KR100340343B1

KR100340343B1 - 각질 제거용 러빙크림 조성물

Info

Publication number: KR100340343B1
Application number: KR1020000014115A
Authority: KR
Inventors: 김성환
Original assignee: 김상회; 주식회사 과일나라화장품
Priority date: 2000-03-20
Filing date: 2000-03-20
Publication date: 2002-06-12
Also published as: KR20010100228A

Abstract

본 발명은 파인애플과 파파야에서 추출한 단백질 분해효소가 불필요한 각질층을 잡고 있는 세포간 접착물질에 작용하고, 천연클레이가 탈락되는 각질성분과 피부표면의 불순물을 제거할 수 있는 각질제거용 러빙크림의 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명은 정제수, 보습제, 점증제, 고형왁스, 계면활성제, 실리콘유, 향, 사과추출물, β-하이드록시애시드, 목단피 추출물, 천연클레이와 단백질분해효소인 브로멜라인과 파파인을 포함하는 각질 제거용 조성물과 정제수, 보습제, 방부제, 목단피 추출물, 사과효소추출물, 세라마이드, 세정제, 에탄올, 계면활성제, 및 식물성 세정제로 이루어진 세정 조성물을 포함하는 각질제거용 러빙크림 조성물 세트를 제공한다. 본 발명으로 인하여 천연재료등을 이용한 기존 방법에 비해 보다 간편하면서도 우수한 각질제거 효능을 갖는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

각질 제거용 러빙크림 조성물{RUBBING CREAM COMPOSITION FOR REMOVING KERATIN}

본 발명은 파인애플 줄기와 파파야 나무에서 추출한 단백질 분해효소가 불필요한 각질층을 잡고 있는 세포간 접착물질에 작용하고 천연클레이가 탈락되는 각질성분과 피부표면의 불순물을 제거할 수 있는 각질 제거용 러빙크림의 조성물에 관한 것이다.

각질층(Stratum Corneum)

피부각질층(CORNEUM)은 라틴어 코르뉴(CORNU)의 파생어, 불같이 단단하다는 뜻으로 피부의 겉표면에 도착한 세포들이 딱딱하게 각질화되는 것을 표현한 것이다. 일반적인 표현은 표피층의 가장 바깥 또는 위층에 있다는 뜻의 더 탑 레이어, 더 업퍼모스트 레이어, 더 아웃터 모스트 레이어와 라틴어와 같은 뜻으로 호니레이어, 뿔같이 딱딱한 층 또는 각질층이 있고 세포 층의 위층이라는 셀룰러 업퍼 레이어라고 말하기도 한다. 각질층에 도착한 세포들이 딱딱하게 각질화되는 것을 표현한 것이다. 각질층에 도착한 세포들은 각질(KERATIN)이 되어 납작하게 죽은 세포들로서 하루에 수백 만개의 죽은 각질세포가 피부에서 떨어져 나가고 새 각질세포로 교체된다. 70% 정도의 수분으로 채워진 기저 층의 세포가 각질층에 도달하면 수분이 20%로 줄어들면서 각질세포로 변한다. 20% 정도의 수분은 피부(겉피부의 각질층)의 가장 좋은 상태-피부가 촉촉하고 탱탱하여 윤기가 흐르는 아름답고 고운 피부를 만드는 조건이다. 피부의 수분이 15% 이하로 떨어지면 건조해지며 갈라지고 트는 거친 피부, 미운 피부가 된다. 납작하게 된 각질세포는 마치 벽돌을 쌓아 놓은 득 15 내지 40줄로 층층이 단단하게 겉피부까지 닿아 있다. 세포 사이를 떨어지지 않도록 접착시키는 풀의 역할은 인터셀룰러 씨멘트(Intercellular cement)라는 물질이 맡고 있다. 이 시멘트로 접착된 세포는 나아가 들면서 세포가 빨리 탈락되지 않게 되고 각질세포의 순환이 이루어지지 않게 되어 피부는 칙칙하고 거칠어질 뿐 아니라 노화가 빨라져 주름살과 거친 피부의 원인이 된다.

각질화(Keratinization)

기저층(Basal layer)에서 생산된 각질세포(Keratinocyte)는 14일 걸려 과립층까지 올라온다. 과립층에서 Keratohyalin의 작용으로 각질화가 시작된다. 이미 세포속의 체액은 빠져나가 세포는 납작해진 상태로 각질화의 준비단계에 이른 셈이다. 세포의 핵, 세포질과 세포소기관은 퇴화되고 케라토히알린(Keratohyalin)으로 교체되어 엘레이딘(Eleidin)으로 다시 변화되었다가 마지막 단계인 각질로 바뀌면서 세포의 일생은 끝나며 각질층으로 밀려 올라간다. 각질은 유황성분을 가진 단백질로 피부는 20%의 수분을 가진 연질각질(Soft Keratin)이며 머리카락과 손톱은 수분이 없는 딱딱한 경질각질(Hard Keratin)이다.

각질이 되어 죽은 세포는 피부표면에서 계속 떨어져 나간다. 여성이 중년에 접어들면 여러 가지 이유로 세포의 박리 또는 낙설(Desquamation)이 제대로 이루어지지 않아 세포재생 회전주기(Cell Turnover Cycle)가 길어지면서 피부가 활력을 잃게 된다. 이것을 방지하고 인위적으로 박리 또는 낙설을 촉진하기 위한 박리제품, 박피수술(Dermabrasion)과 화학적 박리 등 여러 가지 방법으로 표피층을 벗겨내 기저층에서의 세포 분열과 증식을 자극, 젊고 싱싱한 세포가 생산되도록 한다. 세포재생 회전주기는 기저층에서 세포분열로 만들어진 신세포가 성장하면서 각질층까지 도달, 떨어져 나가지까지의 세로의 일생, 즉 세포의 1 회전 주기를 말한다. 기저층에서 여러층을 통과하는 시간을 주행시간(transit time)이라고 하는데 기저층에서 과립층까지의 주행시간은 14일, 과립층에서 각질세포가 되어 각질층에 도달, 탈락할 때까지 14일이 걸려 총 28일이 걸린다. 여성의 나이 25세까지 주행시간이 가장 짧아 세포의 세포재생이 가장 왕성하고 그 이후부터 둔화되기 시작, 60세에 이르면 2배의 시간이 걸린다.

각질 보호 형태 조사의 시행 및 그 결과

각질 보호 형태조사를 통하여 다음과 같은 정보를 얻을 수 있었다. 전체 46명 중 85%의 대상자가 얼굴의 각질에 대해 신경 쓴 적이 있다고 답하였고 그중 56%의 대상자가 각질보호를 실시한 적이 있다고 답하였다. 각질케어의 필요성에 대해서는 전체 46명중 79%의 대상자가 필요하다고 답하였으며 그 이유로는 화장이 잘먹지 않은, 지저분하고 칙칙해 보이는 피부등을 들었다. 지금까지의 각질케어의 방법을 살펴보면 스팀타올 등을 이용한 수건이용법, 천연재료를 이용한 천연재료 이용법과 기능성 제품을 이용하는 방법 등을 들 수 있다. 이들 방법의 문제점들을 살펴보면, 여러 번 씻어주어야 하는 불편함(팩류), 자극으로 인한 피부 벌개짐(AHA 화장료, 스크럽 함유 화장료, 머드팩류), 효과없슴(크림류) 등을 들 수 있다.

본 발명의 목적은 스크럽제를 이용하여 물리적으로 피부와 마찰하여 각질을 제거함으로써 피부의 자극을 야기하는 종래의 각질제거방법이 아닌 저자극이면서도 보다 우수한 각질제거 기능을 갖는 화장료 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 천연클레이와 단백질 분해효소를 포함하는 각질제거용 조성물과 정제수, 보습제, 목단피 추출물, 사과효소 추출물, 세라마이드, 세정제, 에탄올, 계면활성제, 및 식물성 세정제로 이루어진 세정 조성물을 포함하여, 사용하기에 편리하고, 저자극이면서 우수한 각질제거 효능을 나타내는 각질제거용 러빙크림 세트를 제공하는데 있다.

본 발명은 파인애플 줄기와 파파야 나무에서 얻은 단백질 분해효소를 사용함으로써 피부에 저자극이면서 우수한 각질제거 효능이 있는 러빙크림 조성물을 제공한다.

도 1은 피부의 각질층에서 불필요한 각질이 제거됨을 나타내고 있는 피부의 현미경확대 사진이다.

상기의 본 발명의 목적은 파인애플 줄기에서 얻은 단백질 분해효소와 파파야 나무에서 얻은 단백질분해효소 및 천연클레이 성분을 함유하는 러빙크림 조성물에의해 달성된다.

본 발명의 발명자들은 불필요한 각질세포를 잡고있는 세포간 접착물질인 데스모좀이라는 단백질을 효과적으로 제거하기 위해 자연의 여러 가지 천연물질 중에서 각질제거에 효과적인 물질을 연구한 결과, 파인애플 줄기에서 얻어낸 단백질가수분해 효소인 브로멜라인(Bromelain)과 파파야 나무에서 얻어낸 단백질분해효소인 파파인(papain)이 탁월한 단백질분해 효능을 가지고 있으며 피부에의 자극에도 문제가 없음을 밝혀내었다. 또한, 본 발명의 발명자들은 흡착효능이 뛰어난 천연 클레이 성분을 위의 단백질분해효소와 함께 처방할 경우 피부에서의 각질제거효능이 현저하게 증진되는 것을 밝견하였다. 본 발명의 발명자들은 이러한 성분들을 적합하게 함유한 화장료 조성물을 개발하였다.

따라서, 본 발명은 파인애플 줄기에서 얻어낸 단백질가수분해 효소인 브로멜라인(Bromelain)과 파파야 나무에서 얻어낸 단백질분해효소인 파파인을 함유하는 각질제거용 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 본 발명은 파인애플 줄기에서 얻은 단백질가수분해효소인 브로멜라인 및 파파야 나무에서 얻은 단백질분해효소인 파파인과, 천연클레이를 함유하는 각질 제거용 조성물을 제공한다.

본 발명의 각질 제거용 조성물은, 조성물 전체 중량을 기준으로 하여, 10 내지 15중량%의 보습제, 1.2 내지 3.2중량%의 점증제, 10 내지 20 중량%의 천연클레이, 10 내지 20중량%의 고형왁스, 1.0 내지 3.0중량%의 계면활성제, 4 내지 10중량%의 실리콘유, 0.1 내지 0.3중량%의 향, 0.1 내지 0.5중량%의 사과효소 추출물, 0.1 내지 0.5중량%의 브로멜라인과 파파인, 0.1 내지 0.2중량%의 β-히드록시애시드, 0.1 내지 0.5중량%의 목탄피 추출물과 나머지 함량의 정제수를 포함한다. 본 발명의 각질 제거용 조성물은 추가로 0.2 내지 0.4중량%의 방부제와 0.1 내지 0.3중량%의 향을 포함할 수 있다.

본 발명은 또한 각질 제거용 조성물과 세정 조성물을 포함하는 러빙크림 조성물 세트를 제공한다.

본 발명의 러빙크림 조성물 세트는 정제수, 보습제, 방부제, 점증제, 고형왁스, 계면활성제, 실리콘유, 향, 사과추출물, β-하이드록시애시드, 목단피 추출물, 천연클레이와 단백질분해효소로서 브로멜라인과 파파인을 포함하는 각질 제거용 러빙크림 조성물과 정제수, 보습제, 방부제, 목단피 추출물, 사과효소추출물, 세라마이드, 세정제, 에탄올, 계면활성제, 향과 식물성 세정제로 이루어진 세정 조성물을 포함한다.

본 발명의 세정 조성물은, 조성물 전체 중량을 기준으로 하여, 8 내지 12중량%의 보습제, 0.4 내지 0.6중량%의 목탄피 추출물, 0.4 내지 0.6중량%의 사과효소 추출물, 0.5 내지 1.5중량%의 세라마이드, 3.0 내지 4.0중량%의 세정제 0.5 내지 1.5중량%의 에탄올, 1 내지 2.0중량%의 계면활성제, 및 0.4 내지 0.6중량%의 식물성 세정제 및 나머지 함량의 정제수를 포함한다. 본 발명의 세정 조성물은 추가로 0.2 내지 0.3중량%의 방부제 및 0.1 내지 0.2중량%의 향을 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에 함유되고 있는 단백질 분해효소는 파인애플 줄기에서 얻은 브로멜라인과 파파야 나무에서 얻은 파파인이다.

본 발명의 조성물에 함유되고 있는 성분, 즉, 보습제, 방부제, 점증제, 고형왁스, 계면활성제, 실리콘유, 향, 천연 클레이, 세라마이드, 세정제 등은 본 기술분야에서 통상적으로 사용되는 성분이다.

바람직하게는, 본 발명에 사용되는 보습제로는 1,3-부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 및 글리세린이 있으며, 방부제로는 메틸 파라벤(Methyl paraben), 에틸파라벤, 프로필파라벤, 및 부틸 파라벤이 있고, 점증제로는 카르복시 비닐 폴리머, 및 크산탄 검(Xanthan Gum)이 있으며, 계면활성제로는 세테아릴 글리코사이드(Cetearyl glucoside), 소르비탄 스테아레이트(Sorbitan stearate) 및 수크로스 코코에이트(sucrose cocoate)가 있고, 본 발명에 사용되는 향으로는 에센셜 오일(essential oil)이 있다.

본 발명의 조성물에 함유되는 목단피 추출물은 피부 깊숙이 흡수되어 피부의 신진대사를 원활히 하고 수분을 공급하는 성분으로서 대한민국 특허출원 제99-14768호에 개시되어 있다.

본 발명의 각질 제거용 조성물은 정제수를 약 75℃까지 가온한 후, 보습제, 고형왁스, 계면활성제, 향, β-하이드록시 애시드와 사과효소 추출물을 균일하게 혼합하고, 여기에 단백질 분해효소인 브로멜라인과 파파인, 흡착기능이 우수한 천연클레이를 첨가함으로써 제조된다.

본 발명의 사용법은 아래와 같으며 피부 타입에 따라 1주일에 1-3회 정도 또는 그 이상 사용할 수 있다.

사용법

① 얼굴을 깨끗이 세안하고 물기를 제거한 뒤 러빙크림을 얼굴전체에 골고루 펴 바른다.

② 백탁현상(피부에 내용물이 하얗게 남는 현상)이 없어질 때까지 펴 발라준다.

③ 얼굴에 바른 후에 죽인 각질이 내용물에 묻어나도록 손끝으로 꾹꾹 눌러주고 20초 정도 건조시킨다. (너무 오래 건조시키지 않는다).

④ 건조상태를 확인한 후 피부결(안쪽에서 바깥쪽)에 따라 부드럽게 마사지하듯 문지르면 각질이 내용물에 묻어 나온다.

⑤ 내용물을 피부에서 제거할 때에는 과도하게 밀어내지 말고 3 내지 4회 부드럽게 밀어내어 굵은 각질을 제거한 후 페이셜 리파이너를 화장솜에 적셔 잔 각질을 닦아낸다.

⑥ 미온수로 가볍게 물 세안하고 기초화장품을 바른다.

본 발명의 각질제거용 조성물은 피부에 자극을 주지 않으면서 우수한 각질제거효능을 나타내고, 사용하기에도 편리하다.

다음에서 몇가지 실시예에 의해 본 발명을 상세하게 설명한다. 아래의 실시예 및 실험예는 본 발명의 내용을 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 내용이 여기에 한정되지는 않는다.

실시예

실시예 1

일차로 단백질 분해 효능이 우수한 두 가지 인자인 브로멜라인 2%와 파파인 12%를 만니톨에 용해하여 단백질 분해효소제를 준비하였다. 이의 단백질 분해효능의 평가를 위해 단백질 분해효소제 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4중량%의 양을 처리하여 각각의 단백질(세포간접착물질)분해효능의 정도를 측정하였다.

사용된 단백질 분해효소제의 효능정도

단백질 분해효소의 농도(중량%)	분해효능(%)
0.00	0
0.05	20
0.10	25
0.20	45
0.30	42
0.40	43

표 1에서는 단백질 분해효소제의 양변화에 따른 단백질 분해정도를 나타내었는데 단백질 분해 효소제의 양이 증가함에 따라 단백질이 분해되는 정도가 증가되는 것을 불수 있었다. 따라서, 본 발명자들이 찾아낸 브로멜라인과 파파인이 우수한 단백질 분해효소라는 것을 알 수 있다.

실시예 2 내지 실시예 6

우수한 흡착기능을 갖는 천연클레이의 각질제거효능정도를 평가하기 위하여 상기의 조성물 처방에서 천연클레이의 양을 변화시키면서 그 효능 정도를 확인하였다.

천연클레이의 함량에 따른 조제

원료명	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6	비고
원료명	함량(중량%)					비고
정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	A
보습제	12.0	12.0	12.0	12.0	12.0	B
방부제	0.3	0.3	0.3	0.3	0.3	B
점증제	2.2	2.2	2.2	2.2	2.2	C
천연클레이	0.0	5.0	10.0	15.0	20.0	D
고형왁스	15.0	15.0	15.0	15.0	15.0	E
계면활성제	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
실리콘유	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
향	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	F
사과효소추출물	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	G
단백질분해효소	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
β-하이드록시 애시드	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
목단피추출물	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1

위의 A 성분을 약 75℃까지 가온한 후 이에 B성분을 넣고 용해시킨 후 C성분 및 D성분을 넣고 완전히 분산시킨 후에 여기에 약 75℃까지 가온 용해한 E 성분을 첨가하여 균일하게 혼합한 후 약 50℃까지 냉각시킨 다음, F성분 및 G성분을 넣고 혼합하고 30℃까지 방냉하여 조성물을 조제하였다. 위 조성물에서 천연클레이의 양을 0.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0중량%로 변화시키면서 그 조성물의 각질제거 효능정도를 평가하였다. 평가는 피검자가 만족할 수준으로 각질이 제거되는 정도를 10으로 전혀 각질이 제거되지 않은 정도를 1로 정하였다. 또한 피검자는 10명을 대상으로 하였으며 천연클레이의 양은 0.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0중량%의 양을 첨가하여 그 각질제거정도를 확인하였다.

실험결과

천연클레이의 양을 0.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0중량%의 양을 변화시키면서각각의 각질제거정도를 평가해 본 결과 아래와 같은 결과를 확인하였다.

천연 클레이의 변화에 따른 각질 제거 효능

	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6
피검자 1	4	5	6	9	8
피검자 2	5	7	7	8	9
피검자 3	3	5	7	9	9
피검자 4	4	6	6	9	9
피검자 5	4	6	7	8	8
피검자 6	5	6	8	9	9
피검자 7	4	7	8	9	9
피검자 8	5	6	8	9	9
피검자 9	5	7	8	8	9
피검자 10	5	6	7	9	8

표 3을 통하여 상기의 조합물에서 천연클레이의 양을 늘림에 따라 각질이 제거되는 정도가 증가되는 것을 볼수 있었다. 특히 천연클레이의 양이 15중량%와 20.0중량%일 때의 결과가 비슷하게 나타났으나 사용감과 단가 등의 인자 등과 함께 종합적으로 검토할 때 천연클레이의 함유량이 15중량%일 때의 경우에 가장 효율적인 결과를 얻을 수 있었다.

실시예 7

상기 화장품 조합물의 조제법을 실시예를 통해 상세히 설명하면 다음과 같다.

각질 제거용 조성물의 조제

원료명	함량(중량%)	비고
정제수	to 100	A
보습제	12.0	B
방부제	0.3	B
점증제	2.2	C
천연클레이	15.0	D
고형왁스	15.0	E
계면활성제	2.0
실리콘유	5.0
향	0.2	F
사과효소추출물	0.1	G
단백질분해효소	0.2
β-하이드록시 애시드	0.1
목단피추출물	0.1

위의 A성분을 약 75℃까지 가온한 후 이에 B성분을 넣고 용해시킨 후 C성분 및 D성분을 넣고 완전 분산시킨 후에 여기에 약 75℃까지 가온 용해한 E성분을 첨가하여 균일 혼합후 약 50℃까지 냉각시킨 다음 F성분 및 G성분을 넣고 혼합하고 30℃까지 냉각한 후 방냉하여 각질 제거용 조성물을 조제하였다.

세정 조성물의 조제

원료명	함량(중량%)	비고
정제수	to 100	A
보습제	10.0	B
방부제	0.25	B
목단피 추출물	0.5	C
사과효소 추출물	0.5
세라마이드	1.0
세정제	3.5	D
에탄올	1.0	E
계면활성제	1.5
향	0.15
식물성 세정제	0.5	F

위의 A성분에 B성분 및 C성분을 가하여 완전히 용해시킨 후 D성분을 서서히 첨가하여 혼합하였다. 여기에 E성분을 첨가하여 혼합하고 F성분을 서서히 첨가하여 미세 여과하여 세정 조성물을 조제하였다.

실시예 8

위에서 조제한 화장료 조성물에 대한 각질제거 효능을 확인하기 위해 단백질 정량분석에 기초한 시험관내 시험과 피부조직 염색법에 기초한 생체내 시험을 시행하였다.

가. 단백질 정량분석에 의한 제거된 각질세포수의 분석

1. 섬유아세포를 사용한 세포수와 단백질의 분석

1) 실험방법

① 2.2x10⁶세포를 얻어서 PBS 용액으로 2배, 10배, 20배, 200배, 400배, 4000배로 희석하였다.

② 8000rpm으로 3분을 원심분리하여 세포 펠릿(cell pellet)을 모았다.

③ ②에 용해 완충액(10mM HEPES(pH7.0), 10mM NaCl, 1.5mM MgCl₂, 20% 글리세롤, 0.5mM DTT, 0.1% SDS, 1mM PMSF) 100㎕를 넣었다.

④ 초음파분해처리(sonication)을 20초 간격으로 3회 수행하였다.

⑤ 12000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 얻어 단백질 정량화에 이용하였다.

⑥ 단백질 표준 곡성은 Hradford 방법(BIO-RAD)를 이용하여 완성하였다. 1㎎/㎖ BSA를 10㎍/㎖, 20㎍/㎖, 40㎍/㎖, 60㎍/㎖, 80㎍/㎖로 희석하였다. 희석한 BSA 각각의 농도 160㎕와 염색 시약(BIO-RAD) 40㎕를 혼합하여 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader: 모델 3550, BIO-RAD)로O.D 595nm에서 측정하였다.

⑦ ⑤에서 얻은 샘플을 100배 희석한 용액 160㎕와 염색시약(BIO-RAD) 40㎕를 혼합하여 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader: 모델 3550, BIO-RAD)로 O.D 595nm에서 측정하였다.

2) 실험결과

위의 실험을 통하여 다음과 같은 기준 데이터를 얻어내었다.

섬유아세포를 사용한 세포수와 단백질의 분석

세포수	0	550	5.5x10³	1.1x10⁴	1.1x10⁵	2.2x10⁵	1.1x10⁶	2.2x10⁶
log 세포수		2.74	3.74	4.04	5.04	5.34	6.04	6.34
광학밀도	0	0.001	0.002	0.008	0.079	0.185	0.825	0.967
단백질 농도(㎍/㎕)	0	0.29	0.59	2.35	23.2	54.4	242.6	2284.4
단백질량(㎍)	0	29	59	235	2320	5440	24260	228440
log 단백질		1.46	1.77	2.37	3.37	3.74	4.38	5.36

2. 각질 제거제내의 단백질 함유량 분석

1) 실험방법

① 상기의 사용법대로 사용하여 러빙크림 2g, 1g, 0.2g, 0.1g을 위하였다.

② ①에 세포용해 완충액(10mM HEPES(pH7.0), 10mM NaCl, 1.5mM MgCl_2,20% 글리세롤, 0.5mM DTT, 0.1% SDS, 1mM PMSF) 100㎕를 넣는다.

③ 초음파분해처리(sonication)을 20초 간격으로 3회 수행하였다.

④ 12000rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액을 얻어 단백질 정량화에 이용하였다.

⑤ ④에서 얻은 샘플을 100배 희석한 용액 160㎕와 염색 시약(BIO-RAD) 40㎕를 혼합하여 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader: 모델 3550, BIO-RAD)로 O.D 595nm에서 측정하였다.

2) 실험결과

러빙 크림 자체내의 단백질 함유량의 분석

	-	0.1g	0.2g	1.0g	2.0g
광학밀도	0	0.014	0.021	0.449	0.915
단백질농도(㎍/㎕)	0	4.12	6.17	132.06	269.12
단백질의 양(㎍/㎕)	0	412	617	13206	26912

3. 각질 제거 샘플에 대한 단백질 함유량 분석

1) 실험방법

① 상기의 사용법대로 12명의 피검자를 대상으로 얼굴 피부의 5x5cm 부위에 러빙크림 0.1g을 사용하고 그 샘플을 채취하였다.

2) 실험결과

러빙크림에 대한 분석(얼굴 5x5cm, 0.1g 러빙크림 사용)

샘플번호	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
광학밀도	0.266	0.1	0.115	0.18	0.113	0.249	0.12	0.241	0.106	0.1
희석배수	1	5	5	1	1	1	5	1	3	3
단백질농도	78.24	29.41	33.82	52.94	33.24	73.24	35.29	70.88	31.18	29.41
단백질의 양	15236	29410	33408	10176	6326	14236	34878	13764	18296	17234
log 단백질	4.183	4.468	4.524	4.008	3.795	4.153	4.543	4.139	4.262	4.236
log 세포수	5.70	5.96	5.98	5.56	5.40	5.69	6.00	5.70	5.78	5.76
제거된세포수	5.0x10⁵	9.1x10³	9.5x10³	3.6x10⁵	2.5x10⁵	4.9x10⁵	1.0x10⁶	5.0x10⁵	6.0x10⁵	5.8x10⁵

*각질제거 단백질량: (용적 x 희석배수 x 단백질농도)-각질제거제내의 단백질 함유량

나. 피부조직 염색법에 의한 제거된 각질세포의 확인

1) 실험방법

① 적량의 러빙크림을 취하여 상기의 사용법대로 하여 피검자 5명을 대상으로 배부(등)의 좌측피부에 시행한다.

② 시험부위와 대조군으로 우측배부(등)의 피부를 선택하여 양측에서 동일하게 피부천자생검(직경 4mm)을 시행한다.

③ 생검 피부조직을 포르말린에 고정하여 파라핀-함입된 헤마톡실린-에오신(Paraffin-embeded Hematoxylin-eosin) 염색처리를 시행한다.

④ 도포시험 결과를 고배율 (400배, 200배) 현미경 시야에서 형태학적으로 비교 분석한다.

2) 실험결과

① 피부 각질층 표면의 일부 각질이 제거되었으며, 대조군과 비교하여 약 5 내지10%정도 각질층 두께의 감소를 확인하였다.

② 시험군과 대조군의 비교에서 피부각질층의 두께의 감소 이외의 형태학적인 이상변화는 관찰되지 않았다.

실시예 9

피부 자극에 대한 실험

피부 자극에 대한 실험은 미국 FDA인 쉘란스키 앤 쉘란스키 방법(Shelanski Shelanski procedure)을 사용하였다.

방법

① 패취 유닛(patch unit)은 핀 챔버(finn chamber)를 사용한다.

② 시험부위는 전박부로 70% 에탄올로 닦아내고 나서 건조시킨 후 각질 제거용 조성물을 20㎕를 챔버내에 적하시킨 후 도포, 도포부위는 표시 팬(marking pen)으로 표시한다.

③ 24시간 폐쇄 첩포한다.

④ 제거후 피부 반응을 평가한다.

⑤ 첩포제거 24, 48, 72시간에 피부 반응을 평가하며 평가기준은 ICDRG(international contact dermatitis research group)규정에 의한다.

기 호	판 정 기 준
±	의심스러운 또는 미미한 홍반등
+	약한 반응(소수포를 동반하지 않음), 홍반, 구진
++	중성도 반응(소수포를 동반함), 홍반, 구진, 소수포
+++	강한 반응, 대수포 반응
-	음성

결과

	24시간	48시간	72시간	비고
피검자 1	-	-	-
피검자 2	-	-	-
피검자 3	-	-	-
피검자 4	-	-	-
피검자 5	-	-	-
피검자 6	-	-	-
피검자 7	-	-	-
피검자 8	-	-	-
피검자 9	±	-	-
피검자 10	-	-	-
피검자 11	-	-	-
피검자 12	-	±	-
피검자 13	-	-	-
피검자 14	-	-	-
피검자 15	-	-	-
피검자 16	-	-	-
피검자 17	-	-	-
피검자 18	-	-	-
피검자 19	-	-	-
피검자 20	-	-	-

상기 실험결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 각질제거용 조성물은 피부에 대한 자극을 거의 나타내지 않거나 전혀 나타내지 않고 있다.

이상에서와 같이, 본 발명의 각질제거용 조성물은 피부에 자극을 주지 않으면서 우수한 각질제거효능을 나타내고, 사용하기에도 편리하다.

Claims

피부에 자극이 없으며 각질제거 효능이 우수한 러빙크림 조성물로서, 조성물 전체 중량을 기준으로 하여, 10 내지 15중량%의 보습제, 1.2 내지 3.2중량%의 점증제, 10 내지 20 중량%의 천연클레이, 10 내지 20중량%의 고형왁스, 1.0 내지 3.0중량%의 계면활성제, 4 내지 10중량%의 실리콘유, 0.1 내지 0.5중량%의 사과효소 추출물, 0.1 내지 0.5중량%의 단백질분해효소, 0.1 내지 0.2중량%의 β-히드록시애시드, 0.1 내지 0.5중량%의 목탄피 추출물을 포함하는 각질제거용 러빙크림 조성물.
제 1항에 있어서, 0.2 내지 0.4중량%의 방부제 및 0.1 내지 0.3중량%의 향을 추가로 포함함을 특징으로 하는 각질제거용 러빙크림 조성물.
제 1항에 기재된 각질 제거용 러빙크림 조성물과 8 내지 12중량%의 보습제, 0.4 내지 0.6중량%의 목탄피 추출물, 0.4 내지 0.6중량%의 사과효소 추출물, 0.5 내지 1.5중량%의 세라마이드, 3.0 내지 4.0중량%의 세정제 0.5 내지 1.5중량%의 에탄올, 1 내지 2.0중량%의 계면활성제, 및 0.4 내지 0.6중량%의 식물성 세정제로 이루어진 세정 조성물을 포함하는 러빙크림 조성물 세트.
제 3항에 있어서, 세정 조성물이 0.2 내지 0.3중량%의 방부제, 및 0.1 내지 0.2중량%의 향을 추가로 포함함을 특징으로 하는 러빙크림 조성물 세트.