KR0170623B1

KR0170623B1 - 페녹시페닐 사이클로펜테닐 하이드록시우레아

Info

Publication number: KR0170623B1
Application number: KR1019960700828A
Authority: KR
Inventors: 아끼요시 가와이; 로드니 더블유. 스티븐스
Original assignee: 알렌 제이. 스피겔; 화이자 인코포레이티드
Priority date: 1993-08-19
Filing date: 1994-08-15
Publication date: 1999-03-30
Also published as: CO4230229A1; FI943799A; CZ288358B6; MY111140A; TW448144B; EP0720598A1; IL110628A0; PE57194A1; US5792882A; RU2125987C1; DE69413831T2; ECSP941144A; BR9407314A; CA2169066C; IL110628A; CA2169066A1; ATE171939T1; DK0720598T3; CN1077568C; PL313037A1

Abstract

본 발명은 5-리폭시제나제 효소를 억제하는 능력을 갖고 하기 일반식(Ⅱ)의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염의 우회전성 이성질체인 신규 페닐치환된 사이클로펜테닐하이드록시우레아 화합물에 대한 것이다:

상기 식에서,

R¹은 수소, 플루오로 또는 클로로이고,

R²는 수소 또는 메틸이다.

이들 화합물은 포유동물의 염증성 질병, 알레르기 및 심혈관계 질병의 예방, 치료 또는 경감에 유용하고, 상기 질병의 치료를 위한 약학적 조성물의 활성성분으로 유용하다.

Description

[발명의 명칭]

페녹시페닐 사이클로펜테닐 하이드록시우레아

[기술적 분야]

본 발명은 신규 N-하이드록시우레아 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 화합물은 리폭시제나제 효소의 활성을 억제하고, 포유동물의 염증성 질병, 알레르기 및 심혈관 질환을 예방, 치료 또는 경감시키는데 유용하다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

[배경기술]

아라키돈산은 내인성 대사산물인, 프로스타사이클린, 트롬복세인 및 류코트라인을 포함한 프로스타글란딘의 여러 군들의 생물학적 전구체로 공지되어 왔다. 아라키돈산 대사의 제1단계는 아라키돈산 및 관련된 불포화 지방산이 포스포리파제 A2의 작용에 의해 막 인산지질에서 유리되는 것이다. 그런 다음, 유리 지방산은 사이클로옥시제나제에 의해 프로스타글란딘 및 트롬복세인으로 대사되거나, 리폭시제나제에 의해 하이드로퍼옥시 지방산이 되고 상기 하이드로퍼옥시 지방산은 더욱 대사되어 류코트라인이 될 수 있다. 류코트라인은 류마티스성 관절염, 통풍, 천식, 허혈성 재관류 손상, 건선 및 염증성 배변 질병을 포함하는 염증성 질병의 병리생태학에 깊이 연관되어 있다. 리폭시제나제를 억제하는 임의의 약제는 급성 및 만성 염증성 질병 둘모두에 대한 중요한 새로운 치료법을 제공할 것으로 기대된다.

최근에, 리폭시제나제에 대한 여러 고찰 논문이 보고되고 있다(마사문 및 멜빈(H. Masamune and L. S. Melvin, Sr.)의 문헌[Annual Reports in Medicinal Chemistry, 24(1989) pp 71-80(Academic Press)] 및 피츠시몬스 및 로카치(B. J. Fitzsimmons and J. Rokach)의 문헌 [Leukotrienes and Lipoxygenases, (1989) pp 427-502(Elsevier)] 참고.)

보다 구체적으로는 국제 특허 공개 제 WO 92/09567 호 및 제 WO 92/09566 호는 리폭시제나제 효소의 억제제로써 다양한 N-하이드록시우레아 및 하이드록사민산 화합물들을 개시한다. 이들은 하기의 구조형(I)의 화합물을 포함한다:

상기 식에서,

Ar 은 방향족기를 나타내고,

X 는 비-방향족 고리 시스템을 나타내고,

A 는 선택적인 탄화수소 이격자 기를 나타내고,

R 은 알킬 또는 선택적으로 치환된 아미노기이다.

제 WO 92/09567 호에서, 비-방향족 잔기 X 는 3내지 8개의 탄소원자를 가진 포화 카보사이클 고리이고, X기에서의 불포화가능성에 대한 언급은 없다. 제 WO 92/09566 호에서는, 비-방향족 잔기는 3 내지 8개의 탄소를 가진 카보사이클 고리로 도시되고, 상기는 선택적으로 하나의 이중 결합을 함유할 수 있다. 그러나, 제 WO 92/09566 호에서의 모든 사이클로알켄 화합물의 실시예들은 사이클로부텐 또는 사이클로헥센 화합물들이고 이들 불포화 화합물이 바람직하다는 제안은 없다.

다라서, 본 발명자가 X 가 사이클로펜테닐기이고 Ar 이 선택적으로 치환된 3-페녹시페닐 기인 일반식(I)을 갖는 N-하이드록시우레아 화합물의 작은 속이 리폭시제나제 억제제로 유리한 성질을 가진다는 것을 발견한 것은 놀랍다.

[발명의 간단한 설명]

본 발명은 하기 화학식(Ⅱ)를 갖는 N-하이드록시우레아 화합물의 우회전성 이성질체 및 그의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:

싱기 식에서,

R¹은 수소, 플루오르 또는 클로로이고,

R²는 수소 또는 메틸이다.

일반식(Ⅱ)의 화합물은 5-리폭시제나제 효소를 억제한다. 따라서, 이들은 5-리폭시제나제 억제제가 필요한 인간등의 포유동물의 의학적 질병의 치료에 유용하다. (+)이성질체가 알레르기성 질병 및 염증성 질병의 치료 또는 예방에 특히 유용하다. 본 발명은 또한 일반식(Ⅱ)의 화합물의 (+) 이성질체 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물을 또한 포함한다.

일반식(Ⅱ)의 화합물의 (+) 이성질체는 리폭시제나제 억제제로서 뛰어난 가능성을 보인다. 또한, 이들은 글루쿠론산화에 대해 뛰어난 대사적 안정성을 보인다.

본 발명의 특히 바람직한 화합물은 하기와 같다.

(+)-N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아

(+)-N-[3-(3-페녹시페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아, 및

(+)-N-[3-[3-(4-클로로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아

[ 발명의 상세한 설명]

우회전성 이성질체(또는 (+) 이성질체)라는 용어는 에탄올 용액에서 평면 편광면을 나트륨의 D 라인에서 시계방향으로 회전시키는 에난티오머를 의미한다.

일반식(Ⅱ)의 화합물들은 다양한 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. R¹및 R²는 앞서 정의하였다.

한가지 양태에서, 일반식(Ⅱ)의 화합물은 도식1에서 개설된 반응 단계에 따라 제조된다.

상기 단계에서 하이드록실아민(Ⅲ)을 반응-불활성 용매, 일반적으로 주변 온도 내지 환류 온도범위의 온도에서 적절한 트리알킬실릴 이소시아네이트 또는 메틸 이소시아네이트로 처리한다. 반응물 및/또는 생성물과 반응하지 않는 적절한 용매는 예를 들면, 테트라하이드로푸란, 디옥산, 페닐렌 클로라이드 또는 벤젠이다. 다른 공정은 (Ⅲ)을 벤젠 또는 톨루엔과 같은 반응 불활성 용매에서 기체성 염산으로 처리하고 이어서 포스진으로 처리한다. 반응 온도는 일반적으로 주위 온도 내지 용매의 비등점 사이의 범위이다. 중간체 염화 카바모일은 단리되지 않고 수성 암모늄 또는 메틸아민으로 동일 반응계에서 반응시킨다. 본 공정의 개질으로는, R²가 수소이면 (Ⅲ)의 산 부가염을 시아네이트 칼륨과 같은 알칼리 금속 시아네이트의 동몰량과 물에서 반응시킬 수 있다. 이렇게 수득한 일반식(Ⅱ)의 생성물을 표준 방법으로 단리하고, 정제는 재결정화 및 크로마토그래피와 같은 종래 방법으로 수행될 수 있다.

전술한 하이드록실아민(Ⅲ)은 상응하는 3-치화된 2-사이클로펜텐-1-온 또는 3-치환된 2-사이클로펜텐을 -1-올 화합물로부터 표준 합성 공정에 의해 제조될 수 있다. 예를 들면 적합한 카보닐 화합물은 그의 옥심으로 전환되고 난 후 적합한 환원제(예를 들면, 보크 등(R. F. Borchet al.)의 문헌[J. Am. Chem. Soc., 93,2897, 1971] 참고)에 의해 필요한 하이드록실아민(Ⅲ)로 환원된다. 선택되는 환원제는 시아노보로하이드라이드 나트륨 및 보란-피리딘,보란-트리에틸아민 및 보란-디메닐설파이드와 같은 보란 착화합물이지만 제한되지는 않는다. 트리플루오로 아세트산에 용해시킨 트리에틸실란 또한 사용할 수 있다.

적합한 2-사이클로펜텐-1-온은 다양한 상이한 방법으로 제조될 수 있다(제 WO 92/09566 호 참고). 사이클로펜텐온은 상응하는 알데하이드 및 메틸 비닐 케톤으로부터 스테터(Stetter)반응에 의해 쉽게 접근가능한 1,4-디케톤의 분자내 알돌 환원화에 의해 제조될 수 있다(예를 들면 노박 등(L. Novak et al.)의 문헌[Liebigs Ann. Chem., 509, 1986] 참고). 다르게는, 2-사이클로펜텐-1-온은 상응하는 아릴 할라이드 또는 트리플레이트를 3-스태닐-2-사이클로펜텐-1-온과 교차 커플링 반응시키거나 또는 Pd(PPh₃)₄, PdCL₂(PPh₃)₂등등과 같은 적합한 촉매 존재하에 역으로 반응시켜 제조될 수 있다.(예를 들면, 킬렐리 등(S. S. Kilely et al.)의 문헌[J. Heterocyclic Chem., 28, 1581, 1991] 참고).

다르게는, 전술한 하이드록실아민(Ⅲ)은 상응하는 2-사이클로 펜텐-1-올을 N, O-비스(t-부틸옥시카보닐)-하이드록실아민과 미츄노부(Nitsunobu)형 반응조건하에서 처리하고, N, O-보호된 중간 생성물을 산촉매 가수분해(예를 들면, 트리플루오로아세트산 사용)하여 쉽게 제조될 수 있다(일본 특허 제 1,045,344호 참고). 필요한 2-사이클로펜텐-1-올은 상응하는 2-사이클로펜텐-1-온을 나트륨 보로하이드라이드, 나트륨 보로하이드라이드세륨 트리클로라이드 등등과 같은 적합한 환원제를 사용하여 1,2-환원시켜서 쉽게 제조할 수 있다. 필요한 알콜 또한 예를 들면, 상응하는 아릴 할라이드 또는 트리플레이트를 Pd(PPh₃)₄등과 같은 적합한 촉매 존재하에서 2-사이클로펜텐-1-올과 커플링시켜 제조할 수 있다.

상기 전술한 대표적 공정에 의해 수득된 일반식(Ⅲ)의 하이드록실아민은 표준 방법에 의해 단리되고, 정제는 재결정화 및 크로마토 그래피와 같은 종래 수단으로 수행될 수 있다.

다른 양태에서는, 일반식(Ⅱ)의 화합물들은 도식 2에 예시된 바와 같이 제조된다.

상기식에서,

R³는 페닐이고,

R⁴는 페닐 또는 저급 알킬이다.

상기 공정에서, 일반식(Ⅳ)의 화합물은 상응하는 사이클로펜텐올 및 비스-카복시하이드록실아민 화합물, 바람직하게는 N, O-비스(페녹시-카보닐)하이드록실아민에서 제조되고, 이어서 암모늄, 암모늄 하이드록사이드 또는 메틸아민으로 처리하여(Ⅱ)로 전환된다(스튜와트 및 브룩스(A. O. Stewart and D. W. Brooks)의 문헌[J. Org. Chem., 57,5020, 1992]). 비록 반응은 조-용매 없이, 즉 필요한 아민 단독으로 수행될 수 있지만, 적합한 반응 용매는 예를 들면, 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로푸란, 벤젠 등과 같다. 반응 온도는 전형적으로 주위온도 내지 용매의 비등점 사이의 범위이다. 다르게는, 일반식(Ⅳ)의 화합물은 상응하는 아릴 할라이드 또는 트리플레이트를 Pd(PPh₃)₄등과 같은 적합한 촉매 존재하에서 2-사이클로펜텐-1-올에서 유도된 비스-카복시하이드록실아민과 직접 커플링시켜 제조된다. 이렇게 수득한 일반식(Ⅱ)의 생성물은 표준 방법으로 단리되고, 정제는 재결정화 및 크로마토그래피와 같은 종래 수단으로 수행될 수 있다.

일반식(Ⅱ)의 화합물의 우회전성 이성질체 각각은 이 분야에 숙련된 이들에게는 공지된 다양한 방법으로 수득될 수 있다. 예를 들면, 일반식(Ⅱ)의 (+)이성질체는 일반식(Ⅱ)의 라세미 혼합물의 성분을(Ⅰ) 키랄 크로마토그래피 컬럼 또는(2) 키랄 에스테르화제와 반응시키고 상기와 같이 수득한 부분 입체 이성질적 혼합물을 단리(예, 크로마토그래피에 의해)하여 N-하이드록시우레아를 분리시켜 편리하게 수득할 수 있다.

다르게는, 일반식(Ⅱ)의 키랄 화합물은 상응하는 일반식(Ⅲ)의 키랄 화합물로부터 본원에서 전술한 방법들에 의해 직접적으로 제조될 수 있다. 일반식(Ⅲ)의 키랄 화합물들은 예를 들면 적절한 키랄 2-사이클로펜텐-1-올로부터 쉽게 접근가능하다. 키랄 2-사이클로펜텐-1-올은 예를 들면 키랄 크로마토그래피 컬럼으로 라세미 혼합물에서 성분을 분리하거나 적절한 부분 입체 이성질체를 제조 및 분리하여 필요한 분리된 에난티오머를 얻거나, 비대칭 합성하는 것을 포함하는 이 분야에 숙련된 이들에게 공지된 다양한 방법으로 제조될 수 있다.

상기와 같이 수득된 일반식(Ⅱ)의 키랄 화합물들은 재결정화 등과 같은 종래 방법으로 정제될 수 있다.

일반식(Ⅱ)의 새로운 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은, 수성 용액 또는 적합한 유기 용매에 용해시킨 적절한 금속 하이드록사이드 또는 알콕사이드 또는 아민의 이론적 양과 상기 화합물들을 접속시켜서 쉽게 제조한다. 각각의 염은 침전 후 여과시키거나 또는 용매를 증발시켜 수득할 수 있다.

일반식(Ⅱ)의 화합물은 리폭시제나제 효소의 활성을 억제한다. 일반식(Ⅱ)의 화합물의 리폭시제나제 효소를 억제하는 능력은 포유동물에서 아라키돈산으로부터의 내인성 대사산물이 야기하는 증상들을 조절하는데 유용하다. 따라서, 화합물들은 아라키돈산 대사산물의 축적이 원인성 인자인, 즉 알레르기성 기관지 천식, 피부 질병, 류마티스성 관절염, 골관절염 및 혈전증과 같은 질병의 예방 및 치료에 매우 유용하다. 따라서, 일반식(Ⅱ)의 화합물 및 그들의 약학적으로 허용가능한 염은 인간의 염증성 질병의 치료 및 경감에 특히 유용하다.

일반식(Ⅱ)의 화합물이 리폭시제나제 효소의 활성을 억제하는 능력은 하기의 표준 공정에 의해 시험관 내 및 생체내에서 증명될 수 있다.

1) 헤파린 처리된 인간의 전체 혈액(HWB)을 이용한 시험관내 분석

억제도는 헤파린 처리한 인간의 전체 혈액을 이용하여 시험관 내에서 증명되어왔는데(British Journal of Pharmacology : (1990), 99, 113-118), 이는 상기 화합물이 아라키돈산의 5-리폭시제나제(LO) 대사를 억제하는 효과를 결정한다. 건강한 기증자로부터 얻은 헤파린 처리한 인간 전체 혈액의 분취액(1㎖)을 디메틸 설폭사이드(최종 농도 0.1%)에 용해시킨 시약으로 10분간 37℃에서 예비 향온처리하고, 칼슘 이오노포어(ionophore)인 A21387(60μM) 및 헤파라피드(Heparapid)(2.5%, 세끼쉬 케미칼 캄파니 리미티드(Sekisui Chemical Co. LTD.), 일본국)를 첨가하고 한온처리를 30분 더 계속하였다. 반응은 빙욕에 급속 냉각하여 종결시켰다. 헤파라피드에 의해 유도된 혈액-응고는 원심분리하여 제거하였다. 아세토니트릴(ACN, 1.5㎖) 및 PGB₂(200ng, 내부 표준으로 사용)를 상층액에 첨가하였다. 샘플들을 볼텍스(Voltex) 혼합기로 혼합하고, 침전된 단백질들은 원심분리하여 제거하였다. 상층액을 희석시켜 물에 용해시킨 15% ACN으로 만들어 예비 세척된 Sep-Pak C₁₈카트리지(워터스 어소시에이트(Waters Associates), 미국 미네소타 밀포드 소재)에 부하하고 70% 에탄올 4㎖로 아라키도네이트 대사산물들을 용출시켰다. 메탄올 추출액은 증발시키고, 잔기를 다시 250㎕의 67% ACN 에 녹였다.

ACN 용액(100㎕)을 역상 C₁₈컬럼(와코실(Wakosil) 5C18, 4.6×150㎜, 와코 퓨어 케미칼 인더스트리 리미티드(Wako Pure Chemical Industries LTD), 일본국)상에 주입하였다. 컬럼온도는 40℃이었다. HPLC 분석은 휴렛 패커드(Hewlett Packard)의 모델 1090MHPLC 시스템을 이용하여 수행하였다. 크로마토그래피는 2개의 상이한 이동상(이동상 A는 10% ACN, 0.1% 트리플루오로아세트산 및 0.05% 트리에틸아민으로 구성되고 : 이동상 B는 80% ACN, 0.1% 트리플루오로 아세트산 및 0.05% 트리에틸아민으로 구성되어있다)을 이용한 구배 용출에 의해 수행된다. 각각의 이동상은 헬륨가스로 계속 스파징(aparging)하였다. HPLC 구배는 하기와 같이 프로그램되었다(상기에서, A+B는 100이다), 0내지 9.7분 동안은, 이동상 A를 1㎖/분의 유동속도로 35내지 100% 직선 구배하였다. 용출된 생성물의 피크는 UV 흡광도로 정량하여(275nm 에서 LTB₄및 PGB₂: 235nm에서 HTT 및 5-HETE) PGB₂회수로 보정하였다. 선형 회귀를 IC₅₀값을 측정하기 위해 사용하였다.

본원의 실시예 1, 2 및 3에서 도시된 일반식(Ⅱ)의 (+) 이성질체는 리폭시제나제 활성을 억제하는 능력을 보기 위해 전술한 분석법으로 시험하였다. 실시예 1, 2 및 3의 (+) 이성질체는 약 0.5μM의 IC₅₀값을 보였다.

일반식(Ⅱ)의 화합물의 리폭시제나제를 억제하는 능력은 또한 문헌[Japanese J. Inflammation, 7 : 145-150(1987), Synthesis of leukotrienes by peritoneal macrophage]에 개시된 방법에 따라 래트의 복강 거주 세포를 사용하여 증명될 수 있는데, 상기는 상기 화합물이 아라키돈산의 대사에 미치는 영향을 결정한다.

2) 마이스에서 혈소판 활성 인자(PAF)에 의해 유도된 치사율에 대해 구강 투여한 시험 화합물의 효과를 측정하는 생체내 시스템

시험화합물을 ICR 마이스(숫놈)에게 구강 투여한 후의 생체내 효력은 하기 문헌에 개시된 바와 유사한 방법으로 PAF 치사율 분석법을 이용하여 결정되었다, 영, 말로니, 좁 및 클라크(J. M. Young, P. J. Maloney, S. N. Jubb and J. S. Clark)의 문헌[Prostaglandins, 30, 545(1985)], 크리스쿠올리 및 수비씨(M. Criscuoli and A. Subissi)의 문헌[Br. J. Pharmac., 90, 203(1987)], 및 쯔노다, 아베, 사꾸마, 가따야마 및 가따야마(H. Tsunoda, S, Abe, Y. Sakuma, S. Katayama and K. Katayama)의 문헌[Prostaglandins Leukotrienes and Essential Fatty Acids, 39,291(1990)]. PAF를 0.25% 소의 혈청 알부민(BSA)를 함유한 0.05㎎/㎖ 프로프라놀올-염수에 1.2㎍/㎖의 농도로 용해시키고, 마이스에 12㎍/㎏의 투여량으로 정맥내 주사하였다. 치사율은 PAF 주사 1시간 후에 결정하였다. 5-LO 억제제의 효과를 조사하기 위해, 화합물을 5% 트윈 80.5% EtOH-염수에 용해시켜 PAF 를 주사하기 45분 전에 구강(0.1㎖/10g)투여하였다. 선형 회귀를 ED₅₀값을 측정하기 위해 사용하였다. 상기 분석법에서, 실시예 1, 2 및 3의 일반식(II)의 (+)이성질체는 약 1 내지 10mg/kg 의 ED₅₀값을 가졌다.

3) 원숭이의 간 마이크로좀 시료를 사용한 시험관내 글루쿠론산화 속도 연구

구조형(I)의 하이드록시우레아의 주된 대사적 결말은 글루쿠론산화로 간주된다(스위니, 본스카, 마시니스트, 벨, 카터, 세파 및 넬란(D.J. Sweeny, J. Bonska, J. Machinist, R. Bell, G. Carter, S. Cepa, and H. N. Nellans)의 문헌[Drug Metabolism and Disposition, 20, 328(1992)]). 따라서, 글루쿠론산화에 대해 상대적으로 안정성이 있는 화합물이 개선된 생체내의 약학역학적 성질을 보일 것으로 기대된다. 본 발명의 화합물들의 글루쿠론산화에 대한 안정성을 하기에 개시된 바와 같이 시험관내에서 측정하였다.

숫놈 시노몰거스(cynomolgus) 원숭이(3 내지 4kg)에서 수득한 간을 -80℃에 저장하고 획득한지 6개월 이내에 사용하였다. 간을 0.25M 슈크로즈, 1mM EDTA, 10mM 트리스(pH 7.4)에 균질화하고 표준 원심분리 공정에 의해 미코로솜을 준비하였다(보크, 부크벨, 듀톤, 한니넨, 뮬더, 오웬스, 시에스트 및 테플리(K. W. Bock, B. Burcbell, G. Dutton, O. Hanninen, G. J. Mulder, I. Owens, G. Siest and T. Telphly)의 문헌[Biochem. Pharmacol., 32, 953(1983)]. 13×100㎜의 폴리프로필렌 튜브를 대사산물 교반 욕(TAITEC^R)에 넣어 37℃에서 항온처리하였다. 최종 항온처리 부피는 2.6㎖이고 하기를 함유하였다:

시험 화합물(10μM, 30μM, 100μM), 2.6㎎의 마이크로좀 단백질, 5mM MgC_l2, 0.025% 트라이톤 X-100, 50mM 트리스-염산(pH 8.0) 및 3mM UDP-글루쿠론산. 반응은 UDP-글루쿠론 산을 첨가하여 개시하였고, 200㎕의 항온처리 혼합물에 2㎖의 ISTD(1μM)/아세토니트릴을 첨가하여 종결시켰다. 침전물을 원심분리하여 제거하였고, 상층액을 따라내어 스피드 백(Speed Vac)으로 건조시켰다. 잔기는 75㎕의 아세토니트릴/물/암모늄 아세테이트(25:75:0.05)에 용해시켜 HPLC 분석하였다. HPLC 분리는 역상 C₁₈컬럼(와코실(WAKOSIL) 5C18, Ф2㎜×150㎜, 5㎛, 와코 퓨어 케미칼 인더스트리 리미티드, 일본국)을 사용하였고, 크로마토 그래피는 2개의 상이한 이동상을 이용하여 구배용출하였다. 이동상 A 는 0.006N 암모늄 아세테이트에 용해시킨 10% 아세토니트릴로 구성되어 있었고, 이동상 B는 0.006N 암모늄 아세테이트에 용해시킨 80% 아세토니트릴로 구성되어 있었다. 유동 속도는 0.35㎖/분이고, 용출은 260 내지 270nm 에서 모니터링되었다. 마이크로좀 단백질은 BSA를 표준으로한 바이오-래드(Bio-Rad) 단백질 정량에 의해 정량적으로 분석되었다. 시험화합물이 글루쿠론산화되는 동역학은 10내지 100μM의 농도 범위에서 결정되었다. 원숭이 마이크로좀에서 시험화합물의 글루코론산화는 미캘리스-맨튼(Michaelis-Menten) 동역학을 따른다. 시험 화합물의 V_max및 K_m은 미캘리스-맨튼 식을 이용하여 측정된다.

일반식(Ⅱ)의 화합물의 (+) 이성질체 및 (-) 이성질체 및 그의 혼합물은 리폭시제나제 효소에 대해 우수한 시험관내 및 생체내 생물학적 활성을 보인다. 그러나, 원숭이의 간 마이크로좀 시료를 이용한 시험관내 글루쿠론산화 시험은 (+)이성질체가 (-)이성질체보다 클루쿠론산화에 대해 훨씬 많이 안정하다는 것을 증명하였다. 또한, 일반식(Ⅱ)의 (+)이성질체는 제 WO 92/09566 호 및 제 WO 92/09567호에 개시된 구조적으로 연관된 페녹시페닐-사이클로펜틸 하이드록시우레아보다 글루쿠론산화에 대해 훨씬 안정하다. 더욱 또한, (+)이성질체는 제 WO 92/09566 호의 단순한 페닐사이클로부테닐 화합물 및 페닐사이클로헥세닐 화합물보다 LO 억제제로서 유리한 효능을 갖는다. 또한, (+)이성질체는 인간 치료에 사용하기에 특히 적합한 우수한 화학적 안정성을 보인다.

상기에 개시한 다양한 질병의 치료를 위해, 본 발명의 일반식(Ⅱ)의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염을 인간에 단독으로 또는 바람직하게는 표준 약학적 실시에 따른 약학적 조성물로서 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 혼합하여 투여할 수 있다. 화합물은 구강 투여, 비구강 투여를 포함한 다양한 종래 투여 경로 및 흡입으로 투여될 수 있다. 화합물이 인간의 염증성 질병을 치료하기 위해 구강 투여되면, 투여 범위는 약 0.1 내지 10mg/치료 대상의 몸무게 kg/일, 바람직하게는 약 0.5 내지 10mg/몸무게kg/일이고, 단독 또는 분할 투여될 것이다. 만약 비경구 투여가 바람직하다면, 효과적인 투여량은 약 0.1 내지 10mg/치료 대상의 몸무게 kg/일 것이다. 환자 증상의 유형 및 심각성 및 투여될 특정 화합물의 효력 뿐 아니라 각 환자의 나이 및 반응에 따라 투여량의 변화가 필요하므로, 때때로, 상기 범위를 능가한 투여량을 사용하는 것이 필요할 수 있다.

경구 투여의 경우, 본 발명의 화합물 및 그들의 약학적으로 허용가능한 염을 정제, 분말, 당제, 시럽, 캡슐, 수성 용액 또는 현탁액의 형태로 투여할 수 있다. 경구 사용을 위한 정제의 경우, 공통적으로 사용되는 담체는 락토즈 및 옥수수 전분을 포함한다. 또한, 스테아르산 마그네슘과 같은 윤활제를 일반적으로 첨가할 수 있다. 캡슐의 경우, 유용한 희석제는 락토즈 및 건조 옥수수 전분이다. 수성 현탁액이 경구 사용을 위해 필요하면, 활성 성분은 유화제 및 현탁제와 혼합된다. 원한다면, 임의의 감미료 및/또는 향료제를 첨가할 수 있다. 근육내, 복강내, 피하 및 정맥내 사용을 위해, 활성물질의 멸균된 용액은 일반적으로 제조되고, 용액의 pH는 적절하게 조절되고 완충되어야 한다. 정맥내 사용을 위해, 용매의 총농도를 시료가 등장액이 되도록 조절하여야 한다.

[실시예]

본 발명은 하기 실시예에 의해 예시된다. 그러나, 본 발명이 상기 실시예들의 특정한 세부에 제한되지 않음을 이해해야만 한다. 양성자 핵자기공명(NMR) 스펙트럼은 달리 명시되지 않으면 270MHz 에서 측정되고, 피크의 위치는 테트라메틸실란으로부터 하향장의 100만분의 일부(ppm)으로 표시된다. 피크의 형태는 하기와같이 표시된다:s-단일선, d-이중선, t-삼중선, m-다중선 및 br-넓음.

[실시예 1]

[(+)-N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아]

[A] 1-브로모-3-(4-플루오로페녹시)벤젠:

물(65㎖)에 용해시킨 수산화 칼륨(32g;0.485M)용액을 메탄올(160㎖)에 용해시킨 4-플루오로페놀(54.42g, 0.486M)의 교반되는 용액에 적가하였다. 적가를 종결한 후, 혼합물을 증발시키고 남아있는 고형물을 분쇄하여 N-메틸-2-피롤리돈(200㎖)에 취하였다. m-브로모플루오로벤젠(84.97g, 0.4855M)을 첨가하고 혼합물을 환류온도에서 하룻밤 가열하였다. 냉각후, 혼합물을 물(500㎖)에 부어서 Et₂O(500㎖×1, 200㎖×1)로 추출하고, 합한 유기층을 2M 수성 NaOH 용액(200㎖×2), 물(100㎖×1), 10% 수성 HCl 용액(200㎖×1), 물(100㎖×1) 및 염수(100㎖×1)로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 진공에서 농축시켜서 50g 의 조질 에테르를 제공하였다. 수득된 조질의 오일을 증류(b. p. 95 내지 115℃)하여 연한 노란색 오일로서 부제 화합물 [A] 38.53g(수율 30%)을 제공하였다.

[B] 3-(4-플루오로페녹시)벤즈알데하이드:

건조 THF(80㎖)에 용해시킨 1-브로모-3-(4-플루오로페녹시) 벤젠(38.5g ; 0.1442M)의 냉각되고(-75℃), 교반되는 용액에 n-부틸리튬(n-헥산에 용해시킨 1.63M, 68㎖ ; 0.11M)을 N₂하에서 적가하였다. -73℃에서 30분간 교반한 후에, -73℃에서 DMF(11.38g ; 0.1557M)를 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 30분 더 교반한 후에, 실온으로 난방하였다. 2M 수성 HCl(200㎖)을 혼합물에 첨가하여 전체를 Et₂O(100㎖×3)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(150㎖) 및 염수(150㎖)로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 진공하에서 농축하였다. 남아있는 오일을 에틸 아세테이트-n-헥산(1:10)으로 용출시킨 플래시 컬럼(SiO₂)으로 정제하여 무색의 오일로 부제 화합물 [B] 21.6g 을 수득하였다.

[C] 1-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-1,4-펜탄디온:

에탄올(60㎖)에 용해시킨 3-(4-플루오로페녹시)벤즈알데하이드(26.8g ; 0.124M)의 교반되는 용액에 메틸 비닐 케톤(8.32㎖ ; 0.1M), 3-벤질-5-(2-하이드록시에틸)-4-메틸티졸륨 클로라이드(5.93g ; 0.022M) 및 트리에틸아민(27.88㎖ ; 0.2M) 을 실온에서 첨가하였다. 6시간동안 교반한 후 , 휘발성물질을 제거하였다. 잔기에 물(200㎖)을 첨가하고 전체를 에틸 아세테이트(150㎖×2)로 추출하였다. 합한 유기층을 물(100㎖), 염수(100㎖)로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 진공하에서 농축하였다. 남아있는 오일을 에틸 아세테이트-n-헥산(1:5)으로 용출시킨 플래시 컬럼(SiO₂)으로 정제하여 연한 노란색 오일로 부제 화합물[C] 19.03g(수율 66.5%)을 수득하였다.

[D] 3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-온:

0.44M 수성 NaOH 용액(300㎖)에 용해시킨 1-[3-(4-플루오로 페녹시)페닐]-1,4-펜탄디온(19.03g ; 0.0665M) 용액을 24시간동안 환류하였다. 냉각한 후, 남아있는 고형물을 여과하여 수집하고 건조시켜, 갈색 고형물로서 부제 화합물 [D] 18g(정량 수율)을 수득하여, 더 정제하지 않고 사용하였다.

[E] 3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-온 옥심

에탄올-피리딘(75㎖-21㎖)에 용해시킨 3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐온(10g ; 0.0373M)의 교반된 용액에 하이드록실아민 하이드로클로라이드(3.37g ; 0.0485M)를 실온에서 첨가하였다. 4시간동안 교반한 후에, 용매를 제거하였다. 잔사에 희석한 수성 HCl(100㎖)를 첨가하고, 전체를 에틸 아세테이트(200㎖×1, 100㎖×1)로 추출하였다. 합친 유기층을 물(100㎖), 염수(100㎖)로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 진공하에서 농축하여, 갈색 오일로서 조질의 부제 화합물 [E] 12g(정량 수율)을 수득하여, 더 정제하지 않고 사용하였다.

[F] N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록실아민

아세트산(10㎖)에 용해시킨 3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐온 옥심(1.85g ; 6.54mM)의 교반된 용액에 나트륨 시아노보로하이드라이드(0.62g ; 9.81mM)을 실온에서 부분으로 첨가하였다. 2시간동안 교반한 후에, 추가의 나트륨 시아노보로하이드라이드(0.25g ; 4mM) 및 아세트산(5㎖)를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 아세트산을 진공에서 제거하였고, 잔사에 포화 수성 NaHCO₃(50㎖)을 첨가시켰다. 전체를 에틸 아세테이트(50㎖×1, 30㎖×1)로 추출하였고, 합친 유기층을 물(50㎖), 염수(50㎖)로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 진공하에서 농축하였다. 남아있는 오일을 CH₂Cl₂-에탄올(30:1)로 용출시킨 플래시 컬럼(SiO₂)으로 정제하여 연한 노란색 오일로 부제 화합물 [F] 1.07g 을 수득하였다.

[G] N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아

건조 THF(10㎖)에 용해시킨 N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-사이클로펜트-2-에틸]-N-하이드록실아민(1.07g ; 3.75mM)의 교반되는 용액에 트리메틸실릴 이소시아네이트(0.76g ; 5.63mM)를 실온에서 첨가시켰다. 1시간동안 교반한후, 에탄올(10㎖)을 첨가하였다. 휘발성 물질을 제거하였고, 남아있는 고형물을 에틸 아세테이트-n-헥산에서 재경정화시켜 무색의 고형물로서 부제 화합물 [G] 0.6g (수율 28%)을 수득하였다.

표제의 우회전성 에난티오머를 [G]로 수득한 라세미체의 키랄 정지상에서 분리하여 수득하였다 라세미체(50mg)를 키랄 팩(Pak) AS 컬럼(DIACEL CHEM. IND)을 사용한 HPLC(용출액 : n-헥산-에탄올(70 : 30)에 의해 분리하여, 에틸 아세테이트-n-헥산으로부터 재결정한후 덜 극성인 표제 에난티오머를 무색의 결정으로 12mg을 수득하였다.

m.p. 152-154℃ ; [α]_D= +59.6 (C=0.057, 에탄올)

[실시예 2]

[(+)-N-[3-(3-페녹시페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아]

N-[3-(3-페녹시페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아:

부제 화합물은 단계[C]에서 3-(4-플루오로페녹시)벤즈알데하이드 대신 3-페녹시벤즈알데하이드를 사용하여 실시예 1의 공정에 따라 제조하였다.

표제의 우회전성 에난티오머를, 라세미체 N-[3-(3-페녹시페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아를 키랄 정지상에서 분리하여 수득하였다. 라세미체(50mg)를 키랄 팩(Pak) AS 컬럼(DIACEL CHEM. IND)을 사용한 HPLC(용출액 : n-헥산-에탄올(70 : 30)에 의해 분리하여, 에틸 아세테이트-n-헥산으로부터 재결정한 후 덜 극성인 에난티오머를 무색의 결정으로 12mg 을 수득하였다.

[실시예 3]

[(+)-N-[3-[3-(4-클로로페녹시)페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아]

N-[3-[3-(4-클로로페녹시)페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아

부제 화합물을 단계 [C]에서 3-(4-플루오로페녹시)벤즈알데하이드 대신 3-(4-클로로페녹시)벤즈알데하이드를 사용하여 실시예1의 공정에 따라서 제조하였다.

[(+)-N-[3-(3-클로로페녹시)페닐)-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아]

표제의 우회전성 에난티오머를, 라세미체 N-[3-[3-(4-클로로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아를 키랄 정지상에서 분리하여 수득하였다. 라세미체(50mg)를 키랄 팩(Pak) AS 컬럼(DIACEL CHEM. IND)를 사용한 HPLC(용출액 : n-헥산-에탄올(70 : 30)에 의해 분리하여, 에틸 아세테이트-n-헥산으로부터 재결정한후 덜 극성인 에난티오머를 무색의 결정으로 12mg을 수득하였다.

Claims

하기 일반식의 화합물의 우회전성 이성질체 및 그의 약학적으로 허용가능한 염

상기식에서,R1 은 수소, 플루오로 또는 클로로이고,R2 는 수소 또는 메틸이다.
제1항에 있어서, R2가 수소인 화합물.
제1항에 있어서,N-[3-[3-(4-플루오로페녹시)페닐]-2-사이클로펜텐-1-일]-N-하이드록시우레아의 우회전성 이성질체인 화합물.
5-리폭시제나제 억제제를 필요로 하는 포유동물의 의학적 질병의 치료에 효과적인 양의 제1항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 5-리폭시제나제 억제제가 필요한 포유동물의 의학적 질병의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.
포유동물의 알레르기성 또는 염증성 질병의 치료에 효과적인 양의 제1항에 따른 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 포유동물의 알레르기성 또는 염증성 질병의 치료 또는 예방을 위한 약학 조성물.