KR100433134B1 - 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법 - Google Patents

신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR100433134B1
KR100433134B1 KR20020011619A KR20020011619A KR100433134B1 KR 100433134 B1 KR100433134 B1 KR 100433134B1 KR 20020011619 A KR20020011619 A KR 20020011619A KR 20020011619 A KR20020011619 A KR 20020011619A KR 100433134 B1 KR100433134 B1 KR 100433134B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
aromatic
reaction
amino
amino group
Prior art date
Application number
KR20020011619A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20030072067A (ko
Inventor
김병기
조병관
Original Assignee
김병기
조병관
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 김병기, 조병관 filed Critical 김병기
Priority to KR20020011619A priority Critical patent/KR100433134B1/ko
Publication of KR20030072067A publication Critical patent/KR20030072067A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100433134B1 publication Critical patent/KR100433134B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 토양으로부터 방향족 L-아미노산을 유일한 질소원으로 포함하는 최소배지를 이용하여 고온조건하에서 토양으로부터 L형 광학선택성이 높은 아미노기 전이효소 활성을 갖는 신규한 호열성 미생물, 특히 바실러스 sp. T30을 분리하여, 상기 분리된 호열성 미생물 또는 이의 세포파쇄물로부터 수득된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 생촉매로 이용한 고농도 비대칭 합성반응을 통하여 방향족 L-아미노산을 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족 Ｌ-아미노산의 제조 방법 {NOVEL THERMOPHILIC MICROORGANISM AND METHODS FOR PRODUCING L-TYPE AROMATIC AMINO ACIDS BY USING THE SAME}
본 발명은 토양에서 분리한 L형 광학선택성을 갖는 신규한 호열성 미생물을분리하여, 이를 생촉매로 이용하고 고농도의 케토산을 기질로 사용하여 ACE (Angiotensin-converting enzyme) 저해제 등의 광학활성 의약품의 전구체로 사용되는 L-호모페닐알라닌을 포함한 광학활성 천연 또는 비천연 방향족 L-아미노산 (이하, 방향족 L-아미노산)을 효과적으로 비대칭 합성하고 중성 수용액상에서 방향족 L-아미노산의 낮은 용해도 특성을 이용하여 고순도의 방향족 L-아미노산을 제조하는 방법에 관한 것이다.
방향족 L-아미노산을 중간체로 사용하는 의약품이 다수 존재하나, 의약활성을 나타내는 것은 광학적으로 순수한 형태를 중간체로 사용하는 것이 대부분이다. 예를 들어, L-형 비천연 방향족 아미노산의 한 종류인 L-호모페닐알라닌의 경우, 고혈압 및 심장혈관질환의 효과적인 치료제로서, 현재 광범위하게 사용되고 있는 베나제프릴(Benazepril), 에나라프릴(Enalapril), 리시노프릴(Lisinopril) 등의 ACE 저해제 생산의 중요한 중간체로 사용되고 있는 물질로서, L-호모페닐알라닌만이 중간체로서 생물학적 활성이 있다고 알려져 있다(Iwasaki, 1989).
또한, 천연 방향족 아미노산인 L-페닐알라닌은 합성감미료인 아스파탐의 중간체로서 광학이성질체인 D-페닐알라닌이 불순물로 함유될 경우, 아스파탐의 맛 기능을 저하시키는 것으로 보고되어 있으며, 광학활성 의약품인 L-도파의 중간체로 사용될 수 있는 티로신의 경우에도 L-형만이 활성을 나타낸다 (Chan, 1993).
비천연 방향족 아미노산의 일종인 L-히드록시페닐글라이신을 중간체로 포함하는 반코마이신, 클로로에레모마이신, 콤플레스타틴 등의 항생제의 경우, L-히드록시페닐글라이신만이 활성을 나타내며(Hubbard, 2000), 당뇨병치료에 사용되는 L-피라조일알라닌, L-트리아조일알라닌, L-아자인도일알라닌 등의 베타헤테로사이클릭알라닌 유도체들도 L-형만이 활성을 나타낸다 (Rolland-Fulcrandet al, 2000).
따라서, L-아미노산만을 광학특이적으로 생산할 수 있는 방법에 관하여 오랫동안 연구되었으며, 현재 일반적으로 비천연 아미노산을 생산하는 효소적 방법으로는 리파아제(Hounget al.1996, US patent 5552318), 하이단토이나제(US patent 5552327), 탈수소효소(Asanoet al. 1990, Stewart 2001, US patent 5053328), 아미노아실라제(US patent 5552317, US patent 6008386, US patent 4670395, US patent 3907638, US patent 3816254), 아미노산 산화효소, 아미노기 전이효소(US patent 4518692, WO98/53088, US patent 5919669, US patent 5962281)를 이용하는 공정이 보고되어 있다.
이러한 효소적 방법은 크게 광학분할을 이용하는 경우와 비대칭 합성을 이용하는 경우로 크게 나누어 볼 수 있다. 이 중 광학분할을 이용하는 경우로는 아미노아실라제, 리파아제, 하이단토이나제, 아미노산 산화효소 등이 해당하고, 비대칭 합성을 이용하는 경우로는 탈수소효소와 아미노기 전이효소 등이 속한다. 상기한 아미노아실라제 또는 리파아제의 경우, 화학적으로 합성된 라세믹 유도체기질(예를 들어, 아미노산 에틸에스테르)을 광학 분할하여 제조하는 방법으로서 주생산 공정 이외의 라세믹 기질의 화학적 또는 효소적으로 합성하는 과정이 필요하다. 또한, 하이단토이나제를 사용하는 경우는 하이단토인의 가수분해공정에 필요한 하이단토이나제와 생성된 카바모일기를 다시 가수분해하는 카바모일라제의 두 개의 효소를사용하여야 하는 것과 기질의 용해도가 낮아 고농도 반응이 어려운 단점이 있다. 아미노산 산화효소를 이용하는 공정의 경우는 반응생성물인 과산화수소가 효소를 실활시키는 것이 큰 단점이며, 이 문제를 해결하기 위해 카탈라제 또는 퍼옥시다제 등의 과산화수소를 기질로 사용하는 효소를 동시에 사용해야 한다. 또한, 위에서 열거한 광학분할을 이용한 생산공정은 라세믹체 기질을 이용하므로 이론 수율이 50%라는 단점이 있다.
탈수소효소를 사용하는 경우는 환원적 아민화 반응을 통하여 케토산 기질을 비대칭적으로 변환시키는 방법을 이용하며 케토산을 사용하는 면에서는 아미노기 전이효소의 공정과 매우 흡사하나, 주 효소공정보다 고가의 조효소의 연속적 재생공정이 필요하게 되는 단점이 있다. 아미노기 전이효소를 이용하는 생산공정은 탈수소효소를 사용하는 공정과 비슷하게 케토산을 기질로 사용하며 조효소의 재생공정이 필요하지 않아 효과적인 공정을 구성할 수 있다.
일반적으로 아미노기 전이효소를 이용하여 방향족 L-아미노산을 비대칭 합성하는데 있어서, 고농도 반응을 달성하기 위해서는 기질인 케토산의 용해도 및 기질저해가 문제점으로 지적되어 왔다. 대장균 등의 중온성 미생물 유래의 아미노기 전이효소는 광학특이성에는 문제점이 없으나 37℃ 부근에서 케토산의 용해도가 낮아 고농도 반응이 어렵고 케토산에 의해 저농도에서 기질저해가 발생한다. 또한, 아미노기 전이효소의 반응평형상수는 1이기 때문에, 반응평형으로 인해 100%의 수율을 얻기가 힘들다. 따라서 반응평형을 이동시키기 위한 노력으로, 과량의 아미노기 공여체를 첨가하거나 또는 아스파틱산을 아미노기 공여체로 사용한다. 아스파틱산을 아미노기 공여체로 사용할 경우, 무기촉매 또는 디카르복실라제를 반응에 첨가하므로써 생성물인 옥살아세트산을 피루빅산 및 이산화탄소로 변환시켜 생성물 저해 및 반응평형 문제를 해결하려는 시도(WO98/53088)가 이루어져왔으나 새로운 촉매의 도입은 공정의 복잡성과 비용증가의 문제점을 발생시켰다. 또한, 옥살아세트산의 분해산물인 피루빅산은 반응 중 아미노기 수용체로 경쟁반응을 하여 알라닌이 생성되며 결과적으로 아미노기 공여체의 수율을 낮추어 생산성이 감소하게 된다 (Tokarskiet al. 1988). 더불어 아세토락테이트 합성효소(synthethase)를 사용하여 피루빅산을 아세토락테이트로 변환시키고 최종적으로 아세토인을 형성하므로써 위의 문제점을 해결하려는 시도가 있었으나 상기 합성효소 등의 새로운 생촉매의 도입은 앞서 언급한 대로 공정의 복잡성과 비용증가의 문제점을 발생시켰다 (USP 6197558).
따라서, 본 발명에서는 상기 공지기술의 문제점을 해결하기 위하여 우선적으로 방향족 L-아미노산을 아미노기 공여체로 사용하는 방향족 아미노기 전이효소를 함유하고 있는, 고온에서 생존가능한 호열성 미생물을 토양으로부터 선별하여, 선별된 호열성 미생물 또는 이의 세포 추출물 등을 생촉매로 이용하여 광학특이적으로 방향족 L-아미노산을 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 또한 상기 호열성 미생물을 이용하여 고온에서 아미노기 전이반응을 수행하여 기질인 케토산의 용해도를 증가시킴으로써 원하는 방향족 L-아미노산을 고농도로 제조하는 방법을 제공하는 것이다. 즉, 아미노기 전이효소에의한 아미노기 전이반응은 평형상수가 1이기 때문에 방향족 L-아미노산을 아미노기 공여체로 사용하는 미생물은 반대로 글루탐산 등의 아미노산을 아미노기 공여체로 이용하여 방향족 L-아미노산의 케토산으로부터 방향족 L-아미노산을 비대칭 합성할 수 있으므로 이러한 호열성 미생물을 생촉매로 사용함으로써 방향족 L-아미노산의 비대칭 합성 반응을 고온에서 수행할 수 있고 상온과 비교하여 고온에서 기질인 케토산의 용해도가 증가하고 기질인 케토산에 의한 저해가 발생하지 않는 조건하에서 방향족 L-아미노산을 고농도로 비대칭 합성할 수 있다.
더불어, 본 발명은 상기 호열성 미생물을 이용하여 생산된 방향족 L-아미노산이 산성 또는 염기성 용액에서는 용해도가 높고 중성 수용액상에서 용해도가 낮아 쉽게 침전되는 것을 이용하여 반응평형을 생성물방향으로 이동시키고 동시에 방향족 L-아미노산을 고순도로 정제할 수 있는 방법을 제공한다.
도 1은 호열성 바실러스 sp. T30 (Bacillus sp. T30)을 이용하여 고온 전세포반응으로 100mM 2-벤질피루빅산으로부터 L-호모페닐알라닌의 비대칭합성 결과이다. 최종수율 약 81%로 광학순도 99%이상의 L-호모페닐알라닌을 비대칭 합성하였다.
도 2는 호열성 바실러스 sp. T30으로부터 생산된 세포추출물 (내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물)을 이용하여 고온 효소반응으로 100mM 2-벤질피루빅산으로부터 L-호모페닐알라닌의 비대칭 합성 결과이다. 최종수율 97%로 광학순도 99%이상의 L-호모페닐알라닌을 비대칭 합성하였다.
도 3은 생산된 L-호모페닐알라닌의 광학 순도분석 결과이다.
도 4는 상온에서의 수소이온농도에 따른 L-호모페닐알라닌의 용해도변화를 나타낸다.
본 발명은 L형 광학선택성의 높은 방향족 아미노기 전이효소 활성을 갖는 신규한 호열성 미생물 및/또는 이의 세포추출물을 제공하고, 상기를 이용하여 L형 방향족 아미노산을 광학특이적으로 제조하는 방법을 제공한다. 즉, 본 발명은 일차적으로 토양으로부터 방향족 L-아미노산을 유일한 질소원으로 포함하는 최소배지를 이용하여 토양으로부터 L형 광학선택성 및 높은 아미노기 전이효소 활성을 갖는 신규한 호열성 미생물을 선별하고, 이러한 호열성 미생물 또는 그의 추출물, 또는 정제된 L형 광학선택성 방향족 아미노기 전이효소을 이용하여 L-아미노산을 광학특이적으로 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
더불어, 본 발명은 상기 호열성 미생물을 이용하여 생산된 방향족 L-아미노산이 산성 또는 염기성 용액에서는 용해도가 높고 중성 수용액상에서 용해도가 낮아 쉽게 침전되는 것을 이용하여 반응평형을 생성물 방향으로 이동시키고 동시에 방향족 L-아미노산을 고순도로 정제할 수 있는 방법을 제공한다.
본원발명의 호열성 미생물은 50 내지 80℃의 온도조건하에서 질소원으로서 단지 L-아미노산만을 첨가한 배지조건에서 생존가능한 바실러스종의 미생물을 모두 포함하는 것이나, 이들 중 특히 생명공학연구소 유전자은행 (KCTC:Korean Collection for Type Cultures)에 2001년 9월 6일자로 기탁번호 KCTC 10070BP로 기탁된 바실러스 sp. T30이 바람직하다.
또한, 본원발명은 본원발명의 선별조건에서 선별된 호열성 미생물, 특히 상기 신규한 바실러스 sp. T30을 생촉매로 사용하거나 내열성 방향족 L-아미노기 전이효소를 포함하는 이의 세포추출물을 촉매로 이용하여 천연 또는 비천연 방향족 L-아미노산 (이하, 방향족 L-아미노산)을 비대칭 합성반응을 통해 제조하는 방법을 제공한다.
본원발명의 방향족 L-아미노산의 제조방법은 (1) 본원발명의 신규한 호열성 미생물, 특히 KCTC 10070BP의 바실러스 sp. T30를 이용하여 고온에서 반응시킴으로써 아미노기 전이효소가 기질 저해 현상을 나타내지 않는 최대한의 범위내에서 기질인 케토산의 용해도를 높여 고수율로 방향족 L-아미노산을 생산할 수 있다는 점, (2) 생성물인 L-아미노산이 산성용액에서의 용해도는 높으나 중성용액에서 용해도가 낮은 점을 이용하여 반응을 중성에서 수행함으로써 반응평형을 이동시킴으로써고수율로 방향족 L-아미노산을 생산할 수 있다는 점과 및 (3) 상기의 용해도 차이를 이용하여 상기 생성물을 용이하게 분리 및 정제할 수 있다는 점에 특징이 있다.
즉, 본 발명의 아미노기 전이효소에 의한 아미노기 전이반응은 평형상수가 1이기 때문에 방향족 L-아미노산을 아미노기 공여체로 사용하는 미생물은 반대로 글루탐산 등의 아미노산을 아미노기 공여체로 이용하여 방향족 L-아미노산의 케토산으로부터 방향족 L-아미노산을 비대칭 합성할 수 있다. 반응식은 하기와 같다:
그러므로 이러한 호열성 미생물을 생촉매로 사용함으로써 방향족 L-아미노산의 비대칭 합성 반응을 고온에서 수행할 수 있으며, 상온과 비교하여 기질인 케토산의 용해도가 증가하고 기질인 케토산에 의한 저해가 발생하지 않는 고온의 조건하에서 방향족 L-아미노산을 고농도로 비대칭 합성할 수 있다.
따라서 본 발명에서는 호열성 미생물을 이용하여 고온에서 아미노기 전이반응을 수행하여 기질인 케토산의 용해도를 증가시킴으로써 원하는 방향족 L-아미노산을 고농도로 생산할 수 있는 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어는 당업계에서 통상적으로 사용되는 것으로 당업자라면 그 의미를 누구나 이해할 수 있을 것이나, 본 명세서에서 간략히 설명하면 다음과 같다:
(1) 아미노기 전이효소; 아미노기를 한 분자에서 다른 분자로 옮기는 반응을 촉매하는 효소
(2) 아미노기 전이효소 추출물; 내열성 아미노기 전이효소가 포함된 본원발명의 바실러스종 호열성 미생물의 세포추출물
(3) 전세포 반응; 특정 효소를 포함하는 세포를 파쇄하여 세포 내용물을 이용하거나 또는 효소를 분리정제하지 않고 온전한 세포 전체를 이용한 반응
(4) 비대칭 합성; 비광학물질(achiral compounds)에 광학적으로 순수하게 기능기를 도입하는 합성방법
(5) 방향족 아미노산; 아미노산 중 측쇄기가 방향족인 것
(6) 케토산; 케토카르복시산이라고도 한다. 카르보닐기와 카르복시기가 직접 결합하고 있는 것을 α-케토산, 1개의 탄소원자에 의해 떨어져 있는 것을 β-케토산, 2개, 3개,…의 탄소원자에 의해 떨어져 있는 것을 각각 α-케토산, δ-케토산,…으로 구별한다. 이 중 β-케토산은 대단히 불안정하며, 분해하여 케톤과 이산화탄소가 된다. 본 발명에서는 아미노기 전이반응에서 아미노기를 전달받는 물질이다.
(7) 아미노기 공여체; 아미노기 전이반응에서 아미노기를 제공하는 물질
(8) 아미노기 수용체; 아미노기 전이반응에서 아미노기를 전달받는 물질
(9) 내열성 아미노기 전이효소; 고온에서 활성을 유지하는 아미노기 전이효소
(10) 호열성 미생물; 생육온도가 높은 미생물
(12) 기질저해; 효소반응에서 기질에 의해 효소반응속도가 감소하는 현상
신규한 호열성 미생물의 선별
본원발명의 호열성 미생물의 선별을 위해 본 발명자들은 하기 표 1의 조성성분으로 이루어진 방향족 L-아미노산을 유일한 질소원으로 포함하는 최소배지를 제조하였다. 상기 최소배지를 이용하여 토양으로부터 표 1에서 첨가된 방향족 L-아미노산을 질소원으로 사용하고 온도조건을 50 내지 80℃, 특히 60 내지 70℃로 조정함으로써, 방향족 L-아미노산에 특이성을 갖는 아미노기 전이효소를 함유하고 있는 호열성 미생물을 선별하였다.
본원발명에서 사용된 최소배지성분은 하기와 같다.
구분 성분 조성 비고
탄소원 글리세롤 100-500 mM
질소원 방향족L-아미노산 20-100 mM 용해도가 낮은 경우 고체상으로 첨가가능
완충성분 KH2PO4 1.31 g/L
K2HPO4 2.68 g/L
CaCl2 0.2-1 mM
MgSO4ㆍH2O 1-5 g/L
미량원소 ZnCl2 0.1-0.5 mg/L
MnSO4 0.1-0.5 mg/L
CuSO4ㆍ5H2O 0.1-0.5 mg/L
CoCl2ㆍ6H2O 0.1-0.5 mg/L
NiSO4 0.1-0.5 mg/L
H3BO3 0.02-0.1 mg/L
Na2MoO4ㆍ2H2O 2-10 mg/L
FeSO4ㆍ7H2O 4-20 mg/L
EDTA 0.5-2.5 mg/L
고체배지 아가(agar) 3%
본원발명의 온도조건 및 최소배지를 이용하는 선별방법은 성장 속도에 따라 호열성 미생물을 선별하는 간단한 방법으로서 아미노기 전이효소의 활성이 낮은 호열성 미생물은 배양단계에서 자발적으로 제거되므로 방향족 L-아미노산에 기질특이성을 나타내고 고온에서 활성을 나타내는 내열성 방향족 아미노기 전이효소를 함유하는 호열성 미생물을 선별할 수 있다.
본 발명에서 선별된 호열성 미생물들은 신규한 것으로서, 본 발명자들은 이의 16S rRNA 부분 서열을 코딩하는 DNA 서열 (서열번호 1)의 특징을 통해 바실러스종으로 파악하였다. 특히 선별된 수 개의 호열성 미생물 중 방향족 아미노기 전이효소 활성이 탁월한 한 종류를 바실러스 sp. T30 로 명명하였다. 또한, 이를 생명공학연구소 유전자은행 (KCTC: Korean Collection for Type Cultures)에 기탁번호 KCTC 10070BP로 2001년 9월 6일자로 기탁하였다.
본원발명의 선별된 미생물 중 가장 활성이 높은 호열성 바실러스 (바실러스 sp. T30 )를 이용하여 기질특이성을 확인한 결과, 이 미생물은 방향족 L-아미노산을 아미노기 공여체로 사용하는 방향족 아미노기 전이효소를 함유하고 있음을 알 수 있었다 (표 2).
표 2는 호열성 바실러스종 유래의 방향족 아미노기 전이효소의 아미노기 공여체 기질특이성을 보여준다.
아미노기 공여체 활성 (%) 아미노기 공여체 활성 (%)
L-페닐알라닌 173.1 L-루신 25.7
L-티로신 148.1 L-글루타민 25.7
L-트립토판 115.3 DL-아미노부티릭산 26.3
L-글루탐산 100.0 L-호모알기닌 7.8
L-아스파틱산 6.5 DL-호모세린 7.2
L-알라닌 38.0 L-호모글루타민 10.5
L-글라이신 0.0 L-호모시스테익산 14.4
L-알기닌 6.2 L-베타호모루신 0.0
L-아스파라긴 4.6 L-호모이소루신 0.0
L-프롤린 3.2 L-호모알라닌 0.0
L-발린 14.4 L-베타루신 0.0
L-세린 4.8 DL-3-아미노부티릭산 0.0
L-트레오닌 2.7 DL-3-아미노페닐프로피오닉산 8.8
L-메티오닌 33.1 DL-tert-루신 6.6
L-라이신 10.9 DL-페닐글리신 16.4
L-이소루신 12.6 L-히스티딘 40.9
주) 아미노기 수용체로는 10mM의 2-벤질피루빅산을 이용함.반응액 조성은 50mM 트리스 완충용액, 10mM 2-벤질피루빅산과 20mM의 각 아미노기 공여체로 구성되어 60℃에서 1시간동안 반응시켜 초기속도를 비교함
본 발명자들은 또한 상기 호열성 미생물을 파쇄하여 이를 원심분리하고 원심분리액의 상등액으로부터 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 포함하는 세포추출물 (내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물)을 생산하였다.
호열성 미생물 또는 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 생촉매로 이용한 고농도 비대칭 합성방법을 통한 방향족 L-아미노산의 제조방법
상기 수득한 호열성 미생물 또는 생산된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물, 케토산 및 L-글루탐산으로 구성된 반응액으로부터 방향족 L-아미노산을 비대칭 합성한다. 반응액에는 아미노기 수용체로서 케토산, 아미노기 공여체로서 L-글루탐산이 포함되어 있고, 본원발명의 호열성 미생물 또는 생산된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 생촉매로서 반응액에 첨가하여 반응을 개시한다.
본 발명에서 사용할 수 있는 아미노기 수용체로는 케토산군으로서, 벤조일피루빅산 (C6H5), 페닐피루빅산 (C6H5CH2), 벤질피루빅산 (C6H5CH2CH2), 페닐케토발레릭산 (C6H5CH2CH2CH2), p-토릴글리옥시릭산 (CH3C6H4), p-토릴피루빅산 (CH3C6H4CH2), p-토릴케토부티릭산 (CH3C6H4CH2CH2), p-토릴케토발레릭산 (CH3C6H4CH2CH2CH2), 2,6-디메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)2C6H3), p-에틸페닐글리옥시릭산 (C2H5C6H4), p-tert-부틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)3CC6H4), p-tert-부틸페닐피루빅산 ((CH3)3CC6H4CH2), p-이소프로필페닐글리옥시릭산 ((CH3)2CHC6H4), 2,4,6-트리메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)3C6H2), 2,3,5,6-테트라메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)4C6H), 2,3,4,6-테트라메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)4C6H), 펜타메닐페닐글리옥시릭산 ((CH3)5C6), 2,4,6-트리메틸페닐피루빅산 ((CH3)3C6H2CH2), 디메틸페닐피루빅산 (C6H5C(CH3)2), 프탈로닉산 ((CO2H)C6H4), 3-카르복시페닐글리옥시릭산 ((CO2H)C6H4), 3-카르복시-4-히드록시페닐글리옥시릭산 ((CO2H)(OH)C6H3), 3-카르복시페닐피루빅산 ((CO2H)C6H4CH2), 3-카르복시-4-히드록시페닐피루빅산 ((CO2H)(OH)C6H3CH2), 4-메톡시페닐글리옥시릭산 ((CH3O)C6H4), p-히드록시페닐글리옥시릭산 ((OH)C6H4), 2,5-디히드록시페닐글리옥시릭산 ((OH)2C6H3), 2-카르복시메틸페닐글리옥시릭산 ((CO2H)CH2C6H4), 4-메톡시페닐케토부티릭산 ((CH3O)C6H4CH2CH2), p-히드록시페닐피루빅산 ((OH)C6H4CH2), p-메틸시오페닐글리옥시릭산 (CH3SC6H4), p-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), p-클로로페닐글리옥시릭산 (ClC6H4), p-플루오르페닐글리옥시릭산 (FC6H4), p-요오드페닐글리옥시릭산 (IC6H4), o-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), m-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), 2,4-디클로로페닐글리옥시릭산 (Cl2C6H3), 3-플루오르-4-메톡시페닐글리옥시릭산 (F(CH3O)C6H3), p-니트로페닐글리옥시릭산 ((NO2)C6H4), m-니트로페닐글리옥시릭산 ((NO2)C6H4), p-브로모페닐피루빅산 (BrC6H4CH2), p-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), p-플루오르페닐피루빅산 (FC6H4CH2), o-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), m-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), p-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), m-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), o-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), 3-요오드-4-히드록시페닐피루빅산 ((OH)IC6H3CH2), 3,5-디요오드-4-히드록시페닐피루빅산 (OH)(I)2C6H2CH2), p-아미노페닐글리옥시릭산 (H2NC6H4), p-아미노페닐피루빅산(H2NC6H4CH2), α-나프틸글리옥시릭산 (C10H7), β-나프틸글리옥시릭산 (C10H7), 4-메틸-1-나프틸글리옥시릭산 ((CH3)C10H6), 1-나프틸피루빅산 (C10H7CH2), 2-나프틸피루빅산 (C10H7CH2), 디페닐피루빅산 ((C6H5)2CH), 트리페닐피루빅산 ((C6H5)3C), 디페닐케토부티릭산 ((C6H5)2CHCH2) 등이며, 사용가능한 아미노기 공여체는 L-글루탐산이다.
생산가능한 방향족 L-아미노산은 상기 케토산군으로부터 비대칭 합성되는 L-호모페닐알라닌, L-페닐알라닌, L-티로신, L-히드록시페닐글라이신 등이다.
아미노기 공여체의 사용농도는 아미노기 수용체인 케토산 농도와 동일하며,바람직하게는 1 내지 2배이다. 본 발명의 반응온도는 50 내지 70℃가 바람직하며, 55 내지 60℃가 더욱 바람직하다. 반응액의 pH는 6 내지 10이며, 더욱 바람직하게는 7 내지 8 이다. 산 또는 염기로 반응액의 pH를 조절할 수 있다.
생성된 L-아미노산의 분리정제방법
본 발명에서 합성할 수 있는 방향족 L-아미노산은 중성 수용액상에서 용해도가 매우 낮으며 산용액 또는 염기용액에서 용해도가 매우 높다. 즉, 반응액의 pH의 조절로 합성되는 방향족 L-아미노산의 용해도를 조절할 수 있으며, 이를 이용하여 반응평형을 방향족 L-아미노산의 생산반응 방향으로 유도할 수 있으며 또한 하기와 같이 반응 최종단계에서 반응액으로부터 간단하게 방향족 L-아미노산을 분리 및 정제할 수 있다.
상기 아미노기 전이반응액에 1N 내지는 2N 농도의 염산, 퍼클로릭산 또는 황산용액을 첨가하여 pH를 1이하로 조절하여 반응을 종료하면, 생촉매인 호열성 미생물 내지 내열성 아미노기 전이효소는 변성되어 침전되고, 합성된 방향족 L-아미노산은 완전히 용해된다. 이러한 반응종료액으로부터 여과 또는 원심분리를 이용하여 변성된 미생물 또는 효소는 반응액으로부터 제거하고, 다시 1N 내지는 2N의 수산화나트륨용액을 첨가하여 생촉매가 제거된 반응액의 pH를 중성으로 조절하여 주면, 중성용액에서 용해도가 낮은 합성된 방향족 L-아미노산은 다시 침전된다. 상기 반응액을 여과 또는 원심분리를 이용하여 방향족 L-아미노산을 수거하고 낮은 온도의 증류수를 이용하여 세척하면 고순도의 방향족 L-아미노산을 얻을 수 있다.
실시예
이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예로서 상세히 설명하나, 본 발명의 기술적 범위가 반드시 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다. 하기 실시예에서 특별한 언급이 없으면, 모든 퍼센트는 최종 조성물의 100 중량%를 기준으로 한다.
실시예 1
호열성 미생물, 바실러스 sp. T30 (KCTC 10070BP)의 선별
상기 표 1의 최소배지 100mL을 토양시료 10g에 첨가하고, 60℃에서 2시간 교반한다. 혼탁액 1mL을 최소배지 2mL에 첨가하여 60℃에서 2일간 배양하였다. 상기 배양액 1mL을 새로운 최소배지 2mL에 첨가하고 60℃에서 1일간 배양하는 과정을 3회 반복한 후, 배양액 0.2mL을 상기 액체최소배지와 3% 한천으로 구성되는 고체최소배지에 플레이팅하여 60℃에서 1일간 배양하여 콜로니를 얻었다. 상기 미생물 콜로니를 새로운 액체최소배지 2mL에 접종하고 60℃에서 1일간 배양하여 반응시키고 활성이 가장 높은 콜로니를 동정한 결과, 호열성 바실러스종으로 명명되었다.
실시예 2
내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물의 생산
효모추출물(4g/L), 펩톤(8g/L), 염화나트륨(3g/L)으로 구성된 배지(이하 완전배지)에 배양된 세포를 PBS완충용액(pH 7)으로 3회 세척하여 회수된 세포외부의 배지성분을 제거하였다. 회수된 세포(이하 세포)를 3배 내지 5배 (부피비)의 10mM 인산완충용액, 20mM 피리독살 5-인산, 2mM 에틸렌디아민테트라아세트산, 1mM 페닐메틸설포닐플로라이드, 0.01% (w/w) 2-메르캅토에탄올, 10% 글리세롤로 구성된 완충용액에 혼탁한 후, 음파파쇄기를 이용하여 세포를 파쇄하였다. 5% 내지 15% 바람직하게는 8% 내지 12%의 글리세롤을 음파파쇄시 사용되는 완충용액에 첨가하여 주면 음파파쇄에 의한 내열성 방향족 아미노기 전이효소의 실활을 감소시킬 수 있다. 상기 파쇄 세포추출물을 12,000rpm에서 30분간 원심분리 후, 상등액을 회수하고 투석하여 최종 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 생산하였다.
실시예 3
호열성 바실러스 T30 전세포 반응을 이용한 L-호모페닐알라닌의 비대칭 합성
완전배지에 배양한 세포를 PBS로 세척하여 100mM 2-벤질피루빅산, 120mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 최종반응 세포혼탁도가 46가 되게 첨가하여 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과, 광학순도 99%이상의 L-호모페닐알라닌을 81%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 4
내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 이용한 L-호모페닐알라닌의 비대칭 합성
실시예 2에서 생산된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 100mM 2-벤질피루빅산, 120mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 1mL첨가하고 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과, 광학순도 99%이상의 L-호모페닐알라닌을 97%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 5
호열성 바실러스 전세포 반응을 이용한 L-페닐알라닌의 비대칭 합성
완전배지에 배양한 세포를 PBS로 세척하여 150mM 페닐피루빅산, 200mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 최종반응 세포혼탁도가 45가 되게 첨가하여 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과, 광학순도 99%이상의 L-페닐알라닌을 83%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 6
내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 이용한 L-페닐알라닌의 비대칭 합성
실시예 2에서 생산된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 150mM 페닐피루빅산, 200mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 1mL첨가하고 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과, 광학순도 99%의 L-페닐알라닌을 98%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 7
호열성 바실러스 전세포 반응을 이용한 L-티로신의 비대칭 합성
완전배지에 배양한 세포를 PBS로 세척하여 150mMp-히드록시페닐피루빅산, 200mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 최종반응 세포혼탁도가 45가 되게 첨가하여 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과,광학순도 99%이상의 L-티로신을 84%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 8
내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 이용한 L-티로신의 비대칭 합성
실시예 2에서 생산된 내열성 방향족 아미노기 전이효소 추출물을 150mMp-히드록시페닐피루빅산, 200mM 글루탐산, 50mM 트리스완충용액(pH 8.0)으로 구성된 반응액 5mL에 1mL첨가하고 60℃에서 400분 동안 반응하였다. 16% 퍼클로릭산을 첨가하여 반응종료 후, 반응액을 고압크로마토그래피를 이용하여 광학분석한 결과, 광학순도 99%이상의 L-티로신을 98%의 수율로 합성할 수 있었다.
실시예 10
전세포반응액으로 부터 pH 조절을 이용한 L-호모페닐알라닌의 생산
반응종료 후, 반응액에 pH 1.0이 되게 1N 산용액을 첨가하여 준 후 원심분리하여 세포를 제거하고 상등액을 1N 염기용액으로 중성으로 맞추어 주었다. 사용할 수 있는 산용액은 염산, 황산, 퍼클로릭산 등이며 산용액의 종류에 따른 특별한 사용제한조건은 없다. 사용할 수 있는 염기용액은 수산화나트륨, 수산화칼륨 등이며 염기용액의 종류에 따른 특별한 사용제한조건은 없다. 사용침전물을 원심분리하여 회수하고 4℃의 증류수로 2회 세척하고 건조한 결과, 90% 수율로 99% 이상 순도의 L-호모페닐알라닌을 회수할 수 있었다.
일반적으로, 중온성 균주 또는 그로부터 분리된 아미노기 전이효소의 경우, 고농도의 케토산을 기질로 이용하면, 기질저해로 인해 20mM 이상의 농도범위에서는비대칭 합성속도가 많이 감소하나, 본 발명에 의한 호열성 미생물 또는 내열성 방향족 아미노기 전이효소는 기질저해현상이 완화되어 100mM의 고농도의 케토산을 사용하여도 비대칭 합성속도가 많이 감소하지 않는다는 점, 생성되는 방향족 L-아미노산의 용해도가 온도에 의해 크게 영향을 받지 않으므로 고온조건에서도 침전이 되어 반응평형이 완전히 이동된다는 점과 고온에서 반응이 이루어지므로 반응 중 미생물에 의한 오염을 해결하였다.

Claims (11)

  1. KCTC 10070BP인 바실러스 sp. T30 (Bacillus sp. T30) 호열성 미생물.
  2. 제 1항의 KCTC 10070BP인 바실러스 sp. T30의 세포 추출물.
  3. 제 1항 바실러스 sp. T30 또는 제 2항의 바실러스 sp. T30의 세포 추출물을 생촉매로 사용하는 것을 특징으로 하는, 방향족 L-아미노산의 광학특이적 제조방법.
  4. 제 3항에 있어서, 50 내지 70℃의 온도에서 반응을 수행하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  5. 제 3항에 있어서, 6 내지 10의 pH에서 반응을 수행하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  6. 제 3항에 있어서, 아미노기 수용체가 벤조일피루빅산 (C6H5), 페닐피루빅산 (C6H5CH2), 벤질피루빅산 (C6H5CH2CH2), 페닐케토발레릭산 (C6H5CH2CH2CH2), p-토릴글리옥시릭산 (CH3C6H4), p-토릴피루빅산 (CH3C6H4CH2), p-토릴케토부티릭산(CH3C6H4CH2CH2), p-토릴케토발레릭산 (CH3C6H4CH2CH2CH2), 2,6-디메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)2C6H3), p-에틸페닐글리옥시릭산 (C2H5C6H4), p-tert-부틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)3CC6H4), p-tert-부틸페닐피루빅산 ((CH3)3CC6H4CH2), p-이소프로필페닐글리옥시릭산 ((CH3)2CHC6H4), 2,4,6-트리메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)3C6H2), 2,3,5,6-테트라메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)4C6H), 2,3,4,6-테트라메틸페닐글리옥시릭산 ((CH3)4C6H), 펜타메닐페닐글리옥시릭산 ((CH3)5C6), 2,4,6-트리메틸페닐피루빅산 ((CH3)3C6H2CH2), 디메틸페닐피루빅산 (C6H5C(CH3)2), 프탈로닉산 ((CO2H)C6H4), 3-카르복시페닐글리옥시릭산 ((CO2H)C6H4), 3-카르복시-4-히드록시페닐글리옥시릭산 ((CO2H)(OH)C6H3), 3-카르복시페닐피루빅산 ((CO2H)C6H4CH2), 3-카르복시-4-히드록시페닐피루빅산 ((CO2H)(OH)C6H3CH2), 4-메톡시페닐글리옥시릭산 ((CH3O)C6H4), p-히드록시페닐글리옥시릭산 ((OH)C6H4), 2,5-디히드록시페닐글리옥시릭산 ((OH)2C6H3), 2-카르복시메틸페닐글리옥시릭산 ((CO2H)CH2C6H4), 4-메톡시페닐케토부티릭산 ((CH3O)C6H4CH2CH2), p-히드록시페닐피루빅산 ((OH)C6H4CH2), p-메틸시오페닐글리옥시릭산 (CH3SC6H4), p-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), p-클로로페닐글리옥시릭산 (ClC6H4), p-플루오르페닐글리옥시릭산 (FC6H4), p-요오드페닐글리옥시릭산 (IC6H4), o-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), m-브로모페닐글리옥시릭산 (BrC6H4), 2,4-디클로로페닐글리옥시릭산 (Cl2C6H3), 3-플루오르-4-메톡시페닐글리옥시릭산 (F(CH3O)C6H3), p-니트로페닐글리옥시릭산 ((NO2)C6H4), m-니트로페닐글리옥시릭산 ((NO2)C6H4), p-브로모페닐피루빅산 (BrC6H4CH2), p-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), p-플루오르페닐피루빅산 (FC6H4CH2), o-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), m-클로로페닐피루빅산 (ClC6H4CH2), p-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), m-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), o-니트로페닐피루빅산 ((NO2)C6H4CH2), 3-요오드-4-히드록시페닐피루빅산 ((OH)IC6H3CH2), 3,5-디요오드-4-히드록시페닐피루빅산 (OH)(I)2C6H2CH2), p-아미노페닐글리옥시릭산 (H2NC6H4), p-아미노페닐피루빅산 (H2NC6H4CH2), α-나프틸글리옥시릭산 (C10H7), β-나프틸글리옥시릭산 (C10H7), 4-메틸-1-나프틸글리옥시릭산 ((CH3)C10H6), 1-나프틸피루빅산(C10H7CH2), 2-나프틸피루빅산(C10H7CH2), 디페닐피루빅산((C6H5)2CH), 트리페닐피루빅산((C6H5)3C), 디페닐케토부티릭산 ((C6H5)2CHCH2)등으로 이루어진 방향족 케토산군 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  7. 제 3항에 있어서, 아미노기 공여체가 글루탐산인 것을 특징으로 하는 제조방법.
  8. 제 3항에 있어서, 방향족 L-아미노산이 L-호모페닐알라닌, L-페닐알라닌, L-티로신, L-히드록시페닐글라이신, L-피라조일알라닌, L-트리아조일알라닌 또는 L-아자인도일알라닌인 제조방법.
  9. 제 3항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 반응용액의 pH를 1 내지 3으로 조정함으로써 반응을 종료하는 단계 및 반응종료 후 반응종료액의 pH를 6 내지 10으로 조정하여 방향족 L-아미노산을 분리하는 단계를 추가로 포함하는 제조방법.
  10. 제 9항에 있어서, 반응을 종료하는 단계에서 황산, 염산 또는 퍼클로릭산을 사용하여 반응액의 pH를 조정하는 방법.
  11. 제 9항에 있어서, 상기 분리단계 중 반응 종료액의 pH를 수산화나트륨 수용액을 사용하여 조정하는 방법.
KR20020011619A 2002-03-05 2002-03-05 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법 KR100433134B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20020011619A KR100433134B1 (ko) 2002-03-05 2002-03-05 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20020011619A KR100433134B1 (ko) 2002-03-05 2002-03-05 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20030072067A KR20030072067A (ko) 2003-09-13
KR100433134B1 true KR100433134B1 (ko) 2004-05-27

Family

ID=32223464

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR20020011619A KR100433134B1 (ko) 2002-03-05 2002-03-05 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100433134B1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100818611B1 (ko) * 2006-08-18 2008-04-01 재단법인서울대학교산학협력재단 신규한 토양 미생물, 상기 토양 미생물로부터 분리된신규한 베타트랜스아미나제, 상기 베타트랜스아미나제를암호화하는 유전자 및 이들을 이용하여 광학적으로 순수한베타아미노산과 그 유도체를 생산하는 방법
WO2014092496A1 (ko) 2012-12-13 2014-06-19 연세대학교 산학협력단 탈라세믹화를 이용한 광학 활성 아민 화합물의 제조방법
TW202020148A (zh) 2018-07-31 2020-06-01 德商拜耳廠股份有限公司 編碼改良之轉胺酶蛋白質之核酸

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62244386A (ja) * 1985-12-05 1987-10-24 Sagami Chem Res Center Ｌ−アミノ酸の製造法
KR20000052825A (ko) * 1996-10-26 2000-08-25 비그만 피. 방향족 물질대사/ｉ로부터 물질의 미생물적 제조방법
KR20010042974A (ko) * 1998-04-24 2001-05-25 포르슝스젠트룸 율리히 게엠베하 방향족 대사/ⅲ로부터 물질을 제조하는 미생물에 의한 방법
KR100359131B1 (ko) * 1992-12-21 2003-03-06 제넨코 인터내셔날 인코포레이티드 방향족아미노산합성의경로의탈차단방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62244386A (ja) * 1985-12-05 1987-10-24 Sagami Chem Res Center Ｌ−アミノ酸の製造法
KR100359131B1 (ko) * 1992-12-21 2003-03-06 제넨코 인터내셔날 인코포레이티드 방향족아미노산합성의경로의탈차단방법
KR20000052825A (ko) * 1996-10-26 2000-08-25 비그만 피. 방향족 물질대사/ｉ로부터 물질의 미생물적 제조방법
KR20010042974A (ko) * 1998-04-24 2001-05-25 포르슝스젠트룸 율리히 게엠베하 방향족 대사/ⅲ로부터 물질을 제조하는 미생물에 의한 방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR20030072067A (ko) 2003-09-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8563278B2 (en) Process of producing glutamate derivatives
EP1445323A1 (en) Process for production of glutamic acid derivatives
US8460902B1 (en) DNA encoding hydantoinase, DNA encoding N-carbamyl-L-amino acid hydrolase, recombinant DNA, transformed cell, method of producing protein, and method of producing optically active amino acid
JPH06343462A (ja) 新規微生物、Ｌ−α−アミノ酸の製法、新規微生物の突然変異種及び変体の培養法、カルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の獲得法、及びカルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の微生物又は細胞中への挿入法
WO2000009660A1 (en) Novel microorganisms and method for producing l-threonine using the same
DK170672B1 (da) Fremgangsmåde til enzymatisk fremstilling af aminosyreeamider eller aminosyrer
US20050009151A1 (en) Methods for the stereospecific and enantiomeric enrichment of beta-amino acids
JP3905575B2 (ja) 新規の微生物、Ｌ−α−アミノ酸の製法並びに新規の微生物の突然変異株及び変体の培養法、カルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の取得法及びカルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の微生物又は細胞への挿入法
KR100433134B1 (ko) 신규한 호열성 미생물 및 이를 이용한 방향족ｌ-아미노산의 제조 방법
Paloyan et al. Microbial approaches for amino acids production
EP0383403A1 (en) Process for preparation of organic chemicals
KR100718817B1 (ko) 신규한 오메가아미노트랜스퍼라제, 이의 유전자 및 이의이용 방법
US5688672A (en) Process for the biotechnological preparation of L-thienylalanines in enantiomerically pure form from 2-hydroxy-3-thienylacrylic acids
JP4577513B2 (ja) ２−アルキルシステインアミド又はその塩、並びに、それらの製造方法及び用途
Kato et al. Enzymatic synthesis of l-β-chloroalanine using amino acid dehydrogenase
Hsiao et al. Enzymatic production of amino acids
JPS61274690A (ja) Ｄ−α−アミノ酸の製造方法
US20100105111A1 (en) Method for production of optically active amino acid
JP4231709B2 (ja) 新規デヒドロゲナーゼ及びそれをコードする遺伝子
JP2674078B2 (ja) Ｄ−α−アミノ酸の製造法
US20060172393A1 (en) Process for producing optically active alpha -methylcysteine derivative
JPS60184392A (ja) Ｄ−α−アミノ酸の製造方法
KR0145011B1 (ko) L-아르기닌에 대해 감수성을 갖는 l-트립토판 생산균주
JP2001145499A (ja) ナフチルアラニンの製造法
JPH04234984A (ja) アミノ酸ラセマーゼの失活抑制方法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20120517

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130508

Year of fee payment: 10

LAPS Lapse due to unpaid annual fee