JPWO2019027055A1 - 核酸含有脂質ナノ粒子 - Google Patents
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Abstract
Description
[1]
リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体、および核酸を含む、核酸含有脂質ナノ粒子。
[2]
前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体が、グリセロリン脂質類縁体である、[1]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[3]
リパーゼが、ホスホリパーゼA2である[1]または[2]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[4]
前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体が、以下の式(1)もしくは式(2)で表される脂質である、[1]〜[3]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
Rx3は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
Rx41は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC7-C23アルキル、C7-C23アルケニルもしくはC7-C23アルキニルであり、
Rx5は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
Rx6は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
[5]
前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体の含有量が、総脂質のモル数に対して0.001倍モル量以上である、[1]〜[4]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[6]
カチオン性脂質をさらに含む、[1]〜[5]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[7]
カチオン性脂質が、脂質A;以下の式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V’)および式(V’’)の少なくとも1つ、および/または、脂質B;式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)、式(CL-VII)、式(CL-VIII)、式(CL-IX)、式(CL-X)、式(CL-XI)、式(CL-XII)、式(CL-XIII)、式(CL-XIV)、式(CL-XV)、式(CL-XVI)、式(CL-XVII)、式(CL-XVIII)および式(CL-XIX)の少なくとも1つである[6]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。(ここで、式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V’)および式(V’’)は、後述する発明を実施するための形態に記載された構造で表される。また、式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)、式(CL-VII)、式(CL-VIII)、式(CL-IX)、式(CL-X)、式(CL-XI)、式(CL-XII)、式(CL-XIII)、式(CL-XIV)、式(CL-XV)、式(CL-XVI)、式(CL-XVII)、式(CL-XVIII)および式(CL-XIX)は、後述する発明を実施するための形態に記載された構造で表される。以下、同様である。)
[8]
カチオン性脂質が、前記脂質Bである、[7]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[9]
水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体をさらに含む、[1]〜[8]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[10]
水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体における水溶性高分子部分が、ポリエチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸およびポリアクリルアミドからなる群より選ばれる、[9]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[11]
中性脂質をさらに含む、[1]〜[10]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[12]
中性脂質が、リン脂質、ステロール、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質およびスフィンゴイドからなる群より選ばれる、[11]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[13]
核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、[1]〜[12]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[14]
標的遺伝子が、腫瘍または炎症に関連する遺伝子である、[13]に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
[15]
リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を使用する、核酸含有脂質ナノ粒子を安定化する方法。ここで、当該グリセロールの脂肪酸エステル類縁体としては、上記[1]〜[5]に記載される類縁体であってもよく、当該核酸含有脂質ナノ粒子としては、上記[1]〜[14]に記載される核酸含有脂質ナノ粒子であってもよい。
[16]
[1]〜[14]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を用いる、核酸を細胞内に導入する方法。
[17]
細胞が、ほ乳類の腫瘍または炎症部位にある細胞である、[16]に記載の方法。
[18]
細胞が、ほ乳類の肝臓、胃、肺、腎臓、膵臓または脾臓にある細胞である、[16]または[17]に記載の方法。
[19]
細胞内に導入する方法が、静脈内投与または皮下投与によって細胞内に導入する方法である、[16]〜[18]のいずれか1項に記載の方法。
[20]
[1]〜[14]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を、ほ乳動物に投与することを含む、癌または炎症疾患の治療方法。
[21]
投与が、静脈内投与または皮下投与である、[20]に記載の治療方法。
[22]
[1]〜[14]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を含む、医薬。
[23]
静脈内投与用または皮下投与用である、[22]に記載の医薬。
[24]
[1]〜[14]のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を含む、癌または炎症疾患の治療剤。
[25]
静脈内投与用または皮下投与用である、[24]に記載の治療剤。
[26]
式(CL-XVIII)
R137およびR138は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルチオエチル、C8-24アルケニルチオエチル、もしくはC8-C24アルキニルチオエチルであり、
X135は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(C)
で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
[27]
式(CL-XIX)
R139およびR140は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L133は、SまたはOであり、
X142は水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)
で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩(カチオン性脂質)。
本発明の核酸含有脂質ナノ粒子は、リパーゼと接触があったとしても、該粒子中の脂質が分解されにくいため、安定に存在することができる。
本発明におけるグリセロールの脂肪酸エステル類縁体は、上記天然型グリセロール脂質中の一部の構造が改変された構造を有する脂質であり、リパーゼによって加水分解されない。
リパーゼと上記類縁体との接触は、通常30〜45℃、好ましくは35〜42℃、より好ましくは37℃で、通常0分〜48時間、好ましくは1分〜36時間、より好ましくは1分〜24時間の条件である。
構造改変がされる範囲の下限値は、0Å以上であれば特に制限されない。sn-2位の炭素原子からの範囲が0Åとは、sn-2位の炭素原子を指す。
上記有機基としては、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ等が挙げられる。これらの置換基のうちアルコキシおよびアルコキシカルボニルにおけるアルキル部分は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、シクロブチル、シクロプロピルメチル等のC1-C4アルキルである。
本発明におけるグリセロールの脂肪酸エステル類縁体は、好ましくは、ホスホリパーゼA2によって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体である。
Rx3は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
Rx41は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC7-C23アルキル、C7-C23アルケニルもしくはC7-C23アルキニルであり、
Rx5は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
Rx6は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
Rx3およびRx6は、陰電荷であってもよい。Rx3およびRx6が陰電荷であるとは、Rx3およびRx6に当たる水素が脱プロトン化することを指す。すなわち、陰電荷であるとは、式(1)および式(2)におけるリン酸エステル基が、-PO4 2-となっていてもよいことを指す。
また、式(1)、式(2)、式(NL1)および式(NL2)における各基は、各基として記載の任意の組み合わせであってもよく、好ましい基同士の組み合わせであってもよい。
なお、ジオールX3からX4の変換においては、一級アルコール、二級アルコールのいずれかを保護基で保護して反応を行ってもよい。
式(1)で表される脂質の合成において使用される保護基は、例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)を参考に、反応条件や基質に基づき選択すればよい。
Rx4, Rx5, Rx6, Rx41は、式(2)におけるRx4, Rx5, Rx6, Rx41と同義である。)
なお、ジオールX3からX4の変換においては、一級アルコール、二級アルコールのいずれかを保護基で保護して反応を行ってもよい。
式(2)で表される脂質(2)の合成において使用される保護基は、例えば、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)を参考に、反応条件や基質に基づき選択すればよい。
カチオン性脂質としては、1以上の置換されていても良い炭化水素基を含む脂質親和性領域と、少なくとも1つの1級アミノ基、2級アミノ基、3級アミノ基および/または4級アンモニウム基を含むカチオン性の親水性領域を有する両親媒性分子であれば特に限定されないが、1つの4級アンモニウム基を有する親水部および置換されていても良い独立した3つの炭化水素基を有する脂質(脂質A)、置換されていても良い1つのアミノ基または1つの4級アンモニウム基を有する親水部および置換されていても良い独立した2つの炭化水素基を有する疎水部を有する脂質(脂質B)を挙げることができる。
R1〜R3は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L1〜L3は同一または異なって存在しないか、-Z1-(CY1Y2)p1-または-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中、Y1〜Y6は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z1〜Z3は同一または異なって、-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-または-NY7D-CO-0-であり(式中、Y7A〜Y7Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p1〜p3は同一または異なって1〜5の整数である)であり、
X1は置換されていても良いC1-C4アルキルであり、
A1は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(II)
R4〜R6は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L4〜L6は同一または異なって存在しないか、-Z4-(CY8Y9)p4-または-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中、Y8〜Y13は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z4〜Z6は同一または異なって、-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-または-NY14D-CO-0-であり(式中、Y14A〜Y14Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p4は0〜5の整数であり、p5は1〜5の整数であり、p6は0〜5の整数である)であり、
L7は存在しないか、-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-または-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中、Y15〜Y26は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z7〜Z9は同一または異なって、-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-または-NY27D-CO-0-であり(式中、Y27A〜Y27Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p7は1〜5の整数であり、p8は0〜5の整数であり、p9は1〜5の整数であり、p10は0〜5の整数であり、p11は1〜5の整数であり、p12は1〜5の整数である)であり、
B1は、
A2は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(III)
R7〜R9は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L8〜L10は同一または異なって存在しないか、-Z12-(CY39Y40)p18-または-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中、Y39〜Y44は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z12〜Z14は同一または異なって、-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y45A〜Y45Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p18は0〜5の整数であり、p19は1〜5の整数であり、p20は0〜5の整数である)であり、
L11は存在しないか、-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-または-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中、Y46〜Y57は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z15〜Z17は同一または異なって、-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y58A〜Y58Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p21は1〜5の整数であり、p22は0〜5の整数であり、p23は1〜5の整数であり、p24は0〜5の整数であり、p25は1〜5の整数であり、p26は1〜5の整数である)であり、
L12は存在しないか、-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-または-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中、Y59〜Y70は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z18〜Z20は同一または異なって、-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y71A〜Y71Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p27は1〜5の整数であり、p28は0〜5の整数であり、p29は0〜5の整数であり、p30は0〜5の整数であり、p31は1〜5の整数であり、p32は0〜5の整数である)であり、
J1およびJ2は同一または異なってCY72またはN(式中、Y72は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、置換されていても良いC1-C4アルコキシ、または置換されていても良いC1-C4アシルオキシである)であり、
B2は、
A3は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(IV)
R10〜R12は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L13は存在しないか、-Z23-(CY84Y85)p38-または-Z24-(CY86Y87)p39-Z25-(CY88Y89)p40-(式中、Y84〜Y89は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z23〜Z25は同一または異なって、-O-、-NY90A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY90B-、-NY90C-CO-または-NY90D-CO-0-であり(式中、Y90A〜Y90Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p38〜p40は同一または異なって1〜5の整数である)であり、
L14およびL15は同一または異なって存在しないか、-Z26-(CY91Y92)p41-または-Z27-(CY93Y94)p42-Z28-(CY95Y96)p43-(式中、Y91〜Y96は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z26〜Z28は同一または異なって、-O-、-NY97A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY97B-、-NY97C-CO-、-NY97D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y97A〜Y97Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p41は0〜5の整数であり、p42は1〜5の整数であり、p43は0〜5の整数である)であり、
L16は存在しないか、-(CY98Y99)p44-、-(CY100Y101)p45-Z29-(CY102Y103)p46-または-(CY104Y105)p47-Z30-(CY106Y107)p48-Z31-(CY108Y109)p49-(式中、Y98〜Y109は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z29〜Z31は同一または異なって、-O-、-NY110A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY110B-、-NY110C-CO-、-NY110D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y110A〜Y110Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p44は1〜5の整数であり、p45は0〜5の整数であり、p46は1〜5の整数であり、p47は0〜5の整数であり、p48は1〜5の整数であり、p49は1〜5の整数である)であり、
J3はCY111またはN(式中、Y111は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、置換されていても良いC1-C4アルコキシ、または置換されていても良いC1-C4アシルオキシである)であり、
X14およびX15は同一または異なって置換されていても良いC1-C4アルキルであるか、または一緒になって隣接する窒素原子とともに置換されていても良いC4-C6ヘテロ環を形成し、
A4は薬学的に許容される陰イオンである)、または
式(V’)もしくは式(V’’)
R13〜R18は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
Y112〜Y115は同一または異なって水素原子、ヒドロキシまたは置換されていても良いC1-C4アルキルであり、
L17〜L19およびL22〜L24は同一または異なって存在しないか、-Z32-(CY116Y117)p51-または-Z33-(CY118Y119)p52-Z34-(CY120Y121)p53-(式中、Y116〜Y121は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z32〜Z34は同一または異なって、-O-、-NY122A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY122B-、-NY122C-CO-、-NY122D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y122A〜Y122Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p51は0〜5の整数であり、p52は1〜5の整数であり、p53は0〜5の整数である)であり、
L20およびL25は同一または異なって存在しないか、-(CY123Y124)p54-、-(CY125Y126)p55-Z35-(CY127Y128)p56-または-(CY129Y130)p57-Z36-(CY131Y132)p58-Z37-(CY133Y134)p59-(式中、Y123〜Y134は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z35〜Z37は同一または異なって、-O-、-NY135A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY135B-、-NY135C-CO-、-NY135D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y135A〜Y135Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p54は1〜5の整数であり、p55は0〜5の整数であり、p56は1〜5の整数であり、p57は0〜5の整数であり、p58は1〜5の整数であり、p59は1〜5の整数である)であり、
L21およびL26は同一または異なって存在しないか、-(CY136Y137)p60-、-(CY138Y139)p61-Z38-(CY140Y141)p62-または-(CY142Y143)p63-Z39-(CY144Y145)p64-Z40-(CY146Y147)p65-(式中、Y136〜Y147は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z38〜Z40は同一または異なって、-O-、-NY148A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY148B-、-NR148C-CO-、-NY148D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y148A〜Y148Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p60は1〜5の整数であり、p61は0〜5の整数であり、p62は0〜5の整数であり、p63は0〜5の整数であり、p64は1〜5の整数であり、p65は0〜5の整数である)であり、
B3およびB4は同一または異なって、
A5およびA6は同一または異なって薬学的に許容される陰イオンである)
で表される化合物が挙げられる。
直鎖状または分岐状のC8-C24アルキルとしては、例えばオクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、2,6,10-トリメチルウンデシル、ペンタデシル、3,7,11-トリメチルドデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、6,10,14-トリメチルペンタデカン-2-イル、ノナデシル、2,6,10,14-テトラメチルペンタデシル、イコシル、3,7,11,15-テトラメチルヘキサデシル、ヘニコシル、ドコシル、トリコシル、テトラコシル等が挙げられ、好ましくはノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル等が挙げられ、より好ましくはウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル等が挙げられる。
C1-C3アルキルとしては、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル等が挙げられ、好ましくはメチル、エチル等が挙げられ、より好ましくはメチル等が挙げられる。
X2およびX3は、同一または異なってメチルもしくはエチルであり、X4は、メチル、エチル、ヒドロキシプロピルまたはヒドロキシエチル等であることが好ましく、X2〜X4は、メチルであることがさらに好ましい。
L9およびL10としては、同一または異なって存在しないか、-CO-O-(CY39Y40)p18-、-O-CO-(CY39Y40)p18-、-CO-NY45B-(CY39Y40)p18-または-NY45C-CO-(CY39Y40)p18-であることが好ましく、同一または異なって存在しないか、-CO-O-(CY39Y40)p18-または-O-CO-(CY39Y40)p18-であることがより好ましく、同一または異なって存在しないかまたは-CO-O-(CH2)p18-であることがさらに好ましく、同一に存在しないかまたは-CO-O-(CH2)p18-であることが最も好ましい。
下記構造式(D)および(E)において、「親水部(Hydrophilic Unit)」は、置換されていても良い1つのアミノ基または1つの4級アンモニウム基を有する親水部を表し、「疎水部(Hydrophobic Unit)」は、置換されていても良い独立した炭化水素基を表す。
また、「親水部(Hydrophilic Unit)」を構成する4級アンモニウム基は、その4つの結合手のうちの0〜2個が、「疎水部(Hydrophobic Unit)」を形成する炭化水素基のいずれか0〜2個と結合しており、残りの結合手が、水素、もしくは、置換されていても良い鎖状および/または環状炭化水素基等と結合している。
「親水部(Hydrophilic Unit)」を構成する置換されていても良い鎖状および/または環状炭化水素基としては、炭素原子と水素原子とからなる基であればいずれでも良いが、炭素数1〜10のものが好ましく、炭素数1〜6のものがより好ましく、炭素数1〜3のものがさらに好ましい。
R101およびR102は同一または異なって直鎖状または分岐状のC10-C24アルキル、C10-C24アルケニルもしくはC10-C24アルキニルであり、
L101およびL102は水素原子であるか、または一緒になって単結合もしくはC1-C3アルキレンを形成し、
L103は単結合、-CO-または-CO-O-であり、
L103が単結合である場合には、
X101は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、
L103が-CO-または-CO-O-である場合には、
X101はピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、該置換基の少なくとも1つは、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ピロリジニル、ピペリジルまたはモルホリニルである)、
式(CL-II)
R103およびR104は同一または異なって直鎖状または分岐状のC12-C24アルキル、C12-C24アルケニルもしくはC12-C24アルキニルであり、
p101およびp102は同一または異なって0〜3の整数であり、
L106およびL107は水素原子であるか、または一緒になって単結合もしくはC2-C8アルキレンを形成し、
L104およびL105は同一または異なって-O-、-CO-O-または-O-CO-であり、
L108は単結合、-CO-または-CO-O-であり、
L108が単結合である場合には、
X102は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、ピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、
L108が-CO-または-CO-O-である場合には、
X102はピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、該置換基の少なくとも1つは、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ピロリジニル、ピペリジルまたはモルホリニルである)、
式(CL-III)
R105は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R106は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシプロピルであり、
X103およびX104は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成するか、またはX103はL111と一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L111は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、アミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイルもしくはジアルキルカルバモイルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであるか、またはX103と一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L109はC1-C6アルキレンであり、
L110は単結合であるか、またはC1-C6アルキレンであり、ただし、L109とL110の炭素数の和は7以下であり、L111が、水素原子の場合、L110は単結合であり、L111がX103と一緒になってC2-C6アルキレンを形成する場合、L110は単結合であるか、またはメチレンもしくはエチレンである)、
式(CL-IV)
R107は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R108は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチル、C8-C24アルキニルオキシプロピル、C8-C24アルキルオキシエトキシエチル、C8-C24アルケニルオキシエトキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシエトキシエチルであり、
X105は水素原子、置換されていても良いC1-C4アルキルまたは-CO-(CH2)n-NY1Y2であり、
nは1〜4の整数を表し、
Y1およびY2は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成する)、
式(CL-V)
R109は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R110は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシプロピルであり、
L112はC1-C3アルキレンであり、
X105’は水素原子またはC1-C3アルキルである)、
式(CL-VI)
R111およびR112は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
X106およびX107は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
p103、p104およびp105は同一または異なって0または1であり、ただしp103, p104およびp105は同時には0ではなく、
L113およびL114は同一または異なってO、SまたはNHである)、
式(CL-VII)
R113およびR114は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R115は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、C1-C4アルコキシまたはC1-C4アシルオキシであり、
X109およびX110は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L115は-CO-O-、-O-CO-、-NHCO-または-CONH-であり、
p106は0〜3の整数であり、
p107は1〜4の整数である)、
式(CL-VIII)
R116およびR117は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルまたはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであるか、
生分解性基が組み込まれている前記C8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニル、または、生分解性基が末端に存在するC8-C24アルキル基、C8-C24アルケニル基もしくはC8-C24アルキニル基であり、
前記生分解性基は、組み込まれているものは、-C(O)O-または‐OC(O)-であり、末端に存在するものは、-C(O)O-C1-C4アルキルまたは-OC(O)-C1-C4アルキルであり、
B100は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキル、式(A)
p108は0〜4の整数であり、p109は1〜4の整数であり(但し、p108が0であり、p109が1である場合を除く)、
L116は結合する炭素ごとに同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルであり、
L117は結合する炭素ごとに同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルである)、
式(CL-IX)
X115およびX116は同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルであり、
L118およびL119は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキレンもしくはC8-C24アルケニレンであり、
M101およびM102は同一または異なって-C=C-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(S)-、-C(S)O-、-SS-、-C(R’’)=N-、-N=C(R’’)-、-C(R’’)=N-O-、-O-N=C(R’’)-、-N(R’’)C(O)-、-C(O)N(R’’)-、-N(R’’)C(S)-、-C(S)N(R’’)-、-N(R’’)C(O)N(R’’’)-、-N(R’’)C(O)O-、-OC(O)N(R’’)-および-OC(O)O-からなる群から選ばれ、
R’’およびR’’’は、同一または異なって、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
R118およびR119は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C16アルキルもしくはC2-C16アルケニルである)、
式(CL-X)
X117およびX118は同一または異なって水素原子、置換されていても良いC1-C6アルキル、ヘテロシクリルまたはポリアミンであるか、またはX117およびX118はそれらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成してもよく、
R120およびR121は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC4-C24アルキルもしくはC4-C24アルケニルである)、
式(CL-XI)
X119およびX120は同一または異なって水素原子、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C20アルキル、C1-C20アルケニル、C1-C20アルキニルもしくはC6-C20アシルであり、
R122およびR123は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C30アルキル、C2-C30アルケニルもしくはC2-C30アルキニルであり、
p112、p113およびp114は同一または異なって0であるか、任意の正の整数である。)、
式(CL-XII)
X121およびX122は同一または異なって水素原子、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルであるか、またはX121およびX122はそれらが結合する窒素原子と一緒になってC2-C6含窒素ヘテロ環を形成してもよく、
L120およびL121は同一または異なって-O-、-OC(O)-または-(O)CO-であり、
R124およびR125は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキルもしくはC8-C24アルケニルである)、
式(CL-XIII)
R126およびR127は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24ヘテロアルキル、C8-C24ヘテロアルケニルもしくはC8-C24ヘテロアルキニルであり、
X123は水素原子または置換されていても良いC1-C6アルキルであり、
X124は、C1-C6アルキル、-NR4aR4bで置換される置換C1-C6アルキルまたは置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルであり、
R4aおよびR4bは同一または異なって水素原子、-C(=NH)NH2または置換されていても良いC1-C6アルキルであるか、またはR4aおよびR4bは、それらが結合する窒素原子と一緒になって置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルを形成してもよく、
X123およびX124はそれらが結合する窒素原子と一緒になって置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルを形成してもよく、
ただし、X123およびX124はイミダゾリル、ベンズイミダゾリル、またはたスクシンイミジルを形成せず、および1つだけの1級アミンがX123およびX124のいずれか一方の上に存在することができ、またはいかなる1級アミンもX123およびX124のいずれか一方の上に存在せず、X123およびX124は置換されたアミドではなく、
R126およびR127がC11アルキルまたはC15アルキルであるとき、X123は水素原子ではなく、
R126およびR127がC16アルキルまたはC17アルキルであるとき、R126およびR127はOHと置換されず、
R126およびR127がC17アルキルであるとき、X123およびX124はOHと置換されず、
R126およびR127がC18アルキルであるとき、X124は置換されていても良いイミダゾリルと置換されない)
式(CL-XIV)
X125およびX126は同一または異なって水素原子、置換されていても良いC1-C6アルキル、ヘテロシクリルまたはポリアミンであるか、またはX125およびX126はそれらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成してもよく、
R130は水素原子またはC1-C6アルキルであり、
R128およびR129は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC4-C24アルキルもしくはC4-C24アルケニルであり、
Y3およびY4は同一または異なって酸素原子またはCH2であり、
p115は0〜2の整数である。)、
式(CL-XV)
X127およびX128は同一または異なってC1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニルであるか、
X127およびX128は、それらが結合している窒素原子と一体になって、1から2個の窒素原子を有する複素環を形成し、
L122は-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)N(X130)-、-N(X130)C(O)-、-OC(O)O-、-OC(O)N(X130)-、-N(X130)C(O)N(X130)-、または-N(X130)C(O)O-であり、
X130の各存在は独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
aは1、2、3、4、5、または6であり、
bは0、1、2、または3であり、
X129は存在しないか、水素またはC1-C3アルキルであり、
R131およびR132は同一または異なって、1つ以上の生分解性基を有する炭素数12〜24のアルキル、炭素数12〜24のアルケニル、または炭素数12〜24のアルコキシであり、前記生分解性基は独立して、前記炭素数12〜24のアルキル基、炭素数12〜24のアルケニル基、または炭素数12〜24のアルコキシ基に組み込まれているか、炭素数12〜24のアルキル基、炭素数12〜24のアルケニル基、または炭素数12〜24のアルコキシ基の末端に存在しており、
前記生分解性基は、組み込まれているものは、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)N(X130)-、または-N(X130)C(O)-であり、末端に存在するものは、-C(O)O‐C1-C4アルキル、−OC(O)-C1-C4アルキル、-C(O)N(X130)-C1-C4アルキル、または-N(X130)C(O)-C1-C4アルキルであり、
R131およびR132は、上記生分解性基とアスタリスク(*)の付された第3級炭素原子との間に少なくとも4つの炭素原子を有する)、
式(CL-XVI)
R133およびR134は同一または異なって、直鎖状または分岐状のC1-C9アルキル、C2-C11アルケニルもしくはC2-C11アルキニルであり、
L123およびL124は同一または異なって、直鎖状のC5-C18アルキレンもしくは直鎖状のC5-C18アルケニレンであるか、または結合しているNと複素環を形成しており、
L125は、単結合であるか、または-C(O)-O-であり、
L125が-C(O)O-であるとき、-L124-CO-OR134が形成されており、
L127はSまたはOであり、
L126は単結合であるか、または直鎖状もしくは分岐状のC1-C6アルキレンであるか、または-C(O)-を介して結合しているNと複素環を形成しており、
L128は直鎖状または分岐状のC1-C6アルキレンであり、そして
X131およびX132は同一または異なって、それぞれ水素または直鎖状もしくは分岐状のC1-C6アルキルである)、
式(CL-XVII)
L131はC2-C4アルキレンまたは-CH2-S-CH2CH2-であり、
L129およびL130は同一または異なって、それぞれC1-C6アルキルであり、
R135およびR136は同一または異なって、C10-C30アルキル、C10-C30アルケニルであり、
X133およびX134は同一または異なって、水素、C1-C6アルキルまたは-CH2CH2OHである。)、
式(CL-XVIII)
R137およびR138は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルチオエチル、C8-24アルケニルチオエチル、もしくはC8-C24アルキニルチオエチルであり、
X135は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(C)
式(CL-XIX)
R139およびR140は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L133は、SまたはOであり、
X142は水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)
本発明の式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)で表される化合物において、構造中の窒素原子上の孤立電子対に水素イオンが配位してもよく、その場合には、製薬上許容し得る陰イオンと塩を形成していてもよく、本発明においては、式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)で表される化合物で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩として、構造中の窒素原子上の孤立電子対に水素イオンが配位したカチオン性脂質も包含される。
本発明において、製薬上許容し得る陰イオンとしては、例えば塩化物イオン、臭化物イオン、硝酸イオン、硫酸イオンおよびリン酸イオン等の無機イオンならびに酢酸イオン、シュウ酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、安息香酸イオンおよびメタンスルホン酸イオン等の有機酸イオン等が挙げられる。
本発明の式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)で表される化合物の製薬上許容し得る塩としては、例えば塩酸塩、臭酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩およびメタンスルホン酸塩等が挙げられる。
本発明の式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)で表される化合物の中には、幾何異性体もしくは光学異性体等の立体異性体または互変異性体等が存在し得るものもあるが、本発明の化合物(I)は、これらを含め、全ての可能な異性体およびそれらの混合物を包含する。
本発明の式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)中の各原子の一部またはすべては、それぞれ対応する同位体原子で置き換わっていてもよく、式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)で表される化合物は、これら同位体原子で置き換わった化合物も包含する。例えば、化合物(I)中の水素原子の一部またはすべては、原子量2の水素原子(重水素原子)であってもよい。
本発明の式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)中の各原子の一部またはすべてが、それぞれ対応する同位体原子で置き換わった化合物は、市販のビルディングブロックを用いて、上記各製造法と同様な方法で製造することができる。また、式(CL-XVIII)または式(CL-XIX)中の水素原子の一部またはすべてが重水素原子で置き換わった化合物は、例えば、イリジウム錯体を触媒として用い、重水を重水素源として用いてアルコール、カルボン酸等を重水素化する方法[ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ(J.Am.Chem.Soc.), Vol.124,No.10,2092(2002)参照]等を用いて製造することができる。
なお、L101およびL102が、水素原子である場合には、X101が水素原子、メチル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであることがより好ましく、水素原子、メチル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、ヒドロキシもしくはカルバモイルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであることがさらに好ましく、水素原子、またはメチル等であることがさらに好ましい。
X105におけるC1-C4アルキルとしては、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、シクロブチル等が挙げられ、好ましくはメチルが挙げられる。なお、X105としては水素原子がさらに好ましい。
置換されていても良いC1-C4アルコキシのアルキル部分は、前記C1-C4アルキルと同義である。
置換されていても良いC1-C4アルキルにおける置換基としては、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ等が挙げられる。これらの置換基のうちモノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、モノアルキルカルバモイルおよびジアルキルカルバモイルにおけるアルキル部分は、前記C1-C4アルキルと同義である。ジアルキルアミノおよびジアルキルカルバモイルにおける2つのアルキルは、それぞれ同一でも異なっていてもよい。
置換されていても良いC1-C4アシルオキシにおける置換基としては、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、ヒドロキシカルボニル、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ニトロ、シアノ、フルオロ、クロロ、ブロモ等が挙げられる。これらの置換基のうちモノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシ、アルコキシカルボニル、モノアルキルカルバモイルおよびジアルキルカルバモイルにおけるアルキル部分は、前記C1-C4アルキルと同義である。ジアルキルアミノおよびジアルキルカルバモイルにおける2つのアルキルは、それぞれ同一でも異なっていてもよい。
X135におけるヒドロキシC2-C4アルキルとしては、例えば、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチルが挙げられる。ヒドロキシ基の置換位置は任意である。
X136およびX137、X138およびX139、X140およびX141がそれぞれ形成しうるC3-C6含窒素ヘテロ環としては、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、アゼパン等が挙げられる。
X146におけるヒドロキシC2-C4アルキルとしては、例えば、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチルが挙げられる。ヒドロキシ基の置換位置は任意である。
X143およびX144、X145およびX146が、それぞれ形成しうるC3-C6含窒素ヘテロ環としては、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン、アゼパン等が挙げられる。
式(CL-X)におけるX117およびX118が、それらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成する場合には、該単環式ヘテロ環はハロゲン原子、R’、OR’、SR’、CN、CO2R’またはCONR’2から選択される1〜3個の置換基で置換されていてもよい。
ここで、R’は水素原子またはC1-C6アルキルであり、R’としてのC1-C6アルキルは、ハロゲン原子またはOHで置換されていてもよい。
C4-C24アルキルまたはC4-C24アルケニルは、ハロゲン原子、R’、OR’、SR’、CN、CO2R’またはCONR’2から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよい。
ここで、R’は水素原子またはC1-C6アルキルであり、R’としてのC1-C6アルキルは、ハロゲン原子またはOHで置換されていてもよい。
式(CL-XIV)におけるX125およびX126がそれらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成する場合には、該単環式ヘテロ環はハロゲン原子、R’、OR’、SR’、CN、CO2R’またはCONR’2から選択される1〜3個の置換基で置換されていてもよい。
ここで、R’は水素原子またはC1-C6アルキルであり、R’としてのC1-C6アルキルは、ハロゲン原子またはOHで置換されていてもよい。
C4-C24アルキルまたはC4-C24アルケニルは、ハロゲン原子、R’、OR’、SR’、CN、CO2R’またはCONR’2から選択される1個以上の置換基で置換されていてもよい。
ここで、R’は水素原子またはC1-C6アルキルであり、R’としてのC1-C6アルキルは、ハロゲン原子またはOHで置換されていてもよい。
X135は、水素原子、C1-C3アルキル、またはヒドロキシC2-C4アルキルであり、式(C)、式(D)または式(E)であり、好ましくは水素原子または式(C)または式(D)であり、より好ましくは水素原子または式(E)であり、さらに好ましくは水素原子である。
L133は、SまたはOであり、好ましくはSである。
X142は水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)、または式(G)であり、好ましくはC1-C3アルキルであり、さらに好ましくはメチルである。
また、化合物R1-L1-OHのうち、L1が-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3- (各基は前記と同義)であるものも、同様に目的とする化合物に対応した反応基質を用い、公知の反応を1〜複数回適用することにより得ることができる。
化合物37および39は、化合物35と同様の手法により調製することができる。
また、化合物53は市販品として得ることができる。
また、化合物57は市販品として得ることができる。
また、化合物63は、化合物59と化合物62を反応させることによっても得られる。
この場合、b1が
化合物102は、化合物54と同様である。
化合物110のうちM21が-OHであるものは、合成経路1記載のR1-L1-OHと同様である。また、化合物110のうちM21が-NY45C-Hであるものは、化合物37と同様である。さらに、化合物110のうちM21が-CO-OHであるものは、化合物17と同様である。
化合物(CL-IX)のうち、X115およびX116が共に水素原子である化合物(CL-IXa)、およびX115およびX116が同一である化合物(CL-IXb)は以下の方法によって製造することができる。
化合物(IX-IIa)は、2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオールと化合物(IX-IIIa)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。さらに、化合物(CL-IXa)は、化合物(IX-IIa)と化合物(IX-IIIb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(CL-IXb)は、化合物(CL-IXa)を2〜20当量の化合物(IX-IV)と、溶媒中、好ましくは1当量〜大過剰量の還元剤および必要により好ましくは1〜10当量の酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(CL-IX)のうち、X115およびX116が異なる化合物(CL-IXc)および(CL-IXd)は以下の方法によって製造することができる。
化合物(IX-IIb)は、化合物(CL-IXa)を有機合成化学で常用される保護基[例えば、プロテクティブ グループス イン オーガニック シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の保護基]で保護することで製造することができる。
化合物(IX-IIc)は、化合物(IX-IIb)と化合物(IX-IIIc)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(CL-IXc)は、化合物(IX-IIc)の保護基PGを適切な方法で除去することによって得られる。保護基の除去方法としては、有機合成化学で常用される保護基の除去方法[例えば、プロテクティブ グループス イン オーガニック シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の除去方法]を用いることができ、これにより目的とする化合物を製造することができる。
化合物(CL-IXd)は、化合物(CL-IXc)を1〜10当量の化合物(IX-IV)と、溶媒中、好ましくは1当量〜大過剰量の還元剤および必要により好ましくは1〜10当量の酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(CL-IX)のうち、M101およびM102がそれぞれ-OC(O)-である化合物(CL-IXc’)および(CL-IXd’)は以下の方法によっても製造することができる。
化合物(IX-IId)は、化合物(IX-IIc’)と酸化剤を溶媒中、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IX-IIe)は、化合物(IX-IId)と酸化剤を、溶媒中-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(IX-IIf)は化合物(IX-IIe)と化合物(IX-Va)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の縮合剤と1〜10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。さらに、化合物(IX-IIc’’)は、化合物(IX-IIf)と化合物(IX-Vb)を、無溶媒でまたは溶媒中、1〜10当量の縮合剤と1〜10当量の塩基の存在下、室温と200℃の間の温度で、5分間〜100時間反応させることにより製造することができる。
化合物(CL-IXc’)は、化合物(IX-IIc’’)の保護基PGを適切な方法で除去することによって得られる。保護基の除去方法としては、有機合成化学で常用される保護基の除去方法[例えば、プロテクティブ グループス イン オーガニック シンセシス第3版(Protective Groups in Organic Synthesis, third edition)、グリーン(T.W.Greene)著、John Wiley&Sons Inc.(1999年)等に記載の除去方法]を用いることができ、これにより目的とする化合物を製造することができる。
化合物(CL-IXd’)は、化合物(CL-IXc’)を1〜10当量の化合物(IX-IV)と、溶媒中、好ましくは1当量〜大過剰量の還元剤および必要により好ましくは1〜10当量の酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
R115およびR116は同一または異なって、好ましくは水素原子、メチル、エチル、プロピルであり、より好ましくは水素原子、メチルである。
(R115,R116)の組み合わせとしては、好ましくは(水素原子,水素原子)、(水素原子,メチル)、(メチル,メチル)であり、より好ましくは(水素原子,メチル)、(メチル,メチル)である。
L118およびL119は同一または異なって、アルキレンである場合、好ましくは直鎖状のC8-C24アルキレンであり、より好ましくは直鎖状のC8-C20アルキレンであり、さらに好ましくは直鎖状のC8-C12アルキレンである。
L118およびL119は同一または異なって、好ましくはオクチレン、ノニレン、ウンデシレン、トリデシレン、ペンタデシレンであり、より好ましくはオクチレン、ノニレン、ウンデシレンである。
L118およびL119は同一または異なって、アルケニレンである場合、好ましくは直鎖状のC8-C24アルケニレンであり、より好ましくは直鎖状のC10-C20アルケニレンであり、さらに好ましくは直鎖状のC10-C12アルケニレンである。
L118およびL119は同一または異なって、好ましくは(Z)-ウンデカ-9-エニレン、(Z)-トリデカ-11-エニレン、(Z)-テトラデカ-9-エニレン、(Z)-ヘキサデカ-9-エニレン、(Z)-オクタデカ-9-エニレン、(Z)-オクタデカ-11-エニレン、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニレンである。
L118およびL119は同一であることが好ましい。
M101およびM102は同一または異なって、好ましくは-C=C-、-OC(O)-、-C(O)O-、-C(O)(NR’’)-、-N(R’’)C(O)-、-N(R’’)C(O)-、-N(R’’)C(O)N(R’’’)-、-N(R’’)C(O)O-、-OC(O)N(R’’)-、-OC(O)O-であり、より好ましくは-C=C-、-OC(O)-、-C(O)O-である。
M101およびM102の各構造の結合については、-OC(O)-を例にして説明すると、R118-OC(O)-L118という構造であることを意味する。
M101およびM102は同一であることが好ましい。
R’’およびR’’’は、好ましくは水素原子、メチル、エチル、プロピルであり、より好ましくは水素原子、メチルであり、さらに好ましくは水素原子である。
R118およびR119は同一または異なって、アルキルである場合、好ましくは直鎖状のC1-C16アルキルであり、より好ましくは直鎖状のC2-C9アルキルである。
R118およびR119は同一または異なって、好ましくはペンチル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシルである。
R118およびR119は同一または異なって、アルケニルである場合、好ましくは直鎖状のC2-C16アルケニルであり、より好ましくは直鎖状のC3-C9アルケニルである。
R118およびR119は同一または異なって、好ましくは(Z)-ヘプタ-2-エン、(Z)−オクタ-2-エン、(Z)-ノナ-2-エン、(Z)-ノナ-3-エン、ノナ-8-エン、(Z)-ドデカ-2-エン、(Z)-トリデカ-2-エンである。
R118およびR119は同一であることが好ましい。
R118-M101-L118およびR119-M102-L119は同一であることが好ましい。
R118-M101-L118およびR119-M102-L119は同一または異なって、好ましくは(Z)-テトラデカ-9-エニル、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(E)-オクタデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-11-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル、(9Z,12Z,15Z)-オクタデカ-9,12,15-トリエニル、(Z)-イコサ-11-エニル、(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルおよび(Z)-ドコサ-13-エニルからなる群から選ばれ、より好ましくは(Z)-ヘキサデカ-9-エニル、(Z)-オクタデカ-9-エニル、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルおよび(11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニルからなる群から選ばれる。
R118-M101-L118およびR119-M102-L119は同一または異なって、好ましくは以下の構造(1)〜(5)であり、より好ましくは同一に以下の構造(1)〜(5)である。
式(CL-XVIII)で表される脂質の合成方法としては、例えば、以下の式(CL-XVIII)の合成法I及び式(CL-XVIII)の合成法IIが挙げられる。
(式(CL-XVIII)の合成法I)
化合物(XVIII-b)は、化合物(XVIII-a)と2-メルカプトエタノールとを、無溶媒でまたは溶媒中で、1〜10当量の塩基の存在下、5分間〜100時間、チオエーテル化反応させ、アルコール化合物を得た後、アルコールをハロゲン化反応することにより得ることができる。ハロゲン化の反応としては、クロロ化が好ましく、例えば、無溶媒でまたは溶媒中で、1〜10当量の塩基の存在下、5分間〜100時間、メタンスルホニルクロリドを反応させる方法を挙げることができる。
化合物(XVIII-d)は、化合物(XVIII-c)とN-(ターシャリーブトキシカルボニル)-2-ニトロベンゼンスルフォンアミドとを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより、カルバメート中間体を得たのち、酸と、無溶媒でまたは溶媒中で、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより製造することができる。
化合物(XVIII-c)とN-(ターシャリーブトキシカルボニル)-2-ニトロベンゼンスルフォンアミドとを反応させる段階では、テトラブチルアンモニウムヨージド等の相間移動触媒も用いてもよい。
塩基としては、工程39と同様の塩基が挙げられる。
化合物(XVIII-b)と化合物(XVIII-d)とを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより、式(CL-XVIII)で表される脂質(式中のX135が水素原子である)を得ることができる。
化合物(XVIII-b)と化合物(XVIII-d)との反応では、テトラブチルアンモニウムヨージド等の相間移動触媒も用いてもよい。
公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座13 有機化合物の合成I」、第5版、p.374、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法を使用して、N-アルキル化、N-カルボニル化、N-アシル化、N-スルホニル化反応を行うことにより、式(CL-XVIII)で表される脂質(式中のX135がC1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(C)、式(D)、式(E)のいずれかである)を得ることができる。
式(CL-XVIII)で表される脂質は、当該式中のR138がC8-C24アルキニルC8-C24アルキルチオエチル、C8-24アルケニルチオエチル、C8-C24アルキニルチオエチルであるとき、式(CL-XVIII)の合成法IIにより好適に製造することができる。
化合物(XVIII-e)は、化合物(XVIII-a)に対し、チオ酢酸S-カリウムを、無溶媒でまたは溶媒中で、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより得ることができる。
化合物(XVIII-g)は、化合物(XVIII-f)とメタンスルホニルクロリドとを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させることにより得ることができる。
化合物(XVIII-e)と化合物(XVIII-g)とを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させチオエーテルを得たのち、無溶媒でまたは溶媒中で、酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させてBoc基を脱離させることにより、式(CL-XVIII)で表される脂質(式中のX135が水素原子である)を得ることができる。
塩基としては、工程43と同様の塩基が挙げられる。
工程46は、前記工程42と同様に行うことができる。
式(CL-XIX)で表される脂質の合成方法としては、例えば、以下の式(CL-XIX)の合成法I及び式(CL-XIX)の合成法IIが挙げられる。
式(CL-XIX)の合成法Iは、式(CL-XIX)中のL133がSであるときに好適である。
アゼチジン-3,3-ジイルジメタノール(XIX-a)におけるNを常法にしたがってBoc基で保護した後、メタンスルホニルクロリドを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間作用させることによりジメシル体を得る。さらに、ジメシル体に対し、チオ酢酸 S-カリウムを、無溶媒でまたは溶媒中で、5分間〜72時間反応させることにより、化合物(XIX-b)を得ることができる。
化合物(XIX-b)と、R139-OMsおよびR140-OMs(Msは、メタンスルホニル基である)とを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間作用させることにより、チオエーテル体を得ることができる。
さらに、得られたチオエーテル体に対し、無溶媒でまたは溶媒中で、酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させてBoc基を脱離させることにより、式(CL-XIX)で表される脂質(式中のX142が水素原子である)を得ることができる。
溶媒としては、工程47と同様の溶媒が挙げられる。
酸としては、例えば、塩酸、酢酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。
公知の方法(例えば、「第5版実験化学講座13 有機化合物の合成I」、第5版、p.374、丸善(2005年))もしくはそれに準じた方法を使用して、N-アルキル化、N-カルボニル化、N-アシル化反応を行うことにより、式(CL-XIX)で表される脂質(式中のX142がC1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)、式(G)のいずれかである)を得ることができる。
式(CL-XIX)の合成法IIは、式(CL-XIX)中のL133がOであるときに好適である。
アゼチジン-3,3-ジイルジメタノール(XIX-a)におけるNを常法にしたがってBoc基で保護した後、R140-OMsを無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間作用させることにより、化合物(XIX-c)を得る。
化合物(XIX-c)に対し、メタンスルホニルクロリドを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間作用させることによりメシル体を得る。さらに、メシル体に対し、チオ酢酸 S-カリウムを、無溶媒でまたは溶媒中で、5分間〜72時間反応させることにより、化合物(XIX-d)を得ることができる。
溶媒としては、工程50と同様の溶媒が挙げられる。
化合物(XIX-d)と、R139-OMs(Msは、メタンスルホニル基である)とを、無溶媒でまたは溶媒中で、塩基の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間作用させることにより、チオエーテル体を得ることができる。
さらに、得られたチオエーテル体に対し、無溶媒でまたは溶媒中で、酸の存在下、-20℃と150℃の間の温度で、5分間〜72時間反応させてBoc基を脱離させることにより、式(CL-XIX)で表される脂質(式中のX142が水素原子である)を得ることができる。
溶媒としては、工程50と同様の溶媒が挙げられる。
酸としては、例えば、塩酸、酢酸、トリフルオロ酢酸等が挙げられる。
工程53は、前記工程49と同様に行うことができる。
また、式(II)で表される脂質の中でも、好ましくは、式(II)中のR4〜R6の少なくとも一つが直鎖状のC8-C24アルキルである脂質であり、より好ましくは、式(II)中のR4〜R6の2つが直鎖状のC8-C24アルキルである脂質であり、さらに好ましくは、式(II)中のR4〜R6がすべて直鎖状のC8-C24アルキルである脂質である。
式(II)、式(V’)、および式(V”)からなる群より選択される脂質と組み合わせる脂質Bとしては、好ましくは、式(CL-I)、式(CL-II)、式(CL-III)、式(CL-IV)、式(CL-V)、式(CL-VI)、式(CL-VII)、式(CL-VIII)、式(CL-IX)、式(CL-XII)、式(CL-XIV)、式(CL-XVIII)および式(CL-XIX)で表される脂質であり、より好ましくは式(CL-XVIII)および式(CL-XIX)で表される脂質である。
また、式(CL-II)で表される脂質の中でも、好ましくは、式(CL-II)中のL106およびL107が一緒になって単結合またはC2-C8アルキレンを形成し、かつp101およびp102が1〜3の整数である脂質であり、より好ましくは、式(CL-II)中のL106およびL107が一緒になって単結合を形成し、かつp101およびp102が1である脂質である。
脂質Aと脂質Bの組み合わせとしては、より好ましくは、脂質Aとして式(II)で表される脂質と、脂質Bとして式(CL-XVIII)および/または式(CL-XIX)で表される脂質との組み合わせである。
本発明の核酸含有脂質ナノ粒子は、1種または2種以上の脂質Bを含有していてもよい。
また、本発明の核酸含有脂質ナノ粒子は、中性脂質および/または水溶性高分子の脂質誘導体もしくは脂肪酸誘導体を含有していてもよい。
本発明の核酸含有脂質ナノ粒子は、1種または2種以上の脂質A、および1種または2種以上の脂質Bを含有していてもよい。
第1または第3の脂質溶液と水または緩衝剤水溶液の混合においては、前者を後者に加えても良く、後者を前者に加えてもよい。また、撹拌しながら容器に同時に前者と後者を加えてもよい。さらに、インラインにおいて前者と後者を混合することもできる。この場合、インライン混合デバイスとしては、例えば、T-コネクタ等を用いることができる。
本発明の核酸含有脂質ナノ粒子において脂質Bを含有する場合、脂質Bの分子の総数は特に限定されないが、脂質Bのモル数が、本発明の核酸含有脂質ナノ粒子を構成する核酸のリン原子のモル数に対して0.1〜10倍モル量であるのが好ましく、0.5〜9倍モル量であるのがより好ましく、1〜8倍モル量であるのがさらに好ましく、1.5〜6倍モル量であるのが最も好ましい。
核酸含有脂質ナノ粒子における脂質Bの分子の総数は、上記の上限下限の好ましい範囲の組合せの中で、総脂質のモル数に対して0.10〜0.70倍モル量であるのが好ましく、0.15〜0.65倍モル量であるのがより好ましく、0.20〜0.65倍モル量であるのがさらにより好ましく、0.25〜0.60倍モル量であるのが最も好ましい。
中性脂質としては、単純脂質、複合脂質または誘導脂質のいかなるものであってもよく、例えば、リン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質、スフィンゴイドまたはステロール等が挙げられるがこれらに限定されない。また、中性脂質は1種また2種以上を組み合わせて使用してもよい。
なお、ここでいう中性脂質とは、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体以外の中性脂質を指す。
本発明においては、総脂質とは、脂質Aおよび水溶性高分子の脂質誘導体および脂肪酸誘導体を含み、場合により、脂質Bおよび中性脂質を含む。すなわち、脂質Aのモル数は、総脂質のモル数を1とした場合の倍モル量として、水溶性高分子の脂質誘導体および脂肪酸誘導体の倍モル量、場合により、脂質Bの倍モル量および中性脂質の倍モル量の総和を1から減じた倍モル量となる。
なお、実施例および参考例に示されたプロトン核磁気共鳴スペクトル(1H NMR)は、270MHz、300MHzまたは400MHzで測定されたものであり、化合物および測定条件によっては交換性プロトンが明瞭には観測されないことがある。なお、シグナルの多重度の表記としては通常用いられるものを用いているが、brとは見かけ上幅広いシグナルであることを表す。
以下参考例A1〜A71に、脂質Aの合成方法を示す。
N-メチル-2-(オレオイルオキシ)-N,N-ビス(2-(オレオイルオキシ)エチル)エタンアミニウム クロリド (化合物I-1)
工程1
トリエタノールアミン (シグマアルドリッチ(Sigma-Aldrich)社製, 0.115 g, 0.771 mmol)のクロロホルム (5 mL)溶液にオレイン酸 (東京化成工業社製, 0.784 g, 2.78 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (東京化成工業社製, 0.591 g, 3.08 mmol)、トリエチルアミン (0.430 mL, 3.08 mmol)およびN,N-ジメチルアミノピリジン (ナカライテスク社製, 0.024 g, 0.19 mmol)を加えて室温で終夜攪拌した。反応液に水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/ヘキサン = 50/50〜100/0)で精製して2,2’,2’’-ニトリロトリス(エタン-2,1-ジイル) トリオレアート (0.439 g, 0.466 mmol, 収率60%)を得た。
ESI-MS m/z: 943 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.23-1.36 (m, 60H), 1.58-1.63 (m, 6H), 1.98-2.04 (m, 12H), 2.29 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 2.83 (t, J = 6.1 Hz, 6H), 4.11 (t, J = 6.1 Hz, 6H), 5.31-5.38 (m, 6H).
工程2
工程1で得られた2,2’,2’’-ニトリロトリス(エタン-2,1-ジイル) トリオレアート (0.439 g, 0.466 mmol)にヨウ化メチル (東京化成工業社製, 3 mL)を加え、室温で終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1)に溶解してイオン交換樹脂 (ダウ・ケミカル(Dow Chemical)製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄)にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1)で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜88/12)で精製して標記の化合物 (0.342 g, 0.344 mmol, 収率74%)を得た。
ESI-MS m/z: 957 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.25-1.35 (m, 60H), 1.59-1.63 (m, 6H), 1.99-2.03 (m, 12H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 3.56 (s, 3H), 4.21 (t, J= 4.9 Hz, 6H), 4.61 (t, J = 4.9 Hz, 6H), 5.30-5.38 (m, 6H).
N-メチル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-N,N-ビス(2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)エチル)エタンアミニウム クロリド (化合物I-2)
参考例A1と同様の方法で、オレイン酸の代わりに(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (Sigma-Aldrich社製, 0.704 g, 2.51 mmol)を用い、標記の化合物(0.100 g、通し収率22%)を得た。
ESI-MS m/z: 950 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.25-1.40 (m,42H), 1.55-1.66 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 6H), 3.54 (s, 3H), 4.21 (t, J = 5.1 Hz, 6H), 4.59 (br s, 6H), 5.28-5.43 (m, 12H).
(9Z,12Z)-N-メチル-N,N-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物I-3)
工程1
アンモニア (東京化成工業社製, 約7 mol/Lメタノール溶液、8.00 mL、56.0 mmol)に (9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (ニューチェック・プレップ・インク (Nu-Chek Prep,Inc)社製, 3.55 g, 10.1 mmol) を加え、マイクロ波反応装置を用いて130℃で3時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで5回抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮することで (9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの粗生成物を得た。
得られた粗生成物に(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (2.78 g, 8.07 mmol) および50%水酸化ナトリウム水溶液 (2.00 mL, 50.0 mmol) を加え、油浴上110℃で60分間攪拌した。室温まで冷却後、反応液を酢酸エチルで希釈し、水、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜90/10)で精製することにより、(9Z,12Z)-トリ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミン (1.09 g, 1.43 mmol, 収率18%)を得た。
ESI-MS m/z: 763 (M + H)+.
工程2
参考例A1工程2と同様の方法で、2,2’,2’’-ニトリロトリス(エタン-2,1-ジイル)トリオレアートの代わりに工程1で得られた(9Z,12Z)-トリ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミン (1.05 g, 1.38 mol)を用い、標記の化合物 (1.06 g, 1.30 mol, 収率94%)を得た。
ESI-MS m/z: 777 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.1 Hz, 9H), 1.22-1.45 (m, 48H), 1.61-1.69 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 3.35 (s, 3H), 3.44-3.50 (m, 6H), 5.29-5.42 (m, 12H).
(Z)-N-メチル-N,N-ジ((Z)-オクタデカ-9-エニル)オクタデカ-9-エン-1-アミニウム クロリド (化合物I-4)
参考例A3と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートの代わりに (Z)-オクタデカ-9-エニル メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc.製) を用い、標記の化合物 (0.410 g, 0.501 mmol, 通し収率24%) を得た。
ESI-MS m/z: 783 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.22-1.44 (m, 66H), 1.62-1.69 (m, 6H), 1.98-2.04 (m, 12H), 3.35 (s, 3H), 3.45-3.51 (m, 6H), 5.30-5.39 (m, 6H).
(11Z,14Z)-N,N-ジ((11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル)-N-メチルイコサ-11,14-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物I-5)
参考例A3と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートの代わりに (11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエニル メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc.製) を用い、標記の化合物 (0.323 g, 0.360 mmol, 通し収率25%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.24-1.43 (m, 63H), 1.61-1.69 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.35 (s, 3H), 3.45-3.50 (m, 6H), 5.30-5.42 (m, 12H).
(9Z,12Z)-N-(3-ヒドロキシプロピル)-N,N-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物I-6)
参考例A3の工程1で得られるトリ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミン(0.199 g, 0.261 mmol)のクロロホルム (0.3 mL)溶液に3-ヨードプロパン-1-オール (和光純薬工業社製, 0.194 g, 1.04 mmol)を加え、マイクロ波反応装置で130℃、40分間反応させた。反応液を少量のエタノールに溶解してイオン交換樹脂(Sigma-Aldirch社製, Amberlite(R) IRA-400, Cl型, 約20倍量, 水およびエタノールでプレ洗浄)にロードし、エタノールで溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜88/12)で精製して標記の化合物 (0.146 g, 0.170 mmol, 収率65%)を得た。
ESI-MS m/z: 821 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.27-1.39 (m, 49H), 1.67-1.74 (m, 6H), 1.93-1.99 (m, 2H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.2 Hz, 6H), 3.14-3.19 (m, 6H), 3.70-3.74 (m, 2H), 3.79 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 5.29-5.42 (m, 12H).
(9Z,12Z)-N-(2-ヒドロキシエチル)-N,N-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物I-7)
参考例A6と同様の方法で、3-ヨードプロパン-1-オールの代わりに2-ヨードエタン-1-オール (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物(0.211 g, 0.250 mmol, 収率85%)を得た。
ESI-MS m/z: 807 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.27-1.40 (m, 49H), 1.64-1.71 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 6H), 3.36-3.41 (m, 6H), 3.53-3.56 (m, 2H), 4.08-4.12 (m, 2H), 5.29-5.42 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-1)
工程1
2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (ザイレクサファーマ (Zylexa Pharma)社製, 0.252 g, 1.69 mmol) のクロロホルム (10 mL)溶液に(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (2.37 g, 8.45 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (1.62 g, 8.45 mmol)および N,N-ジメチルアミノピリジン(0.206 g, 1.69 mmol)を加えて60℃で終夜攪拌した。室温まで冷却後、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 100/0) で精製して(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.334 g, 0.356 mmol, 収率21%)を得た。
ESI-MS m/z: 937 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデク-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデク-9,12-ジエノアート (0.324 g, 0.346 mmol)のクロロホルム (3 mL)溶液にヨウ化メチル (0.216 mL)を加え、室温で5時間撹拌した。反応液にヨウ化メチル (0.216 mL)を加え、室温で終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム(1:1)に溶解してイオン交換樹脂 (Dow Chemical製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄)にロードし、メタノール-クロロホルム(1:1)で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=100/0〜90/10)で精製して標記の化合物 (0.161 g, 0.164 mmol, 収率47%)を得た。
ESI-MS m/z: 951 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.86 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.22-1.36 (m, 42H), 1.54-1.61 (m, 6H), 2.02 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.34 (t, J = 7.7 Hz, 6H), 2.74 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 3.69 (s, 9H), 4.57 (s, 6H), 5.26-5.39 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス((Z)-テトラデカ-9-エノイルオキシ)-2-(((Z)-テトラデカ-9-エノイルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-2)
参考例A8と同様の方法で、(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりにcis-9-テトラデセン酸 (Nu-Chek Prep,Inc社製) を用い、標記の化合物 (0.0854 g, 0.104 mmol, 通し収率16%)を得た。
ESI-MS m/z: 789 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.1 Hz, 9H), 1.27-1.36 (m, 36H), 1.58-1.64 (m, 6H), 2.02 (q, J = 6.5 Hz, 12H), 2.37 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.72 (s, 9H), 4.55 (s, 6H), 5.30-5.38 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス(オレオイルオキシ)-2-(オレオイルオキシメチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-3)
参考例A8と同様の方法で、(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりにオレイン酸を用い、標記の化合物 (1.14 g, 1.15 mmol, 通し収率34%)を得た。
ESI-MS m/z: 957 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.83 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.17-1.32 (m, 60H), 1.51-1.59 (m, 6H), 1.96 (t, J = 5.5 Hz, 12H), 2.32 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.70 (s, 9H), 4.56 (s, 6H), 5.25-5.34 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス(ステアロイルオキシ)-2-(ステアロイルオキシメチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-4)
工程1
2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.100g, 0.670 mmol)にトルエン (10 mL)、ステアリン酸 (東京化成工業社製, 0.763 g, 2.68 mmol)、p-トルエンスルホン酸一水和物 (0.191 g, 1.01 mmol)を順に加え、加熱還流条件下で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム)で精製して、2-(ジメチルアミノ)-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジステアラート (0.120 g, 0.127 mmol, 収率19%)を得た。
ESI-MS m/z: 948 (M + H)+
工程2
工程1で得られた、2-(ジメチルアミノ)-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジステアラート(0.120 g, 0.127 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物(0.0260 g, 0.0260 mmol, 収率21%)を得た。
ESI-MS m/z: 963 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.36 (m, 84H), 1.56-1.65 (m, 6H), 2.37 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.72 (s, 9H), 4.56 (s, 6H).
1,3-ビス((Z)-ヘキサデカ-9-エノイルオキシ)-2-(((Z)-ヘキサデカ-9-エノイルオキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-5)
参考例A8と同様の方法で、(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりにcis-9-ヘキサデセン酸を用い、標記の化合物 (0.680 g, 0.748 mmol, 通し収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 873 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.24-1.36 (m, 48H), 1.56-1.67 (m, 13H), 1.98-2.05 (m, 12H), 2.37 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 3.75 (s, 9H), 4.53 (s, 6H), 5.29-5.40 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-6)
工程1
2-ジメチルアミノ-2-ヒドロキシメチルプロパン-1,3-ジオール (Zylexa Pharma 社製, 0.115 g, 0.768 mmol) のトルエン (5 mL) 溶液に水素化ナトリウム (ナカライテスク社製, 油性, 60%, 0.154 g, 3.84 mmol) および (9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (1.32 g, 3.84 mmol) を加えて加熱還流下で終夜攪拌した。室温まで冷却後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてヘキサンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜95/5) で精製して N,N-ジメチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-2-アミン (0.195 g, 0.217 mmol, 収率28%) を得た。
ESI-MS m/z: 895 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた N,N-ジメチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-2-アミン (0.0849 g, 0.0949 mmol) のクロロホルム (1 mL)溶液にヨウ化メチル (0.119 mL)を加え、室温で終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1)に溶解してイオン交換樹脂 (Dow Chemical製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄)にロードし、メタノール-クロロホルム(1:1)で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して標記の化合物 (0.0646 g, 0.0684 mmol, 収率72%)を得た。
ESI-MS m/z: 909 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.25-1.40 (m, 48H), 1.55-1.63 (m, 6H), 2.02-2.09 (m, 12H), 2.77 (t, J= 6.8 Hz, 6H), 3.44 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.62 (s, 9H), 3.82 (s, 6H), 5.29-5.42 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス((Z)-テトラデカ-9-エニルオキシ)-2-(((Z)-テトラデカ-9-エニルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-7)
参考例A13と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートの代わりにミリストレイル メタンスルホナート(Nu-Chek Prep,Inc製) を用い、標記の化合物(0.0729 g, 0.0931 mmol, 通し収率12%)を得た。
ESI-MS m/z: 747 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.90 (t, J = 7.1 Hz, 9H), 1.27-1.37 (m, 42H), 1.54-1.61 (m, 6H), 2.02 (q, J = 6.5 Hz, 12H), 3.43 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.64 (s, 8H), 3.81 (s, 6H), 5.31-5.39 (m, 6H).
1,3-ビス((Z)-ヘキサデカ-9-エニルオキシ)-2-(((Z)-ヘキサデカ-9-エニルオキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパンー2-アミニウム クロリド (化合物II-8)
参考例A13と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートの代わりにパルミトレイル メタンスルホナート(Nu-Chek Prep,Inc製)を用い、標記の化合物(0.466 g, 0.538 mmol, 通し収率71%)を得た。
ESI-MS m/z: 831 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.23-1.37 (m, 54H), 1.53-1.61 (m, 14H), 2.02 (q, J = 5.8 Hz, 12H), 3.43 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 3.65 (s, 9H), 3.81 (s, 6H), 5.30-5.40 (m, 6H).
(6Z,9Z,40Z,43Z)-N,N,N-トリメチル-25-((3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-3-オキソプロポキシ)メチル)-20,30-ジオキソ-19,23,27,31-テトラオキサノナテトラコンタ-6,9,40,43-テトラエン-25-アミニウム クロリド (化合物II-9)
工程1
“ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー(J.Org.Chem.)”,2002年, 第67巻, p.1411-1413に記載の方法に準じた方法で合成したジ-tert-ブチル 3,3'-((2-アミノ-2-((3-(tert-ブトキシ)-3-オキソプロポキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル)ビス(オキシ))ジプロパノエート (0.500 g, 0.989 mmol)をジクロロメタン(5 mL)に溶解させ、ヨウ化メチル(1.40 g, 9.89 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1)に溶解してイオン交換樹脂 (Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄)にロードし、メタノールで溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 97/3〜80/20)で精製して9-((3-(tert-ブトキシ)-3-オキソプロポキシ)メチル)-N,N,N,2,2,16,16-ヘプタメチル-4,14-ジオキソ-3,7,11,15-テトラオキサヘプタデカン-9-アミニウム クロリド (0.144 g, 0.246 mmol, 収率25%)を得た。
ESI-MS m/z: 548 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた9-((3-(tert-ブトキシ)-3-オキソプロポキシ)メチル)-N,N,N,2,2,16,16-ヘプタメチル-4,14-ジオキソ-3,7,11,15-テトラオキサヘプタデカン-9-アミニウム クロリド (0.350 g, 0.246 mmol)をジクロロメタン (2 mL)に溶解させ、トリフルオロ酢酸 (0.380 mL, 4.92 mmol)を加えて、室温で3時間攪拌した。反応液にトルエンを加えて、減圧下濃縮することで、1,3-ビス(2-カルボキシエトキシ)-2-((2-カルボキシエトキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパン-2-アミニウム クロリド トリフルオロ酢酸塩の粗生成物 (0.102 g, 0.246 mmol, 粗収率100%)を得た。
ESI-MS m/z: 422 (M + H)+
工程3
工程2で得られた1,3-ビス(2-カルボキシエトキシ)-2-((2-カルボキシエトキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパン-2-アミニウム クロリド トリフルオロ酢酸塩の粗生成物 (0.055 g, 0.13 mmol)をジクロロメタン (2 mL)に溶解させ、O-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロフォスフェート (和光純薬工業社製, 0.20 g, 0.53 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.23 mL, 1.3 mmol)、および(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-オール(東京化成工業社製, 0.141 g, 0.53 mmol)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に水を加えて、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 90/10〜80/20)で精製して標記の化合物 (8.0 mg, 6.9 mmol, 収率5%)を得た。
ESI-MS m/z: 1125 (MH)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.25-1.39 (m, 48H), 1.58-1.66 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.59 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 6H), 3.42 (s, 9H), 3.74 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 4.00 (s, 6H), 4.07 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 5.29-5.40 (m, 12H).
(7Z,38Z)-23-((3-((Z)-ヘキサデカ-9-エニルオキシ)-3-オキソプロポキシ)メチル)-N,N,N-トリメチル-18,28-ジオキソ-17,21,25,29-テトラオキサペンタテトラコンタ-7,38-ジエン-23-アミニウム クロリド (化合物II-10)
参考例A16と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-オールの代わりに(Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-オール (Nu-Chek Prep,Inc社製)を用い、標記の化合物(0.145 g, 0.134 mmol, 通し収率17%)を得た。
ESI-MS m/z: 1047 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.24-1.38 (m, 54H), 1.58-1.66 (m, 6H), 1.98-2.05 (m, 12H), 2.58 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 3.47 (s, 9H), 3.74 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 4.02 (s, 6H), 4.07 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 5.30-5.40 (m, 6H).
(5Z,36Z)-N,N,N-トリメチル-16,26-ジオキソ-21-((3-オキソ-3-((Z)-テトラデカ-9-エニルオキシ)プロポキシ)メチル)-15,19,23,27-テトラオキサヘンテトラコンタ-5,36-ジエン-21-アミニウム クロリド (化合物II-11)
参考例A16と同様の方法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-オールの代わりに(Z)-テトラデカ-9-エン-1-オール (Nu-Chek Prep,Inc社製)を用い、標記の化合物(0.189 g, 0.189 mmol, 通し収率24%)を得た。
ESI-MS m/z: 963 (M)+;1H-NMR (CDCl3) δ: 0.87-0.92 (m, 9H), 1.25-1.38 (m, 42H), 1.55-1.66 (m, 6H), 1.98-2.05 (m, 12H), 2.58 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 3.47 (s, 9H), 3.75 (t, J = 5.7 Hz, 6H), 4.01 (s, 6H), 4.07 (t, J= 6.8 Hz, 6H), 5.30-5.41 (m, 6H).
(11Z,14Z)-N,N,N-トリメチル-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)イコサ-11,14-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物II-12)
工程1
シアノ酢酸エチル (東京化成工業社製, 1.00 g, 8,84 mmol)と(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (7.62 g, 22.1 mmol) をテトラヒドロフラン (30 mL)に溶解させ、氷冷下水素化ナトリウム (油性, 60%, 1.06 g, 26.5 mmol)、およびヨウ化テトラ-n-ブチルアンモニウム (ナカライテスク社製, 3.27 g, 8.84 mmol)を加えた。発泡が収まった後、60℃で3時間攪拌した。反応液に水を加えて、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮することで、(11Z,14Z)-エチル 2-シアノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノエートの粗生成物 (3.50 g, 5.74 mmol, 粗収率65%)を得た。
工程2
工程1で得られた(11Z,14Z)-エチル 2-シアノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノエートの粗生成物 1.50 g, 2.46 mmol)をテトラヒドロフラン(10 mL)に溶解し、氷冷下水素化アルミニウムリチウム (純正化学社製, 0.467 g, 12.3 mmol)を加え、30分間攪拌した。反応液に水 (0.5 mL), 15%水酸化ナトリウム水溶液 (0.5 mL), 水 (1.5 mL)、硫酸マグネシウムを順に加え、しばらく攪拌した後ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 99/1〜85/15)で精製して(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (1.00 g, 2.46 mmol, 収率71%)を得た。
ESI-MS m/z: 573 (M + H)+.
工程3
工程2で得られた(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (0.350 g, 0.612 mmol)をアセトニトリル (2 mL)とテトラヒドロフラン (2 mL)に溶解し、 38%ホルムアルデヒド水溶液 (和光純薬工業社製, 0.145 mL, 1.84 mmol)、酢酸 (0.035 mL, 0.612 mmol)、およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (Acros Organics(アクロスオーガニクス)社製, 0.389 g, 1.84 mmol) を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に水を加えて、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 99/1〜85/15)で精製して(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.252 g, 0.420 mmol, 収率69 %)を得た。
ESI-MS m/z: 600 (M + H)+
工程4
工程3で得られた(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.252 g, 0.420 mmol)のジクロロメタン (4 mL)溶液に、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (0.141 g, 0.504 mmol)、 O-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロフォスフェート (0.192 mmol, 0.504 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.147 mL, 0.840 mmol)を順に加えて、室温で4時間攪拌した。反応液に水を加えてヘキサンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 95/5〜85/15)で精製することで、(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.307 g, 0.356 mmol, 収率85 %)を得た。
ESI-MS m/z: 863 (M + H)+
工程5
工程4で得られた(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.307 g, 0.356 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様にして標記化合物 (0.260 g, 0.285 mmol, 収率80%)を得た。
ESI-MS m/z: 877 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ:0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.48 (m, 54H), 1.60-1.66 (m, 2H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.77 (t, J= 6.3 Hz, 6H), 3.50 (s, 2H), 3.60 (s, 9H), 4.13 (s, 2H), 5.27-5.44 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-3-((11Z,14Z)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)イコサ-11,14-ジエニルカルバモイルオキシ)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-13)
工程1
参考例A19工程2で得られた(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (0.918 g, 1.61 mmol)をテトラヒドロフラン(20 mL)に溶解させ、トリエチルアミン (0.671 mL, 4.81 mmol)、および二炭酸 ジ-tert-ブチル (国産化学社製, 0.373 mL, 1.61 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 95/5〜50/50)で精製することで、tert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.918 g, 1.37 mmol, 収率85%)を得た。
ESI-MS m/z: 672 (M + H)+.
工程2
工程1で得られたtert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.357 g, 0.531 mmol)をジクロロメタン (5 mL)に溶解させ、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (0.223 g, 0.797 mmol)、O-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロフォスフェート (0.303 mmol, 0.797 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.186 mL, 1.06 mmol)、およびN,N-ジメチルアミノピリジン (0.0650 g, 0.531 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99/1〜90/10)で精製することで、 (9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(((tert-ブトキシカルボニルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート(0.395 g, 0.423 mmol, 収率80%)を得た。
ESI-MS m/z: 935(M + H)+.
工程3
工程2で得られた(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(((tert-ブトキシカルボニルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.395 g, 0.423 mmol)をジクロロメタン(3 mL)に溶解させ、氷冷下トリフルオロ酢酸 (1.00 mL, 4.92 mmol)を加えて、0℃で2時間攪拌した。反応液に1,2-ジクロロエタンを加えて、減圧下濃縮することで、(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート トリフルオロ酢酸塩の粗生成物 (0.394 g, 0.423 mmol, 粗収率100%)を得た。
ESI-MS m/z: 834 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート トリフルオロ酢酸塩の粗生成物 (0.200 g, 0.215 mmol)をアセトニトリル(2 mL)に溶解させ、“ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー(J.Am.Chem.Soc.)”,1981年,第103巻,p.4194-4199記載の方法に準じた方法で合成した3-(ジメチルアミノ)プロピル 4-ニトロフェニル カルボナート塩酸塩 (0.279 g、1.07 mmol)、トリエチルアミン (0.299 mL, 2.15 mmol)、およびN,N-ジメチルアミノピリジン (0.0520 g, 0.429 mmol)を加え、60℃で2時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99/1〜60/40)で精製することで、 (9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((((3-(ジメチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-dien-1-yl)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.0800 g, 0.0830 mmol, 収率39%)を得た。
ESI-MS m/z: 964 (M + H)+.
工程5
工程4で得られた(9Z,12Z)-(11Z,14Z)-2-((((3-(ジメチルアミノ)プロポキシ)カルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.053 g, 0.055 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.025 g, 0.025 mmol, 収率45%)を得た。
ESI-MS m/z: 978 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.17-1.40 (m, 54H), 1.56-1.66 (m, 2H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.09-2.17 (m, 2H), 2.33 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.2 Hz, 6H), 3.05 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.44 (s, 9H), 3.73-3.79 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 4.16 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 5.27-5.44 (m, 12H), 5.72 (t, J = 6.5 Hz, 1H).
(12Z,15Z)-3-ヒドロキシ-N,N,N-トリメチル-2,2-ジ((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)ヘニコサ-12,15-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物II-14)
工程1
参考例A19工程2で得られた(11Z,14Z)-2-(アミノエチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(1.35 g, 2.36 mmol)をテトラヒドロフラン(10 mL)に溶解させ、38%ホルムアルデヒド水溶液 (和光純薬工業社製0.559 mL, 7.08 mmol)、酢酸 (0.135 mL, 2.36 mmol)、およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (1.50 g, 7.08 mmol)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 99/1〜85/15)で精製することで、 (11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン-1-オール (0.610 g, 1.02 mmol, 収率43%)を得た。
ESI-MS m/z: 600 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン-1-オール (0.300 g, 0.500 mmol)をジクロロメタン (3 mL)に溶解させ、デス-マーチン試薬 (東京化成工業社製、0.233 g, 0.550 mmol)を加えて、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 95/5〜70/30)で精製することで、(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエナール(0.160 g, 0.268 mmol, 収率54%)を得た。
ESI-MS m/z: 598 (M + H)+.
工程3
マグネシウム (Sigma-Ardrich社製, 0.0140 g, 0.562 mmol)にジエチルエーテル (1 mL)、およびヨウ素(ひとかけら)を加え、室温で5分間攪拌した。そこに、国際公開第2010/42877号に記載の方法に準じた方法で合成した(6Z,9Z)-18-ブロモオクタデカ-6,9-ジエン (0.176 g, 0.535 mmol)のジエチルエーテル溶液 (1 mL)を加え、加熱還流下攪拌した。ヨウ素の色が消えたことを確認した後、工程2で得られた(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエナール (0.160 g, 0.268 mmol)のジエチルエーテル溶液 (1 mL)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 99/1〜85/15)で精製することで、(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-((ジメチルアミノ)メチル)-20-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オクタトリアコンタ-6,9,29,32-テトラエン-19-オール (0.0470 g, 0.0550 mmol, 収率21%)を得た。
ESI-MS m/z: 848 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-((ジメチルアミノ)メチル)-20-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オクタトリアコンタ-6,9,29,32-テトラエン-19-オール (0.047 g, 0.055 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.0012 g, 0.0013 mmol, 収率2%)を得た。
ESI-MS m/z: 863 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ:0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.17-1.40 (m, 58H), 1.54-1.65 (m, 2H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 3.29 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 3.51 (s, 9H), 3.56 (d, J= 14.2 Hz, 1H), 3.62-3.70 (m, 1H), 5.29-5.42 (m, 12H).
(11Z,14Z)-N,N,N-トリメチル-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)-2-(((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)カルボニル)イコサ-11,14-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物II-15)
工程1
参考例A20の工程1で得られたるtert-ブチル ((11Z,14Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (0.300 g, 0.448 mmol)をアセトン (2 mL)に溶解させ、氷冷下ジョーンズ試薬 (Sigma-Ardrich社製, 2 mol/L, 0.224 mL, 0.448 mmol)を加えた後、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 95/5〜50/50)で精製することで、(11Z,14Z)-2-(((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン酸 (0.136 g, 0.198 mmol, 収率44%)を得た。
ESI-MS m/z: 684 (M - H)-.
工程2
工程1で得られた(11Z,14Z)-2-(((tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) イコサ-11,14-ジエン酸 (0.120 g, 0.175 mmol)と(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-オール (Nu-Chek Prep,Inc社製, 0.0930 g, 0.350 mmol)を用いて、参考例A20の工程2と同様の方法で(11Z,14Z)-(9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル 2-((( tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.123 g, 0.132 mmol, 収率75%)を得た。
ESI-MS m/z: 935 (M + H)+.
工程3
工程2で得られた(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル 2-((( tert-ブトキシカルボニル)アミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.123 g, 0.132 mmol)をジクロロメタン(1 mL)に溶解させ、氷冷下トリフルオロ酢酸 (0.300 mL, 3.89 mmol)を加え、1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 99/1〜80/20)で精製することで、(11Z,14Z)-(9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル 2-(アミノメチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.110 g, 0.132 mmol, 収率100%)を得た。
ESI-MS m/z: 835 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル 2-(アミノメチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.110 g, 0.132 mmol)を用いて、参考例A21工程1と同様の方法で(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル2-((ジメチルアミノメチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.0720 g, 0.0830 mmol, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 862 (M + H)+.
工程5
工程4で得られた(11Z,14Z)-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル2-((ジメチルアミノメチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノアート (0.072 g, 0.083 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.052 g, 0.057 mmol, 収率68%)を得た。
ESI-MS m/z: 877 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ:0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.09-1.42 (m, 52H), 1.52-1.81 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.46 (s, 9H), 3.79 (s, 2H), 4.14 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 5.28-5.43 (m, 12H).
(11Z,14Z)-N,N,N-トリメチル-2,2-ビス(((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)イコサ-11,14-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物II-16)
工程1
マロン酸ジメチル (東京化成工業社製,1.00 g, 7.57 mmol)をアセトニトリル (20 mL)に溶解させ、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (2.61g,7.57 mmol)、炭酸セシウム (和光純薬工業社製, 4.93 g, 15.1 mmol)およびヨウ化テトラ-n-ブチルアンモニウム (2.80 g, 7.57 mmol)を加え、50℃で終夜攪拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜70/30)で精製することで、ジメチル 2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート (1.22 g, 3.21 mmol, 収率42%)を得た。
ESI-MS m/z: 381 (M + H)+.
工程2
工程1で得られたジメチル 2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート (0.200 g, 0.526 mmol)をアセトニトリル(3 mL)に溶解させ、N,N,N',N'-テトラメチルジアミノメタン (東京化成工業社製, 0.0860 mL, 0.631 mmol)および無水酢酸 (0.0600 mL, 0.631 mmol)を加えた。その後、氷冷下水素化ナトリウム (油性, 60%, 0.0320 g, 0.788 mmol)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜60/40)で精製することで、ジメチル 2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート (0.0660 g, 0.151 mmol, 収率29%)を得た。
ESI-MS m/z: 438 (M + H)+.
工程3
工程2で得られたジメチル 2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロナート (0.066 g, 0.15 mmol)を用いて、参考例A19工程2と同様の方法にて、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)プロパン-1,3-ジオール (0.013 g, 0.034 mmol, 収率23%)を得た。
ESI-MS m/z: 382 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)プロパン-1,3-ジオール (0.013 g, 0.034 mmol)を用いて、参考例A20工程2と同様の方法にて、(9Z,9'Z,12Z,12')-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)プロパン-1,3-ジイル ビス(オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.017 g, 0.019 mmol, 収率56%)を得た。
ESI-MS m/z: 906 (M + H)+.
工程5
工程4で得られた(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)- オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル) プロパン-1,3-ジイル ビス(オクタデカ-9,12-ジエノアート (0.017 g, 0.019 mmol)を用いて、参考例A1工程2と同様の方法にて、標記化合物 (5.5 mg, 0.0058 mmol, 収率31%)を得た。
ESI-MS m/z: 921 (M)+.1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 48H), 1.53-1.65 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.77 (t, J= 6.6 Hz, 6H), 3.59 (s, 9H), 3.72 (s, 2H), 4.20 (dd, J = 22.1, 12.2 Hz, 4H), 5.28-5.44 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-17)
工程1
2-(ブロモメチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(0.200 g, 1.01 mmol)にジメチルアミン (Sigma-Aldrich社製, 2.0 mol/L テトラヒドロフラン溶液, 5.02 mL, 10.1 mmol)を加え、マイクロウェーブ照射下で120℃で15時間攪拌した。反応液に水酸化リチウム一水和物 (0.0290 g, 1.21 mmol)を加え、生じた沈殿をろ別した。ろ液を減圧下濃縮することで、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオールの粗生成物(0.200g, 1.23 mmol, 定量的)を得た。
ESI-MS m/z: 164 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオールの粗生成物 (0.200 g, 1.23 mmol)を用い、参考例A8と同様の方法にて、標題の化合物 (0.0470 g, 0.047 mmol 通し収率4.4%)を得た。
ESI-MS m/z: 965 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ:0.85-0.94 (m, 9H), 1.24-1.40 (m, 42H), 1.53-1.63 (m, 6H), 2.00-2.10 (m, 12H), 2.38 (t, J = 6.9 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 3.64 (s, 9H), 3.95 (s, 2H), 4.30 (s, 6H), 5.27-5.43 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-3-(オレオイルオキシ)-2,2-ビス(オレオイルオキシメチル)プロパン-1-アミニウム クロリド (化合物II-18)
参考例A8の工程1における(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりにオレイン酸を用い、参考例A8と同様の方法により標記の化合物 (0.663 g, 0.658 mmol, 通し収率28%) を得た。
ESI-MS m/z: 971 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.22-1.38 (m, 60H), 1.55-1.65 (m, 6H), 2.01 (q, J = 5.9 Hz, 12H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.64 (s, 9H), 3.98 (s, 2H), 4.29 (s, 6H), 5.29-5.39 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド (化合物II-19)
工程1
ジメチルアミン (約2 mol/Lテトラヒドロフラン溶液、15.0 mL、30.0 mmol) に2-(ブロモメチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (1.52 g, 7.56 mmol) を加え、マイクロ波反応装置を用いて120℃で15時間加熱撹拌した。室温まで冷却後、反応液に水酸化リチウム (0.217 g, 9.07 mmol) を加え、ろ過し、減圧下濃縮することで2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオールの粗生成物を得た。
得られた粗生成物に トルエン (30 mL)、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (6.51 g, 18.9 mmol)および水素化ナトリウム (油性, 60%, 0.756 g, 18.9 mmol) を加え、加熱還流下で終夜撹拌した。室温まで冷却後、反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてヘキサンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜90/10) で精製して、N,N-ジメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-アミン (0.196 g, 0.216 mmol, 3%) と 3-(ジメチルアミノ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-オール (1.80 g, 2.73 mmol, 収率36%) を得た。
N,N-ジメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-アミン
ESI-MS m/z: 909 (M + H)+.
3-(ジメチルアミノ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-オール
ESI-MS m/z: 661 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた N,N-ジメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-アミン (0.120 g, 0.132 mmol) のクロロホルム (1 mL) 溶液にヨウ化メチル (0.500 mL) を加え、室温で3時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Amberlite(R) IRA-400, Cl型, 約20倍量, 水およびエタノールでプレ洗浄)にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して標記の化合物 (0.0654 g, 0.0682 mmol, 収率57%) を得た。
ESI-MS m/z: 923 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.22-1.40 (m, 1H), 1.49-1.59 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 6H), 3.37 (t, J= 6.6 Hz, 6H), 3.45 (s, 6H), 3.55 (s, 9H), 3.58 (s, 2H), 5.28-5.42 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド (化合物II-20)
参考例A26工程1で得られた 3-(ジメチルアミノ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロパン-1-オール (0.265 g, 0.401mmol) の1,2-ジロロエタン (4 mL) 溶液に (9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (0.169 g, 0.602 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (0.154 g, 0.802 mmol) および N,N-ジメチルアミノピリジン (0.0250 g, 0.201 mmol) を加えて室温で終夜攪拌した。減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5〜90/10)で精製して (9Z,12Z)-3-(ジメチルアミノ)-2,2-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)メチル)プロピル オクタデカ-9,12-ジエノアートの粗生成物を得た。
得られた粗生成物にクロロホルム (2 mL) およびヨウ化メチル (東京化成工業社製, 1.00 mL) を加え、室温で5時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Sigma-Aldirch社製, Amberlite(R) IRA-400, Cl型, 約20倍量, 水およびエタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して標記の化合物 (0.220 g, 0.226 mmol, 収率56%) を得た。
ESI-MS m/z: 937 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.41 (m, 51H), 1.50-1.66 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.9 Hz, 12H), 2.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.1 Hz, 6H), 3.39 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 3.44-3.48 (m, 2H), 3.54-3.58 (m, 11H), 3.73 (s, 2H), 4.18 (s, 2H), 5.28-5.43 (m, 11H).
N,N,N-トリメチル-4-(2-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエンアミド-3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロポキシ)-4-オキシブタン-1-アミニウム クロリド (化合物II-21)
工程1
tert-ブチル (1,3-ジヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-2-イル)カルバマート (キーオーガニクス (Key Organics) 社製, 0.505 g, 2.28 mmol) のジクロロメタン (15 mL) 溶液に (9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (3.23 g, 11.4 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (2.19 g, 11.4 mmol) および N,N-ジメチルアミノピリジン (0.279 g, 2.28 mmol) を加えて室温で1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/クロロホルム = 100/0〜95/5) で精製して(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (2.08 g, 2.06 mmol, 収率90%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 9H), 1.43 (s, 9H), 1.57-1.66 (m, 14H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 12H), 2.32 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.5 Hz, 6H), 4.34 (s, 6H), 4.81 (br s, 1H), 5.28-5.43 (m, 12H).
工程2
工程1で得られた (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (2.05 g, 2.03 mmol, 90%) のジクロロメタン (10 mL) 溶液にトリフルオロ酢酸 (2 mL, 26.0 mmol) を加えて室温で1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜95/5)で精製して (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエンアミドプロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (1.70 g, 1.84 mmol, 収率91%) を得た。
ESI-MS m/z: 909 (M + H)+.
工程3
工程2で得られた (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ヒドロキシメチル)-2-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエンアミドプロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.8933 g, 0.983 mmol) のジクロロメタン (9 mL) 溶液に (9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (Sigma-Aldrich社製, 2.37 g, 8.45 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (1.62 g, 8.45 mmol) および N,N-ジメチルアミノピリジン(0.206 g, 1.69 mmol) を加えて室温で2時間攪拌した。減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜75/25) で精製して (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((4-(ジメチルアミノ)ブタノイルオキシ)メチル)-2-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエンアミドプロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.900 g, 0.881 mmol, 収率90%) を得た。
ESI-MS m/z: 1022 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-((4-(ジメチルアミノ)ブタノイルオキシ)メチル)-2-(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエンアミドプロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.805 g, 0.788 mmol) のクロロホルム (4 mL) 溶液にヨウ化メチル (0.493 mL) を加え、室温で終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10〜80/20)で精製して標記の化合物 (0.740 g, 0.690 mmol, 収率88%)を得た。
ESI-MS m/z: 1036 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.4 Hz, 9H), 1.21-1.40 (m, 45H), 1.54-1.65 (m, 6H), 2.01-2.08 (m, 12H), 2.09-2.19 (m, 2H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.32 (t, J= 7.5 Hz, 4H), 2.57 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 6H), 3.41 (s, 9H), 3.84 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 4.37-4.50 (m, 6H), 5.28-5.43 (m, 12H), 6.72 (br s, 1H).
4-(1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-2-イルアミノ)-N,N,N-トリメチル-4-オキソブタン-1-アミニウム クロリド (化合物II-22)
工程1
2-アミノ-2-(ヒロドキシメチル)-1,3-プロパンジオール (和光純薬工業社製, 7.41 g, 61.2 mmol) のジクロロメタン (60 mL) 溶液にtert-ブチルジメチルシリル クロリド (Sigma-Aldrich社製, 9.43 g, 60.7 mmol) およびイミダゾール (ナカライテスク社製, 5.51 g, 80.9 mmol) を加え、室温で終夜撹拌した。反応液に飽和食塩水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜95/5) で精製して 6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン-6-アミン (3.80 g, 8.19 mmol, 収率40%) を得た。
ESI-MS m/z: 464 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた 6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン-6-アミン(1.28 g, 2.76 mmol) のジクロロメタン (10 mL) 溶液に 4-(ジメチルアミノ)酪酸塩酸塩 (Sigma-Aldrich社製, 0.708 g, 4.14 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (0.810 g, 4.14 mmol)、N,N-ジメチルアミノピリジン (0.0170 g, 0.138 mmol) および N,N‐ジイソプロピルエチルアミン (1.45 mL, 8.31 mmol) を加えて室温で終夜攪拌した。減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5〜90/10) で精製して N-(6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン-6-イル)-4-(ジメチルアミノ)ブタンアミド (1.22 g, 2.11 mmol, 収率76%) を得た。
ESI-MS m/z: 578 (M + H)+.
工程3
工程2で得られた N-(6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン-6-イル)-4-(ジメチルアミノ)ブタンアミド (1.08 g, 1.87 mmol) のテトラヒドロフラン (10 mL) 溶液にテトラブチルアンモニウム フルオリド (東京化成工業社製, 約 1 mol/L テトラヒドロフラン溶液、7.49 mL、7.49 mmol) を加え、室温で2時間攪拌した。反応液に (9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (2.05 g, 7.31 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (1.44 g, 7.51 mmol) および N,N-ジメチルアミノピリジン (0.0340 g, 0.278 mmol) を加えて室温で終夜攪拌した。減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 60/40〜50/50) で精製して (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(4-(ジメチルアミノ)ブタンアミド)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.405 g, 0.396 mmol, 収率21%) を得た。
ESI-MS m/z: 1022 (M + H)+.
工程4
工程3で得られた (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(4-(ジメチルアミノ)ブタンアミド)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデカ-9,12-ジエノアート (0.335 g, 0.328 mmol) の クロロホルム (3 mL) 溶液にヨウ化メチル (東京化成工業社製, 0.200 mL) を加え、室温で2時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10〜80/20) で精製して標記の化合物 (0.324 g, 0.302 mmol, 収率92%)を得た。
ESI-MS m/z: 1036 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 45H), 1.55-1.64 (m, 6H), 2.01-2.12 (m, 14H), 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.43 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.37 (s, 9H), 3.77-3.83 (m, 2H), 4.43 (s, 6H), 5.28-5.42 (m, 12H), 6.62 (br s, 1H).
2-(1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-2-イルアミノ)-N,N,N-トリメチル-2-オキソエタンアミニウム クロリド (化合物II-23)
参考例A29と同様の方法で、4-(ジメチルアミノ)酪酸 塩酸塩の代わりに N,N-ジメチルグリシン (東京化成工業社製) を用い、標記の化合物 (0.356 g, 0.341 mmol, 通し収率17%)を得た。
ESI-MS m/z: 1008 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 44H), 1.54-1.64 (m, 26H), 2.01-2.08 (m, 12H), 2.35 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 3.40 (s, 9H), 4.46 (s, 6H), 4.70 (s, 2H), 5.28-5.42 (m, 12H), 9.54 (br s, 1H).
4-((6Z,9Z,29Z,32Z)-20-ヒドロキシ-20-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタトリアコンタ-6,9,29,32-テトラエン-19-イルオキシ)-N,N,N-トリメチル-4-オキソブタン-1-アミニウム クロリド (化合物III-1)
米国特許出願公開第2012/0172411号明細書に記載の方法に準じた方法で得られた(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-ヒドロキシ-20-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタトリアコンタ-6,9,29,32-テトラエン-19-イル 4-(ジメチルアミノ)ブタノアート (0.144 g, 0.156 mmol)を用いて、参考例A1の工程2と同様の方法で標記の化合物 (0.146 g, 0.150 mmol, 収率96%) を得た。
ESI-MS m/z: 935 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.16-1.79 (m, 60H), 1.98-2.17 (m, 15H), 2.52-2.59 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 6H), 3.44 (s, 9H), 3.69-3.81 (m, 2H), 4.94-4.98 (m, 1H), 5.29-5.42 (m, 12H).
(6Z,9Z,28Z,31Z)-N,N-ジメチル-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミニウム クロリド (化合物IV-1)
工程1
国際公開第2010/042877号に記載の方法に準じた方法で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-オン (0.194 g, 0.368 mmol)の1,2-ジクロロエタン (2 mL)溶液にメチルアミン (東京化成工業社製, 約40%メタノール溶液, 0.110 mL, 1.1 mmol)と酢酸 (0.063 mL, 1.1 mmol)を加えた。さらにナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (0.117 g, 0.552 mmol)を添加した後、室温で2時間撹拌した。反応液にメチルアミン (約40%メタノール溶液, 0.110 mL, 1.1 mmol)、酢酸 (0.063 mL, 1.1 mmol)、およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (0.117 g, 0.552 mmol)を加え、2時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてヘキサンで2回抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10) で精製して(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-メチルヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミン (0.121 g, 0.223 mmol, 収率61%)を得た。
ESI-MS m/z: 543 (M + H)+.
工程2
工程1で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-メチルヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミン (0.121 g, 0.223 mmol)に(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (0.154 g, 0.446 mmol) および50%水酸化ナトリウム水溶液 (0.107 g, 1.34 mmol) を加え、油浴上135℃で2時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、飽和食塩水を加え、ヘキサンで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 100/0〜85/15)で精製することにより、(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-メチル-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミン (0.139 g, 0.175 mmol, 収率79%)を得た。
ESI-MS m/z: 792 (M + H)+.
工程3
工程2で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-N-メチル-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミン (0.139 g, 0.175 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.114 g, 0.135 mmol, 収率77%)を得た。
ESI-MS m/z: 806 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.26-1.56 (m, 54H), 1.65-1.73 (m, 2H), 1.80-1.88 (m, 2H), 2.05 (q, J = 7.0 Hz, 12H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 6H), 3.22-3.27 (m, 1H), 3.31 (s, 6H), 3.58-3.62 (m, 2H), 5.29-5.42 (m, 12H).
N,N,N-トリメチル-3-(パルミトイルオキシ)-2,2-ビス((パルミトイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-24)
工程1
参考例A24の工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.420 g,2.57 mmol)の1,2-ジクロロエタン (5 mL)溶液に、ピリジン (3.12 mL, 38.6 mmol)を加えた後、室温にてパルミトイル クロリド (東京化成工業社製, 6.22 mL, 20.6 mmol)を加え、70℃で2時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム)で精製することにより、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((パルミトイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジパルミタート (0.650 g, 0.740 mmol, 収率29%)を得た。
ESI-MS m/z: 879 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((パルミトイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジパルミタート (0.65 g, 0.74 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.056 g, 0.060 mmol, 収率8%)を得た。
ESI-MS m/z: 893 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 9H), 1.21-1.34 (m, 72H), 1.54-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.62 (s, 9H), 3.95 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-(テトラデカノイルオキシ)-2,2-ビス((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-25)
参考例A33と同様の方法で、パルミトイル クロリドの代わりにミリストイル クロリド (和光純薬工業) を用い、標記の化合物 (0.045 g, 0.053 mmol, 通し収率4%)を得た。
ESI-MS m/z: 809 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 9H), 1.21-1.34 (m, 60H), 1.54-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.64 (s, 9H), 3.96 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
3-(ドデカノイルオキシ)-2,2-ビス((ドデカノイルオキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-26)
参考例A33と同様の方法で、パルミトイル クロリドの代わりにラウロイル クロリド(東京化成工業社製) を用い、標記の化合物 (0.085 g, 0.112 mmol, 通し収率9%) を得た。
ESI-MS m/z: 725 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 9H), 1.19-1.34 (m, 48H), 1.54-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.66 (s, 9H), 3.97 (s, 2H), 4.30 (s, 6H).
(Z)-N,N,N-トリメチル-3,3-ビス((オレオイロキシ)メチル)ヘニコサ-12-エン-1-アミニウム クロリド(化合物II-27)
工程1
マロン酸ジメチル (1.00 g, 7.57 mmol)をアセトニトリル (25 mL)に溶解させ、(Z)-オクタ-9-エン-1-イル メタンスルホナート(3.15g, 9.08 mmol)、炭酸セシウム (4.93 g, 15.1 mmol)およびヨウ化テトラブチルアンモニウム (3.35 g, 9.08 mmol)を加え、60℃で1時間攪拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜70/30)で精製することで、(Z)-ジメチル 2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (2.54 g, 6.64 mmol, 収率88%)を得た。
ESI-MS m/z: 383 (M + H)+
工程2
工程1で得られた(Z)-ジメチル 2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (0.500 g, 1.31 mmol)をトルエン (6 mL)に溶解させ、氷冷下水素化ナトリウム (油性, 60%, 0.209 g, 5.23 mmol)を加え、発泡が無くなるまで撹拌した。次いで2-クロロ-N,N-ジメチルエタンアミン 塩酸塩 (東京化成工業社製, 0.377 g, 2.61 mmol)を加え、100℃で2時間攪拌した。氷冷下反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 99/1〜90/10)で精製することで、(Z)-ジメチル 2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (0.258 g, 0.569 mmol, 収率44%)を得た。
ESI-MS m/z: 454 (M + H)+
工程3
参考例A19の工程2と同様の方法で、工程2で得られた(Z)-ジメチル 2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (0.250 g, 0.551 mmol)を用い、(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)プロパン-1,3-ジオール (0.220 g, 0.553mmol, 定量的)を得た。
ESI-MS m/z: 398 (M + H)+
工程4
工程3で得られた(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)プロパン-1,3-ジオール (0.220 g, 0.553mmol)をジクロロメタン(2 mL)に溶解し、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.386 mL, 2.21 mmol)を加え、氷冷下オレオイルクロリド (Sigma-aldrich社製, 0.457 mL, 1.38 mmol)を加え、室温で10分間撹拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜50/50)で精製することで、(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.280 g, 0.302 mmol, 収率55%)を得た。
ESI-MS m/z: 927 (M + H)+
工程5
工程4で得られた(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.280 g, 0.302 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.199 g, 0.204 mmol, 収率67%)を得た。
ESI-MS m/z: 941 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.39 (m, 66H), 1.55-1.65 (m, 4H), 1.70-1.78 (m, 2H), 1.98-2.06 (m, 12H), 2.33 (t, J= 7.6 Hz, 4H), 3.46 (s, 9H), 3.58-3.65 (m, 2H), 3.93-4.03 (m, 4H), 5.29-5.39 (m, 6H).
(Z)-N,N,N-トリメチル-4,4-ビス((オレオイルオキシ)メチル)ドコサ-13-エン-1-アミニウム クロリド(化合物II-28)
工程1
参考例A36の工程2と同様の方法で、2-クロロ-N,N-ジメチルエタンアミン 塩酸塩の代わりに3-クロロ-N,N-ジメチルプロパン-1-アミン 塩酸塩(東京化成工業社製)を用い、(Z)-ジメチル 2-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (0.210 g, 0.449 mmol, 収率34%)を得た。
ESI-MS m/z: 468 (M + H)+
工程2
参考例A36の工程3、4、5と同様の方法で、(Z)-ジメチル 2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナートの代わりに工程1で得られた(Z)-ジメチル2-(3-(ジメチルアミノ)プロピル)-2-(オクタデカ-9-エン-1-イル)マロナート (0.210 g, 0.449 mmol)を用い、標記化合物 (0.042 g, 0.042 mmol, 通し収率9%)を得た。
ESI-MS m/z: 955 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.22-1.36 (m, 68H), 1.56-1.64 (m, 4H), 1.72-1.82 (m, 2H),1.96-2.07 (m, 12H), 2.32 (t, J= 7.5 Hz, 4H), 3.38 (s, 9H), 3.39-3.46 (m, 2H), 3.93 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.99 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 5.28-5.40 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-(ステアロイルオキシ)-2,2-ビス((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-29)
参考例A33と同様の方法で、パルミトイル クロリドの代わりにステアロイル クロリド(東京化成工業社製) を用い、標記の化合物 (0.085 g, 0.112 mmol, 通し収率6%) を得た。
ESI-MS m/z: 977 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 9H), 1.21-1.37 (m, 84H), 1.54-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.65 (s, 9H), 3.96 (s, 2H), 4.30 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-オレアミド-2,2-ビス((オレオイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-30)
工程1
参考例A24の工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.410 g,2.51 mmol)をジクロロメタン (5 mL)、ピリジン (5.08 mL, 62.8 mmol)の混合溶媒に溶解した。氷冷下、オレオイル クロリド (1.25 mL, 3.77 mmol)を加えた。反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、(Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.190 g, 0.275 mmol, 収率11%)を得た。
ESI-MS m/z: 693 (M + H)+
工程2
工程1で得られた(Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.190 g,2.51 mmol)をトルエン (2 mL)に溶解し、室温でジフェニルリン酸アジド (東京化成工業社製, 0.118 mL, 0.549 mmol)と1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン(0.0830 mL,0.549 mmol)を加え、1時間撹拌した。反応の進行が不十分であったので、ジフェニルリン酸アジド (0.118 mL, 0.549 mmol)を追加し、80℃で3時間加熱撹拌した。反応液を室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5〜60/40)で精製することにより、(Z)-2-(アジドメチル)-2-((ジメチルアミノ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.135 g, 0.188 mmol, 収率69%)を得た。
ESI-MS m/z: 718 (M + H)+
工程3
工程2で得られた(Z)-2-(アジドメチル)-2-((ジメチルアミノ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.135 g,2.51 mmol)をテトラヒドロフラン (1 mL)と水(0.1 mL)の混合溶液に溶解し、トリフェニルホスフィン (純正化学工業社製, 0.0740 g, 0.282 mmol)を加え、3時間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮することにより、(Z)-2-(アミノエチル)-2-((ジメチルアミノ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアートの粗生成物 (0.130 g, 0.188 mmol, 収率100%)を得た。
ESI-MS m/z: 691 (M + H)+
工程4
工程3で得られた(Z)-2-(アミノエチル)-2-((ジメチルアミノ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.130 g,0.188 mmol)のジクロロメタン (2 mL)溶液に、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.0990 mL, 0.564 mmol)を加え、氷冷下オレオイルクロリド (0.0850 g, 0.282 mmol)を加えて、室温で1時間撹拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=97/3〜60/40)で精製することにより、(Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(オレアミドメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.105 g, 0.110 mmol, 収率58%)を得た。
ESI-MS m/z: 956 (M + H)+
工程5
工程4で得られた(Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(オレアミドメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.105 g, 0.110 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物(0.0480 g, 0.0480 mmol, 収率43%)を得た。
ESI-MS m/z: 970 (M)+;1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.21-1.37 (m, 60H), 1.56-1.65 (m, 6H), 1.96-2.05 (m, 12H), 2.36 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 3.51 (s, 9H), 3.51-3.56 (m, 2H), 4.02 (s, 2H), 4.20 (d, J= 12.2 Hz, 2H), 4.30 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 5.27-5.40 (m, 6H), 8.11-8.20 (m, 1H).
N,N,N-トリメチル-4-(オレオイルオキシ)-3,3-ビス(オレオイルオキシメチル)ブタン-1-アミニウム クロリド (化合物II-31)
工程1
2-(ブロモメチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (東京化成工業社製, 1.00 g, 5.02 mmol) のテトラヒドロフラン (10 mL) 溶液に、tert -ブチルジメチルクロロシラン (東京化成工業社製, 3.79 g, 25.1 mmol)、イミダゾール (ナカライテスク社製, 3.42 g, 50.2 mmol)、N,N-ジメチルアミノピリジン (0.061 g, 0.502 mmol) を加えて、室温にて終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてヘキサンで2回抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン) で精製することにより6-(ブロモメチル)-6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン (2.50 g, 4.61 mmol, 92%)を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.04 (s, 18H), 0.89 (s, 27H), 3.41 (s, 2H), 3.49 (s, 6H).
工程2
工程1で得られた6-(ブロモメチル)-6-((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-2,2,3,3,9,9,10,10-オクタメチル-4,8-ジオキサ-3,9-ジシラウンデカン (1.849 g, 3.41 mmol) のジメチルスルホキシド (10 mL) 溶液に、シアン化ナトリウム (ナカライテスク社製, 0.529 g, 10.8 mmol) を加えて、85℃にて3日間攪拌した。室温まで冷却後、反応液をヘキサンで希釈し、水、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10)で精製することにより、4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-3,3-ビス((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ブタンニトリル (1.35 g, 2.77 mmol, 収率81%)を得た。
ESI-MS m/z: 489 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.05 (s, 18H), 0.89 (s, 27H), 2.34 (s, 2H), 3.51 (s, 6H).
工程3
工程2で得られた 4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-3,3-ビス((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ブタンニトリル (1.34 g, 2.75 mmol) のテトラヒドロフラン (10 mL) 溶液に、氷冷下、水素化アルミニウムリチウム (0.104 g, 2.75 mmol) を加え、室温にて2時間攪拌した。反応液に水 (0.495 mL, 27.5 mmol) とフッ化ナトリウム (3.46 g, 82.0 mmol) を加え、室温にて終夜攪拌した。不溶物をセライト濾過にて除去し、濾液を濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (酢酸エチル) で精製することにより、4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-3,3-ビス((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ブタン-1-アミン (0.435 g, 0.884 mmol, 収率32%) を得た。
ESI-MS m/z: 493 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.02 (s, 18H), 0.88 (s, 27H), 1.38-1.43 (m, 2H), 2.71-2.75 (m, 2H), 3.40 (s, 6H).
工程4
工程3で得られた 4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-3,3-ビス((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)ブタン-1-アミン (0.200 g, 0.407 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (3 mL) 溶液に、38%ホルムアルデヒド水溶液 (0.295 mL)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (0.431 g, 2.03 mmol)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、クロロホルムで2回抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10) で精製することで、4-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)-3,3-ビス((tert-ブチルジメチルシリルオキシ)メチル)-N,N-ジメチルブタン-1-アミンの粗生成物を得た。
得られた粗生成物にテトラヒドロフラン (2 mL) および テトラブチルアンモニウム フルオリド (東京化成工業社製, 約 1 mol/L テトラヒドロフラン溶液, 2.06 mL, 2.06 mmol) を加え、室温で5時間攪拌した後、60℃て終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、クロロホルムで2回洗浄した。水層を減圧下濃縮した。得られた残渣にアセトン (2 mL)、水酸化ナトリウム (和光純薬工業社製, 2 mol/L 水溶液, 3 mL, 6 mmol)、オレオイル クロリド ( 0.681 mL, 2.06 mmol) を加え、室温にて3時間攪拌した。反応液にオレオイル クロリド (0.681 mL, 2.06 mmol) を加え、60℃にて終夜攪拌した。室温まで冷却後、反応液に水を加え、クロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10)で精製することで、(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オレイルオキシメチル)プロパン-1,3-ジイルジオレートの粗生成物を得た。得られた粗生成物を少量のメタノール-クロロホルム (9:1) に溶解してイオン交換樹脂 (ウォーターズ (Waters) 製, PoraPack Rxn CX, メタノールでプレ洗浄) にロードし、アンモニア (Sigma-Aldirch社製, 2 mol/L メタノール溶液) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、(Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オレイルオキシメチル)プロパン-1,3-ジイルジオレート (0.387 g, 0.399 mmol, 収率98%) を得た。
ESI-MS m/z: 971 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.21-1.38 (m, 62H), 1.54-1.65 (m, 6H), 1.97-2.04 (m, 12H), 2.20 (s, 6H), 2.25-2.32 (m, 8H), 4.04 (s, 6H), 5.29-5.39 (m, 6H).
工程5
参考例A1工程2と同様な方法により、2,2’,2’’-ニトリロトリス(エタン-2,1-ジイル) トリオレアートの代わりに工程4で得られた (Z)-2-(2-(ジメチルアミノ)エチル)-2-(オレイルオキシメチル)プロパン-1,3-ジイルジオレート(0.109 g, 0.112 mol)を用い、標記の化合物 (0.0642 g, 0.0630 mol, 収率56%)を得た。
ESI-MS m/z: 986 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.23-1.37 (m, 74H), 1.55-1.64 (m, 65H), 1.78-1.84 (m, 2H), 1.95-2.06 (m, 13H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.42 (s, 8H), 3.70-3.77 (m, 2H), 4.08 (s, 6H), 5.29-5.39 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-2-(3-(オレオイルオキシ)-2,2-ビス((オレオイルオキシ)メチル)プロポキシ)-2-オキシエタン-1-アミニウム クロリド(化合物II-32)
工程1
米国登録特許8816099号明細書に記載の方法で合成した2,2-(ジメチル-1,3-ジオキサン-5,5-ジイル)ジメタノール (0.200 g, 1.14 mmol)のテトラヒドロフラン (5 mL)溶液にトリエチルアミン (0.475 mL, 3.40 mmol)を加えた後、氷冷下にてオレオイル クロリド(0.854 g, 2.84 mmol)を加え、そのまま氷冷下にて1時間撹拌した。反応液に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5)で精製することにより、(2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5,5-ジイル)ビス(メチレン) ジオレアート (0.500 g, 0.709 mmol, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 705 (M + H)+
工程2
工程1で得られた(2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5,5-ジイル)ビス(メチレン) ジオレアート(0.500 g, 0.709 mmol)のジクロロメタン (5 mL)溶液に、氷冷下トリフルオロ酢酸 (2.00 mL, 26.0 mmol)を2回に分けて加え、そのまま氷冷下にて1時間撹拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=90/10〜50/50)で精製することにより、2,2-ビス(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.207 g, 0.311 mmol, 収率44%)を得た。
ESI-MS m/z: 665 (M + H)+
工程3
N,N-ジメチルグリシン (東京化成工業社製, 0.049 g, 0.474 mmol)に塩化チオニル (1 mL, 13.7 mmol)を加え、70℃で30分加熱撹拌した。反応液を室温まで冷却した後、減圧下で濃縮することでN,N-ジメチルグリシノイルクロリドの粗生成物を得た。工程2で得られた2,2-ビス(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.207 g, 0.311 mmol)のジクロロメタン (5 mL)溶液に、氷冷下N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.110 mL, 0.632 mmol)、上記N,N-ジメチルグリシノイルクロリドの粗生成物を加え、室温で1時間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=90/10〜40/60)で精製することにより、2-(((ジメチルグリシル)オキシ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.077 g, 0.103 mmol, 収率33%)を得た。
ESI-MS m/z: 751 (M + H)+
工程4
工程3で得られた2-(((ジメチルグリシル)オキシ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.0770 g, 0.103 mmol)のジクロロメタン (3 mL)溶液にピリジン (0.0330 mL, 0.411 mmol)を加えた後、氷冷下オレオイル クロリド (0.0620 g, 0.205 mmol)を加え、室温で30分撹拌した。反応液に水を加え、ヘキサン/酢酸エチル=1/1の混合溶媒で抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5)で精製することにより、2-(((ジメチルグリシル)オキシ)メチル)-2-((オレオイル)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.122 g, 0.0600 mmol, 収率59%)を得た。
ESI-MS m/z: 1015 (M + H)+
工程5
工程4で得られた2-(((ジメチルグリシル)オキシ)メチル)-2-((オレオイル)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.122 g, 0.060 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.017 g, 0.016 mmol, 収率27%)を得た。
ESI-MS m/z: 1029 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.19-1.38 (m, 58H), 1.54-1.66 (m, 6H), 1.98-2.04 (m, 12H), 2.28-2.35 (m, 6H), 3.60 (s, 9H), 4.11 (d, J = 1.8 Hz, 6H), 4.20 (s, 2H), 5.08 (s, 2H), 5.29-5.41 (m, 6H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド(化合物II-33)
工程1
2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (1.50 g,10.1 mmol)をテトラヒドロフラン (10 mL)にピリジン (4.07 mL, 50.3 mmol)、次いでテトラデカノイルクロリド (4.09 mL, 15.1 mmol)を加え、60℃で2時間加熱撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、2-(ジメチルアミノ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (1.50 g, 1.92 mmol, 収率19%)、2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.750 g, 1.32 mmol, 収率13%)、および2-(ジメチルアミノ)-3-ヒドロキシ-2-(ミドロキシメチル)プロピル テトラデカノアート (0.220 g, 0.612 mmol, 収率6%)をそれぞれ得た。
ESI-MS m/z: 781 (M + H)+
ESI-MS m/z: 570 (M + H)+
ESI-MS m/z: 360 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (1.50 g, 1.92 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物(0.530 g, 0.638 mmol, 収率33%)を得た。
ESI-MS m/z: 795 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.21-1.33 (m, 60H), 1.55-1.65 (m, 6H), 2.37 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.71 (s, 9H), 4.59 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス(オレオイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド(化合物II-34)
工程1
参考例A42の工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-3-ヒドロキシ-2-(ミドロキシメチル)プロピル テトラデカノアート (0.220 g, 0.612 mmol)の1,2-ジクロロエタン (3 mL)溶液にピリジン (0.297 mL, 3.67 mmol)、次いでオレオイル クロリド (0.552 g, 1.84 mmol)を加え、60℃で1時間加熱撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=98/2〜85/15)で精製することにより、2-(ジメチルアミノ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.250 g, 0.281 mmol, 収率46%)を得た。
ESI-MS m/z: 889 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオレアート (0.250 g, 0.281 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.065 g, 0.069 mmol, 収率25%)を得た。
ESI-MS m/z: 903 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.38 (m, 60H), 1.56-1.66 (m, 6H), 1.97-2.05 (m, 8H), 2.39 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 3.72 (s, 9H), 4.58 (s, 6H), 5.28-5.40 (m, 4H).
N,N,N-トリメチル-1-(オレイルオキシ)-3-(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド(化合物II-35)
工程1
参考例A42の工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート(0.750 g, 1.32 mmol)の1,2-ジクロロエタン (3 mL)溶液にピリジン (0.532 mL, 6.58 mmol)、次いでオレオイル クロリド (0.792 g, 1.84 mmol)を加え、60℃で1時間加熱撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5)で精製することにより、2-(ジメチルアミノ)-2-((オレイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.750 g, 0.899 mmol, 収率68%)を得た。
ESI-MS m/z: 835 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-2-((オレイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.750 g, 0.899 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.092 g, 0.104 mmol, 収率12%)を得た。
ESI-MS m/z: 849 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.19-1.38 (m, 60H), 1.56-1.65 (m, 6H), 1.98-2.06 (m, 4H), 2.39 (t, J= 7.6 Hz, 6H), 3.72 (s, 9H), 4.59 (s, 6H), 5.30-5.39 (m, 2H).
N,N,N-トリメチル-3-(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカオイルオキシ)メチル)-2-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-36)
工程1
参考例A24の工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.820 g, 5.02 mmol)のテトラヒドロフラン (7 mL)溶液に、ピリジン (2.03 mL, 38.6 mmol)を加えた後、氷冷下にてテトラデカノイル クロリド (0.930 mL, 3.77 mmol)を加え、60℃で2時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5〜70/30)で精製することにより、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.150 g, 0.257 mmol, 収率5%)を得た。
ESI-MS m/z: 584 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.060 g, 0.103 mmol)のジクロロメタン (3 mL)溶液にトリエチルアミン (0.017 mL, 0.123 mmol)を加え、氷冷下にて4-ニトロフェニルクロロフォルメート (東京化成工業社製, 0.025 g, 0.123 mmol)、次いでテトラデシルアミン (東京化成工業社製, 0.022 g, 0.103 mmol)を加えて、室温で一晩撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5〜70/30)で精製することにより、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.052 g, 0.063 mmol, 収率62%)を得た。
ESI-MS m/z: 824 (M + H)+
工程3
工程2で得られた2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.052 g, 0.063 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.012 g, 0.014 mmol, 収率21%)を得た。
ESI-MS m/z: 838 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.33 (m, 62H), 1.51-1.61 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 3.13 (dd, J = 14.2, 5.8 Hz, 2H), 3.59 (s, 9H), 4.12 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.21 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 4.25 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 6.72 (t, J = 5.8 Hz, 1H).
N,N,N-トリメチル-3-((オクタデシルカルバモイル)オキシ)-2,2-ビス((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-37)
工程1
参考例A45と同様の方法で、テトラデシルアミンの代わりにステアリルアミン (東京化成工業社製) を用い、標記の化合物 (0.015 g, 0.016 mmol, 通し収率0.5%) を得た。
ESI-MS m/z: 894 (M)+;1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.21-1.34 (m, 70H), 1.51-1.62 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 3.13 (dd, J = 14.3, 5.8 Hz, 2H), 3.60 (s, 9H), 4.12 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.21 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 4.25 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 6.69 (t, J = 5.8 Hz, 1H).
N,N,N-トリメチル-3-(ステアロイルオキシ)-2,2-ビス((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド (化合物II-37)
工程1
“アンゲバンテ・ケミー・インターナショナルエディション (Angewandte Chemie International Edition) ”, 2009年, 第48巻, p.2126 - 2130記載の方法で合成した(5-(ブロモメチル)-2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-イル)メタノール (1.00 g, 4.18mmol)のピリジン (10 mL)溶液に、ステアロイルクロリド (2.53 g, 8.36 mmol)を加え、室温で30分撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=90/10)で精製することにより、(5-(ブロモメチル)-2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-イル)メチル ステアラート(0.95 g, 1.879 mmol, 収率45 %)を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 44H), 1.54-1.64 (m, 26H), 2.01-2.08 (m, 12H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 3.40 (s, 9H), 4.46 (s, 6H), 4.70 (s, 2H), 28-5.42 (m, 12H), 9.54 (br s, 1H).
工程2
工程1で得られた(5-(ブロモメチル)-2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-イル)メチル ステアラート (0.95 g, 1.879 mmol)のN,N-ジメチルアホルムアミド (10 mL)溶液に、ジメチルアミン (2.0 mol/L テトラヒドロフラン溶液, 5.64 mL, 11.3 mmol)を加え、マイクロウェーブ照射下、120℃で13時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、(5-((ジメチルアミノ)メチル)-2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-イル)メチル ステアラート(0.14 g, 0.298 mmol, 収率16 %) を得た。
ESI-MS m/z: 470 (M + H)+
工程3
参考例A41の工程2と同様の方法で、工程1で得られた(5-((ジメチルアミノ)メチル)-2,2-ジメチル-1,3-ジオキサン-5-イル)メチル ステアラート (0.140 g, 0.298 mmol)を用い、3-(ジメチアミノ)-2,2-ビス(ヒドロキシメチル)プロピル ステアラート (0.12g, 0.279 mmol, 収率94 %)を得た。
ESI-MS m/z: 430 (M + H)+
工程4
工程3で得られた3-(ジメチアミノ)-2,2-ビス(ヒドロキシメチル)プロピル ステアラート (0.12 g, 0.279 mmol)のジクロロメタン (2 mL)溶液に、ピリジン (0.122 mL, 1.51 mmol)を加えた後、氷冷下にてテトラデカノイルクロリド (0.224 g, 0.98 mmol)を加え、室温で1時間攪拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル=95/5)で精製することにより、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.150 g, 0.176 mmol, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 851 (M + H)+
工程5
工程4で得られた-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.150 g, 0.176 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物(0.032 g, 0.056 mmol, 収率32%)を得た。
ESI-MS m/z: 865 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.19-1.33 (m, 68H), 1.54-1.65 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.63 (s, 9H), 3.95 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-(((Z)-テトラデカ-9-エンオイル)オキシ)-2,2-ビス((((Z)-テトラデカ-9-エンオイル)オキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-39)
工程1
ミリストレイン酸 (Nu-Chek Prep,Inc社製, 2.50 g, 11.0 mmol)のジクロロメタン(20 mL)溶液に塩化チオニル (1.61 mL, 22.1 mmol)とN,N-ジメチルホルムアミド (8.55 mL, 0.110 mmol)を加えて、室温で1時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮することで、ミリストレイル クロリドの粗生成物(2.70 g, 11.04 mmol, 収率100%)を得た。
工程2
参考例A33と同様の方法で、パルミトイルクロリドの代わりに工程1で得られたミリストレイル クロリド (1.88 g, 7.66 mmol) を用い、標記の化合物 (0.350 g, 0.417 mmol, 通し収率27%) を得た。
ESI-MS m/z:803 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.86-0.94 (m, 9H), 1.26-1.39 (m, 36H), 1.53-1.64 (m, 6H), 1.97-2.07 (m, 12H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.67 (s, 9H), 3.99 (s, 2H), 4.30 (s, 6H), 5.29-5.39 (m, 6H).
2-((4-((1,3-ビス(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-イル)アミノ)-4-オキソブタノイル)オキシ)-N,N,N-トリメチルエタン-1-アミニウム クロリド(化合物II-40)
工程1
“オーストラリアン・ジャーナル・オブ・ケミストリー(Australian Journal of Chemistry) ”, 2013年, 第66巻, p.23 - 29記載の方法に準じた方法で合成した4-((1,3-ビス(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-イル)アミノ)-4-オキソブタン酸 (0.250 g, 0.293 mmol)のジクロロメタン (3 mL)溶液に1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド (0.084 g, 0.440 mmol)、2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オール (東京化成工業社製, 0.039 g, 0.440 mmol), 4-ジメチルアミノピリジン (0.036 g, 0.293 mmol)を順番に加えて、室温で終夜撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、2-(4-(2-(ジメチルアミノ)エトキシ)-4-オキソブタンアミド)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.200 g, 0.217 mmol, 収率74%)を得た。
ESI-MS m/z: 924 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(4-(2-(ジメチルアミノ)エトキシ)-4-オキソブタンアミド)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.200 g, 0.217 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.150 g, 0.154 mmol, 収率71%)を得た。
ESI-MS m/z: 938 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.20-1.34 (m, 60H), 1.56-1.65 (m, 6H), 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.54 (br s, 4H), 3.48 (s, 9H), 4.13-4.21 (m, 2H), 4.40 (s, 6H), 4.57-4.65 (m, 2H), 6.22 (s, 1H).
3-((4-((1,3-ビス(テトラデカノイルオキシ)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-2-イル)アミノ)-4-オキソブタノイル)オキシ)-1-メチルキヌクリジン-1-ニウム クロリド(化合物II-41)
参考例A49と同様の方法で、2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オールの代わりにクヌクリジン-3-オール (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.350 g, 0.417 mmol, 通し収率46%) を得た。
ESI-MS m/z: 976 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.18-1.35 (m, 66H), 1.55-1.66 (m, 6H), 1.97-2.10 (m, 1H), 2.14-2.26 (m, 2H), 2.45-2.70 (m, 6H), 3.34 (s, 3H), 3.61-4.07 (m, 6H), 4.41 (s, 6H), 5.03-5.10 (m, 1H), 6.50 (s, 1H).
N,N,N-トリメチル-16,22-ジオキソ-19-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)-17,21-ジオキサ-15,23-ジアザヘプタトリアコンタン-19-アミニウム クロリド (化合物II-42)
工程1
2-(ジメチルアミノ)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.15 g,1.01 mmol)にトルエン (4 mL)、トリエチルアミン (0.280 mL, 2.01 mmol)、1-テトラデカンイソシアナート (1.66 mL, 6.03 mmol)を順に加え、マイクロ波反応装置で100℃、 4時間反応させた。反応液に水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、2-(ジメチルアミノ)-2-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(テトラデシルカルバマート) (0.872 g, 1.01 mmol, 収率100%)を得た。
ESI-MS m/z: 868 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(ジメチルアミノ)-2-(((テトラデシルカルバモイル)オキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ビス(テトラデシルカルバマート) (0.872 g, 1.01 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.761 g, 0.829 mmol, 収率82%)を得た。
ESI-MS m/z: 882 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.32 (m, 66H), 1.47-1.56 (m, 6H), 3.13 (td, J = 14.3, 6.0 Hz, 6H), 3.58 (s, 9H), 4.52 (s, 6H), 6.69 (t, J = 6.0 Hz, 3H).
N,N,N-トリメチル-1,3-ビス(3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカノイルオキシ)-2-((3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカノイル)メチル)プロパン-2-アミニウム クロリド (化合物II-43)
2-ジメチルアミノ-2-ヒドロキシメチルプロパン-1,3-ジオール (0.0170 g, 0.112 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (1 mL) 溶液に3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカン酸 (0.1826 g, 0.561 mmol)、((((1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデン)アミノ)オキシ) -4-モルホリノメチレン)ジメチルアンモニウムヘキサフルオロりん酸塩 (Sigma-Aldirch社製, 0.240 g, 0.561 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.098 mL, 0.561 mmol)を加えて、60℃で終夜攪拌した。室温まで冷却後、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5) で精製して2-(ジメチルアミノ)-2-((3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイルジイル ビス(3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカノアート)の粗生成物を得た。得られた粗生成物にヨウ化メチル (1.00 mL, 16.0 mmol) を加え、室温で終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1)に溶解してイオン交換樹脂 (Dow Chemical製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム(1:1)で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10) で精製して標記の化合物 (0.0766 g, 0.071 mmol, 収率63%)を得た。
ESI-MS m/z: 1043 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.81-0.87 (m, 36H), 0.92 (d, J = 6.7 Hz, 9H), 0.97-1.42 (m, 60H), 1.51 (tt, J= 19.8, 6.7 Hz, 3H), 1.84-1.97 (m, 3H), 2.16 (ddd, J = 15.5, 8.4, 2.3 Hz, 3H), 2.38 (ddd, J = 15.5, 5.6, 1.6 Hz, 3H), 3.72 (s, 9H), 4.55 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)-2-テトラデシルヘキサデカン-1-アミニウム クロリド(化合物II-44)
参考例A19と同様の方法で、参考例A19工程1で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートと工程4で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりにそれぞれ1-ブロモテトラデカン(東京化成工業社製)、ミリスチン酸(東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.292 g, 0.39 mmol, 通し収率22%)を得た。
ESI-MS m/z: 721 (M)+; 1H-NMR (CD3OD) δ: 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.28-1.32 (m, 70H), 1.49 (br s, 2H), 1.63-1.66 (m, 2H), 2.42 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.26 (s, 9H), 3.43 (s, 2H), 4.18 (s, 2H).
2-ヘキサデシル-N,N,N-トリメチル-2-((パルミトイルオキシ)メチル)オクタデカン-1-アミニウム クロリド (化合物II-45)
参考例A19と同様の方法で、参考例A19工程1で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートと工程4で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりに、それぞれ1-ブロモヘキサデカン (東京化成工業社製)、パルミチン酸 (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.195 g, 0.23 mmol, 通し収率5%)を得た。
ESI-MS m/z: 805 (M)+; 1H-NMR (CD3OD) δ: 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.28-1.33 (m, 82H), 1.49 (br s, 2H), 1.63-1.67 (m, 2H), 2.43 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.26 (s, 9H), 3.43 (s, 2H), 4.18 (s, 2H).
N,N,N-トリメチル-2-((ステアロイルオキシ)メチル)-2-テトラデシルヘキサデカ-1-アミニウム クロリド (化合物II-46)
参考例A19と同様の方法で、参考例A19工程1で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナートと工程4で用いる(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸の代わりに、それぞれ1-ブロモテトラデカン (東京化成工業社製)、ステアリン酸 (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.421 g, 0.52 mmol, 通し収率20%)を得た。
ESI-MS m/z: 777 (M)+; 1H-NMR (CD3OD) δ: 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.29-1.33 (m, 78H), 1.49 (br s, 2H),1.63-1.67 (m, 2H), 2.43 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.27(s, 9H), 3.44 (s, 2H), 4.18 (s, 2H).
3-(ドデカノイルオキシ)-N,N,N-トリメチル-2,2-ビス((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド (化合物II-47)
参考例A46と同様の方法で、参考例A46工程1で用いるステアロイルクロリドと工程4で用いるテトラデカノイルクロリドの代わりに、それぞれラウロイルクロリド (東京化成工業社製)、ステアロイルクロリド (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.200 g, 0.417 mmol, 通し収率0.3%)を得た。
ESI-MS m/z: 893 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.21-1.32(m, 72H), 1.57-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.63 (s, 9H), 3.99 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
3-(ドデカノイルオキシ)-N,N,N-トリメチル-2,2-ビス((パルミトイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-48)
参考例A47と同様の方法で、参考例A47工程1で用いるステアロイルクロリドと工程4で用いるテトラデカノイルクロリドの代わりに、それぞれラウロイルクロリド (東京化成工業社製)、パルミトイルクロリド (和光純薬工業社製)を用い、標記の化合物 (0.350 g, 0.40 mmol, 通し収率0.6%)を得た。
ESI-MS m/z: 837 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.21-1.33(m, 64H), 1.56-1.64 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.66 (s, 9H), 3.98 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
3-(ドデカノイルオキシ)-2-((ドデカノイルオキシ)メチル)-N,N,N-トリメチル-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-49)
参考例A47と同様の方法で、参考例A47工程4で用いるテトラデカノイルクロリドの代わりにラウロイルクロリド (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.210 g, 0.249 mmol, 通し収率0.3%)を得た。
ESI-MS m/z: 809 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.23-1.34(m, 60H), 1.53-1.65 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.63 (s, 9H), 3.97 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
N,N,N-トリメチル-3-(パルミトイルオキシ)-2-((パルミトイルオキシ)メチル)-2-((ステアロイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-50)
参考例A47と同様の方法で、参考例A47工程4で用いるテトラデカノイルクロリドの代わりに、パルミトイルクロリド (東京化成工業社製)を用い、標記の化合物 (0.420 g, 0.44 mmol, 通し収率0.5%)を得た。
ESI-MS m/z: 921 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 9H), 1.21-1.32(m, 76H), 1.55-1.65 (m, 6H), 2.38 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 3.67 (s, 9H), 399 (s, 2H), 4.29 (s, 6H).
3-(イコサノイルオキシ)-N,N,N-トリメチル-2,2-ビス((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-51)
参考例A47と同様の方法で、参考例A47工程1で用いるステアロイルクロリドの代わりに、エイコサノイル クロリド (Nu-Chek Prep,Inc.社製)を用い、標記の化合物を得る。
3-(ドデカノイルオキシ)-2-((ドデカノイルオキシ)メチル)-2-((イコサノイルオキシ)メチル)-N,N,N-トリメチルプロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-52)
参考例A47と同様の方法で、参考例A47工程1で用いるステアロイル クロリドと工程4で用いるテトラデカノイル クロリドの代わりに、それぞれエイコサノイル クロリド (Nu-Chek Prep,Inc.社製)、ラウロイル クロリド (和光純薬工業社製)を用い、標記の化合物を得る。
N,N,N-トリメチル-3-(メチル(3-(テトラデカノイルオキシ)-2,2-ビス((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロピル)アミノ)プロパン-1-アミニウム クロリド(化合物II-53)
工程1
2-(ブロモメチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (0.15 g, 0.754 mmol)のN,N-ジメチルアセトアミド(1 mL)溶液に、N,N,N’-トリメチルプロパン-1,3-ジアミン (0.263 g, 2.26 mmol)を加え、マイクロ波反応装置で100℃、 2時間反応させた。その後、氷冷下でN,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.395 mL, 2.26 mmol)、次いでテトラデカノイル クロリド(1.12 g, 4.52 mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=99/1〜90/10)で精製することにより、2-(((3-(ジメチルアミノ)プロピル)(メチル)アミノ)メチル)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.040 g, 0.046 mmol, 収率6%)を得た。
ESI-MS m/z: 866 (M + H)+
工程2
工程1で得られた2-(((3-(ジメチルアミノ)プロピル)(メチル)アミノ)メチル)-2-((テトラデカノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジテトラデカノアート (0.040 g, 0.046 mmol)を用い、参考例A1工程2と同様にして、標記化合物 (0.015 g, 0.016 mmol, 収率35%)を得た。
ESI-MS m/z: 880 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.20-1.35 (m, 62H), 1.54-1.65 (m, 6H), 1.87-2.03 (m, 2H), 2.21-2.31 (m, 2H), 2.31 (t, J = 7.6 Hz, 6H), 2.49 (br s, 3H), 3.40 (s, 9H), 3.52-3.63 (m, 2H), 4.05 (s, 6H).
(S)-6-(ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)-N,N,N-トリメチル-5-オレアミド-6-オキソヘキサン-1-アミニウム クロリド (化合物III-2)
工程1
アンモニア (約2 mol/Lメタノール溶液、18.0 mL、36.0 mmol)に、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (1.55 g, 4.50 mmol) を加え、マイクロ波反応装置を用いて130℃で3時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで5回抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮することで(Z)-オクタデカ-9-エニルアミンの粗生成物を得た。
得られた粗生成物に(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (1.24 g, 3.60 mmol) および50%水酸化ナトリウム水溶液 (1.44 g、18.0 mmol)を加え、油浴上110℃で60分間攪拌した。室温まで冷却後、反応液を酢酸エチルで希釈し、水、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール=100/0〜95/5)で精製することにより、(9Z,12Z)-ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミン (0.838 g, 1.631 mmol, 収率36%)を得た。
ESI-MS m/z: 515 (M + H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.26-1.38 (m, 32H), 1.45-1.54 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.6 Hz, 8H), 2.60 (t, J = 7.1 Hz, 4H), 2.77 (t, J = 5.9 Hz, 4H), 5.29-5.43 (m, 8H).
工程2
(S)-2-アミノ-6-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)ヘキサン酸 (1.94 g, 7.88 mmol) のアセトン(5 mL) 溶液に、水酸化ナトリウム (2 mol/L 水溶液, 5 mL)、オレオイル クロリド (2.09 g, 6.89 mmol) を加え、室温にて終夜攪拌した。反応液に塩酸水溶液 (6 mol/L) を加えてクロロホルムで2回抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール= 90/10〜80/20) で精製することにより (S)-6-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-オレアミドヘキサン酸 (2.50 g, 4.89 mmol, 収率71%) を得た。
ESI-MS m/z: 510 (M - H)-; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.20-1.54 (m, 33H), 1.57-1.68 (m, 2H), 1.71-1.93 (m, 2H), 1.96-2.05 (m, 4H), 2.18-2.29 (m, 2H), 3.07-3.16 (m, 2H), 4.50-4.60 (m, 1H), 4.63-4.76 (m, 1H), 5.28-5.39 (m, 2H), 6.49-6.57 (m, 1H).
工程3
工程2で得られた (S)-6-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)-2-オレアミドヘキサン酸 (0.291 g, 0.570 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (4 mL) 溶液に、O-(7-アザ-1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロフォスフェート ( 0.433 g, 1.14 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.498 mL, 2.85 mmol)、工程1で得られた (9Z,12Z)-ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミン (0.293 g, 0.570 mmol) を加え、室温にて4時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 80/20) で精製することにより tert-ブチル(S)-6-(ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)-5-オレアミド-6-オキソヘキシルカルバマート (0.489 g, 0.486 mmol, 収率85%) を得た。
ESI-MS m/z: 1008 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.85-0.92 (m, 9H), 1.20-1.72 (m, 73H), 1.97-2.08 (m, 12H), 2.18 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.74-2.80 (m, 4H), 3.02-3.34 (m, 5H), 3.44-3.53 (m, 1H), 4.55-4.63 (m, 1H), 4.88 (td, J = 8.2, 4.6 Hz, 1H), 5.28-5.43 (m, 10H), 6.30 (d, J = 8.4 Hz, 1H).
工程4
工程3で得られた tert-ブチル (S)-6-(ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)-5-オレアミド-6-オキソヘキシルカルバマート (0.459 g, 0.456 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (2 mL) 溶液にトリフルオロ酢酸 (0.500 mL, 6.49 mmol) を加え、室温にて1時間攪拌した。反応液を減圧濃縮した後、残渣にクロロホルムと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜80/20) で精製することにより N-((S)-6-アミノ-1-(ジ ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)-1-オキソヘキサン-2-イル)オレアミド (0.259 g, 0.286 mmol, 収率63%) を得た。
ESI-MS m/z: 907 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.86-0.91 (m, 9H), 1.20-1.71 (m, 64H), 1.96-2.09 (m, 12H), 2.21 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.73-2.88 (m, 6H), 3.08-3.47 (m, 4H), 4.81-4.88 (m, 1H), 5.28-5.43 (m, 10H), 6.67 (br s, 1H).
工程5
工程4で得られた N-((S)-6-アミノ-1-(ジ ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)-1-オキソヘキサン-2-イル)オレアミド (0.137 g, 0.151 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (1 mL) 溶液に、38%ホルムアルデヒド水溶液 (0.300 mL)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (0.096 g, 0.453 mmol)を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、クロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 50/50) で精製することで、N-((S)-1-(ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)-6-(ジメチルアミノ)-1-オキソヘキサン-2-イル)オレアミド (0.122 g, 0.130 mmol, 収率86%) を得た。
ESI-MS m/z: 936 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.83-0.93 (m, 9H), 1.12-1.77 (m, 64H), 1.95-2.25 (m, 22H), 2.73-2.80 (m, 4H), 3.04-3.15 (m, 1H), 3.20-3.34 (m, 2H), 3.44-3.54 (m, 1H), 4.85-4.91 (m, 1H), 5.28-5.43 (m, 10H), 6.28 (d, J= 8.6 Hz, 1H).
工程6
参考例A8工程2と同様な方法で、(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデク-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデク-9,12-ジエノアートの代わりに工程5で得られた N-((S)-1-(ジ(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)-6-(ジメチルアミノ)-1-オキソヘキサン-2-イル)オレアミド (0.104 g, 0.111 mol)を用いて標記の化合物 (0.0707 g, 0.0718 mol, 65%)を得た。
ESI-MS m/z: 950 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.85-0.91 (m, 9H), 1.21-1.83 (m, 64H), 1.97-2.08 (m, 12H), 2.19 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 2.74-2.80 (m, 4H), 3.05-3.84 (m, 15H), 4.82-4.90 (m, 1H), 5.28-5.43 (m, 10H), 6.41-6.46 (m, 1H).
(S)-N,N,N-トリメチル-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-1,5-ジオキソ-1-(テトラデシロキシ)ペンタン-2-アミニウム クロリド (化合物III-3)
工程1
ぎ酸エチル (ナカライテスク社製, 2.4 mL, 29.7 mmol) のテトラヒドロフラン (9 mL) 溶液にテトラデシルマグネシウム クロリド (Sigma-Aldrich社製, 1.0 mol/L テトラヒドロフラン溶液, 59.4 mL, 59.4 mmol) を加え、60℃で2時間攪拌した。反応液を氷冷し、水と硫酸 (ナカライテスク社製, 2.0 mol/L水溶液) を加えた。沈殿物を濾取し、ノナコサン-15-オール (6.90 g, 16.2 mmol, 収率55%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.22-1.34 (m, 48H), 1.37-1.49 (m, 2H), 3.54-3.64 (m, 1H).
工程2
1-tert-ブチル 2-アミノペンタンジオアート 塩酸塩 (渡辺化学工業社製, 10.0 g, 30.3 mmol) のエタノール (150 mL) 溶液にパラホルムアルデヒド (Sigma-Aldrich社製, 5.50 g, 183 mmol)、シアノ水素化ホウ素ナトリウム (5.70 g, 90.7 mmol) を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで2回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 35/65) で精製することで、(S)-5-ベンジル 1-tert-ブチル2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアート(8.20 g, 25.5 mmol, 収率84%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.48 (s, 9H), 1.95-2.00 (m, 2H), 2.32 (s, 6H), 2.43 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.04 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.12 (s, 6H), 7.29-7.40 (m, 5H).
実工程3
(S)-5-ベンジル 1-tert-ブチル2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアート(8.20 g, 25.5 mmol) のエタノール (200 mL) 溶液に、パラジウム-炭素 (東京化成工業社製, パラジウム10%, 約55%水湿潤品, 820 mg)を加え、水素雰囲気下、室温で7時間攪拌した。不溶物をセライトろ過にて除去し、ろ液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ジクロロメタン/メタノール= 85/15) で精製することで、(S)-5-tert-ブトキシ-4-(ジメチルアミノ)-5-オキソペンタン酸の粗生成物を得た。 (4.83 g, 20.9 mmol, 粗収率82%) を得た。
得られた(S)-5-tert-ブトキシ-4-(ジメチルアミノ)-5-オキソペンタン酸 (4.83 g, 20.9 mmol) の粗生成物に、1.2-ジクロロエタン (200 mL)、工程1で得られたノナコサン-15-オール (9.75 g, 23.0 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (8.01 g, 41.8 mmol)、N,N-ジメチルアミノピリジン (255 mg, 2.09 mmol) を加え、50 ℃で3時間攪拌した。反応液に水を加え、ジクロロメタンで2回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 85/15) で精製することで、(S)-1-tert-ブチル5-ノナコサン-15-イル 2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアート (8.13 g, 12.7 mmol, 収率61%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.20-1.38 (m, 48H), 1.46-1.57 (m, 4H), 1.91-2.00 (m, 2H), 2.33-2.41 (m, 8H), 3.05 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 4.82-4.93 (m, 1H).
工程4
工程3で得られた(S)-1-tert-ブチル5-ノナコサン-15-イル 2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアート (8.13 g, 12.7 mmol) のジクロロメタン (40 mL) 溶液に、トリフルオロ酢酸 (20 mL) を加え、40℃で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ジクロロメタン/メタノール = 85/15) で精製することで、(S)-2-(ジメチルアミノ)-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-5-オキソペンタン酸 (6.70 g, 11.5 mmol, 収率90%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.18-1.37 (m, 48H), 1.44-1.60 (m, 4H), 2.00-2.13 (m, 2H), 2.52-2.74 (m, 2H), 2.87 (s, 6H), 3.62-3.73 (m, 1H), 4.80-4.89 (m, 1H).
工程5
工程4で得られた(S)-2-(ジメチルアミノ)-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-5-オキソペンタン酸 (100 mg, 0.172 mmol) の1,2-ジクロロエタン溶液 (2.0 mL) に、(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノ-モルホリノ-カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩 (96.0 mg, 0.224 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.060 mL, 0.344 mmol)をテトラデカン-1-オール () を加え、室温で終夜攪拌した。反応液に水を加えてジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル= 95/5〜85/15)で精製することで、(S)-5-ノナコサン-15-イル 1-テトラデシル 2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアート (64.0 mg, 0.0822 mmol, 収率48%) を得た。1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 9H), 1.12-1.39 (m, 70H), 1.45-1.69 (m, 6H), 1.93-2.03 (m, 2H), 2.29-2.38 (m, 8H), 3.16 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.03-4.17 (m, 2H), 4.80-4.91 (m, 1H).
工程6
参考例A8工程2と同様な方法で、(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデク-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデク-9,12-ジエノアートの代わりに工程5で得られる (S)-5-ノナコサン-15-イル 1-テトラデシル 2-(ジメチルアミノ)ペンタンジオアートを用いて標記化合物を得る。
(S)-1-(ドデシルオキシ)-N,N,N-トリメチル-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-1,5-ジオキソペンタン-2-アミニウム クロリド (化合物III-4)
参考例A64と同様な方法で、参考例A64工程5のテトラデカン-1-オールの代わりにドデカン-1-オールを用いて標記の化合物を得る。
(S)-1-(ヘキサデシルオキシ)-N,N,N-トリメチル-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-1,5-ジオキソペンタン-2-アミニウム クロリド (化合物III-5)
参考例A64と同様な方法で、参考例A64工程5のテトラデカン-1-オールの代わりにヘキサデカン-1-オールを用いて標記の化合物を得る。
(S)-N,N,N-トリメチル-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-1-(オクタデシルオキシ)-1,5-ジオキソペンタン-2-アミニウム クロリド (化合物III-6)
参考例A64と同様な方法で、参考例A64工程5のテトラデカン-1-オールの代わりにオクタデカン-1-オールを用いて標記の化合物を得る。
(S,Z)-N,N,N-トリエチル-5-(ノナコサン-15-イルオキシ)-1-(オクタデカ-9-エニルオキシ)-1,5-ジオキソペンタン-2-アミニウム クロリド (化合物III-7)
参考例A64と同様な方法で、参考例A64工程5のテトラデカン-1-オールの代わりに(Z)-オクタデカ-9-エン-1-オールを用いて標記の化合物を得る。
(6Z,9Z,28Z,31Z)-N,N-ジメチル-N-(2-(N-メチルステアルアミド)エチル)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミニウム クロリド (化合物IV-2)
工程1
国際公開第2010/042877号に記載の方法に準じた方法で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-オン (0.50 g, 0.256 mmol)の1,2-ジクロロエタン (2 mL)溶液に、メタノール (2 mL)、N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン (東京化成工業社製, 0.085 mL, 0.767 mmol)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (0.325 g, 1.53 mmol) を加え、50℃で5時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10〜80/20) で精製して N1-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル)-N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン (0.0303 g, 0.0506 mmol, 収率20%) を得た。
ESI-MS m/z: 600 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.13-1.45 (m, 40H), 2.01-2.09 (m, 8H), 2.14 (s, 3H), 2.28-2.40 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.52-2.60 (m, 4H), 2.75-2.80 (m, 4H), 5.29-5.42 (m, 8H).
工程2
工程1で得られた N1-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル)-N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン (0.0258 g, 0.0431 mmol) の1,2-ジクロロエタン (1 mL) 溶液に、ステアロイル クロリド (0.039 0g, 0.129 mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン (0.038 mL, 0.215 mmol)を加えて、室温で1時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10) で精製して N-(2-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル(メチル)アミノ)エチル)-N-メチルステアルアミドの粗生成物を得た。
得られた粗生成物にヨウ化メチル (1.00 mL, 16.0 mmol) を加え、50℃で1時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Dow Chemical製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 80/20) で精製して標記の化合物 (0.0149 g, 0.0163 mmol, 収率38%)を得た。
ESI-MS m/z: 881 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.84-0.92 (m, 9H), 1.20-2.09 (m, 78H), 2.27-2.38 (m, 2H), 2.74-2.80 (m, 4H), 3.14-3.45 (m, 9H), 3.77-4.09 (m, 5H), 5.28-5.43 (m, 8H).
(9Z,12Z)-N,N-ジメチル-N-(3-((9Z,12Z)-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエンアミド)プロピル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミニウム クロリド (化合物IV-3)
工程1
(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (0.838 g, 2.43 mmol) に3-アミノプロパン-1-オール (1.66 g, 21.9 mmol) を加えて、90℃にて3時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をアミノシリカゲルクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル) で精製して 3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)プロパン-1-オール (0.722 g, 2.23 mmol, 収率92%) を得た。
ESI-MS m/z: 325 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 1.26-1.39 (m, 17H), 1.46 (tt, J = 7.1, 6.9 Hz, 3H), 1.69 (tt, J = 5.7, 5.4 Hz, 2H), 2.02-2.08 (m, 4H), 2.60 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.75-2.80 (m, 2H), 2.88 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 5.30-5.42 (m, 4H).
工程2
参考例A63工程5と同様な方法により、N-((S)-6-アミノ-1-(ジ ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)-1-オキソヘキサン-2-イル)オレアミドの代わりに工程1で得られた 3-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルアミノ)プロパン-1-オール (0.233 g, 0.722 mol) を用い、3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロパン-1-オール (0.220 g, 0.652 mol, 収率90%)を得た。
ESI-MS m/z: 338 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.24-1.40 (m, 16H), 1.47 (tt, J = 7.6, 7.0 Hz, 2H), 1.69 (tt, J = 5.7, 5.2 Hz, 2H), 2.01-2.08 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.34 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.75-2.80 (m, 2H), 3.80 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 5.29-5.42 (m, 4H).
工程3
(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (2.85 g, 8.27 mmol) のアセトニトリル(30 mL) 溶液に、炭酸セシウム (6.74 g, 20.7 mmol)、よう化テトラ‐n‐ブチルアンモニウム (3.05 g, 8.27 mmol)および N-(tert-ブトキシカルボニル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド (2.50 g, 8.27 mmol) を加えて、加熱還流下3時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、水を加えて酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 70/30) で精製して tert-ブチル 2-ニトロフェニルスルホニル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)カルバマート (3.21 g, 5.83 mmol) を得た。
得られた tert-ブチル 2-ニトロフェニルスルホニル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)カルバマート (3.21 g, 5.83 mmol) のジクロロメタン (23 mL) 溶液にトリフルオロ酢酸 (9.63 mL, 126 mmol) を加えて、室温で0.5時間攪拌した。反応液をジクロロメタンで希釈し、水酸化ナトリウム水溶液 (1 mol/L) と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5) で精製して2-ニトロ-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ベンゼンスルホンアミド (2.48 g, 5.50 mmol, 収率67 %) を得た。
ESI-MS m/z: 338 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.22-1.39 (m, 16H), 1.52 (m, 2H), 2.01-2.05 (m, 4H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.09 (q, J = 6.7 Hz, 2H), 5.23 (m, 1H), 5.31-5.42 (m, 4H), 7.71-7.76 (m, 2H), 7.78-7.87 (1H), 813-8.15 (m, 1H).
工程4
工程2で得られた 3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロパン-1-オール (0.220 g, 0.652 mol) のテトラヒドロフラン (4 mL) 溶液に、工程3で得られた 2-ニトロ-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ベンゼンスルホンアミド (0.441 g, 0.978 mmol)、トリフェニルホスフィン (0.257 g, 0.978 mmol)、アゾジカルボン酸ジエチル (ナカライテスク社製、40%トルエン溶液, 0.387 mL, 0.851 mmol) を加えて、50℃にて2時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、飽和食塩水を加えてヘキサンで2回抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 80/20) で精製してN-(3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロピル)-2-ニトロ-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ベンゼンスルホンアミドの粗生成物を得た。
得られたN-(3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロピル)-2-ニトロ-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)ベンゼンスルホンアミドの粗生成物のアセトニトリル (5 mL) 溶液に、ドデカン-1-チオール (0.409 mL, 1.63 mmol) と 1,8-ジアザビシクロ [5.4.0]-7-ウンデセン (0.246 mL, 1.630 mmol) を加えて、60℃で2時間攪拌した。反応液に水を加えてヘキサンで2回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 75/25) で精製して N1-メチル-N1,N3-ジ ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)プロパン-1,3-ジアミン(0.212 g, 0.363 mmol, 収率56%) を得た。
ESI-MS m/z: 586 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.22-1.51 (m, 36H), 1.66 (tt, J = 7.2, 7.1 Hz, 2H), 2.01-2.08 (m, 8H), 2.20 (s, 3H), 2.29 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.36 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.58 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.62 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.75-2.80 (m, 4H), 5.29-5.43 (m, 8H).
工程5
工程4で得られた N1-メチル-N1,N3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)プロパン-1,3-ジアミン (0.108 g, 0.185 mmol) の 1,2-ジクロロエタン (1 mL) 溶液に、(9Z, 12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン酸 (0.104 g, 0.370 mmol)、1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩 (0.106 g, 0.555 mmol)、N,N-ジメチルアミノピリジン (0.0023 g, 0.0188 mmol)を加えて室温で1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 85/15) で精製して (9Z,12Z)-N-(3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロピル)-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエナミド(0.146 g, 0.172 mmol, 収率93%) を得た。
ESI-MS m/z: 848 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.21-1.74 (m, 54H), 2.01-2.08 (m, 12H), 2.18 (s, 3H), 2.24-2.33 (m, 6H), 2.74-2.80 (m, 6H), 3.18-3.35 (m, 4H), 5.29-5.42 (m, 12H).
工程6
参考例A8工程2と同様な方法で、(9Z,9'Z,12Z,12'Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-(((9Z,12Z)-オクタデク-9,12-ジエノイルオキシ)メチル)プロパン-1,3-ジイル ジオクタデク-9,12-ジエノアートの代わりに工程5で得られた (9Z,12Z)-N-(3-(メチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミノ)プロピル)-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)オクタデカ-9,12-ジエナミド (0.100 g, 0.118 mmol)を用いて標記の化合物 (0.0804 g, 0.0895 mol, 収率76%)を得た。
ESI-MS m/z: 862 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.22-1.41 (m, 46H), 1.49-1.78 (m, 6H), 1.93-2.10 (m, 14H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.74-2.79 (m, 6H), 3.24-3.35 (m, 8H), 3.36-3.47 (m, 4H), 3.59-3.67 (m, 2H), 5.28-5.42 (m, 12H).
(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフラン-2-イル)-N,N,N-トリメチル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エタンアミニウム クロリド (化合物V’-1)
工程1
(2R,3R,4S)-2-((R)-1,2-ジヒドロキシエチル)テトラヒドロフラン-3,4-ジオール(Sigma-Aldrich社製, 0.315 g, 1.92 mmol) のピリジン (和光純薬工業社製, 10 mL) 溶液に、4,4'-ジメトキシトリチル クロリド (0.704 g, 2.02 mmol)、N,N-ジメチルアミノピリジン(0.047 g, 0.384 mmol) を加えて50℃で終夜攪拌した。室温まで冷却後、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10) で精製して (2R,3R,4S)-2-((R)-2-(ビス(4-メトキシフェニル)フェニル)メトキシ)-1-ヒドロキシエチル)テトラヒドロフラン-3,4-ジオール(0.465 g, 0.997 mmol, 収率52%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.67-1.74 (m, 1H), 2.73-2.77 (m, 1H), 3.31 (dd, J = 9.8, 6.2 Hz, 1H), 3.41-3.50 (m, 2H), 3.70 (dd, J = 9.6, 1.3 Hz, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.94 (dd, J = 6.2, 3.5 Hz, 1H), 4.10-4.24 (m, 3H), 4.26-4.30 (m, 1H), 6.81-6.86 (m, 4H), 7.20-7.36 (m, 7H), 7.41-7.45 (m, 2H).
工程2
工程1で得られた (2R,3R,4S)-2-((R)-2-(ビス(4-メトキシフェニル)フェニル)メトキシ)-1-ヒドロキシエチル)テトラヒドロフラン-3,4-ジオール(0.0669 g, 0.143 mmol) のテトラヒドロフラン (1 mL) 溶液に、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (0.247 g, 0.717 mmol)、水素化ナトリウム (油性, 60%, 0.0459 g, 1.15 mmol) を加え、加熱還流下で終夜撹拌した。室温まで冷却後、反応液に飽和食塩水を加えてヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 90/10) で精製して(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ)-1-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エチル)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフランの粗生成物を得た。
得られた(2R,3R,4S)-2-((R)-2-(ビス(4-メトキシフェニル)(フェニル)メトキシ)-1-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エチル)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフランの粗生成物に、ジクロロメタン (1 mL)、トリフルオロ酢酸 (0.0500 mL, 0.649 mmol) を加え、室温で5分攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 70/30) で精製して(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エタノール(0.0531 g, 0.0584 mmol, 収率41%) を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.43 (m, 48H), 1.50-1.62 (m, 6H), 2.01-2.09 (m, 12H), 2.32 (dd, J = 8.2, 4.2 Hz, 1H), 2.74-2.80 (m, 6H), 3.37-3.50 (m, 4H), 3.54-3.69 (m, 3H), 3.69-3.77 (m, 2H), 3.80-3.87 (m, 2H), 3.88-3.95 (m, 2H), 4.06 (dd, J = 9.8, 4.7 Hz, 1H), 5.28-5.42 (m, 12H).
工程3
工程2で得られた (R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフラン-2-イル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エタノール(0.0491 g, 0.0540 mmol) のジクロロメタン (1 mL) 溶液に、メタンスルホニルクロリド (純正化学社製, 0.0500 mL, 0.642 mmol)、トリエチルアミン (0.150 mL, 1.08 mmol) を加えて、室温で1時間攪拌した。反応液にメタンスルホニルクロリド (0.0500 mL, 0.642 mmol)、トリエチルアミン (0.150 mL, 1.08 mmol) を加えて、室温で1時間攪拌した。反応液にクロロホルム (1 mL) を加えて、室温にて1時間攪拌した。反応液にメタンスルホニルクロリド (0.0500 mL, 0.642 mmol)、トリエチルアミン (0.150 mL, 1.08 mmol) を加えて、40℃で2時間攪拌した後、加熱還流下2時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えてクロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣に、テトラヒドロフラン (1 mL)、ジメチルアミン (2.0 mol/L テトラヒドロフラン溶液, 2 mL, 2.00 mmol) を加え、マイクロ波反応装置を用いて130℃で5時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5) で精製して (R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフラン-2-イル)-N,N-ジメチル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エタンアミンの粗生成物を得た。得られた(R)-2-((2R,3R,4S)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)テトラヒドロフラン-2-イル)-N,N-ジメチル-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)エタンアミンの粗生成物にクロロホルム (0.5 mL)、ヨウ化メチル (1.00 mL, 16.0 mmol) を加え、室温で2時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣を少量のメタノール-クロロホルム (1:1) に溶解してイオン交換樹脂 (Dow Chemical製, Dowex(TM) 1x-2 100 mesh, Cl型, 約20倍量, 水およびメタノールでプレ洗浄) にロードし、メタノール-クロロホルム (1:1) で溶出した。溶出液を減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 90/10) で精製して標記の化合物 (0.0130 g, 0.0132 mmol, 収率24%)を得た。
ESI-MS m/z: 951 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 9H), 1.23-1.40 (m, 48H), 1.51-1.61 (m, 6H), 2.01-2.09 (m, 12H), 2.74-2.80 (m, 6H), 3.34-3.68 (m, 17H), 3.70-3.74 (m, 1H), 3.81-3.84 (m, 1H), 3.93-4.02 (m, 3H), 4.07-4.12 (m, 1H), 5.28-5.43 (m, 12H).
N,N-ジメチル-2,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロパン-1-アミン(化合物CL-1)
CL-1は、“ジャ-ナル オプ コントロールド 放出(J. Control. Release.)”,2005年,第107巻,p.276-287に記載の方法で合成した。
N-メチル-N,N-ビス(2-((Z)-ヘキサデカ-9-エニルオキシ)エチル)アミン(化合物CL-2)
水素化ナトリウム(油性, 60%, 222 mg, 5.55 mmol)のトルエン(2 mL)懸濁液に、N-メチルジエタノールアミン(東京化成工業社製、82.6 mg, 0.693 mmol)のトルエン (2 mL)溶液を撹拌しながら添加した後、(Z)-ヘキサデカ-9-エニル メタンスルホナート(530 mg, 1.66 mmol)のトルエン(2 mL)溶液を滴下した。得られた混合物を加熱還流下2時間撹拌した。室温まで冷却後、反応を水で停止させた。得られた混合物に飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜98/2)で精製することにより標記の化合物 (199 mg, 0.353 mmol, 収率51%)を得た。
ESI-MS m/z: 565 (M + H)+;
trans-1-メチル-3,4-ビス((((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)メチル)ピロリジン (化合物CL-3)
CL-3は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
trans-1-メチルピロリジン-3,4-ジイル)ビス(メチレン) (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-ビス(オクタデカ-9,12-ジエノアート)(化合物CL-4)
CL-4は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル 4-(ジメチルアミノ)ブタノアート (化合物CL-5)
CL-5は、国際公開第2010/054401号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 642
3-(ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)プロパン-1-オール(化合物CL-6)
CL-6は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-7)
CL-7は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
1-メチル-3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン (化合物CL-8)
CL-8は、国際公開第2016/002753号に記載の方法で合成した。
N,2-ジメチル-1,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロパン-2-アミン (化合物CL-9)
工程1
2-アミノ-2-メチルプロパン-1,3-ジオール (東京化成工業社製, 0.300 g, 4.76 mmol)をテトラヒドロフラン (3 mL)に溶解させ、水素化ナトリウム (油性60%, 0.171 g, 7.13 mmol)を室温で加えた。発泡が収まった後、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc社製, 2.458 g, 7.13 mmol)を加え、加熱環流下2時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜90/10)で精製することで、2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-アミン (0.280 g, 収率16%)を得た。
ESI-MS m/z: 602 (M + H)+
工程2
工程1で得られる2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-アミン (0.500 g, 0.831 mmol)をジクロロメタン (3 mL)に溶解させ、氷冷下トリエチルアミン (和光純薬工業社製, 2.55 mL, 18.3 mmol)および2-ニトロベンゼン-1-スルホニル クロリド (Sigma-Aldrich社製, 0.368 g, 1.66 mmol)加え、室温に戻した後1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1〜85/15)で精製することで、N-(2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-イル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド (0.400 g, 収率61%)を得た。
ESI-MS m/z: 787(M + H)+
工程3
工程2で得られたN-(2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-イル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド (0.200 g, 0.274 mmol)をテトラヒドロフラン (3 mL)に溶解させ、炭酸セシウム (和光純薬工業社製, 0.248 g, 0.726 mmol)およびヨウ化メチル (東京化成工業社製, 0.048 mL, 0.762 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて70℃で1時間攪拌した。反応混合物に水を加え、ヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、粗生成物としてN-メチル-N-(2-メチル-1,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロパン-2-イル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド (0.200 g, 収率91%)を得た。
ESI-MS m/z: 801(M + H)+
工程4
工程3で得られたN-メチル- N-(2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-イル)-2-ニトロベンゼンスルホンアミド (0.200 g, 0.250 mmol)をアセトニトリル (2 mL)に溶解させ、1-ドデカンチオール (東京化成工業社製, 0.149 mL, 0.624 mmol)、1,8-ジアザビシクロ[5.4.0]-7-ウンデセン (ナカライテスク社製, 0.0940 mL, 0.624 mmol)を加え、80℃で1時間撹拌した。反応混合物に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=90/10〜75/25)で精製することにより、化合物CL-9 (0.070 g, 収率46%)を得た。
ESI-MS m/z: 616(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.02 (s, 3H), 1.25-1.40 (m, 32H), 1.50-1.59 (m, 4H), 2.05 (q, J= 6.8 Hz, 8H), 2.32 (s, 3H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 3.26 (s, 4H), 3.40 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 5.28-5.43 (m, 8H).
メチルジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミン(化合物CL-10)
メチルアミン(Sigma-Aldrich社製, 約2 mol/Lテトラヒドロフラン溶液、10.5 mL、21.0 mmol)に(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート(1.03 g, 3.00 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて150℃で90分間加熱撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、2 mol/L水酸化ナトリウム水溶液、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮することでメチル((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル)アミンの粗生成物を得た。
得られた粗生成物に(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート(0.93 g, 2.70 mmol)および50%水酸化ナトリウム水溶液(0.960 g, 12.0 mmol)を加え、油浴上135℃で60分間加熱撹拌した。室温まで冷却後、反応液を酢酸エチルで希釈し、水、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜97/3)で精製することにより化合物CL-10 (1.07 g, 2.03 mmol, 通し収率67 %)を得た。
ESI-MS m/z: 529 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.7 Hz, 6H), 1.29 (br s, 32H), 1.40-1.51 (m, 4H), 1.97-2.06 (m, 8H), 2.20 (s, 3H), 2.30 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.77 (t, J = 5.8 Hz, 4H), 5.28-5.43 (m, 8H).
N-メチル-2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-N-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)エタン-1-アミン (化合物CL-11)
CL-11は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(3R,4R)-3,4-ビス(((Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-イル)オキシ)-1-メチルピロリジン (化合物CL-12)
CL-12は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
2-(ジメチルアミノ)-N-((6Z,9Z,28Z,31Z)-ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-イル)アセトアミド (化合物CL-13)
CL-13は、国際公開第2013/059496号に記載の方法で合成した。
3-(ジメチルアミノ)プロパン-1,2-ジイル (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-ビス(オクタデカ-9,12-ジエノアート) (化合物CL-14)
CL-14は、“バイオケミストリー(BioChemistry)”,1994年,第33巻,p.12573-12580に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミン (化合物CL-15)
CL-15は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アミン (化合物CL-16)
CL-16は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-N-メチル-N-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-17)
2-(メチルアミノ)エタノール (東京化成工業社製, 0.125 g, 1.66 mmol )をトルエン (2.5 mL)に溶解させ、水素化ナトリウム(油性, 60%, 0.333 g, 8.32 mmol)、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルホナート (Nu-Chek Prep,Inc製, 1.32 g, 3.83 mmol)のトルエン (2.5 mL)溶液を順に加え、加熱環流下2時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却した後、エタノール、水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜97/3)で精製することにより、化合物CL-17 (0.211 g, 収率22%)を得た。
ESI-MS m/z: 572(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 6H), 1.24-1.38 (m, 32H), 1.43-1.49 (m, 2H), 1.53-1.59 (m, 2H), 2.05 (q, J = 7.2 Hz, 8H), 2.27 (s, 3H), 2.37 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.57 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.78 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.42 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 5.30-5.41 (m, 8H).
(9Z,12Z)-N-(3-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-18)
CL-18は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 572
(1-メチルピペリジン-3-イル)メチル ジ((11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル)カルバマート (化合物CL-19)
CL-19は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
(13Z,16Z)-N,N-ジメチル-4-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)ドコサ-3,13,16-トリエン-1-アミン (化合物CL-20)
工程1
国際公開第2009/132131に記載の方法で合成したヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-オン (0.353 g, 0.186 mmol)のテトラヒドロフラン (0.882 mL)溶液に、アルゴン雰囲気下、無水セリウム(III)クロリド (東京化成工業社製, 0.174 g, 0.706 mmol)を加えた。その後、氷冷下にてシクロプロピルマグネシウム ブロミド(Sigma-Aldrich社製, 0.5 mmol/L. 1.06 mL, 0.529 mmol)を加え、5分撹拌した後、室温で1時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=97/3〜94/6)で精製することにより、(6Z,9Z,28Z,31Z)-19-シクロプロピルヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-オール (0.141 g, 収率70%)を得た。
ESI-MS m/z: 569
工程2
工程1で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-19-シクロプロピルヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-オール (0.141 g, 0.248 mmol)のジクロロメタン (2 mL)溶液に 室温にて臭化リチウム (Sigma-Aldrich社製, 0.108 g, 1.24 mmol)とクロロトリメチルシラン (東京化成工業社製, 0.135 g, 1.24 mmol)を加えて1時間撹拌した。その後、臭化リチウム (Sigma-Aldrich社製, 0.108 g, 1.24 mmol)とクロロトリメチルシラン (東京化成工業社製, 0.135 g, 1.24 mmol)を追加で加えて1時間撹拌した。
反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=100/0〜90/10で精製することにより、(6Z,9Z,28Z,31Z)-19-(3-ブロモプロピリデン)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン (0.074 g, 収率47%)を得た。
ESI-MS m/z: 632
工程3
工程2で得られた(6Z,9Z,28Z,31Z)-19-(3-ブロモプロピリデン)ヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン (0.074 g, 0.117 mmol)にジメチルアミン (Sigma-Aldrich社製, 2.0 mmol/L テトラヒドロフラン溶液, 1.5 mL,3.0 mmol)を加え、マイクロウェーブ照射下にて90分130℃で加熱撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、水層をヘキサンで抽出した。有機層を飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=97/3〜88/12で精製することにより、CL-20 (0.062 g, 収率69%)を得た。
ESI-MS m/z: 596
(S)-2-アミノ-3-ヒドロキシ-N,N-ビス(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)プロパンアミド (化合物CL-21)
CL-21は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(3R,4R)-3,4-ビス(((11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル)オキシ)ピロリジン (化合物CL-22)
CL-22は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
trans-3,4-ビス((((11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)-1-メチルピロリジン (化合物CL-23)
CL-23は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
1-((S)-2,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)ピロリジン (化合物CL-24)
CL-24は、国際公開第2009/129395号に記載の方法で合成した。
2-(2,2-ジ((9Z,12Z)-オクタエカ-9,12-ジエン-1-イル)-1,3-ジオキソラン-4-イル)-N,N-ジメチルエタン-1-アミン (化合物CL-25)
CL-25は、国際公開第2010/042877号に記載の方法で合成した。
3-(ジメチルアミノ)プロピル ジ((9Z,12Z)-オキサデカ-9,12-ジエン-1-イル)カルバマート (化合物CL-26)
CL-26は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
4-(ジメチルアミノ)ブチル ジ((9Z,12Z)-オキサデカ-9,12-ジエン-1-イル)カルバマート (化合物CL-27)
CL-27は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
2-(ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)エタン-1-オール (化合物CL-28)
CL-28は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
2-(ジメチルアミノ)-3-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)-2-((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)プロパン-1-オール (化合物CL-29)
CL-29は、国際公開第2011/149733号に記載の方法で合成した。
(6Z,9Z,28Z,31Z)-N,N-ジメチルヘプタトリアコンタ-6,9,28,31-テトラエン-19-アミン (化合物CL-30)
CL-30は、国際公開第2010/054405号に記載の方法で合成した。
N,N,2-トリメチル-1,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロパン-2-アミン (化合物CL-31)
参考例B9の工程1で得られた2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-アミン (0.240 g, 0.399 mmol)を1,2-ジクロロエタン (1 mL)とメタノール (1 mL)の混合溶媒に溶解させ、ホルムアルデヒド (和光純薬工業社製, 37%水溶液, 0.144 mL, 1.99 mmol)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (東京化成工業社製, 0.211 g, 0.997 mmol)を加え、室温で一晩撹拌した。反応混合物に水を加え、水層を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過した。ろ液を減圧濃縮し、得られた残渣をNHシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル=99/1〜80/20)で精製することにより、化合物2 (0.191 g, 収率76%)を得た。
ESI-MS m/z: 630(M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 0.95 (s, 3H), 1.26-1.39 (m, 32H), 1.53-1.58 (m, 4H), 2.05 (q, J= 6.9 Hz, 8H), 2.31 (s, 6H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 3.33-3.42 (m, 8H), 5.27-5.43 (m, 8H).
N-メチル-2-(((Z)-オクタデカ-6-エン-1-イル)オキシ)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-6-エン-1-イル)オキシ)エチル)エタン-1-アミン (化合物CL-32)
CL-32は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(3R,4R)-3-(ジメチルアミノ)プロピル 3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)ピロリジン-1-カルボキシラート (化合物CL-33)
工程1
水素化ナトリウム(油性, 60%, 5.80 g, 145 mmol)のトルエン(100 mL)懸濁液に、(3R,4R)-1-ベンジルピロリジン-3,4-ジオール(Diverchim S.A.社製、3.50 g, 18.1 mmol)のトルエン (70 mL)溶液を撹拌しながら添加した後、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート(15.6 g, 45.3 mmol)のトルエン(30 mL)溶液を滴下した。得られた混合物を加熱還流下終夜撹拌した。室温まで冷却後、反応を飽和塩化アンモニウム基水溶液で停止した。得られた混合物に飽和食塩水を加え、酢酸エチルで2回抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(メタノール/クロロホルム=0/100〜2/98)で精製することにより(3R,4R)-1-ベンジル-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)ピロリジン(6.96 g, 10.1 mmol, 収率56%)を得た。
ESI-MS m/z: 691 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 6H), 1.26-1.38 (m, 30H), 1.52-1.62 (m, 6H), 2.05 (q, J = 6.3 Hz, 8H), 2.50 (dd, J = 9.9, 4.3 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 5.8 Hz, 4H), 2.85 (dd, J = 9.6, 5.9 Hz, 2H), 3.37-3.45 (m, 4H), 3.52-3.66 (m, 2H), 3.83 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 5.28-5.43 (m, 8H), 7.23-7.33 (m, 5H).
工程2
工程1で得られた(3R,4R)-1-ベンジル-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)ピロリジン (6.96 g, 10.1 mmol))を1,2-ジクロロエタン (100mL)に溶解させ、クロロぎ酸1-クロロエチル(3.30 mL, 30.3 mmol)を加え130℃で1時間撹拌した。反応溶液にメタノール(100 mL)を加え、130℃でさらに1時間撹拌した。室温まで冷却後、減圧下濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜92/8)で精製した。得られた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮することで(3R,4R)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)ピロリジン(5.56 g, 9.27 mmol, 収率92%)を得た。
ESI-MS m/z: 601 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 6H), 1.29-1.41 (m, 30H), 1.49-1.60 (m, 4H), 1.67 (br s, 3H), 2.05 (q, J = 6.5 Hz, 8H), 2.75-2.85 (m, 6H), 3.09 (dd, J = 12.4, 5.1 Hz, 2H), 3.37-3.49 (m, 4H), 3.76 (dd, J= 5.0, 3.3 Hz, 2H), 5.28-5.43 (m, 8H).
工程3
参考例B4の工程2と同様の方法で、ジ((Z)-オクタデカ-9-エニル)アミンの代わりに工程2で得られた(3R,4R)-3,4-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニルオキシ)ピロリジン(0.111 g, 0.185 mmol)を用いて、標記の化合物 (0.101 g, 0.139 mmol, 75%) を得た。
ESI-MS m/z: 730 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 6H), 1.24-1.40 (m, 32H), 1.50-1.57 (m, 4H), 1.77-1.83 (m, 2H), 2.02-2.08 (m, 8H), 2.23 (s, 6H), 2.34 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.8 Hz, 4H), 3.38-3.56 (m, 8H), 3.83-3.86 (m, 2H), 4.11 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 5.30-5.42 (m, 8H).
(9Z,12Z)-N-(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(化合物CL-34)
CL-34は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-N-(2-(((Z)-ヘキサデカ-9-エン-1-イル) オキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-35)
CL-35は、国際公開第2014/007398号に記載の方法で合成した。
N,N-ジメチル-1,3-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロパン-2-アミン (化合物CL-36)
CL-36は、国際公開第2009/129385号に記載の方法で合成した。
3-(ジメチルミノ)プロピル ジ((Z)-オクタデカ-9-エニル)カルバマート(化合物CL-37)
工程1
アンモニア(東京化成工業社製, 約2 mol/Lメタノール溶液、12.0 mL、24.0 mmol)に、(Z)-オクタデカ-9-エニル メタンスルホナート(1.04 g, 3.00 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて130℃で3時間攪拌した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてクロロホルムで5回抽出した。有機層を合わせて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮することで(Z)-オクタデカ-9-エニルアミンの粗生成物を得た。
得られた粗生成物に(Z)-オクタデカ-9-エニル メタンスルホナート(0.832 g, 2.40 mmol)および50%水酸化ナトリウム水溶液(0.960 g、12.0 mmol)を加え、油浴上110℃で60分間攪拌した。室温まで冷却後、反応液を酢酸エチルで希釈し、水、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜95/5)で精製することにより、ジ((Z)-オクタデカ-9-エニル)アミン (0.562 g, 1.085 mmol, 収率36%)を得た。
ESI-MS m/z: 519(M + H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J = 6.7 Hz, 6H), 1.29(br s, 45H), 1.41-1.52(m, 4H), 1.97-2.05(m, 8H), 2.58(t, J = 7.2 Hz, 4H), 5.28-5.40(m, 4H).
工程2
工程1で得られるジ((Z)-オクタデカ-9-エニル)アミン (0.156 g、0.301 mmol)をクロロホルム(3 mL)に溶解させ、“ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー(J.Am.Chem.Soc.)”,1981年,第103巻,p.4194-4199記載の方法に準じた方法で合成した3-(ジメチルアミノ)プロピル 4-ニトロフェニル カルボナート塩酸塩 (0.138 g、0.452 mmol)およびトリエチルアミン(0.168 mL, 1.21 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて110℃で60分間攪拌した。反応液に3-(ジメチルアミノ)プロピル 4-ニトロフェニル カルボナート塩酸塩 (22.9 mg、0.0753 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて110℃で20分間攪拌した。反応液に3-(ジメチルアミノ)プロピル 4-ニトロフェニル カルボナート塩酸塩 (22.9 mg、0.0753 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて110℃で20分間攪拌した。反応液に3-(ジメチルアミノ)プロピル 4-ニトロフェニル カルボナート塩酸塩 (22.9 mg、0.0753 mmol)を加え、マイクロ波反応装置を用いて110℃で20分間攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧濃縮した。得られた残渣を少量のn-ヘキサン/酢酸エチル(1/4)に溶解してアミノ修飾シリカゲルのパッドに吸着させ、n-ヘキサン/酢酸エチル(1/4)で溶出し、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール=100/0〜95/5)で精製することで標記の化合物 (0.173 g, 0.267 mmol, 収率89%)を得た。
ESI-MS m/z: 648(M + H)+; 1H-NMR(CDCl3) δ: 0.88(t, J= 6.6 Hz, 6H), 1.28(br s, 44H), 1.45-1.55(m, 4H), 1.75-1.85(m, 2H), 1.97-2.04(m, 8H), 2.23(s, 6H), 2.34(t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.13-3.24(m, 4H), 4.10(t, J=6.4 Hz, 2H), 5.28-5.40(m, 4H).
(11Z,14Z)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)イコサ-11,14-ジエン-1-アミン (化合物CL-38)
CL-38は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 588
(9Z,12Z)-N-(2-(((Z)-イコサ-11-エン-1-イル)オキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-39)
CL-39は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 588
(11Z,14Z)-N-(2-(((Z)-イコサ-11-エン-1-イル)オキシ)エチルイコサ-11,14-ジエン-1-アミン (化合物CL-40)
CL-40は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 616
(Z)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)オクタデカ-9-エン-1-アミン (化合物CL-41)
CL-41は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 562
ビス(2-(((11Z,14Z)-イコサ-11,14-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アミン (化合物CL-42)
CL-42は、国際公開第2011/136368号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 658
(Z)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)ヘキサデカ-9-エン-1-アミン (化合物CL-43)
CL-43は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z:534
(Z)-N-(2-(オクタデカ-9-エン-1-イルオキシ)エチル)オクタデカン-1-アミン (化合物CL-44)
CL-44は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 564
(Z)-N-(2-(オクタデカ-9-エン-1-イルオキシ)エチル)テトラデカン-1-アミン (化合物CL-45)
CL-45は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 508
3-((3R,4R)-3,4-ビス(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)ピロリジン-1-イル)プロパン-1,2-ジオール (化合物CL-46)
CL-46は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
ビス(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)アミン (化合物CL-47)
CL-47は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
3-(ビス(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)アミノ)プロパン-1,2-ジオール (化合物CL-48)
CL-48は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
3-(ビス(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)アミノ)プロパンアミド(化合物CL-49)
CL-49は、国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-N-(2-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エトキシ)エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (化合物CL-50)
CL-50は、国際公開第2014/007398号に記載の方法に準ずる方法で合成した。
ESI-MS m/z: 604
ジ((Z)-ノナ-2-エン-1-イル) 9-((4-(ジメチルアミノ)ブタノイル)オキシ)ヘプタデカンジオアート(化合物CL-51)
CL-51は、国際公開第2011/153493に記載の方法で合成した。
ジ((Z)-ノナ-2-エン-1-イル) 8,8'-((((2-(ジメチルアミノ)エチル)チオ)カルボニル)アザンジイル)ジオクタノアート(化合物CL-52)
CL-52は、国際公開第2017/023817に記載の方法で合成した。
2-(ジメチルアミノ)-N-(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)-N-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アセトアミド(化合物CL-53)
CL-53は、国際公開第2014/007398に記載の方法に準ずる方法で合成した。
3-((2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アミノ)プロパン-1-オール(化合物CL-54)
CL-54は、国際公開第2014/007398に記載の方法に準ずる方法で合成した。
1-メチル-3,3-ビス((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)アゼチジン(化合物CL-55)
CL-55は、国際公開第2012/108397に記載の方法で合成した。
1-メチル-3,3-ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)エチル)アゼチジン (化合物CL-56)
CL-56は、国際公開第2016/002753に記載の方法で合成した。
1-メチル-3,3-ビス(2-(((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)プロピル)アゼチジン (化合物CL-57)
CL-57は、国際公開第2016/002753に記載の方法で合成した。
2-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)エタン-1-オール (化合物CL-58)
CL-58は、国際公開第2016/002753に記載の方法で合成した。
2-(3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-イル)プロパン-1-オール(化合物CL-59)
CL-59は、国際公開第2016/002753に記載の方法で合成した。
3-(ジメチルアミノ)プロピル 3,3-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)アゼチジン-1-カルボキシラート(化合物CL-60)
CL-60は、国際公開第2016/002753に記載の方法で合成した。
2-(ジ((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)アミノ)エタン-1-オール(化合物CL-61)
CL-61は、国際公開第2014/007398に記載の方法で合成した。
3-(ジ((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)アミノ)プロパン-1-オール(化合物CL-62)
CL-62は、国際公開第2014/007398に記載の方法で合成した。
(11Z,14Z)-2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(化合物CL-63)
工程1
(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルメタンスルホネート(7.62 g, 22.1 mmol)のテトラヒドロフラン(30.0 mL) 溶液に、エチル2-シアノアセテート(0.943 mL, 8.84 mmol)、水素化ナトリウム(1.06 g, 26.5 mmol)、テトラブチルアンモニウムヨージド(3.27 g, 8.84 mmol)を加え、60℃で2時間攪拌した。反応液に水を加え、ヘプタンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 99/1〜85/15)で精製してエチル(11Z,14Z)-2-シアノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノエイト (3.50 g, 5.74 mmol, 収率64.9%)を得た。
エチル(11Z,14Z)-2-シアノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエノエイト(1.50 g, 2.46 mmol)のテトラヒドロフラン(10.0 mL) 溶液に水素化アルミニウムリチウム(0.467 g, 12.3 mmol)を加え、氷冷下で30分間撹拌した。反応液に水、水酸化ナトリウム、水を1:1:3の割合で加え、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 90/10)で精製して(11Z,14Z)-2-(アミノメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール (1.00 g, 1.75 mmol, 収率71.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 573 (M + H)+.
工程2
(11Z,14Z)-2-(アミノメチル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.200 g, 0.350 mmol)のジクロロエタン(2.00 mL) 溶液にパラホルムアルデヒド溶液(0.276 g, 3.50 mmol, 37%メタノール溶液)、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム(1.48 g, 6.99 mmol)を加え、室温で3時間撹拌した。反応液に水を加え、クロロホルムを用いて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 99/1〜85/15)で精製して標記化合物(0.0280 g, 0.0470 mmol, 収率13.3%)を得た。
ESI-MS m/z: 601 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.23-1.29 (m, 40H), 2.05 (q, J= 6.8 Hz, 8H), 2.32 (s, 6H), 2.40 (s, 2H), 2.77 (dd, J = 9.8, 3.4 Hz, 4H), 3.53 (s, 2H), 5.29-5.42 (m, 8H).
(11Z,14Z)-2-(ジメチルアミノ)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-yl)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(化合物CL-64)
工程1
水素化ナトリウム (1.21 g, 30.3 mmol) の THF (30.0 mL) 溶液にマロン酸 tert-ブチルエチル (東京化成工業社製, 2.00 mL, 10.1 mmol)、よう化テトラ‐n‐ブチルアンモニウム (ナカライテスク社製, 0.746 g, 2.02 mmol)、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエニル メタンスルホナート (ニューチェック・プレップ・インク(Nu-Chek Prep,Inc)社製, 8.70 g, 25.2 mmol) を加えて、加熱還流下、2時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 95/5) で精製して、1-tert-ブチル 3-エチル 2,2-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロン酸 (5.52 g, 80.0%) を得た。
工程2
1-tert-ブチル 3-エチル 2,2-ジ((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)マロン酸 (5.52 g, 8.06 mmol) のジクロロメタン (30.0 mL) 溶液にトリフルオロ酢酸 (5.00 mL, 64.9 mmol) を加えて、室温にて30分攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。残渣をクロロホルムと飽和重曹水で分液した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 95/5) で精製して (11Z,14Z)-2-(エトキシカルボニル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン酸 (4.04 g, 6.42 mmol, 80.0%) を得た。
工程3
(11Z,14Z)-2-(エトキシカルボニル)-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン酸 (0.284 g, 0.452 mmol) のトルエン (3.00 mL) 溶液に、トリエチルアミン (0.315 mL, 2.26 mmol)、ジフェニルホスホリルアジド (東京化成工業社製, 0.121 mL, 0.542 mmol) を加えて、室温にて1時間攪拌した。反応液に水 (0.0200 mL, 1.11 mmol) を加えて、加熱還流下5時間攪拌した。反応液に水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 80/20) で精製して、 (11Z,14Z)-2-アミノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン酸エチル (0.0457 g, 0.0762 mmol, 17.0%) を得た。
ESI-MS m/z: 601 (M + H)+ .
工程4
(11Z,14Z)-2-アミノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン酸エチル (0.299 g, 0.498 mmol) のTHF (3.00 mL) 溶液に、水素化リチウムアルミニウム (純正化学社製, 0.0190 g, 0.498 mmol) を加えて、室温で30分攪拌した。反応液に水、水酸化ナトリウム水溶液を加えて、不溶物をセライト濾過で除き、濾液を減圧濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル = 50/50) で精製して (11Z,14Z)-2-アミノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.0667 g, 0.120 mmol, 24.0%) を得た。
ESI-MS m/z: 559 (M + H)+ .
工程5
(11Z,14Z)-2-アミノ-2-((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)イコサ-11,14-ジエン-1-オール(0.0664 g, 0.119 mmol) のジクロロエタン (1.00 mL) 溶液に、ホルムアルデヒド (0.500 mL, 6.72 mmol)、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド (東京化成工業社製, 0.101 g, 0.476 mmol) を加えて、室温にて終夜撹拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム/メタノール = 80/20) で精製して標記化合物 (0.0474 g, 0.0809 mmol, 68.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 587 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.24-1.39 (m, 40H), 2.05 (q, J= 6.8 Hz, 8H), 2.38 (s, 6H), 2.77 (t, J= 6.7 Hz, 4H), 5.29-5.42 (m, 8H).
3-(ジメチルアミノ)-2,2-ビス((((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル)オキシ)メチル)プロパン-1-オール(化合物CL-65)
2-(ブロモメチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(1.52 g, 7.56 mmol)にジメチルアミン溶液(15.0 mL, 30.0 mmol, 2M in THF)を加え、マイクロウェーブ照射下で120℃、15時間攪拌した。反応液に水酸化リチウムを加え、ろ過した。ろ液を減圧下濃縮し、2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール (1.23 g, 定量的)を得た。
2-((ジメチルアミノ)メチル)-2-(ヒドロキシメチル)プロパン-1,3-ジオール(1.23 g, 7.56 mmol)のトルエン(30.0 mL) 溶液に水素化ナトリウム(0.756 g, 18.9 mmol)、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルメタンスルホネート(6.51 g, 18.9 mmol)を加え、加熱還流下で終夜撹拌した。反応液に飽和食塩水を加え、ヘキサンを用いて抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 90/10)、アミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル = 90/10)で精製して標記化合物(1.80 g, 2.73 mmol, 収率36.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 661 (M)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H), 1.24-1.39 (m, 32H), 1.50-1.56 (m, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 2.30 (s, 6H), 2.53 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 4H), 3.30-3.41 (m, 8H), 3.71 (s, 2H), 5.29-5.42 (m, 8H).
((2-((2-(ジメチルアミノ)エチル)チオ)アセチル)アザンジイル)ビス(エタン-2,1-ジイル) ジテトラデカノアート(化合物CL-66)
CL-66は、国際公開第2012/170952に記載の方法で合成した。
(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(化合物CL-67)
工程1
(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネート(2.00 g, 5.77 mmol)をアセトニトリル(10.0 mL)に溶解させ、炭酸セシウム(3.76 g, 11.5 mmol)、2-メルカプトエタノール(0.615 mL, 8.66 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮して(Z)-2-(オクタデック-9-エン-1-イルチオ)エタン-1-オール(2.35 g、定量的)を得た。
(Z)-2-(オクタデック-9-エン-1-イルチオ)エタン-1-オール(1.50 g, 4.56 mmol)をジクロロメタン(10.0 mL)に溶解させ、トリエチルアミン(1.91 mL, 13.7 mmol)、メタンスルホニルクロリド(0.889 mL, 11.4 mmol)を0℃で加え、室温で2.5時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜90/10)で精製して(Z)-(2-クロロエチル)(オクタデック-9-エン-1-イル)スルファン(0.630 g, 収率39.8%)を得た。
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.33 (m, 2H), 3.64-3.60 (m, 2H), 2.87-2.83 (m, 2H), 2.56 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.03-2.00 (m, 4H), 1.61-1.56 (m, 2H), 1.37-1.29 (m, 22H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
工程2
(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルフォネート(6.00 g, 17.4 mmol)をアセトニトリル(40.0 mL)に溶解させ、炭酸セシウム(14.2 g, 43.5 mmol)、テトラブチルアンモニウムヨージド(8.36 g, 22.6 mmol)、N-(tert-ブトキシカルボニル)-2-ニトロベンゼンスルフォンアミド(6.84 g, 22.6 mmol)を加え、60℃で終夜撹拌した。反応液に飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜70/30)で精製してtert-ブチル [(2-ニトロフェニル)スルフォニル][(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(7.80 g, 収率81.0%)を得た。
tert-ブチル [(2-ニトロフェニル)スルフォニル][(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(7.80 g, 14.2 mmol)をジクロロメタン(25.0 mL)に溶解させ、トリフルオロ酢酸(21.8 mL, 283 mmol)を加え、室温で3時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜70/30)で精製して2-ニトロ-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]ベンゼンスルフォンアミド(5.10 g, 収率80.0%)を得た。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 8.15-8.13 (m, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.77-7.71 (m, 2H), 5.37-5.33 (m, 4H), 5.23 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 3.09 (td, J = 7.1, 5.8 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.07-2.01 (m, 4H), 1.55-1.50 (m, 2H), 1.39-1.23 (m, 16H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
工程3
工程2で得られた2-ニトロ-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]ベンゼンスルフォンアミド(0.200 g, 0.444 mmol)をアセトニトリル(4.00 mL)に溶解させ、炭酸セシウム(0.289 g, 0.888 mmol)、テトラブチルアンモニウムヨージド(0.164 g, 0.444 mmol)、工程1で得られた(Z)-(2-クロロエチル)(オクタデック-9-エン-1-イル)スルファン(0.162 g, 0.466 mmol)を加え、80℃で4時間撹拌した。反応液に飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜85/15)で精製して2-ニトロ-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]ベンゼンスルフォンアミド(0.277 g, 収率82.0%)を得た。
2-ニトロ-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]ベンゼンスルフォンアミド(0.277 g, 0.364 mmol)をアセトニトリル(4.00 mL)に溶解させ、ジアザビシクロウンデセン(0.137 mL, 0.909 mmol)、1-ドデカンチオール(0.217 mL, 0.909 mmol)を加え、70℃で3時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜70/30)、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜50/50)で精製して(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.0525 g, 収率25.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 576 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 2.82-2.76 (m, 4H), 2.67 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.60 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.05-2.01 (m, 8H), 1.59-1.48 (m, 4H), 1.39-1.27 (m, 38H), 0.89-0.88 (m, 6H).
(9Z,12Z)-N-メチル-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(化合物CL-68)
工程1
参考例B31と同様の手法で、2-メチル-1,3-ビス((9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イルオキシ)プロパン-2-アミンの代わりに、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンを用い、(9Z,12Z)-N-メチル-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン (0.0200 g, 37.2%) を得た。
ESI-MS m/z: 590 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.29 (m, 6H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.64-2.55 (m, 4H), 2.52 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.06-2.00 (m, 8H), 1.62-1.56 (m, 2H), 1.47-1.45 (m, 2H), 1.36-1.30 (m, 38H), 0.91-0.86 (m, 6H).
2-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アセトアミド(化合物CL-69)
工程1
実施例C1工程3で得られた(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(1.54 g, 2.66 mmol)をジクロロメタン(10.0 mL)に溶解させ、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.16 mL, 6.66 mmol)、1-[ビス(ジメチルアミノ)メチレン]-1H-1,2,3-トリアゾロ[4,5-b]ピリジニウム3-オキシドヘキサフルオロホスファート(2.53 g, 6.66 mmol)、ジメチルグリシン(0.550 g, 5.33 mmol)を加えて、室温で2時間撹拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜80/20)、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して2-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アセトアミド(1.41 g, 収率80.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 661 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 6H), 3.57 (dt, J = 15.7, 7.9 Hz, 1H), 3.47 (dt, J = 15.7, 7.9 Hz, 1H), 3.36 (dt, J = 15.7, 7.9 Hz, 1H), 3.29 (dt, J = 15.7, 7.9 Hz, 1H), 3.10 (d, J = 16.7 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.69-2.65 (m, 2H), 2.57-2.54 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.05-1.99 (m, 8H), 1.60-1.56 (m, 4H), 1.39-1.27 (m, 38H), 0.89-0.88 (m, 6H).
ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミン(化合物CL-70)
工程1
実施例C1の工程2と同様の手法で、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに、実施例C1の工程1で得られた(Z)-(2-クロロエチル)(オクタデック-9-エン-1-イル)スルファンを用い、(Z)-2-ニトロ-N-[2-(オクタデック-9-エン-1-イルチオ)エチル]ベンゼンスルフォンアミド(0.270 g, 定量的)を得た。
工程2
実施例C1の工程3と同様の手法で、2-ニトロ-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]ベンゼンスルフォンアミドの代わりに、(Z)-2-ニトロ-N-[2-(オクタデック-9-エン-1-イルチオ)エチル]ベンゼンスルフォンアミドを用い、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミン(0.0470 g, 57.2%)を得た。
ESI-MS m/z: 638 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 2.82 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.68 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.59-1.55 (m, 4H), 1.39-1.27 (m, 44H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
2-(ジメチルアミノ)-N,N-ビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)アセトアミド(化合物CL-71)
工程1
実施例C3工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに、実施例C4と同様の手法で得られたビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)アミンを用い、2-(ジメチルアミノ)-N,N-ビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)アセトアミド(0.0493 g, 収率87.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 719 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 8H), 3.62 (dt, J = 15.0, 7.5 Hz, 2H), 3.48 (dt, J = 15.0, 7.5 Hz, 2H), 3.14 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.69 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.55 (dt, J = 12.8, 7.6 Hz, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.60-1.58 (m, 4H), 1.39-1.26 (m, 32H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H).
2-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]エタン-1-スルフォンアミド(化合物CL-72)
工程1
実施例C1工程3で得られた(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.183 g, 0.318 mmol)をジクロロメタン(3.00 mL)に溶解させ、トリエチルアミン(0.260 mL, 1.87 mmol)、2-クロロメタンスルフォニルクロリド(0.140 mL, 1.33 mmol)を0℃で加え、室温で終夜撹拌した。反応液に0.01N塩酸を加え、蒸留水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜86/14)で精製してN-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]エタンスルフォンアミド(0.160 g, 収率61.0%)を得た。
N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]エタンスルフォンアミド(0.113 g, 0.169 mmol)をテトラヒドロフラン(0.500 mL)に溶解させ、ジメチルアミン溶液(1.08 mL, 2.16 mmol, 2M in THF)を加え、加熱還流下で3時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜96/4)で精製して2-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]エタン-1-スルフォンアミド(0.113 g, 収率94.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 712 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 3.36 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.20 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.17-3.11 (m, 2H), 2.80-2.68 (m, 6H), 2.54 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 2.27 (s, 6H), 2.09-1.93 (m, 8H), 1.63-1.53 (m, 4H), 1.41-1.22 (m, 38H), 0.92-0.85 (m, 6H).
2-(ジメチルアミノ)エチル(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(化合物CL-73)
工程1
実施例C1工程3で得られた(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.127 g, 0.220 mmol)をジクロロメタン(1.10 mL)に溶解させ、トリフォスゲン(0.0406 g, 0.410 mmol)を加え、室温で30分間撹拌した。反応液にトリエチルアミン(0.150 mL, 1.08 mmol)、2-ジメチルアミノエタノール(0.100 mL, 0.998 mmol)を加え、室温で終夜撹拌した。反応液に飽和重曹水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して2-(ジメチルアミノ)エチル(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(0.140 g, 収率92.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 692 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 4.18 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.43-3.32 (m, 2H), 3.28-3.18 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.70-2.60 (m, 2H), 2.60-2.49 (m, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.09-1.93 (m, 8H), 1.61-1.47 (m, 4H), 1.42-1.19 (m, 38H), 0.91-0.86 (m, 6H).
1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン (化合物CL-77)
工程1
アゼチジン-3,3-ジイルジメタノール(0.315 g, 2.96 mmol)をメタノール(5.00 mL)に溶解させ、二炭酸ジ-tert-ブチル(0.936 mL, 4.03 mmol)、トリエチルアミン(0.750 mL, 5.38 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮してtert-ブチル 3,3-ビス(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.584 g, 定量的)を得た。
tert-ブチル 3,3-ビス(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.584 g, 2.69 mmol)をジクロロメタン(10.0 mL)に溶解させ、メタンスルホニルクロリド(0.524 mL, 6.73 mmol)、トリエチルアミン(1.13 mL, 8.07 mmol)を0℃で加えて、室温で2時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮してtert-ブチル 3,3-ビス{[(メチルスルフォニル)オキシ]メチル}アゼチジン-1-カルボキシレート(1.01 g, 定量的)を得た。
tert-ブチル 3,3-ビス{[(メチルスルフォニル)オキシ]メチル}アゼチジン-1-カルボキシレート(0.900 g, 2.41 mmol)をジメチルホルムアミド(15.0 mL)に溶解させ、チオ酢酸 S-カリウム(0.963 g, 8.44 mmol)を加えて、55℃で終夜攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜34/66)で精製してtert-ブチル 3,3-ビス[(アセチルチオ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.742 g, 収率92.0%)を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.61 (s, 4H), 3.20 (s, 4H), 2.38 (s, 6H), 1.44 (s, 9H).
工程2
tert-ブチル 3,3-ビス[(アセチルチオ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.342 g, 1.03 mmol)をテトラヒドロフラン(6.00 mL)に溶解させ、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネート(1.07 g, 3.08 mmol)、28%ナトリウムメトキシド-メタノール溶液(0.615 mL, 3.08 mmol)を加えて、室温で4時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜90/10)で精製してtert-ブチル 3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.487 g, 収率63.3%)を得た。
tert-ブチル 3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.487 g, 0.649 mmol)をジクロロメタン(3.00 mL)に溶解させ、トリフルオロ酢酸(1.00 mL, 13.0 mmol)を加えて、室温で2時間攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜25/75、クロロホルム/メタノール = 100/0〜95/5)で精製して3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.310 g, 収率73.5%)を得た。
ESI-MS m/z: 650 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.47 (s, 4H), 2.95 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.01 (q, J= 6.4 Hz, 8H), 1.63-1.56 (m, 4H), 1.37-1.29 (m, 44H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
工程3
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに、 3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用い、1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0925 g, 収率88.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 664 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.33 (m, 4H), 3.07 (s, 4H), 2.92 (s, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.36-1.29 (m, 44H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
1-[3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(化合物CL-75)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに、実施例C8の工程2で得られた3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、1-[3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(0.0815 g, 72.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 735 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.97 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.96 (s, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.63-1.55 (m, 4H), 1.36-1.29 (m, 44H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
1-メチル-3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-76)
工程1
実施例C8の工程2と同様の手法で、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに、(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルフォネートを用い、3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.338 g, 56.6%)を得た。
ESI-MS m/z: 646 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 8H), 3.47 (s, 4H), 2.95 (s, 4H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.56 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.63-1.56 (m, 4H), 1.39-1.24 (m, 32H), 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 6H).
工程2
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに、 3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用い、1-メチル-3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0680 g, 収率63.4%)を得た。
ESI-MS m/z: 660 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 8H), 3.07 (s, 4H), 2.92 (s, 4H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.54 (t, J= 7.5 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.05 (q, J= 6.9 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.39-1.25 (m, 32H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
1-[3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(化合物CL-74)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに、実施例C10の工程1で得られた3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、1-[3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(0.0692 g, 61.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 731 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 8H), 3.97 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.98 (s, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.56 (t, J= 7.5 Hz, 4H), 2.29 (s, 6H), 2.05 (q, J= 6.8 Hz, 8H), 1.63-1.55 (m, 4H), 1.39-1.24 (m, 32H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
1-メチル-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-81)
工程1
アゼチジン-3,3-ジイルジメタノール(0.315 g, 2.96 mmol)をメタノール(5.00 mL)に溶解させ、二炭酸ジ-tert-ブチル(0.936 mL, 4.03 mmol)、トリエチルアミン(0.750 mL, 5.38 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液を減圧下濃縮してtert-ブチル 3,3-ビス(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.584 g, 定量的)を得た。
tert-ブチル 3,3-ビス(ヒドロキシメチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.292 g, 1.35 mmol)をトルエン(6.00 mL)に溶解させ、水素化ナトリウム(0.0810 g, 2.02 mmol)、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネート(0.559 g, 1.61 mmol)を加えて、100℃で5時間攪拌した。反応液に蒸留水、飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜95/5)で精製してtert-ブチル (Z)-3-(ヒドロキシメチル)-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.296 g, 収率47.1%)を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.35-5.34 (m, 2H), 3.81 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.63 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.53 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 4H), 1.60-1.52 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.34-1.28 (m, 22H), 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 3H).
工程2
tert-ブチル (Z)-3-(ヒドロキシメチル)-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.296 g, 0.633 mmol)をジクロロメタン(5.00 mL)に溶解させ、メタンスルホニルクロリド(0.0640 mL, 0.823 mmol)、トリエチルアミン(0.132 mL, 0.949 mmol)を加えて、室温で2時間半攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮してtert-ブチル (Z)-3- {[(メチルスルフォニル)オキシ]メチル}-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.345 g, 定量的)を得た。
tert-ブチル (Z)-3- {[(メチルスルフォニル)オキシ]メチル}-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレートをジメチルホルムアミド(8.00 mL)に溶解させ、チオ酢酸 S-カリウム(0.130 g, 1.14 mmol)を加えて、55℃で終夜攪拌した。反応液に蒸留水、飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜80/20)で精製してtert-ブチル (Z)-3-[(アセチルチオ)メチル]-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレート(0.250 g, 収率75.0%)を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.33 (m, 2H), 3.67 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.43-3.41 (m, 4H), 3.24 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.3 Hz, 4H), 1.58-1.53 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.29-1.27 (m, 22H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
工程3
実施例C8の工程2と同様の手法で、tert-ブチル 3,3-ビス[(アセチルチオ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレートの代わりにtert-ブチル (Z)-3-[(アセチルチオ)メチル]-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレートを用いて、3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.187 g, 収率62.6%)を得た。
ESI-MS m/z: 634 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.35-5.34 (m, 4H), 3.57 (s, 2H), 3.46-3.40 (m, 6H), 2.88 (s, 2H), 2.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.59-1.56 (m, 4H), 1.34-1.27 (m, 44H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
工程4
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに、 3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用い、1-メチル-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0760 g, 収率91.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 648 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.53 (s, 2H), 3.44 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.21-3.14 (m, 4H), 2.88 (s, 2H), 2.52 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.62-1.53 (m, 4H), 1.34-1.27 (m, 44H), 0.88 (t, J= 7.0 Hz, 6H).
2-(ジメチルアミノ)-1-(3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル)エタン-1-オン(化合物CL-80)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに、実施例C12の工程3で得られた3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、2-(ジメチルアミノ)-1-(3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル)エタン-1-オン(0.0360 g, 34.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 719 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.36-5.33 (m, 4H), 3.98 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.82 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.74 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.51 (s, 2H), 3.44 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.95 (s, 2H), 2.84 (s, 2H), 2.53 (t, J= 7.5 Hz, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.01 (q, J= 6.3 Hz, 8H), 1.59-1.54 (m, 4H), 1.31-1.28 (m, 44H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
1-メチル-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-79)
工程1
実施例C12の工程1と同様の手法で、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルフォネートを用い、tert-ブチル 3-(ヒドロキシメチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.166 g, 収率26.6%)を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.29 (m, 4H), 3.81 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.72 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.66 (s, 2H), 3.63 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.53 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 1.57-1.43 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.39-1.25 (m, 16H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
工程2
実施例C12の工程2と同様の手法で、tert-ブチル (Z)-3-(ヒドロキシメチル)-3-[(オクタデック-9-エン-1-イルオキシ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレートの代わりにtert-ブチル 3-(ヒドロキシメチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレートを用いて、tert-ブチル 3-[(アセチルチオ)メチル]-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレート(0.0560 g, 29.9%)を得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.30 (m, 4H), 3.67 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 3.60 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.43-3.41 (m, 4H), 3.24 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 4H), 1.56-1.52 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.33-1.29 (m, 16H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H).
工程3
実施例C8の工程2と同様の手法で、tert-ブチル 3,3-ビス[(アセチルチオ)メチル]アゼチジン-1-カルボキシレートの代わりにtert-ブチル 3-[(アセチルチオ)メチル]-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)アゼチジン-1-カルボキシレートを用いて、3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0335 g, 収率68.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 630 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.30 (m, 8H), 3.77 (d, J= 9.9 Hz, 2H), 3.72 (d, J = 9.9 Hz, 2H), 3.54 (s, 2H), 3.48 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.77 (d, J= 6.6 Hz, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.62-1.54 (m, 4H), 1.39-1.24 (m, 32H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
工程4
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに、3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用い、1-メチル-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0125 g, 収率76.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 644 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.30 (m, 8H), 3.52 (s, 2H), 3.44 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.23 (s, 4H), 2.88 (s, 2H), 2.77 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.53 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.59-1.57 (m, 4H), 1.39-1.25 (m, 32H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H).
2-(ジメチルアミノ)-1-[3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]エタン-1-オン(化合物CL-78)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに、実施例C14の工程3で得られた3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、2-(ジメチルアミノ)-1-[3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]エタン-1-オン(0.00830 g, 43.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 715 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.30 (m, 8H), 3.98 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.92 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.82 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.74 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.51 (s, 2H), 3.44 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.96 (s, 2H), 2.84 (s, 2H), 2.77 (t, J= 6.7 Hz, 4H), 2.53 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.28 (s, 6H), 2.05 (q, J= 6.8 Hz, 8H), 1.60-1.58 (m, 4H), 1.39-1.26 (m, 32H), 0.89 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
3-[(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アミノ]プロパン-1-オール(化合物CL-82)
工程1
(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.150 g, 0.260 mmol)をジメチルホルムアミド(1.00 mL)に溶解させ、炭酸セシウム(0.255 g, 0.781 mmol)、(3-ブロモプロポキシ)(tert-ブチル)ジメチルシラン(0.121 mL, 0.521 mmol)を加えて、マイクロウェーブ照射下で80℃で3時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、ヘキサンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 80/20)で精製して(9Z,12Z)-N-{3-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]プロピル}-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.114 g, 収率58.5%)を得た。
(9Z,12Z)-N-{3-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]プロピル}-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.114g, 0.152 mmol)をテトラヒドロフラン(1.00 mL)に溶解させ、テトラブチルアンモニウムフルオリド(0.228 mL, 0.228 mmol)を加えて、室温で2時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜80/20)、(クロロホルム/メタノール = 100/0〜80/20)で精製して3-[(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アミノ]プロパン-1-オール(0.0640 g, 収率66.3%)を得た。
ESI-MS m/z: 635 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 3.79 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 2.78 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.68-2.60 (m, 6H), 2.52 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.44 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.08-1.96 (m, 8H), 1.71-1.66 (m, 2H), 1.62-1.54 (m, 2H), 1.50-1.46 (m, 2H), 1.39-1.27 (m, 38H), 0.90-0.88 (m, 6H).
3-(ジメチルアミノ)プロピル(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(化合物CL-83)
工程1
4-ニトロフェニルカルボノクロリデート(5.16 g, 25.1 mmol)をジエチルエーテル(150 mL)に溶解させ、3-(ジメチルアミノ)プロパン-1-オール(3.00 mL, 25.1 mmol)を加えて、室温で2時間撹拌した。反応液にエタノールを加え、ろ過することで3-(ジメチルアミノ)プロピル(4-ニトロフェニル)カーボネートハイドロクロリド(5.49 g, 71.8%)を得た。
実施例C1工程3で得られた(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミン(0.104 g, 0.181 mmol)をクロロホルム(2.00 mL)に溶解させ、トリエチルアミン(0.101 mL, 0.722 mmol)、3-(ジメチルアミノ)プロピル(4-ニトロフェニル)カーボネートハイドロクロリド(0.110 g, 0.361 mmol)を加えて、110℃で2時間撹拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜80/20)、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜80/20)で精製して3-(ジメチルアミノ)プロピル(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバメート(0.0510 g, 収率40.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 706 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 6H), 4.12 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.22 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.54 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.23 (s, 6H), 2.06-2.00 (m, 8H), 1.84-1.77 (m, 2H), 1.60-1.51 (m, 4H), 1.36-1.30 (m, 38H), 0.91-0.86 (m, 6H).
2-(ジエチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アセトアミド(化合物CL-84)
工程1
実施例C3工程1と同様の手法で、ジメチルグリシンの代わりに、N,N-ジエチルグリシンを用い、2-(ジエチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]アセトアミド(0.108 g, 収率86.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 690 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 3.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 3.48-3.47 (m, 2H), 3.28 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 3.25 (d, J = 15.5 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.72-2.64 (m, 2H), 2.61-2.51 (m, 6H), 2.09-1.93 (m, 8H), 1.63-1.48 (m, 4H), 1.42-1.20 (m, 38H), 1.03 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.92-0.84 (m, 6H).
3-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパンアミド (化合物CL-85)
工程1
実施例C3工程1と同様の手法で、ジメチルグリシンの代わりに、3-(ジメチルアミノ)プロパノイックアシッドを用い、3-(ジメチルアミノ)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)-N-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]プロパンアミド(0.0537 g, 収率83.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 676 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.30 (m, 6H), 3.50-3.41 (m, 2H), 3.34-3.23 (m, 2H), 2.77 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.70-2.62 (m, 4H), 2.59-2.46 (m, 4H), 2.27 (s, 6H), 2.11-1.93 (m, 8H), 1.67-1.46 (m, 4H), 1.41-1.22 (m, 38H), 0.91-0.86 (m, 6H).
S-[2-(ジメチルアミノ)エチル] (2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバモチオエート(化合物CL-86)
工程1
実施例C7の工程1と同様の手法で、2-ジメチルアミノエタノールの代わりに、2-(ジメチルアミノ)エタン-1-チオールを用い、S-[2-(ジメチルアミノ)エチル] (2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]カルバモチオエート(0.143 g, 収率94.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 708 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.43-5.29 (m, 6H), 3.54-3.43 (m, 2H), 3.41-3.26 (m, 2H), 3.03 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.73-2.64 (m, 2H), 2.59-2.50 (m, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.09-1.93 (m, 8H), 1.65-1.49 (m, 4H), 1.41-1.21 (m, 38H), 0.92-0.85 (m, 6H).
N-メチル-2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)エタン-1-アミン(化合物CL-87)
工程1
ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミン(0.0300 g, 0.0470 mmol)を1,2-ジクロロエタン(1.00 mL)とメタノール(1.00 mL)の混合溶媒に溶解させ、37%ホルムアルデヒド溶液(0.0170 mL, 0.235 mmol)、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム(0.0250 g, 0.118 mmol)を加えて、室温で3時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜90/10)で精製してN-メチル-2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)エタン-1-アミン(0.0146 g, 収率47.6%)を得た。
ESI-MS m/z: 652 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 2.62 (s, 8H), 2.52 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.29 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.62-1.54 (m, 4H), 1.36-1.29 (m, 44H), 0.89 (t, J= 6.8 Hz, 6H).
ビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)アミン(化合物CL-88)
工程1
(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル メタンスルフォネイト(1.02 g, 2.96 mmol)をジメチルホルムアミド(20.0 mL)に溶解させ、チオ酢酸 S-カリウム(0.440 g, 3.85 mmol)を加えて、室温で4時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮してS-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル] エタンチオエイト(0.0146 g, 収率47.6%)を得た。
工程2
tert-ブチル ビス(2-ヒドロキシエチル)カルバメート(0.300 g, 1.46 mmol)をジクロロメタン(5.00 mL)に溶解させ、メタンスルホニルクロリド(0.419 mL, 3.65 mmol)、トリエチルアミン(0.611 mL, 4.38 mmol)を0℃で加えて、室温で1時間攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮して[(tert-ブトキシカルボニル)アザンジイル]ビス(エタン-2,1-ジイル) ジメタンスルフォネイト(0.560 g, 定量的)を得た。
工程3
S-[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル] エタンチオエイト(0.269 g, 0.830 mmol)をメタノール(2.00 mL)とテトラヒドロフラン(0.500 mL)の混合溶媒に溶解させ、28%ナトリウムメトキシド-メタノール溶液(0.133 mL, 0.664 mmol)、[(tert-ブトキシカルボニル)アザンジイル]ビス(エタン-2,1-ジイル) ジメタンスルフォネイト(0.100 g, 0.277 mmol)を0℃で加えて、50℃で終夜攪拌した。反応液に蒸留水、飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘプタン/酢酸エチル = 100/0〜85/15)で精製してtert-ブチル ビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)カルバメート(0.0654 g, 収率32.2%)を得た。
tert-ブチル ビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)カルバメート(0.0654 g, 0.0890 mmol)をジクロロメタン(1.00 mL)に溶解させ、トリフルオロ酢酸(0.137 mL, 1.78 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和重曹水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜95/5)で精製してビス(2-{[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}エチル)アミン(0.0493 g, 収率87.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 634 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.42-5.29 (m, 8H), 2.82 (t, J = 6.6 Hz, 4H), 2.77 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.68 (t, J = 6.5 Hz, 4H), 2.51 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.05 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.61-1.57 (m, 4H), 1.39-1.24 (m, 32H), 0.89 (t, J= 7.0 Hz, 6H).
3,3-ビス({[(9Z,12Z)-オクタデカ-9,12-ジエン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン (化合物CL-89)
実施例C10の工程1と同様の手法で合成した。
3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-90)
実施例C8の工程2と同様の手法で合成した。
1-エチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-91)
工程1
実施例C8の工程2で得られる3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0450 g, 0.0690 mmol)を1,2-ジクロロエタン(0.500 mL)、メタノール(0.500 mL)の混合溶媒に溶解させ、アセトアルデヒド(0.0200 mL, 0.346 mmol)、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム(0.0730 g, 0.346 mmol)を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に飽和食塩水を加えて、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、ろ過し、減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール = 100/0〜90/10)で精製して1-エチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0375 g, 収率80.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 678 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.07 (s, 4H), 2.93 (s, 4H), 2.55 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.50-2.49 (m, 2H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.67-1.55 (m, 4H), 1.37-1.29 (m, 44H), 0.95 (t, J = 7.2 Hz, 3H) , 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)-1-プロピルアゼチジン(化合物CL-92)
工程1
参考例25の工程1と同様の手法で、アセトアルデヒドの代わりにプロピオンアルデヒドを用いて、3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)-1-プロピルアゼチジン(0.0374 g, 収率58.5%)を得た。
ESI-MS m/z: 692 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.04 (s, 4H), 2.93 (s, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.39 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.60-1.57 (m, 4H), 1.39-1.30 (m, 46H), 0.89-0.87 (m, 9H).
3,3-ビス(({(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-93)
工程1
実施例C8の工程2と同様の手法で、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートを用いて、3,3-ビス(({(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.208 g, 収率62.3%)を得た。
ESI-MS m/z: 595 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.44 (s, 4H), 2.95 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.01 (q, J= 6.4 Hz, 8H), 1.64-1.56 (m, 4H), 1.38-1.32 (m, 36H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
3,3-ビス({[(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)-1-メチルアゼチジン(化合物CL-94)
工程1
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに3,3-ビス(({(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、3,3-ビス({[(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)-1-メチルアゼチジン(0.0910 g, 収率89.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 609 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.34 (m, 4H), 3.07 (s, 4H), 2.92 (s, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.39-1.32 (m, 36H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
1-[3,3-ビス({[(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(化合物CL-95)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに3,3-ビス(({(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、1-[3,3-ビス({[(Z)-ヘキサデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(0.0660 g, 収率64.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 679 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.34 (m, 4H), 3.97 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.98 (s, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.01 (q, J = 6.5 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.42-1.29 (m, 36H), 0.88 (t, J= 6.8 Hz, 6H).
3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-96)
工程1
実施例C8の工程2と同様の手法で、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル メタンスルフォネートを用いて、3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.365 g, 収率85.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 651 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.34 (m, 4H), 3.44 (s, 4H), 2.95 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.01 (q, J= 6.4 Hz, 8H), 1.62-1.57 (m, 4H), 1.42-1.27 (m, 44H), 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-97)
工程1
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0780 g, 収率77.0%)を得た。
ESI-MS m/z: 665 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.07 (s, 4H), 2.92 (s, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.01 (q, J = 6.4 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.42-1.27 (m, 44H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
1-[3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(化合物CL-98)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて1-[3,3-ビス({[(Z)-オクタデック-11-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(0.0440 g, 収率67.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 735 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.36-5.33 (m, 4H), 3.96 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.96 (s, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 2.27 (s, 6H), 2.01 (q, J = 6.8 Hz, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.34-1.28 (m, 44H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-99)
工程1
実施例C8の工程2と同様の手法で、(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートの代わりに(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル メタンスルフォネートを用いて、3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.137 g, 収率73.5%)を得た。
ESI-MS m/z: 539 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.47 (s, 4H), 2.95 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.01-2.00 (m, 8H), 1.63-1.56 (m, 4H), 1.36-1.31 (m, 28H), 0.90 (t, J = 7.1 Hz, 6H).
1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-100)
工程1
参考例B31と同様の手法で、ビス(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)アミンの代わりに3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて、1-メチル-3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(0.0684 g, 収率71.7%)を得た。
ESI-MS m/z: 553 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.39-5.31 (m, 4H), 3.07 (s, 4H), 2.92 (s, 4H), 2.54 (t, J = 7.5 Hz, 4H), 2.33 (s, 3H), 2.03-2.01 (m, 8H), 1.62-1.55 (m, 4H), 1.35-1.32 (m, 28H), 0.90 (t, J= 7.1 Hz, 6H).
1-[3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(化合物CL-101)
工程1
実施例C3の工程1と同様の手法で、(9Z,12Z)-N-(2-{[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}エチル)オクタデカ-9,12-ジエン-1-アミンの代わりに3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジンを用いて1-[3,3-ビス({[(Z)-テトラデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン-1-イル]-2-(ジメチルアミノ)エタン-1-オン(0.0145 g, 収率50.1%)を得た。
ESI-MS m/z: 623 (M + H)+;1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 5.37-5.33 (m, 4H), 3.97 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 2.96 (s, 2H), 2.89 (s, 4H), 2.56 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 2.28 (s, 6H), 2.02-2.00 (m, 8H), 1.63-1.55 (m, 4H), 1.39-1.29 (m, 28H), 0.90 (t, J = 7.1 Hz, 6H).
3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]オキシ}メチル)-3-({[(Z)-オクタデック-9-エン-1-イル]チオ}メチル)アゼチジン(化合物CL-102)
実施例C12の工程3と同様の手法で合成した。
2-(ジメチルアミノ)-N,N-ビス(2-(((Z)-オクタデカ-9-エン-1-イル)オキシ)エチル)アセトアミド (化合物CL-103)
化合物CL-103は国際公開第2011/136368号に記載の方法で合成した。
(S)-3-(ベンジルオキシ)プロパン-1,2-ジオール(2.36 g, 13.0 mmol)のクロロホルム(14 mL)溶液に、ピリジン(2.09 mL, 25.9 mmol)とステアロイルクロリド (7.85 g, 25.9 mmol)のクロロホルム (4 mL)溶液を加えて、55℃で7時間攪拌した。反応液にヘキサンを加えて有機層を0.5 mol/L塩酸で2回洗浄し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をエタノールより結晶化させ、濾取することで(R)-3-(ベンジルオキシ)プロパン-1,2-ジイル ステアラートの粗生成物を得た。
得られた粗生成物のヘキサン(86 mL)溶液にパラジウム/炭素(パラジウム10%, 50%水湿潤品, 0.546 g, 0.257 nmol)を加えて、水素下40度で6時間攪拌した。反応液を室温まで空冷後、不溶物をセライト濾過にて除去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた残渣をヘキサンより結晶化させ、濾取することで(R)-3-ヒドロキシプロパン-1,2-ジイル ジステアラート(5.13 g, 8.21 mmol, 63%)を得た。
ESI-MS m/z: 642 (M + NH4)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.21-1.36 (m, 56H), 1.57-1.67 (m, 4H), 2.01 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 2.30-2.37 (m, 4H), 3.71-3.75 (m, 2H), 4.24 (dd, J = 11.9, 5.6 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 11.9, 4.6 Hz, 1H), 5.05-5.11 (m, 1H).
[工程2]
オキシ塩化りん(V)(0.767 g, 5.00 mmol)とトリエチルアミン(3.48 mL, 25.0 mmol) のクロロホルム(15 mL)溶液に、氷冷下、[工程1]で得られた(R)-3-ヒドロキシプロパン-1,2-ジイル ジステアラート(0.313 g, 0.500 mmol)のクロロホルム(4 mL)溶液を加えて、室温で1時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮した。得られた残渣にエチルエーテルを加えて、不溶物を濾過にて除去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた残渣にクロロホルム(5 mL)に溶解し、氷冷下、コリンp-トルエンスルホン酸塩(0.200 g, 0.725 mmol)のピリジン(7 mL)溶液を加えて、室温で終夜攪拌した。反応液に10%炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて、室温で20分攪拌した。反応液にエタノールを加えて、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣にクロロホルムを加えて、不溶物を濾過にて除去し、ろ液を減圧下濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホルム/メタノール/水 = 60/30/1〜0/100/0)で精製し、クロロホルム/アセトン = 1/1 より結晶化させ、濾取することでD-DSPC(0.0718 g, 0.0909 mmol, 18%) を得た。
ESI-MS m/z: 791 (M + H)+; 1H-NMR (CDCl3) δ: 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 6H), 1.17-1.36 (m, 56H), 1.52-1.63 (m, 4H), 2.24-2.32 (m, 4H), 3.36 (s, 9H), 3.76-3.83 (m, 2H), 3.87-4.00 (m, 2H), 4.12 (dd, J= 12.0, 7.5 Hz, 1H), 4.28-4.35 (m, 2H), 4.39 (dd, J = 11.9, 2.8 Hz, 1H), 5.16-5.24 (m, 1H).
参考例A10で得られたII-3、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジパルミトイル(D-DPPC)、およびコレステロール(Chol)を用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤1を製造した。
用いた核酸はセンス鎖(5’―CCGUCGUAUUCGUGAGCAAGA―3’)と、アンチセンス鎖(5’―UUGCUCACGAAUACGACGGUG―3’)の塩基配列からなる、ルシフェラーゼ(以下、「Luc」と表す)遺伝子の発現を抑制するsiRNAであり、ジーンデザイン社(GeneDesign社)から入手した(以下、「Luc siRNA」と表す)。PEG-DSPEおよびコレステロールは日油から入手した。D-DPPCは、シグマアルドリッチから入手した。
II-3は、10 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。CL-10、PEG-DSPE、D-DPPC、コレステロールは、各々20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。各脂質ストック溶液は、-20℃で保管し、製剤調製の直前に60℃に加温して脂質を溶解してから室温に戻して用いた。
Luc siRNAは、1 mg/mLとなるように注射用水に溶解し、Luc siRNA溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486μmol/1.01μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は、アミコンウルトラ(Millipore社製)を用いて濃縮し、さらに溶媒を生理食塩水に置換し、0.2 μmのフィルター(東洋濾紙社製)を用いてクリーンベンチ内でろ過した。さらに得られた製剤のsiRNA濃度を測定し、siRNA濃度で0.1 mg/mLとなるように生理食塩水を用いて希釈することで、製剤1を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤2を製造した。
L-α-ホスファチジルコリン, ジパルミトイル(L-DPPC)は日油から入手した。
L-DPPCは20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.364 μmol/0.121 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤2を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤3を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤3を得た。
参考例A19で得られたII-12、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジパルミトイル(D-DPPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤4を製造した。
II-12は、20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記記載のLuc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液であるCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤4を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤5を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.364 μmol/0.121 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤5を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤6を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤6を得た。
参考例A11で得られたII-4、参考例B2で得られたCL-2および1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジパルミトイル(D-DPPC)、コレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤7を製造した。
II-4は、5 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。CL-2は、20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液であるCL-2/PEG-DSPE/D-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.536 μmol/1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤7を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤8を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.402 μmol/0.134 μmol /1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤8を得た。
以下のようにD-DPPCの含有量が異なる製剤9を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/D-DPPC/L-DPPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.268 μmol/0.268 μmol /1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤9を得た。
製剤1のD-DPPCをL-DPPCにした以外、実施例1と同様にして製剤10を得た。
製剤4のD-DPPCをL-DPPCにした以外、実施例4と同様にして製剤11を得た。
製剤7のD-DPPCをL-DPPCにした以外、実施例7と同様にして製剤12を得た。
核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径測定
粒子径測定装置(Zetasizer Nano ZS, マルバーン(Malvern)社製)で製剤中の核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径を測定した(表32)。なお表中のPDIは多分散指数(Polydispersity Index)を表す。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例1〜9に記載する製剤1〜9および比較例1〜3に記載する製剤10〜12を、それぞれ以下の方法により、ヒト膵臓癌由来細胞株Mia PaCa-2/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、GIBCO社)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたMia PaCa-2/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をMia PaCa-2/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表33から明らかなように、D-DPPCを含有する製剤1〜9をヒト膵臓がん由来細胞株MIA PaCa-2/Luc細胞内に導入後のLucの発現率は、D-DPPCの代わりにL-DPPCを含有する製剤10〜12と比較して抑制率が高い結果であった。また、製剤1〜3を比較するとD-DPPCの含有量が高くなるとより抑制率が高い結果であった。製剤4〜6、7〜9も同様の結果であった。
よって、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
参考例A10で得られたII-3、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、DL-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(DL-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤13を製造した。
DL-DSPCは、シグマアルドリッチから入手した。
DL-DSPCは、20mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。各脂質ストック溶液は、-20℃で保管し、製剤調製の直前に60℃に加温して脂質を溶解してから室温に戻して用いた。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/DL-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤13を得た。
以下のようにDL-DSPCの含有量が異なる製剤14を製造した。
L-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(L-DSPC)は日油から入手した。
L-DSPCは、20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/DL-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤14を得た。
参考例A10で得られたII-3、参考例B8で得られたCL-8、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE)、DL-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(DL-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤15を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-8/PEG-DSPE/DL-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤15を得た。
以下のようにDL-DSPCの含有量が異なる製剤16を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-8/PEG-DSPE/DL-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤16を得た。
参考例A19で得られたII-12、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE) 、DL-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(DL-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤17を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/DL-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤17を得た。
以下のようにDL-DSPCの含有量が異なる製剤18を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/DL-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤18を得た。
参考例A11で得られたII-4、参考例B2で得られたCL-2、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE) 、DL-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(DL-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤19を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/DL-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.536 μmol/1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤19を得た。
以下のようにDL-DSPCの含有量が異なる製剤20を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/DL-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.268 μmol/0.268 μmol /1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし、製剤20を得た。
製剤13のDL-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例10と同様にして製剤21を得た。
製剤15のDL-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例12と同様にして製剤22を得た。
製剤17のDL-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例14と同様にして製剤23を得た。
製剤19のDL-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例16と同様にして製剤24を得た。
核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径測定
粒子径測定装置(Zetasizer Nano ZS, マルバーン(Malvern)社製)で製剤中の核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径を測定した(表34)。なお表中のPDIは多分散指数(Polydispersity Index)を表す。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例10〜17に記載する製剤13〜20および比較例4〜7に記載する製剤21〜24を、それぞれ以下の方法により、ヒト膵臓癌由来細胞株Mia PaCa-2/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、GIBCO社)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたMia PaCa-2/Luc細胞を、細胞数7500/80μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をMia PaCa-2/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表35から明らかなように、DL-DSPCを含有する製剤13〜20をヒト膵臓がん由来細胞株MIA PaCa-2/Luc細胞内に導入後のLucの発現率は、DL-DSPCの代わりにL-DSPCを含有する製剤21〜24と比較して抑制率が高い結果であった。
よって、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A10で得られたII-3、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、およびコレステロール(Chol)を用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤25を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤25を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A10で得られたII-3、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、L-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(L-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤26を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤26を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A34で得られたII-25、参考例B2で得られたCL-2、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤27を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-25を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/D-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.384 μmol/0.797 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤27を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A34で得られたII-25、参考例B2で得られたCL-2、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000] (PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、L-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(L-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤28を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-25を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/D-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.192 μmol/0.192 μmol/0.797 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤28を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A19で得られたII-12、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤29を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤29を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A19で得られたII-12、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、L-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(L-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤30を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤30を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
参考例A25で得られたII-18、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤31を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-18を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤31を得た。
以下のようにD-DSPCの含有量が異なる製剤を調製した。
実施例A25で得られたII-18、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、D-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(D-DSPC)、L-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(L-DSPC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤32を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-18を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/D-DSPC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤32を得た。
製剤25のD-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例18と同様にして製剤33を得た。
製剤27のD-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例20と同様にして製剤34を得た。
製剤29のD-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例22と同様にして製剤35を得た。
製剤31のD-DSPCをL-DSPCにした以外、実施例24と同様にして製剤36を得た。
核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径測定
粒子径測定装置(Zetasizer Nano ZS, マルバーン(Malvern)社製)で製剤中の核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径を測定した(表36)。なお表中のPDIは多分散指数(Polydispersity Index)を表す。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例18〜25に記載する製剤25〜32および比較例8〜11に記載する製剤33〜36を、それぞれ以下の方法により、ヒト膵臓癌由来細胞株Mia PaCa-2/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、GIBCO社)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたMia PaCa-2/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をMia PaCa-2/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表37から明らかなように、D-DSPCを含有する製剤25〜32をヒト膵臓がん由来細胞株MIA PaCa-2/Luc細胞内に導入後のLucの発現率は、D-DSPCの代わりにL-DSPCを含有する製剤33〜36と比較して抑制率が高い結果であった。
よって、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
参考例A10で得られたII-3、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、1,2-ジオクタデシル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(Diether-PC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤37を製造した。
Diether-PCはアバンチポーラ−リピッズ社(Avanti Polar Lipids)から入手した。
Diether-PCは20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。各脂質ストック溶液は、-20℃で保管し、製剤調製の直前に60℃に加温して脂質を溶解してから室温に戻して用いた。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/Diether-PC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤37を得た。
以下のようにDiether-PCの含有量が異なる製剤38を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/Diether-PC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤38を得た。
参考例A10で得られたII-3、参考例B8で得られたCL-8、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、1,2-ジオクタデシル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(Diether-PC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤39を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-8/PEG-DSPE/Diether-PC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤39を得た。
以下のようにDiether-PCの含有量が異なる製剤40を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-3を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-8/PEG-DSPE/Diether-PC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤40を得た。
参考例A19で得られたII-12、参考例B10で得られたCL-10、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、1,2-ジオクタデシル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(Diether-PC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤41を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/Diether-PC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486 μmol/1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤41を得た。
以下のようにDiether-PCの含有量が異なる製剤42を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-12を0.626 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-10/PEG-DSPE/Diether-PC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.243 μmol/0.243 μmol /1.01 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤42を得た。
参考例A11で得られたII-4、参考例B2で得られたCL-2、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、1,2-ジオクタデシル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(Diether-PC)、およびコレステロールを用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤43を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/Diether-PC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.536 μmol/1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤43を得た。
以下のようにDiether-PCの含有量が異なる製剤44を製造した。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液であるII-4を0.156 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-2/PEG-DSPE/Diether-PC/L-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.268 μmol/0.268 μmol /1.11 μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は実施例1と同様にし製剤44を得た。
核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径測定
粒子径測定装置(Zetasizer Nano ZS, マルバーン(Malvern)社製)で製剤中の核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径を測定した(表38)。なお表中のPDIは多分散指数(Polydispersity Index)を表す。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例26〜33に記載する製剤37〜44および比較例4〜7に記載する製剤21〜24を、それぞれ以下の方法により、ヒト膵臓癌由来細胞株Mia PaCa-2/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、GIBCO社)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたMia PaCa-2/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をMia PaCa-2/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表39から明らかなように、Diether-PCを含有する製剤37〜44をヒト膵臓がん由来細胞株MIA PaCa-2/Luc細胞内に導入後のLucの発現率は、Diether-PCの代わりにL-DSPCを含有する製剤21〜24と比較して抑制率が高い結果であった。
よって、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
PLA2処理した核酸含有脂質ナノ粒子の中性脂質およびリパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体の定量
LC/MS/MS装置(ACQUITY UPLC SYSTEM(Waters)、API4000 Q TRAP (AB Sciex))で試験例2にて使用した核酸含有脂質ナノ粒子のL-DPPCとD-DPPCの総量を定量した。定量の結果を図1に示した。なお、LC/MS/MS分析においては、10 mM酢酸アンモニウム/イソプロパノール/アセトニトリル(80:10:10)およびイソプロパノール/アセトニトリル(50:50)を移動相として用い、ACQUITY UPLC BEH C8(1.7 μm, 2.1 mmI.D.× 50 mm, Waters)をカラムとして用いた。
各製剤の脂質残存量は、PLA2未処理群の残存脂質量を1としたときの相対的な割合として算出した。
PLA2処理した核酸含有脂質ナノ粒子の中性脂質およびリパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体の定量
LC/MS/MS装置(ACQUITY UPLC SYSTEM(Waters)、API4000 (AB Sciex))で試験例4にて使用した核酸含有脂質ナノ粒子のDL-DSPCとL-DSPCの総量を定量した。定量の結果を図2に示した。なお、LC/MS/MS分析においては、10 mM酢酸アンモニウム/イソプロパノール/アセトニトリル(80:10:10)およびイソプロパノール/アセトニトリル(50:50)を移動相として用い、ACQUITY UPLC BEH C8(1.7 μm, 2.1 mmI.D.× 50 mm, Waters)をカラムとして用いた。
各製剤の脂質残存量は、PLA2未処理群の残存脂質量を1としたときの相対的な割合として算出した。
PLA2処理した核酸含有脂質ナノ粒子の中性脂質およびリパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体の定量
LC/MS/MS装置(ACQUITY UPLC SYSTEM(Waters)、API4000 (AB Sciex))で試験例8にて使用した核酸含有脂質ナノ粒子のEther-PCとL-DSPCの総量を定量した。定量の結果を図3に示した。なお、LC/MS/MS分析においては、10 mM酢酸アンモニウム/イソプロパノール/アセトニトリル(80:10:10)およびイソプロパノール/アセトニトリル(50:50)を移動相として用い、ACQUITY UPLC BEH C8(1.7 μm, 2.1 mmI.D.× 50 mm, Waters)をカラムとして用いた。
各製剤の脂質残存量は、PLA2未処理群の残存脂質量を1としたときの相対的な割合として算出した。
参考例A34で得られたII-25、実施例C1で得られたCL-67、1,2-ジステアロイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-[メトキシ(ポリエチレングリコール)-2000](PEG-DSPE)、DL-α-ホスファチジルコリン, ジステアロイル(DL-DSPC)およびコレステロール(Chol)を用いて、以下のように核酸含有脂質ナノ粒子を含有する製剤45を製造した。
用いた核酸はセンス鎖(5’―CCGUCGUAUUCGUGAGCAAGA―3’)と、アンチセンス鎖(5’―UUGCUCACGAAUACGACGGUG―3’)の塩基配列からなる、ルシフェラーゼ(以下、「Luc」と表す)遺伝子の発現を抑制するsiRNAであり、ジーンデザイン社(GeneDesign社)から入手した(以下、「Luc siRNA」と表す)。PEG-DSPEおよびコレステロールは日油から入手した。DL-DSPCは、シグマアルドリッチから入手した。
II-25は、5 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。CL-67、PEG-DSPE、DL-DSPC、コレステロールは、各々20 mg/mLとなるように100%エタノールに溶解し、脂質ストック溶液とした。各脂質ストック溶液は、-20℃で保管し、製剤調製の直前に60℃に加温して脂質を溶解してから室温に戻して用いた。
Luc siRNAは、1 mg/mLとなるように注射用水に溶解し、Luc siRNA溶液とした。
80%エタノール、0.1%HCl水溶液に前記脂質ストック溶液としたII-25を0.313 μmolとなるように添加した。続いて、前記Luc siRNA溶液を200 μL添加し、1分間攪拌後、本溶液に前記脂質ストック溶液としたCL-67/PEG-DSPE/DL-DSPC/Cholを1.88 μmol/0.235 μmol/0.486μmol/1.01μmolとなるように添加した。その後、20%以下エタノール水溶液となるよう注射用水を62 mL/秒以上の流速で添加し粗製剤を形成した。得られた粗製剤は、アミコンウルトラ(Millipore社製)を用いて濃縮し、さらに溶媒を生理食塩水に置換し、0.2 μmのフィルター(東洋濾紙社製)を用いてクリーンベンチ内でろ過した。さらに得られた製剤のsiRNA濃度を測定し、siRNA濃度で0.1 mg/mLとなるように生理食塩水を用いて希釈することで、製剤45を得た。
製剤45のCL-67を実施例C3で得られたCL-69にした以外、実施例34と同様にして製剤46を得た。
製剤45のCL-67を実施例C6で得られたCL-72にした以外、実施例34と同様にして製剤47を得た。
製剤45のCL-67を実施例C7で得られたCL-73にした以外、実施例34と同様にして製剤48を得た。
製剤45のCL-67を実施例C20で得られたCL-86にした以外、実施例34と同様にして製剤49を得た。
製剤45のCL-67を実施例C4で得られたCL-70にした以外、実施例34と同様にして製剤50を得た。
製剤45のCL-67を実施例C5で得られたCL-71にした以外、実施例34と同様にして製剤51を得た。
製剤45のCL-67を実施例C11で得られたCL-74にした以外、実施例34と同様にして製剤52を得た。
製剤45のCL-67を実施例C10で得られたCL-76にした以外、実施例34と同様にして製剤53を得た。
製剤45のCL-67を実施例C8で得られたCL-77にした以外、実施例34と同様にして製剤54を得た。
製剤45のCL-67を実施例C13で得られたCL-80にした以外、実施例34と同様にして製剤55を得た。
製剤45のCL-67を実施例C12で得られたCL-81にした以外、実施例34と同様にして製剤56を得た。
製剤45のCL-67を参考例B7で得られたCL-7にした以外、実施例34と同様にして製剤57を得た。
製剤45のCL-67を参考例B47で得られたCL-47にした以外、実施例34と同様にして製剤58を得た。
製剤45のCL-67を参考例C37で得られたCL-103にした以外、実施例34と同様にして製剤59を得た。
製剤45のCL-67を参考例B55で得られたCL-55にした以外、実施例34と同様にして製剤60を得た。
核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径測定
粒子径測定装置(Zetasizer Nano ZS, マルバーン(Malvern)社製)で製剤中の核酸含有脂質ナノ粒子の平均粒子径を測定した(表40)。なお表中のPDIは多分散指数(Polydispersity Index)を表す。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例34〜38、40〜49に記載する製剤45〜49、51〜60を、それぞれ以下の方法により、ルシフェラーゼを強制発現させたヒト膵臓癌由来細胞株Mia PaCa-2/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、Access Biologicals LLC)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたMia PaCa-2/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をMia PaCa-2/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表41から明らかなように、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例34〜49に記載する製剤45〜60を、それぞれ以下の方法により、ルシフェラーゼを強制発現させたヒト子宮頸癌由来細胞株HeLa細胞(以降、Luc2CP-HeLaと記載する)に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、Access Biologicals LLC)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(DMEM)に懸濁させたLuc2CP-HeLa/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をLuc2CP-HeLa/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表42から明らかなように、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
核酸含有脂質ナノ粒子のインビトロ活性評価試験
実施例34〜49に記載する製剤45〜60を、それぞれ以下の方法により、ルシフェラーゼを強制発現させたヒト肺癌由来細胞株NCI-H358/Luc細胞に導入した。
[非特許文献3]に記載された方法に準じて、製剤をPLA2で処理し遺伝子抑制率を評価した。96ウェルの培養プレートに10%ウシ胎仔血清(FBS、Access Biologicals LLC)を含むダルベッコ改変イーグル最小必須培地(RPMI1640)に懸濁させたNCI-H358/Luc細胞を、細胞数7500/80 μL/ウェルとなるように播種し、37℃、5%CO2条件下で24時間培養した。核酸の最終濃度が3〜100 nMとなるように、オプティメム(Opti-MEM、Gibco社)で希釈した各製剤を、96ウェルの培養プレートに、20 μLずつ分注し、37℃、5%CO2条件下で培養することで、各製剤をNCI-H358/Luc細胞内に導入した。また陰性対照の群として何も処理しない細胞を播種した。
各製剤を導入した細胞を37℃の5%CO2インキュベーター内で24時間培養し、ルシフェラーゼ定量システム(Steady-Glo Luciferase Assay System 、プロメガ社、E2520)を用いて、製品に添付された説明書に記載された方法に従い処理、発光強度をプレートリーダーで測定した。各製剤処理群の発光量は、陰性対照群の補正後発光量を1としたときの相対的な割合として算出し、IC50値を得た。
表43から明らかなように、、本発明の、リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を含有する脂質ナノ粒子はPLA2存在下でも核酸を細胞内等に導入することができることが明らかとなった。
配列番号2は、Luc siRNA アンチセンス鎖の塩基配列を示す。
Claims (27)
- リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体、および核酸を含む、核酸含有脂質ナノ粒子。
- 前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体が、グリセロリン脂質類縁体である、請求項1に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- リパーゼが、ホスホリパーゼA2である請求項1または2に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体が、以下の式(1)もしくは式(2)で表される脂質である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
Rx3は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
Rx41は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC7-C23アルキル、C7-C23アルケニルもしくはC7-C23アルキニルであり、
Rx5は、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
Rx6は、陰電荷、水素原子、または以下の基;
- 前記グリセロールの脂肪酸エステル類縁体の含有量が、総脂質のモル数に対して0.001倍モル量以上である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- カチオン性脂質をさらに含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- カチオン性脂質が、脂質A;以下の式(I)〜式(IV)、式(V’),式(V’’)の少なくとも1つ、および/または、脂質B;式(CL-I)〜(CL-XIX)の少なくとも1つである請求項6に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
式(I)
R1〜R3は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L1〜L3は同一または異なって存在しないか、-Z1-(CY1Y2)p1-または-Z2-(CY3Y4)p2-Z3-(CY5Y6)p3-(式中、Y1〜Y6は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z1〜Z3は同一または異なって、-O-、-NY7A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY7B-、-NY7C-CO-または-NY7D-CO-0-であり(式中、Y7A〜Y7Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p1〜p3は同一または異なって1〜5の整数である)であり、
X1は置換されていても良いC1-C4アルキルであり、
A1は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(II)
R4〜R6は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L4〜L6は同一または異なって存在しないか、-Z4-(CY8Y9)p4-または-Z5-(CY10Y11)p5-Z6-(CY12Y13)p6-(式中、Y8〜Y13は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z4〜Z6は同一または異なって、-O-、-NY14A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY14B-、-NY14C-CO-または-NY14D-CO-0-であり(式中、Y14A〜Y14Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p4は0〜5の整数であり、p5は1〜5の整数であり、p6は0〜5の整数である)であり、
L7は存在しないか、-(CY15Y16)p7-、-(CY17Y18)p8-Z7-(CY19Y20)p9-または-(CY21Y22)p10-Z8-(CY23Y24)p11-Z9-(CY25Y26)p12-(式中、Y15〜Y26は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z7〜Z9は同一または異なって、-O-、-NY27A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY27B-、-NY27C-CO-または-NY27D-CO-0-であり(式中、Y27A〜Y27Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p7は1〜5の整数であり、p8は0〜5の整数であり、p9は1〜5の整数であり、p10は0〜5の整数であり、p11は1〜5の整数であり、p12は1〜5の整数である)であり、
B1は、
A2は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(III)
R7〜R9は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L8〜L10は同一または異なって存在しないか、-Z12-(CY39Y40)p18-または-Z13-(CY41Y42)p19-Z14-(CY43Y44)p20-(式中、Y39〜Y44は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z12〜Z14は同一または異なって、-O-、-NY45A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY45B-、-NY45C-CO-、-NY45D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y45A〜Y45Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、
p18は0〜5の整数であり、p19は1〜5の整数であり、p20は0〜5の整数である)であり、
L11は存在しないか、-(CY46Y47)p21-、-(CY48Y49)p22-Z15-(CY50Y51)p23-または-(CY52Y53)p24-Z16-(CY54Y55)p25-Z17-(CY56Y57)p26-(式中、Y46〜Y57は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z15〜Z17は同一または異なって、-O-、-NY58A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY58B-、-NY58C-CO-、-NY58D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y58A〜Y58Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p21は1〜5の整数であり、p22は0〜5の整数であり、p23は1〜5の整数であり、p24は0〜5の整数であり、p25は1〜5の整数であり、p26は1〜5の整数である)であり、
L12は存在しないか、-(CY59Y60)p27-、-(CY61Y62)p28-Z18-(CY63Y64)p29-または-(CY65Y66)p30-Z19-(CY67Y68)p31-Z20-(CY69Y70)p32-(式中、Y59〜Y70は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z18〜Z20は同一または異なって、-O-、-NY71A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY71B-、-NY71C-CO-、-NY71D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y71A〜Y71Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p27は1〜5の整数であり、p28は0〜5の整数であり、p29は0〜5の整数であり、p30は0〜5の整数であり、p31は1〜5の整数であり、p32は0〜5の整数である)
であり、
J1およびJ2は同一または異なってCY72またはN(式中、Y72は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、置換されていても良いC1-C4アルコキシ、または置換されていても良いC1-C4アシルオキシである)であり、
B2は、
A3は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(IV)
R10〜R12は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L13は存在しないか、-Z23-(CY83Y84)p38-または-Z24-(CY85Y86)p39-Z25-(CY87Y88)p40-(式中、Y83〜Y88は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z23〜Z25は同一または異なって、-O-、-NY89A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY89B-、-NY89C-CO-または-NY89D-CO-0-であり(式中、Y89A〜Y89Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p38〜p40は同一または異なって1〜5の整数である)であり、
L14およびL15は同一または異なって存在しないか、-Z26-(CY90Y91)p41-または-Z27-(CY92Y93)p42-Z28-(CY94Y95)p43-(式中、Y90〜Y95は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z26〜Z28は同一または異なって、-O-、-NY96A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY96B-、-NY96C-CO-、-NY96D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y96A〜Y96Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p41は0〜5の整数であり、p42は1〜5の整数であり、p43は0〜5の整数である)であり、
L16は存在しないか、-(CY97Y98)p44-、-(CY99Y100)p45-Z29-(CY101Y102)p46-または-(CY103Y104)p47-Z30-(CY105Y106)p48-Z31-(CY107Y108)p49-(式中、Y97〜Y108は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z29〜Z31は同一または異なって、-O-、-NY109A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY109B-、-NY109C-CO-、-NY109D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y109A〜Y109Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p44は1〜5の整数であり、p45は0〜5の整数であり、p46は1〜5の整数であり、p47は0〜5の整数であり、p48は1〜5の整数であり、p49は1〜5の整数である)であり、
J3はCY110またはN(式中、Y110は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、置換されていても良いC1-C4アルコキシ、または置換されていても良いC1-C4アシルオキシである)であり、
X14およびX15は同一または異なって置換されていても良いC1-C4アルキルであるか、または一緒になって隣接する窒素原子とともに置換されていても良いC4-C6ヘテロ環を形成し、
A4は薬学的に許容される陰イオンである)、
式(V’)もしくは式(V’’)
R13〜R18は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
Y111〜Y114は同一または異なって水素原子、ヒドロキシまたは置換されていても良いC1-C4アルキルであり、
L17〜L19およびL22〜L24は同一または異なって存在しないか、-Z32-(CY115Y116)p51-または-Z33-(CY117Y118)p52-Z34-(CY119Y120)p53-(式中、Y115〜Y120は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z32〜Z34は同一または異なって、-O-、-NY121A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY121B-、-NY121C-CO-、-NY121D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y121A〜Y121Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p51は0〜5の整数であり、p52は1〜5の整数であり、p53は0〜5の整数である)であり、
L20およびL25は同一または異なって存在しないか、-(CY122Y123)p54-、-(CY124Y125)p5
5-Z35-(CY126Y127)p56-または-(CY128Y129)p57-Z36-(CY130Y131)p58-Z37-(CY132Y133)p59-(式中、Y122〜Y133は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z35〜Z37は同一または異なって、-O-、-NY134A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-NY134B-、-NY134C-CO-、-NY134D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y134A〜Y134Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p54は1〜5の整数であり、p55は0〜5の整数であり、p56は1〜5の整数であり、p57は0〜5の整数であり、p58は1〜5の整数であり、p59は1〜5の整数である)であり、
L21およびL26は同一または異なって存在しないか、-(CY135Y136)p60-、-(CY137Y138)p61-Z38-(CY139Y140)p62-または-(CY141Y142)p63-Z39-(CY143Y144)p64-Z40-(CY145Y146)p65-(式中、Y135〜Y146は同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルであり、Z38〜Z40は同一または異なって、-O-、-NY147A-、-CO-O-、-O-CO-、-CO-N
Y147B-、-NR147C-CO-、-NY147D-CO-0-または-CO-であり(式中、Y147A〜Y147Dは同一または異なって水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、p60は1〜5の整数であり、p61は0〜5の整数であり、p62は0〜5の整数であり、p63は0〜5の整数であり、p64は1〜5の整数であり、p65は0〜5の整数である)であり、
B3およびB4は同一または異なって、
A5およびA6は同一または異なって薬学的に許容される陰イオンである)
式(CL-I)
R101およびR102は同一または異なって直鎖状または分岐状のC10-C24アルキル、C10-C24アルケニルもしくはC10-C24アルキニルであり、
L101およびL102は水素原子であるか、または一緒になって単結合もしくはC2-C8アルキレンを形成し、
L103は単結合、-CO-または-CO-O-であり、
L103が単結合である場合には、
X101は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、
L103が-CO-または-CO-O-である場合には、
X101はピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、該置換基の少なくとも1つは、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ピロリジニル、ピペリジルまたはモルホリニルである)、
式(CL-II)
R103およびR104は同一または異なって直鎖状または分岐状のC12-C24アルキル、C12-C24アルケニルもしくはC12-C24アルキニルであり、
p101およびp102は同一または異なって0〜3の整数であり、
L106およびL107は水素原子であるか、または一緒になって単結合もしくはC2-C8アルキレンを形成し、
L104およびL105は同一または異なって-O-、-CO-O-または-O-CO-であり、
L108は単結合、-CO-または-CO-O-であり、
L108が単結合である場合には、
X102は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、ピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、
L108が-CO-または-CO-O-である場合には、
X102はピロリジン-2-イル、ピロリジン-3-イル、ピペリジン-2-イル、ピペリジン-3-イル、ピペリジン-4-イル、モルホリン-2-イル、モルホリン-3-イル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、ピロリジニル、ピペリジルもしくはモルホリニルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであり、該置換基の少なくとも1つは、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニオ、ピロリジニル、ピペリジルまたはモルホリニルである)、
式(CL-III)
R105は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R106は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシプロピルであり、
X103およびX104は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成するか、またはX103はL111と一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L111は水素原子、C1-C6アルキル、C3-C6アルケニル、アミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、または同一もしくは異なって1〜3つのアミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシ、アルコキシ、カルバモイル、モノアルキルカルバモイルもしくはジアルキルカルバモイルで置換されたC1-C6アルキルもしくはC3-C6アルケニルであるか、またはX103と一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L109はC1-C6アルキレンであり、
L110は単結合であるか、またはC1-C6アルキレンであり、ただし、L109とL110の炭素数の和は7以下であり、L111が、水素原子の場合、L110は単結合であり、L111がX103と一緒になってC2-C6アルキレンを形成する場合、L110は単結合であるか、またはメチレンもしくはエチレンである)、
式(CL-IV)
R107は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R108は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチル、C8-C24アルキニルオキシプロピル、C8-C24アルキルオキシエトキシエチル、C8-C24アルケニルオキシエトキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシエトキシエチルであり、
X105は水素原子または置換されていても良いC1-C4アルキルである)、
式(CL-V)
R109は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R110は直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルオキシエチル、C8-C24アルキルオキシプロピル、C8-C24アルケニルオキシエチル、C8-C24アルケニルオキシプロピル、C8-C24アルキニルオキシエチルもしくはC8-C24アルキニルオキシプロピルであり、
L112はC1-C3アルキレンであり、
X105’は水素原子またはC1-C3アルキルである)、
式(CL-VI)
R111およびR112は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
X106およびX107は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
p103、p104およびp105は同一または異なって0または1であり、ただしp103, p104およびp105は同時には0ではなく、
L113およびL114は同一または異なってO、SまたはNHである)、
式(CL-VII)
R113およびR114は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
R115は水素原子、ヒドロキシ、置換されていても良いC1-C4アルキル、C1-C4アルコキシまたはC1-C4アシルオキシであり、
X109およびX110は同一または異なってC1-C3アルキルであるか、または一緒になってC2-C8アルキレンを形成し、
L115は-CO-O-、-O-CO-、-NHCO-または-CONH-であり、
p106は0〜3の整数であり、
p107は1〜4の整数である)、
式(CL-VIII)
R116およびR117は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C7-C20アルキルオキシC1-C3アルキル、C7-C20アルケニルオキシC1-C3アルキルもしくはC7-C20アルキニルオキシC1-C3アルキルであり、
B100は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、C1-C3ジアルキルアミノC2-C4アルキル、式(A)
P108は0〜4の整数であり、P109は1〜4の整数であり(但し、P108が0であり、P109が1である場合を除く)、
L116は結合する炭素ごとに同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルであり、
L117は結合する炭素ごとに同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルである)、
式(CL-IX)
X115およびX116は同一または異なって水素原子またはC1-C3アルキルであり、
L118およびL119は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキレンもしくはC8-C24アルケニレンであり、
M101およびM102は同一または異なって-C=C-、-OC(O)-、-C(O)O-、-SC(O)-、-C(O)S-、-OC(S)-、-C(S)O-、-SS-、-C(R’’)=N-、-N=C(R’’)-、-C(R’’)=N-O-、-O-N=C(R’’)-、-N(R’’)C(O)-、-C(O)N(R’’)-、-N(R’’)C(S)-、-C(S)N(R’’)-、-N(R’’)C(O)N(R’’’)-、-N(R’’)C(O)O-、-OC(O)N(R’’)-および-OC(O)O-からなる群から選ばれ、
R’’およびR’’’は、同一または異なって、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
R118およびR119は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C16アルキルもしくはC2-C16アルケニルである)、
式(CL-X)
X117およびX118は同一または異なって水素原子、置換されていても良いC1-C6アルキル、ヘテロシクリルまたはポリアミンであるか、またはX117およびX118はそれらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成してもよく、
R120およびR121は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC4-C24アルキルもしくはC4-C24アルケニルである)、
式(CL-XI)
X119およびX120は同一または異なって水素原子、直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C20アルキル、C1-C20アルケニル、C1-C20アルキニルもしくはC6-C20アシルであり、
R122およびR123は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC1-C30アルキル、C2-C30アルケニルもしくはC2-C30アルキニルであり、
p112、p113およびp114は同一または異なって0であるか、任意の正の整数である)、
式(CL-XII)
X121およびX122は同一または異なって水素原子、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルであるか、またはX121およびX122はそれらが結合する窒素原子と一緒になってC2-C6含窒素ヘテロ環を形成してもよく、
L120およびL121は同一または異なって-O-、-OC(O)-または-(O)CO-であり、
R124およびR125は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキルもしくはC8-C24アルケニルである)、
式(CL-XIII)
R126およびR127は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24ヘテロアルキル、C8-C24ヘテロアルケニルもしくはC8-C24ヘテロアルキニルであり、
X123は水素原子または置換されていても良いC1-C6アルキルであり、
X124はC1-C6アルキル、-NR4aR4bで置換される置換C1-C6アルキルまたは置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルであり、
R4aおよびR4bは同一または異なって水素原子、C(=NH)NH2または置換されていても良いC1-C6アルキルであるか、またはR4aおよびR4bは、置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルを形成してもよく、
X123およびX124はそれらが結合する窒素原子と一緒になって置換されていても良いC3-C7ヘテロシクリルを形成してもよく、
ただし、X123およびX124はイミダゾリル、ベンズイミダゾリル、またはスクシンイミジルを形成せず、および1つだけの1級アミンがX123およびX124のいずれか一方の上に存在することができ、またはいかなる1級アミンもX123およびX124のいずれか一方の上に存在せず、X123およびX124は置換されたアミドではなく、
R126およびR127がC11アルキルまたはC15アルキルであるとき、X123は水素原子ではなく、
R126およびR127がC16アルキルまたはC17アルキルであるとき、R126およびR127はOHと置換されず、
R126およびR127がC17アルキルであるとき、X123およびX124はOHと置換されず、
R126およびR127がC18アルキルであるとき、X124は置換されていても良いイミダゾリルと置換されない)、
式(CL-XIV)
X125およびX126は同一または異なって水素原子、置換されていても良いC1-C6アルキル、ヘテロシクリルまたはポリアミンであるか、またはX125およびX126はそれらが結合している窒素と一緒に、該窒素に加えて、N、OおよびSから選択される1または2個のさらなるヘテロ原子を含有していてもよい4〜7員の単環式ヘテロ環を形成してもよく、
R130は水素原子またはC1-C6アルキルであり、
R128およびR129は同一または異なって直鎖状または分岐状の置換されていても良いC4-C24アルキルもしくはC4-C24アルケニルである)、
式(CL-XV)
X127およびX128はそれぞれ独立して、C1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニルであるか、
X127およびX128は、それらが結合している窒素原子と一体になって、1から2個の窒素原子を有する複素環を形成し、
L122は−C(O)O−、−OC(O)−、−C(O)N(X130)−、−N(X130)C(O)−、−OC(O)O−、−OC(O)N(X130)−、−N(X130)C(O)N(X130)−、または−N(X130)C(O)O−であり、
X130の各存在は独立して、水素原子またはC1-C3アルキルであり、
aは1、2、3、4、5、または6であり、
bは0、1、2、または3であり、
X129は存在しないか、水素またはC1-C3アルキルであり、
R131およびR132のそれぞれは独立して、1つ以上の生分解性基を有する炭素数12〜24のアルキル、炭素数12〜24のアルケニル、または炭素数12〜24のアルコキシであり、各生分解性基は独立して、上記の炭素数12〜24のアルキル基、アルケニル基、またはアルコキシ基に割り込んでいるか、炭素数12〜24のアルキル基、アルケニル基、またはアルコキシ基の末端で置換されており(上記生分解性基は、割り込んでいるものは、‐C(O)O-、‐OC(O)−、−C(O)N(X130)−、または‐N(X130)C(O)−であり、末端のものは、‐C(O)O‐C1-C4アルキル、−OC(O)−C1-C4アルキル、−C(O)N(X130)−C1-C4アルキル、または−N(X130)C(O)−C1-C4アルキルである)、
R131およびR132は、上記生分解性基とアスタリスク(*)の付された第3級炭素原子との間に少なくとも4つの炭素原子を有する)、
式(CL-XVI)
R133およびR134は同一または異なり、それぞれ直鎖状または分岐状のC1-C9アルキル、C2-C11アルケニルもしくはC2-C11アルキニルであり、
L123およびL124は同一または異なり、それぞれ直鎖状のC5-C18アルキレンもしくは直鎖状のC5-C18アルケニレンであるか、またはNと複素環を形成しており、
L125は、単結合であるか、または-CO-O-であり、それによって-L124-CO-OR134が形成されており、
L127はSまたはOであり、
L126は単結合であるか、または直鎖状もしくは分岐状のC1-C6アルキレンであるか、またはNと複素環を形成しており、
L128は直鎖状または分岐状のC1-C6アルキレンであり、そして
X131およびX132は同一または異なり、それぞれ水素または直鎖状もしくは分岐状のC1-C6アルキルである)
式(CL-XVII)
L131はC2-C4アルキレンまたは-CH2-S-CH2CH2-であり、
L129およびL130は同一または異なって、それぞれC1-C6アルキルであり、
R135およびR136は同一または異なって、C10-C30アルキル、C10-C30アルケニルであり、
X133およびX134は同一または異なって、水素、C1-C6アルキルまたは-CH2CH2OHである。)、
式(CL-XVIII)
R137およびR138は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルチオエチル、C8-24アルケニルチオエチル、もしくはC8-C24アルキニルチオエチルであり、
X135は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(C)
式(CL-XIX)
R139およびR140は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L133は、SまたはOであり、
X142は水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)
- カチオン性脂質が、前記脂質Bである、請求項7に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体をさらに含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 水溶性高分子の脂質誘導体または脂肪酸誘導体における水溶性高分子部分が、ポリエチレングリコール、ポリグリセリン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸およびポリアクリルアミドからなる群より選ばれる、請求項9に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 中性脂質をさらに含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 中性脂質が、リン脂質、ステロール、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質およびスフィンゴイドからなる群より選ばれる、請求項11に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 核酸が、RNA干渉(RNAi)を利用した標的遺伝子の発現抑制作用を有する核酸である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- 標的遺伝子が、腫瘍または炎症に関連する遺伝子である、請求項13に記載の核酸含有脂質ナノ粒子。
- リパーゼによって加水分解されない、グリセロールの脂肪酸エステル類縁体を使用する、核酸含有脂質ナノ粒子を安定化する方法。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を用いる、核酸を細胞内に導入する方法。
- 細胞が、ほ乳類の腫瘍または炎症部位にある細胞である、請求項16に記載の方法。
- 細胞が、ほ乳類の肝臓、胃、肺、腎臓、膵臓または脾臓にある細胞である、請求項16または17に記載の方法。
- 細胞内に導入する方法が、静脈内投与または皮下投与によって細胞内に導入する方法である、請求項16〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を、ほ乳動物に投与することを含む、癌または炎症疾患の治療方法。
- 投与が、静脈内投与または皮下投与である、請求項20に記載の治療方法。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を含む、医薬。
- 静脈内投与用または皮下投与用である、請求項22に記載の医薬。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載の核酸含有脂質ナノ粒子を含む、癌または炎症疾患の治療剤。
- 静脈内投与用または皮下投与用である、請求項24に記載の治療剤。
- 式(CL-XVIII)
R137およびR138は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニル、C8-C24アルキニル、C8-C24アルキルチオエチル、C8-24アルケニルチオエチル、もしくはC8-C24アルキニルチオエチルであり、
X135は、水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(C)
で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩。 - 式(CL-XIX)
R139およびR140は、同一または異なって、直鎖状または分岐状のC8-C24アルキル、C8-C24アルケニルもしくはC8-C24アルキニルであり、
L133は、SまたはOであり、
X142は水素原子、C1-C3アルキル、ヒドロキシC2-C4アルキル、式(F)
で表される化合物、またはその製薬上許容し得る塩。
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