JPH08502497A

JPH08502497A - 波長特異的感光性ポルファシアニン及び拡大されたポルフィン様化合物及び調製のための方法とその使用

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Publication number: JPH08502497A
Application number: JP6510513A
Authority: JP
Inventors: タン、ハン; ズィー、リリー; ウィジェセケラ、ティラック; ドルフィン、デイビッド
Original assignee: クワドラロジックテクノロジーズインク．
Priority date: 1992-10-30
Filing date: 1993-10-29
Publication date: 1996-03-19
Anticipated expiration: 2015-11-13
Also published as: CN1092424A; EP0666859A1; AU683856B2; AU5414394A; KR950704321A; FI951986A; NO951635L; ZA938108B; TW268953B; KR100284928B1; US5512675A; US5405957A; CA2147509A1; FI951986A0; NO951635D0; JP3108438B2; WO1994010172A1

Abstract

(57)【要約】新しい拡大された（expanded）ポリフィリン様化合物のグループである、４００〜８５０ナノメーターの範囲に吸収極大をもつボルファシアニン（Ｐｃ）とボルファシアニン様化合物は、標的とされる組織、細胞及びウイルスを検出し、処理するのに有用である。本発明のＰｃを用いることによって血液において吸収される波長より別の波長を含むような光照射を行うことができるようになる。本発明のＰｃは光照射を行うため、特定の組織又は細胞にターゲティングされるように、免疫グロブリンヌはその断片のような標的特異的モイエティを結台させていてもよい。このような物質を使うことによって、組織又は細胞へのターゲティングにおいて、かなり深いところまで透過できるようになり、特異性もあかる。適当な常磁性イオン又は放射性同位元素と結合されると、本発明のＰｃは核磁気共鳴イメージング及びラジオイメージングにおける使用に合うようになる。本発明のＰｃを合成するための新しい方法が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の名称］長特異的感光性ポルファシアニン及び拡大されたポルフィン様化合物及び調製のための方法とその使用［発明の技術分野］本発明は光を照射することにより、標的となる細胞又は組織の検出又は破壊を仲介するような、新しい拡拡大された（expanded）波長特異的ポルファシアニン及び拡大された（expanded）ポルフィリン様化台物、それらの調製のための新しい方法、及びそれらの化合物の使用に関わる。特に、本発明は、検出され、破壊されるべき細胞又は組織へ光照射（irradiation）を行う際に仲介となるような、２５０〜８５０ナノメーター（nm）の範囲に吸収極大をもつポルファシアニン及び他のポルファシアニン様化合物とその誘導体及びそれらの使用と、特定の標的細胞上に光を照射するときの効果を集中させるためこのような化合物又はそのコンジュゲート（conjugate）を使用することに関わる。さらに、本発明はラジオイメージングと磁気共鳴イメージング法におけるポルファシアニンとポルファシアニン様化合物とその誘導体の使用に関わる。［発明の背景］ポルフィリン及び他のテトラビロリックマクロシクル（tetrapyrrolic macr ocycles）の合成や研究にかなりの労力が注がれていたけれども、大きな芳香族ピロール含有系、いわゆる「拡大された（expanded）ポルフィリン」については少ししか分かっていない。そのような系は、かなり多くの数のπ電子を含んでいること、ヘテロ原子をさらに配位することができること、及びより大きな中心結合コアを形成していることにより、ポルフィリンを越えた利点を提供できよう。このような化合物の研究は、何十年も前のトリピランジカルボン酸及びビピロールジカルボキサルデヒドからサフィリンの合成が最初に報告されたときに始まった。（Woodward，R.B.,Aromaticity Conference，Scheffield，England，19 66，また Broadhurst et al.，J．Chem．Soc．Perkins Trams．(1972)1:2111及びBauer et al．(1983)J．Am．Chem．Soc．105:6429をみよ）ビピロールジカルボキサルデヒドとヒロールジピロメタンジカルボン酸からのスマラグディリンの合成は１９７０年にＭ．Ｍ．Ｋｉｎｇ（Ph．D．Dissertation，Harvard Univers ity，Cambridge，MA）によって報告された。スーパーフタロシアニンのウラニル複合体は、歴史的に重要なペンタピロリックマクロサイクリック化合物である。この化台物はウラニルジクロライドとジシアノベンゼンの直接のテンプレート縮台によって調製される。しかしながら、フリー塩基は不安定である。（Day et al．(1975)J．Am．Chem．Soc．97:4519）金属を除くことによって環が縮小され、フタロシアニンを形成する（Marks，T.J．and D.R．Stojakovic (197 8)J．Am．Chem．Soc．100:1695）。Ｇｏｓｓａｕｅｒはトリビランジアルデヒドとｂｉｓ−α−トリピランを縮合し、続いて酸化することによって最初のヘキサフィリンを台成した（Bull．Soc ．Chim．Belg．(1983)92:793）。ヘキサフィリンの中に存在する６つのメチン結合のうち、２つはＥ型（同書）である。Charriereはヘキサフィリンはいくつかの遷移金属と、バイメタリックな複合体をつくると報告した（1987，Thesis，Un iversity de Fribourg，Suisse）。別のヘキサピロリック系のルビリンが最近合成され、構造的な特色も示された（Sessler et al．(1991a)Angew．Chem．Int． Ed．Engl．30:977）。ビニロガスポルフィリン又はプラティリンはR.A.BergerとE.LeGoffにより最初にしめされた別の重要なクラスのピロール含有マクロシクルである（Tetra.Lett ．(1978)44:4225、また、LeGoff，E．and O.G.Weaver(1987)J．Org．Chem．52:7 11，及びFranck et al．(1988)Proc.SPIE Int．Soc．Opt．Eng.，Ser．5,997:10 7をみよ）。このような化合物は一般にジピロメタンを、ビニラルデヒドで置換したジピロメタンと反応させることによって合成される。（Beckman et al．(1990)Ang ew．Chem．Int．Ed．Engl．29:1395）。ビスビニロガス拡大された（expanded）ポルフィリンは、ふつう１つの原子のメソ結合の４つの全てが大きくされている（enlarged）テトラビニロガスポルフィリンにまでさらに拡大される。テトラビニロガスポルフイリンはＮを保護されたビロールで置換されたアリル（allyl）アルコールの酸触媒自己縮合によってつくられる。テトラビニロガスポルフィリンには、普通のポルフィリンのシフトから１５０ｎｍ以上もの強いソーレー様バンドシフトがある（Gosmann，H．and B．Franck(1986)Angew．Chem．Int．Ed．E ngl．25:1100 Knuebel，G．and B．Franck(1988)Angew．Chem．Int．Ed．Engl． 27:1170）。さらに、ビスビニロガスポルフィセンの合成が最近報告された（Jux et al (1990)Angew．Chem．Int．Ed．Engl．29:1385 Vogel et al．(1990)Ange w．Chem．Int．Ed．Engl．29:1387）。テキサフィリンによって表されるシッフ−ベース化合物は別のクラスのピロール含有マクロシルである（Sessler et al．(1987)J．Org．Chem．52:4394，Sess ler et al．(1988) J．Am．Chem．Soc．110:5586）。テキサフィリンはｏ−フェニレンジアミンとトリピランジアルデヒドの酸触媒の縮合によって合成される。いくつかのテキサフィリンアナログが同様のストラテジーをつかって調製された（Sessler et al．（1991b） Abstract of the 201st Natl．Soc．Mtg．，InorganicDivision；Sessler et al ．（1992）Inorg．Chem．28：529）。悪性細胞の検出と処理のために、光照射と組合されたポルフィリンの使用にはこのときまでかなりの歴史がある（たとえばPORPHYRIN PHOTOSENSITIZATION（Ke ssel，D．et al．，eds．Plenum Press，1983）をみよ）。あるポルフィリンが「自然に」悪性細胞に局在することができるようにみえる。光が照射されると、ポルフィリンは、それらを有用なものとなしてくれる２つの特性をもつようになる。まず、紫外又は可視光が照射されると、それらはケイ光を発し、そうして、悪性腫瘍の検出と関わる診断方法において有用となるだろう。（たとえば、Kess el et al．，前記、Gregory，H．B．Jr．et al．，Ann，Surg．（1968）167：82 7-829をみよ）。さらに、紫外（UV）、可視、又は、近赤外光が照射されると、あるポルフィリンはそれらがとどまっている細胞に対して細胞毒性を示すようになる（たとえば、Diamond，I．et al．，Lancet（1972）2：1175-1177，Dougherty，T．J．et a l．，Cancer Research（1978）38：2628-635，Dougherty，T．J．et al．，THE SCIENCE OF PHOTO MEDICINE 625-638（J．D．Regan&J．A．Parrish，eds.，1982），Dougherty，T ．J．et al.，CANCER：PRINCIPLES AND PRACTICE OF ONCOLOGY 1836-1844（V．T ．DeVita Jr．et al．eds.，1982）をみよ）。サフィリン、テキサフィリン及びビニコガスポルフィリンのようなある拡大されたポルフィリンは単一の長波長をもち、腫瘍の光治療における使用のための潜在的な感光剤としてそれらを魅力あるものにする一重項（singlet）酸素形成という性質を有している（Maiya et al ．（1990）J．Phys．Chem．94：3597，Sessler et al．（1991c） SPIE Soc．14 26：318，Franck et al．，上記）。ヘマトポルフィリンのようなあるポルフィリンに標的とされる細胞に特異的な免疫グロブリンを結合させることによって、あるポルフィリンが望まれる細胞又は組織にとどまる（home）能力を高めることができる一方で、これは、こういう一般の治療へのアプローチを考える際に生じる別の問題、すなわち、６３０nmという範囲内にある、あるポルフィリンを活性化するのに必要とされる光照射のための波長はまた、他のポルフィリンや血液や他の組織中にふつうに存在している自然の発色団によって容易に吸収されるエネルギーでもあるという問題を解決していない。それゆえ、有効な処理の深さはヘモグロビンのような自然の発色団による光吸収という阻害の影響のため、数ミリメートルに限られていた。従って、より長波長側で励起でき、対象生物の体全体に存在する自然の発色団による阻害の影響を回避するようにして、光照射を行うのを仲介するような化合物を投与することが望まれるだろう。光治療に加えて、拡大された（expanded）ポルフィリンは磁気共鳴イメージング（MRI）においても有効である。MRIは正常及び異常な組織が成長の初期段階で観察され、認識されることができるようにする非侵入性で、非イオン化の方法である。しかしながら、このときMRIは対正常組織の病気組織についてのシグナル促進の程度が、この方法が多くの治療の場で使われるようになるにはしばしば不十分であるという重要な欠点がある。この問題を克服するために、MRIに対するコントラスト剤を開発するためかなりの努力が行われている。ガドリニウム（II I）（Gd）から誘導される複合体のような常磁性金属複合体が最近治療の試みに特に有効であることが証明された。今日まで、MRIコントラスト剤におけるガドリニウムの配位は、カルボキシレートタイプのリガンドを使ってなされた（たとえば、Lauffer，R．B．（1987）C hem．Rev．87：901，Kornguth et al．（1987）J．Ne．66：898，Koenig et al ．（1986）Invest．Radiol．21：697，Chacheris et al．（1987）Inorg．Chem ．26：958，Loncin et al．（1986）Inorg．Chem．25：2646，Chang ，C．A．and V．C．Sekhar（1987）Inorg．Chem．26：1981をみよ）。これらの知られている系は全て熱力学的にはとても安定であるが、かなり本質的には不安定性を内在する。他方、ある拡大（expanded）ポルフィリンは、ふつうのポルフィリンとは安定な複合体を形成しないGd（III）と安定な複合体を形成することができる。結果として、それらはMRIコントラスト剤として、改良されたアプローチを提供している。Sesslerらはテキサフィリンは生体外で極めて安定なGd（I II）複合体を形成すると報告した（Sessler et al．（1989）Inorg．Chem．28： 3390）。Gd（III）に加えて、テキサフィリンは Cd及びEuのような様々な遷移金属と複合体を形成することが報告された（Sessler，J．L．and A．K．Burrell （1992）Top．Cur．Chem．161：177）。［発明の開示］本発明は標的組織、細胞及び病原体を検出及び・又は処理する際に使用するのに適当な新しい光吸収化合物を与える。本発明はまたポルファシアニンの収量を増大させるもしくはその合成過程をかなり簡単にするような新しい拡大された（ expanded）ポルフィリン（ポルファシアニン）を調製するための新しい方法を与える。このような化合物は、血液や他の組織中に高濃度で存在する成分、特にヘモグロビンやミオグロビンと結合（associated）しているポルフィリン残基によってふつうに吸収されるような範囲の外のエネルギー範囲で放射を吸収することができるため、比較的低量で投与されてもよい。それゆえ、このような新しい拡大されたポルフィリン様化合物に、長波長側の活性化光を供給することによって、その照射の処理は本来の発色団がその活性化合物と光子について競争（競合）しないような波長で行うことができる。このため、光はかなり奥深くまで透過する。このような化合物は好ましくは非標的組織及び細胞と比較して、標的組織及び細胞で優先的に保持される。従って、放射性同位元素又は常磁性イオンポルファシアニン及びポルフィリン様化合物でラベルされるか又はそれらに結合（conjugate）されると、それらは、特にラジオイメージング（radioimaging）及び磁気共鳴像コントラスト剤（ magnetic resonance image contrast agents）として、それぞれ役に立つ。さらに、利用できる金属結合コア部分の安定性を増大させ、金属を結合（bind）するのに役に立つ原子の数を増やしたため、ポルファシアニンとポルファシアニン様化台物は、特に磁気共鳴コントラスト剤として役に立つ。本発明のポルファシアニンと他の新しいポルファシアニン様化合物と金属元素を含むそのコンジュゲートの別の利点は、それらがUV（紫外）、可視又は近赤外光を照射されると、ルミネセンスを示すことができることである。このように、これらの化台物は、特に、病変及び腫瘍の検出に役に立つ。このケイ光誘導体を集合して、本明細書内で「ポルファシアニン」及び「ポルファシアニン様化合物」と称する。ポルファシアニンは式Ｉの化合物により例示される。ここで、Ｒは置換及び非置換アルキル（alkyl）、アルケニル（alkenyl）、アルキニル（alkynyl）、置換及び非置換アリール（aryl）、アルキル（alkyl）もしくはアリールスルフォニル（aryl sulfonyl）、アルキル（alkyl）もしくはアリールシアノ（aryl c yano）、ハロゲン（halogen）、シアノ（cyano）、ニトロ（nitro）、アミノ（a mino）、カルボキシ（carboxy）、カルバルコキシ（carbalkoxy）、又はそれらのエステル（ester）、アミド（amide）及び塩などを含むが、これらには限定されない、非干渉（noninterfering）置換基である。本明細書中で使われているように、カルボキシは従来より定義されているように-COOHであり、カルバルコキシは-COORであり、ここでＲはアルキル（alkyl）（1-6C）である。本明細書で使われているように、アルキル（alkyl）は例えばメチル（methyl）、エチル（ethyl）、２−メチルペンチル（2-methylpentyl）、ｔ−ブチル（t-butyl）ｎ−プロビル（n-propyl）などのような１〜６コの炭素原子からなる飽和直鎖又は分岐鎖の炭化水素である。アリール（aryl）（6-1OC）はハロ（halo）（フルオロ（fluoro）、クロロ（c hloro）、ブロモ（bromo）、ヨード（iodo））、低級アルキル（lower alkyl）（1-4C）、又は低級アルコキシ（lower alkoxy）（1-4C）から独立に選ばれた１〜３個の置換基で任意に置換されるフェニル（phenyl）である。アルコキシは− ＯＲであり、ここでＲは本明細書中で定義されているようにアルキルである。アリール（6-10C）又はアルキル（1-6C）スルフオニルモイアティ（sulfonyl moieties）は、式ＳＯ₂Ｒで表され、ここでＲは前記定義のようにアルキル又はアリールである。本発明の化合物は−ＣＯＯＨの塩、エステル、アミドを含む。生体内で使用するためには、これらの塩、エステル、及びアミドは製薬的に受けいれられ、毒性のないものでなければならない。これは、生体外の使用では関わってない必要条件である。「塩、エステル、アミド」は製薬的に受け入れられる無毒性の無機及び有機塩基を含めた、無機又は有機塩基由来の塩、及び、本明細書中で定義されているようにＲがアルキルである式ＲＯＨ、ＲＮＨ₂もしくはＲ₂ＮＨのアルコール又は１級もしくは２級アミン由来のアルキルエステル又はアミドにあたる。適当な無機塩基はナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、水酸化物などを含む。特に、カリウム、ナトリウム塩が好まれる。製薬的に受け入れることのできる有機無毒性塩基は、環状アミンを含めた１級、２級、３級、４級アミンと、塩基性イオン交換樹脂を含む。その例はイソプロピルアミン、トリメチルアミン、エタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、コリン、ベタイン、グルコサミン、テオブロビン、プリン、ピペラジン、ポリアミン樹脂などをふくむ。塩誘導体は適量の製薬的に受け入れることのできる塩基でフリーの酸を処理することによって調製される。反応は、無水又は水中にて、即ち水単独又は不活性の水混和性有機溶媒と組合せて、約０℃から約１００℃の温度、好ましくは室温で、塩基に対して本発明の化合物を適当な一定モル量という条件下で行われる。代表的な不活性の水混和性有機溶媒はメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、ジオキサン、テトラヒドロフランをふくむ。塩誘導体は、酸好ましくは無機酸、たとえば塩化水素酸、硫酸などで、約０℃ から約５０℃好ましくは室温で酸性化することによって、そのそれぞれのフリーの酸に再転化させることができる。エステルは、望むエステルに対応するアルコール試薬で、その対応するフリーの酸をエステル化することによって調製される。この反応は、ボロントリフルオライド（boron trifluoride）、塩化水素、硫酸、p-トルエンスルフォン酸（p-t oluenesulfonic acid）などのような強酸の存在下で行われる。そのエステル化で使われるアルコール試薬は反応温度では液体であるので、そのアルコール試薬は反応溶媒でありうる。任意に、その反応は、フリーの酸とアルコール試薬が可溶性である不活性有機溶媒中で行うことができ、かかる溶媒としては、炭化水素溶媒、たとえば、ヘキサン、イソオクタン、デ゛カン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、キシレン：ハロゲン化された炭化水素溶媒、たとえばメチレンクロライド、クロロホルム、ジクロロエタン：又はエーテル溶媒、たとえばジエチルエーテル、ジブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフランなどがある。その反応は、約０℃から、その反応混合物の還流温度まで、好ましくは塩化水素を使って１５℃から約３５℃の温度で行われる。できた産物は反応物を水で稀釈し、生じた水性混合物をジエチルエーテル、ベンゼン、メチレンクロライドなどのような水と非混和性の不活性有機溶媒で抽出し、抽出物をあわせ、水で中性になるまで抽出物を洗浄し、そして減圧下で溶媒を蒸発させるという従来の方法により単離される。かわって、アルキルエステルはその分野では知られた方法に従ってトランスエステル化反応によって調製することができる。低級エステルから高級エステルへ、たとえばメチルエステルからたとえばイソアミルエステルになるようにトランスエステル化反応を媒してエステルを調製するのが好まれる。しかしながら、実質的に過剰の低級アルコールを使うことによって、高級エステルは、低級エステルへとトランスエステル化されることができる。かくて、たとえば、実質的に過剰のエタノールを使うことによって、ヘキシルエステルはトランスエステル化によりエチルエステルに転化される。また別法として、エステルはアプロチック（aprotic）有機溶媒中、低温で、ジアゾメタン、ジアゾ−ｎ−ヘキサン又はジアゾ−ｉ−プロパンのような適当なジアゾアルカンとフリーの酸の形のものを反応させることによって調製することができる。アミドはたとえばチオキシルクロライドによりカルボキシル酸残基を活性化することによって、及び適当なアミンで処理することによって、得られる。本発明中の標的細胞及び組織の実施例は、血液腫瘍、悪性の骨髄、ウイルスに感染した血液細胞又は骨髄を含めた腫瘍、形成異常症の細胞または組織、炎症や感染部位、乾癖プラーク又はパピローマウイルス病変（いぼ）のような過増殖組織、又は新生脈管内膜の過形成病変、ポートワイン斑点や血管腫のような血管過形成、アテローム性動脈硬化症のプラーク、（毛髪の）毛包、フリーのウイルス、バクテリア、原生動物又は他の病原性寄生体をふくむが、これらには限定されない。又別の視点で、本発明はポルファシアニン及び・又はポルファシアニン様化合物を使って、あるウイルス、バクテリア、原生動物及び他の病原性寄生体を不活性化するための方法に関わる。本発明で考慮されているターゲットの病原体はヒトのサイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、マレック病ヘルペスウイルス、ヒトのヘルペスシンプレックスウイルス、水痘−帯状庖疹（バリセラ −ゾスター）ウイルス、ポックスビリダエ（Poxviridae）科のメンバー、ヒトの肝炎Ｃウィルスを含めてヒトの肝炎Ａウィルス（HAV）、ヒトの肝炎Ｂウィルス（HBV）、非Ａ、非Ｂ肝炎ウイルスのようなヘパドナビリダエ（Hepadnaviridae）科のメンバー、インフルエンザウイルスＡ型、Ｂ型、Ｃ型のようなオルトミクソビリダエ（Orthomyxoviridae）科のメンバー、ヒトのＴ細胞白血病ウイルス、ヒトの免疫不全症ウイルスのようなレトロビリダエ（Retr oviridae）科のメンバー、ダニ媒介の脳炎ウイルス又は黄熱病ウイルスのようなフラビビリダエ（Flaviviridae）科のメンバーのようなエンベローブをもつウイルスをふくむ。本発明により考慮された別のクラスの病原体は、マラリア原虫（Plasmodium m alariae），プラズモジウム・ファルシパルム（P．falciparum），Ｐ．オヴァーレ（P．ovale），P．ヴィヴアックス（P．vivax）及びトリパノゾーマ・クルージ（Trypanosoma cruzi）のような寄生体をふくむ。バクテリアの根絶がまた本発明によりバシルス・スブティリス（Bacillus sub tilis），ストレプトコッカス・ファエカリス（Streptococcus faecalis），プスユードモナス（Pseudomonas）spp.，ミコバクテリウム（Mycobacterium）spp ．及び光活性化によって処理できる他の都合のよい生物をふくめて、考慮されている。さらに、本発明内のポルファシアニンとポルファシアニン様化合物は、標的特異的モイエティ（target-specitic moieties）（Tsm ）に結合させることができる。これらのTsmとしてはポリクローナル及びモノクローナル抗体をふくめた免疫グロブリン及びその免疫グロブリンの断片、Ｈ２− アゴニスト、エストロゲンとテストステロンをふくめたステロイド、マンノースのような糖、Ｔ細胞レセプターとアルファ−ベータ（α−β）ヘテロダイマーのようなペプチドなどがある。Tsmにポルファシアニンとポルファシアニン様化合物を結合（conjugate）させることによって、望む標的組織内にその化合物が濃縮することを促進できる。このように、１つの視点として、本発明は式Tsm-L-Pcというコンジュゲートに関わる。ここで、Tsmは免疫グログリンやホルモンのような標的特異的モイエティを表し、Pcは４００〜８５０ナノメーター（nm）の範囲に吸収極大をもつポルファシアニン誘導体を表し、Lはこれらの化台物を結台させている共有結合もしくはTsmとPcのそれそれに共有結合的に結合している結合モイエティを表す。 macrocycles）を与えるようにモノ−、ジ−、及びオリゴ−ピロリック前駆体を環化するような方法を用いて得られたポルファシアニンとポルフアシアニン様誘導体からなる群から選ばれる。他の点で、本発明はUV（紫外）、可視、近赤外光の存在下でポルファシアニンとポルファシアニン様化合物を使って、単独でもしくは上記のコンジュゲートとして標的細胞に対し、細胞毒性を与えるための方法に関わる。なお更なる視点で、本発明はポルファシアニンとポルファシアニン様化台物又はそのコンジュゲートを用いて病変組織を検出するための方法に関わる。本発明のポルファシアニンとポルファシアニン様化合物は診断用のイメージング剤として使用するため、ラジオイメージング（radioimaging＝シンチグラム造影式のイメージング scintigraphic imaging）のための同位元素又は磁気共鳴像促進剤でラベルされるか又はこれに結合させることができる。ポルファシアニンとポルファシアニン様化合物にとって、有効なラベルとなるような放射性同位元素の例はヨード−１２３、ヨード−１３１、テクネチウム−９９m）インジウム−１１１及びガリウム-６７をふくむ。ポルファシアニンとポルファシアニン様化合物に結合させたときに、ＭＲＩイメージング促進にとって有効であろう化合物の例はＧｄ，Ｍｎ，Ｅｕ，Ｄｙ，Ｐｒ，Ｐａ，Ｃｒ，Ｃｏ，Ｆｅ，Ｃｕ，Ｎｉ，Ｔｉ，及びｖのような元素の常磁性イオンをふくむ。さらなる視点として、本発明はこれらの活性成分をふくんでいる医薬的組成物に関わる。［図面の簡単な説明］図１は、式Ｉのポルファシアニンの構造を示す。図２は、式Ｉのポルファシアニンを合成するための１つの方法を図示している。図３は、式Ｉのポルファシアニンを合成するための別の方法を図示している。図４は、式Ｉのポルファシアニンを合成するための方法を図示している。図５は、本発明内におけるポルファシアニン様化合物の構造を示す。図６は、本発明内における別のポルファシアニン様化合物の構造を示す。図７は、本発明内におけるまた別のポルファシアニン様化合物の構造を示す。図８は、本発明内におけるさらに別のポルファシアニン様化合物の構造を示す。図９は、４５６ｎｍで励起されたときの、式Ｉのポルファシアニンのフリーの塩基の放出波長（emission wavelength）を図示している。図１０は、４５６ｎｍで励起されたときの、式Ｉのプロトン化（protonated）されたポルファシアニンの放出波長を図示している。図１１は、式Ｉのポルファシアニンを合成するための新しい方法を図示している。図１２は、式Ｉのポルフファシアニンを合成するための新しい、簡単にされた方法を図示している。図１３は、本発明内において、２つの架橋炭素原子（two bridge carbon atom s）上で置換又は非置換フェニル基をふくむポルファシアニンを合成するための新しい方法を図示している。図１４は、本発明内において、２つの架橋炭素原子の１つにおいて置換又は非置換フェニル基をふくむ非対称（asymetrical）のポルファシアニンを合成するための新しい方法を図示している。［発明を実施するための形態］ポルファシアニンとポルファシアニン様化合物本発明の全ての組成物は、光吸収化合物として、新しい拡大された（expanded ）ポルファシアニン様マクロシクル（macrocycle）誘導体、すなわち、４００〜８５０ｎｍの範囲に光の吸収極大をもつポルファシアニンとポルファシアニン様化合物を用いている。ポルファシアニンとポルファシアニン様化合物はマクロシクルである。その中で、知られているポリピロリックマクロシクルの結合（brid ges）の少なような化合物の核の典型的な例は図１及び図５〜８に記載されている。本発明において有用なポルファシアニンの特別な調製は、氷酢酸中で２−ベンジルオキシカルボニル−３，４−ジエチル−５−メチルビロールに４酢酸鉛（ lead tetracetate）を加えることによってなされる。エチレングリコールがすべての残っているＰｂ（ＩＶ）を還元するために加えられる。水が加えられ、５−アセトキシメチル−２−ベンジルオキシカルボニル− ３，４−ジエチルビロール（図３中の化台物Ａ）が瀘過により回収され、さらに、水を加えて洗浄される。５−アセトキシメチル−２−ベンジルオキシカルボニル−３，４−ジエチルビロールが水中で酢酸に加えられ、加熱される。前述の溶液が室温にまで冷えると、固形産物が、かなりのかたまり（チャンク chunk）として沈澱される。水が加えられ、その産物は瀘過により回収され、そしてさらに、水を加えて洗浄される。瀘液はＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出されて、そして固形産物を生じるように溶媒を蒸発させる。固形産物は一緒にして、そしてＣＨ₂Ｃｌ₂及びヘキサンの溶液から再結晶化させる。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の５，５’−ビス（ベンジルオキシカルボニル）−３，３’−４，４’ −テトラエチル−２，２’−ジビロメタン（図３中の化合物Ｂ）はＰｄ／Ｃ及びトリエチルアミンの存在下水素のもとで撹拌される。触媒がセライト（celite）を通して瀘過されたあと、瀘液は、乾燥状態になるまで蒸発させられ、その結果ジカルボン酸が生成される。ジカルボン酸は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中にとかされ、アルゴンの存在下で沸騰するまで加熱される。溶液は冷やされ、過剰の冷やされた塩化ベンゾイルがビス−α−フリージピロメタン（化合物Ｂ）に加えられる。反応混合物は撹拌され、瀘過により固形産物が回収される。固形産物が水に加えられＮａＨＣＯ₃を用いて塩基性化され、６０℃まで加熱される。青黄色の産物がその溶液から結晶化されてきて瀘過され、水で洗浄される。エタノール中の３，３’，４，４’−テトラエチル−５，５’−ジホルミル− ２，２’−ジピロメタン（図３中の化合物Ｃ）はアルゴンで泡立てされ、そしてヒドロキシルアミン塩化水素と酢酸ナトリウムが加えられる。この混合物はアルゴンの存在下で加熱され、そして溶媒が除かれ、産物は一晩真空で乾燥させる。ビス−オキシムが無水酢酸中に溶解され、アルゴンで飽和させる。粗製のビスニトリル産物（図３中の化合物Ｄ）は無水酢酸を除去した後に黒い固形物として得られ、真空条件で乾燥させる。産物は、ＣＨ₂Ｃｌ₂中の０．５％メタノールを使ったシリカゲルカラム、続いて１０〜２０％ＥｔＯＡｃを使ったアルミナカラムによって精製される。溶媒の蒸発により青桃色の結晶として３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジビロメタンが生じる。１つの実施例（図３）において、３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５ ’−シアノジビロメタンがＴＨＦ中で溶解され、ＬｉＡｌＨ₄のＴＨＦ懸濁液に加えられる。できた混合物は撹拌され水が加えられる。固形産物が生じ、これは瀘過して取り除かれる。ビス−アミン産物は真空条件で乾燥することによって、溶媒を蒸発させた後に得られる。ビス−アミンは無水メタノール中に溶解され、ビス−アルデヒドが加えられる。溶液は泡立てられ、窒素で還流が行われる。チオシアン酸鉛（lead thiocyanate）（Pb（SCN₂））が加えられ、その溶液は還流される。酸素ガスが室温で溶液を通って泡立てされる。溶媒を蒸発させた後、粗製のポルファシアニン産物は真空で乾燥させる。産物はＣＨ₂Ｃｌ₂中酢酸エチルを使ったＡｌ₂Ｏ₃カラムにより精製される。緑色の溶離剤（eluent）が回収され、濃縮される。ポルファシアニンマクロシクルの結晶が溶媒を蒸発させた後、得られる。かわりの実施例において、無水ＴＨＦ中の３，３’−４，４’−テトラエチル −５，５’−シアノジピロメタンが０℃で窒素の存在下、ＬｉＡｌＨ₄のＴＨＦ懸濁液に加えられる。混合物は撹拌され、水がその反応をクエンチするように加えられ、そして沈澱は瀘過して取り除かれる。金色をした溶液がＰｂ（ＳＣＮ）₂と無水硫酸ナトリウムを等モル量ふくむ２首フラスコ（two-neck flask）にうつされる。無水メタノールが加えられ、混合物は還流が行われる。色が紫から暗緑色に段階的に変化していく。反応が止められ、空気が溶液を通してゆっくり、泡立ちされる。粗製の産物は塩化メチレンに溶解され、固形物は瀘過して取り除かれた。緑色溶液の体積はおよそ５mlにまで減らされ、そしてアルミナカラムにかけて、ＣＨ₂Ｃｌ₂中の酢酸エチルで溶出させる。ボルファシアニンをふくむ明緑色溶離剤（eluent）が回収され、乾燥状態になるまで蒸発される。また別のかわりのもの（図４）として、単一の架橋にアミド結合をつくり、そして脱水することによってつくられる。このように、図１の式Ｉのように示されたようにして得られた化合物がある。この中で、それそれＲは独立に置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、アルキニル；置換もしくは非置換アリール；アルキルもしくはアリールスルホニル；アルキルもしくはアリールシアノ；ハロゲン；シアノ；ニトロ：アミノ；カルボキシ；カルバルコキシ；またはそれらのエステル、アミド、塩などでありうる。式Ｉのポルファシアニンを調製するための新しい方法（図１１）において、無水ＴＨＦ中の３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジピロメタンが０℃、窒素のもとでの、ＬｉＡｌＨ₄のＴＨＦ懸濁液に加えられる。混合物は撹拌され、水が反応をクエンチするように加えられ、沈澱は瀘過して取り除かれる。０℃、窒素存在下、ＴＨＦ／ＣＨ₂Ｃｌ₂懸濁液中１０倍過剰の２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）が無水ＴＨＦ／ＣＨ₂Ｃｌ₂中の３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−ビスアミノメチル −２，２’−ジピロメタンに加えられる。溶液はすぐに暗緑色になる。粗製産物は塩化メチレン中に溶解される。固形物は瀘過して取り除かれる。緑色溶液の体積はおよそ５mlくらいまで減らされ、そしてアルミナカラムにかけて、ＣＨ₂Ｃｌ₂中の酢酸エチルで溶出させる。ポルファシアニンをふくむ明緑色溶離剤（elu ent）が回収され、乾燥状態になるまで、蒸発させる。収量の有意な増加（４８％）が空気酸化を介して得られた収量に比較して、今回の合成過程から得られる。式Ｉのポルファシアニンを調製する別の新しい方法（図１２）において、３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−ジホルミル−２，２’−ジビロメタンが乾燥ＥｔＯＨ中で懸濁される。生じるエタノール溶は０℃で冷やされ、アンモニアガスがそれを通して泡立てされる。フラスコはそして７２時間６０℃で油槽中におかれる。反応が止められ、０℃で冷やされる。エタノールはロートーヴァップ（roto-vap）上で除かれ、残渣はジクロロメタンで中性のアルミナ上でクロマトグラフィーで分離される。このかなり簡単にされた合成過程により収量２０％又は４．６mgのオクタエチルポルファシアニンを生成できる。もう１．５mgの産物がＤＤＱにより、より極性の強い成分の酸化から得られる。なお別の実施例において、２つの架橋炭素原子のそれそれにフェニル基をふくむポルファシアニンは図１３の中で示された反応スキームにより調製される。このように図１３の中で示されたようにして得られた化合物があり、この中でそれそれのＸは置換もしくは非置換アルキル、アルケニル、アルキニル；置換または非置換アリール；アルキルもしくはアリールスルホニル；アルキルもしくはアリールシアノ；ハロゲン：シアノ；ニトロ；アミノ；カルボキシ；カルバルコキシ；またはそれらのエステル、アミド、塩などでありうる。さらに別の実施例において、２つの架橋炭素原子の１つにフェニル基をふくむポルファシアニンは図１４でしめされる反応スキームにより調製される。標的特異的モイエテイポルファシアニンとポルファシアニン様化合物は単独でたとえば、腫瘍のようなある病変組織や細胞に特異的にそれらが局在するようにする際に標的剤として特に有用である。この標的化能力はそのような組織や細胞の表面上に位置しているエピトープ（抗原決定基）又はレセプターに特異的に結合するようなあるモイエティをポルファシアニンと結合させることによって促進されることができる。このように、本発明における標的特異的モイエティはエストロケン及びテストステロンのようなステロイドとその誘導体、及びＴ細胞レセプター又はアルフファ −ベータ（α−β）ヘテロダイマーを含むペプチド、単球やマクロファージがそれに対するレセプターをもっている、マンノースのような、多糖、及びＨ２アゴニストを含む。本発明内における、コンジュゲートの成分をふくむ標的特異的モイエティはまた免疫特異的な成分からなっていてもよい。Ｔｓｍはポリクローナルまたはモノクローナル抗体のプリバレーション由来で抗体全体又はＦ（ａｂ¹）₂、Ｆａｂ、又はＦａｂ’断片のようなそれら抗体の免疫学的に反応性のある断片を含むことができる。抗体全体にかわって使われる物として、そのような免疫学的反応性のある断片の使用については当該分野においてはよく知られている。例えば、Spiegelberg，H．L.，Immunoas says in the Clinical Laboratory（1978）3：1-23をみよ。ポリクローナル抗血清は、適当なホ乳動物に、抗体をつくる必要のある抗原を注射して、抗原に対する血清中の抗体レベルをアッセイし、タイターが高いときに抗血清を調製するという従来からの方法に従って調製される。モノクローナル抗体の調製は、又たとえば、免疫された動物から末梢血リンパ球又は牌臓細胞をとってこれを用いて、このような細胞をウイルス感染、骨髄腫との融合もしくは他の従来の手順によって不死化し、欲しい抗体の産生を単離されたコロニーにより選び出すというKoehlerとMilsteinのような方法によって従来どうり行われてもよい。モノクローナルもしくは、ポリクローナル抗体のプリパレーシヨンから断片をつくる方法については、上記したSpiegelberg，Ｈ．Ｌ．によって報告されている従来の方法により行われる。特に、本明細書中で例示されている有用抗体はMalcolmらにより報告されているようにして調製することのできるモノクローナル抗体のプリパレーションのＣＡＭＡＬ−１（Ex．Hematol．（1984）12：539-547）、Mewらによって報告されている抗Ｍ１抗体のポリクローナル又はモノクローナルのプリパレーシヨン（ J．Immunol．（1983）130：1473-1477）及びMaierら（J．Immunol．（1983）131 ：1843）とSteeleら（Cell Immunol．（1984）90：303）に報告されているようにして調製されたＢ１６Ｇ抗体をふくむ。前記のリストは実施例であって、確かに限定するものではない。いったん標的組織が分かると、この組織に対する特異的な抗体が従来の方法により調製されうる。それゆえ、本発明はいかなる望む標的に対しても毒性をもたらすように応用できる。結合（Linkage）本発明内において標的特異的モイエティとポルファシアニンとの結合は従来のいかなる方法によっても行われることがてき、Ｒ１〜Ｒ８のすくなくとも１つがカルボキシル基をふくむことが必要である。これらのモイエティ間の直接の共有結合は、例えば、カルホジイミドのような脱水剤を使って行われうる。その場合、Ｌは共有結合を表す。ポルファシアニンを標的特異的モイエティに共有結合的に結合されるという特に好まれる方法はジメチルサルフォキシド（ＤＭＳＯ）を必須にふくむ反応媒体の存在下で、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロビル）カルボジイミド（ＥＤＣＩ）で処理するものである。この好まれる手順を用いた調製は以下実施例５の中で示されている。もちろん、ジシクロヘキシルカルボジイミド又はジエチルカルボジイミドのような他の脱水剤も従来どうり水性及び部分的に水性の媒体と同様に使われうるだろう。コンジュケートの活性モイエティはまた２機能を有していて、それそれ２つの活性成分を共有結合的に結合させることのできる架橋剤化合物を通しても結合されうる。多様なこのような架橋剤は商業的に入手することができ、代表的なリストは、例えば、Pierce Chemical Co．のカタログのなかでみられる架橋剤を含んでいるだろう。このような架橋剤はホモもしくはヘテロの２機能を有するモイエティであり、ジスルフィド、アミド、ヒドラゾン、及び幅広い多様な他の結合をつくることのできるような機能性を含んでいる。他の架橋剤はポリアミン、ポリエーテル、ポリアミンアルコールのようなポリマーを含んでいて、それらはケトン、酸、アルテヒド、イソシアネートまたは多様な他の置換基を使ってその成分にまで誘導される。コンジュケートの活性モイエティを結合させる際に使われる技術はいかなる標準的な方法も含んでいて、結合のための方法が本発明の一部をつくっているのではない。それゆえ、そのようなコンジュゲートをつくるような分野でよく知られた、いかなる有効な技術も本発明の範囲の中に含まれ、よって、架橋剤モイエテティは共有結合もしくはその分野で手に入れることのできる又は標準的な技術を用いて誘導できる架橋剤（linker）モイエティであるものとしてのみ広く定義されている。投与と使用ポルファシアニン又はそのコンジュゲートは、一般的にその分野でよく知られている技術を用いて対象に投与するための製薬的な組成物に処方される。そのような製薬的な組成物の概要はたとえば、REMINGTONのPHARMACEUTICAL SCIENCES （Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania，最新版）の中で知ることができる。本発明におけるポルファシアニン、ポルファシアニン様化合物及びそのコンジュケートはふつう組織的に（systemically）、特に注射によって投与されるだろう。静脈内、皮下、筋肉内又は腹膜内でさえ注射が行われうる。注射する物質は従来からの形で、液体の溶液又は懸濁液として、注射の前に液体状の溶液や懸濁液にするのに適当な固形の形としてもしくは乳濁液として調製される。適当な賦形剤は例えば、水、生理的食塩水、デキストロース、グリセロールなどである。もちろん、このような組成物は湿剤、乳化剤、pH緩衝剤などの少量の無毒性の補助物質をふくむことができる。組織への投与はまたゆっくり遊離していくような（皮下）植込み又は持続して遊離するような系を通して、坐薬によって、もし適当に処方されたら、経口投与も行われうる。このような投与方法のための処方はその分野では大変よく知られており、その方法の概要は例えばREMINGTONのPHARMACEUTICAL SCIENCES（上記）の中で知ることができる。もし、治療が表在性の腫瘍や皮膚疾患の治療のためのように、局所的にされるなら、ポルファシアニン、ポルファシアニン様化合物又はその活性コンジュケートが外用水薬、懸濁剤、貼付剤（ペースト）、又はクリームをふくめた標準的な局所用組成物を使って、投与されてもよい。投与されるべきコンジュケート又はポルファシアニン誘導体の量は、活性成分の選択、処理される条件、投与の方法、個々の対象、及びそれに関わる人の判断に依存している。調製の特異性に依存して、より少量または多量に必要とされるだろう。約０．０５〜１０mg/kgの投与量が組織への投与に対して提唱されている。約０．０１〜２０％、好ましくは１〜５％の濃度の範囲の活性成分投与量が、局所への投与に対しては提唱されている。約１０〜３００mgの範囲の全体の毎日の投与量が経口投与に対して提唱されている。前記の範囲は個人の治療様式に関して変数の数が多くありこれらの推薦値よりかなりずれることが期待されるので単に提唱にすぎない。本発明のラジオイメージング（シンチグラム造影イメージング）方法は個人に非経口で有効量のポルファシアニンラジオイメージング剤を注入することによって行われる。非経口でとは例えば静脈、動脈、包膜内、間質又は、空洞内に注射するということを意味する。個人は特定の放射性同位元素が機能を果たす量である約１mCiから５０mCiの投与量のラジオイメージング剤と投与方法をうける。静脈注射に対してはその量はふつう、Tc-９９mでは約１０〜４０mCi、好ましくは約２０mCiであり、In-１１１又はGa-６７では約２〜５mCi）好ましくは４mCiである。ラジオイメージング剤は便利なことに、注射用プリパレーションとして、病気の組織又は細胞へその薬剤をターゲティングするため、ヒトへの使用においては好ましくは滅菌の注射用プリパレーションとして提供される。そして好ましくは次のものをふくんでいる。製薬的に受け入れることのできる滅菌の注射媒体、好ましくは生理的ｐＨと生理的濃度のリン酸バッファー塩溶液（ＰＢＳ）中に有効量のラジオラベルされた薬剤をふくむ滅菌注射用溶液である。他の製薬的に受け入れることのできる媒体は非経口の投与の場所で必要とされるような形で利用されうる。本発明に従って非経口で投与されるべき典型的なプリパレーションは滅菌溶液中に、ふつう約０．１〜２０ｍｇ好ましくは２ｍｇのラジオラベルされた薬剤をふくむだろう。いったん、標的部位に十分な同位元素がおかれると、従来の２次元の及び・またはＳＰＥＣＴガンマカメラもしくは炎症や病変を局部に集めるように外部でまたは内部で使われるガンマプロープをもっているハンド（ｈａｎｄ）を使うことによって、スキャニングが行われる。シンチグラムはふつう５０〜５００ＫｅＶの範囲のエネルギーを検出するための１以上のウインドウをもつガンマイメージングカメラにより撮影される。磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）はイメージング剤が放射性同位元素というよりＭＲＩ促進物ないし核種（species）をふくむということを除いてラジオイメージングと似た方法で行われる。磁気共鳴現象はラジオイメージングとは異なった原理ではたらくということは評価されるであろう。ふつう、生じるシグナル（信号）は、イメージされる場において水分子の水素原子核におけるブロトンの磁気モーメントの緩和時間と相関がある。磁気共鳴像促進剤は、緩和の割合を高くすることによってはたらき、それによって、イメージング剤が定着する場における水分子と、体の他の場所の水分子の間でのコントラストが大きくなる。しかしながら、その薬剤の効果はＴ₁とＴ₂の両方を大きくすることであり、前者によって、大きなコントラストが生じ、後者によってコントラストが小さくなるようになる。したかって、その現象は濃度依存的で、普通、最大の効率を得るための常磁性核種の最適濃度が存在する。最適濃度は使用される特定の薬剤、イメージングの場所、イメージングの方法、つまり、スピン−エコー、飽和−回復（saturation-recovery）、反転− 回復（inversion-recovery）、及びさまざまな他の強いＴ₁依存的又はＴ₂依存的イメージング技術、その薬剤が溶解している又は懸濁している媒体の組成によって変わる。これらの因子と、その相互の重要性はその分野ではよく知られている。例えば”Pykett，Scientific American （1982）246：78”及び”Runge et al .，Am．J．Radiol．（1987）141：1209”を見よ。本発明のＭＲＩ法は、本発明の中でガドリミウムのような金属元素にカップリングさせたポルファシアニンまたはポルファシアニン様化合物からなる、効果的な量のＭＲＩコントラスト剤を非経口で個人に注射することによって行われる。個人は特定の常磁性核種が機能を果たすことができる量である少なくとも約２０％、好ましくは５０〜５００％の標的部位上でＭＲＩシグナルを促進するのに十分な量のコントラスト剤と、投与方法をうけると考えられる。また、本発明におけるコントラスト剤は便利なことに、使用に際して注射用プリパレーションとして、病気の組織又は細胞へのＭＲＩ剤をターゲティングするため、ヒトでの使用においては好ましくは滅菌の注射用プリパレーションとして与えられる。そして好ましくは次のものを含んでいる。製薬的に受け入れることのできる滅菌の注射媒体、好ましくはリン酸バッファー生理食塩水溶液中に有効量のコントラスト剤を含む滅菌注射溶液である。非経口での投与のために他の従来からの製薬的に受け入れることのできる媒体は、非経口投与の場所で必要とされる様な形で利用されるだろう。本発明に従って、非経口で投与されるような典型的なプリパレーションは滅菌溶液中で約０．１〜２０mg、好ましくは２mgのコントラスト剤を含むだろう。実施例の実施例は本発明を例証することを意図したものであり、範囲を限定することを意図したものではない。実施例１ポルファシアニンの合成、図２４酢酸鉛（lead tetracetate）（１８．２ｇ、０．０４１モル（mole））が６０mlの氷酢酸中の２−ベンジルオキシカルボニル−３，４−ジエチル−５−メチルピロール（１０．１ｇ、０．０３７モル）の撹拌溶液中に加えられた。混合物は、短い間６０℃まで温められた。１０ミリリットル（ml）のエチレングリコールが残っているＰｂ（IV）を還元するために加えられた。２０ミリリットルの水が加えられ、５−アセトキシメチル−２−ベンジルオキシカルボニル−３，４− ジエチルピロール（図２中の化台物Ａ）が瀘過により回収され、さらに水を加えて洗浄された。５−アセトキシメチル−２−ベンジルオキシカルボニル−３，４ −ジエチルピロールが１００mlの水の中の８０％酢酸に加えられ、１時間１００ ℃で加熱された。前記溶液が室温まで冷やされると、固形物が大きなかたまり（ chunk）として沈澱した。１００ミリリットルの水が加えられ、産物は瀘過によって回収され、さらに水を加えて洗浄された。瀘液はＣＨ₂Ｃｌ₂出し、そして固形物ができるように蒸発させた。固形物は一緒にされてＣＨ₂Ｃｌ₂とヘキサンの溶液から再結晶化された。収量：６．６ｇ、６７．４％Ｃ₃₃Ｈ₃₈Ｏ₄Ｎ₂に対して計算された分子量：５２６．２８３１高分解能ＭＳ（マススペクトル）：５２６．２８３５ＣＤＣｌ₃中での¹ＨＮＭＲ：１．０５（ｔ，６Ｈ）、１．１２（ｔ，６Ｈ）、２．４３（ｑ，４Ｈ）、２．７５（ｑ，４Ｈ）、３．８５（ｓ，２Ｈ）、５．２５（ｓ，４Ｈ）、７．２８−７．４０（ｍ，１０Ｈ）、８．７０（ｂｒＳ，２Ｈ）。２００mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の５，５’−ビス（ベンジルオキシカルボニル）−３，３’−４，４’−テトラエチル−２，２’−ジピロメタン（図２の化台物Ｂ）（８．１ｇ、０．０１５モル）が大気圧、水素存在下、室温で０．４ｇ１０％Pd/Cと５滴のトリエチルアミン存在下で一晩撹拌された。触媒がセライトを通して瀘過された後、瀘液はロート−ヴァップ（ｒｏｔｏ−ｖａｐ）上で乾燥状態になるまで蒸発させて、ジカルボン酸が生成された。ジカルボン酸は１００ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解され１時間３０分アルゴン存在下で沸騰するまで加熱された。溶液は氷の上で冷やし、過剰の冷やした塩化ベンゾイル（７．２ml）がビス−α−フリージビロメタン（化合物Ｂ）に１滴ずつ加えられた。反応混合物は５℃で２時間撹拌され、瀘過によって固形物が回収された。固形物が５０mlの水に加えられ、ＮａＨＣＯ₃を用いて塩基性化された。溶液は加熱され、６０℃で１時間放置された。その溶液から結晶化した青黄色の産物は瀘過され、そして水で洗浄された。収量：３．４ｇ、７０．０％Ｃ₁₉Ｈ₂₆Ｎ₂Ｏ₂に対して計算された分子量：３１４．１９４４高分解能ＭＳ：３１４．１９９４ＣＤＣｌ₃中の¹ＨＮＭＲ：１．１０（ｔ，６Ｈ）、１．２５（ｔ，６Ｈ）、２．５０（ｑ，４Ｈ）、２．７０（ｑ，４Ｈ）、４．００（ｓ，２Ｈ）、９．５５（ｓ，２Ｈ）、１０．９０（ｓ，２Ｈ）。３００mlのエタノール中の３，３’，４，４’−テトラエチル−５，５’−ジホルミル−２，２’−ジビロメタン（図２の化合物Ｃ）は２０分間アルゴンにより泡立て通気された（bubbled）。ヒドロキシルアミン塩化水素（０．５１ｇ、０．００７３モル）と酢酸ナトリウム（１．２０ｇ、０．０１５モル）が加えられた。この混合物は６０℃でアルゴン存在下２時間３０分加熱された。溶媒はロート−ヴァップ（ｒｏｔｏ−ｖａｐ）上で取り除かれ、産物は一晩真空で乾燥された。ビス−オキシムが５mlの無水酢酸中に溶解され、３０分間アルゴンで飽和された。粗製のビスニトリル産物（図２の化合物Ｄ）は無水酢酸が除かれた後、黒色産物として得られ、真空で一晩乾燥させた。産物はＣＨ₂Ｃｌ₂中の０．５％メタノールを使ってシリカゲルカラム（４０ｇ）、続いて１０〜２０％のＥｔＯＡｃを使ってアルミナカラム（４０ｇ）によって精製された。この溶媒の蒸発により青桃色の結晶が生成した。収量：０．４３ｇ、４２％Ｃ₁₉Ｈ₂₄Ｎ₄に対して計算された分子量：３０８．２００１高分解能ＭＳ：３０８．２００２ＣＤＣｌ₃中での¹ＨＮＭＲ：１．１０（ｔ，６Ｈ）、１．２５（ｔ，６Ｈ）、２．４５（ｑ，４Ｈ）、２．６０（ｑ，４Ｈ）、３．９０（ｓ，２Ｈ）、８．４５（ｓ，２Ｈ）３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジビロメタン（０．０５３ｇ、１．７×１０^-4モル）が１０mlの無水ＴＨＦ中に溶解され、０℃Ｎ₂存在下で、ＬｉＡｌＨ₄（０．０５０ｇ、１．５×１０^-3モル）のＴＨＦ懸濁液に１滴ずつ加えられた。生じた混合物は３０分間撹拌され、２滴の水が加えられた。固形産物が生成し、それは瀘過して取り除かれた。ビス−アミン産物は真空で一晩乾燥させることによって溶媒を蒸発させた後に得られた。ビス−アミンは５０mlの無水メタノール中に溶解され、ビス−アルデヒド（０．０５０ｇ、１．６ ×１０^-4モル）が加えられた。溶液は２０分間Ｎ₂といっしよに泡立てられ、Ｎ₂存在下で還流が行われた。チオシアン酸鉛（lead thiocya-nate）（Ｐｂ（ＳＣＮ₂））（０．０５５ｇ、１．７×１０^-4 モル）が加えられ、溶液は４時間還流された。酸素ガスが室温で一晩溶液を通して泡立て通気された。溶媒を蒸発させた後、粗製ポルファシアニン産物は一晩真空で乾燥された。産物はＣＨ₂Ｃｌ₂中の１０％酢酸エチルを使ってＡｌ₂Ｏ₃カラム（４％の水が加えられた）により精製された。緑色の溶離剤（eluent）が回収され、ロート−ヴァッブ（ｒｏｔｏ−ｖａｐ）上で濃縮された。ポルファシアニンマクロシクル（大環状物）の結晶は溶媒を蒸発させた後得られた。収量：１９．３mg、１９．１％マクロシクル（macro-cycle）Ｃ₃₆Ｈ₄₆Ｎ₆に対して計算された分子量：５８８．３９４１高分解能ＭＳ：５８８．３９３３ ¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）、−４．５０（ｂｓ，２Ｈ）、２．０５（ｔ，１２Ｈ）、２．１３（ｔ，１２Ｈ）、４．２８（ｑ，８Ｈ）、４．４０（ｑ，８Ｈ）、１０．５０（ｓ，２Ｈ）、１３．０（ｓ，４Ｈ）ＣＨ₂Ｃｌ₂中のＵＶ／ＶＩＳ４５５，５９２，８００nm 実施例２ポルフアシアニンの合成、図３実施例１の方法に従って、３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジピロメタンが調製された。１０mlの無水ＴＨＦ中の０．１０２ｇ、３．３ ×１０^-4モルの３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジピロメタンが０℃、Ｎ₂存在下ＬｉＡ１Ｈ₄の２０ml ＴＨＦ懸濁液にゆっくりと加えられた。混合物は３０分間撹拌され、水が２滴反応を抑えるように加えられた。沈澱は瀘過して取り除かれた。金色をした溶液はＰｂ（ＳＣＮ）₂と無水硫酸ナトリウムを等モル量含む２首フラスコ（two-neck flask）に移された。１５ミリリットルの無水メタノールが加えられ、混合物は還流が行われた。溶液の色は紫から暗緑色へ段階的に変化していた。反応は４時間３０分後に止められ、空気が一晩溶液を通してゆっくりと泡立て通気された。粗製産物は塩化メチレン中に溶解され、固形産物は瀘過して除かれた。緑色溶液の体積はおよそ５mlまで減らされ、アルミナカラム（１２０ｇ、４％の水が加えられた）上にかけて、ＣＨ₂Ｃｌ₂ 中の１０％酢酸エチルで溶出させた。ポルファシアニンを含む２リットルの明緑色の溶離剤（eluent）は回収され乾燥状態になるまで蒸発させた。収量：２３．４mg、２４．１％この化合物の分光学的データは前記実施例１の中で調製された化合物と同一である。実施例３ポルファシアニンの生体外毒性細胞は無血清培地（ＤＭＥ）で３回洗って数を数え、１mlあたり１０⁷細胞という濃度になるようにした。「アフィニティ（Affinity）」アッセイのため、暗所で１００μｌ（マイクロリットル）の細胞懸濁液と１００μｌのテスト又はコントロール化合物が混合された。「ラベリング」が４℃で１時間続けられ、ラベルされた細胞は暗所にて一回一回３mlの培地を使って３回洗われ、新鮮な培地に再懸濁される。再懸濁された細胞はそして３０分間３００〜８５０nmの光を照射される。「ダイレクト（直接）」アッセイでは、細胞はテスト又はコントロール化合物から加えられるとすぐに光を照射される。光照射の効果は、その標的細胞にふさわしい方法を使って評価される。ヒトの赤血球（ＲＢＣｓ）がテスト細胞として使われると、コントロール（ヘマトポルフィリン、Ｈｐ）でラベルされた及びポルファシアニン（式Ｉ）でラベルされた細胞への光照射により起こる溶血反応が、目で見て評価される。マウスの肥満細胞腫の細胞株Ｐ８１５が使われると、結果は次の様に決定される。コントロールとしてＨｐおよびテスト物質として式Ｉのポルファシアニンを１０〜５０ng/mlの濃度で使って上記のようにして細胞かラベルされる。再懸濁した細胞は３０分間３００〜８５０nmの光を照射され、その結果生き残っているものを、死んだ細胞と生きている細胞を区別する標準的な方法であるエオシン−Ｙエクスクルージョン（eosin Y-exclusion）を使って直接数を数えることにより評価する。上記したようにして行われた他の決定としては、光を照射された細胞を回収し、その回収された細胞はチミジンの取り込みが細胞の生存を反映するものととらえる標準的な方法に従って、細胞を１８時間１０μＣｉ/mlのトリチウムラベルされたチミジンの中でインキュベートすることにより、その細胞の生存を調べるアッセイが行われる。細胞は回収され、放射活性の取り込みがシンチレーションカウンターによって測定される。実施例４ポルファシアニンの選択的結合Ｐ８１５細胞はＨｐまたは式Ｉのポルファシアニン１〜２００ng/mlを使って実施例３の中で述べられたようにしてインキュベートされる。細胞は３０分間暗所でラベルされ、吸収されなかったポルフィリンがなくなるように洗われ、再懸濁され、そしてもう３０分間３００〜８５０nmの光を照射される。細胞の生存は３０μＣｉ/mlのトリチウム化されたチミジンでラベルし、３７℃で１８時間インキュベートした後、トリチウム化されたチミジンの取り込み量によって評価される。実施例５免疫コンジュゲート（conjugate）の調製この実施例はヘマトポルフィリン（Ｈｐ）もしくは式Ｉのポルファシアニン（Ｐｃ）と、４つの異った抗体のプリパレーションを免疫結合させるときの調製方法を示す。使われた抗体はＣＡＭＡＬ−１、抗Ｍ１抗体、及びＢ１６Ｇ抗体、前記したようにして調製された全ての抗体、アフィニティ精製したウサギの抗マウスＩｇ（ＲａＭＩｇ）である。さらに、精製された全く関係のないモノクローナルのプリパレーシヨン（Ｃ−ＭＡｂ）がコントロールが必要なところでは使われる。コンジュゲート（conjugate）の１つの調製は元来Ｍｅｗら（J．Immunol（198 3）130：1473）により報告されているようにして行われる。簡単に言って、０．６ml の水の中の２０mgの１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロビル）−カルボジイミドＨＣｌ（ＥＤＣＩ）が、２５mlの水と０．８mlのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの中の２２０mg Ｈｐ．０．２ＨＣｌ（Sigma Chemical Co．，St．Lou is，M0）に加えられる。３０分後、この溶液は５mlの蒸留水中に溶解された１５ mgの抗体タンパク質と混合され、５時間インキュベートされる。この時間の間、溶液のｐＨがモニターされ、６と７の間にくるように調製される。そして、５０ μｌのモノエタノールアミンが加えられ、溶液は室温で一晩置かれる。溶液は０．００１Ｍリン酸バッフア−ｐＨ７．４に対して、１日３回バッファー交換をするようにして４日間透析が行われ、及び一晩はＰＢＳに対しての透析が行われる。ポルファシアニンのコンジュケート（conjugate）は類似の方法で調製される。好まれるプロトコールとしては、ＨｐまたはＰｃ及び脱水剤をそれぞれ５mg含むＤＭＳＯの中で、２mlの分散液（dispersion）が調製され、窒素存在下室温で３０分間撹拌される。これに２mlのＤＭＳＯ中に２mgの適当な免疫グロブリンを含む分散液（dispersion）が加えられ、できた混合物はもう１０分間撹拌される。この混合物は５０μｌのモノエタノールアミンを含むＰＢＳを５回加えてリン酸バッファー塩溶液ｐＨ７．４（ＰＢＳ）中で希釈することによってつくられ、そして、３回交換した溶液（wash）を使ってＰＢＳに対して透析される。かわってＨｐまたはＰｃ、架橋剤及び脱水剤をそれぞれ５mg含む分散液（disp ersion）２mlが調製され、窒素存在下、およそ１５分間室温で撹拌される。そして、これに２mlのテトラヒドロフラン中約２mgの免疫特異的タンパク質を含む分散液（dispersion）が加えられ、できた混合物はもう１０分間撹拌される。混合物は前記のようにして作り上げられる。前記の手順はＣＡＭＡＬ−１及び前記の残余の抗体プリパレーシヨンに適当である。さらに、次のプリパレーションは特にＢ１６Ｇ及びＲαＭＩｇについて行われる。Ｂ１６Ｇ４mlのスペクトル分析用グレードのＤＭＳＯ中の１１mgのヘマトポルフィリンと１１mgのＥＤＣＩが、Maierらの”J．Immunol（1983）131：1843”により報告されているようにして２mlのＤＭＳＯ中で調製された２０mgの凍結乾燥されたＢ１６Ｇ抗体を加える前に３０分間窒素存在下で室温で撹拌される。できた混合物は室温で４０秒間撹拌され、前記のようにつくりあげられる。できた産物はおよそ３７５μｇ Hp/mgのＢ１６Ｇを含んでいる。同様の手順がＨｐをＰｃに置き換えて使われる。ＲαＭＩ１mlのＤＭＳＯ中４００μｇのＥＤＣＩと４００μｇのヘマトポルフィリンが、Mewらの（J．Immunol．（1983）130：1473）により報告されているようにして１mlのＤＭＳＯ中で調製された８００μｇの凍結乾燥されたＲαｘＭＩｇ抗体を加える前に、前記のようにして、室温で窒素存在下３０分間撹拌される。できた混合物は３０秒間撹拌され、前記のようにつくりあげられ、２００μｇのHp/mg ＲαＭＩｇを含む産物が得られる。同様の手順はＨｐをＰｃに置き換えて使われる。実施例６生体外の免疫コンジュゲート（conjugate）の特異性Ｔｓｍに免疫グロフリンが含まれているようなＴｓｍ−Ｈｐ及びＴｓｍ−Ｐｃコンジュゲートは、適当なコントロールと一緒にそのコンジュゲートを適当なタイプの細胞と混合し、そしてラベルされた細胞に光を照射することによって生体外で細胞に対してテストされる。このアッセイを行うための手順は、ＣＡＭＡＬ −１についてはMewらのCancer Research（1985）、抗Ｍ１についてはMewらのJ． Immunol．（1983）の中でその詳細が報告されている。前記で引用した文献は両方とも本願中に引用をもって繰り込んでいる。簡単に言って、前記実施例４の中で示してあるように、ＣＡＭＡＬ−１では、３つの細胞株、ＷＣ４、ＷＣ６、及びＷＣ２（ＷＣ４とＷＣ６はＣＡＭＡＬ抗原を産生しており、ＷＣ２は産生していない）が、適当なＴｓｍ−Ｈｐ又はＴｓｍ −Ｐｃプリパレーションでラベルされる。それぞれ１０⁶細胞を含むようなラベルされた細胞のプリパレーションがローズチャンバー（Rose chamber）へ導入され、６３０nmのレーザー光を照射して光活性化される。様々なプリパレーションに対する結果が編集されている。抗Ｍ１コンジュゲートでは、Ｍ１腫瘍細胞が標的細胞として使われ、Ｔｓｍ− Ｈｐ、Ｔｓｍ−Ｐｃコンジュゲート又は薬剤（drug）又は抗体単独又は抗体と薬剤いっしょであるか結合させていないもので処理して、それらを３７℃で２時間６％ＣＯ₂給湿インキュベーターの中でインキュベートさせる。細胞はＰＢＳ中で３回洗って、プレートされ、一晩蛍光を照射される。細胞は前記トリチウム化チミジンの取り込みによってその生存を評価される。Ｂ１６Ｇコンジュゲートについては、標的細胞としてＡ１０、Ｐ８１５及びＬ１２１０細胞が使われる。（Ａ１０細胞はＢ１６Ｇに対し反応性のあるＴ−サプレッサー因子を分泌するＴ細胞ハイブリドーマであり、Ｐ８１５細胞はまたＢ１６Ｇと反応性がある。）生体外での研究がＢ１６Ｇ−Ｈｐ又はＢ１６Ｇ−Ｐｃコンジュゲートを用いた直接的な方法を使って、又は、ラベルされていないＢ１６Ｇ抗体とラベルされたＲαＭＩｇ−Ｈｐ又はＲαＭＩｇ −Ｐｃを用いて間接的になされている。直接の方法では、５×１０⁵細胞がテスト又はコントロールとして３２０、１６０、８０、４０、２０ng薬剤／mlというＨｐ又はＰｃ濃度の、適当なＴｓｍ− 薬剤コンジュゲートを含むような１mlのＤＭＥ／Hepesの中で懸濁される。細胞は暗所で３７℃１時間インキュベートされ、５mlのＤＭＥ／Hepes中で３回洗われ、そして、１mlの同じバッファーに再懸濁される。ラベルされたプリパレーションのうち、１００μｌずつのテスト分が３つ、平底のマイクロタイターウェル（micro-titer well）にまかれる。細胞の懸濁液の残り（７００μｌ）に２０cm 離れたところから、１時間白熱光（２２．５mW/cm²）を照射する。そして、さらに１００μｌずつ３つ分のサンプルをとって、マイクロタイターウェルにまく。２０％ＦＣＳを含むＤＭＥ／Hepesで希釈したトリチウムラベルチミジンが、２ μＣｉのラベルされたチミジンがそれぞれのウェルに加えられることになるように、１００μｌのサンプルの入っている全てのマイクロタイターウェルに加えられる。培養は３７℃で１８時間インキュベートされ、１０％ＣＯ₂を給湿され、ＭＡＳＨハーベスターで回収される。チミジンの取り込みはＨｐシンチレーションカウンター（Tri-Carb Model 4550）を使って測定される。間接的アッセイにおいては、前記のようにして調製された懸濁されたＡ１０細胞は４℃で３０分５０μg/mlのＢ１６Ｇもしくはコントロール抗体Ｃ−ＭＡｂにさらして、その後ＤＭＥ／Hepes中で洗われ、２μg/mlと１５ng/mlの間のＨｐまたはＰｃで様々な濃度のＲαＭＩｇ−Ｈｐ又はＲαＭＩｇ−Ｐｃに暗所中４℃で、さらに３０分間さらされた。細胞は前記のように、ラベルされたチミジンの取り込みを使って生存を評価される。実施例７ポルファシアンとそのコンジュゲートの生体内細胞毒性ポルファシアニンとそのコンジジュゲートの生体内の効力がまた評価される。ＣＡＭＡＬ−１と抗Ｍ１コンジュゲートに対しては、手順は、前記実施例６で引用された、２つのMewらの論文の中で詳しく述べられている。Ｂ１６Ｇ−ＨｐとＢ１６Ｇ−Ｐｃコンジュゲートに対して及びＰｃ（式Ｉ）単独に対しては、生体内の研究は次のようにして行われる。生体内でのテストは、腫瘍上のＴ−サプレッサー細胞集団の間接的な影響に依存している。それは照射処理の効果を評価するための方法として役に立つ。同糸の（syngeneic）ＤＢＡ／２マウスの中で成長したＰ８１５肥満細胞腫の細胞は腫瘍特異的Ｔサプレッサー細胞を刺激する。これらのＴサプレッサー細胞は、そうでない場合腫瘍を小さくするのを助けるであろう特異的Ｔキラー細胞の成長を阻害する。上記のＡ１０と命名されたＴ細胞ハイブリドーマは、このようなＴサプレッサー細胞と結合（associated）する、Ｔサプレッサー因子を分泌する。このようにＴｓｍが細胞の表面上のＴサプレッサー因子に特異的な抗体（すなわちＢ１６Ｇ）であるときの、これが入っているコンジュゲートとの反応を通して、このようなＴサプレッサー細胞集団が選択的に殺されることによって、Ｐ８１５腫瘍をもつマウスの中の腫瘍が小さくなっていくはずである。それゆえこのアッセイにおいて、ＤＢＡ／２マウスは、腫瘍を取り込むように、１０⁴Ｐ８１５細胞を右の脇腹に皮下注射される。８日目に、腫瘍が触診して分かるようになると（およそ２５〜４２ｍｍ²）マウスはランダムに８つのグループに分けられ、何も含まないもの、Ｈｐ又はＰｃ、Ｂ１６Ｇ−ＨｐまたはＢ１５Ｇ−Ｐｃ、Ｂ１６Ｇと薬剤、Ｂ１６Ｇ単独、又はＣ−ＭＡｂ−ＨｐもしくはＣ− ＭＡｂ−Ｐｃを含むような１５０μｌのＰＢＳを静脈内（IV）に注入される。Ｈｐのレベルは全ての場合１動物当り５０μｇであり、Ｂ１６Ｇは全ての場台３１０μｇである（これが適当な量である場合）。動物は暗所に２時間置かれ、そして３００〜８５０nm、２２．５mW/cm²の強光を照射される。動物はそして普通に扱われ、毎日を基本としてモニターされる。実施例８診断用のイメージング３２歳の女性患者は熱が上がり腹部の痛みを訴える。患者は効果もなく１週間抗生物質治療をうける。ＣＡＴスキャンは、異常部分を示すことはできない。ラジオイメージング検査がＴｃ−９９ｍラベルされたポルファシアニンを使ってなされる。２０ｍＣｉのラジオラベルされたポルファシアニンの注入がなされ、患者はＳＰＥＣＴモードのガンマカメラでスキャンされる。その患者の腹部のスキャンから、Ｔｃ−９９ｍが蓄積している中心部が示される。手術が行われ、Ｔｃ −９９ｍ活性のあった場所に膿瘍が見つけられる。実施例９ポルファシアニンの合成、図１１３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジピロメタンが実施例１の方法に従って調整された。１０倍過剰の２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（ＤＤＱ）が１０ｍｌの無水ＴＨＦ中の６９mgの３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５’−シアノジビロメタンに加えられた。できた溶液はすぐに暗緑色になった。残渣は実施例２の方法にしたがってクロマトグラフィーで分離された。空気酸化と比較して収量の有意な増加が得られた。収量：３２mg、４８％この化合物の分光学的データは前記実施例１で調製された化合物と同一である。実施例１０ポルファシアニンの合成、簡単にされた方法ポルファシアニンを合成するためのかわりの方法として、実施例１に従ってジアルデヒドが調製された。２５mgの３，３’−４，４’−テトラエチル−５，５ ’−ジホルミル−２，２’−ジヒロメタンが３０mlの乾燥エタノール中に懸濁された。生じたエタノール溶液は０℃で冷やされ、アンモニアガスが３０分間その溶液を通して泡立て通気された。ガスの引入口（in-let）が除かれ、フラスコは７２時間６０℃で油槽中に置かれた。反応は止められ、０℃で冷やされた。エタノールがロート−ヴァップ（ro to-vap）上で除かれ、残渣はジクロロメタンで中性のアルミナ（４％Ｈ₂Ｏが加えられた）上でクロマトグラフィーにより分離された。収量：４．６mg、２０％この化合物の分光学的データは前記実施例１で調製された化合物と同一である。もう１．５mgの産物がＤＤＱにより、より極性の成分の酸化から得られた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＤＵ 51/00 7431−4ＣＡ６１Ｋ 49/02 Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＳＫ (72)発明者ズィー、リリーカナダブイ６ティー１ダブリュ４、ブリティッシュコロンビア、バンクーバー、ダルハウジーロード 207―5600 (72)発明者ウィジェセケラ、ティラックアメリカ合衆国、ペンシルヴァニア 19343、グレンミルズ、コベントリーレイン 2106 (72)発明者ドルフィン、デイビッドカナダブイ６アール２アール２、ブリティッシュコロンビア、バンクーバー、ウェストトウェルブスアヴェニュー 4464

Claims

【特許請求の範囲】１．式のポルフィリンにおいて、Ｒ₁〜Ｒ₈が各々、独立した非干渉置換基であり、Ｒ₉ とＲ₁₀の各々が独立に−Ｈ又はであり、各々Ｘが独立に非干渉置換基であるポルフイリン。２．Ｒ₁〜Ｒ₈各々及び各Ｘが、−Ｈ、置換もしくは非置換基アルキル、アルケニル、アルキニル；置換もしくは非置換基アリール；アルキルもしくはアリールスルホニル；アルキルもしくはアリールシアノ；ハロゲン；シアノ；ニトロ；アミノ；カルボキシ；カルバルコキシ；及びそれらのエステル、アミド及び塩からなる群中より独立に選択される請求項１に記載の化合物。３．Ｒ₉とＲ₁₀がＨである請求項１又は２に記載の化合物。４．Ｒ₉及びＲ₁₀の一方がＨであり、もう一方がであり、又はＲ₉とＲ₁₀の両方がである請求項１又は２に記載の化合物。５．Ｒ₁〜Ｒ₈の各々が独立にエチル又はＨである請求項１〜４のいずれか１に記載の化台物。６．式Ｔｓｍ−Ｌ−Ｐｃで表されるコンジュゲートであって、Ｔｓｍは標的特異的モイエティを表し、Ｐｃは４００〜８５０nmの範囲に光の吸収極大をもつポルフアシアニンを表し、Ｌは共有結合又は共有結合を通してＴｓｍとＰｃに結台する架橋剤モイエティを表すコンジュケート。７．Ｔｓｍが免疫グロブリン叉は免疫グロブリンの断片であり、又は、ステロイドであり、又は、糖であり、又は、Ｔ細胞リセプターを含み、及び／又は、Ｌが共有結合を表す請求項６に記載のコンジュゲート。８．少なくとも１つの製薬的に受け入れることのできる賦形剤を含む混合物であって、請求項１〜５のいずれか１に記載の化合物又は請求項６又は７に記載のコンジユゲートを有効量含む特定の細胞又は組織に対し細胞毒性のある製薬的組成物。９．標的とされる細胞、組織又はウイルスの代謝を害し、破壊をもたらす方法における請求項１〜５のいずれか１に記載の化合物または請求項６または７に記載のコンジュゲートの使用であって、前記細胞、組織又はウイルスに有効量の前記化台物又はコンジュゲートを投与し、その投与された細胞、組織又はウイルスに４００〜８５０nmの範囲の波長の光を照射することを含む使用。１０．請求項１〜５のいずれか１に記載の化台物及び常磁性イオンを含む磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）コントラスト剤。１１．常磁性イオン要素がガドリニウム（III）またはマンガン（II）である請求項１０に記載の診断用コントラスト剤。１２．病気の組織を検出する方法における請求項１０又は１１に記載の薬剤の使用であって、そのような投与の必要な動物に前記コントラスト剤を投与し、そして動物内でのコントラスト剤の分布を観察することを含む使用。１３．請求項１〜５のいずれか１に記載の化合物及びテクネチウム、インジウム、ガリウムからなる群中より選択される放射性同位元素を含むラジオイメージング剤。１４．病気の組織を検出する方法における請求項１３に記載の薬剤の使用であって、そのような投与の必要な動物に前記ラジオイメージング剤を投与し、そして動物内でのラジオイメージング剤の分布を観察することを含む使用。１５．各Ｒが非干渉置換基であり、次に示す過程からなる請求項１に記載したポルフアシアニンを調製する方法。（ａ）粗製産物をつくるため、適当に置換された５，５’−ビスアミノメチル− ２，２’−ジビロメタンに１０倍過剰の２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ− １，４−ベンゾキノンを加え、（ｂ）アルミナカラム上でクロマトグラフィーにより粗製産物を精製し、そして、（ｃ）精製されたポルフアシアニンを乾燥状態になるまで溶媒を蒸発させる。１６．次に示す過程を含む請求項１に記載したポルフアシアニンを調製する方法。（ａ）乾燥メタノール中で適当に置換されたジホルミル−２，２’−ジビロメタンを懸濁し、（ｂ）過程（ａ）の溶液を通して、アンモニアガスを泡立て通気し、（ｃ）過程（ｂ）の産物を少なくとも７２時間の間、少なくとも６０℃で加熱し、（ｄ）過程（ｃ）の産物を０℃まで冷やし、（ｅ）アルミナカラム上でクロマトグラフィーにより粗製産物を精製し、そして、（ｆ）精製されたポルファシアニンを乾燥状態になるまで溶媒を蒸発させる。