JPWO2019189331A1

JPWO2019189331A1 - 新規ｋ９５−５９０１−１物質およびその製造方法

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Publication number: JPWO2019189331A1
Application number: JP2020509177A
Authority: JP
Inventors: 大村　智; 智大村; 塩見　和朗; 和朗塩見; 美穂子森; 厚子松本; 定彦鈴木; 千絵中島; 山口　智之; 智之山口
Original assignee: Hokkaido University NUC; Kitasato Institute
Current assignee: Hokkaido University NUC; Kitasato Institute
Priority date: 2018-03-28
Filing date: 2019-03-27
Publication date: 2021-04-15
Also published as: WO2019189331A1

Abstract

本発明者らは微生物培養液中から多剤耐性結核菌に有効な抗生物質を探索した結果、放線菌アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１の生産物の中から、以下の構造を有する新規物質Ｋ９５−５９０１−１を発見した。本物質は多剤耐性結核菌に対してもマイクロモル以下の低濃度で増殖阻害活性を示し、かつ細胞毒性は非常に弱い。よって、本発明はこのような知見に基づいて新規の結核菌の増殖阻害活性物質を提供するものである。【選択図】なし

Description

本発明は、結核菌の増殖阻害活性を有する化合物、及び当該化合物を含有する医薬品及び動物薬の分野に関する。

２類感染症に指定されている結核は３大感染症の１つであり、単一の感染症としてはＨＩＶ／ＡＩＤＳに続いて世界で２番目に死亡者数が多い疾患である。１，０４０万人の結核患者がいると報告され、年間１７０万人が結核により死亡している（２０１６年、ＷＨＯ）。またＨＩＶ感染者において、結核はその死因の５分の１を占めている。結核の治療に関しては、第一選択薬として、リファンピシン、イソニアジド、ピラジナミド、ストレプトマイシン、エタンブトールが、第二選択薬として、レボフロキサシン、カナマイシン、エチオナミド、エンビオマイシン、パラアミノサリチル酸、サイクロセリンが使用されており、３剤以上の併用で用いられる。

近年、これらの治療薬に耐性な多剤耐性結核が、蔓延傾向を示している。第一選択薬であるリファンピシンに耐性な症例も年間６０万件に上り、そのうち４９万件は多剤耐性になっていると考えられている。さらに多剤耐性結核や既存の抗結核薬が全く効果を示さない超多剤耐性結核の出現が世界の半数以上の国々で見られ、これらの対策は国際社会において喫緊の課題となっている。

しかし、これらの治療薬により先進国における新規発生患者数が減少したことに伴い、新規の抗結核薬の開発は減少し、４０年間で新規の抗結核薬は１剤も上市されていない。多剤耐性結核ならびに超多剤耐性結核の対策の一つとして、これらに対して有効な、従来の治療薬とは構造や作用機構の異なる新しい治療薬の開発が求められている。

このような抗結核薬として、ニトロイミダゾール系化合物、ＣＰＺＥＮ−４５／カプラザマイシン類、及びＣｌｐプロテアーゼ攪乱物質が検討されている（非特許文献１）。Ｃｌｐプロテアーゼ攪乱物質の一種であるサイクロマリン（ｃｙｃｌｏｍａｒｉｎ）は海洋由来放線菌のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．から得られたヘプタペプチドである。サイクロマリンは、結核菌ＣｌｐのＣｌｐＣ１サブユニットに作用し、機能を暴走させて細胞死を誘導する。イラマイシンは深海由来のＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｔｒａｔｕｓ
ＳＣＳＩＯＺＨ１６から単離されたサイクロマリンの類似化合物であり、同様にＣｌｐプロテアーゼ攪乱物質であると考えられている。イラマイシンの複数の同族体のうちイラマイシンＣは以下の構造で表される化合物であるが、本化合物の薬剤耐性結核菌（ＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒｖ）に対する活性は９．６μＭと低いことが報告されている（非特許文献２）。

五十嵐雅之、化学と生物；５４（１）：３７−４２（２０１６）ＪｕｎｙｉｎｇＭａら、ｎａｔｕｒｅｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ；ｖｏｌｕｍｅ８，Ａｒｔｉｃｌｅｎｕｍｂｅｒ：３９１（２０１７）

本発明者らは微生物培養液中から多剤耐性結核菌に有効な抗生物質を探索した結果、放線菌アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１の生産する新規物質Ｋ９５−５９０１−１を発見した。本物質は従来の結核治療薬と異なる新規の構造をもち、多剤耐性結核菌に対してもマイクロモル以下の低濃度で増殖阻害活性を示した。さらに細胞毒性は非常に弱いものであった。これまで、このような物質が結核菌の増殖を阻害するという報告はなく、よって本発明はこのような知見に基づいて新規の結核菌の増殖阻害活性物質を提供するに至ったものである。
本発明は係る知見に基づいて完成されたものであって、具体的には以下の発明に関する：
（１）下記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物。

（２）放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中に前記化合物を蓄積せしめ、該培養物から前記化合物を採取することを含む、（１）に記載の化合物の製造方法。
（３）放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物が、アクチノプラネス属に属する微生物である、（２）に記載の製造法。
（４）放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物が、アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）である請求項３に記載の製造法。
（５）放線菌に属し、Ｋ９５−５９０１−１物質を生産する能力を有する微生物。
（６）アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）株。
（７）（１）に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含有する、医薬組成物。
（８）抗結核薬である、（７）に記載の医薬組成物。
（９）結核菌増殖阻害剤である、（８）に記載の医薬組成物。

本発明のＫ９５−５９０１−１物質は、結核菌増殖阻害活性を有する。よって本発明によれば、Ｋ９５−５９０１−１物質は結核に対する治療薬または予防薬として有効に使用し得る。

本発明は、アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１が生産するＫ９５−５９０１−１物質に関する。本明細書において、「Ｋ９５−５９０１−１物質」とは、以下の物性を有する化合物を意味する：
（１）性状：黄白色粉末
（２）分子量：１０５４．５２４４（Ｍ−Ｈ⁻、高分解能電子スプレーイオン化質量分析による）
（３）分子式：Ｃ_５４Ｈ_７３Ｎ_９Ｏ_１３
（４）比旋光度：［α］Ｄ^２２＝−７２．２（ｃ０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中、カッコ内はモル吸光係数ε）：２２１ｎｍ（８０７００），２７６ｎｍ（１５９００），３５６ｎｍ（３８５０）
（６）赤外部吸収極大（全反射測定法）：３３３１，２９５６，２３６１，１６８３，１６２９，１５３９，１３１７，１２５０，１１８３ｃｍ−１に極大吸収を有する。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）およびスピン結合定数（Ｈｚ、カッコ内））：９．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．５４（１Ｈ，ｄ，９．０），７．７４（１Ｈ，ｄ，８．０），７．７１（１Ｈ，ｄ，８．６），７．６５（１Ｈ，ｄ，９．８），７．５１（１Ｈ，ｄ，１．７），７．４０（１Ｈ，ｄ，６．３），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，８．６，１．７），７．１１（１Ｈ，ｓ），７．０６（１Ｈ，ｄｄｄ，８．０，６．９，１．１），６．９６（１Ｈ，ｄｄ，８．０，７．４），６．９５（１Ｈ，ｄ，８．０），５．６１（１Ｈ，ｄ，４．６），５．３９（１Ｈ，ｄｑ，１４．９，６．３），５．２５（１Ｈ，ｄｔｄ，１４．９，６．９，１．７），５．０８（１Ｈ，ｄｄ，８．６，４．６），５．０４（１Ｈ，ｄｄ，９．２，４．６），４．７９（１Ｈ，ｍ），４．７８（１Ｈ，ｍ），４．６９（１Ｈ，ｄｄ，８．６，４．６），４．３３（１Ｈ，ｍ），４．３０（１Ｈ，ｔ，５．８），４．２２（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１１．４，２．３），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，３．５，２．８），２．９２（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１３．８，５．８），２．８５（１Ｈ，ｍ），２．８４（１Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１３．８，９．２），２．６０（１Ｈ，ｍ），２．３２（１Ｈ，ｍ），２．２６（１Ｈ，ｍ），２．１９（１Ｈ，ｄｔ，１４．３，５．２），２．１２（３Ｈ，ｓ），１．９６（１Ｈ，ｄｄ，１４．３，９．２，６．３），１．９３（１Ｈ，ｄｄｄ，１４．９，９．７，４．６），１．７７（１Ｈ，ｄｄｄ，１４．９，９．７，４．６），１．５７（３Ｈ，ｓ），１．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，９．２），１．４０（３Ｈ，ｓ），１．３５（１Ｈ，ｍ），１．２８（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，１１．５，４．０），１．１６（３Ｈ，ｄ，７．４），１．１５（３Ｈ，ｄ，７．５），０．８７（１Ｈ，ｍ），０．８４（３Ｈ，ｄ，６．３），０．８２（３Ｈ，ｄ，６．９），０．３０（３Ｈ，ｄ，６．９），０．１３（３Ｈ，ｄ，６．３），−０．８９（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，９．０，３．０）．
（ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒ．は幅広線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）^１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ））：１７３．６，１７１．８，１７１．６，１６９．３，１６９．２，１６８．２，１６７．６，１６６．９，１５０．６，１３５．６，１３５．３，１３４．７，１２７．２，１２７．０，１２６．８，１２５．７，１２４．６，１２３．１，１２０．５，１２０．５，１１８．８，１１８．３，１１２．８，１１２．４，６８．２，５７．９，５７．１，５６．８，５６．６，５５．６，５４．６，５１．０，５０．４，４５．１，４４．２，３６．５，３６．５，３５．６，３５．４，３５．２，３４．１，２７．８，２７．５，２４．１，２３．６，２３．２，２２．７，２２．３，２１．７，２１．２，２０．１，１７．４，１６．７，１５．７．
（９）溶剤に対する溶解性：クロロホルム、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシドに易溶。水に難溶。
（１０）呈色反応：リンモリブデン硫酸に陽性。Ｅｈｌｒｉｃｈ試薬に陽性。

更に、本発明者らが見出したところによれば、Ｋ９５−５９０１−１物質は以下の式（Ｉ）で表される化合物である。

本明細書において、Ｋ９５−５９０１−１物質の塩とは、Ｋ９５−５９０１−１物質が、無機又は有機の塩基又は酸と結合して形成した塩のことである。塩としては、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ金属及びアルカリ土類金属塩；アンモニア、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシエチル）ピペラジン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、Ｌ−グルカミン等のアミンの塩；又はリジン、δ−ヒドロキシリジン、アルギニンなどの塩基性アミノ酸との塩を挙げることができる。また、Ｋ９５−５９０１−１物質の水和物及び溶媒和物、並びにＫ９５−５９０１−１物質の塩の水和物及び溶媒和物も本発明の化合物に包含される。また、本明細書においてＫ９５−５９０１−１物質又は式（Ｉ）で表される化合物は、それが明らかに適さない場合を除き、明示されていない場合にも、Ｋ９５−５９０１−１物質の塩、水和物及び溶媒和物、並びに化合物Ｋ９５−５９０１−１物質の塩の水和物又は溶媒和物をも含むと解釈されるべきである。

本発明の化合物は不斉炭素を有することがあることから、光学異性体が存在することがある。本発明の化合物としては、右旋性（＋）又は左旋性（−）の何れの化合物であってもよいし、ラセミ体などのこれらの異性体の混合物であってもよい。また、本発明の化合物は、特に断らない限り、いずれの互変異性体、又は幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）も含むものである。

本発明のＫ９５−５９０１−１物質は、放線菌に属するＫ９５−５９０１−１物質を生産する能力を有する微生物を培養し、その培養物から分離・精製することにより得ることができる。本発明のＫ９５−５９０１−１物質の製造に用いることのできる放線菌としては、アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）株及びその変異株を含む、放線菌に属する（好ましくは、アクチノプラネス属に属する）Ｋ９５−５９０１−１物質生産菌の全てである。

上記Ｋ９５−５９０１−１物質の生産に適した放線菌培養における栄養源としては、放線菌の栄養源として使用し得るもので特に制限されるものではない。例えば、市販のペプトン、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆粉、酵母エキス、ＮＺ−アミン、カゼインの水和物、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等の窒素源、グリセリン、澱粉、グルコース、ガラクトース、マンノース等の炭水化物、あるいは脂肪等の炭素源、及び食塩、リン酸塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム等の無機塩を単独あるいは組み合わせて使用できる。

放線菌培養の培地にはその他必要に応じて微量の金属塩、消泡剤として動・植・鉱物油等を添加することもできる。これらの添加物は生産菌を利用しＫ９５−５９０１−１物質の生産の役だつものであればよく、公知の放線菌の培養材料はすべて用いることができる。また放線菌培養の培養温度は、生産菌が発育しＫ９５−５９０１−１物質を生産できる任意の範囲で適用できる。培養は以上に述べた条件を使用するＫ９５−５９０１−１物質生産菌の性質に応じて適宜選択して行なうことができる。

Ｋ９５−５９０１−１物質は、培養液よりクロロホルム、酢酸エチル等の水不混和性の有機溶媒で抽出することができる。上述の抽出法に加え、脂溶性物質の採取に用いられる公知の方法、例えば吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーよりのかき取り、遠心向流分配クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等を適宜組合わせあるいは繰返すことによって純粋に採取することができる。

また、本発明は、Ｋ９５−５９０１−１物質を含有する医薬組成物、特には抗結核薬に関する。別の態様では、本発明は、抗結核薬を製造するための、Ｋ９５−５９０１−１物質の使用に関する。あるいは本発明は、結核を治療又は予防するためのＫ９５−５９０１−１物質に関する。更に、本発明は、Ｋ９５−５９０１−１物質の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、結核の治療方法及び予防方法に関する。本発明の医薬組成物は，結核の治療薬又は予防薬とすることができる。特に、本発明の医薬組成物は、既存の薬剤が効果を示さない薬剤耐性結核菌、複数の薬剤への耐性を持つ多剤耐性結核菌、及び既存の全ての薬剤に耐性を示す超多剤耐性結核菌の感染症の治療薬又は予防薬とすることができる。本発明の治療及び予防の対象となる結核菌が耐性菌の場合、当該結核菌は、リファンピシン、イソニアジド、ピラジナミド、ストレプトマイシン、エタンブトール、レボフロキサシン、カナマイシン、エチオナミド、エンビオマイシン、パラアミノサリチル酸、及びサイクロセリンから選択される少なくとも１種類の薬剤に耐性であり、２種類以上〜全ての種類の間の任意の種類の薬剤に耐性であってもよい。例えば、本発明の治療及び予防の対象となる結核菌は、リファンピシンとイソニアジドに耐性であってもよい。

幅広い結核菌に確実に作用させるため、本発明の医薬組成物はＫ９５−５９０１−１物質と１種類以上の他の抗結核薬を組み合わせて使用するものであってもよい。当該他の抗結核薬としては、リファンピシン、イソニアジド、ピラジナミド、ストレプトマイシン、エタンブトール、レボフロキサシン、カナマイシン、エチオナミド、エンビオマイシン、パラアミノサリチル酸、及びサイクロセリンを挙げることができる。これらの併用剤は、単一製剤として提供されていてもよいし、組み合わせて使用されるように個別の製剤として提供されていてもよい（例えば、キットなど）。

本発明の医薬組成物は経口投与用又は非経口投与用とすることができる。医薬組成物の剤型としては，局所適用製剤，懸濁剤，軟膏，クリーム剤，ゲル剤，吸入剤，注射剤（例えば，静脈注射用注射剤，皮下投与用注射剤，筋肉注射用注射剤，点滴）、タブレット、カプセル、錠剤、顆粒剤、及び粉剤等が挙げられる。

本発明の医薬組成物は、通常の薬学的に許容される担体を用いて、常法により製剤化することができる。Ｋ９５−５９０１−１物質を有効成分として含有する医薬組成物を製剤化するための剤型に制限はなく錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等の固形剤、溶液、懸濁液、乳剤などの液状製剤として経口的に、あるいは、静脈内、筋肉内、皮下などの注射剤、坐剤、貼付剤などとして非経口的に使用することができる。経口用固形製剤を調製する場合は、主薬に賦形剤、更に必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤等を加えた後、常法により溶剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等とする。注射剤を調製する場合には、主薬に必要によりｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤等を添加し、常法により皮下又は静脈内用注射剤とすることができる。

本発明はさらに、それを必要とする患者に有効量のＫ９５−５９０１−１物質を投与することを備える、結核菌感染症の治療方法又は予防方法に使用することができる。例えば、Ｋ９５−５９０１−１物質を治療又は予防目的で使用する場合、Ｋ９５−５９０１−１物質を有効成分として含有する医薬組成物を、経口投与形態、又は注射剤、点滴剤等の非経口投与形態で投与することができる。Ｋ９５−５９０１−１物質を哺乳動物等に投与する場合、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等として経口投与してもよいし、又は、注射剤、点滴剤として非経口的に投与してもよい。投与量は、症状、年齢、性別、体重、投与形態等により異なるが、例えば成人に経口的に投与する場合には、通常１日量は０．１−１０００ｍｇである。

以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。また、本願は２０１８年３月２８日に出願された日本国特許出願第２０１８−０６１３９７号の優先権を主張する。本願が優先権を主張する日本国特許出願第２０１８−０６１３９７号記載の内容は全て参照によりそのまま本願に組み込まれる。

（実施例１）アクチノプラネス・エスピーＫ９５−５９０１株の菌学的性状
アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）株は、日本国埼玉県朝霞市において採取された土壌より単離された菌株であり、その菌学的性状は以下のとおりである。
（Ｉ）形態的性質
栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し、分断は観察されない。気菌糸は着生しないが、栄養菌糸上に約５〜１０μｍの球形の胞子嚢を形成する。

（ＩＩ）各種培地上での性状
イー・ビー・シャーリング（Ｅ．Ｂ．Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）とデー・ゴットリーブ（Ｄ．Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ・システィマティック・バクテリオロジー、１６巻、３１３頁、１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性状を表１に示す。色調は標準色として、カラー・ハーモニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決定し、色票名とともに括弧内にそのコードを併せて記した。以下は特記しない限り、２７℃、２週間目の各培地における観察の結果である。

（ＩＩＩ）生理学的諸性質

（ＩＶ）細胞の化学組成
細胞壁のジアミノピメリン酸はメソ型である。主要メナキノンはＭＫ−９（Ｈ_４）でＭＫ−８（Ｈ_４）およびＭＫ−１０（Ｈ_４）を少量有する。

（Ｖ）１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析
１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の部分塩基配列７２４塩基を決定し、ＤＮＡデータベースに登録され公開されている細菌と比較した結果、その配列はアクチノプラネス・ミズーリエンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ）ＮＢＲＣ１０２３６３と１００％一致したことから、本菌株はアクチノプラネス・ミズーリエンシス（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｍｉｓｓｏｕｒｉｅｎｓｉｓ）に最も近縁であり、アクチノプラネス属に分類することが妥当である。

（ＶＩ）結論
以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとおりである。細胞壁中のジアミノピメリン酸はメソ型、主要メナキノンはＭＫ−９（Ｈ_４）である。気菌糸は着生しないが、栄養菌糸上に球形の胞子嚢を形成する。コロニーは黄色からオレンジ色を呈し、メラニン色素およびその他の可溶性色素は産生しない。
これらの結果および１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の解析結果から、本菌株はバージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・オブ・アーキア・アンド・バクテリア（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｕａｌｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓｏｆＡｒｃｈａｅａａｎｄ
Ｂａｃｔｅｒｉａ）、ウィリ・オンライン・ライブラリ（ＷｉｌｅｙＯｎｌｉｎｅＬｉｂｒａｒｙ）、２０１５年に基づくアクチノプラネス属に属する菌種であると考えられる。なお、本菌株はアクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１として、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託されている（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）。

（実施例２）Ｋ９５−５９０１−１物質の単離抽出、理化学的性状、及び構造
寒天斜面培地で培養したアクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）株より、デンプン２．４％、グルコース０．１％、ペプトン０．３％、肉エキス０．３％、酵母エキス〔オリエンタル酵母工業（株）製〕０．５％、炭酸カルシウム０．４％からなる液体培地（ｐＨ７．０）が１０ｍｌ入った試験管に１白金耳接種し、２７℃で３日間振盪培養した。得られた種培養液を可溶性デンプン２．０％、グリセロール０．５％、小麦胚芽１．０％、肉エキス０．３％、乾燥酵母〔フェルミパン、ＤＳＭベーカリーイングリィエンツ社製〕０．３％、炭酸カルシウム０．３％からなる液体培地（ｐＨ７．５）が１００ｍｌ入った５００ｍｌ容三角フラスコ３０本に各１ｍｌずつ植菌し、２５℃で６日間振盪培養した。

培養の終了した５００ｍｌ容三角フラスコ３０本にそれぞれ１００ｍｌのエタノールを加えて１時間激しく撹拌した。次にその抽出液中のエタノールを減圧留去し、得られた水溶液をガラスカラムに水で充填したダイヤイオンＨＰ２０〔三菱ケミカル（株）製〕に吸着させ、各濃度のメタノール水溶液を流し、目的とする活性の見られた画分を回収し、減圧濃縮して０．５ｇの粗物質を得た。このうちの１４ｍｇを逆相系ＯＤＳ−ＨＰＬＣカラムに吸着させ、溶出溶媒にアセトニトリル水溶液またはメタノール水溶液を用いて溶出し、目的とする活性の見られた画分を回収、濃縮乾固して８．９ｍｇのＫ９５−５９０１−１物質を黄白色粉末として得た。

Ｋ９５−５９０１−１物質の理化学的性状は次の通りである。
（１）性状：黄白色粉末
（２）分子量：１０５４．５２４４（Ｍ−Ｈ⁻、高分解能電子スプレーイオン化質量分析による）
（３）分子式：Ｃ_５４Ｈ_７３Ｎ_９Ｏ_１３
（４）比旋光度：［α］Ｄ^２２＝−７２．２（ｃ０．１、メタノール）
（５）紫外部吸収極大（メタノール中、カッコ内はモル吸光係数ε）：２２１ｎｍ（８０７００），２７６ｎｍ（１５９００），３５６ｎｍ（３８５０）
（６）赤外部吸収極大（全反射測定法）：３３３１，２９５６，２３６１，１６８３，１６２９，１５３９，１３１７，１２５０，１１８３ｃｍ−１に極大吸収を有する。
（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ）およびスピン結合定数（Ｈｚ、カッコ内））：９．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．５４（１Ｈ，ｄ，９．０），７．７４（１Ｈ，ｄ，８．０），７．７１（１Ｈ，ｄ，８．６），７．６５（１Ｈ，ｄ，９．８），７．５１（１Ｈ，ｄ，１．７），７．４０（１Ｈ，ｄ，６．３），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，８．６，１．７），７．１１（１Ｈ，ｓ），７．０６（１Ｈ，ｄｄｄ，８．０，６．９，１．１），６．９６（１Ｈ，ｄｄ，８．０，７．４），６．９５（１Ｈ，ｄ，８．０），５．６１（１Ｈ，ｄ，４．６），５．３９（１Ｈ，ｄｑ，１４．９，６．３），５．２５（１Ｈ，ｄｔｄ，１４．９，６．９，１．７），５．０８（１Ｈ，ｄｄ，８．６，４．６），５．０４（１Ｈ，ｄｄ，９．２，４．６），４．７９（１Ｈ，ｍ），４．７８（１Ｈ，ｍ），４．６９（１Ｈ，ｄｄ，８．６，４．６），４．３３（１Ｈ，ｍ），４．３０（１Ｈ，ｔ，５．８），４．２２（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１１．４，２．３），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．１８（１Ｈ，ｄｄ，３．５，２．８），２．９２（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１３．８，５．８），２．８５（１Ｈ，ｍ），２．８４（１Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，１３．８，９．２），２．６０（１Ｈ，ｍ），２．３２（１Ｈ，ｍ），２．２６（１Ｈ，ｍ），２．１９（１Ｈ，ｄｔ，１４．３，５．２），２．１２（３Ｈ，ｓ），１．９６（１Ｈ，ｄｄ，１４．３，９．２，６．３），１．９３（１Ｈ，ｄｄｄ，１４．９，９．７，４．６），１．７７（１Ｈ，ｄｄｄ，１４．９，９．７，４．６），１．５７（３Ｈ，ｓ），１．５７（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，９．２），１．４０（３Ｈ，ｓ），１．３５（１Ｈ，ｍ），１．２８（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，１１．５，４．０），１．１６（３Ｈ，ｄ，７．４），１．１５（３Ｈ，ｄ，７．５），０．８７（１Ｈ，ｍ），０．８４（３Ｈ，ｄ，６．３），０．８２（３Ｈ，ｄ，６．９），０．３０（３Ｈ，ｄ，６．９），０．１３（３Ｈ，ｄ，６．３），−０．８９（１Ｈ，ｄｄｄ，１２．５，９．０，３．０）．
（ｓは一重線、ｄは二重線、ｔは三重線、ｑは四重線、ｍは多重線、ｂｒ．は幅広線、Ｈはプロトンの数を示す。）
（８）^１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（重ジメチルスルホキシド中の化学シフト（ｐｐｍ））：１７３．６，１７１．８，１７１．６，１６９．３，１６９．２，１６８．２，１６７．６，１６６．９，１５０．６，１３５．６，１３５．３，１３４．７，１２７．２，１２７．０，１２６．８，１２５．７，１２４．６，１２３．１，１２０．５，１２０．５，１１８．８，１１８．３，１１２．８，１１２．４，６８．２，５７．９，５７．１，５６．８，５６．６，５５．６，５４．６，５１．０，５０．４，４５．１，４４．２，３６．５，３６．５，３５．６，３５．４，３５．２，３４．１，２７．８，２７．５，２４．１，２３．６，２３．２，２２．７，２２．３，２１．７，２１．２，２０．１，１７．４，１６．７，１５．７．
（９）溶剤に対する溶解性：クロロホルム、エタノール、メタノール、ジメチルスルホキシドに易溶。水に難溶。
（１０）呈色反応：リンモリブデン硫酸に陽性。Ｅｈｌｒｉｃｈ試薬に陽性。

Ｋ９５−５９０１−１物質の各種理化学的性状やスペクトルデータを検討した結果、Ｋ９５−５９０１−１物質は下記式（Ｉ）で表される構造であることが決定された。

以上のとおり、Ｋ９５−５９０１−１物質の各種理化学的性状について詳述したが、このような性質に一致する化合物はこれまで報告されておらず、Ｋ９５−５９０１−１物質は新規物質であると決定した。

（実施例３）Ｋ９５−５９０１−１物質のマイコバクテリウム属菌に対する抗菌活性
被験菌として、多剤耐性（リファンピシンならびにイソニアジド耐性）臨床分離マイコバクテリウム・ツバクローシスＷ−２６株ならびにＷ−１１４株を用いた。小川培地上で発育した８週間以内の菌コロニーをマイコブロス〔極東製薬工業（株）製〕に懸濁して、３７℃にて培養を開始した。培養液を１日毎に撹拌しデジタル比色計Ｖｉ−ｓｐｅｃＩＩ〔極東製薬工業（株）製〕を用いて波長５３０ｎｍにおける濁度の測定を行い、濁度０．１５に達するまで培養を続けた。さらにこの培養液を、新たなマイコブロスに４０μｌ接
種し、濁度が０．１５±０．０１となるまで培養した後、マイコブロス４ｍｌに対し培養液１００μｌを加え接種菌液とした。丸底９６穴マイクロタイタープレートにあらかじめマイコブロスを用いて２倍階段希釈したＫ９５−５９０１−１物質液１００μｌを用意し、これに１００μｌの接種菌液を加えて、当該丸底９６穴マイクロタイタープレートを３７℃にて培養した。培養１０日目までに肉眼的に有意な菌発育が認められない最小の薬剤濃度を最小発育阻止濃度として決定した。Ｋ９５−５９０１−１物質のＷ−２６株およびＷ−１１４株に対する最小発育阻止濃度は、それぞれ０．０１６μｇ／ｍｌおよび０．００８μｇ／ｍｌであった。

本発明のＫ９５−５９０１−１物質のマイコバクテリウム属以外の試験菌に対する抗菌活性は以下のとおりである。濾紙円板〔アドバンテック東洋（株）製、直径６ｍｍ〕にＫ９５−５９０１−１物質の１ｍｇ／ｍｌのメタノール溶液をそれぞれ１０μｌ浸漬し、一定時間風乾して溶媒を除去後、表３に列挙された試験菌をそれぞれ含有する寒天平板に張り付け、３５℃で２４時間培養後、濾紙円板の周りにできた生育阻止円の直径を測定した。

結果を表３に示す。本発明のＫ９５−５９０１−１物質は、表３に示す微生物のうちマイコバクテリウム・スメグマチスとバチルス・サブチリス、ミクロコッカス・ルテウス以外の細菌、真菌には抗菌活性を示さなかった。したがって、本発明のＫ９５−５９０１−１物質はマイコバクテリウム属細菌に抗菌活性を示す抗結核薬などの薬剤として使用し得る。

Claims

下記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物。
放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物を培地で培養し、培養物中に前記化合物を蓄積せしめ、該培養物から前記化合物を採取することを含む、請求項１に記載の化合物の製造方法。
放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物が、アクチノプラネス属に属する微生物である、請求項２に記載の製造法。
放線菌に属する上記式（Ｉ）で表される化合物を生産する能力を有する微生物が、アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）である請求項３に記載の製造法。
放線菌に属し、Ｋ９５−５９０１−１物質を生産する能力を有する微生物。
アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓｓｐ．）Ｋ９５−５９０１（受託番号ＮＩＴＥＢＰ−０２６５８）株。
請求項１に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含有する、医薬組成物。
抗結核薬である、請求項７に記載の医薬組成物。
結核菌増殖阻害剤である、請求項８に記載の医薬組成物。