JPWO2020223236A5 - - Google Patents

Claims (18)

1. 配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列を含むカプシドタンパク質を含むＡＡＶカプシドを有し、前記ＡＡＶカプシド中に、異種核酸配列を含むベクターゲノムがパッケージングされている、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）。
2. 配列番号２、配列番号４または配列番号６をコードする核酸配列の発現によって産生されるカプシドタンパク質を含むカプシドを有し、前記カプシド中に、異種核酸配列を含むベクターゲノムがパッケージングされている、組換えＡＡＶ。
3. 前記カプシドタンパク質が、配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５か、または配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５と少なくとも９０％、少なくとも９５％少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列、によってコードされる、請求項１に記載の組換えＡＡＶ。
4. ５’ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）配列および３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列、ならびに調節配列と作動可能に連結される異種核酸配列をさらに含み、前記調節配列が、標的細胞において前記異種核酸配列によってコードされる産物の発現を指示する、請求項２または３に記載の組換えＡＡＶであって、
   任意選択的に、前記ＡＡＶ ＩＴＲ配列が、ＡＡＶｒｈ．９２、ＡＡＶｒｈ．９３、またはＡＡＶｒｈ．９１．９３以外のＡＡＶ由来であり、
   任意選択的に、前記５’ＡＡＶ 配列および３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列が、ＡＡＶ２由来である、
   組換えＡＡＶ。
5. 前記ＡＡＶカプシドが、
   （１）配列番号２の１～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ１タンパク質、配列番号１から産生されるｖｐ１タンパク質、もしくは配列番号２の１～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号１と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ１タンパク質から選択されるｖｐ１タンパク質の異種集団、
   配列番号２の少なくとも約アミノ酸１３８～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ２タンパク質、配列番号１の少なくともヌクレオチド４１２～２１９９を含む配列から産生されるｖｐ２タンパク質、もしくは配列番号２の少なくとも約アミノ酸１３８～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号１の少なくともヌクレオチド４１２～２１９９と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ２タンパク質から選択されるｖｐ２タンパク質の異種集団、および
   配列番号２の少なくとも約アミノ酸１９７～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ３タンパク質、配列番号１の少なくともヌクレオチド５８９～２１９９を含む配列から産生されるｖｐ３タンパク質、もしくは配列番号２の少なくとも約アミノ酸１９７～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号１の少なくともヌクレオチド５８９～２１９９と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ３タンパク質から選択されるｖｐ３タンパク質の異種集団か、または
   （２）配列番号２のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集団、配列番号２の少なくとも約アミノ酸１３８～７３３のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集団、および配列番号２の少なくともアミノ酸１９７～７３３をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集団
   を含む、ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、前記ｖｐ１、ｖｐ２、およびｖｐ３タンパク質が、配列番号２のアスパラギン－グリシン対中に少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する亜集団を含み、任意選択的に、質量分析で決定される、他の脱アミド化アミノ酸を含む亜集団をさらに含み、前記脱アミド化が、アミノ酸変化をもたらす、請求項２に記載の組換えＡＡＶであって、
   任意選択的に、前記カプシドタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号１であるか、または配列番号１と少なくとも８０％の同一性を共有する配列である、
   組換えＡＡＶ。
6. 前記ＡＡＶカプシドが、
   （１）配列番号４の１～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ１タンパク質、配列番号３から産生されるｖｐ１タンパク質、もしくは配列番号４の１～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号３と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ１タンパク質から選択されるｖｐ１タンパク質の異種集団、
   配列番号４の少なくとも約アミノ酸１３８～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ２タンパク質、配列番号３の少なくともヌクレオチド４１２～２１８４を含む配列から産生されるｖｐ２タンパク質、もしくは配列番号４の少なくとも約アミノ酸１３８～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号３の少なくともヌクレオチド４１２～２１８４と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ２タンパク質から選択されるｖｐ２タンパク質の異種集団、および
   配列番号４の少なくとも約アミノ酸１９９～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ３タンパク質、配列番号３の少なくともヌクレオチド５９５～２１８４を含む配列から産生されるｖｐ３タンパク質、もしくは配列番号４の少なくとも約アミノ酸１９９～７２８の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号３の少なくともヌクレオチド５９５～２１８４と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ３タンパク質から選択されるｖｐ３タンパク質の異種集団、または
   （２）配列番号４のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集団、配列番号４の少なくとも約アミノ酸１３８～７２８のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集団、および配列番号４の少なくともアミノ酸１９９～７２８をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集団を含む、ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、前記ｖｐ１、ｖｐ２、およびｖｐ３タンパク質が、配列番号４のアスパラギン－グリシン対中に少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する亜集団を含み、任意選択的に、質量分析で決定される、他の脱アミド化アミノ酸を含む亜集団をさらに含み、前記脱アミド化が、アミノ酸変化をもたらす、請求項２に記載の組換えＡＡＶであって、
   任意選択的に、前記カプシドタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号３であるか、または配列番号３と少なくとも８０％の同一性を共有する配列である、
   組換えＡＡＶ。
7. 前記ＡＡＶカプシドが、
   （１）配列番号６の１～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ１タンパク質、配列番号５から産生されるｖｐ１タンパク質、
   もしくは配列番号６の１～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号５と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ１タンパク質から選択されるｖｐ１タンパク質の異種集団、
   配列番号６の少なくとも約アミノ酸１３８～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ２タンパク質、配列番号５の少なくともヌクレオチド４１２～２１９９を含む配列から産生されるｖｐ２タンパク質、もしくは配列番号６の少なくとも約アミノ酸１３８～７３８の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号５の少なくともヌクレオチド４１２～２１９９と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ２タンパク質から選択されるｖｐ２タンパク質の異種集団、
   配列番号６の少なくとも約アミノ酸２０３～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現により産生されるｖｐ３タンパク質、配列番号５の少なくともヌクレオチド６０７～２１９９を含む配列から産生されるｖｐ３タンパク質、もしくは配列番号６の少なくとも約アミノ酸２０３～７３３の予測されたアミノ酸配列をコードする配列番号５の少なくともヌクレオチド６０７～２１９９と少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ３タンパク質から選択されるｖｐ３タンパク質の異種集団、ならびに／または
   （２）配列番号６のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集団、配列番号６の少なくとも約アミノ酸１３８～７３３のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集団、および配列番号６の少なくともアミノ酸２０３～７３３をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集団を含む、ＡＡＶカプシドタンパク質を含み、前記ｖｐ１、ｖｐ２、およびｖｐ３タンパク質が、配列番号６のアスパラギン－グリシン対中に少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する亜集団を含み、任意選択的に、質量分析で決定される、他の脱アミド化アミノ酸を含む亜集団をさらに含み、前記脱アミド化が、アミノ酸変化をもたらす、請求項２に記載の組換えＡＡＶであって、
   任意選択的に、前記カプシドタンパク質をコードする前記核酸配列が、配列番号５であるか、または配列番号５と少なくとも８０％の同一性を共有する配列である、
   組換えＡＡＶ。
8. 請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶと、生理学的に適合する担体、緩衝液、アジュバント、および／または希釈剤と、を少なくとも含む、組成物。
9. 前記組成物が、
   （ａ）髄腔内送達用に製剤化され、前記ベクターゲノムが、中枢神経系への送達用の遺伝子産物をコードする核酸配列を含むか、
   （ｂ）静脈内送達用に製剤化されるか、または
   （ｃ）鼻腔内送達用または筋肉内送達用に製剤化される、
   請求項８に記載の組成物。
10. 所望の遺伝子産物を、それを必要とする対象に送達するための、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ。
11. 所望の遺伝子産物を、それを必要とする対象に送達するための、医薬組成物、薬剤もしくはきっとの製造における、請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶ、または請求項８または９に記載の組成物、の使用。
12. 請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶを産生するために有用な組換えＡＡＶ産生システムであって、前記産生システムが、
    （ａ）配列番号２、配列番号４、または配列番号６のアミノ酸配列をコードする核酸配列と、
    （ｂ）ＡＡＶカプシドへのパッケージングに好適な核酸分子であって、前記核酸分子が、少なくとも１つのＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）配列、および宿主細胞における産物の発現を指示する配列と作動可能に連結される遺伝子産物をコードする非ＡＡＶ核酸配列を含む、核酸分子と、
    （ｃ）前記ＡＡＶカプシド中に前記核酸分子をパッケージングすることを可能にするのに十分なＡＡＶ ｒｅｐ機能およびヘルパー機能と、を含み、
    任意選択的に、前記（ａ）の核酸配列が、少なくとも配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５を含むか、または配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５と少なくとも７０％の同一性を共有する配列を含む、
    システム。
13. 組換えＡＡＶを生成する方法であって、宿主細胞を培養するステップを含み、前記宿主細胞が、（ａ）配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列をコードする配列を含む核酸分子と、（ｂ）機能的なｒｅｐ遺伝子と、（ｃ）５’ＡＡＶ ＩＴＲ配列、３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列、および導入遺伝子を含むミニ遺伝子と、（ｄ）ＡＡＶカプシドへの前記ミニ遺伝子のパッケージングを可能にするのに十分なヘルパー機能と、を含み、
    任意選択的に、前記配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列をコードする配列が、配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５の配列を含むか、または配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５と少なくとも９０％、少なくとも９５％少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列を含む、
    方法。
14. 請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶで形質導入された宿主細胞。
15. 細胞に導入遺伝子を送達する方法であって、前記細胞を請求項１～７のいずれか一項に記載の組換えＡＡＶと接触させるステップを含み、前記組換えＡＡＶが、前記導入遺伝子を含む、方法。
16. 配列番号２、配列番号４または配列番号６のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含むプラスミドであって、
    任意選択的に、前記核酸配列が、配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５の配列を含むか、配列番号１、配列番号３もしくは配列番号５を含む配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列を含む、プラスミド。
17. 請求項１６に記載のプラスミドを用いてトランスフェクトされた、パッケージング細胞株。
18. 組換えＡＡＶを産生するための請求項１７に記載のパッケージング細胞株の使用。