KR100241853B1

KR100241853B1 - 포르포시아닌 및 cnc-확장된 포르피린

Info

Publication number: KR100241853B1
Application number: KR1019960706028A
Authority: KR
Inventors: 더블유 보일 로스; 항 탕; 릴리 시에; 위제세케라 틸락; 돌핀 데이비드
Original assignee: 팜 윌리암 엔.; 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아
Priority date: 1994-04-26
Filing date: 1995-04-26
Publication date: 2000-03-02
Also published as: KR970702861A; FI964267A0; AU697139B2; US5726304A; CZ288186B6; CZ314296A3; JPH10500942A; PL317024A1; HUT77405A; NO964541L; EP0757689A1; NZ284413A; NO309481B1; FI964267A; AU2300795A; CA2188029A1; WO1995029180A1; HU9602956D0; NO964541D0; CA2188029C

Abstract

다음식:

의 화합물 및 금속화된 형태 및 그것의 염; 여기서 n은 1-4의 정수; 그리고 여기서 각각의 P_i는 독립적으로 다음식

(여기서 각 R_ia및 R_ib는 독립적으로 비간섭 치환기이다)의 피롤잔기이고, 여기서 각각의 Z_i는 독립적으로 공유결합이거나; 또는 다음식

의 메소 다리기이거나; 또는

다음식

의 N-메소 다리기 이거나; 또는

다음식

의 CC결합이거나 또는 다음식

(여기서 각 R_ic, R_id, R_ie, R_if및 R_ig는 독립적으로 비간섭 치환기이다)의 CNCCNC결합이거나; 또는

다음식

의 CNC결합이고, 여기에서 적어도 한 Z_i는 상기 CNC결합인 화합물이 개시된다.

이들 화합물은 광역학 요법 및 진단법에 유용하다. 금속이 상자성일 때 금속화된 형태는 MRI콘트라스트제로 유용하다.

Description

[발명의 명칭]

포르포시아닌 및 CNC-확장된 포르피린

[도면의 간단한 설명]

제1도는 유리-염기 형태의 옥타에틸포르포시아닌의 방출스펙트럼을 나타낸다.

제2도는 산부가염 형태의 옥타에틸포르포시아닌의 방출스펙트럼을 나타낸다.

제3도는 본 발명의 화합물의 몇가지 바람직한 구체예를 나타낸다.

[발명의 상세한 설명]

[발명의 분야]

본 발명은 포르포시아닌 같은 CNC-확장된 포르피린, 그 제조방법 및 광조사에 의한 표적세포 또는 조직의 검출 또는 파괴를 중재하려는 이들 화합물의 사용에 관한 것이다. 더욱이 본 발명은 방사선 영상 및 자기공명영상법에서 본 발명의 화합물의 사용에 관한 것이다.

[배경기술]

포르피린 및 다른 테트라피롤의 거대고리의 합성 및 연구에 상당한 노력을 기울였지만, 소위 “확장된 포르피린”이란 거대한 방향족 피롤-함유시스템에 대해 알려진 것이 많지 않다. 보다 많은 수의 π전자, 추가의 배위 헤테로 원자 및 보다 큰 중심 결합핵을 함유하는 덕분으로 그러한 시스템은 포르피린에 대한 이점을 제공할 수 있다.

많은 확장된 포르피린 시스템은 4개 이상의 피롤고리를 함유한다. 트리피란디카르복실산 및 비피롤디카르복스알데히드로부터 펜타피롤화합물을 얻는 사피린의 합성은 수십년전에 Woodward, R.B., Aromaticity Conference, Scheffield, England, 1966에 의해 보고되었다. 또한, Broadhurst et al., J. Chem Soc Perkins Trans(1972) 1 : 2111 및 Bauer et al. J. Chem Soc(1983) 105 : 6429를 참조한다.

중피롤디카르복스알데히드 및 피롤디피로메탄디카르복실산으로부터 스마라그디린의 합성은 1970년에 M.M.King,(Ph. D. Dissertation, Harvard University, Cambridge, MA)에 의해 보고되었다.

수퍼프탈로시아닌의 우라닐 복합체는 역사적으로 중요한 다른 펜타피롤류 거대고리화합물이다. 이 화합물은 이염화우라닐로 디시아노벤젠의 직접적인 주형축합에 의해 제조되었지만 유리염기는 불안정하다(Day et al. J. Am Chem Soc(1975) 97 : 4519). 탈금속화는 고리의 수축을 초래하여 프탈로시아닌을 형성하였다(Marks, T.J. 및 D.R. Stojakovic J. Am Chem Soc(1978) 100 : 1695).

고사우어(Gossauer)는 트리피란디알데히드로 비스-α-트리피란을 축합에 이어서 산화시킴으로써 처음으로 헥사피린을 합성하였다(Bull Soc Chim Soc(1983) 92 : 793). 헥사피린에 존재하는 6개의 메텐 다리중에서, 2개가 E배열(Id.)을 갖는다.

샤리에르(Charriere)는 헥사피린이 몇개의 전이금속을 갖는 이금속 복합체를 형성한다고 보고하였다(1987, Thesis, University de Fribourg, Suisse). 다른 헥사피롤시스템인 루비린은 최근에 합성되어 구조적으로 특성화되었다(Sessler et al. Angew Chem Int Ed Engl(1991a) 30 : 977).

비닐위치의 포르피린 또는 플라티린은 R.A. Berger 및 E. LeGoff(Tetra Lett(1978) 44 : 4225 ; 또한 참조, LeGoff, E. 및 O.G. Weaver J. Org Chem(1977) 52 : 711 ; 및 Franck et al. Proc SPIE Int Soc Opt Eng, Ser 5(1988) 997 : 107)에 의해 처음으로 기술된 피롤-함유 거대고리의 다른 중요한 부류이다.

이들 화합물은 일반적으로 디피로메탄과 아크릴알데히드-치환된 디피로메탄을 반응시킴으로써 합성된다(Beckman et al. Angew Chem Int Ed Engl(1990) 29 : 1395).

비스비닐위치의 확장된 포르피린은 모두 4개의 메소다리 결합이 확대된 테트라비닐위치 포르피린으로 더 확장되었다. 테트라비닐위치 포르피린은 N-보호된 피롤-치환 알릴알코올의 산-촉매 자가-축합에 의해 제조된다. 테트라비닐위치 포르피린은 보통의 포르피린으로 부터 150nm이상의 매우 강한 소렛 유사 밴드이동을 갖는다(Gosmann, M. 및 B. Franck Angew Chem Int Ed Engl(1986) 25 : 1100; Knbel, G. 및 B. Frank Angew Chem Int Ed Engl(1988) 27 : 1170). 게다가 비스비닐위치 포르피센의 합성은 최근에 보고되었다(Jux et al. Angew Chem Int Ed Engl(1990) 29 : 1385; Vogel et al. Angew Chem Int Ed Engl(1990) 29 : 1387).

텍사피린으로 나타낸 시프-염기 화합물은 거대고리를 함유하는 피롤의 다른 부류로 이루어진다(Sessler et al. J. org Chem(1987) 52 4394; Sessler et al. J. Am Chem Soc(1988) 110 : 5586); Sessler, J.L. et al. Acc Chem Res(1994) 27 : 43-50.

텍사피린은 트리피란 디알데히드와 o-페닐렌디아민의 산-촉매 축합에 의해 합성된다. 몇몇 텍사피린은 유사한 수단을 사용하여 제조되었다(Sessler et al.(1991) Abstract of the 201st Natl Soc Mtg, Inorganic Division; Sessler et al. Inorg Chem(1992) 28 : 529).

악성세포의 검출 및 치료를 위한 조사와 더불어 포르피린의 사용은 지금까지 상당한 역사를 갖는다(예를들면, Porphyrin Photosensitization(Kessel, D. et al., eds. Plenum Press, 1983 참조). 어떤 포르피린은 “자연적으로” 악성세포를 국소화시킬수 있는 것으로 보인다. 조사되었을때, 포르피린은 자신을 유용하게 만드는 2가지 성질을 갖는다. 먼저, 자외선 또는 가시광선으로 조사되었을때 형광을 발할수 있고, 따라서 악성세포의 검출과 관련된 진단법에서 유용하다(예를 들면, Kessel et al., 상기참조; Gregory, H.B. Jr. et al., Ann Surg(1968) 167 : 827-829 참조).

또한, 광조사되었을때, 어떤 포르피린은 국소화된 세포에서 세포독성효과를 나타낸다(예를 들면, Diamond, I. et al., Lancet(1972) 2 : 1175-1177; Dougherty, T.J. et al., Cancer Research(1978) 38 : 2628-2635; Dougherty, T.J. et al., The Science of Photo Medicine 625-638(J.D. Regan 및 J.A. Parrish, eds., 1982); Dougherty, T.J. et al., Cancer: Principles 및 Practice of Oncology 1836-1844(V.T. Devita Jr. et al., eds., 1982 참조). 사피린, 텍사피린 및 비닐위치의 포르피린 같은 어떤 확장된 포르피린은 종양광선요법에 사용하기 위한 전위 감광제로 관심을 끄는 유일한 장파장과 일중항 산소발생 성질을 포함한다(Maiya et al. J Phys Chem(1990) 94 : 3597; Sessler et al. SPIE Soc(1991) 1426 : 318; Franck et al., 상기 참조).

헤마토포르피린, 모노히드로벤조포르피린 유도체(BPDs) 및 포르피머(Pofimer)나트륨 같은 포르피린은 원하는 세포 또는 조직으로 향하는 그 능력을 정제하려는 표적화 세포에 대해 특이적인 면역글로불린과 콘쥬게이트되었다.

광역학 요법의 실시에 있어 부수적인 문제는 어떤 포르피린을 활성화시키는데 필요한 조사 파장이 630nm의 범위에 있는데, 이 파장은 또한 혈액 및 다른 조직에 정상적으로 존재하는 천연 발색단 및 다른 포르피린에 의해 쉽게 흡수된다는 것이다.

따라서 효과적인 치료의 깊이는 헤모글로빈 같은 광-흡수 천연 발색단의 차단효과때문에 몇 밀리미터로 제한되었다. 보다 많은 투과를 원할때 BPD 같은 보다 긴 파장에서 여기될 수 있는 조사 효과를 중재하기 위한 화합물을 투여하여 피험자의 유기체 전체에 걸쳐 존재하는 천연 발색단의 차단 효과를 피하는 것이 바람직하다.

광선 요법에 더하여, 확장된 포르피린은 자기공명영상(MRI)에 유용하다.

MRI는 발달의 초기 단계에서 정상 및 비정상 조직이 관찰되고 인식하게 되는 비침습, 비이온화방법이다. 이번에 MRI는 병든 세포 대 정상세포에 대한 신호 증강의 정도가 많은 임상적인 상황에 사용되기에는 종종 불충분하다는 점에서 중요한 단점을 갖는다. 이 문제를 해결하기 위해서 MRI를 위한 콘트라스트제가 개발되었다. 가돌리늄(III)(Gd)에서 유도된 것 같은 상자성 금속착체가 최근에 임상시험에서 특히 효과적이라고 입증되었다.

지금까지, MRI 콘트라스트제 중의 가돌리늄의 배위는 포르피린, 그러나 보다 성공적으로는 텍사피린을 포함하는 카르복실레이트-형 리간드를 사용하여 이루어졌다.

(예를 들면, Lauffer, R.B. Chem Rev(1987) 87 : 901; Kornguth et al. J Neurosurg(1987) 66 : 898; Koenig et al. Invest Radiol(1986) 21 : 697; Chacheris et al. Inorg Chem(1987) 26 : 958; Loncin et al. Inorg Chem(1986) 25 : 2646; Chang, C.A. 및 V.C. Sekhar Inorg Chem(1987) 26 : 1981 참조). 세슬러(Sessler)등은 텍사피린이 생체내에서 가장 안정한 Gd(IV)착체를 형성한다고 보고하였다(Sessler et al. Inorg Chem(1989) 28 : 3390), Gd(III)는 보통의 포르피린과 안정한 착체를 형성하지 않는다. Gd(III)이외에, 텍사피린은 Cd 및 Eu 같이 다양한 전이금속과 착체를 형성한다고 보고되었다(Sessler, J.L. 및 A.K. Burrell Top Cur Chem(1992) 161 : 177).

[발명의 개시]

본 발명은 표적조직, 세포 및 병원균을 검출 및/또는 처리하는데 사용하기 적당한 신규의 광흡수 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물은 포르피린, 프탈로시아닌, BPD, 및 관련화합물이 사용될 수 있는 유사한 방법중 광역학 요법 및 진단에 이용될 수 있다. 원한다면, 본 발명의 화합물은 혈액 또는 다른 조직에서 고농도로 존재하는 성분, 구체적으로 헤모글로빈 및 미오글로빈과 정상적으로 회합된 포르피린 잔류물에 의해 정상적으로 흡수되는 에너지의 바깥 범위의 에너지로 방사흡수되는 능력때문에 상대적으로 적은 투여량으로 투여될 수 있다. 이것은 광에 의한 조직의 투과가 필요할때 유리하다. 표면적인 처리로 충분한 어떤 경우에는 보다 짧은 파장이 사용될 수 있다.

이 성질이 효과적인 처리를 위해 필요하지 않을 수도 있지만, 이들 화합물은 비표적화조직 및 세포와 비교하여 표적화조직 및 세포에 바람직하게 보유된다.

예를들면, 미합중국 일련번호 07/948,113(1992. 9. 21 출원) 및 07/979,546(1992. 11. 20 출원)의 내용은 참고로 본문에 포함되므로 참조한다.

따라서, 한가지 양태에서, 본 발명은 CNC-확장된 포르피린의 다음식의 CNC-확장된 포르피린에 관한 것이다.

상기식에서 n=1-4이고; 각 P_i는 독립적으로 다음식

(여기서 각 R_ia및 R_ib는 독립적으로 비간섭 치환기이다)의 피롤잔기이고;

각각의 Z_i는 독립적으로 공유결합이거나, 또는 다음식

: 의 메소다리기 또는 다음식

의 메소다리기 또는 다음식

의 CC결합 또는 다음식

(여기서, 각 R_ic, R_id, R_ie, R_if및 R_ig는 독립적으로 비간섭 치환기이다)의 CNCCNC 결합, 또는 다음식

의 CNC 결합이고, 상기 식에서 적어도 한 Z_i는 상기 CNC결합이다.

본 발명의 화합물에서 적어도 한 Z_i는 상기 CNC결합이다. 또한 본 발명의 화합물은 금속화된 형태 및 상기식(1)의 화합물의 염을 포함한다.

이 “CNC-확장된 포르피린”기의 표현형은 하기한 바와 같은 포르포시아닌이다.

다른 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 및 진단적 조성물, 발명 화합물이 면역글로불린 같은 특이적 표적화제와 공유결합되는 콘쥬게이트, 그리고 광역학 요법 및 진단법에서 이들 화합물 또는 콘쥬게이트의 사용에 관련된다.

다른 양태에서, 본 발명은 방사선영상 및 자기공명영상 콘트라스트제로 사용하기 적당한 본 발명 화합물의 형태뿐만 아니라 이것들을 사용하는 방법도 관련된다. 또 다른 양태는 본 발명 화합물의 합성에 관한 것이다.

[발명의 실행방식]

본문에 나타낸 “CNC-확장된 포르피린”인 본 발명의 화합물은 공유결합, 또는 포르피린내에 원래 있는 임의로 치환된 종래의 메소결합, 또는 N-메소결합, 또는 포르파센내에 있는 임의로 치환된 CC결합, 또는 텍사핀내에 있는 o-페닐렌디아민 결합과 유사한 임의로 치환된 CNCCNC결합, 또는 CNC결합을 통하여 적어도 3개의 피롤핵을 함유하며, 여기서 적어도 한 결합은 다음식

의 CNC결합이다.

이 기에 속하는 한 특정부류의 원(員)은 포르포시아닌이다.

이것은 다음식으로 나타낸다.

다양한 R 치환기는 광역학 요법 단락에서 표적화 조직 및 세포의 파괴를 중재하고 MRI 콘트라스트제로 작용하는 등의 적어도 한 원하는 효과를 이루며 적당한 파장을 광흡수하는 그 능력에서 기본 포르포시아닌 핵을 간섭하지 않는 기이다. 간섭하지 않을 적당한 R치환기의 성질은 하기에 더 개시된다. 그러나 광범위한 치환기가 이들 화합물의 유용성을 간섭하지 않고 사용될 수 있음이 언급될 수 있다.

비간섭 치환기의 적당한 선택은 특정의도의 용도에 의존할 것이다. 예를들면, 생체내에서 사용되려면, 치환기는 비독성이어야 한다. 시험관내에서 사용될 때, 특히 적당히 처리된 물질로부터 본 발명의 화합물을 제거하기 위한 가능성이 유용하다면, 이것은 중요하지 않을 수 있다. 그것들 또는 보통의 기술은 각각의 R_i선택을 제한하는 변수를 이해할 것이다.

화합물 식(1a)이외에, 다른 CNC-확장된 포르피린은 본 발명의 범위내에 포함된다.

한 바람직한 구체예에서, n=2일때 식(1)은 다음으로 나타낼 수 있다.

여기에서 각각의 P_i및 Z_i는 상기 정의한 바와 같다. n=2인 이들 -CNC- 화합물의 예시는 식(1b)내지(1e)의 화합물이다:

또는 총칭적으로

이들 예시식에서 보는 바와 같이 4개의 피롤핵 사이의 적어도 한 다리 결합은 CNC 결합이어야 한다. 그 밖에, 결합은 공유결합 또는 임의로 R_ic로 치환된 종래의 메소 단일-원자 메틴결합, 또는 상기한 다른 결합일 수 있다.

본 발명의 CNC 포르피린 내의 π-결합의 결과적 배열은 결합선택에 의존할 것이고 이것은 유기화학에서 보통의 기술에 의해 이해된다. 예를 들면, 안정하지만 홀수의 메소결합을 CNC로 치환하여 방향족 시스템을 비방향족으로 전환시킨다; 짝수의 치환은 방향성을 유지시킨다.

추가의 구체예는 n=1일때:

또는 n=3일때

또는 n=4일때

를 포함한다. 제3도에 나타낸 구체예가 특히 바람직한 것이다.

대체로 변환기 R_ia, R_ib및 R_ic, R_id, R_ie, R_if및 R_ig와 관련하여 각각의 R_i는 독립적으로 H, 할로, 니트로, 시아노, NR′₂, SR′, OR′, SOR′, SO₂R′, COOR′, CONR′₂, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 알케닐, 임으로 치환된 알키닐, 임의로 치환된 아릴, 또는 임의로 치환된 아릴알킬이다. 치환기 R′는 수소 또는 알킬(1-6C)을 나타낸다.

또한, 아미노, 술프히드릴 및 히드록실 치환기는 아실화(1-6C)될 수 있다.

상기 임의의 치환에 적당한 치환기는 상기 명명한 것, 즉, 할로, 니트로, 시아노, NR′₂, SR′, OR′ 등을 포함한다. 물론 방향족 핵은 또한 알킬, 알케닐 또는 알키닐기로 치환될 수 있다.

본문에 사용된 알킬, 알케닐 및 알키닐은 1-6C를 함유하는 히드로-카르빌 치환기로서 종래적으로 정의되고, 포화 또는 비포화되고, 직쇄, 분지 또는 고리형 부분이다.

따라서, 알킬은 메틸, 3차부틸, 고리형헥실, n-헥실등을 포함한다; 알케닐은 하나 이상의 이중결합을 갖는 이들 탄소골격을 포함한다; 알키닐은 하나 이상의 3중 결합을 갖는 유사 탄소 골격구조를 포함한다. 아릴알킬(5-18C)은 알킬렌기(여기서 알킬렌은 알킬(1-6C)의 정의에 대응하는 방식으로 정의됨)를 통하여 CNC-확장된 포르피린 핵에 결합된 아릴치환기로 언급한다.

“아릴”이란 4-l2C의 방향족 부분, 임의로 하나 이상의 헤테로 원자를 함유하는 것을 의미한다. 따라서 적당한 아릴기는 페닐, 나프틸, 피리딜, 피리미딜, 퀴놀릴 등을 포함한다.

치환기가 카르복실산 또는 아미노 치환을 함유하는 경우, 또한 관련된 염이 본 발명 화합물의 범위내에 포함된다.

-COOH의 염은 약학적으로 허용가능한 비독성 무기 및 유기염기를 포함하는 무기 또는 유기염기에서 유도될 수 있다. 적당한 무기염기는 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 및 마그네슘, 히드록사이드 등을 포함한다. 특히 바람직한 것은 칼륨 및 나트륨염이다. 약학적으로 허용가능한 유기 비독성 염기는 고리형 아민을 포함하는 1차, 2차, 3차 및 4차 아민이고 염기성 이온교환수지를 포함한다.

예는 이소프로필아민, 트리메틸아민, 에탄올아민, 디시클로헥실아민, 리신, 아르기닌, 히스티딘, 카페인, 프로카인, 콜린, 베타인, 글루코사민, 테오브로민, 푸린, 피페라진, 폴리아민수지 등을 포함한다.

또한 치환기에 함유된 어떤 아미노기는 그것의 산부가염의 형태로 존재할 수 있다.

게다가, CNC-확장된 포르피린 핵자체는 산-부가염의 형태로 존재할 수 있다.

이들 염은 염산, 황산 및 인산 같은 무기산 또는 아세트산, 옥살산, 벤조산 등 같은 유기산으로 형성된다.

유리산 또는 유리염기에서 본 발명 화합물이 대응하는 염형태로 전환 및 그 반대는 이 기술분야에서 잘 이해된 방법에 의해 수행된다.

R_ia및 R_ib의 바람직한 구체예는 수소, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴 및 임의로 치환된 아릴알킬을 포함한다. 특히 바람직한 치환기는 카르복실이다.

가장 바람직한 것은 수소 및 알킬이다. 게다가, 각각의 R_ia및 R_ib는 독립적으로 결정되는 반면에, 이들 치환기의 선택에서 대칭성은 결과생성혼합물중 성분수가 감소하기 때문에 성분의 제조를 용이하게 한다. 크로마토그래피 분리기술이 생성혼합물에서 성분의 임의수의 성분을 분리시키는데 적당하므로, 가능한 생성물 수가 감소될때 수율은 증가된다. 따라서, 모든 R_ia가 동일하고 모든 R_ib가 동일한, 구체적으로 모든 R_ia및 R_ib가 동일한 본 발명의 화합물이 특히 바람직하다.

다른 바람직한 구체예는 식(1a)의 화합물에서 R_1a, R_1b, R_4a및 R_4b는 동일하고 R_2a, R_2b, R_3a및 R_3b는 서로 동일하지만, R_1a, R_1b, R_4a, 및 R_4b와는 다른 것이다.

R_ic-R_ig의 특히 바람직한 구체예는 H 및 임의로 치환된 방향족(아릴)치환기를 포함한다. R_ic의 특히 바람직한 구체예는 H 및 임의로 치환된 페닐이다.

n=1인 본 발명 화합물을 설명하는 바람직한 구체예는 다음과 같다.

1. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2c가 H인 메소이고, Z₃은 공유결합이고, R_1a및 R_2b는 H이고, R_1b, R_2a, R_3a및 R_3b는 메틸이다;

2. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2c가 페닐인 메소이고, Z₃은 공유결합이고, R_1a, R_2a, R_3a및 R_3b는(CH₂)₂COOH이고 R_1b는 메틸이며 R_2b는 H이다;

3. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f및 R_2g가 H인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3d및 R_3e가 H이고 R_1a및 R_2b가 H인 CC이고, R_1b, R_2a, R_3a및 R_3b는 메틸이다;

4. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f및 R_2g가 페닐인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3d및 R_3e가 페닐인 CC이고, R_1a, R_2a, R_3a및 R_3b는(CH₂)₂COOH이고 R_1b는 메틸이며 R_2b는 H이다;

5. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f가 페닐이고 R_2g가 H인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3d가 페닐이고 R_3e가 H이며 R_1a, R_2a및 R_3a가 페닐이고 R_1b, R_2b및 R_3b가 H인 CC결합이다.

n=2인 바람직한 구체예는 다음과 같다:

1. Z₁은 CNC이고, Z₂는 N-메소이고, Z₃은 R_3c가 메틸인 메소이고, Z₄는 R_1a및 R_2b가 H이고 R_1b, R_2a, R_3a, R_3b, R_4a및 R_4b가 메틸인 CNC이다;

2. Z₁은 CNC이고, Z₂는 N-메소이고, Z₃은 R_3c가 페닐인 메소이고, Z₄는 CNC이고 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_3b및 R_4a가(CH₂)₂COOH이고 R_1b, R_2b및 R_4b가 H이다;

3. Z₁은 CNC이고, Z₂는 N-메소이고, Z₃은 R_3c가 H인 메소이고, Z₄는 CNC이고 그중에 R_1a, R_2a, R_3a및 R_4a가 페닐이고 R_1b, R_2b, R_3b및 R_4b가 에틸이다;

4. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f및 R_2g가 둘다 페닐인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3d및 R_3e가 H인 CC결합이고, Z₄는 공유결합이고 그중에 R_1a및 R_2b는 H이고 R_1b, R_2a, R_3a, R_3b, R_4a및 R_4b는 메틸이다;

5. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f및 R_2g가 H인 CNCCNC이고, 또는 Z₃은 R_3d가 에틸이고 R_3e가 H인 CC결합이고, Z₄는 R_4c가 에틸인 메소이고 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_3b및 R_4a가(CH₂)₂COOH이며 R_1b, R_2b및 R_4b는 H이다;

6. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f가 에틸이고 R_2g가 H인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3c가 페닐인 메소이고 Z₄는 R_3d및 R_3e가 메틸인 CC결합이고 그중에 R_1a, R_2a, R_3a및 R_4a는 페닐이며 R_1b, R_2b, R_3b및 R_4b는 에틸이다.

n=3인 경우에서, 바람직한 화합물은 다음과 같다:

1. Z₁은 CNC이고, Z₃는 R_2c가 메틸인 메소이고, Z₃은 R_3c가 메틸인 메소이고, Z₄는 공유결합이며 Z₅는 CNC인데 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_4a및 R_5a는 메틸이고 R_1b, R_2b, R_3b, R_4b및 R_5b는 H이다;

2. Z₁은 CNC이고, Z₂는 N-메소이고, Z₃은 R_3c가 페닐인 메소이고, Z₄는 CNC이며 Z₅는 R_5d및 R_5e가 페닐인 CC이고, 그중에 R_1a, R_1b, R_3a, R_3b, R_5a및 R_5b는(CH₂)₂COOH이고 R_2a, R_2b, R_4a및 R_4b는 메틸이다;

3. Z₁은 CNC이고, Z₂는 메소이고, Z₃은 R_3c가 H인 메소이고, Z₄는 N-메소이며, Z₅는 CNC이고 그중에 R_1a, R_3a및 R_5a는 페닐이고, R_1b, R_3b및 R_5b가 H이며 R_2a, R_2b, R_4a및 R_4b가 메틸이다;

4. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2c가 메틸인 메소이고, Z₃은 R_3f및 R_3g가 페닐인 CNCCNC이고, Z₄는 N-메소이며, Z₅는 R_3d및 R_3e가 H인 CC결합이고, 그중에 R_1a및 R_2b는 H이고 R_1b, R_2a, R_3a, R_3b, R_4a및 R_4b는 에틸이다;

5. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f및 R_2g가 H인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3d가 에틸이고 R_3e는 H인 CC결합이고, Z₄는 R_4c가 에틸인 메소이며 Z₅는 공유결합이고, 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_3b및 R_4a는(CH₂)₂COOH이고 R_1b, R_2b, R_4bR_5a및 R_5b는 H이다;

6. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2f가 에틸이고 R_2g가 H인 CNCCNC이고, Z₃은 R_3c가 페닐인 메소이고, Z₄는 R_4d및 R_4e가 메틸인 CC결합이며 Z₅는 CNC이고, 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_4a및 R_5a는 메틸이고 R_1b, R_2b, R_3b, R_4b및 R_5b가 에틸이다;

7. Z₁은 CNC이고, Z₂는 R_2d및 R_2e가 페닐인 CC결합이고, Z₃은 R_3f및 R_3g가 H인 CNCCNC이고, Z₄는 N-메소이며 Z₅는 R_5c가 메틸인 메소이고 그중에 R_1a, R_1b, R_3a, R_3b, R_5a및 R_5b는(CH₂)₂COOH이고 R_2a, R_2b, R_4a및 R_4b는 메틸이다;

8. Z₁은 CNC이고, Z₂는 공유결합이고, Z₃은 R_3c가 페닐인 메소이고, Z₄는 CNC이며 Z₅는 R_5d및 R_5e가 메틸인 CC결합이고 그중에 R_1a, R_3a및 R_5a는 페닐이고, R_1b, R_3b및 R_5b는 H이고 R_2a, R_2b, R_4a및 R_4b는 메틸이다.

n=4는 화합물에 대해, 바람직한 구체예는 다음을 포함한다:

1. Z₁및 Z₆은 CNC이고, Z₂및 Z₅는 모든 R_2d, R_2e, R_5d및 R_5e가 페닐인 CC결합이고, Z₃및 Z₄는 R_3c및 R_4c가 에틸인 메소이고, 그중에 R_1a, R_2a, R_3a, R_4a, R_5a및 R_6a는 i-프로필이며 R_1b, R_2b, R_3b, R_4b, R_5b및 R_6b는(CH₂)₂COOH이다;

2. Z₁은 CNC이고, Z₂및 Z₄는 N-메소이고, Z₃및 Z₅는 공유결합이며 Z₆은 R_6c가 H이고 R_1a, R_2a, R_3a, R_4a, R_5a및 R_6a는 페닐이며 R_1b, R_2b, R_3b, R_4b, R_5b및 R_6b는 메틸인 메소이다.

다수의 치환기를 갖는 CNC-확장된 포르피린 획득 가능성은 중심 CNC-확장된 포르피린 핵의 성질이 그러한 치환기의 선택에 의해 변형될 수 있는 이점을 갖는다.

예를들면, 화합물의 용해성은 극성기를 갖는 치환기를 사용함으로써 증강될 수 있다.

이들 기의 배열의 대칭을 변경시킴으로써, 화합물을 양쪽성으로 만들수 있는데, 즉 화합물은 + 및-전하의 정형화된 분포를 가질 것이다. 이런 성질은 생물학적 분포 -- 막전이등의 문제를 해결하는데 도움이 된다. 게다가, 중심핵의 광흡수성은 치환기내의 콘쥬게이트된 π-결합에 의해 어느 정도 변형될 수 있어 보통의 조색단 이동을 얻는다.

[방사성 동위 원소의 금속화/첨가]

본 발명의 CNC-확장된 포르피린 화합물은 CNC-확장된 포르피린 자신이 방사선영상(신티그래프 영상)을 위한 방사성 동위원소 또는 자기공명영상 콘트라스트제를 이온이나, 또는 간단하게 화합물의 용이한 형태로 사용하기 위한 어떤 금속과 커플링되는 것을 포함한다. 유용한 표지가 되는 방사성 동위원소의 예는 요오드-123, 요오드-131, 테크네튬-99m, 인듐-111 및 갈륨-67을 포함한다. MRI 콘트라스트제로 적당한 금속의 예는 Gd, Mn, Eu, Dy, Pr, Pa, Cr, Co, Fe, Cu, Ni, Ti, 및 V 같은 원소의 상자성 이온을 포함하며, Gd 및 Mn이 바람직하다.

[발명화합물의 콘쥬게이트]

어떤 문헌에서 사용하기 위해, 리셉터에 대한 리간드 또는 면역글로불린 같은 표적-특이적 부분에 본 발명의 화합물을 결합시키는데 도움이 된다. 바란다면, 종양 같이 병든 조직 및 세포로 향하는 본 발명 화합물의 능력은 그런 표적조직 또는 세포의 표면에 위치한 에피토프 또는 리셉터를 구체적으로 결합하는 부분에 화합물을 커플링시킴으로써 강화될 수 있다.

따라서, 본 발명내의 표적-특이적 부분은 스테로이드, 에스트로겐 및 테스토스테론 및 그 유도체 같은 리간드, T세포 리셉터에 대한 리간드로 이루어지는 펩티드, 리셉터를 갖는 단핵세포 및 거대파지에 대한 만노스 같은 당류, 그리고 H₂작용제를 포함한다.

또한 표적-특이적 부분은 면역특이적 성분일 수 있다.

TSM은 다클론성 또는 단클론성 항체 제조에서 유도될 수 있으며 전체 항체 또는 F(ab′)₂, Fab, 또는 Fab′ 단편 같은 이들 항체의 면역학적으로 반응하는 단편을 함유할 수 있다. 전 항체에 대한 치환기로 그런 면역학적으로 반응하는 단편의 사용은 이 분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들면 Spiegelberg, H.L., Immunoassays in the Clinical Laboratory(1978) 3 : 1-23을 참조한다.

다클론성 항혈청은 원하는 항체에 대한 항원을 적당한 포유동물에 주입하고, 항원에 대한 혈청내의 항체 레벨을 분석하고 적정농도가 높을때 항혈청을 제조하는 종래의 방식으로 제조된다. 단클론성 항체 제조는 또한 면역된 동물로부터 말초혈액 림프구 또는 비장세포를 사용하여, 이들 세포를 바이러스 주사, 골수종과의 융합이나 또는 다른 종래의 방법중 하나로 죽지않게 하며, 분리된 콜로니에 의해 원하는 항체의 생산을 위한 스크리닝을 하는 Koehler 및 Milstein 방법같은 종래적인 방법으로 제조될 수 있다. 단클론성 또는 다클론성 제조중 하나로 부터 단편의 형성은 Spiegelberg, H.L.,(상기 참조)에 의해 기술된 종래의 방법으로 얻는다.

본문에 예시되어 구체적으로 유용한 항체는 Malcolm et al.(Ex Hematol(1984) 12 : 539-547)에 의해 기술된 대로 제조가능한 단클론성 항체제조 CAMAL-1; Mew et al. J Immunol(1983) 130 : 1473-1477에 의해 기술된 바와 같은 다클론성 또는 단클론성 제조의 항-M1 항체 그리고 Maier et al. J Immunol(1983) 131 : 1843 및 Steele et al. Cell Immunol(1984) 90 : 303에 의해 기술된 바대로 제조된 B16G 항체를 포함한다.

전술한 목록은 예시이고 본 발명을 제한하지 않는다; 표적 조직이 알려지면, 이 조직에 대한 특정 항체가 종래의 방법에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 본 발명은 어느 원하는 목적에 대한 독성을 얻는 것이 적용가능하다.

본 발명의 CNC-확장된 포르피린에 대한 표적-특이적 부분의 커플링은 CNC-확장된 포르피린 부분에서 치환기의 성질에 의존하는 이 분야에서 기지된 어떤 용이한 방법에 의해 얻을 수 있다. 예를들면, 적어도 하나의 R_i가 카르복실기를 함유하면, 아미노-함유 TSM으로의 공유결합은 카르보디이미드 같은 탈수제를 사용하여 얻을 수 있다. 표적-특이적 부분에 대한 CNC-확장된 포르피린을 공유결합시키는 보다 바람직한 방법은 본질적으로 디메틸술폭시드(DMSO)로 이루어지는 반응 매개물의 존재에서 1-에틸-3 -(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드(EDCI)로 처리시킨다.

이 바람직한 방법을 사용하는 제조는 하기에 예시된다. 디시클로헥실카르보디이미드 또는 디에틸카르보디이미드 같은 다른 탈수제는 종래적인 수성 및 부분적인 수성 매질로서 잘 사용될 수 있었다.

또한 콘쥬게이트의 활성부분은 이작용성인 링커화합물로 커플링될 수 있으며, 2개의 활성성분 각각과 공유결합이 가능하다. 매우 다양한 이들 링커는 시중구입이 가능하며 전형적인 목록은 예를들면 Pierce Chemical Co., Rockford, IL의 카탈로그에서 발견된 것들을 포함한다. 이들 링커는 호모- 또는 헤테로 이작용성 부분중 하나이며 디술피드, 아미드, 히드라존, 및 광범위한 다른 링커를 형성할 수 있는 작용성을 포함한다. 다른 링커는 케톤, 산, 알데히드, 이소시아네이트, 또는 다양한 다른 기에 의한 성분으로 유도된 폴리아민, 폴리에테르, 폴리아민 알코올 같은 중합체를 포함한다.

콘쥬게이트의 활성부분을 커플링하는데 사용된 기술은 어떤 종래의 방법을 포함하며 커플링을 위한 방법은 본 발명의 부분을 형성하지 않는다.

[PDT에서 발명 화합물의 사용 및 다른 적용]

본 발명 화합물은 포르피머나트륨 및 BPD로 알려진 것들과 유사한 광역학 요법 프로토콜에 사용될 수 있다. 따라서, 화합물은 원하지 않는 세포 또는 조직의 작용을 파괴 또는 손상시키거나 또는 박테리아 및 바이러스 같은 병원균을 불활성시키는데 사용될 수 있다.

PDT가 유용한 표적세포 및 조직의 예는 혈액암을 포함하는 종양, 악성골수, 바이러스성 감염 혈액세포 또는 골수, 이형성세포 또는 조직, 염증 또는 감염부위, 건선반 또는 유두종 바이러스(사마귀) 또는 신생동맥 과형성 병변같은 과증식조직, 단순성 혈관종 같은 과혈관 신생, 아테롬성 동맥경화반점, 모낭, 유리된 바이러스, 박테리아, 원충류 또는 다른 병원성 기생체를 포함하며 이에 한정되지 않는다.

PDT에 의해 반대영향을 받을 수 있는 병원균은 어떤 바이러스, 박테리아, 원충류 및 다른 병원성 기생체를 포함한다. 예를 들면, 바이러스는 사람 거대세포바이러스, 엡스타인-바르 바이러스, 마렉병 포진바이러스, 사람 단순포진 바이러스, 대상포진 바이러스와 같은 엔벨로프 바이러스, Poxviridae과의 구성원, 사람 간염 C형 바이러스를 포함하여 사람 간염 A형 바이러스(HAV), 사람 간염 B형 바이러스(HBV) 및 비 A형, 비 B형 간염 바이러스와 같은 Hepadnaviridae과의 구성원, 인플루엔자 바이러스 A, B 및 C형과 같은 Orthomyxoviridae과의 구성원, 사람 T세포 백혈병 바이러스, 사람 면역 결핍 바이러스와 같은 Retroviridae과의 구성원 및 진드기 매개 뇌염 바이러스 또는 황열 바이러스와 같은 Flaviviridae과의 구성원을 포함한다.

예시적인 기생체는 Plasmodium malarie, P. falciparum, P. ovale, P. vivax 및 Trypanosoma cruzi를 포함한다. 박테리아는 광역학적 활성에 의해 치료가능한 Bacillus subtilis, Streptococus faecalis, Pseudomonas spp., Mycobacterium spp. 및 다른 기회주의의 유기체를 포함한다.

이 내용에서 본 발명 화합물의 사용방식은 이 분야에서 확립된 방법을 따른다.

특정기술에 사용된 CNC-확장된 포르피린을 위한 흡수파장의 선택은 사용성질에 의해 영향받을 수 있다. 예를들면, 표적조직이 혈액중에 발견된 것같이 많은 간섭물질로 있는 경우에는 이들 오염물과 나누지 않는 파장흡수를 갖는 CNC-확장된 포르피린을 사용하는 것이 유리하다. 한편, 표재성 표적조직의 처리를 위해, 이 고찰은 적절하지 못하다. 따라서, 광조사될 환경에서 광흡수 가능한 대안의 화합물 존재 또는 부재는 본 발명의 적당한 구성원 부류의 CNC-확장된 포르피린을 선택하는 것이 고려된다.

광역학 요법에 사용하는 것 이외에, 본 발명 화합물은 포르피린 자체를 위한 것과 유사한 방법에서 진단법에 사용될 수 있다. 포르피린 자체와 유사한 CNC-확장된 포르피린은 적당한 파장의 광에 의해 여기될때 형광을 발할수 있다.

포르피린 자체와 유사한 CNC-확장된 포르피린은 아테롬성 동맥경화반점, 종양등 같은 어떤 표적조직으로 향할 것이다. 적당하다면, 본 발명 화합물은 이 “향함”을 보장하는 표적-특이적 부분으로 제공될 수 있다. 본 발명 화합물은 존재한다면 그러한 표적조직 또는 세포내에 축적될 수도 있으며, 이들 조직 또는 세포는 형광을 검출함으로써 국소화 또는 검출될 수 있다.

더욱이, 본 발명 화합물은 공유결합치환기 또는 금속착체중 하나로서 방사성 동위원소를 포함할 수 있어 발명 화합물이 방사선- 또는 신티그래프 영상에 의해 위치될 수 있다.

또한 어떤 금속이온은 MRI 콘트라스트제로서 실행가능한 본 발명 화합물을 제공한다. 이들 콘트라스트제는 증강된 판독력을 가진 MRI 스캔을 얻는데 용이하게 사용된다.

[발명화합물의 제조]

많은 수단이 본 발명의 CNC 결합을 얻기 위해 사용될 수 있다. 단일 CNC 결합이 예를들면 2-위치에서 카르복실산 부분으로 치환된 피롤과 2위치에서 아미노에틸로 치환된 피롤을 반응시킴으로써 형성될 수 있다. CNC 결합을 형성하기 위한 이 일반방법은 반응도 1에 나타낸다.

[반응도 1]

표시한 바와 같이, 종래의 아미드 형성에 이어서 탈수반응으로 본 발명의 CNC 결합을 형성한다. CNC 결합은 확장된 포르피린 핵의 공명시스템에 포함되어 안정화된다.

추가의 접근법은 인접하는 피롤의 2-위치에 각각 결합된 2개의 시아노기의 축합에 의한 결합을 얻는 반응도 2에서 예시된다.

[반응도 2]

반응도 2에 나타낸 바와 같이, 이 경우에서 시아노-치환된 디피롤을 수소화 알루미늄 리튬으로 먼저 환원시킨 다음 산소로 처리하여 결과 결합을 형성한다.

환원 화합물(3)을 부분 이온화시키고 이온화 형태와 O₂의 존재에서 식(3)의 화합물과 조합하여 생성물(1)을 얻는다.

반응도 2에 대한 대안은 반응도 3에 나타낸다. 산소로 수소화 알루미늄 리튬-환원된 디시아노화합물을 처리하는 대신에; 염화에틸렌 중의 DDQ 및 THF를 사용한다.

[반응도 3]

비스니트릴로 출발하기보다는 출발물질이 또한 식(3)으로 나타낸 비스아미노메틸-유도된 디피로메탄으로 이루어진 것을 반응도 3에서 알 수 있을 것이다.

이 출발물질은 식(1a)의 포르포시아닌의 비대칭 형태를 얻는데 특히 유리하게 사용된다. 이것은 원하는 비대칭 생성물을 얻기 위한 포르포시아닌 핵의 2개의 다른 “절반”의 축합을 설명하는 반응도 3′에서 예시된다. 물론, 2개의 대칭 생성물 또한 형성되지만, 이것들은 표준 크로마토그래피 기술을 사용하여 원하는 비대칭 생성물로부터 쉽게 분리된다.

[반응도 3']

반응도 3′의 다른 변형에서, 나타낸 바와 같이 2개의 디아미노메틸디피로메탄을 축합하는 것보다 비스알데히드(이것은 하기 반응도 5에서 중간체로 얻을 수 있다)를 가한다. 이것은 R_1a, R_1b, R_4a및 R_4b(뿐만 아니라 R_1c)의 성질이 R_2a, R_2b, R_3b및 R_3c와 다를수 있는 포르포시아닌의 비대칭 형태의 생산을 촉진한다. 따라서, 반응도 3에 나타낸 식(3)의 식에서 치환기는 디알데히드에 있는 것과 다를수 있고 단일 비대칭 생성물을 얻는다.

대안으로, 디피롤 중간체의 디알데히드 형태는 반응도 4에 나타낸 바와 같이 에탄올 중의 암모니아 및 물을 사용하여 직접 축합될 수 있다.

[반응도 4]

반응도 2 또는 3에서 축합을 위한 2개의 시아노기, 또는 반응도 4에서 축합을 위한 디알데히드를 함유하는 디피롤부분을 반응도 5에 나타낸 바와 같이 얻을 수 있다.

[반응도 5]

표시한 바와 같이, 디피롤이 2-벤조일카르보닐-4-아세톡시메틸피롤의 2분자의 축합에 의해 형성된다. 결과된 디피롤이 대응하는 디알데히드로 환원하고 표준시약을 사용하여 시아노 유도체로 전환된다.

최종적으로, 반응도 6은 식(2)에 의해 유형화된 디시아노 중간체를 얻기 위한 추가의 대안이다. 다음에 디시아노 화합물은 반응도 2 또는 3에서 상기 설명한 접근법을 사용하여 적당한 포르포시아닌으로 전환될 수 있다.

[반응도 6]

반응도 6의 초기 단계에서, 1-5 독립적으로 선택된 치환기로 임의로 치환된 벤즈알데히드는 2개의 축합 피롤핵 사이의 메소 다리결합을 형성하기 위해 사용된다.

그러나, 포름알데히드 및 아세트알데히드, 부티랄데히드, 헥실알데히드, 등 같은 간단한 알킬알데히드를 포함하는 다른 알데히드 또한 사용될 수 있다. 또, 1-나프틸알데히드 같은 다른 아릴 알데히드 또한 사용될 수 있다. 두번째 단계에서, DMF 같은 극성 비양성자성용매 중의 클로로술포닐이소시아네이트(ClSO₂N=C=O; CSI)는 5-위치에서 원하는 시아노기를 함유하기 위해 피롤핵을 유도한다.

반응도 6에서 나타낸 특정 성분은 예시되지만 제한하지는 않는다.

반응도 5와 관련하여 보다 상세하게, 테트라에틸-치환된 디시아노디피롤이 다음과 같이 예시한 대로 사용된다: 빙초산 중의 출발물질인 2-벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸-5-메틸피롤(도시하지 않음)을 테트라아세트산 납으로 처리한다. 에틸렌글리콜을 가하여 어떤 잔류 Pb(IV)를 환원시킨다. 물을 가하고 반응도 5에서 출발물질로 나타낸 5-아세톡시메틸-2-벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸피롤을 여과에 의해 수집하고 추가의 물로 세척한다.

5-아세톡시메틸-2-벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸피롤을 아세트산에 가하여 가열한다. 전술한 용액을 실온으로 냉각시키면 고체 생성물이 큰 덩어리로 침전한다.

물을 가하고 생성물을 여과에 의해 수집한 다음에 추가의 물로 세척한다.

여액을 CH₂Cl₂로 추출한 다음에 증발시켜 고체 생성물을 얻는다. 고체 생성물을 조합한 후 CH₂Cl₂및 헥산의 용액으로부터 재결정화하여 5,5′-비스(벤질옥시카르보닐)-3,3′,4,4′-테트라에틸-2,2′-디피로메탄을 얻는다.

이 생성물을 테트라히드로푸란(THF)에 용해시키고 Pd/C 및 트리에틸아민의 존재에서 수소하에 교반시킨다. 촉매를 셀리트를 통하여 여과시킨후 여액을 증발 건조시키고, N,N-디메틸포름아미드에 용해하고 아르곤하에서 비등가열한다.

용액을 냉각시키고 과잉의 냉각한 염화 벤조일을 가한다. 반응혼합물을 교반시키고 고체 생성물을 여과에 의해 수집한다. 고체 생성물을 물에 가하고 NaHCO₃를 사용하여 염기화시키고 60℃로 가열한다. 담황색 생성물인 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-디포르밀-2,2′-디피로메탄을 용액으로부터 결정화하고 여과하고 수세한다.

이 생성물을 에탄올에 용해시키고 아르곤으로 기포화시킨다;

염화수소히드록실아민과 아세트산나트륨을 가한다. 이 혼합물을 아르곤하에서 가열하고 용매를 제거하여 생성물을 시험관내에서 하룻밤 건조시킨다.

결과된 비스옥심을 아세트산 무수물에 용해시키고 아르곤으로 포화시켜 미정제 비스니트릴 생성물을 발생시키는데 이것은 아세트산 무수물의 제거후 흑색고체로 얻고 진공하에서 건조시킨다. 반응도 5의 말단 생성물로 나타낸 생성물을 CH₂Cl₂중의 0.5% 메탄올로 실리카겔컬럼, 이어서 10-20% EtOAc로 알루미나컬럼에 의해 정제한다. 용매의 증발로 연분홍색 결정으로 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄을 얻는다.

상기에서 얻은 생성물은 반응도 2에 예시된 바와 같은 원하는 대응 포르포시아닌으로 전환될 수 있다. 무수 THF 중의 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄을 0℃에서 질소하에 LiAlH₄의 THF 현탁액에 가한다. 혼합물을 교반시키고 물을 가하여 반응물을 켄칭시키고 침전을 여과제거한다. 금색용액을 Pb(SCN)₂및 무수황산나트륨의 등몰 일부를 함유하는 2구 플라스크로 옮긴다.

무수메탄올을 가하고 혼합물을 환류시킨다. 색이 점차 자주색에서 암녹색으로 변한다. 반응을 중지시키고 공기를 용액을 통하여 서서히 기포화시킨다.

미정제 생성물을 염화메틸렌에 용해시키고 고체를 여과제거한다.

녹색용액의 부피를 약 5ml로 감소시킨 다음에 알루미나컬럼에 충전하고 CH₂Cl₂중의 에틸아세테이트로 용리시킨다. 포르포시아닌을 함유하는 담녹색 용출액을 수집하고 증발건조시킨다.

반응도 3이 원하는 포르포시아닌을 얻기 위해 후속된다면, 테트라에틸-치환된 디피로 메탄을 다시 사용하여 이 반응순서의 시행을 실시예로 들 수 있고 다음과 같다:

무수 THF중의 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄을 0℃에서 질소하에 LiAlH₄의 THF 현탁액에 가한다. 혼합물을 교반시키고 물을 가하여 반응물을 켄칭시키고 침전을 여과제거한다. 0℃에서 질소하에 THF/CH₂Cl₂현탁액중의 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)의 10배의 과잉량을 무수 THF/CH₂Cl₂중의 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-비스아미노메틸-2,2′-디피로메탄에 가한다.

용액은 즉시 암녹색으로 변한다. 미정제 생성물을 염화메틸렌에 용해시키고 고체를 여과제거한다. 녹색용액의 부피를 약 5ml로 감소시킨 다음에 알루미나 컬럼에서 충전시키고 CH₂Cl₂중의 에틸아세테이트로 용리한다. 포르포시아닌을 함유하는 담녹색 용출액을 수집하여 증발건조시킨다. 공기산화를 통해 얻은 수율과 비교하여 이 합성방법에서 수율의 유의한 증가가 얻어진다.

비스알데히드 및 비스니트릴에서 생성물을 제조하기 위해, 예를들면 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄을 THF에 용해시키고 LiAlH₄의 THF 현탁액에 가한다.

결과혼합물을 교반시키고 물을 가한다. 고체 생성물을 형성하고 여과제거한다. 비스아민생성물을 용매의 증발후에 진공하에서 건조시킴으로써 얻는다. 비스아민을 무수메탄올에 용해시키고 비스알데히드를 가한다. 용액을 질소로 기포발생시키고 환류시킨다. 티오시안산 납(Pb(SCN)₂)을 가하고 용액을 환류시킨다. 산소가스를 실온에서 용액을 통하여 기포발생시킨다. 용매의 증발후에, 미정제 포르포시아닌 생성물을 진공하에서 건조시킨다.

생성물을 CH₂Cl₂중의 에틸아세테이트로 Al₂O₃컬럼에 의해 정제시킨다.

녹색 용출액을 수집하고 농축한다. 포르포시아닌 생성물의 결정을 용매의 증발후에 얻는다.

또 다른 대안의 시행인 반응도 4를 다음과 같이 예시한다.

예시 디알데히드(6) 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-디포르밀-2,2′-디피로메탄을 건조한 EtOH에 현탁시킨다. 결과된 에탄올 용액을 0℃에서 냉각하고 암모니아 가스를 그것을 통하여 기포발생시킨다. 다음에 플라스크를 72시간동안 60℃에서 오일욕에 놓는다. 반응을 중지시키고 0℃에서 냉각시킨다.

에탄올을 회전식 증발기상에서 제거하고 잔류물을 디클로로메탄으로 중성 알루미나에서 크로마토그래피 한다. 이렇게 매우 단순화시킨 합성 방법은 고수율의 포르포시아닌을 제조한다.

본 발명의 CNC-확장된 포르피린의 대안 구체예를 제조하기 위해, 포르포시아닌 화합물 자체가 되는 반응도의 적당한 변형이 이 분야에서 일반적으로 이해된 바와 같이 사용된다. 예를들면, 식(1b)의 CNC-확장된 포르피린을 얻기 위해 반응도 2 또는 3에서 시작하는 축합반응이 2,5-디시아노피롤을 출발물질로 사용하여 쓰인다.

식(1c)의 구체예를 얻기 위해서, 디알데히드와 디아미노메틸 유도체의 축합이 바람직하게 사용된다. 디피롤메탄의 디알데히드와 디아미노메틸화된 피롤일 피롤이 반응하여 원하는 생성물을 형성한다. 식(1d), 및(1e)의 화합물의 제조를 위해서, CNC 결합이 관련 테트라피롤 출발물질에서 상기한 바와 같이 형성된다.

그러한 변형은 보통의 실행자들에 의해 잘 이해될 것이고 이들 대안을 합성하기 위해 종래의 방법이 사용될 수 있다.

[투여 및 방법]

본 발명 화합물 또는 그것의 콘쥬게이트는 일반적으로 이 분야에서 알려진 기술을 사용하여 피험자에게 투여를 위한 약학적 조성물로 제조된다. 그러한 약학적 조성물의 개요는 예를 들면 Remington′s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, latest edition)에서 찾을 수 있다.

본 발명 화합물 및 그것의 콘쥬게이트는 어떤 증상에 대해 전신에 투여되는데 주사에 의한 것이 바람직하다. 주사는 정맥내, 피하, 근육내, 또는 심지어 복막내로 할 수 있다. 주사는 액체용액 또는 현탁액, 주사하기 전에 액체에 용해 또는 현탁하는데 적당한 고체형태, 또는 에멀션으로서 종래의 형태로 제조될 수 있다.

적당한 부형제는 예를들면, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 등이다.

물론, 이들 조성물은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제 등과 같은 소량의 비독성 보조물질을 함유할 수도 있다.

또한 전신투여는 좌약에 의하여, 또는 적당하게 조제된다면, 경구적으로 저속방출 또는 지속방출시스템의 이식물을 통하여 실행될 수 있다. 투여의 이들 방식에 대한 조제는 이 분야에 널리 알려졌으며 그러한 방법의 개요는 예를들면, Remington’s Pharmaceutical Sciences(상기 참조)에서 찾을 수 있다.

표재성 종양 또는 피부질병의 치료와 같이 치료가 국소화될 것이라면 화합물이 로션, 현탁액, 페이스트 또는 크림을 수반하는 표준국소조성물을 사용하여 국소적으로 투여될 수 있다.

투여될 화합물의 양은 활성성분의 선택, 치료될 상태, 투여방식, 환자개인 및 의사의 판단에 따른다.

제제의 특이성에 따라서 적거나 또는 많은 투여량이 필요할 수 있다.

약 0.05-10mg/kg 범위의 투여량이 전신투여에 제안된다. 활성성분의 농도가 약 0.01-20%, 바람직하게는 1-5%의 범위의 투여량이 국소투여에 제안된다.

약 10-300mg범위의 전체 1일 투여량이 경구투여에 제안된다. 상기 범위는 단지 제안적인데, 개별적인 치료양생법에 관련하여 변수가 많고 이들 추천된 값에서 상당한 편차가 예상되기 때문이다.

본 발명의 방사선영상(신티그래프 영상)법은 포르포시아닌 방사선영상화제의 효과량으로 각각 비경구적으로 주사함으로써 실행된다. 비경구적이란 예를들면, 정맥내, 동맥내, 막내, 조직세포내 또는 공동내를 의미한다. 개체는 방사선영상화제의 약 1mCi 내지 50mCi의 투여량을 수용할 것이라고 기대되며 그 양은 특정방사성 동위원소와 투여방식의 함수이다. 정맥내 주사를 위한 양은 보통: Tc-99m 약 10-40mCi, 바람직하게는 약 20mCi ; In-111 또는 Ga-67 약 2-5mCi, 바람직하게는 4mCi이다.

방사선영상화제는 약제를 병든 조직 또는 세포에 표적화하기 위해 사람용의 주사제제, 바람직하게는 멸균주사제제로 제공되며, 바람직하게는 생리학적 pH 및 농도에서 약학적으로 허용가능한 멸균주사부형제, 바람직하게는 포스페이트 완충식염수(PBS)내에 방사표지된 약제의 효과량을 함유하는 멸균주사용액으로 이루어진다.

다른 약학적으로 허용가능한 부형제는 비경구투여 부위에 필요한 대로 사용될 수 있다.

본 발명에 따라 비경구적으로 투여될 대표적 제제는 보통 멸균용액에 약 0.1 내지 20mg, 바람직하게는 약 2mg의 방사표지된 약제를 함유할 것이다.

일단 충분한 동위원소가 표적 부위에 축적되면, 종래의 평면 및/또는 SPECT 감마 카메라로 스캐닝을 실행하거나 손을 사용하여 외부로 또는 내부로 사용된 감마 프로브를 유지하여 염증 또는 병소를 국소화시킨다. 신티그램은 보통 50-500KeV 범위의 에너지 검출을 위한 하나 이상의 윈도우를 갖춘 감마 영상 카메라에 의해 촬영된다.

자기공명영상(MRI)을 위한 콘트라스트제의 투여는 본 발명의 화합물이 상자성 이온을 사용하는 금속화 형태일 것을 제외하고는 방사선영상을 위한 투여와 유사한 방법으로 실행된다. 보통 발생된 신호는 영상화될 영역에서 물분자중의 수소원자핵의 양성자의 자기 모멘트의 이완시간과 상호관련있다.

자기공명영상 콘트라스트제는 이완속도를 증가시키는 역할을 하며 그것에 의해 영상화제가 부착되는 영역중의 물분자 및 체내 다른 곳의 물분자 사이의 콘트라스트를 증가시킨다. 그러나, 약제의 효과는 T₁과 T₂를 증가시키는 것이며, 전자는 더 큰 콘트라스트를 가져오는 반면에 후자는 더 적은 콘트라스트를 가져온다.

따라서, 그 현상은 농도의존성이고, 보통 최대효율을 위한 상자성 종의 최적농도이다.

최적농도는 사용된 특정약제, 영상의 위치, 영상의 방식, 즉 스핀-에코, 포화-회복, 반전-회복 및 다양한 다른 강한 T₁의존성 또는 T₂의존성 영상기술, 및 약제가 용해되거나 현탁되는 매질의 조성에 따라 변할 것이다. 이들 인자, 및 그 상대적 중요성은 이 분야에 공지이다. 예를 들면, Pykett, Scientific American(1982) 246 : 78, 및 Runge et al., Am J Radiol (1987) 141 : 1209 참조.

본 발명의 MRI법은 가돌리늄 같은 금속원소를 포함하는 본 발명의 MRI 콘트라스트제의 효과량으로 각각 비경구적으로 주사함으로써 실행된다. 개체는 표적부위에서 적어도 약 20%, 바람직하게는 50-500%로 MRI 신호를 증강시키는데 충분한 콘트라스트제의 투여량을 수용할 것으로 기대되며, 그양은 특정 상자성 종과 투여방식의 함수이다.

본 발명내의 콘트라스트제는 MRI제를 병든 조직 또는 세포에 표적화하기 위해 사용주사제제, 바람직하게는 사람용의 멸균주사제제로 용이하게 제공되고, 바람직하게는 약학적으로 허용가능한 멸균주사부형제, 바람직하게는 포스페이트 완충식염수의 효과량의 콘트라스트제를 함유하는 멸균주사용액으로 이루어진다. 비경구투여를 위한 다른 약학적으로 허용가능한 부형제는 비경구투여의 부위에 필요한 대로 사용될 수 있다.

본 발명에 따라서 비경구적으로 투여될 대표적인 제제는 보통 멸균용액에 약 0.1 내지 20mg, 바람직하게는 약 2mg의 콘트라스트제를 함유할 것이다.

[실시예]

다음의 실시예는 본 발명을 예시하나 그 범위를 제한하지는 않는다.

[실시예 1]

[반응도 5의 옥타에틸포르포시아닌의 합성에 이은 환원 및 이민형성]

이 실시예는 비스알데히드 및 비스니트릴 디피롤 중간체 둘다를 제조하기 위한 반응도 5의 시행을 기술한다. 또한 비스알데히드와 비스니트릴의 축합으로 식(1a)의 CNC 결합을 얻는 것을 예시한다.

테트라아세트산 납(18.2g, 0.041mole)을 빙초산 60ml중의 2-벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸-5-메틸피롤(10.1g, 0.037mole)의 교반된 용액에 가하였다. 혼합물을 재빨리 60℃로 가온하였다. 에틸렌글리콜 10ml를 가하여 어떤 잔류 Pb(IV)를 감소 환원시켰다. 물 20ml를 가하고 5 - 아세톡시메틸 - 2 - 벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸피롤(8)을 여과에 의해 수집하고 추가의 물로 세척하였다.

5-아세톡시메틸-2-벤질옥시카르보닐-3,4-디에틸피롤을 물 100ml 중의 80%아세트산에 가하고 1시간 동안 100℃에서 가열하였다. 전술한 용액을 실온으로 냉각시키면 고체 생성물이 상당한 양으로 침전되었다. 물 100ml를 가하여 생성물을 여과에 의해 수집한 다음에 추가의 물로 세척하였다. 여액을 CH₂Cl₂로 추출한 다음에 증발시켜 고체 생성물을 얻었다. 고체 생성물을 조합한 다음에 CH₂Cl₂및 헥산의 용액에서 재결정화하여 5,5′- 비스(벤질옥시카르보닐) - 3,3′,4,4′- 테트라에틸 - 2,2′- 디피로메탄(7)을 얻었다.

수율: 6.6g, 67.4%

C₃₃H₃₈O₄N₂에 대한 분자량 이론치 : 526.2831

고해상도MS : 526.2835

CDCl₃중의¹H NMR : 1.05(t, 6H), 1.12(1, 6H), 2 43(q, 4H), 2.75(q, 4H), 3.85(s, 2H), 5.25(s, 4H), 7.28-7.40(m, 10H), 8.70(br s, 2H).

테트라히드로푸란(THF) 200ml중의 상기 생성물(8.1g, 0.015mole)을 대기압 및 실온하에서 10% Pd/C 0.4g 및 트리에틸아민 5방울의 존재에서 하룻밤 교반시켰다.

촉매를 셀리트(celite)로 여과시킨 후에, 여액을 회전식 증발기(roto-vap)에서 증발건조시켜 디카르복실산을 얻었다. 디카르복실산을 N,N-디메틸포름아미드 100ml에 용해시키고 1시간 30분동안 아르곤 하에서 비등가열하였다. 다음에 용액을 얼음에서 차갑게 식히고 과잉의 차가운 염화벤조일(7.2ml)을 적가하고 반응 혼합물을 5℃에서 2시간동안 교반시키고 고체 생성물을 여과로 수집하였다. 고체 생성물을 물 50ml에 가하고 NaHCO₃를 사용하여 염기화시켰다. 용액을 가열하고 1시간동안 60℃에서 유지시켰다. 용액으로부터 결정화한 담황색 생성물을 여과한 다음에 물로 세척하여 3,3′-4,4′-테트라에틸-5,5′-디포르밀-2,2′-디피로메탄(6)을 얻었다.

수율 : 3.4g, 70.0%

C₁₉H₂₆N₂O₂에 대한 분자량 이론치 : 314.1994

고해상도 MS : 314.1994

CDCl₃중의¹H NMR : 1.10(t, 6H), 1.25(t, 6H), 2.50(q, 4H), 2.70(q, 4H), 4.00(s, 2H), 9.55(s, 2H), 10.90(s, 2H).

에탄올 300ml중의 이 생성물(1.03g, 0.0033mole)을 20분동안 아르곤으로 기포발생시켰다. 염화수소 히드록실아민(0.51g, 0.0073mole) 및 아세트산나트륨(1.20g, 0.015mole)을 가하였다. 이 혼합물을 2시간 30분동안 아르곤하에서 60℃에서 가열하였다. 용매를 회전식 증발기에서 제거하고 생성물을 시험관내에서 하룻밤 건조시켰다. 비스옥심을 무수아세트산 5ml에 용해시키고 30분동안 아르곤으로 포화시켰다.

미정제 비스니트릴 생성물(2)을 무수아세트산의 제거 및 진공하에서 하룻밤 건조시킨후에 흑색고체를 얻었다. 생성물을 CH₂Cl₂중의 0.5% 메탄올로 실리카겔컬럼(40g), 이어서 10-20% EtOAc로 알루미나컬럼(40g)으로 정제시켰다.

용매의 증발로 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄(2)의 연분홍색 결정을 얻었다.

수율 : 0.43g, 42%

C₁₉H₂₄N₄에 대한 분자량 이론치 : 308.2001

고해상도 MS : 308.2002

CDCl₃중의¹H NMR : 1.10(t, 6H), 1.25(t, 6H), 2.45(q, 4H), 2.60(q, 4H), 3.90(s, 2H), 8.45(s, 2H).

이 생성물(2)(0.053g, 1.7×10^-4mole)을 무수 THF 10ml에 용해시키고 0℃에서 N₂하 LiAlH₄의 THF 현탁액(0.050g, 1.5×10^-3mole)에 적가하였다.

결과 혼합물을 30분동안 교반시키고 물 2방물을 첨가하였다. 고체 생성물을 형성시켜 여과제거하였다. 비스아민생성물은 진공하에서 하룻밤 건조시킴으로써 용매의 증발후에 얻었다. 비스아민(3)을 무수메탄올 50ml에 용해시키고 비스알데히드(6)(0.050g, 1.6×10^-4)를 가하였다. 용매를 20분동안 N₂로 기포발생시키고 N₂하에서 환류시켰다. 티오시안산 납(Pb(SCN)₂))(0.055g, 1.7×10^-4mole)을 가하여 용매를 4시간동안 환류시켰다. 산소가스를 하룻밤 실온에서 용매를 통하여 기포발생시켰다. 용매의 증발후에, 미정제 포르포시아닌 생성물을 하룻밤 진공하에 건조시켰다. 생성물을 CH₂Cl₂중의 10% 아세트산 에틸로 Al₂O₃컬럼(4%물 첨가)에 의해 정제시켰다. 녹색 용출액을 수집하여 회전식 증발기에서 농축시켰다. 2,3,9,10,14,15,21,22-옥타에틸 포르포시아닌(1)의 결정을 용매의 증발후에 얻었다.

수율 : 19.3mg, 19.1% 거대고리

C₃₈H₄₈N₆에 대한 분자량 이론치 : 588.3941

고해상도MS : 588.3933

¹H NMR(300 MHz, CDCl₃), -4.50(bs, 2H), 2.05(t, 12H), 2.13(t, 12H), 4.28(q, 8H), 4.40(q, 8H), 10.50(s, 2H), 13.0(s, 4H).

CH₂Cl₂중의 UV/VIS 455, 592, 800nm

[실시예 2]

[옥타에틸 포르포시아닌의 합성(반응도 2)]

이 실시예는 반응도 2에 나타낸 축합방법을 사용하여 식(1a)의 포르포시아닌의 형성을 예시한다.

3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄을 실시예 1의 방법론에 따라 제조하였다.

무수 THF 10ml중의 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄 0.102g, 3.3×10^-4mole을 0℃에서 N₂하 LiAlH₄의 THF 현탁액 20ml에 서서히 가하였다.

혼합물을 30분동안 교반시키고 물 2방울을 가하여 반응물을 켄칭시켰다.

침전을 여과하였다. 금색으로 착색된 용액을 Pb(SCN)₂및 무수황산나트륨의 등몰 일부를 함유하는 2구 플라스크에 옮겼다. 무수 메탄올 15ml를 가하고 혼합물을 환류시켰다. 용액의 색이 점점 자주색에서 암녹색으로 변하였다.

반응을 4시간 30분후에 중지시키고 공기를 용매를 통하여 하룻밤 서서히 기포발생시켰다.

미정제 생성물을 염화메틸렌에 용해시키고 고체를 여과하였다. 녹색용액의 부피를 약 5ml로 감소시킨 다음에 알루미나 컬럼(120g, 4%물 첨가)에서 충전시키고 CH₂Cl₂중의 10% 에틸아세테이트로 용리시켰다. 포르포시아닌을 함유하는 담녹색 용출액 2L를 수집하여 증발건조시켰다.

수율 : 23.4mg, 24.1%

이 화합물의 분광 데이터는 상기 실시예 1에서 제조된 화합물과 동일하다.

[실시예 3]

[옥타에틸 포르포시아닌의 합성(반응도 3)]

이 실시예는 반응도 3을 예시한다. 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄(2)을 실시예 1의 방법에 따라 제조하였다. 10배 과잉의2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(DDQ)을 무수 THF 10ml중의 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-시아노디피로메탄 69mg에 첨가하였다. 결과용액은 금방 암녹색으로 변하였다. 잔류물을 실시예 2의 방법에 따라 크로마토그래피하였다.

공기중 산화와 비교했을때 수율의 유의한 증가가 얻어졌다.

수율 : 32mg, 48%

[실시예 4]

[포르포시아닌의 합성(반응도 4)]

이 실시예는 반응도 4를 예시한다. 디알데히드를 실시예 1의 방법에 따라 제조하였다. 3,3′,4,4′-테트라에틸-5,5′-디포르밀-2,2′-디피로메탄(6) 25mg을 건조한 EtOH 30ml에서 현탁하였다. 결과된 에탄올 용액을 0℃에서 차갑게 식히고 암모니아 가스를 30분동안 용액을 통하여 기포발생시켰다. 다음에 가스 입구를 제거하고 플라스크를 72시간 동안 60℃에서 오일욕에 놓았다.

반응을 중지시키고 0℃에서 냉각시켰다. 에탄올을 회전식 증발기에서 제거하고 잔류물을 디클로로메탄으로 중성 알루미나(4% H₂O 첨가)에서 크로마토그래피를 하였다.

수율 : 4.6mg, 20%

생성물의 다른 1.5mg을 DDQ에 의해 보다 극성인 성분의 산화에서 얻었다.

[실시예 5]

[2,2′-비스 시아노 메소 아릴디피로메탄의 합성]

이 실시예는 반응도 6을 예시한다.

일반방법: 250ml 둥근 바닥플라스크를 메탄올(115ml), 피롤(10ml; 105mmol) 및 p-톨루엔술폰산(2.15g; 11.5mmol)으로 충전시킨다. 이 교반된 용액에 메탄올(30ml)중의 방향족 알데히드의 용액(11.25mmol)을 100분에 걸쳐 첨가시킨다. 이 시간후에 반응물을 물(350ml)에 붓고 디클로로메탄(3×150ml)으로 추출한다. 유기상을 염수(3×200ml)로 세척하고 무수탄산칼륨상에서 건조시킨다. 시험관내에서 용매의 증발에 이어 잔류물의 섬광 크로마토그래피(실리카겔: 100g)를 하여 아릴디피로메탄을 얻는다.

메소아릴디피로메탄(0.32mmol)을 N,N-디메틸포름아미드(5ml)에 용해시킨 다음에 이 용액을 아세토니트릴(5ml)로 희석하고 교반 혼합물을 -75℃로 냉각시킨다. 냉각된 혼합물에, N₂의 분위기하에서 아세토니트릴(3ml)중의 클로로술포닐 이소시아네이트의 용액(1.42mmol)을 적가한다. 혼합물을 1시간동안 -78℃에서 교반시킨 다음에 추가의 1시간동안 더 -40℃에서 교반시키고 나서 실온으로 상승시킨다. 반응 혼합물을 5% 수성 탄산수소나트륨(15ml), 수성 수산화칼륨(3M; 2.7ml) 및 얼음의 혼합물에 부은 다음 염수(200ml)로 희석시키고 디클로로메탄(3×50ml)으로 추출한다.

유기상을 무수 탄산칼륨상에서 건조시키고, 용매를 시험관내에서 증발시키고 잔류물을 실리카겔에서 크로마토그래피를 하여 2,2′-비스시아노 메소 아릴디피로메탄을 얻는다.

[실시예 6]

[대칭인 포르포시아닌을 제조하기 위한 2,2′-비스 시아노 메소 아릴디피로메탄의 축합]

이 실시예는 적어도 한 R_ic가 아릴인 반응도 3의 방법을 예시한다.

일반방법: 테트라히드로푸란(5ml)중의 2,2′-비스시아노 메소 아릴디피로메탄(0.124mmol)의 용액을 0℃에서 N₂의 분위기하에서 테트라히드로푸란(10ml)중의 수소화알루미늄리튬(1.3mmol)의 교반 현탁액에 가한다. 환원에 이어서 완결할 때까지 디클로로메탄중의 10%에틸아세테이트로 용리하는 박층 크로마토그래피를 한 다음에 과잉의 LiAlH₄를 물로 켄칭시키고 디클로로메탄(15ml)을 가하고 혼합물을 여과시킨다.

여액을 무수 황산나트륨상에서 건조시키고 용매는 시험관내에서 증발시킨다. 잔류물을 건조 디클로로메탄(100ml)에 재용해시키고 교반용액에 톨루엔(5ml)중의 디클로로디시아노벤조퀴논(5당량)의 용액을 적가한다. 산화에 이어서 UV-제품 분광법을 하고 더 이상의 포르포시아닌 형성이 검출되지 않을 때 반응 혼합물을 중성알루미나의 플러그를 통하여 여과시켜서 과잉의 DDQ를 제거하고 용매는 시험관내에서 증발시킨다. 미정제 디페닐포르포시아닌을 알루미나에서 크로마토그래피로 정제시킨다.

[실시예 7]

[실시예 5 및 6의 방법의 적용]

다양한 포르포시아닌을 기술하는 하기의 실시예에서, 다음의 번호를 매긴 시스템이 사용될 것이다:

실시예 5 및 6의 방법을 사용하여, 다음을 제조하였다.

1. 12,24-디페닐포르포시아닌: 벤즈알데히드 1g으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄 중의 10%헥산)후에 메소 페닐디피로메탄 732mg(35%)을 얻는다.

메소 페닐디피로메탄 500mg으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄중의 5% 아세토니트릴)후에 2,2′-비스 시아노 메소 페닐디피로메탄 195mg(32%)을 얻는다.

2,2′-비스 시아노 메소 페닐 디피로메탄 100mg으로 크로마토그래피(60-325mesh 중성알루미나; 디클로로메탄중의 10%에틸아세테이트)후에 1,11-디페닐 포르포시아닌 28mg(29%)을 얻는다.

분광 데이터 :¹H NMR(CDCl₃) δ7.92(m, 6H), 8.44(m, 4H), 9.38(d, j=5.7Hz, 4H), 9.8(d, J=5.7Hz, 4H), 12.95(s, 4H) ; UV-vis : CH₂Cl₂에서 λ452, 598, 640, 814nm; C₃₄H₂₄N₆(M⁺)에 대한 HRMS(EI) 이론치. 516.2062, 실측치 516.2058.

2. 12,24-디(3′,4′,5′-트리메톡시페닐) 포르포시아닌: 3,4,5-트리메톡시벤즈알데히드 2.21g으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄중의 3%아세톤)후에 메소(3,4,5-트리메톡시페닐)디피로메탄 1.147g(33%)을 얻는다. 메소(3,4,5-트리메톡시페닐)디피로메탄 1g으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄중의 10% 에틸아세테이트)후에 w,w′-비스 시아노 메소(3,4,5-트리메톡시페닐)디피로메탄 460mg(40%)을 얻는다.

2,2′-비스 시아노 메소(3,4,5-트리메톡시페닐)디피로메탄 100mg으로 크로마토그래피(60-325mesh 중성알루미나; 에틸아세테이트/비클로로메탄(1:1))후에 1,11-디(3′,4′,5′-트리메톡시페닐)포르포시아닌 31mg(32%)을 얻는다.

분광 데이터 :¹H NMR(CDCl₃) δ4.1(s, 12H), 4.25(s, 6H), 7.61(s, 4H) 9.44(d, J=4.8Hz, 4H) 9.8(d, J=4.8Hz, 4H), 12.95(s, 4H) ; UV-vis: CH₂Cl₂에서 λ460, 602, 644, 818nm; C₄₀H₃₆N₆O₆(M⁺)에 대한 HRMS(EI) 이론치. 696.2696, 실측치 696.2690.

3. 12,24-디(펜타플루오로페닐)포르포시아닌:

펜타플루오로벤즈알데히드 2.22g으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄중의 25%헥산)후에 메소(펜타플루오로페닐)디피로메탄 1.48g(42%)을 얻는다.

메소(펜타플루오로페닐)디피로메탄 200mg으로 크로마토그래피(실리카겔; 디클로로메탄중의 5%에틸아세테이트)후에 2,2′-비스 시아노 메소(펜타플루오로페닐)디피로메탄 89mg(38%)을 얻는다. 2,2′-비스 시아노 메소(펜타플루오로페닐)디피로메탄 89mg으로 크로마토그래피(60-325mesh 중성알루미나; 디클로로메탄중의 5% 아세톤)후에 1,11-디(펜타플루오로페닐)포르포시아닌 23mg(28%)을 얻는다.

분광 데이터 :¹H NMR((D₃C)₂CO) δ9.55(dd, J₁=15.22Hz, J₂=4.15Hz, 4H), 10.1(d, J=4.15Hz, 4H), 13.24(s, 4H);¹⁹F NMR((D₃C)₂CO) 60.53, 60.92, 61.45 참고 F₃CCOOH; UV-vis: 아세톤에서 442, 582, 624, 814nm; C₃₄H₁₄N₆F₁₀에 대한 (M⁺) HRMS(EI) 이론치. 696.1120, 실측치 696.1124.

[실시예 8]

[비대칭인 포르포시아닌을 얻기 위한 축합]

이 실시예는 반응도 3의 방법을 사용한다.

일반방법: 2개가 다르게 치환된 2,2′-비스 시아노 디피로메탄(0.1mmol)을 건조 테트라히드로푸란(5ml)에 용해시키고 2개의 용액을 혼합한다. 혼합용액을 0℃에서 N₂의 분위기하 건조 THF(10ml)중의 LiAlH₄의 현탁액에 적가한다. 환원에 이어서 TLC를 하고 완결할 때 과잉의 LiAlH₄를 물로 켄칭시키고 디클로로메탄(5ml)을 가한다.

결과 슬러리를 중력여과시키고 여액을 무수 황산나트륨상에서 건조시킨다. 시험관내에서 용매의 증발에 이어서 디클로로메탄(20ml)에 재용해시켜 금색 용액을 얻었다.

이 용액에 톨루엔(5ml)중의 DDQ(5당량)의 용액을 적가한다. 산화에 이어 UV-vis 분광법을 하여 더 이상의 포르포시아닌 형성이 보이지 않을 때 반응혼합물을 중성알루미나의 플러그를 통하여 여과시킨다. 여액으로부터 용매의 증발로 미정제 혼합물의 포르포시아닌을 얻고 이것을 크로마토그래피로 분석한다.

[실시예 9]

[실시예 8의 방법의 적용]

실시예 8의 방법을 사용하여 다음을 제조하였다:

12-페닐-2,3,21,22-테트라에틸 포르포시아닌: 2,2′-비스 시아노 메소 페닐디피로메탄 51mg+2,2′-비스 시아노 3,3′,4,4′-테트라에틸 디피로메탄 58mg으로 미정제 혼합된 포르포시아닌 48mg을 얻는다. 크로마토그래피(C₁₈역상; 0.1% 트리플루오로아세트산/아세토니트릴중의 20%, 0.1%수성 트리플루오로아세트산)후에 표제 화합물 21.7mg(21%)을 분리한다.

분광 데이터 :¹H NMR(CDCl₃)¹H NMR(CDCl₃) 2.05(t, J=7.5Hz, 3H), 2.07(t, J=7.5Hz. 3H), 4.21(q, J=7.5Hz, 2H), 4.32(q, J=7.5Hz, 2H), 7.88(m, 3H), 8.41(m, 2H), 9.31(d, J=4.5Hz, 2H), 9.7(d, J=4.5HZ, 2H), 10.3(s, 1H), 12.72(s, 2H), 12.96(s, 2H) ; UV-vis : CH₂Cl₂에서 λ 456, 592, 632, 804nm; C₃₆H₃₆N₆(M⁺)에 대한 HRMS(EI) 이론치. 552.3001, 실측치 552,2996.

[실시예 10]

[12,24-디페닐 β-알킬 포르포시아닌]

반응도 5 및 반응도 2의 일부를 포함하는 이 일반방법은 비스 카르복시 디피로메탄으로 출발한다: 2,2′-비스 카르복시 3,3′,4,4′-테트라알킬 메소 페닐 디피로메탄(0.25mmol) 또는 2,2′-비스 카르복시 3,3′-디알킬 메소 페닐 디피로메탄(0.25mmol) N,N-디메틸포름 아미드(10ml)에 용해시키고 용액을 N₂의 흐름하에서 가열환류시키고 반응을 TLC로 모니터하고 탈카르복실화가 완결되면 혼합물을 아세토니트릴(10ml)로 희석시키고 -78℃로 냉각시킨다. 아세토니트릴(1ml)중의 클로로술포닐 이소시아네이트(2.9mmol)의 용액을 N₂의 분위기하에서 교반용액에 적가한다. 혼합물을 -78℃에서 1시간동안 교반시키고 그 다음 -40℃에서 추가로 1시간 더 교반시키고 난후에 실온으로 상승시킨다.

반응 혼합물을 5% 수성 탄산수소나트륨(20ml), 수성 수산화칼륨(4ml) 및 얼음의 혼합물에 붓고, 그 다음 염수(200ml)로 희석하고 디클로로메탄(3×50ml)으로 추출한다.

유기상을 염수(5×100ml)로 세척하고, 무수 탄산칼륨상에서 건조시키고 용매를 시험관내에서 증발시킨다. 잔류물의 크로마토그래피로 2,2′-비스 시아노 메소 페닐-3,3′, 4,4′-테트라알킬 디피로메탄 또는 2,2′-비스 시아노 메소 페닐-3,3′-디알킬 디피로메탄을 얻는다.

비스 시아노 화합물(0.11mmol)을 건조 THF(10ml)에 용해시키고 이 용액을 0℃에서 N₂의 분위기하 건조 THF(10ml)중의 LiAlH₄(1.3mmol)의 교반현탁액에 적가한다.

환원은 TLC로 모니터하고 완결되면 과잉의 LiAlH₄를 물로 켄칭시키고 디클로로메탄(15ml)을 가하여 최종 슬러리를 중력여과시킨다. 여액을 무수 황산나트륨상에서 건조시키고 용매를 시험관내에서 증발시킨다. 잔류물을 디클로로메탄(100ml)에 재용해시키고 교반용액에 톨루엔(5ml)중의 DDQ(5당량)의 용액을 적가한다.

산화에 이어 UV-vis 분광법을 하고, 더 이상의 포르포시아닌 형성이 관찰되지 않으면 반응 혼합물을 알루미나의 플러그를 통하여 여과시킨다.

여액을 시험관내에서 증발시키고 잔류물을 크로마토그래피를 하여 1,11-디페닐 β-옥타에틸 포르포시아닌 또는 1,11-디페닐 β-테트라알킬 포르포시아닌을 얻는다.

[실시예 11]

[실시예 10의 방법의 적용]

실시예 10의 방법을 사용하여 다음을 제조하였다:

12,24-디페닐-3,9,15,21-테트라에틸-2,10,14,22-테트라메틸 포르포시아닌: 2,2′-비스 카르복시 3,3′-디에틸-4,4′-디메틸 메소 페닐 디피로메탄 100mg으로 비스 시아노 3,3′-디에틸-4,4′-디메틸 메소 페닐 디피로메탄 40mg(44%)을 얻는다.

비스 시아노 3,3′-디에틸-4,4′-디메틸 메소 페닐 디피로메탄 40mg으로 크로마토그래피(60-325mesh 중성알루미나; 디클로로메탄중의 10% 에틸아세테이트)후에 표제화합물 90㎍(0.23%)을 얻는다.

분광 데이터: UV-vis: CH₂Cl₂에서 462, 604, 642, 802nm; HRMS(EI) C₄₆H₄₈N₆(M⁺) 이론치: 684.3940, 실측치: 684.3932.

[실시예 12]

[시험관내에서 포르포시아닌의 독성]

세포를 혈청이 없는 배지(DME)에서 3번 세척하고 계산하여 10⁷세포/ml의 농도로 만들었다.

“친화성”분석을 위하여, 암실에서, 세포현탁액 100㎕ 및 시험 또는 대조화합물 100㎕를 혼합한다. “표지화”를 4℃에서 1시간동안 계속하게 하고 표지화된 세포를 매번 3ml배지로 3번 암실에서 세척하고 새로운 배지에서 재현탁한다.

다음에 재현탁된 세포를 30분동안 300-850nm에서 광에 노출시킨다.

“직접”분석에서 세포를 시험 또는 대조 화합물의 첨가시 즉시 조사시킨다. 조사의 효과는 표적 세포에 적당한 방법을 사용하여 평가한다.

사람 적혈구(RBCs)를 시험세포로 사용할 때, 대조(헤마토 포르피린, Hp)-표지되고 포르포시아닌(식(1))-표지된 세포의 조사로 야기된 용혈현상은 시각적으로 평가된다.

쥐과의 비만세포종 세포주 P815를 사용할 때, 결과는 다음과 같이 결정된다:

세포를 대조구로 Hp 및 시험물질로 식(1a)의 포르포시아닌의 농도 10-50ng/ml를 사용하여 상기와 같이 표지화시킨다. 재현탁시킨 세포를 30분동안 300-850nm광으로 처리시키고 결과 생육성은 죽은 세포로부터 산 세포를 분화하기 위한 표준방법으로 에오신Y-배제를 사용하여 직접 계산함으로써 평가된다.

상기와 같이 시행된 다른 결정법에서, 광노출에서 회수된 세포를 티미딘 포함이 생육성과 같다는 표준 방법에 따라 10μCi/ml 3중수소-표지된 티미딘에서 18시간동안 배양시킴으로써 생육성에 대해 분석한다.

세포를 수집하고 방사능 흡수를 신틸레이션(scintillation)카운터로 측정한다.

[실시예 13]

[포르포시아닌의 선택결합]

p815세포를 1-200ng/ml Hp 또는 식(1a)의 포르포시아닌을 사용하는 실시예 12에 기술된 바와 같이 배양시킨다. 세포를 30분동안 암실에서 표지화하고, 비흡수 포르피린이 없도록 세척하고, 재현탁시키고, 그 다음 추가의 30분동안 300-850nm 광에 노출시킨다. 세포의 생육성은 30μCi/ml 3중수소화된 티미딘으로 표지화하고 18시간동안 37℃에서 배양한 후에 3중 수소화된 티미딘 포함으로 확립된다.

[실시예 14]

[면역콘쥬게이트의 제조]

이 실시예는 헤마토포르피린(Hp)또는 식(1a)의 포르포시아닌(Pc)중 하나로 제조한 4개의 다른 항체의 면역콘쥬게이트를 제조하는 방법을 기술한다.

사용된 항체는 모두 상기 본문에서 기술된 바와같이 제조된 CAMAL-1, 항-M1항체, 및 B16G항체이며, 친화성 정제된 래비트 항-마우스 Ig(RαMIg)이다.

게다가, 정제된 부적절한 단클론성 제제(C-MAb)는 대조구가 필요한 경우에 사용된다.

콘쥬게이트 제조는 뮤(Mew et al., Immunol(1983) 130: 1473)에 의해 기술된 대로 기본적으로 수행된다. 간단하게, 물 25ml중의 Hp. 0.2HCl 220mg(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) 및 N,N-디메틸포름아미드 0.8ml에 물 0.6ml중의 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 HCl(EDCl) 20mg을 가한다.

30분 후에, 이 용액을 희석시킨 물 5ml에 용해시킨 항체 단백질 15mg과 혼합하고 5시간동안 배양한다.

이 시간동안 용액의 pH를 모니터하고 6 및 7사이로 조정한다. 다음에 모노에탄올 아민 50㎕을 가하고, 용액을 실온에서 하룻밤 방치시킨다. 용액을 4일동안 매일 3번 바뀌는 0.001M 포스페이트 완충액 pH 7.4에 대해서 투석시키고 PBS에 대해서 하룻밤 투석시킨다. 포르포시아닌의 콘쥬게이트는 유사하게 제조된다.

바람직한 프로토콜에서, Hp 또는 Pc 각각의 5mg을 함유하는 DMSO중의 분산액 2ml 및 탈수제를 제조하고 질소하에서 실온에서 30분동안 교반시킨다.

여기에 DMSO 2ml중의 적당한 면역 글로불린 2mg을 함유하는 분산액을 가하여 결과혼합물을 추가의 10분동안 교반시킨다. 다음에, 이 혼합물을 모노에탄올아민 50㎕을 함유하는 PBS의 5배 부피를 가함으로써 포스페이트-완충된 식염수, pH 7.4(PBS)에 희석하여 수행시키고 난 후 3번 변하는 세척을 사용하여 PBS에 대해서 투석시킨다.

대안으로, 각각의 Hp 또는 Pc 5mg, 결합제, 및 탈수제를 함유하는 분산액 2ml을 제조하여 질소하 실온에서 약 15분동안 교반시킨다.

여기에 테트라히드로푸란 2ml중의 면역특이적 단백질 약 2mg을 함유하는 분산액을 가하고 결과 혼합물을 추가의 10분동안 교반시킨다. 다음에 혼합물을 상기한 바와 같이 수행시킨다.

전술한 방법은 상기 목록의 CAMAL-1 및 잔류항체 제조에 적당하다.

게다가, 다음의 제조는 특히 B16G 및 RαMIg로 만든다:

[B16G]

스펙트럼등급 DMSO 4ml중의 헤마토포르피린 11mg+EDCl 11mg을 실온에서 질소하 30분동안 교반시키고 DMSO 2ml중의 Maier et al., J Immunol(1983) 131: 1843에 의해 기술된 대로 제조된 동결건조된 B16G항체 20mg을 첨가한다.

결과 혼합물을 실온에서 40초동안 교반시키고 상기한 바와같이 수행한다.

결과 생성물은 약 375㎍ Hp/mg B16G를 함유한다. 유사방법이 Hp를 Pc로 대체하여 사용된다.

[RαMIg]

DMSO 1ml중의 EDCl 400㎍ 및 헤마토포르피린 400㎍을 상기와 같은 실온에서 질소하에 30분동안 교반시킨 후에 DMSO 1ml중의 Mew et al. J Immunol(1983) 130: 1473)에 기술된 바와 같이 제조된 동결 건조 RαMIg항체 800㎍을 첨가한다.

결과 혼합물을 30초동안 교반시키고 상기한 대로 수행하여 200αgHp/mg RαMIg를 함유하는 생성물을 얻는다. 유사방법은 Hp를 Pc로 대체하여 사용된다.

[실시예 15]

[시험관내에서 면역 콘쥬게이트의 특이성]

TSM이 면역글로불린으로 이루어지는 TSM-Hp 및 TSM-Pc 콘쥬게이트를 적당한 대조구와 함께, 적당한 세포 유형과 콘쥬게이트를 혼합한 다음에 표지된 세포를 조사에 노출시킴으로써 시험관내에서 세포에 대해 시험한다. 이 분석을 시행하기 위한 방법은 CAMAL-1에 대해 Mew et al., Cancer Research(1985) 그리고 Anti-M1에 대해 Mew et al., J Immunol.(1983)에 상세히 기술되며, 상기 인용된 두 참조문헌은 참고로 본문에 포함된다.

간단하게, CAMAL-1을 위한 3개의 세포주, WC4, WC6 및 WC2(WC4와 WC6은 CAMAL 항원을 생산하지만, WC2는 생산하지 않는다)를 실시예 14에서 상기한 바와같은 적당한 TSM-Hp 또는 TSM-Pc제제로 표지화시킨다.

각각 10⁶세포를 함유하는 표지된 세포제제를 로즈챔버(Rose chamber)에 도입하고 630nm에서 레이저로 광활성에 노출시킨다. 그 다음 다양한 제제에 대한 결과를 수집한다.

항-M1 콘쥬게이트에 대해서, M1 종양세포를 표적세포로 사용하고 2시간동안 37℃에서 6% CO₂가습된 배양기에서 TSM-Hp, TSM-Pc콘쥬게이트 또는 약품 또는 단독항체 또는 항체 및 약품의 조합을 커플링하지 않은 채로 배양함으로써 처리한다.

세포를 PBS에서 3번 세척한 다음에 플레이팅하고 하룻밤 형광에 노출시킨다.

세포를 상기와 같이 3중 수소화 티미딘을 흡수시켜 생육성에 대해 평가한다.

B16G 콘쥬게이트에 대해서, A10, P815 및 L1210세포를 표적세포로 사용한다(A10세포는 Bl6G-반응 T-억제인자를 분비하는 T-세포 히브리도마이다; P815세포는 또한 B16G와 반응한다.) 세포내 연구를 B16G-Hp 또는 B16G-Pc 콘쥬게이트를 사용하는 직접법 또는 비표지된 B16G항체 및 표지된 RαMIg-Hp 또는 RαMIg-Pc를 사용하는 간접법을 사용하여 수행한다.

직접법에서, 5×10⁵세포를 Hp 또는 Pc농도 320, 160, 80, 40 및 20ng drug/ml에서 시험 또는 대조로서 적당한 TSM-약품 콘쥬게이트를 함유하는 DME/Hepes 1ml에 현탁시킨다. 세포를 1시간동안 37℃에서 암실에서 배양하고, 그 다음 DME/Hepes 5ml에 3번 세척하고, 그 다음 동일 완충액 1ml에 재현탁한다. 표지된 제제의 3개 100㎕ 시험일부를 편평한 바닥 마이크로타이터 웰에 분산시키고 세포 현탁액(700㎕)을 1시간 동안 20cm의 거리에서 백열광(22.5mW/cm²)에 노출시킨다. 다음에, 3번의 추가 100㎕정제수를 마이크로타이터 월에서 제거한다. 20% FCS 함유하는 DME/Hepes에 희석된 3중수소-표지된 티미딘을 2μCi를 각 웰에 가할 정도의 정제수 100㎕에서 모든 마이크로타이터 웰에 가한다. 배양액을 37℃에서 18시간동안 배양하고 10% CO₂를 가습한 다음에 MASH하비스터에서 수집한다. 티미딘 포함을 Hp신틸레이션 카운터(Tri-Carb Model 4550)로 측정한다.

간접분석에서, 상기한 대로 제조된 A10현탁세포를 30분동안 B16G 또는 대조항체 C-MAb중 하나 50㎍/ml에 노출시키고 DME/Hepes에서 세척한 다음에 2㎍/ml 및 15ng/ml의 Hp 또는 Pc사이에서 RαMIg-Hp 또는 RαMIg-Pc의 다양한 농도에 대해 암실에 4℃에서 추가의 30분동안 노출한다. 세포를 상기한 바와같은 표지된 티미딘 수행을 사용하여 생육성에 대해 평가한다.

[실시예 16]

[포르포시아닌 및 그 콘쥬게이트의 생체내 세포독성]

포르포시아닌(Pc) 및 그 콘쥬게이트의 생체 내 효능을 또한 평가한다.

CAMAL-1 및 항-M1 콘쥬게이트를 위해, 방법은 실시예 15에서 상기 참조한 2개의 Mew et al., 문헌에 기술된 바와 같다 B16G-Hp 및 B16G-Pc 콘쥬게이트를 위해서 그리고 Pc(식(1))만을 위한 생체내 연구가 다음과 같이 시행된다:

생체내 시험은 종양에서 T-억제 세포의 개체수의 간접효과에 의존하는데, 이것은 조사처리의 효과를 평가하는 것을 의미한다. 공통유전형의 DBA/2마이스에서 성장한 P815 비만세포종 세포는 종양에 대한 특이적인 T-억제 세포를 자극한다.

이들 T-억제세포는 종양의 회복에 도움이 되지 않는 특이적인 T-킬러 세포의 발달을 간섭한다. 상기 A10을 지정한 T세포 히브리도마는 이들 T-억제세포와 관련하여 T-억제 인자를 분비한다. 따라서, TSM은 세포의 표면에서 T-억제인자에 특이적인 항체인 콘쥬게이트와의 반응으로 이들 T-억제세포 개체 수의 선택적인 사멸은 P815 종양을 지닌 마우스에서 종양회복을 초래한다.

이 분석에서, DBA/2 마우스를 종양을 함유하는 10⁴P815세포가 있는 오른쪽 옆구리 피하에 주사한다. 8일째에, 종양이 뚜렷해질 때(약 25-42평방밀리미터), 마우스를 8마리 군들로 무작위로 분류하고, 아무것도 함유하지 않은 것, Hp 또는 Pc, B16G-Hp 또는 B15G-Pc, B16G 플러스 약품, B16G 단독 또는 C-MAb-Hp 또는 C-MAb-Pc를 함유하는 150㎕ PBS를 정맥내 주사한다. Hp의 레벨은 모든 경우에서 동물당 50㎍이고(적당한)모든 경우에서 B16G 310㎍이다.

동물을 2시간동안 암실에서 유지시키고 그 다음 300-850nm 및 22.5mW/cm²에서 강한 광에 노출시킨다. 다음에 동물을 정상 처리하고 1일 기준으로 모니터한다.

[실시예 17]

[진단 영상화]

32살의 여성환자가 발열 및 복통을 일으킨다. 환자를 1주일동안 항생제요법으로 유지시키고 효과는 없다. CAT 스캔은 어떤 비정상 덩어리를 입증하는데 실패한다. 방사 영상화 연구를 Tc-99m-표지된 포르포시아닌을 사용하여 수행한다.

방사능 표지된 포르포시아닌의 20mCi 주사를 사용하여 환자를 SPECT모드에서 감마카메라로 스캔한다. 환자 복부의 스캔은 Tc-99m의 축적된 병소를 증명한다.

외과수술을 수행하고 종기는 Tc-99-활성부분에서 발견된다.

Claims

다음식:

의 화합물 또는 그의 금속염 또는 금속 착체; 여기서 n은 1-4의 정수; 그리고 여기서 각각의 P_i는 독립적으로 다음식

(여기서 각 R_ia및 R_ib는 독립적으로 H, 할로, 니트로, 시아노, NR′₂,SR′, OR′, SOR′, SO₂R′, COOR′, CONR′₂이고, 여기서 각 R′은 독립적으로 H 또는 알킬 (1-6C)이며, 여기서 아미노, 술프히드릴 및 히드록실 치환기는 임의로 아실화된 (1-6C), 임의로 치환된 알킬 (1-6C), 임의로 치환된 알케닐 (1-6C), 임의로 치환된 알키닐 (1-6C), 임의로 치환된 아릴 (4-12C), 또는 임의로 치환된 아릴알킬 (5-18C)일 수 있음)의 피롤잔기이고, 여기서 각각의 Z_i는 독립적으로 공유결합이거나; 또는 다음식

의 메소 다리이거나; 또는 다음식

의 메소 다리이거나; 또는 다음식

의 CC 결합이거나 또는 다음식

(여기서 R_ic, R_id, R_ie, R_if및 R_ig는 독립적으로 독립적으로 H, 할로, 니트로, 시아노, NR′₂,SR′, OR′, SOR′, SO₂R′, COOR′, CONR′₂이고, 여기서 각 R′은 독립적으로 H 또는 알킬 (1-6C)이며, 여기서 아미노, 술포히드릴 및 히드록실 치환기는 임의로 아실화된 (1-6C), 임의로 치환된 알킬 (1-6C), 임의로 치환된 알케닐 (1-6C), 임의로 치환된 알키닐 (1-6C), 임의로 치환된 아릴 (4-12C), 또는 임의로 치환된 아릴알킬 (5-18C)일 수 있음)의 CNCCNC 결합이거나; 또는 다음식

의 CNC 결합이고, 여기에서 적어도 한 Z_i는 상기 CNC 결합이며, 단, Z₁및 Z₃이 둘다 -CNC이고 Z₂및 Z₄가 둘다 =CR_ic-의 메소 다리기이면, n이 2가 될 수 없다.
제2항에 있어서, n=2인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁및 Z₃은 CNC 결합이고 Z₂및 Z₄는 메소 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁은 CNC 결합이고 Z₂, Z₃및 Z₄는 메소 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁은 CNC 결합이고 Z₂및 Z₄는 공유결합이고 Z₃은 CC 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁및 Z₃은 CNC 결합이고 Z₂는 공유결합이고 Z₄는 메소 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁및 Z₃은 CNC 결합이고 Z₂는 메소결합이고 Z₄는 CNCCNC 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, Z₁및 Z₃은 CNC 결합이고 Z₂는 N-메소결합이고, Z₄는 메소 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 모든 Z₁, Z₂, Z₃, Z₄가 CNC 결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, n=1인 것을 특징으로 하는 화합물.
제10항에 있어서, Z₁은 CNC 결합이고, Z₂및 Z₃은 메소결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, n=3인 것을 특징으로 하는 화합물.
제12항에 있어서, Z₁및 Z₂는 CNC 결합이고, Z₃, Z₄및 Z₅는 메소결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, n=4인 것을 특징으로 하는 화합물.
제14항에 있어서, Z₁및 Z₄는 CNC 결합이고, Z₂, Z₃, Z₅및 Z₆는 메소결합인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 각 R_ic는 독립적으로 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 알킬, 임의로 치환된 아릴알킬 또는 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
제16항에 있어서, 각 R_ic는 독립적으로 임의로 치환된 아릴 또는 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
제3항에 있어서, 한 R_ic는 치환된 아릴이고 다른 R_ic는 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
제1항에 있어서, 모든 R_ia및 모든 R_ib는 동일하다는 것을 특징으로 하는 화합물.
제3항에 있어서, R_1a, R_1b, R_4a, R_4b는 서로 동일하고 R_2a, R_2b, R_3a, R_3b는 서로 동일하지만 R_1a, R_1b, R_4a, R_4b와는 서로 다른 것을 특징으로 하는 화합물.
제20항에 있어서, 각각의 R_ia및 R_ib가 독립적으로 H 또는 임의로 치환된 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
제2항에 있어서, 포르포시아닌이 2,3,9,10,14,15,21,22-옥타에틸포르포시아닌, 12,24-디페닐포르포시아닌; 12,24-디(3′,4′,5′-트리메톡시페닐)포르포시아닌; 12,24-디(펜타플루오로페닐)포르포시아닌; 12-페닐-2,3,21,22-테트라에틸포르포시아닌, 12,24-디페닐-2,3,9,10,14,15,21,22-옥타에틸포르포시아닌 및 12,24-디페닐 3,9,15,21-테트라에틸-2,10,14,22-테트라메틸포르포시아닌으로 이루어지는 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
면역글로불린 또는 면역글로불린 단편, 스테로이드, 수용체 리간드 또는 당류 중에서 선택된 표적-특이적 부분(TSM)에 공유적으로 결합된 식(1)의 화합물.
제23항에 있어서, 상기 공유결합이 화합물 및 TSM의 두가지 모두와 공유적으로 결합할 수 있는 이작용성 링커의 사용에 의해 이루어진 것이 특징인, TSM에 공유적으로 결합된 식(1)의 화합물.
제1항에 있어서, 금속염 또는 금속 착체인 것을 특징으로 하는 화합물.
제25항에 있어서, 그금속염 또는 금속 착제가 상자성 이온인 것을 특징으로 하는 화합물.
제26항에 있어서, 상자성 이온원소가 가돌리늄(III) 또는 망간(II)인 것을 특징으로 하는 화합물.
상자성 이온으로 금속화된 형태에서 제1항의 화합물로 이루어지는 자기공명영상(MRI) 콘트라스트제.
제1항에 있어서, 테크네튬, 인듐 및 갈륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 방사성 동위원소를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
비극성 비양성자성 용매에서 과잉의 DDQ의 존재 하에서 다음식의 화합물을

다음식의 화합물로 처리하는 것으로 이루어지는

다음식의 화합물을 제조하는 방법: 단, 상기 과잉의 DDQ가 10배 과잉량이면 식 1(a)의 화합물은 알루미나 컬럼상에서의 크로마토그래피 정제법 이외의 방법으로 정제한다.
건조 에탄올은 아닌 극성용매에서 다음식

의 화합물을 과잉량의 암모니아로 처리하는 것으로 이루어지는 다음식

의 화합물을 제조하는 방법.
극성 유기용매의 존재하에 피롤핵을 클로로술포닐 이소시아네이트로 처리하는 것으로 이루어지는, 하나 이상의 시아노기를 함유하는 피롤핵의 제조방법.