JPWO2020079223A5

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Publication number: JPWO2020079223A5
Application number: JP2021521207A
Authority: JP
Publication date: 2022-09-26
Anticipated expiration: 2039-10-18

Claims

少なくとも１つの一価または多価不飽和脂肪族アルデヒドを調製するための方法であって、
（１）少なくとも１つの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）基質と、
配列番号５４から選択されるコンセンサス配列パターンを含む、または
ａ）ＡＫｘｘｘｘｘＡＤｘｘｘｘｘｘｘｘＨｘｘｘｘＨｘｘｘｘＰｘＡ（配列番号２４０）、
ｂ）ＶｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＨｘｘｘＮｘｘＱｘｘＹｘｘｘｘｘＮ（配列番号２４１）、
ならびに
ｃ）ＬｘｘｘｘｘｘＩｘｘｘＮｘｘｘｘｘｘＹｘｘｘｘＰｘｘｘｘｘＳＩ（配列番号２４２）、もしくは
ｄ）ａ）、ｂ）、およびｃ）からの任意の組み合わせ
から選択される配列番号５４の少なくとも１つの部分的コンセンサス配列パターンを含むアミノ酸配列を含むリポキシゲナーゼの酵素活性を含み、
各アミノ酸残基ｘが、互いに独立して、任意の天然アミノ酸残基から選択され得る、
ポリペプチドと
を接触させて、
それによって、前記少なくとも１つのＰＵＦＡ化合物を、少なくとも１つの一価または多価不飽和脂肪族アルデヒドを含む反応生成物に変換するステップと、
（２）任意選択的に、ステップａ）で得られる少なくとも１つの一価または多価不飽和脂肪族アルデヒドを単離するステップと
を含む、方法。
前記ポリペプチドが、
配列番号５３から選択されるコンセンサス配列パターンを含む、または
ａ）ＬｘｘｘｘｘＹｘｘｘｘｘＸ_１ｘｘｘｘｘｘＸ_２ＧｘｘｘｘｘｘｘＫｘＬＰｘＰｘｘｘＦｘＷｘｘｘＸ_３ｘｘｘＰｘｘＩ（配列番号２４３）、
ｂ）ＷｘｘＡＫｘＣｘＱｘＡＤｘｘＨｘＥｘｘｘＨｘｘｘｘＨｘｘＭｘＰｘＡ（配列番号２４４）、
ｃ）ＧｘＶｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＣｘＰｘＨｘｘｘＮｘｘＱｘｘＹｘｘｘｘｘＮＭＰｘＡｘＹ（配列番号２４５）、
ｄ）ＱｘｘｘｘｘｘＬｘｘｘｘｘＤｘｘＧｘＹｘｘｘＸ_４Ｆ（配列番号２４６）、
ｅ）ＱｘｘＬｘｘｘｘｘｘＩｘｘｘＮｘｘＲｘｘｘＹｘｘｘｘｘｘｘｘｘＮＳＩ（配列番号２４７）、もしくは
ｆ）ａ）～ｅ）の任意の組み合わせ
から選択される配列番号５３の少なくとも１つの部分的コンセンサス配列パターンを含むアミノ酸配列を含むリポキシゲナーゼの酵素活性を含み、
各アミノ酸残基ｘが、互いに独立して、任意の天然アミノ酸残基から選択され得て、
Ｘ_１が、０～７個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表し、
Ｘ_２が、０または１個の天然アミノ酸残基を表し、
Ｘ_３が、０～７個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表し、かつ
Ｘ_４が、０～８個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表す、
請求項１記載の方法。
前記ポリペプチドが、
配列番号５２から選択されるコンセンサス配列パターンを含む、または
ａ）ＬｘｘｘｘｘＹｘｘｘｘｘＸ_１ｘｘｘｘｘｘＸ_２ＧＧｘｘｘｘｘｘＫｘＬＰｘＰｘＡｘＦｘＷｘｘｘＸ_３ｘｘｘＰｘｘＩ（配列番号２４８）、
ｂ）ＷｘｘＡＫｘＣｘＱｘＡＤｘＮＨｘＥｘｘｘＨｘｘｘＴＨｘＶＭｘＰｘＡｘｘＴ（配列番号２４９）、
ｃ）ＧｘＶｘＧｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＬｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘＣｘＰｘＨｘｘｘＮｘｘＱｘｘＹｘｘｘｘｘＮＭＰｘＡｘＹ（配列番号２５０）、
ｄ）ＱｘｘｘｘｘｘＬｘｘｘｘＹＤｘＬＧｘＹｘｘｘＸ_４Ｆ（配列番号２５１）、
ｅ）ＦＱｘｘＬｘｘｘｘｘｘＩｘｘｘＮｘｘＲｘｘｘＹｘｘｘｘＰｘｘｘｘＮＳＩ（配列番号２５２）、もしくは
ｆ）ａ）～ｅ）の任意の組み合わせ
から選択される配列番号５２の少なくとも１つの部分的コンセンサス配列パターンを含むアミノ酸配列を含むリポキシゲナーゼの酵素活性を含み、
各アミノ酸残基ｘが、互いに独立して、任意の天然アミノ酸残基から選択され得て、
Ｘ_１が、０～７個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表し、
Ｘ_２が、０または１個の天然アミノ酸残基を表し、
Ｘ_３が、０～６個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表し、かつ
Ｘ_４が、０～８個の同一のまたは異なる天然アミノ酸残基を表す、
請求項１記載の方法。
前記ポリペプチドが、
ａ）配列番号３、６、９、１２、または１５、
ｂ）配列番号１８、
ｃ）配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、または５０、
ｄ）ａ）、ｂ）、またはｃ）の配列のうちの少なくとも１つに対して少なくとも４０％の配列同一性を有し、かつリポキシゲナーゼの前記酵素活性を保持するアミノ酸配列、ならびに
ｅ）特に配列番号２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２８４から選択されるアミノ酸配列を含む変異体から選択される、リポキシゲナーゼの前記酵素活性を保持するいずれかのポリペプチドｃ）の単一変異体および多重変異体
から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１から３までのいずれか１項記載の方法。
前記ポリペプチドが、二機能性リポキシゲナーゼの酵素活性、特に、リポキシゲナーゼ活性とヒドロペルオキシドリアーゼ活性との組み合わせの酵素活性を含む、請求項１から４までのいずれか１項記載の方法。
前記ポリペプチドが、少なくとも１つのＰＵＦＡ、特にω－３およびω－６ＰＵＦＡから選択される少なくとも１つのＰＵＦＡを、少なくとも１つの一価または多価不飽和脂肪族アルデヒド、特に少なくとも１つの多価不飽和脂肪族Ｃ_１０アルデヒド、より具体的にはデカジエナールおよびデカトリエナールから選択されるものに変換する能力を含む、請求項１から５までのいずれか１項記載の方法。
前記デカジエナールが、２Ｅ，４Ｅ－デカジエナールおよび２Ｅ，４Ｚ－デカジエナールならびにそれらの混合物から選択され、前記デカトリエナールが、２Ｅ，４Ｅ，７Ｚ－デカトリエナールおよび２Ｅ，４Ｚ，７Ｚ－デカトリエナールならびにそれらの混合物から選択される、請求項６記載の方法。
前記ＰＵＦＡが、Ｃ_１６～Ｃ_２２－ＰＵＦＡから、特にＣ_１６～Ｃ_２２－ＰＵＦＡから、より具体的にはω－３Ｃ_１６～Ｃ_２２－ＰＵＦＡおよびω－６Ｃ_１６～Ｃ_２２－ＰＵＦＡから、例えば、ω－３Ｃ_１８～Ｃ_２０－ＰＵＦＡおよびω－６Ｃ_１８～Ｃ_２０－ＰＵＦＡから、ならびに例えば、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ）－ヘキサデカ－４，７，１０，１３－テトラエン酸、ＳＤＡ、ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＧＬＡ、およびＡＲＡから選択される、請求項１から７までのいずれか１項記載の方法。
ステップａ）を、酸素の存在下で細胞培養物においてインビボで、または酸素の存在下で液体反応培地においてインビトロで実施する、請求項１から８までのいずれか１項記載の方法。
得られた一価もしくは多価不飽和脂肪族アルデヒドを化学的もしくは酵素的に異性化するステップ、または得られた一価もしくは多価不飽和脂肪族アルデヒドを対応するアルコールもしくはヒドロカルビルエステルに化学的もしくは酵素的に変換するステップをさらに含む、請求項１から９までのいずれか１項記載の方法。
リポキシゲナーゼの酵素活性を含むポリペプチドであって、
ａ）配列番号３、６、９、１２、または１５、
ｂ）配列番号１８、
ｃ）配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、または５０、
ｄ）ａ）、ｂ）、またはｃ）の配列のうちの少なくとも１つに対して少なくとも４０％の配列同一性を有し、かつリポキシゲナーゼの前記酵素活性を保持するアミノ酸配列、ならびに
ｅ）特に配列番号２５４、２５６、２５８、２６０、２６２、２６４、２６６、および２８４から選択されるアミノ酸配列を含む変異体から選択される、リポキシゲナーゼの前記酵素活性を保持するいずれかのポリペプチドｃ）の単一変異体および多重変異体
から選択されるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
請求項１１記載のポリペプチドまたはその相補体をコードする、核酸。
ａ）配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、および１４、
ｂ）配列番号１６および１７、
ｃ）配列番号１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、および７４、
ｄ）ａ）、ｂ）、またはｃ）の配列の少なくとも１つに対して少なくとも４０％の配列同一性を有し、かつリポキシゲナーゼの前記酵素活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
ｅ）特に配列番号２５３、２５５、２５７、２５９、２６１、２６３、２６５、および２８３から選択される、リポキシゲナーゼの前記酵素活性を保持するポリペプチドをコードするいずれかの配列ｃ）の単一変異体および多重変異体をコードするヌクレオチド配列、
ｆ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、またはｅ）のうちのいずれかの配列の相補体
から選択されるコードヌクレオチドを含む、請求項１２記載の核酸。
２Ｅ，４Ｚ－デカジエナール、２Ｅ，４Ｅ－デカジエナール、２Ｅ，４Ｚ，７Ｚ－デカトリエナール、および２Ｅ，４Ｅ，７Ｚ－デカトリエナールから選択される少なくとも２つの不飽和Ｃ_１０アルデヒド異性体の組み合わせであって、２Ｅ，４Ｅ－デカジエナールと２Ｅ，４Ｚ－デカジエナールとの間の特定の比率が３：１～１：９であり、２Ｅ，４Ｚ，７Ｚ－デカトリエナールと２Ｅ，４Ｅ，７Ｚ－デカトリエナールとの間の特定の比率が３：１～１：９である、組み合わせ。
食品または飼料組成物を製造するためのフレーバー成分としての、請求項１から１０までのいずれか１項記載の方法によって得られる、一価もしくは多価不飽和脂肪族アルデヒド、または少なくとも２つのそのようなアルデヒドの混合物、ならびに／または対応する変換生成物およびそれらの混合物、または請求項１４記載の異性体組み合わせの使用。
請求項１５に定義されている少なくとも１つのフレーバー成分が補われた、食品または飼料組成物。