JPWO2019078277A1 - 細胞分級用チップ - Google Patents
細胞分級用チップ Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2019078277A1 JPWO2019078277A1 JP2019520755A JP2019520755A JPWO2019078277A1 JP WO2019078277 A1 JPWO2019078277 A1 JP WO2019078277A1 JP 2019520755 A JP2019520755 A JP 2019520755A JP 2019520755 A JP2019520755 A JP 2019520755A JP WO2019078277 A1 JPWO2019078277 A1 JP WO2019078277A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- channel
- cells
- blood
- chip
- blood cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 192
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 192
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 159
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 137
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims abstract description 53
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 163
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 81
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims description 76
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 33
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 claims description 25
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 16
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 16
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 15
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 8
- 238000002493 microarray Methods 0.000 claims description 7
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 claims description 7
- 238000002509 fluorescent in situ hybridization Methods 0.000 claims description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 80
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 78
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 51
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 23
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 22
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 22
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 16
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 14
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 12
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 11
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 11
- 101150059736 SRY gene Proteins 0.000 description 10
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 9
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 8
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 8
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 102100035716 Glycophorin-A Human genes 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 4
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 4
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 4
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 238000003475 lamination Methods 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 3
- 201000006360 Edwards syndrome Diseases 0.000 description 3
- 101001074244 Homo sapiens Glycophorin-A Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000007159 Trisomy 18 Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000003013 erythroid precursor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 3
- 201000003738 orofaciodigital syndrome VIII Diseases 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 3
- 206010053884 trisomy 18 Diseases 0.000 description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 2
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 2
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000013412 genome amplification Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 210000004005 intermediate erythroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 2
- 238000003793 prenatal diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 2
- 229940088872 Apoptosis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241001522296 Erithacus rubecula Species 0.000 description 1
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 1
- 101000835093 Homo sapiens Transferrin receptor protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 210000002361 Megakaryocyte Progenitor Cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100026144 Transferrin receptor protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 210000002593 Y chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000000158 apoptosis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000002960 bfu-e Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 208000024971 chromosomal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010036302 hemoglobin AS Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 238000010030 laminating Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000000968 medical method and process Methods 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502753—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip characterised by bulk separation arrangements on lab-on-a-chip devices, e.g. for filtration or centrifugation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
- C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
- C12M45/02—Means for pre-treatment of biological substances by mechanical forces; Stirring; Trituration; Comminuting
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6841—In situ hybridisation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
-
- G01N15/1023—
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
- G01N33/491—Blood by separating the blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/49—Blood
- G01N33/4915—Blood using flow cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N37/00—Details not covered by any other group of this subclass
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
- B01L2200/0652—Sorting or classification of particles or molecules
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0861—Configuration of multiple channels and/or chambers in a single devices
- B01L2300/0874—Three dimensional network
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2400/00—Moving or stopping fluids
- B01L2400/04—Moving fluids with specific forces or mechanical means
- B01L2400/0475—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure
- B01L2400/0478—Moving fluids with specific forces or mechanical means specific mechanical means and fluid pressure pistons
-
- G01N2015/012—
-
- G01N2015/016—
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume, or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
-
- G01N2015/1028—
Abstract
Description
血液試料中の細胞を水力学的に分級するためのマイクロ流路単位を、備えるチップであって、
前記マイクロ流路単位は、血液試料が流れる主流路と、前記主流路の側方に接続する副流路と、前記副流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する除去流路と、前記除去流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する回収流路とが平面的に展開してなるパターンを有しており、
前記副流路から前記主流路内に流れ出す液体が前記主流路を流れる細胞を前記除去流路及び前記回収流路の側に向かって押し込み、
前記押し込まれた細胞のうち無核赤血球を含む流体が前記除去流路に進入することで、血液試料から無核赤血球が除去され、
前記無核赤血球が除去されて残った細胞のうち標的細胞を含む流体が前記回収流路に進入することで血液試料から標的細胞が取得され、
前記回収流路一本ごとの前記主流路と前記回収流路との間の接続部の断面における単位時間当たりの流量が、前記除去流路一本ごとの前記主流路と前記除去流路との間の接続部の断面における単位時間当たりの流量に比べて大きく、
同一の前記パターンを有する前記マイクロ流路単位が高さ方向に繰り返し積層されており、
前記マイクロ流路単位の有する前記主流路の入口、前記副流路の入口、前記除去流路の出口、前記回収流路の出口及び前記主流路の出口は各層を横断的に貫く柱流路によってそれぞれまとめられるように前記柱流路に接続されている、
チップ。
<2>
前記マイクロ流路単位が各層に1個ずつ設けられている、
<1>に記載のチップ。
<3>
前記チップを平面視したときに各層の前記マイクロ流路単位のパターンの向き及び位置が揃っている、
<2>に記載のチップ。
<4>
前記主流路及び前記副流路の前記入口がそれぞれ接続される前記柱流路が前記チップの上面に開口を有し、さらに
前記除去流路、前記回収流路及び前記主流路の前記出口がそれぞれ接続される前記柱流路が前記チップの下面に開口を有することで、
前記血液試料が前記チップの上面から下面に向かって前記チップを通り抜ける、
<3>に記載のチップ。
<5>
前記マイクロ流路単位を有する層が等間隔に連続的に積層されている、
<4>に記載のチップ。
<6>
前記主流路と前記除去流路との接続部において前記除去流路の内接径が4〜19μmであり、
前記主流路と前記回収流路との接続部において前記回収流路の内接径が20〜30μmである、
<1>に記載のチップ。
<7>
前記マイクロ流路単位において、
前記回収流路及び前記除去流路の少なくともいずれかの断面積はその下流に進むほど大きくなる、
<1>に記載のチップ。
<8>
血液試料を分画することで細胞数を尺度として標的細胞の濃縮された画分を取得するための、<4>に記載のチップの使用であって、
前記血液試料は、全血そのもの又は全血と比較した場合に細胞数を尺度として標的細胞が濃縮されていないものである、
使用。
<9>
前記主流路が接続される前記柱流路への前記血液試料の流入量が8〜25μl/分である、
<8>に記載の使用。
<10>
前記副流路が接続される前記柱流路への前記液体の単位時間当たりの流入量が、前記主流路が接続される前記柱流路への前記血液試料の単位時間当たりの流入量の1〜2倍である、
<9>に記載の使用。
<11>
前記血液試料を前記チップに注入する間に注入を待つ血液試料を攪拌するとともに、撹拌した血液試料を順次前記チップに注入する、
<8>に記載の使用。
<12>
前記血液試料が母体血の全血又はこれを単に希釈したものであり、
前記標的細胞が胎児由来有核赤血球である、
<8>に記載の使用。
<13>
<12>に記載のチップの使用に基づき有核赤血球の濃縮された画分Aを取得し、
画分Aを白血球及び核酸に対して特異的に標識するとともに、標識した前記画分A中の血球を少なくともセルソーティングによって選別することで、白血球に対して特異的な標識により標識された血球が排除されているとともに核酸に対して特異的な標識により標識された血球が濃縮されている画分Bを取得し、
前記画分B中の血球に含まれる染色体の解析を行うことで、非侵襲的出生前遺伝学的検査における診断に供するデータを取得する、
方法。
<14>
染色体の解析が、蛍光in situハイブリダイゼーション法、次世代シークエンス法又はマイクロアレイ法による解析である<13>に記載の方法。
本実施形態において出発材料はヒトの妊婦の母体血試料である。妊婦は月経後胎齢が10週から33週であることが好ましい。月経後胎齢は最終月経初日を1日目として、満日数又は満週数で表したものである。月経後胎齢は受精後胎齢に2週を加えたものとして算出してもよい。母体血又はこれを希釈したものは血液試料の一例である。本実施形態に係るチップやその使用を母体血以外に適用することができる。以下の実施形態の説明において母体血を血液試料に置き換えてもその技術的内容を解釈してもよい。
本実施形態において、濃縮された胎児由来細胞を取得することを目的とする。以下に胎児由来細胞として母体血に含まれる有核赤血球について説明する。
本実施形態の方法により胎児由来細胞を濃縮する。胎児由来細胞の濃縮とは、母体血試料から、全血球を基準として、好ましくは全赤血球を基準として胎児由来細胞の濃縮された画分を取得することを言い、本実施形態において胎児由来細胞が濃縮されていることとは、画分中の全血球に占める胎児由来細胞の割合が向上していることを指す。好ましくは赤血球に占める有核赤血球の割合が向上していることを指す。
本実施形態の血球分離チップを用いて有核赤血球が濃縮された画分(以下、画分Aということもある)からセルソーティングにより更に有核赤血球を濃縮してもよい。
標識した画分A中の血球をセルソーティングによって選別することで有核赤血球をさらに濃縮することができる。セルソーティングでは例えば細胞を選別するために用いられる装置(セルソーター)を使用する。標識が蛍光標識であれば、セルソーティングによる選別の方法は蛍光標示式細胞分取法(FCM)でもよい。セルソーティングによる選別の方法は磁気標識による細胞分取法でもよい。本実施形態ではセルソーティングの原理及びセルソーターの機種は特に限定されない。
画分A中の血球を蛍光標識した場合は、セルソーティングとしてFACS(商標)を用いることが好ましい。またセルソーティングによる処理後も蛍光標識は残存しているので、これを有効に利用してもよい。
<採血>
本参考例および後述の実施例では適切な手続の下、母体血及び一般血の提供を受けた。母体血は、試験研究用として妊娠33週の妊婦から提供されたものである。胎児の性別は男性である。本実施例において用いられた一般血は、試験研究用として妊婦ではない人から提供されたものである。母体血及び一般血の採取は医療機関においてなされた。これらの血液は適正な管理の下、発明者らの研究室に輸送された。
母体血中の有核赤血球を密度勾配遠心法で濃縮した。ここで濃縮とは、有核赤血球以外の血球を除去することである。濃縮において母体血から除去される血球は無核の赤血球であることが好ましい。濃縮において母体血から血小板も除去されることがさらに好ましい。
画分Aの血球をHoechst33342(Sigma−Aldrich製)、抗CD45-PE標識抗体(Miltenyi-Biotec製、クローン名:5B1)、及び抗CD235a-FITC標識抗体(Miltenyi-Biotec製、クローン名:REA175)で同時に染色した。染色に際して血球の架橋固定は行わなかった。染色は4℃で、10分間行った。染色後、血球の懸濁液を4℃、300Gの条件で10分間遠心することで標識された血球を回収した。
図5はHoechst33342の蛍光強度分布を示す。縦軸は血球の出現頻度を表す。横軸はHoechstの蛍光シグナルの強度を表す。ピークが二つ表れている。出現頻度が強度40〜50の間で極小となった。係る範囲で境界値を定め、これより強度の大きい血球を有核の血球と推定した。また、これより強度の小さい血球を無核の血球と推定した。
画分Bの全体に対してNucleospin Tissue XS(タカラバイオ株式会社から購入)を使用して、DNA抽出を行った。
図8に示す電気泳動像より、試料1には4〜16コピーのSRY遺伝子配列を有するDNAが含まれることが分かった。したがって、試料1には胎児由来の染色体DNAが含有されることが分かった。
<血球分離チップによる有核赤血球の濃縮>
実施例1では採血後2〜3時間経過した母体血0.3mlを使用し、有核赤血球の濃縮の図1および図2に示す血球分離チップによって行った。
15mlの母体血希釈液を上記血球分離チップで分画した結果を表1に示す。係る母体血には300μlの母体血全血が含まれた。母体血全血中には1.43×109個の血球が含まれると考えられる。全自動セルカウンターTC20を用いて測定した。分岐流路1〜4並びにフロースルー5を通過した画分の血球数は表1の通りである。
図9には上述のように染色した血球が示されている。図に示すように凝集の発生は抑えられていた。このため、血球を一細胞レベルで互いに分離可能なことが示された。本実施例において凝集が抑えられたことは染色する抗体濃度を最適化したことによると考えられる。
上記画分Bを、血球を約200個ずつ有する3つの画分に分けた。これらの画分には1〜2個の胎児由来の有核赤血球が含まれているものと期待された。
<血球分離チップによる有核赤血球の濃縮>
妊娠26週の43歳女性(胎児は男児)から提供された母体血をPBSで5倍に希釈し血球分離チップを用いて有核赤血球の濃縮を行った。約69時間経過後に希釈した母体血を用いた。
母体血から得られた画分Fr2に含まれる血球3.11×107個のうち1/8量(0.40×106個)の血球を実施例1と同様にセルソーターで選別した。Hoechst33342及びCD235aに対して陽性、かつCD45に対して陰性の血球を選別した。以上により15429個の血球を含有する画分を得た(図13、Arエリア)。
レーン5の右側には100bpのDNAラダーが示されている。
実施例2で用いた血球分離チップを図16に示すように改変して用いた。すなわち、マイクロ流路単位を有する層中に4個の前記マイクロ流路単位が形成され、前記層が10個であるものを用いて、実施例2に準じて有核赤血球を濃縮した。マイクロ流路単位を有する層中に2以上のマイクロ流路単位が形成されることで、血球分離チップ中には複数の前記マイクロ流路スタックが立ち並んでいる。入口が接続する柱流路が一本の統合柱流路として統合されている。
[1]血球分離チップを使用して血液試料中の血球を分画することで全血が数を基準として有核赤血球の濃縮された画分を取得する方法であって、前記血液試料は、血液試料それ自体、又は前記血液試料に比べて全血が数を基準として有核赤血球が濃縮されていない未漉縮試料であり、
前記血球分離チップは、前記血液試料が流れる主流路と、前記主流路の側方に接続する副流路と、前記副流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する除去流路と、前記除去流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する回収流路と、を有するマイクロ流路単位を備え、
副流路から流れ出す液が前記主流路を流れる血球を前記除去流路及び前記回収流路の側に向かって押し込み、
前記押し込まれた血球のうち無核赤血球が前記除去流路に進入することで、前記血液試料から無核赤血球が除去され、
前記無核赤血球が除去されて残った血球のうち有核赤血球が前記回収流路に進入することで前記血液試料から有核赤血球が前記画分として取得され、
前記除去流路と前記回収流路の内接径が異なり、前記主流路と前記除去流路との接続部における前記除去流路の内接径が、前記主流路と前記回収流路との接続部における前記回収流路の内接径より低い数値である、方法、
[2]前記血液試料が母体血試料であり、前記有核赤血球が胎児由来有核赤血球である、[1]記載の方法、
[3]前記主流路と前記除去流路との接続部において前記除去流路の内接径が4〜19μmであり、
前記主流路と前記回収流路との接続部において前記回収流路の内接径が20〜30μmである、[1]記載の方法、
[4]前記主流路への血液試料の1分間時間当たりの流量が0.5〜50μlである、[1]記載の方法、
[5]前記副流路の流量が、前記主流路への血液試料の1分間当たりの流量の1〜10倍である、[1]記載の方法、
[6]前記マイクロ流路単位中では各流路が平面的に配置されており、前記分離チップは前記マイクロ流路単位を有する層を2〜200個有し、
各層の有する前記マイクロ流路単位は縦方向に互いに重なり合うことでマイクロ流路ス
タックを形成しており、
前記階層流路において、各層の前記マイクロ流路単位の有する前記主流路の注入口、前記副流路の注入口、前記除去流路の排出口、前記回収流路の排出口及び前記主流路の排出口は全層を貫く縦流路にそれぞれまとめて接続されている、[1]に記載の方法、
[7]前記主流路の注入口の底層はふさがり、前記主流路の排出口の最上層または最下層がふさがっている、[6]記載の方法、
[8]前記マイクロ流路単位を有する層中に2以上の前記マイクロ流路単位が形成されることで、前記血球分離チップ中には複数の前記マイクロ流路スタックが立ち並んでおり、前記注入口が接続する前記縦流路が一本の統合縦流路として統合されている、[6]記載の方法、
[9]前記血液試料を注入する間に前記血液試料を定期的に攪拌する、[1]に記載の方法、
[10]前記マイクロ流路単位において、
前記回収流路の前記内接径は前記回収流路の途中で拡大し、
前記除去流路の前記内接径は前記除去流路の途中で拡大している、
[1]に記載の方法、
[11]血球分離チップを使用して血液試料中の血球を分画することで全血が数を基準として有核赤血球の濃縮された画分Aを取得し、前記血液試料は、血液試料それ自体、又は前記血液試料に比べて全血が数を基準として有核赤血球が濃縮されていない未漉縮試料であり、
画分Aを白血球及び核酸に対して特異的に標識するとともに、標識した前記画分A中の血球を少なくともセルソーティングによって選別することで、白血球に対して特異的な標識により標識された血が排除されているとともに核酸に対して特異的な標識により標識された血球が濃縮されている画分Bを取得し、
前記画分B中の血球に含まれる染色体の解析を行うことで、非侵襲的出生前遺伝学的検査における診断に供するデータを取得する方法であって、
前記血球分離チップは、前記血液試料が流れる主流路と、前記主流路の側方に接続する副流路と、前記副流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する除去流路と、前記除去流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する回収流路と、を有するマイクロ流路単位を備え、
副流路から流れ出す液が前記主流路を流れる血球を前記除去流路及び前記回収流路の側に向かって押し込み、
前記押し込まれた血球のうち無核赤血球が前記除去流路に進入することで、前記血液試料から無核赤血球が除去され、
前記無核赤血球が除去されて残った血球のうち有核赤血球が前記回収流路に進入することで前記血液試料から有核赤血球が前記画分として取得され、
前記除去流路と前記回収流路の内接径が異なり、前記主流路と前記除去流路との接続部における前記除去流路の内接径が、前記主流路と前記回収流路との接続部における前記回収流路の内接径より低い数値である、方法、
[12]染色体の解析が、蛍光in situハイブリダイゼーシヨン法、次世代ゲノムシークエンス法またはマイクロアレイ法による解析である[11]記載の方法、
[13]前記血液試料が母体血試料であり、前記有核赤血球が胎児由来有核赤血球である、[11]記載の方法、
[14]前記主流路と前記除去流路との接続部において前記除去流路の内接径が4〜19μmであり、
前記主流路と前記回収流路との接続部において前記回収流路の内接径が20〜30μmである、[11]記載の方法、
[15]前記主流路への血液試料の1分間単位時間当たりの流量が0.5〜50μlである、[11]記載の方法、
[16]前記副流路の流量が、前記主流路への血液試料の1分間当たりの流量の1〜10倍である、[11]記載の方法、
[17]前記マイクロ流路単位中では各流路が平面的に配置されており、前記分離チップは前記マイクロ流路単位を有する層を2〜200個有し、
各層の有する前記マイクロ流路単位は縦方向に互いに重なり合うことでマイクロ流路スタックを形成しており、
前記階層流路において、各層の前記マイクロ流路単位の有する前記主流路の注入口、前記副流路の注入口、前記除去流路の排出口、前記回収流路の排出口及び前記主流路の排出口は全層を貫く縦流路にそれぞれまとめて接続されている、[11]に記載の方法、
[18]前記主流路の注入口の底層はふさがり、前記主流路の排出口の最上層または最下層がふさがっている、[17]記載の方法、
[19]前記マイクロ流路単位を有する層中に2以上の前記マイクロ流路単位が形成されることで、前記血球分離チップ中には複数の前記マイクロ流路スタックが立ち並んでおり、前記注入口が接続する前記縦流路が一本の統合縦流路として統合されている、[17]記載の方法、
[20]前記血液試料を注入する間に前記血液試料を定期的に攪拌する、[11]に記載の方法、
[21]前記マイクロ流路単位において、
前記回収流路の前記内接径は前記回収流路の途中で拡大し、
前記除去流路の前記内接径は前記除去流路の途中で拡大している、
[11]に記載の方法。
22 主流路の入口をまとめる柱流路
23 副流路の入口をまとめる柱流路
24a 除去流路の出口をまとめる柱流路
24d 回収流路の出口をまとめる柱流路
25 主流路の出口をまとめる柱流路
39 顆粒
41 有核赤血球
42 無核赤血球
43 白血球
45a−f 層
46 遠心管
47 主流路
48a−c 血球
49 副流路
50 血球分離チップ
51 入口
52 主流路
53 副流路
54a−d 出口
55 出口
56a−d 流路
57 シリンジ
58 シリンジ
59a−d 分岐流路
61 入口
Fr1−5 画分
FT フロースルー
L01−L10 層
Claims (14)
- 血液試料中の細胞を水力学的に分級するためのマイクロ流路単位を、備えるチップであって、
前記マイクロ流路単位は、血液試料が流れる主流路と、前記主流路の側方に接続する副流路と、前記副流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する除去流路と、前記除去流路の下流において前記副流路とは反対側の前記主流路の側方に接続する回収流路とが平面的に展開してなるパターンを有しており、
前記副流路から前記主流路内に流れ出す液体が前記主流路を流れる細胞を前記除去流路及び前記回収流路の側に向かって押し込み、
前記押し込まれた細胞のうち無核赤血球を含む流体が前記除去流路に進入することで、血液試料から無核赤血球が除去され、
前記無核赤血球が除去されて残った細胞のうち標的細胞を含む流体が前記回収流路に進入することで血液試料から標的細胞が取得され、
前記回収流路一本ごとの前記主流路と前記回収流路との間の接続部の断面における単位時間当たりの流量が、前記除去流路一本ごとの前記主流路と前記除去流路との間の接続部の断面における単位時間当たりの流量に比べて大きく、
同一の前記パターンを有する前記マイクロ流路単位が高さ方向に繰り返し積層されており、
前記マイクロ流路単位の有する前記主流路の入口、前記副流路の入口、前記除去流路の出口、前記回収流路の出口及び前記主流路の出口は各層を横断的に貫く柱流路によってそれぞれまとめられるように前記柱流路に接続されている、
チップ。 - 前記マイクロ流路単位が各層に1個ずつ設けられている、
請求項1に記載のチップ。 - 前記チップを平面視したときに各層の前記マイクロ流路単位のパターンの向き及び位置が揃っている、
請求項2に記載のチップ。 - 前記主流路及び前記副流路の前記入口がそれぞれ接続される前記柱流路が前記チップの上面に開口を有し、さらに
前記除去流路、前記回収流路及び前記主流路の前記出口がそれぞれ接続される前記柱流路が前記チップの下面に開口を有することで、
前記血液試料が前記チップの上面から下面に向かって前記チップを通り抜ける、
請求項3に記載のチップ。 - 前記マイクロ流路単位を有する層が等間隔に連続的に積層されている、
請求項4に記載のチップ。 - 前記主流路と前記除去流路との接続部において前記除去流路の内接径が4〜19μmであり、
前記主流路と前記回収流路との接続部において前記回収流路の内接径が20〜30μmである、
請求項1に記載のチップ。 - 前記マイクロ流路単位において、
前記回収流路及び前記除去流路の少なくともいずれかの断面積はその下流に進むほど大きくなる、
請求項1に記載のチップ。 - 血液試料を分画することで細胞数を尺度として標的細胞の濃縮された画分を取得するための、請求項4に記載のチップの使用であって、
前記血液試料は、全血そのもの又は全血と比較した場合に細胞数を尺度として標的細胞が濃縮されていないものである、
使用。 - 前記主流路が接続される前記柱流路への前記血液試料の流入量が8〜25μl/分である、
請求項8に記載の使用。 - 前記副流路が接続される前記柱流路への前記液体の単位時間当たりの流入量が、前記主流路が接続される前記柱流路への前記血液試料の単位時間当たりの流入量の1〜2倍である、
請求項9に記載の使用。 - 前記血液試料を前記チップに注入する間に注入を待つ血液試料を攪拌するとともに、撹拌した血液試料を順次前記チップに注入する、
請求項8に記載の使用。 - 前記血液試料が母体血の全血又はこれを単に希釈したものであり、
前記標的細胞が胎児由来有核赤血球である、
請求項8に記載の使用。 - 請求項12に記載のチップの使用に基づき有核赤血球の濃縮された画分Aを取得し、
画分Aを白血球及び核酸に対して特異的に標識するとともに、標識した前記画分A中の血球を少なくともセルソーティングによって選別することで、白血球に対して特異的な標識により標識された血球が排除されているとともに核酸に対して特異的な標識により標識された血球が濃縮されている画分Bを取得し、
前記画分B中の血球に含まれる染色体の解析を行うことで、非侵襲的出生前遺伝学的検査における診断に供するデータを取得する、
方法。 - 染色体の解析が、蛍光in situハイブリダイゼーション法、次世代シークエンス法又はマイクロアレイ法による解析である請求項13に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017202907 | 2017-10-19 | ||
JP2017202907 | 2017-10-19 | ||
PCT/JP2018/038728 WO2019078277A1 (ja) | 2017-10-19 | 2018-10-17 | 細胞分級用チップ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP6582272B2 JP6582272B2 (ja) | 2019-10-02 |
JPWO2019078277A1 true JPWO2019078277A1 (ja) | 2019-11-14 |
Family
ID=66174410
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019520755A Active JP6582272B2 (ja) | 2017-10-19 | 2018-10-17 | 細胞分級用チップ |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11666915B2 (ja) |
EP (1) | EP3699587B1 (ja) |
JP (1) | JP6582272B2 (ja) |
KR (1) | KR102313468B1 (ja) |
CN (1) | CN111247427B (ja) |
CA (1) | CA3076601C (ja) |
SG (1) | SG11202002907RA (ja) |
WO (1) | WO2019078277A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020036115A1 (ja) * | 2018-08-14 | 2020-02-20 | 株式会社 TL Genomics | 流体デバイス |
WO2021079826A1 (ja) * | 2019-10-23 | 2021-04-29 | 株式会社 TL Genomics | 血液用デバイス |
CN111040938A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-04-21 | 哈尔滨工业大学(深圳) | 微流控芯片及分选方法 |
KR102474060B1 (ko) * | 2020-10-14 | 2022-12-05 | 한국과학기술연구원 | 미세유체칩 유동에 의한 세포입자의 크기별 분리 장치와 방법 |
CN112557261B (zh) * | 2020-12-07 | 2022-12-09 | 昆明理工大学 | 一种基于c形微柱的红细胞分离检测装置及分离检测方法 |
CN113405955B (zh) * | 2021-06-15 | 2024-02-02 | 中国航发沈阳发动机研究所 | 一种油液磨粒监测装置和监测方法 |
JP2024013994A (ja) * | 2022-07-21 | 2024-02-01 | 株式会社Screenホールディングス | 流路チップ |
CN115364915B (zh) * | 2022-08-08 | 2023-08-29 | 杭州恒升医学科技有限公司 | 一种人体生化检测传感芯片 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06509178A (ja) * | 1992-05-16 | 1994-10-13 | アーレルト ドロテー | 遺伝子奇形の出生前診断のための方法 |
JPH11508182A (ja) * | 1995-06-16 | 1999-07-21 | ザ ユニバーシティ オブ ワシントン | 微細製造差動抽出デバイスおよびその方法 |
WO2011027832A1 (ja) * | 2009-09-04 | 2011-03-10 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 有核赤血球濃縮回収用チップ及び有核赤血球濃縮回収方法 |
JP2013017429A (ja) * | 2011-07-12 | 2013-01-31 | Konica Minolta Holdings Inc | 血球溶解後のサイズ分離により血液から希少な目的細胞を回収する方法 |
JP2014223082A (ja) * | 2007-05-04 | 2014-12-04 | シリコン・バイオシステムズ・エス.ピー.エー.Silicon Biosystems S.P.A. | 非侵襲的出生前診断の方法並びに装置 |
JP2016518131A (ja) * | 2013-04-24 | 2016-06-23 | フォンダツィオーネ イエッレチチエッセ ”カ’ グランダ−オスオエダーレ マッジオーレ ポリキニーコ”Fondazione IRCCS Ca Granda−Ospedale Maggiore Policlinico | 非侵襲的出生前診断方法 |
Family Cites Families (27)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5311356B2 (ja) | 1973-06-30 | 1978-04-20 | ||
JPS5266793A (en) | 1975-11-26 | 1977-06-02 | Masaichi Shimada | Width adjust apparatus for apparatus of take up mortion of fabric |
US4091123A (en) | 1976-06-14 | 1978-05-23 | Nippon Steel Corporation | Method for the manufacture of a steel sheet having excellent lubricating property |
JPS5857537B2 (ja) | 1980-01-08 | 1983-12-20 | ウエスト・ポイント−ペツペレル・インコ−ポレ−テツド | 移動可能な織布への液体化学薬品の付加装置 |
US5731156A (en) | 1996-10-21 | 1998-03-24 | Applied Imaging, Inc. | Use of anti-embryonic hemoglobin antibodies to identify fetal cells |
US5962234A (en) | 1997-10-20 | 1999-10-05 | Applied Imaging Corporation | Use of anti-embryonic epsilon hemoglobin antibodies to identify fetal cells |
US6167910B1 (en) * | 1998-01-20 | 2001-01-02 | Caliper Technologies Corp. | Multi-layer microfluidic devices |
US6818185B1 (en) * | 1999-05-28 | 2004-11-16 | Cepheid | Cartridge for conducting a chemical reaction |
CA2462914A1 (en) * | 2001-10-11 | 2003-04-17 | Aviva Biosciences Corporation | Methods, compositions, and automated systems for separating rare cells from fluid samples |
JP4228808B2 (ja) * | 2003-07-23 | 2009-02-25 | 株式会社日立製作所 | マイクロ分光計測装置及びマイクロ化学システム |
JP2005205387A (ja) | 2004-01-24 | 2005-08-04 | Minoru Seki | 連続粒子分級方法 |
US7858757B2 (en) | 2004-03-31 | 2010-12-28 | Adnagen Ag | Monoclonal antibodies with specificity for fetal erythroid cells |
US20060223178A1 (en) | 2005-04-05 | 2006-10-05 | Tom Barber | Devices and methods for magnetic enrichment of cells and other particles |
CN101305087A (zh) | 2005-09-15 | 2008-11-12 | 阿尔特弥斯康复公司 | 用于磁富集细胞和其他颗粒的装置和方法 |
US20070059781A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ravi Kapur | System for size based separation and analysis |
JP2007175684A (ja) | 2005-12-26 | 2007-07-12 | Minoru Seki | 微粒子の濃縮・分級のための流路構造および方法 |
WO2009042522A2 (en) * | 2007-09-26 | 2009-04-02 | University Of Louisville Research Foundation | Microfluidic lysis |
JP5308834B2 (ja) | 2009-01-13 | 2013-10-09 | 古河電気工業株式会社 | 微粒子分別装置及び微粒子分別方法 |
JP5857537B2 (ja) | 2011-08-30 | 2016-02-10 | 日本精工株式会社 | エアスピンドル |
CN103834554B (zh) * | 2012-11-28 | 2016-01-27 | 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所 | 微流控微生物培养检测芯片 |
US9908123B2 (en) * | 2013-03-15 | 2018-03-06 | Palo Alto Research Center Incorporated | Method and system for stacking and sealing hydrodynamic separation layers |
CN104195028B (zh) * | 2014-08-05 | 2017-07-25 | 深圳先进技术研究院 | 用于对特异性细胞进行筛选的微流控芯片及细胞筛选方法 |
KR20170120105A (ko) * | 2015-01-23 | 2017-10-30 | 유니메드 바이오텍 (상하이) 컴퍼니 리미티드 | 비-침습적 산전 검사를 위한 마이크로유체공학 기반 태아 세포 검출 및 단리 |
KR101758826B1 (ko) | 2015-11-27 | 2017-07-18 | 한국과학기술연구원 | 용액의 이온농도 조절을 이용한 미세유체칩 여과 방법 및 장치 |
KR102658086B1 (ko) * | 2015-12-18 | 2024-04-16 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 자동화된 임상 진단 시스템 및 방법 |
CN106238114A (zh) * | 2016-09-30 | 2016-12-21 | 吉林大学 | 一种基于pmma材料的内嵌三维流道式微流控芯片及制作方法 |
JP6234542B1 (ja) * | 2016-12-27 | 2017-11-22 | 株式会社 TL Genomics | 胎児細胞由来染色体dnaの取得方法 |
-
2018
- 2018-10-17 CN CN201880067937.7A patent/CN111247427B/zh active Active
- 2018-10-17 SG SG11202002907RA patent/SG11202002907RA/en unknown
- 2018-10-17 WO PCT/JP2018/038728 patent/WO2019078277A1/ja unknown
- 2018-10-17 EP EP18867588.8A patent/EP3699587B1/en active Active
- 2018-10-17 JP JP2019520755A patent/JP6582272B2/ja active Active
- 2018-10-17 KR KR1020207013493A patent/KR102313468B1/ko active IP Right Grant
- 2018-10-17 US US16/651,027 patent/US11666915B2/en active Active
- 2018-10-17 CA CA3076601A patent/CA3076601C/en active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH06509178A (ja) * | 1992-05-16 | 1994-10-13 | アーレルト ドロテー | 遺伝子奇形の出生前診断のための方法 |
JPH11508182A (ja) * | 1995-06-16 | 1999-07-21 | ザ ユニバーシティ オブ ワシントン | 微細製造差動抽出デバイスおよびその方法 |
JP2014223082A (ja) * | 2007-05-04 | 2014-12-04 | シリコン・バイオシステムズ・エス.ピー.エー.Silicon Biosystems S.P.A. | 非侵襲的出生前診断の方法並びに装置 |
WO2011027832A1 (ja) * | 2009-09-04 | 2011-03-10 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 有核赤血球濃縮回収用チップ及び有核赤血球濃縮回収方法 |
JP2013017429A (ja) * | 2011-07-12 | 2013-01-31 | Konica Minolta Holdings Inc | 血球溶解後のサイズ分離により血液から希少な目的細胞を回収する方法 |
JP2016518131A (ja) * | 2013-04-24 | 2016-06-23 | フォンダツィオーネ イエッレチチエッセ ”カ’ グランダ−オスオエダーレ マッジオーレ ポリキニーコ”Fondazione IRCCS Ca Granda−Ospedale Maggiore Policlinico | 非侵襲的出生前診断方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
HUANG, R. ET AL.: "A microfluidics approach for the isolation of nucleated red blood cells (NRBCs) from the peripheral", PRENATAL DIAGNOSIS, vol. 28, JPN6019003343, 2008, pages 892 - 899, XP055197085, ISSN: 0004080169, DOI: 10.1002/pd.2079 * |
MIZUNO, M. ET AL.: "Magnetophoresis-Integrated Hydrodynamic Filtration System for Size- and Surface Marker-Based Two-Dim", ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 85, JPN6019003345, June 2013 (2013-06-01), pages 7666 - 7673, ISSN: 0004080170 * |
SAJEESH, P. ET AL.: "Characterization and sorting of cells based on stiffness contrast in a microfluidic channel", RSC ADVANCES, vol. 6, JPN6019003346, 2016, pages 74704 - 74714, XP055597930, ISSN: 0004080171, DOI: 10.1039/C6RA09099K * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN111247427A (zh) | 2020-06-05 |
US20200306756A1 (en) | 2020-10-01 |
WO2019078277A1 (ja) | 2019-04-25 |
EP3699587A4 (en) | 2021-07-14 |
CA3076601A1 (en) | 2019-04-25 |
EP3699587B1 (en) | 2022-04-27 |
SG11202002907RA (en) | 2020-05-28 |
KR20200070315A (ko) | 2020-06-17 |
CN111247427B (zh) | 2022-02-01 |
CA3076601C (en) | 2022-08-16 |
EP3699587A1 (en) | 2020-08-26 |
JP6582272B2 (ja) | 2019-10-02 |
US11666915B2 (en) | 2023-06-06 |
KR102313468B1 (ko) | 2021-10-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6582272B2 (ja) | 細胞分級用チップ | |
JP6234542B1 (ja) | 胎児細胞由来染色体dnaの取得方法 | |
US11453006B2 (en) | Chip for separating and capturing cell and application of chip in tumor cell sorting thereof | |
JP5265815B2 (ja) | 血球の密度変化を利用した密度勾配遠心による有核赤血球の回収法 | |
CN101715486B (zh) | 用于非侵入性产前诊断的方法和装置 | |
JP5943521B2 (ja) | 高濃度夾雑細胞群から低濃度の特定細胞を検出する方法と検出した細胞を回収し解析する方法 | |
US20200238288A1 (en) | Microfluidic label-free isolation and identification of cells using fluorescence lifetime imaging (flim) | |
KR101794218B1 (ko) | 비침습적 산전 진단을 위한 산모 혈액 내 유핵 적혈구의 농축 분리 방법 | |
CN106488981A (zh) | 用于诊断测试的胎儿有核红细胞(nrbcs)的制备 | |
CN108795685A (zh) | 微流控芯片、其制法及胎儿有核红细胞捕获与释放方法 | |
JP2018102289A (ja) | 胎児細胞由来染色体dnaの取得方法 | |
CN109781975B (zh) | 富集循环稀有细胞的试剂及方法 | |
JP2020103299A (ja) | 胎児細胞由来の核酸の取得方法 | |
KR20210049569A (ko) | 역류 원심분리를 이용한 ctc 분리방법 | |
JP2020103299A5 (ja) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190424 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20190424 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20190711 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190723 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190806 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6582272 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D04 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R3D02 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |