KR100284928B1 - 파장 특이적인 감광성 포르파시아닌 및 확대된 포르피린-유사화합물과 그것의 제조방법 및 사용 - Google Patents

파장 특이적인 감광성 포르파시아닌 및 확대된 포르피린-유사화합물과 그것의 제조방법 및 사용 Download PDF

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Abstract

400-850 나노미터의 범위에서 흡광 최대치를 갖는 신규한 확대된 포르피린-유사 화합물, 포르파시아닌(Pc) 및 포르파시아닌-유사화합물은 표적된 조직, 세포 및 바이러스를 검출하고 치료하는데 유용하다. 본 발명의 Pc의 사용은 조사가 혈액에 의해 흡수되는 것외의 파장을 포함하도록 한다. 본 발명의 Pc는 면역글로불린 또는 그것의 단편과 같은 표적- 특이적인 부분에 콘쥬게이트되어 방사선 치료에 대하여 특이적인 조직 또는 세포를 표적할 수도 있다. 이들 물질의 사용은 치료 침투의 더 큰 깊이와 표적하는 조직 또는 세포의 더 큰 특이성을 허용한다. 적당한 상자성 이온 또는 방사성 동위원소와 커플링될때 본 발명의 Pc는 핵자기 공명영상 및 방사영상에서 사용하는데 적당하다. 본 발명의 Pc를 합성하는 신규방법이 개시된다.

Description

[발명의 명칭]
파장 특이적인 감광성 포르파시아닌 및 확대된 포르피린-유사화합물과 그것의 제조방법 및 사용
[도면의 간단한 설명]
제1도는 식 I의 포르파시아닌의 구조를 나타내며,
제2도는 식 I의 포르파시아닌을 합성하기 위한 한가지 방법을 예시하며,
제3도는 식 I의 포르파시아닌을 합성하기 위한 다른 방법을 예시하며,
제4도는 식 I의 포르파시아닌을 합성하기 위한 방법을 예시하며,
제5도는 본 발명내에 있는 포르파시아닌- 유사화합물의 구조를 나타내며,
제6도는 본 발명내에 있는 다른 포르파시아닌- 유사화합물의 구조를 나타내며,
제7도는 본 발명내에 있는 더 다른 포르파시아닌- 유사화합물의 구조를 나타내며,
제8도는 본 발명내에 있는 또다른 포르파시아닌- 유사화합물의 구조를 나타내며,
제9도는 456nm에서 여기될때 식 I의 포르파시아닌의 유리염기의 방출파장을 예시하며,
제10도는 456nm에서 여기될때 식 I의 양성자화 포르파시아닌의 방출파장을 예시하며,
제11도는 식 I의 포르파시아닌을 합성하기 위한 신규한 방법을 예시하며,
제12도는 식 I의 포르파시아닌을 합성하기 위한 신규하고 단순화된 방법을 예시하며,
제13도는 두개의 다리결합 탄소원자상에 치환 또는 비치환 페닐기를 함유하는 본 발명내의 포르파시아닌을 합성하기 위한 신규한 방법을 예시하며,
제14도는 두개중 하나의 다리결합 탄소원자상에 치환 또는 비치환 페닐기를 함유하는 본 발명내의 비대칭 포르파시아닌을 합성하기 위한 신규한 방법을 예시한다.
[발명의 상세한 설명]
[발명의 분야]
본 발명은 신규한 확대된 파장 특이적인 감광성 포르파시아닌 및 확대된 포르피린- 유사화합물, 그것의 신규한 제조방법 및 조사에 의하여 표적세포 또는 조직의 검출 또는 파괴를 중재하기 위한 이들 화합물의 사용에 관한 것이다. 상세하게는 본 발명은 250 내지 280 나노미터(nm)의 범위에서 흡광 최대치를 갖는 포르파시아닌 및 다른 포르파시아닌- 유사화합물과 그것의 유도체의 제조방법과, 검출하거나 파괴시킬 세포 또는 조직의 조사를 중재하기 위한 그것의 사용에 관한 것이며, 조사효과를 특정 표적 조직에 집중시키기 위한 이들 화합물 또는 콘쥬게이트의 사용에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 방사영상 및 자기공명영상법에서 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물과 그것의 유도체의 사용에 관한 것이다.
[발명의 배경]
포르피린 및 다른 테트라피롤류 매크로고리의 합성과 연구에 상당한 노력을 기울여 왔지만 소위 “확대된 포르피린(expanded porphyrins)”이라고 불리우는 보다 큰 방향족 피롤 함유 시스템에 대하여는 별로 알려지지 않았다. 그러한 시스템은 더 많은 수의 π전자, 추가의 배위 헤테로원자 및 더 큰 중심 결합 핵을 함유함으로써 포르피린을 능가하는 이점을 제공한다.
이들 화합물의 연구는 수십년 전에 트리피란 디카르복실산 및 비피롤디카르복시알데히드로부터 사피린의 처음 보고된 합성으로 시작되었다(Woodward, R. B., Aromaticity Conference, Scheffield, England, 1966; Broadhurst et al., J. Chem, Soc. Perkiins Trans. (1972) 1:2111 및 Bauer et al. (1983) J. Am. Chem. Soc. 105: 6429 참조). 비피롤디카르복시알데히드 및 피롤디피로메탄디카르복실산으로 부터 스마라그디린의 합성은 1970년에 M. M. 킹(M. M. King, Ph. D. Dissertation, Harvard University, Cambridge, MA)에 의하여 보고되었다.
수퍼프탈로시아닌의 우란일 착체는 역사적으로 중요한 다른 펜타피롤류 매크로 고리화합물이다. 이 화합물은 디시아노벤젠과 이염화 우란일의 직접적인 정규 축합에 의해 제조되었지만 그 유리염기는 불안정하다 (Day et al. (1975) J. Am. Chem. Soc. 97: 4519). 탈금속화는 프탈로시아닌을 형성하기 위한 고리의 수축을 가져온다 (Marks, T. J. 및 D. R. Stojakovic (1978) J. Am. Chem. Soc. 100:1695).
고사우어(Gossauer)는 비스-α-트리피란과 트리피란 디알데히드를 축합하고 이어서 산화시킴으로써 먼저 헥사피린을 합성하였다 (Bull. Soc. Chim. Belg (1983) 92:793). 헥사피린에 존재하는 여섯개의 다리결합 중에서, 두개는 E 구조를 갖는다 (Id). 샤리에르(Charriere)는 헥사피린이 몇가지 전이금속을 가진 이금속(bimetallic) 착체를 형성한다고 보고하였다 (1987, Thesis, University de Fribourg, Suisse). 다른 헥사피롤시스템인 루비린은 최근에 합성되고 구조적으로 규정되었다 (Sessler et al. (1991a) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 30:977).
비닐로그 포르피린 또는 플라티린은 R. A. 버거와 E. 르고프(R. A, Berger 및 E. LeGoff Tetra. Lett. (1978) 44:4225; LeGoff, E. 및 O. G. Weaver (1987) J. Org. Chem. 52:711; Franck et al. (1988) Proc. SPIE Int. Soc. Opt. Eng., Ser. 5, 997:107)가 먼저 기술한 피롤함유 매크로고리의 다른 중요한 부류이다. 이들 화합물은 보통 디피로메탄을 비닐알데히드 치환 디피로메탄과 반응시킴으로써 합성된다 (Beckman et al. (1990) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 29:1395). 비스비닐로그 확대된 포르피린은 정상적으로 하나의 원자 메소다리 결합 네개 모두가 확대된 테트라비닐로그 포르피린으로 더 확대되었다. 테트라비닐로그 포르피린은 N-보호된, 피롤- 치환 알릴 알코올의 산촉매 자가치환에 의해 만들어진다. 테트라비닐로그 포르피린은 보통의 포르피린으로 부터 150nm 이상의 매우 강한 소렛 유사(Soret-like) 밴드 이동을 갖는다 (Gosmann, M. 및 B. Franck (1986) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 25:1100; Knbel, G 및 B. Franck (1988) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 27:1170). 또한, 비스비닐로그 포르피센의 합성은 최근에 보고되고 있다 (Jux et al. (1990) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 29:1385; Vogel et al. (1990) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 29:1387)
텍사피린으로 나타내는 시프염기(Schiff-base) 화합물은 피롤함유 매크로고리의 다른 부류이다 (Sessler et al. (1987) J. Org. Chem. 52:4394; Sessler et al. (1988) J. Am. Chem. Soc. 110:5586). 텍사피린은 트리피란 디알데히드와 o-페닐렌디아민의 산촉매 축합에 의해 합성된다. 텍사피린의 몇가지 유사체는 유사한 수단을 사용하여 제조되고 있다(Sessler et al. (1991b) Abstract of the 201st Natl. Soc. Mtg., Inorganic Division; Sessler et al. (1992) Inorg. Chem. 28:529).
악성 세포의 검출 및 치료를 위하여 조사와 더불어 포르피린의 사용은 지금까지 상당한 역사를 가지고 있다 (예를들면 PORPHYRIN PHOTOSENSITIZATION (kessel, D. et al., eds. Plenum Press, 1983참조). 어떤 포르피린은 “자연적으로” 악성세포를 국소화시킬 수 있는 것처럼 보인다. 조사되었을 때, 포르피린은 그것을 유용하게 만드는 두가지 특성을 갖는다. 먼저, 자외선 또는 가시광선으로 조사되었을 때, 그것은 형광물질이 되어서 악성 종양의 검출에 관한 진단방법에 유용하게 된다 (예를들면, Kessel et al., 상기 참조; Gregory, H. B. Jr. et al., Ann. Surg. (1968) 167:827-829참조).
또한, 자외선(UV), 가시광선 또는 근적외선으로 조사되었을 때, 어떤 포르피린은 국소화되는 세포에 대한 세포독성 효과를 나타낸다 (예를들면, Diamond, I. et al., Lancet (1972)2:1175-1177; Dougherty, T. J. et al., Cancer Research (1978) 38:2628-2635; Dougherty, T. J. et al., THE SCIENCE OF PHOTO MEDICINE 625-638 (J. D. Regan & J. A. Parrish, eds., 1982); Dougherty, T. J. et al., CANCER: PRINCIPLES AND PRACTICE OF ONCOLOGY 1836-1844 (V. T. DeVita Jr. et al., eds., 1982). 사피린, 텍사피린 및 비닐로그 포르피린과 같은 몇가지 확대된 포르피린은 종양 광선 요법용 전위 감광제로서 흥미를 끌게하는 단일의 긴 파장과 일중 항 산소발생 특성을 갖는다 (Maiya et al. (1990) J. Phys. Chem. 94:3597; Sessler et al.(1991c) SPIE Soc. 1426:318; Franck et al., 상기 참조).
표적 세포에 특이적인 면역글로불린과의 헤마토포르피린과 같은 어떤 포르피린의 콘쥬게이션이 원하는 세포 또는 조직으로 향하게 하는 어떤 포르피린의 능력을 개선할 수 있다고는 하지만, 이 일반적인 치료접근에 부수하는 다른 문제점; 즉 630nm 의 범위에서 어떤 포르피린을 활성화시키는데 요구되는 조사를 위한 파장도 혈액 및 다른 조직내에서 정상적으로 존재하는 천연 발색단 및 다른 포르피린에 의해 쉽게 흡수되는에너지라는 문제점을 아직 해결하지 못하고 있다. 그러므로, 효과적인 치료의 깊이는 헤모글로빈과 같은 광흡수 천연 발색단의 차단 효과 때문에 몇 밀리미터로 제한된다. 따라서, 조사의 효과를 조절하기 위하여 더 긴 파장에서 여기되어 피검 유기체 전체에 걸쳐서 존재하는 천연 발색단의 차단 효과를 피할 수 있는 화합물을 투여하는 것이 요망된다.
광선요법에 더하여 확대된 포르피린은 자기공명 영상(MRI)에 유용하다. MRI 는 정상 및 비정상 조직을 관찰하여 발전의 초기 단계에서 인식할 수 있는 비침습 비이온화 방법이다. 그러나 병든 조직대 정상조직에 대한 신호증강의 정도로는 이 방법으로 많은 임상 상황에 사용하기에 종종 불충분하게 된다는 점에서 MRI 는 심각한 단점을 갖는다. 이 문제를 극복하기 위하여 MRI 용 콘트라스트 시약을 개발하는데 상당한 노력이 계속되고 있다. 가돌리늄 (III)(Gd) 으로 부터 유도된 것과 같은 상자성 금속 착체가 최근에 임상 실험에서 특히 효과적이라고 판명되었다.
최근, MRI 콘트라스트제내 가돌리늄 배위는 카르복실레이트형 리간드를 사용하여 달성되고 있다 (예를들면, Lauffer, R. B. (1987) Chem. Rev. 87:901; Kornguth et al. (1987) J. Neursurg. 66:898; Koenig et al. (1986) Invest. Radiol. 21:697; Chacheris et al. (1987) Inorg. Chem. 26:958; Loncin et al. (1986) Inorg. Chem. 25:2646; Chang, C. A. & V. C. Sekhar (1987) Inorg. Chem. 26:1981 참조). 공지 시스템은 모두 높은 열역학적 안정성이지만 내재적 불안정성을 갖는다. 반면에, 어떤 확대된 포르피린은 Gd (III)와 안정한 착체를 형성할 수 있으며 정상 포르피린과는 안정한 착체를 형성하지 않는다. 그 결과, 그것은 MRI 콘트라스트제로서 개선된 접근법을 제공한다. 세슬러 등은 시험관 내에서 텍사피린이 극도로 안정한 Gd (III) 착체를 형성한다고 보고하였다 (Sessler et al. (1989) Inorg. Chem. 28:3390). Gd (III)에 더하여, 텍사피린은 Cd 및 Eu와 같은 다양한 전이금속과 착체를 형성하는 것으로 보고되었다 (Sessler, J. L. 및 A. K. Burrell (1992) Top. Cur. Chem, 161:177).
[발명의 개시]
본 발명은 표적조직, 세포 및 병원체의 검출 및/ 또는 치료에 사용하는데 적당한 신규한 광흡수 화합물을 제공한다. 또한, 본 발명은 신규한 확장된 포르피린 (포르파시아닌) 의 신규한 제조방법을 제공하며 이것은 포르파시아닌의 수율을 증가시키고, 또는 합성방법을 매우 단순화시킨다. 이들 화합물은 혈액 또는 다른 조직내에 고농도로 존재하는 성분, 특히 헤모글로빈 및 미오글로빈과 정상적으로 결합된 포르피린 잔기에 의하여 정상적으로 흡수되는 범위 밖의 에너지 범위에서 방사선을 흡수할 수 있는 능력에 기인하여 상대적으로 적은 투여량으로 투여될 수 있다. 그러므로, 더 높은 활성화 파장을 갖는 이들 신규한 확대된 포르피린- 유사화합물을 제공함으로써, 조사 치료는 천연 발색단이 활성성분과 광자가 경쟁하지 않는 파장에서 실행될 수 있다. 이것은 광의 더큰 침투 깊이를 가져온다. 이들 화합물은 비표적 조직 및 세포와 비교할 때 표적조직 및 세포에 우선적으로 잔류한다.
따라서, 방사성 동위원소 또는 상자성 이온 포르파시아닌 및 포르파시아닌 유사화합물로 표지되거나 콘쥬게이트될 때 각각 방사영상 및 자기 공명 영상 콘트라스트제로서 특히 유용하다. 또한, 유용한 금속결합 심부의 증가된 안정성과 금속과 결합할 수 있는 더 많은 수의 원자는 포르파시아닌과 포르파시아닌 유사화합물이 자기 공명 콘트라스트제로서 특히 유용한 것이 되게 한다.
본 발명의 포르파시아닌 및 다른 신규한 포르파시아닌 유사화합물과 금속원소를 함유하는 그것의 콘쥬게이트의 다른 이점은 UV, 가시광선 또는 근적외선에 노출될때 냉광을 발하는 그것의 능력이다. 따라서, 이들 화합물은 병소 및 종양을 검출하는데 특히 유용하다. 이 형광 유도체의 집합은 여기서 “포르파시아닌”과 포르파시아닌 유사화합물”로 언급된다.
포르파시아닌은 식 I의 화합물로 예시되며, 식중에서 R 은 치환 및 비치환 알킬, 알켄일, 알킨일; 치환 및 비치환 아릴; 알킬 또는 아릴술포닐; 알킬 또는 아릴 시아노; 할로겐; 시아노; 니트로; 아미노; 카르복시; 카르보알콕시 또는 그것의에스테르, 아미드 또는 염 등으로 이루어진 군을 포함하는 비간섭 치환기이며 이에 한정되지 않는다.
여기서 사용되는 바의 카르복시는 통상 정의된 바와 같이 -COOH 이고 카르보알콕시는 R 이 알킬(1-6C)인 -COOR 이다. 여기서 사용되는 바의 알킬은 메틸, 에틸, 2-메틸펜틸, t-부틸, n-프로필등과 같은 1 내지 6개의 탄소원자를 갖는 포화 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소이다.
아릴(6-10C)은 할로 (플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도), 저급알킬(1-4C) 또는 저급알콕시(1-4C)로 부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 치환기로 선택적으로 치환된 페닐이다. 알콕시는 R 이 여기서 정의된 바의 알킬인 -OR 이다.
아릴(6-10C) 또는 알킬(1-6C) 술포닐 부분은 R 이 알킬이거나 상기 정의된 바와 같은 아릴인 식 SO2R 을 갖는다.
또한 본 발명의 화합물은 -COOH 의 염,에스테르 및 아미드를 포함한다. 생체내 사용을 위하여 이들 염, 에스테르 및 아미드는 약학적으로 허용가능하며 비독성이어야 하는데 이것은 시험관내 사용과 밀접한 관계가 없는 필요조건이다. “염, 에스테르 및 아미드”는 약학적으로 허용가능한 비독성 무기 및 유기염기를 포함하여 무기 또는 유기염기로 부터 유도되는 염과 R 이 여기서 정의된 바와 같은 알킬인 식 ROH 또는 RNH2또는 R2NH의 알코올 또는 1차 또는 2차 아민으로 부터 유도되는 아미드 또는 알킬에스테르이다. 적당한 무기 염기는 수산화나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼숨 및 마그네슘등을 포함한다. 특히 칼륨 및 나트륨 염이 바람직하다. 약학적으로 허용가능한 유기비독성 염기는 고리아민을 포함하여 1차, 2차, 3차 및 4차 아민과 염기성 이온결합수지를 포함한다. 이소프로필아민, 트리메틸아민,에탄올아민, 디시클로헥실아민, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 콜린, 베타인, 글루코사민, 테오브로민, 푸린, 피페라진, 폴리아민수지 등을 예로 포함한다.
염 유도체는 유리산을 적당한 양의 약학적으로 허용가능한 염기로 처리함으로써 제조된다. 반응은 무수 조건하에 또는 수중에서 단독으로 또는 비활성, 수혼화성 유기용매와 조합하여 약 0℃ 내지 약 100℃의 온도, 바람직하게는 실온에서 염기에 대한 본 발명의 화합물의 적당한 몰농도로 실행될 수 있다. 전형적인 비활성, 수혼화성 유기용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 아세톤, 디옥산 또는 테트라히드로푸란을 포함한다.
염 유도체는 약 0℃ 내지 약 50℃의 온도, 바람직하게는 실온에서 산, 바람직하게는 무기 산, 예를들면 염산, 황산등으로 산성화시킴으로써 각각의 유리염기로 재전환될 수 있다.
에스테르는 해당 유리염기를 원하는 에스테르에 해당하는 알코올 시약으로 에스테르화하여 제조된다. 이 반응은 삼염화붕소, 염화수소, 황산, p-톨루엔술폰산등과 같은 강산의 존재하에 실행된다.에스테르화에서 사용되는 알코올 시약은 반응온도에서 액체이기 때문에 알코올 시약이 반응용매가 될수 있다. 선택적으로, 반응은 탄화수소용매, 예를들면, 헥산, 이소옥탄, 데칸, 시클로헥산, 벤젠, 톨루엔, 크실렌, 할로겐화 탄화수소용매, 예를들면 염화 메틸렌, 클로로포름, 디클로로에탄; 또는에테르 용매, 예를들면 디에틸에테르, 디부틸 에테르, 디옥산, 테트라히드로푸란등과 같은, 유리산과 알코올 시약이 용해될 수 있는 비활성 유기용매로 실행될 수 있다. 반응은 약 0℃에서 반응혼합물의 환류온도까지, 바람직하게는 15℃ 내지 약 35℃의 온도에서 염화수소를 사용하여 실행된다.
생성물은 반응혼합물을 물로 희석하고, 생성된 수성 혼합물을 디에틸에테르, 벤젠, 염화 메틸렌등과 같은 수혼화성 비활성 유기용매로 추출하고, 추출물을 모으고, 추출물을 물로 중성이 될때까지 세척하고 그 다음 감압하에 증발시키는 것과 같은 종래수단에 의해 단리된다.
대안으로, 알킬에스테르는 이 분야에 공지인 방법에 따라서 에스테르 교환반응에 의하여 제조될 수 있다. 저급에스테르에서 고급에스테르로, 예를들면 메틸에스테르에서 이소아밀에스테르로 에스테르 교환반응을 경유하여 에스테르를 제조하는 것이 바람직하다. 그러나, 실질적으로 과량의 저급 알코올을 사용함으로써, 고급에스테르는 저급에스테르로 에스테르 교환할 수 있으며 따라서, 예를들면, 실질적으로 과량의 에탄올을 사용함으로써, 헥실에스테르는 에스테르 교환반응에 의하여 에틸에스테르로 전환된다.
또다른 대안에서,에스테르는 비양성자성 유기용매내에 저온에서 유리산 형태를 디아조메탄, 디아조-n- 헥산 또는 디아조-i- 프로판과 같은 적당한 디아조 알칸과 반응시킴으로써 제조될 수 있다.
아미드는 예를들면 티옥실클로라이드에 의하여 카르복실산 잔기를 활성화시키고 적당한 아민으로 처리하여 얻어진다.
본 발명의 표적세포 및 조직의 예는 혈액암을 포함한 종양, 악성골수, 바이러스성 감염혈 액세포 또는 골수, 이형성 세포 또는 조직, 염증 또는 감염부위, 건선반 또는 유두종 바이러스 (사마귀) 또는 신생동맥 과형성 병변 같은 과증식 조직, 단순성 혈관종 같은 과혈관신생, 아테롬성 동맥경화 반점, 모낭, 유리된 바이러스, 박테리아, 원충류 또는 다른 병원성 기생체를 포함하며 이에 한정되지 않는다.
또다른 양태에서, 본 발명은 포르파시아닌 및/ 또는 포르파시아닌 유사화합물을 사용하여 일정한 바이러스, 박테리아, 원충류 및 다른 병원성 기생체를 비활성화시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 의하여 계획된 표적 병원체는 사람 거대세포 바이러스, 엡스타인-바르바이러스, 마렉병 포진 바이러스, 사람 단순포진 바이러스, 대상포진 바이러스와 같은 엔벨로프 바이러스, Poxviridae과의 구성원, 사람 간염 C형 바이러스를 포함하여 사람 간염 A형 바이러스(HAV), 사람 간염 B형 바이러스(HBV) 및 비 A형 비 B형 간염 바이러스와 같은 Hepadnaviridae과의 구성원, 인플루엔자 바이러스 A, B 및 C형과 같은 Orthomyxoviridae과의 구성원, 사람 T세포 백혈병 바이러스, 사람 면역결핍 바이러스와 같은 Retroviridae과의 구성원 및 진드기 매개 뇌염 바이러스 또는 황열 바이러스와 같은 Flaviviridae과의 구성원을 포함한다.
본 발명에 의해 계획되는 병원체의 다른 부류는 Plasmodium malariae, P. falciparum, P. ovale, P. vivax 및 Trypanosoma curzi 와 같은 기생체를 포함한다.
광역학적 활성에 의하여 처리될 수 있는 Bacillus subtilis, Streptococcus faecalis, Pseudomonas spp., Mycobacterium spp. 및 다른 기회 주의의 유기체를 포함하는 박테리아의 박멸도 본 발명에 의해 계획된다.
또한, 본 발명내의 포르파시아닌 및 포르파시아닌 유사화합물은 폴리클론 및 모노클론항체와 그것의 단편을 포함하는 면역글로불린과 같은 표적 특이적인 부분(Tsm), H2-아고니스트, 에스트로겐 및 테스토스테론을 포함하는 스테로이드, 만노스와 같은 당류와 T-세포리셉터 및 알파- 베타 헤테로이량체와 같은 펩티드에 콘쥬게이트될 수 있다. Tsm 과의 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물의 콘쥬게이션은 원하는 표적 조직내에 그것의 농축을 촉진한다.
따라서, 한가지 양태에서, 본 발명은 식 Tsm-L-Pc의 콘쥬게이트에 관한 것이며, 여기서 Tsm 은 면역글로불린 또는 호르몬과 같은 표적 특이적인 부분을 나타내며, Pc는 400-850nm 의 범위내에서 흡광 최대치를 갖는 포르파시아닌 유도체를 나타내며 L 은 이들 성분을 결합하는 공유결합을 나타내거나 Tsm와 Pc 각각에 공유결합된 결합부위를 나타낸다.
바람직하게는 Pc는 모노-, 디 및 올리고- 피롤 전구체를 고리화하여을 함유하는 매크로고리를 얻는 방법을 사용하여 얻어진 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사유도체로 구성된 군으로 부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 발명은 UV, 가시광선 또는 근적외선의 존재하에 포르파시아닌 및 포르파시아닌 유사화합물을 단독으로 또는 상술된 콘쥬게이트를 사용하여 표적 세포에 대하여 세포 독성을 유효화하는 방법에 관한 것이다.
더 추가의 양태에서, 본 발명은 포르파시아닌 및 포르파시아닌 유사화합물 또는 그것의 콘쥬게이트를 사용하여 병든 조직을 검출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물은 방사영상 (신티그래프영상) 을 위한 방사성 동위원소 또는 진단영상화제로서 사용하기 위한 자기공명 영상 증강제로 표지되거나 콘쥬게이트될 수 있다. 포르파시아닌 및 포르파시아닌 유사화합물에 대한 유용한 표지가 되는 방사성 동위 원소의 예는 요오드-123, 요오드-131, 테크네튬-99m, 인듐-111 및 갈륨-67을 포함한다. 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물과 콘쥬게이트되는 경우 MRI 영상 증강에 유용한 화합물의 예는 Gd, Mn, Eu, Dy, Pr, Pa, Cr, Co, Fe, Cu, Ni, Ti 및 V와 같은 원소의 상자성 이온을 포함한다.
더 이상의 양태에서 본 발명은 이들 활성성분을 함유하는 약학적 조성물에 관한다.
[발명의 실행방식]
[포르파시아닌 및 포르파시아닌-유사화합물]
본 발명의 모든 조성물은 신규한 확대된 포르피린- 유사 매크로고리 유도체, 즉 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물을 광흡수 화합물로서 사용하며, 400-850nm 의 범위에서 광흡수 최대치를 갖는다. 포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사화합물은 공지된 폴리피롤 매크로고리의 다리결합중 적어도 하나가으로 치환된 매크로고리이다. 그러한 화합물의 핵의 전형적인 예는 제1도 및 제5도 내지 제8도에 도시되어 있다.
본 발명에 유용한 포르파시아닌의 특이적인 제법은 빙초산중의 2-벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸-5- 메틸피롤에 테트라아세트산 납을 가함으로써 달성된다. 에틸렌글리콜은 어떤 남아있는 Pb (IV) 를 감소시키기 위하여 가한다. 물을 가하고 5-아세톡시메틸-2- 벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸피롤 (제3도의 화합물 A) 을 여과하여 모으고 추가로 물로 세척한다. 5-아세톡시메틸-2- 벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸피롤을 물중의 아세트산에 가하고 가열한다. 상기 용액을 실온으로 냉각시킬 때 고체생성물이 큰 덩어리로 침전한다. 물을 가하고 생성물을 여과하여 모은 다음 추가의 물로 세척한다. 여액을 CH2Cl2로 추출한 다음 증발시켜 고체 생성물을 생성한다. 고체 생성물을 모은 다음 CH2Cl2와 헥산용액으로 부터 재결정화한다.
테트라히드로푸란(THF) 중의 5, 5′-비스 (벤질옥시카르보닐)-3, 3′-4, 4′-테트라에틸-2, 2′-디피로메탄 (제3도의 화합물 B) 을 Pd/C 및 트리에틸아민의 존재하에서 수소하에 교반한다. 촉매가 셀라이트로 통과하여 여과된 후, 여액을 증발건조시켜서 디카르복실산을 얻는다. 디카르복실산을 N, N- 디메틸포름아미드에 용해시키고 아르곤하에 비등가열한다. 용액을 냉각시키고 과량의 냉각된 염화벤질을 비스- α- 유리 디피로메탄 (화합물 B)에 가한다. 반응 혼합물을 교반하고 고체 생성물을 여과하여 모은다. 고체 생성물을 물에 가하고 NaHCO3를 사용하여 염기화하고 60℃로 가열한다. 용액으로부터 엷은 황색 생성물을 결정화하고 여과하여 물로 세척한다.
에탄올중의 3, 3′, 4, 4′- 테트라에틸-5, 5′-디포르밀-2, 2′- 디피로메탄 (제3도의 화합물 C)를 아르곤으로 버블링한 다음 염화수소 히드록시아민과 아세트산나트륨을 가한다. 이 혼합물을 아르곤하에 가열한 다음 용매를 제거하고 생성물을 진공하에 밤새도록 건조시킨다. 비스옥심을 무수아세트산에 용해시키고 아르곤으로 포화시킨다. 미정제 비스니트릴 생성물 (제3도의 화합물 D) 은 무수 아세트산을 제거한 후 흑색 고체로서 얻으며 진공건조시킨다. 생성물은 CH2Cl2중의 0.5% 메탄올로 실리카겔 칼럼, 이어서 10∼20% EtOAc로 알루미나 컬럼에 의해 정제한다. 용매를 증발시켜서 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노디피로메탄을 엷은 분홍색 결정으로 얻는다.
한가지 구체예 (제3도)에서, 그 다음에 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노디피로메탄을 THF에 용해시키고 LiAlH4의 THF 현탁액에 가한다. 생성된 혼합물을 교반하고 물을 가한다. 고체 생성물이 형성되며 이것을 여과제거한다. 용매를 증발시킨 후 진공 건조시켜서 비스아민 생성물을 얻는다. 비스- 아민을 무수메탄올에 용해시키고 비스- 알데히드를 가한다. 용액을 버블링하고 질소로 환류시킨다. 티오시안산 납(Pb(SCN)2) 을 가하고 용액을 환류시킨다. 산소 기체를 실온에서 용액을 통과시켜 버블링한다. 용매를 증발시킨 후, 미정제 포르파시아닌 생성물을 증발건조시킨다. 생성물을 CH2Cl2중의 아세트산에틸로 Al2O3컬럼에 의해 정제한다. 녹색 용출액을 모으고 농축시킨다. 용매를 증발시킨 후 포르파시아닌 매크로고리의 결정을 얻는다.
대안의 구체예에서, 무수 THF 중의 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′-시아노피로메탄을 0℃에서 질소하에 LiAlH4의 THF 현탁액에 가한다. 혼합물을 교반하고 물을 가하여 반응을 억제하고 침전물을 여과제거한다, 금색 용액을 등몰 분량의 Pb (SCN)2와 무수 황산나트륨을 함유하는 2 구 플라스크에 옮긴다. 무수 메탄올을 가하고 혼합물을 환류시킨다. 색이 점차 자주색에서 진한 녹색으로 변한다. 반응을 중지하고 공기를 용액에 천천히 통과시켜서 버블링한다. 미정제 생성물을 염화 메틸렌에 용해시키고 고체를 여과제거한다. 녹색용액의 부피를 대략 5㎖로 감소시킨 다음 알루미늄 컬럼에 충전하고 CH2Cl2중의 에틸아세테이트로 용출한다. 포르파시아닌을 함유하는 밝은 녹색 용출액을 모으고 증발건조시킨다.
더 다른 대안 (제4도)에서, 독특한 결합기 “”는 제4도에 나타낸 바와 같이 아미드결합을 사전형성하고 탈수시킴으로써 형성된다.
따라서, 제1도의 식 I로 나타낸 화합물을 얻으며 식중에서 각각의 R 은 독립적으로 치환 또는 비치환 알킬, 알켄일; 알킨일, 치환 또는 비치환 아릴; 알킬 또는 아릴 술포닐; 알킬 또는 아릴시아노: 할로겐; 시아노; 니트로; 아미노; 카르복시; 카르보알콕시 또는 그것의 에스테르, 아미드 또는 염 등일 수 있다.
식 I (제11도) 의 포르파시아닌의 신규한 제조방법에서, 무수 THF 중의 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노디피로메탄을 질소하에 0℃에서 LiAlH4의 THF 현탁액에 가한다. 혼합물을 교반하고 물을 가하여 반응을 중지하고 침전물을 여과제거한다. 질소하에 0℃에서 THF/CH2Cl2현탁액중의 10배 과량의 2, 3- 디클로로-5, 6-디시아노-1, 4-벤조퀴논 (DDQ)을 무수 THF/CH2Cl2중의 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 비스아미노메틸-2, 2′- 디피로 메탄에 가한다. 용액은 즉시 진한 녹색으로 바뀐다. 미정제 생성물을 염화메틸렌에 용해시키고 고체를 여과제거한다. 녹색용액의 부피를 대략 5㎖로 감소시킨 다음 알루미나 컬럼에 충전하고 CH2Cl2중의 에틸아세테이트로 용출한다. 포르파시아닌을 함유하는 밝은 녹색 용출액을 모으고 증발건조시킨다. 공기산화를 경유하여 얻어진 수율과 비교할 때 수율의 상당한 증가 (48%)가 이 합성방법으로 부터 얻어진다.
식 I (제12도)의 포르파시아닌에 다른 신규한 제조방법에서, 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′-디포르밀-2, 2′- 디피로메탄을 무수 EtOH에 현탁한다. 생성된에탄을 용액을 0℃로 냉각하고 암모니아 가스를 그것을 통과시켜 버블링한다. 그 다음 플라스크를 60℃에서 72시간 동안 오일욕에 넣는다. 반응을 정지시키고 0℃로 냉각한다. 에탄올을 회전증발기상에서 제거하고 잔류물을 디클로로메탄으로 중성 알루미나상에서 크로마토그래피한다. 이 매우 단순화된 합성방법은 옥타에틸포르파시아닌 20% 또는 4.6mg을 얻는다. 생성물의 다른 1.5mg은 DDQ에 의하여 더 극성인 성분의 산화로부터 얻어진다.
더 다른 구체예에서, 두개의 다리결합 탄소원자 각각에 페닐기를 함유하는 포르파시아닌은 제13도에 나타낸 반응도에 의하여 제조된다. 따라서, 각각의 X 가 독립적으로 치환 또는 비치환 알킬, 알켄일, 알킨일; 치환 또는 비치환 아릴; 알킬 또는 아릴 술포닐; 알킬 또는 아릴 시아노; 할로겐; 시아노; 니트로, 아미노; 카르복시; 카르보알콕시 또는 그것의 에스테르, 아미드 또는 염등일 수 있는 제13도에 나타낸 화합물이 얻어진다.
또 다른 구체예에서, 두개의 다리결합 탄소원자중 하나에 페닐기를 함유하는 포르파시아닌은 제14도에 나타낸 반응도에 의하여 제조된다.
[표적 특이적인 부분]
포르파시아닌 및 포르파시아닌- 유사 화합물은 단독으로 종양과 같은 어떤 병든 조직 및 세포를 특이적으로 국소화시키는 표적화제로서 특히 유용하다. 이 표적화 능력은 그러한 조직 또는 세포의 표면에 위치된 에피토프 또는 리셉터에 특이적으로 결합하는 어떤 부분에 포르파시아닌을 커플링시킴으로써 향상될 수 있다. 따라서, 본 발명의 표적 특이적인 부분은 단핵세포 및 대식세포가 리셉터 및 H2아고니스트를 갖는, 에스트로겐 및 테스토스테론과 그것의 유도체와 같은 스테로이드, T-세포 리셉터 또는 알파-베타 헤테로 이량체를 함유하는 펩티드, 만노스와 같은 당류를 포함한다.
본 발명의 콘쥬게이트의 성분을 함유하는 표적 특이적인 부분은 면역 특이적인 성분으로 구성될 수도 있다. Tsm은 폴리클론 또는 모노클론 항체 제제로 부터 유도될 수 있으며 완전 항체 또는 F(ab1)2, Fab, 또는 Fab′ 단편과 같은 이들 항체의 면역학적 반응성 단편을 함유할 수 있다. 완전 항체에 대한 치환체로서 그러한 면역학적 반응성 단편의 사용은 이 분야에 널리 알려져 있다. 예를들면 Spiegelberg, H. L., Immunoassays in the Clinical Laboratory (1978) 3:1-23 참조.
폴리클론 항혈청은 적당한 포유류를 항체에 적합한 항원으로 주사하고 항원에 대한 혈청내 항체 수준을 분석하고 적정량이 높을때 항혈청을 제조함으로써 종래 방식대로 제조된다. 모노클론 항체 제제는 면역화된 동물로 부터 말초 혈액 림프구 또는 비장세포를 사용하고 바이러스 감염에 의하여 이들 세포를 모두 불멸화시키는 쾰러와 밀슈타인(Koehler and Milstein)의 방법, 골수종과의 융합 또는 다른 종래 방법과 같이 통상적으로 제조되며 단리된 콜로니에 의하여 원하는 항체의 생성을 위해 스크리닝한다. 모노클론 또는 폴리클론 제제로 부터 단편의 조합은 스피겔버그(Spiegelberg, H. L. 상기 참조) 가 기술한 바와 같은 종래 수단에 의하여 실행된다.
여기서 예시되는 특히 유용한 항체는 말콤등(Malcolm et al., Ex. Hematol. (1984) 12:539-547)이 기술한 바와같이 제조될 수 있는 모노클론 항체 제제 CAMAL-1; 뮤 등(Mew et al., J. Immunol. (1983) 130:1473-1477) 이 기술한 바의 anti-M1 항체의 폴리클론 또는 모노클론 제제; 및 마이어 등 (Maier et al., J. Immunol. (1983) 131:1843)과 스틸 등 (Steele et al., Cell Immunol. (1984) 90:303)이 기술한 바의 B16G 항체를 포함한다.
상기 명단은 예시이고 한정하는 것은 확실히 아니며; 일단 표적 조직이 알려지면 이 조직에 특이적인 항체는 종래 수단에 의하여 제조될 수 있다. 그러므로, 본 발명은 어떤 원하는 표적에 대한 독성을 실행하는데 적용될 수 있다.
[결합]
본 발명의 포르파시아닌에 대한 표적 특이적인 부분의 콘쥬게이션은 어떤 종래 수단에 의해 실행될 수 있으며 R1-R8중 적어도 하나가 카르복실기를 함유하는 것이 요구된다. 이들 부분간의 직접적인 공유결합은 예를들면, L 이 공유결합을 나타내는 경우, 카르보디이미드와 같은 탈수제를 사용하여 실행될 수 있다. 포르파시아닌과 표적 특이적인 부분을 공유결합하는 특히 바람직한 방법은 디메틸술폭시드(DMSO)를 필수적으로 함유하는 반응 매질의 존재하에 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드(EDCI)로 처리하는 것이다. 이 바람직한 방법을 사용하는 제조방법은 하기 실시예 5에 예시되어 있다.
물론, 디시클로헥실카르보디이미드 또는 디에틸카르보디이미드와 같은 다른 탈수제도 종래의 수성 및 부분 수성매질과 마찬가지로 사용될 수 있다.
콘쥬게이트의 활성부분은 이작용기이며 각각의 두 활성성분을 공유결합할 수 있는 링커화합물을 통하여 콘쥬게이트될 수 있다. 매우 다양한 이들 링커는 시중구입할 수 있으며 전형적인 리스트에는 예를들면 Pierce Chemical Co. 의 카탈로그에서 발견되는 것들을 포함할 것이다. 이들 링커는 호모- 또는 헤테로 이작용성 부분이며 디술피드, 아미드, 히드라존 및 매우 다양한 다른 결합을 형성할 수 있는 작용기를 포함한다.
다른 링커는 케톤, 산, 알데히드, 이소시아네이트 또는 다양한 다른 기에 의한 성분으로 유도되는 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아민 알코올과 같은 폴리머를 포함한다.
콘쥬게이트의 활성부분을 콘쥬게이션하는 데 사용되는 기술은 어떤 표준수단 및 본 발명의 일부를 구성하지 않는 콘쥬게이션 방법을 포함한다. 그러므로 그러한 콘쥬게이트를 생성하기 위한 이 분야에 공지인 어떤 효과적인 기술은 본 발명의 범주내에 있으며, 따라서 링커 부분은 단지 이 분야에 유용하거나 표준 기술을 사용하여 그로 부터 유도될 수 있는 공유결합 또는 어떤 링커부분인 것으로 넓게 한정된다.
[투여 및 사용]
포르파시아닌 또는 그것의 콘쥬게이트는 일반적으로 이 분야에 공지인 기술을 사용하여 환자에게 투여하기 위한 약학적 조성물로 조제된다. 그러한 약학적 조성물의 개요는 예를들면 REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, latest edition)에서 찾을 수 있다.
본 발명의 포르파시아닌, 포르파시아닌- 유사 화합물 및 그것의 콘쥬게이트는 특히 주사에 의하여 정상적으로 전신투여된다. 투여는 정맥내, 피하, 근육내, 또는 심지어 복강내일 수 있다. 주사물질은 액체용액 또는 현탁액, 주사에 앞서 액체에 용해 또는 현탁하는데 적당한 고체형태, 또는 에멀션으로서 종래 형태로 제조될 수 있다. 적당한 부형제는 예를들면, 물, 염수, 덱스트로스, 글리세롤등이다. 물론, 이들 조성물은 습윤제 또는 에멀션화제, pH 완충제등과 같은 소량의 비독성 보조물질을 함유할 수도 있다.
또한 전신투여는 좌약에 의하여, 또는 적당하게 조제된다면, 경구적으로 저속방출 또는 지속방출 시스템의 이식물을 통하여 실행될 수 있다. 투여의 이들 방식에 대한 조제는 이 분야에 널리 알려졌으며 그러한 방법의 개요는 예를들면, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES (상기 참조)에서 찾을 수 있다.
표재성 종양 또는 피부장해의 치료와 같이 치료가 국소화될 것이라면 포르파시아닌, 포르파시아닌- 유사 화합물 또는 그것의 활성 콘쥬게이트는 로션, 현탁액, 페이스트 또는 크림을 수반하는 표준 국소 조성물을 사용하여 국소적으로 투여될 수 있다.
투여될 콘쥬게이트 또는 포르파시아닌 유도체의 양은 활성 성분의 선택, 치료될 상태, 투여방식, 환자 개인 및 의사의 판단에 따른다. 제제의 특이성에 따라서 적거나 많은 투여량이 필요할 수 있다. 약 0.05-10mg/kg 범위의 투여량이 전신투여에 제안된다. 활성 성분의 약 0.01-20%, 바람직하게는 1-5% 범위의 투여량이 국소 투여에 제안된다. 약 10-300mg 범위의 전체 1일 투여량이 경구투여에 제안된다. 상기 범위는 단지 제안적인데, 개별적인 식이법에 관하여 변수가 많고 이들 추천된 값으로 부터 상당한 편차가 예견되기 때문이다.
본 발명의 방사영상 (신티그래프 영상) 법은 효과적인 양의 포르파시아닌 방사영상화제로 개별적으로 비경구적으로 주사함으로써 실행된다. 비경구적이라는 것은 예를들면, 정맥내, 동맥내, 막내, 조직세포내 또는 동내를 의미한다. 개체는 방사영상화제의 약 1mCi에서 50mCi 까지의 투여량을 수용할 것이라고 기대되며 그 양은 특정 방사성 동위원소함수 및 투여 방식이다. 정맥내 투여에 대하여 그 양은 보통: Tc-99m 약 10-40mCi, 바람직하게는 약 20mCi; In-111 또는 Ga-67 약 2-5mCi, 바람직하게는 약 4mCi 이다.
방사영상화제는 약제를 병든 조직 또는 세포에 표적화하기 위하여 사람용의 주사제제, 바람직하게는 살균 주사 제제로 제공되며, 바람직하게는 생리학적 pH 및 농도에서 약학적으로 허용가능한 살균 주사 부형제, 바람직하게는 인산염 완충염수(PBS) 내에 효과적인 양의 방사표지된 약제를 함유하는 살균주사용액으로 이루어진다. 다른 약학적으로 허용가능한 부형제는 비경구 투여 부위에 필요한 것에 따라서 사용될 수 있다.
본 발명에 따라서 비경구 투여될 대표적인 제제는 보통 살균용액에 약 0.1 내지 20mg, 바람직하게는 약 2mg의 방사표지된 약제를 함유할 것이다.
일단 충분한 동위원소가 표적 부위에 부착되면, 종래의 평면 및/ 또는 SPECT 감마 카메라로 스캐닝을 실행하거나 손을 사용하여 외부로 또는 내부로 사용된 감마 프로브를 유지하여 염증 또는 병소를 국소화시킨다. 신티그램은 보통 50-500KeV 범위의에너지 검출을 위한 하나 이상의 윈도우를 갖춘 감마 영상 카메라에 의해 촬영된다.
자기 공명영상(MRI)은 영상화제가 방사성 동위원소 대신에 MRI 증강 종을 함유할 것이라는 것을 제외하고는 방사영상과 유사한 방법으로 실행된다. 자기 공명 현상이 방사영상과는 상이한 원리로 작동한다는 것은 이해할 것이다. 보통 발생된 신호는 조영될 영역에서 물분자중의 수소원자 핵의 양성자의 자기 모멘트의 이완시간과 상호관련 있다. 자기 공명영상 증강제는 이완속도를 증가시키는 역할을 하며 그것에 의해 영상화제가 부착된 영역의 물분자와 체내 다른 곳의 물분자 간의 콘트라스트를 증가시킨다. 그러나, 약제의 효과는 T1과 T2를 증가시키는 것이며, 전자는 더큰 콘트라스트를 가져오는 한편, 후자는 더 적은 콘트라스트를 가져온다. 따라서, 그 현상은 농도 의존적이며 보통, 최대 효율을 위한 상자성 화학종의 최적 농도이다.
최적 농도는 사용된 특정 약제, 영상의 위치, 영상의 방식, 즉, 스핀-에코, 포화- 회복 (saturation-recovery), 역위- 회복(inversion-recovery) 및 다양한 다른 강한 T1의존성 또는 T2의존성 영상기술 및 약제가 용해되거나 현탁되는 매질의 조성물에 따라 변할 것이다. 이들 인자 및 그것의 상대적 중요성은 이 분야에 공지이다. 예를들면 Pykett, Scientific American (1982) 246:78, 및 Runge et al., Am. J. Radiol. (1987) 141:1209 참조.
본 발명의 MRI 법은 가돌리늄과 같은 금속원소에 커플링된 본 발명의 포르파시아닌 또는 포르파시아닌- 유사화합물을 함유하는 효과적인 양의 MRI 콘트라스트제로 개체에게 비경구적으로 투여함으로써 실행된다. 개체는 표적 부위에서 적어도 약 20%, 바람직하게는 50-500% 로 MRI 신호를 증강시키는 데 충분한 투여량의 콘트라스트제를 수용할 것이라고 기대되며 그 양은 특정 상자성 종의 함수 및 투여방식이다.
다시, 본 발명의 콘트라스트제는 MRI 제를 병든 조직 또는 세포에 표적화하기 위하여 사람용의 주사제제, 바람직하게는 살균 주사 제제로 제공되며, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 살균 주사 부형제, 바람직하게는 인산염 완충 염수내에 효과적인 양의 콘트라스트제를 함유하는 살균주사 용액으로 이루어진다. 비경구 투여를 위한 다른 종래의 약학적으로 허용가능한 부형제는 비경구 투여 부위에 필요한 것에 따라서 사용될 수 있다.
본 발명에 따라서 비경구 투여될 대표적인 제제는 보통 살균용액에 약 0.1 내지 20mg, 바람직하게는 약 2mg의 콘트라스트제를 함유할 것이다.
[실시예]
다음 실시예는 본 발명을 예시하려는 것이며 그 범위를 한정시키는 것은 아니다.
[실시예 1]
[포르파시아닌의 합성, 제2도]
테트라아세트산 납(18.2g, 0.041mole)을 60㎖ 빙초산중의 2-벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸-5-메틸피롤(10.1g, 0.037mole)의 교반용액에 가하였다. 혼합물을 60℃로 잠시 데웠다.에틸렌글리콜 10밀리리터를 가하여 어떤 남아 있는 Pb(IV)를 환원시켰다. 물 20밀리리터를 가하고 5-아세톡시메틸-2- 벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸피롤 (제2도의 화합물 A)을 여과하여 모으고 추가의 물로 세척하였다. 5-아세톡시메틸-2- 벤질옥시카르보닐-3, 4-디에틸피롤을 100㎖ 물중의 80% 아세트산에 가하고 100℃로 1시간 동안 가열하였다. 상기 용액을 실온으로 냉각시켰을 때 고체 생성물이 큰 덩어리로 침전되었다. 물 100밀리리터를 가하고 생성물을 여과하여 모은 다음 추가의 물로 세척하였다. 여액을 CH2Cl2로 추출한 다음 증발시켜서 고체 생성물을 생성하였다. 고체 생성물을 모은 다음 CH2Cl2와 헥산의 용액으로 부터 재결정하였다.
수율: 6.6g, 67.4%
Mol. wt. 계산치 C33H38O4N2: 526.2831
고해상도 MS: 526.2835
1H NMR (CDCl3): 1.05 (t, 6H), 1.12 (t, 6H), 2.43 (q, 4H), 2.75 (q, 4H), 3.85 (s, 2H), 5.25 (s, 4H), 7.28-7.40 (m, 10H), 8.70 (br s, 2H).
200㎖ 테트라히드로푸란(THF) 중의 5, 5′-비스 (벤질옥시카르보닐)-3, 3′-4, 4′-테트라에틸-2, 2′-디피로메탄 (제2도의 화합물 B) (8.1g, 0.015mole) 을 0.4g 10% Pd/C 및 트리에틸아민 5 방울의 존재하에 수소하에 대기압 및 실온에서 밤새도록 교반하였다. 결정을 셀라이트를 통과시켜 여과한 다음, 여액을 회전식 증발기상에서 증발 건조시켜서 디카르복실산을 얻었다. 디카르복실산을 100㎖ N, N- 디메틸포름아미드에 용해시키고 1시간 반 동안 아르곤하에 비등 가열하였다. 그 다음 용액을 얼음으로 냉각하고 과량의 냉각된 염화 벤조일(7.2㎖) 을 비스- α- 유리 디피로메탄 (화합물 B)에 적가하였다. 반응혼합물을 2시간 동안 5℃에서 교반하고 고체 생성물을 여과하여 모았다. 고체 생성물을 50㎖ 물에 가하고 NaHCO3를 사용하여 염기화하였다. 용액을 가열하고 60℃로 1시간 동안 유지하였다. 용액으로 부터 결정화시킨 엷은 황색 생성물을 여과한 다음 물로 세척하였다.
수율: 3.4g, 70.0%
Mol. wt. 계산치 C19H26N2O2: 314.1994
고해상도 MS: 314.1994
1H NMR (CDCl3): 1.10 (t, 6H), 1.25 (t, 6H), 2.50 (q, 4H), 2.70 (q, 4H), 4,00 (s, 2H), 9.55 (s, 2H), 10.90 (s, 2H).
300㎖에탄올중의 3, 3′, 4, 4′- 테트라에틸-5, 5′- 디포르밀-2, 2′- 디피로메탄 (제2도의 화합물 C) (1.03g, 0.0033mole)을 아르곤으로 20분 동안 버블링하였다. 염화수소 히드록실아민(0.51g, 0.0073mole) 및 아세트산 나트륨(1.20g, 0.015mole)을 가하였다. 이 혼합물을 60℃로 아르곤하에 2시간 반동안 가열하였다. 용매를 회전식 증발기상에서 제거하고 생성물을 밤새도록 진공건조하였다. 비스- 옥심을 5㎖ 무수아세트산에 용해시키고 아르곤으로 30분 동안 포화시켰다. 무수아세트산을 제거한 후 미정제 비스니트릴 생성물 (제2도의 화합물 D) 을 흑색 고체로 얻었으며 밤새도록 진공 건조시켰다. 생성물을 CH2Cl2중의 0.5% 메탄올로 실리카겔 컬럼(40g), 이어서 10-20% EtOAc 로 알루미나 컬럼(40g)에 의해 정제하였다. 용매를 증발시켜 엷은 분홍색 결정을 얻었다.
수율: 0.43g, 42%
Mol. wt. 계산치 C19H24N4: 308.2001
고해상도 MS: 308.2002
1H NMR (CDCl3): 1.10 (t, 6H), 1.25 (t, 6H), 2.45 (q, 4H), 2.60 (q, 4H), 3.90 (s, 2H), 8.45 (s, 2H).
3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노피로메탄(0.053g, 1.7×10-4mole) 을 10㎖ 무수 THF에 용해시키고 N2하에 0℃에서 LiAlH4(0.050g, 1.5 × 10-3mole) 의 THF 현탁액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고 물 2방울을 가하였다. 고체 생성물이 형성되었으며 여과제거하였다. 밤새도록 진공건조에 의하여 용매를 증발시킨 후 비스- 아민 생성물을 얻었다. 비스- 아민을 50㎖ 무수 메탄올에 용해시키고 비스- 알데히드(0.050g, 1.6× 10-4mole) 를 가하였다. 용액을 N2로 20분 동안 버블링하고 N2하에 환류하였다. 티오시안산 납(Pb(SCN)2) (0.055g, 1.7 × 10-4mole) 을 가하고 용액을 4시간 동안 환류하였다. 산소가스를 실온에서 밤새도록 용액을 통과시켜 버블링하였다. 용매를 증발시킨 후 미정제 포르파시아닌 생성물을 밤새도록 진공건조시켰다. 생성물을 CH2Cl2중의 10%에틸아세테이트로 Al2O3컬럼(4% 물을 가함)에 의해 정제하였다. 녹색 용출물을 모으고 회전식 증발기상에 농축하였다. 용매를 증발시킨 후 포르파시아닌 매크로고리의 결정을 얻었다.
수율: 19.3mg, 19.1% 매크로고리
Mol. wt. 계산치 C38H48N6: 588.3941
고해상도 MS: 588.3933
1H NMR (300MHz, CDCl3): -4.50 (bs, 2H), 2.05 (t, 12H), 2.13 (t, 12H), 4.28 (q, 8H), 4.40 (q, 8H), 10.50 (s, 2H), 13.0 (s. 4H).
UV/VIS (CH2Cl2) 455, 592, 800nm,
[실시예 2]
[포르파시아닌의 합성, 제3도]
3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노피로메탄을 실시예 1의 방법에 따라서 제조하였다. 10㎖ 무수 THF 중의 3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노디피로메탄 0.102g, 3.3 × 10-4mole을 N2하에 0℃에서 LiAlH4의 20㎖ THF 현탁액에 천천히 가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고 물 2방울을 가하여 반응을 중지시켰다. 침전물을 여과제거 하였다. 금색용액을 Pb (SCN)2와 무수황산나트륨의 등물 분량을 함유하는 2구 플라스크로 옮겼다. 무수메탄올 15밀리리터를 가하고 혼합물을 환류시켰다. 용액의 색은 자주색에서 진한 녹색으로 점차 바뀌었다. 반응을 4시간 반 후에 정지시키고 공기를 밤새도록 용액을 통과시켜서 천천히 버블링하였다. 미정제 생성물을 염화메틸렌에 용해시키고 고체를 여과제거하였다. 녹색용액의 부피를 대략 5㎖로 감소시킨 다음 알루미나 컬럼(120g, 4% 물을 가함)에 충전하고 CH2Cl2중의 10%에틸아세테이트로 용출하였다. 포르파시아닌을 함유하는 밝은 녹색 용출액 2리터를 모으고 증발건조하였다
수율: 23.4mg, 24.1%
이 화합물의 분광 데이터는 상기 실시예 1에서 제조된 화합물과 동일하다.
[실시예 3]
[포르파시아닌의 시험관내 독성]
세포를 혈청이 없는 배지(DME)에서 세번 세척하고 계수하고 107세포/㎖의 농도가 되게 하였다.
“친화” 분석을 위하여 어둠속에서 세포 현탁액 100μl 와 시험 또는 대조화합물 100μl를 혼합하였다. “라벨링” 을 4℃에서 1시간 동안 계속하고 표지된 세포를 어둠속에서 매회 3㎖ 배지로 세번 세척하고 신선한 배지에 재현탁하였다. 그 다음 재현탁된 세포를 300-850nm에서 30분 동안 광조사하였다.
“직접” 분석에서 세포를 시험 또는 대조화합물의 첨가시 바로 조사하였다. 조사의 효과는 표적 세포에 적당한 방법을 사용하여 평가하였다.
사람 적혈구를 시험 세포로 사용하였을 때 대조 (헤마토포르피린, Hp)-표지된 세포 및 포르파시아닌 (식 I)-표지된 세포의 조사에 의하여 유발된 용혈은 가시적으로 평가하였다.
쥐과 동물 비만세포종 세포주 P815를 사용하였을 때 결과는 다음과 같이 결정하였다: 대조로서 Hp 및 시험물질로서 식 I의 포르파시아닌 10-50ng/㎖의 농도를 사용하여 상기와 같이 표지하였다. 재현탁된 세포를 30분 동안 300-850nm 광으로 처리하고 결과하는 생존력은 살아 있는 세포와 죽은 세포를 구별하는 표준방법인 에오신-Y 배제를 사용하여 직접 계수함으로써 평가하였다.
상기와 같이 실행된 다른 측정에서, 광노출로 부터 제거된 세포는 티미딘 삽입이 생존력과 같다는 표준방법에 따라서 10μCi/ ㎖ 삼중수소- 표지된 티미딘으로 그것을 18시간 동안 배양하여 생존력에 대해 분석하였다. 세포를 수확하고 방사능 흡수를 신틸레이션 카운터로 측정하였다.
[실시예 4]
[포르파시아닌의 선택적 결합]
P815 세포를 1-200ng/㎖ Hp 또는 식 I의 포르파시아닌을 사용하여 실시예 3에 기술된 바와같이 배양하였다. 세포를 어둠속에서 30분 동안 표지하고, 미흡수된 포르파시아닌을 세척하고, 재현탁한 다음 다시 30분 동안 300-850nm 광에 노출시켰다. 세포의 생존력은 30μCi /㎖ 삼중수소화 티미딘으로 표지하고 37℃에서 18시간 동안 배양한 후에 삼중수소화 티미딘 삽입으로 평가하였다.
[실시예 5]
[면역콘쥬게이트의 제조]
이 실시예는 헤마토포르피린(Hp)이나 식 I의 포르파시아닌(Pc)으로 네가지 다른 항체제제의 면역콘쥬게이트를 제조하는 방법을 기술한다. 사용된 항체는 CAMAL-1, anti-M1 항체, 및 B16G 항체이며 모두 상기 기술된 바와같이 제조하였으며 그리고 친화 정제된 토끼 항- 마우스 Ig (RαMIg)이다. 또한 대조를 원하는 경우 정제된 무관한 모노클론 제제(C-MAb) 를 사용하였다.
콘쥬게이트의 한 제조는 뮤 등(Mew et al., J. Immunol. (1983) 130:1473) 이 기술한 바와 같이 기본적으로 실행하였다. 간단히, 25㎖ 물중의 200mg Hp. 0.2HCl (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 과 0.8㎖ N, N- 디메틸포름아미드에 0.6㎖ 물중의 20mg 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 HCl (EDCI)을 가하였다. 30분 후에 이 용액을 5㎖ 증류수에 용해시키고, 5시간 동안 배양한 항체 단백질 15mg과 혼합하였다. 이 기간중에 용액의 pH는 6과 7 사이에서 모니터하고 조절하였다. 그 다음, 모노에탄을 아민 50μl 를 가하고, 용액을 실온에서 밤새도록 방치하였다. 용액을 0.001M 인산염 완충제 pH 7.4로 4일 동안 매일 세번씩 바꾸면서 투석하고 PBS 로 밤새도록 투석하였다. 포르파시아닌의 콘쥬게이트를 유사하게 제조하였다.
바람직한 프로토콜에서, 5mg 의 각각의 Hp 또는 Pc와 탈수제를 함유하는 DMSO 분산액 2㎖ 를 제조하고 30분 동안 실온에서 질소하에 교반하였다. 이것에 DMSO 2㎖중의 적당한 면역글로불린 2mg 을 함유하는 분산액을 가하고 생성된 혼합물을 10분 동안 더 교반하였다. 그 다음 이 혼합물을 50μl 모노에탄올아민을 함유하는 PBS 분량을 5번 가하여 pH 7.4인 인산염 완충 염수(PBS) 희석액으로 하고 그후 세척액을 세번 바꿔 사용하면서 PBS 로 투석하였다.
대안으로, 5mg 의 각각의 Hp 또는 Pc, 결합제 및 탈수제를 함유하는 분산액 2㎖를 제조하고 대략 15분 동안 실온에서 질소하에 교반하였다. 그 다음 이것에 테트라히드로푸란 2㎖중의 면역특이적인 단백질 약 2mg을 함유하는 분산액을 가하고 생성된 혼합물을 10분 더 교반하였다. 그 다음 혼합물을 상기와 같이 만들었다.
상기 방법은 CAMAL -1 과 상기에 열거된 나머지 항체 제제에 적당하다.
또한 다음 제제는 특히 B16G와 RαMIg로 만들었다:
[B16G]
2㎖ DMSO중의 마이어 등 (Mairer et al. J. Immunol. (1983) 131:1843)이 기술한 바와 같이 제조한 20mg 냉동건조 B16G 항체를 첨가하기 전에 4㎖ 분광 그레이드 DMSO중의 EDCI 11mg에 더하여 헤마토포르피린 11mg을 30분 동안 질소하에 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 40초 동안 실온에서 교반하고 상기와 같이 만들었다. 생성된 생성물은 대략 375㎍ Hp/mg B16G를 함유하였다. Hp 를 Pc로 대체하여 유사한 방법을 사용하였다.
[RαMIg]
1㎖ DMSO중의 뮤 등 (Mew et at, J. Immunol (1983) 130:1473)이 기술한 바와 같이 제조한 800㎍ 냉동건조 RαMIg 항체를 첨가하기 전에 1㎖ DMSO중의 EDCI 400㎍ 과 400㎍ 헤마토포르피린을 30분 동안 질소하에 실온에서 교반하였다. 생성된 혼합물을 30초 동안 교반하고 상술된 바와 같이 만들어서 200αg Hp/mg RαMIg 를 함유하는 생성물을 얻었다. Hp를 Pc로 대체하여 유사한 방법을 사용하였다.
[실시예 6]
[시험관내 면역콘쥬게이트의 특이성]
Tsm 이 면역글로불린으로 이루어진 Tsm-Hp 및 Tsm-Pc 콘쥬게이트는 적당한 대조표준과 함께 콘쥬게이트를 적당한 세포 종류와 혼합하고 표지된 세포를 방사선에 노출시켜서 세포에 대한 시험관내 시험을 하였다. 이 분석을 실행하는 방법은 CAMAL-1에 대하여는 Mew et al., Cancer Research (1985)에, Anti-M1에 대하여는 Mew et al., J. Immunol.(1983)에 상세하게 기술되어 있으며 상기 인용 참고문헌은 여기서 참고로 포함된다.
간단히, CAMAL-1에 대하여 세개의 세포주, WC4, WC6 및 WC2 (WC4 및 WC6 은 CAMAL 항체를 생성하지만 WC2 는 생성하지 않는다.)를 실시예 4에서 상술된 바와 같이 적당한 Tsm-Hp 또는 Tsm-Pc 제제로 표지하였다. 각각 10 세포를 함유하는 표지된 세포 제제를 로즈 챔버(Rose chamber)에 도입하고 630nm에서 레이저로 활성화된 광에 노출시켰다. 그 다음 다양한 제제에 대한 결과를 만들었다.
anti-M1 콘쥬게이트에 대하여, M1 종양 세포를 표적 세포로 사용하고 37℃에서 2시간 동안 6% CO2가습 배양기내에서 배양하여 Tsm-Hp, Tsm-Pc 콘쥬게이트 또는 약제 또는 항체 단독 또는 항체와 약제를 포함하지만 커플링되지 않은 것으로 처리하였다. 세포를 PBS에서 세번 세척한 다음 플레이팅하고 밤새도록 형광에 노출시켰다. 세포는 상기와 같이 삼중수소화 티미딘 흡수에 의하여 생존력에 대하여 평가하였다.
B16G 콘쥬게이트에 대하여 A10, P815 및 L1210 세포를 표적 세포로 사용하였다 (A10 세포는 B16G- 반응성 T-억제 인자를 분비하는 T-세포 하이브리도마이며; P815 세포도 B16G에 반응성이다.) 시험관내 연구는 B16G-Hp 또는 B16G-Pc 콘쥬게이트를 이용하는 직접 방법을 사용하거나 미표지된 B16G 항체 및 표지된 RαMIg-Hp 또는 RαMIg-Pc를 간접적으로 사용하여 실행된다.
직접 방법에서, 5×105세포는 320, 160, 80, 40 및 20ng 약제 /㎖의 Hp 또는 Pc농도에서 시험 또는 대조표준으로서 적당한 Tsm-약제 콘쥬게이트를 함유하는 1㎖ DME/Hepes에 현탁시켰다. 세포를 어둠속에서 37℃에서 1시간 동안 배양한 다음 5㎖ DME/Hepes 로 3번 세척하고 그후 동일한 완충제 1㎖에 재현탁시켰다. 표지된 세포의 세개의 100μl 시험 분량을 바닥이 편평한 마이크로타이터 웰에 분배하고 세포 현탁액의 나머지(700μl)를 20cm 거리에서 1시간 동안 백열등(22.SmW/㎠)에 노출시켰다. 그 다음 세개의 추가 100μl 분량을 마이크로타이터 웰로 옮겼다. 그 다음 20% FCS 를 함유하는 DME/Hepes에 희석시킨 삼중수소 표지된 티미딘을 100μl 분량의 모든 마이크로타이터 웰에 가하여 표지된 티미딘 2μCi가 각각의 웰에 첨가되도록 하였다. 배양물을 18시간 동안 37℃에서 배양하고 10% CO2를 가습한 다음 MASH 수확기상에 수확하였다. 티미딘 삽입을 Hp 신틸레이션 카운터(Tri-Carb Model 4550)로 측정하였다.
간접 분석에서, 상술된 바와 같이 제조된 A10 현탁 세포를 4℃에서 30분 동안 B16G 또는 대조항체 C-MAb 50㎍/㎖에 노출시키고 DME/Hepes 내에서 세척한 다음 어둠속에서 추가로 30분 동안 4℃에서 Hp 또는 Pc의 2㎍/㎖와 15ng /㎖ 사이의 RαMIg-Hp 또는 RαMIg-Pc 의 농도를 변화시켜서 노출하였다. 세포는 상술된 바와 같이 표지된 티미딘 흡수를 사용하여 생존력에 대하여 평가하였다.
[실시예 7]
[포르파시아닌과 그것의 콘쥬게이트의 생체내 세포독성]
포르파시아닌(Pc) 및 그것의 콘쥬게이트의 생체내 효율도 평가하였다. CAMAL-1 및 anti-M1 콘쥬게이트에 대하여, 그 방법은 실시예 6에서 상기 참조된 두가지 뮤 등 (Mew et al.)의 방법에 기술된 것과 같다. B16G-Hp 및 B16G-Pc 콘쥬게이트와, Pc (식 I) 단독에 대하여 생체내 연구는 다음과 같이 실행하였다:
생체내 시험은 종양에 대한 T-억제 세포의 개체군의 간접 효과에 따르며 그 다음 방사선 처리의 효율성을 평가하는 수단 역할을 한다. 동계의 DBA/2 마우스내에서 성장하는 P815 비만세포종은 종양에 특이적인 T-억제 세포를 자극한다. 이들 T-억제세포는 종양의 복귀를 도울지도 모르는 특이적인 T-킬러 세포의 발달을 방해한다. 상기 A10 으로 표시되는 T-세포 하이브리도마는 이들 T-억제 세포와 관련된 T-억제 인자를 분비한다. 따라서, Tsm 이 세포 (즉 B16G) 의 표면상에서 T-억제 인자에 특이적인 항체인 콘쥬게이트와의 반응을 통한 이들 T-억제 세포 개체군의 선택적인 킬링(killing)은 P815 종양을 가진 마우스에서 종양 복귀를 초래하게 될 것이다.
그러므로, 이 분석에서, DBA/2 마우스를 종양을 삽입하기 위하여 104P815 세포로 우측옆 구리를 피하 주사하였다. 8일째에 종양이 손으로 만져질때 (대략 25-42 sq.mm), 마우스를 무작위로 8개 군으로 나누어 가두고 아무것도 함유하지 않는것, Hp 또는 Pc, B16G-Hp 또는 B15G-Pc, B16G 와 약제, B16G 단독 또는 C-MAb-Hp 또는 C-MAb-Pc를 함유하는 150μl PBS로 정맥내 주사하였다. Hp 레벨은 모든 경우에서 동물당 50㎍ 이고 B16G 모든 경우에서 310g이다 (적당한 경우).
동물들을 어둠속에서 2시간 동안 사육한 다음 300-850nm 및 22.5mW/㎠에서 강한 광에 노출시켰다. 그 다음 동물을 정상적으로 치료하고 1일을 기본으로 모니터하였다.
[실시예 8]
[진단영상]
32세 여성환자는 열이 있으며 복부 통증이 있다. 그 환자는 효과없이 1주간 항생치료를 받았다. CAT 스캔은 어떤 비정상적인 덩어리를 나타내는데 실패하였다. 방사영상 연구는 Tc-99m- 표지된 포르파시아닌을 사용하여 실행하였다. 방사표지된 포르파시아닌의 20mCi 의 주사를 사용하고 환자를 SPECT 방식의 감마 카메라로 스캔하였다. 환자 복부의 스캔은 Tc-99m 축적의 집중을 나타내었다. 수술을 실행하였으며 Tc-99m활성 부위에서 종기를 발견하였다.
[실시예 9]
[포르파시아닌의 합성, 제11도]
3, 3′-4, 4′-테트라에틸-5, 5′- 시아노디피로메탄을 실시예 1의 방법에 따라서 제조하였다. 10배 과량의 2, 3- 디클로로-5, 6-디시아노-1, 4-벤조퀴논(DDQ) 을 10㎖ 무수 THF 중의 3, 3′-4, 4′- 테트라에틸-5, 5′- 시아노피로메탄에 가하였다. 생성된 용액은 즉시 진한 녹색으로 변하였다. 잔류물을 실시예 2의 방법에 따라 크로마토그래피하였다. 공기산화와 비교하였을 때 수율의 상당한 증가가 얻어졌다.
수율: 32mg, 48%
이 화합물의 분광 데이터는 상기 실시예 1에서 제조된 화합물과 동일하다.
[실시예 10]
[포르파시아닌의 합성, 단순화된 방법]
포르파시아닌을 합성하기 위한 대안의 방법에서, 디알데히드를 실시예 1의 방법에 따라서 제조하였다. 3, 3′-4, 4′- 테트라에틸-5, 5′- 디포르밀-2, 2′- 디피로메탄 25mg을 30㎖ 무수 EtOH에 현탁하였다. 생성된 에탄올 용액을 0℃로 냉각하고 암모니아 가스를 30분 동안 그것을 통과시켜서 버블링하였다. 그 다음 가스입구를 제거하고 플라스크를 60℃에서 72시간 동안 오일욕에 넣었다. 반응을 정지시키고 0℃로 냉각시켰다. 에탄올을 회전식 증발기에서 제거하고 잔류물을 디클로로메탄으로 중성 알루미나(4% H2O를 가함) 상에서 크로마토그래피 하였다.
수율: 4.6mg, 20%
이 화합물의 분광 데이터는 상기 실시예 1에서 제조된 화합물과 동일하다.
생성물의 다른 1.5mg 은 DDQ에 의하여 더 극성인 성분의 산화로 부터 얻었다.

Claims (11)

  1. 다음 식의 포르파시아닌:
    (상기 식에서, 각각의 R9및 R10은 독립적으로 -H 또는이며, 상기 식에서, 각각의 R1-R8및 각 X는, -H, 포화된 직쇄 또는 분지된 사슬에 1 내지 6의 탄소원자를 가지는 알킬, 알켄일, 알킨일; 할로겐, 저급알킬, 또는 저급알콕시에서 독립적으로 선택된 1 내지 3의 치환기로 치환되거나 비치환된 아릴, 알킬 또는 아릴술포닐; 알킬 또는 아릴 시아노; 할로겐; 시아노; 니트로; 아미노; 카르복시 ; 카르보알콕시 및 그것의 에스테르, 아미드 및 그 염으로 구성된 군으로 부터 독립적으로 선택된다.).
  2. 제1항에 있어서, R9및 R10이 H 인 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R9및 R10중 하나는 H 이고 다른 것은이거나, R9및 R10이 모두인 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 제1항에 있어서, 각각의 R1-R8은 독립적으로 에틸 또는 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 포르파시아닌 화합물의 콘쥬게이트에 있어서, 상기 포르파시아닌 화합물은 400 내지 850nm의 범위에서 흡광 최대치를 가지며, 상기 포르파시아닌 화합물은, 면역글로불린, 면역글로불린 단편, 스테로이드 및 당류로 이루어진 군에서 선택되거나, 또는 T-세포 리셉터로 이루어진 표적-특이적인 부분에 공유결합되어 있는 것을 특징으로 하는 포르파시아닌 화합물의 콘쥬게이트.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 포르파시아닌 화합물의 콘쥬게이트에 있어서, 상기 포르파시아닌 화합물은, 면역글로불린, 면역글로불린 단편, 스테로이드, 및 당류로 이루어진 군에서 선택되거나, 또는 T-세포 리셉터로 이루어진 표적-특이적인 부분에 공유결합되어 있는 것을 특징으로 하는 포르파시아닌 화합물의 콘쥬게이트.
  7. 제1항 내지 제4항중 어느 한 항의 화합물과 상자성 이온을 포함하는 것을 특징으로 하는 자기 공명 영상(MRI) 콘트라스트제.
  8. 제7항에 있어서, 상기 상자성 이온원소는 가돌리늄(III) 또는 망간 (II)인 것을 특징으로 하는 콘트라스트제.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물과 테크네튬, 인듐 및 갈륨으로 구성된 군으로부터 선택된 방사성 동위원소를 포함하는 것을 특징으로 하는 방사선 영상화제.
  10. 제1항의 포르파시아닌을 제조하는 방법에 있어서, (a)10배 과량의 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논을 적당하게 치환된 5,5′-비스아미노메틸-2,2′-디피로메탄에 가하여 미정제 생성물을 생성하는 단계; (b) 상기 미정제 생성물을 알루미나 컬럼상에서 크로마토그래피로 정제하는 단계; 및 그다음 (c) 정제된 포르파시아닌을 증발 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
  11. 제1항의 포르파시아닌을 제조하는 방법에 있어서, (a) 적당하게 치환된 디포르밀-2,2′-디피로메탄을 무수에탄올에 현탁시키는 단계; (b) 암모니아 가스를 단계 (a)의 용액을 통하여 버블링하는 단계; (c) 단계 (b)의 생성물을 적어도 약 60℃에서 적어도 약 72시간 동안 가열하는 단계; (d) 단계 (c)의 생성물을 0℃로 냉각시키는 단계; (e) 미정제 생성물을 알루미나 컬럼상에서 크로마토그래피로 정제하는 단계; 및 그 다음 (f) 정제된 포르파시아닌을 증발 건조시키는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 제조방법.
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