JPWO2020223514A5

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Publication number: JPWO2020223514A5
Application number: JP2021564834A
Authority: JP
Publication date: 2023-05-11

Claims

配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むクラスター化された規則的な間隔の短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）ヌクレアーゼを含む、天然に存在しない組成物。
a) ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）分子及びトランス活性化ＣＲＩＳＰＲＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）分子、又は
b) 単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子、
を更に含み、
前記ｃｒＲＮＡ分子、ｔｒａｃｒＲＮＡ分子及び前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼは、一緒に天然に存在せず、前記ｃｒＲＮＡ分子又はｓｇＲＮＡ分子が標的領域内の配列に相補的なガイド配列部分を含む、請求項１に記載の組成物。
前記ガイド配列部分が２１～２２個のヌクレオチドからなる、請求項２に記載の組成物。
前記ガイド配列部分が１９～２３個のヌクレオチドからなる、請求項２に記載の組成物。
前記ガイド配列部分が１７～２４個のヌクレオチドからなる、請求項２に記載の組成物。
前記ｃｒＲＮＡ分子又はｓｇＲＮＡ分子が、配列番号３７の配列、配列番号３９の配列、又はＧＵＵＵＧＡＧＡＧの配列を含む反復配列部分を更に含む、請求項２に記載の組成物。
前記ｔｒａｃｒＲＮＡ分子又は前記ｓｇＲＮＡ分子が、配列番号３８、４０～４３及び１４９～１５４の配列から選択される１つ以上の配列を含むｔｒａｃｒＲＮＡ配列部分を更に含む、請求項２に記載の組成物。
前記ｓｇＲＮＡ分子が、配列番号４４、４５、８７及び８８に記載の配列の群から選択される配列を含むヌクレオチド配列部分を更に含む、請求項２に記載の組成物。
前記ｔｒａｃｒＲＮＡ分子が、前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼと複合体を形成することができるヌクレオチド配列を含む、請求項２に記載の組成物。
前記標的領域が、ＮＧＧ、ＮＡＧ及びＮＧＡから選択されるプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）部位に隣接する、請求項２に記載の組成物。
前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼが核局在化配列（ＮＬＳ）を更に含む、請求項１に記載の組成物。
前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼが２つ以上の核局在化配列を更に含む、請求項１に記載の組成物。
前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼが更なるタンパク質と連結している、請求項１に記載の組成物。
ドナーテンプレート分子を更に含む、請求項２に記載の組成物。
前記ドナーテンプレート分子がＤＮＡ分子である、請求項１４に記載の組成物。
前記ドナーテンプレート分子がＲＮＡ分子である、請求項１４に記載の組成物。
ｃｒＲＮＡ分子、ｔｒａｃｒＲＮＡ分子、ｃｒＲＮＡ分子及びｔｒａｃｒＲＮＡ分子の両者、又はｓｇＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ分子を更に含む、請求項１に記載の組成物。
(i) ヌクレアーゼ結合ＲＮＡヌクレオチド配列部分；及び
(ii) 標的ＤＮＡ配列内の配列に相補的な１７～２４個のヌクレオチド配列からなるガイド配列部分、
を含む単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子を更に含み、
前記ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼが、前記ｓｇＲＮＡ分子と複合体化して、前記標的ＤＮＡ配列とハイブリダイゼーション可能な複合体を形成することが可能である、請求項１に記載の組成物。
前記ガイド配列部分が２１～２２個のヌクレオチドからなる、請求項１８に記載の組成物。
前記ｓｇＲＮＡ分子が、配列番号３７～４５、８７～８８、１４９～１５４の配列及びＧＵＵＵＧＡＧＡＧの配列からなる群から選択される配列を含む、請求項１８に記載の組成物。
前記標的ＤＮＡ配列が、ＮＧＧ、ＮＡＧ及びＮＧＡからなる群から選択されるＰＡＭ部位に隣接する、請求項１８に記載の組成物。
前記ｓｇＲＮＡ分子が５０～２００塩基長を有する、請求項１８に記載の組成物。
細胞のゲノム内の標的部位におけるヌクレオチド配列を標的化又は改変する方法であって、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むクラスター化された規則的な間隔の短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）ヌクレアーゼをコードする核酸分子を、前記細胞に導入することを含む、方法。
(a) ｃｒＲＮＡ分子及びｔｒａｃｒＲＮＡ分子；又は
(b) ｓｇＲＮＡ分子、
を、前記細胞に導入することを更に含み、
前記ｃｒＲＮＡ分子又はｓｇＲＮＡ分子が標的領域内の配列に相補的なガイド配列部分を含む、請求項２３に記載の方法。
ドナーテンプレート分子を、前記細胞に導入することを更に含む、請求項２４に記載の方法。
ｃｒＲＮＡ分子、ｔｒａｃｒＲＮＡ分子、ｃｒＲＮＡ分子及びｔｒａｃｒＲＮＡ分子の両者、又はｓｇＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ分子を、前記細胞に導入することを更に含む、請求項２３に記載の方法。
哺乳類細胞のゲノム内の標的部位におけるヌクレオチド配列を標的化又は改変する方法であって、請求項１に記載の組成物を前記細胞に導入することを含み、
前記組成物が、標的ＤＮＡ部位内の配列に相補的な１７～２４個のヌクレオチドのガイド配列部分を含む単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）分子を更に含み、前記標的ＤＮＡ部位が、ＮＧＧ、ＮＡＧ及びＮＧＡからなる群から選択されるＰＡＭ部位に隣接する、方法。
前記ガイド配列部分が２１～２２個のヌクレオチドからなる、請求項２７に記載の方法。
前記ｓｇＲＮＡ分子が、配列番号３７～４５、８７～８８、１４９～１５４の配列及びＧＵＵＵＧＡＧＡＧからなる群から選択される配列を更に含む、請求項２７に記載の方法。
(iii) ドナーテンプレート分子を、前記細胞に導入することを更に含む、請求項２７に記載の方法。
前記ドナーテンプレート分子がＤＮＡ分子である、請求項３０に記載の方法。
前記ドナーテンプレート分子がＲＮＡ分子である、請求項３０に記載の方法。
配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含むクラスター化された規則的な間隔の短い回文配列反復（ＣＲＩＳＰＲ）ヌクレアーゼをコードする操作された核酸分子を含む組成物。
前記操作された核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項３３に記載の組成物。
前記操作された核酸分子がｍＲＮＡ分子である、請求項３３に記載の組成物。
前記操作された核酸分子が、単一ガイドＲＮＡを更にコードする、請求項３３に記載の組成物。
単一ガイドＲＮＡ分子、ｃｒＲＮＡ分子及び／又はｔｒａｃｒＲＮＡ分子をコードする第２の核酸分子を更に含む、請求項３３に記載の組成物。
前記第２の核酸分子がＤＮＡ分子である、請求項３７に記載の組成物。
変異障害を有する対象を治療する方法であって、請求項２に記載の組成物を、前記対象の細胞に導入することを含む、方法。