JPWO2018235834A1 - 表皮水疱症の治療剤 - Google Patents
表皮水疱症の治療剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2018235834A1 JPWO2018235834A1 JP2019525640A JP2019525640A JPWO2018235834A1 JP WO2018235834 A1 JPWO2018235834 A1 JP WO2018235834A1 JP 2019525640 A JP2019525640 A JP 2019525640A JP 2019525640 A JP2019525640 A JP 2019525640A JP WO2018235834 A1 JPWO2018235834 A1 JP WO2018235834A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- epidermolysis bullosa
- skin
- cell preparation
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010014989 Epidermolysis bullosa Diseases 0.000 title claims abstract description 61
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 259
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 64
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 208000008106 junctional epidermolysis bullosa Diseases 0.000 claims abstract 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 27
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 17
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 108010017842 Telomerase Proteins 0.000 claims description 11
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 claims description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 229940028444 muse Drugs 0.000 abstract description 108
- 208000010975 Dystrophic epidermolysis bullosa Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000004298 epidermolysis bullosa dystrophica Diseases 0.000 abstract description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 33
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 25
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 23
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 21
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 18
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 17
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 14
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 14
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 14
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 12
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000003972 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 7
- 108090000385 Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 230000006355 external stress Effects 0.000 description 7
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 6
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 6
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 5
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 5
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 5
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 5
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 5
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 5
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 5
- 210000003866 melanoblast Anatomy 0.000 description 5
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 201000000744 recessive dystrophic epidermolysis bullosa Diseases 0.000 description 5
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 5
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 5
- 101001076292 Homo sapiens Insulin-like growth factor II Proteins 0.000 description 4
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 229940068935 insulin-like growth factor 2 Drugs 0.000 description 4
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 210000004786 perivascular cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 4
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 4
- 102100023126 Cell surface glycoprotein MUC18 Human genes 0.000 description 3
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 description 3
- 102100033725 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 16 Human genes 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 210000000625 blastula Anatomy 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 3
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 3
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 3
- 101100114361 Arabidopsis thaliana COL7 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100021811 E3 ubiquitin-protein ligase RNF5 Human genes 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 206010040799 Skin atrophy Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 230000005861 gene abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 206010010716 Conjunctival erosion Diseases 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 208000007217 Esophageal Stenosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 1
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 101100060131 Mus musculus Cdk5rap2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100154912 Mus musculus Tyrp1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282339 Mustela Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 108010032605 Nerve Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010030194 Oesophageal stenosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 1
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 201000000660 Pyloric Stenosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000035100 Threonine proteases Human genes 0.000 description 1
- 108091005501 Threonine proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 238000009109 curative therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002514 epidermal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003999 epithelial cell of bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001621 ilium bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000933 neural crest Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 231100001221 nontumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000003836 peripheral circulation Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150077014 sox10 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009121 systemic therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 229940072041 transforming growth factor beta 2 Drugs 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/33—Fibroblasts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
- C12N5/0629—Keratinocytes; Whole skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0656—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/03—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from non-embryonic pluripotent stem cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
水疱、びらん、潰瘍などを流水洗浄したのち、ガーゼとびらんが固着することを防ぐため、ワセリンガーゼなどを塗布する。この際、水疱内容はあらかじめ穿刺排液しておく(水疱蓋は除去しない)。指趾間の癒着を伴う症例では、指間にワセリンガーゼを挟むなどして、指趾間の癒着を予防する。抗生物質含有軟膏の長期間にわたる使用は耐性菌の出現の原因となるため、特別な場合を除き、抗生物質含有軟膏を積極的に使用する必要はない。びらんや潰瘍の悪化が認められた場合は、真菌や細菌感染の合併、特に劣性栄養障害型表皮水疱症では皮膚癌の出現の可能性があるため、皮膚生検や真菌検査、細菌培養検査などを積極的に施行する。基本的には軟膏療法を1日1回実施する。
栄養補給:特に劣性栄養障害型表皮水疱症では口腔粘膜や食道の病変により、栄養を十分摂取できず、慢性的な栄養不良、貧血になっていることが非常に多い。そのためエンシュアリキッドなどの栄養剤の経口摂取が有用である。経口摂取が困難な場合は経鼻チューブや点滴で、栄養を補給することもある。そう痒がはげしい場合は抗ヒスタミン剤が奏功することもある。
劣性栄養障害型と接合部型において、指(趾)間癒着、皮膚悪性腫瘍、食道狭窄、幽門狭窄、肛門部のびらん・狭窄、栄養不良、結膜びらん、貧血などが問題になることが多い。また、重篤な合併症のひとつに続発性全身性アミロイドーシスがある。
表皮水疱症の合併症はQOLを著しく低下させるものが多くそれだけに、治療の必要性が高い。形成術や拡張術、栄養管理など臨床各分野の専門医の協力を得て、診断治療にあたることが重要である。(非特許文献1)
一方、近年の再生医療の研究の進展により、骨髄移植、骨髄幹細胞移植等による表皮水疱症の治療が探索されつつある。
(1)骨髄由来細胞による皮膚再生メカニズム:長年広範囲の表皮剥離を繰り返す結果、大量の表皮幹細胞を喪失している表皮水疱症患者皮膚の表皮再生機序として、骨髄内幹細胞が末梢循環を介して損傷部皮膚に動員され、水疱部皮膚の再生に寄与していることを明らかにした。(非特許文献3、非特許文献4)
(2) 表皮水疱症に対する骨髄移植療法:米国ミネソタ大学の研究グループは世界で初めて劣性栄養障害型表皮水疱症に対する骨髄移植を実施し、皮膚症状の改善効果を報告した。しかし、7 例中2 例が経過中に死亡しており、より安全な骨髄移植治療プロトコール開発が必要不可欠である。(非特許文献5)
(3) 表皮水疱症に対する骨髄間葉系幹細胞移植療法:南米チリの研究グループは、重症劣性栄養障害型表皮水疱症の2 症例に対して健常者骨髄由来培養間葉系幹細胞を皮下移植し、その有効性を明らかにした(非特許文献6)。また、英国やエジプトのグループは、重症劣性栄養障害型表皮水疱症の患者に対して健常者骨髄由来培養間葉系幹細胞を点滴投与し、その有効性を報告した(非特許文献7、非特許文献8)。しかし移植した間葉系幹細胞は数ヶ月で次第に減少する可能性も併せて示された。
(4)表皮水疱症に対する骨髄間葉系幹細胞血中動員因子を利用した再生誘導医療の可能性:剥離表皮から放出されるHMGB1 が末梢血液を介して骨髄間葉系幹細胞を剥離表皮部皮膚に集積させて損傷皮膚再生を強く誘導していることが見出された。(非特許文献4)
上記の通り、表皮水疱症の根治的療法を目指し、遺伝子治療や再生治療の基礎的、臨床的研究が精力的に進められている。しかし、現在も、安全性と有効性が確認された、表皮水疱症を完全に治癒させる治療法は見いだされておらず、さらなる根治的治療の実現が待たれている。
[1]生体の間葉系組織又は培養間葉系細胞に由来するSSEA−3陽性の多能性幹細胞を含む、表皮水疱症を治療するための細胞製剤。
[2]表皮水疱症が、単純型表皮水疱症である、[1]に記載の細胞製剤。
[3]表皮水疱症が、接合部型表皮水疱症である、[1]に記載の細胞製剤。
[4]表皮水疱症が、栄養障害型表皮水疱症である、[1]に記載の細胞製剤。
[5]栄養障害型表皮水疱症が、優性栄養障害型表皮水疱症又は劣性栄養障害型表皮水疱症である、[4]に記載の細胞製剤。
[6]前記多能性幹細胞が、以下の性質の全てを有する多能性幹細胞である、上記[1]〜[5]のいずれかに記載の細胞製剤:
(i)テロメラーゼ活性が低いか又は無い;
(ii)三胚葉のいずれの胚葉の細胞に分化する能力を持つ;
(iii)腫瘍性増殖を示さない;及び
(iv)セルフリニューアル能を持つ。
[7]前記多能性幹細胞が、以下の性質の全てを有する多能性幹細胞である、上記[1]〜[5]のいずれかに記載の細胞製剤:
(i)SSEA−3陽性;
(ii)CD105陽性;
(iii)テロメラーゼ活性が低いか又は無い;
(iv)三胚葉のいずれかの胚葉に分化する能力を持つ;
(v)腫瘍性増殖を示さない;及び
(vi)セルフリニューアル能を持つ。
[8]生体の間葉系組織又は培養間葉系細胞に由来するSSEA−3陽性の多能性幹細胞から分化誘導された皮膚細胞。
[9]皮膚細胞がケラチノサイトおよび/または線維芽細胞である、[8]に記載の皮膚細胞。
[10][8]または[9]に記載の皮膚細胞を含む、皮膚疾患を治療するための細胞製剤。
[11]皮膚疾患が表皮水疱症である、[10]に記載の細胞製剤。
[12]上記[1]〜[6]のいずれかに記載の細胞製剤の有効量を、治療を必要とする患者に投与する工程を含む、表皮水疱症の治療方法。
本発明は、SSEA−3陽性の多能性幹細胞(Muse細胞)を含む、表皮水疱症を治療するための細胞製剤に関する。なお、治療には症状の治癒、緩和、再発防止などが含まれる。本発明を以下に詳細に説明する。
本発明のSSEA−3陽性の多能性幹細胞(Muse細胞)を含む細胞製剤は、表皮水疱症の治療に使用される。
本発明において、「表皮水疱症」とは、皮膚基底膜領域における接着構造制御蛋白質の遺伝子異常等の原因により表皮・真皮間の接着機能が破綻し、日常生活の軽微な外力で表皮が基底膜レベルで剥離して水疱、潰瘍および/またはびらんを形成する遺伝性水疱性皮膚難病をいう。
(1)多能性幹細胞(Muse細胞)
本発明の細胞製剤に使用される多能性幹細胞は、出澤らが、ヒト生体内にその存在を見出し、「Muse(Multilineage−differentiating Stress Enduring)細胞」と命名した細胞である。Muse細胞は、骨髄液、脂肪組織(Ogura,F.,et al.,Stem Cells Dev.,Nov 20,2013(Epub)(published on Jan 17,2014))や皮膚の真皮結合組織等から得ることができるほか、広く組織や臓器の結合組織に存在することが知られている。また、この細胞は、多能性幹細胞と間葉系幹細胞の両方の性質を有する細胞であり、例えば、細胞表面マーカーである「SSEA−3(Stage−specific embryonic antigen−3)」陽性細胞、好ましくはSSEA−3陽性かつCD−105陽性の二重陽性細胞として同定される。したがって、Muse細胞又はMuse細胞を含む細胞集団は、例えば、SSEA−3単独又はSSEA−3及びCD−105の発現を指標として生体組織から分離することができる。Muse細胞の分離法、同定法、及び特徴などの詳細は、国際公開第WO2011/007900号に開示されている。また、Muse細胞が様々な外的ストレスに対する耐性が高いことを利用して、蛋白質分解酵素処理や、低酸素条件、低リン酸条件、低血清濃度、低栄養条件、熱ショックへの暴露、有害物質存在下、活性酸素存在下、機械的刺激下、圧力処理下など各種外的ストレス条件下での培養によりMuse細胞を選択的に濃縮することができる。なお、本明細書においては、表皮水疱症を治療するための細胞製剤として、SSEA−3を指標として用いて、生体の間葉系組織又は培養間葉系組織から調製された多能性幹細胞(Muse細胞)又はMuse細胞を含む細胞集団を単に「SSEA−3陽性細胞」と記載することがある。また、本明細書においては、「非Muse細胞」とは、生体の間葉系組織又は培養間葉系細胞に含まれる細胞であって、「SSEA−3陽性細胞」以外の細胞を指すことがある。
前記外的ストレスは、プロテアーゼ処理、低酸素濃度での培養、低リン酸条件下での培養、低血清濃度での培養、低栄養条件での培養、熱ショックへの暴露下での培養、低温での培養、凍結処理、有害物質存在下での培養、活性酸素存在下での培養、機械的刺激下での培養、振とう処理下での培養、圧力処理下での培養又は物理的衝撃のいずれか又は複数の組み合わせであってもよい。
前記プロテアーゼによる処理時間は、細胞に外的ストレスを与えるために合計0.5〜36時間行うことが好ましい。また、プロテアーゼ濃度は、培養容器に接着した細胞を剥がすとき、細胞塊を単一細胞にばらばらにするとき、又は組織から単一細胞を回収するときに用いられる濃度であればよい。
前記プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼ、システインプロテアーゼ、金属プロテアーゼ、グルタミン酸プロテアーゼ又はN末端スレオニンプロテアーゼであることが好ましい。更に、前記プロテアーゼがトリプシン、コラゲナーゼ又はジスパーゼであることが好ましい。
(i)テロメラーゼ活性が低いか又は無い;
(ii)三胚葉のいずれの胚葉の細胞に分化する能力を持つ;
(iii)腫瘍性増殖を示さない;及び
(iv)セルフリニューアル能を持つ
からなる群から選択される少なくとも1つの性質を有してもよい。好ましくは、本発明の細胞製剤に使用されるMuse細胞は、上記性質を全て有する。
ここで、上記(i)について、「テロメラーゼ活性が低いか又は無い」とは、例えば、TRAPEZE XL telomerase detection kit(Millipore社)を用いてテロメラーゼ活性を検出した場合に、低いか又は検出できないことをいう。テロメラーゼ活性が「低い」とは、例えば、体細胞であるヒト線維芽細胞と同程度のテロメラーゼ活性を有しているか、又はHela細胞に比べて1/5以下、好ましくは1/10以下のテロメラーゼ活性を有していることをいう。
上記(ii)について、Muse細胞は、in vitro及びin vivoにおいて、三胚葉(内胚葉系、中胚葉系、及び外胚葉系)に分化する能力を有し、例えば、in vitroで誘導培養することにより、肝細胞(肝芽細胞又は肝細胞マーカーを発現する細胞を含む)、神経細胞、骨格筋細胞、平滑筋細胞、骨細胞、脂肪細胞等に分化し得る。また、in vivoで精巣に移植した場合にも三胚葉に分化する能力を示す場合がある。さらに、静注により生体に移植することで傷害を受けた臓器(心臓、皮膚、脊髄、肝、筋肉等)に遊走及び生着し、組織に応じた細胞に分化する能力を有する。
上記(iii)について、Muse細胞は、増殖速度約1.3日で増殖するが、浮遊培養では1細胞から増殖し、胚様体様細胞塊を作り一定の大きさになると14日間程度で増殖が止まる、という性質を有するが、これらの胚様体様細胞塊を接着培養に移行すると、再び細胞増殖が開始され、細胞塊から増殖した細胞が約1.3日の増殖速度で広がっていく。さらに精巣に移植した場合、少なくとも半年間は癌化しないという性質を有する。
また、上記(iv)について、Muse細胞は、セルフリニューアル(自己複製)能を有する。ここで、「セルフリニューアル」とは、1個のMuse細胞から浮遊培養で培養することにより得られる胚様体様細胞塊に含まれる細胞から3胚葉性の細胞への分化が確認できると同時に、胚様体様細胞塊の細胞を再び1細胞で浮遊培養に持っていくことにより、次の世代の胚様体様細胞塊を形成させ、そこから再び3胚葉性の分化と浮遊培養での胚様体様細胞塊が確認できることをいう。セルフリニューアルは1回又は複数回のサイクルを繰り返せばよい。
本発明のMuse細胞を含む細胞製剤は、限定されないが、上記(1)で得られたMuse細胞又はMuse細胞を含む細胞集団を生理食塩水や適切な緩衝液(例えば、リン酸緩衝生理食塩水)に懸濁させることによって得られる。この場合、自家又は他家の組織から分離したMuse細胞数が少ない場合には、細胞移植前に細胞を培養して、所定の細胞数が得られるまで増殖させてもよい。なお、すでに報告されているように(国際公開第WO2011/007900号パンフレット)、Muse細胞は、腫瘍化しないため、生体組織から回収した細胞が未分化のまま含まれていても癌化の可能性が低く安全である。また、回収したMuse細胞の培養は、特に限定されないが、通常の増殖培地(例えば、10%仔牛血清を含むα−最少必須培地(α−MEM)など)において行うことができる。より詳しくは、上記国際公開第WO2011/007900号パンフレットを参照して、Muse細胞の培養及び増殖において、適宜、培地、添加物(例えば、抗生物質、血清)等を選択し、所定濃度のMuse細胞を含む溶液を調製することができる。ヒト対象に本発明のMuse細胞を含む細胞製剤を投与する場合には、ヒトの腸骨から骨髄液を採取し、例えば、骨髄液からの接着細胞として骨髄間葉系幹細胞を培養して有効な治療量のMuse細胞が得られる細胞量に達するまで増やした後、Muse細胞をSSEA−3の抗原マーカーを指標として分離し、自家又は他家のMuse細胞を細胞製剤として調製することができる。あるいは、例えば、骨髄液から得られた骨髄間葉系幹細胞を外的ストレス条件下で培養して有効な治療量に達するまでMuse細胞を増殖、濃縮した後、自家又は他家のMuse細胞を細胞製剤として調製することができる。
本発明においては、Muse細胞から分化誘導されたケラチノサイトおよび/または線維芽細胞などの皮膚細胞を細胞製剤として使用することもできる。
ケラチノサイトとはケラチンを産生する細胞であり、表皮細胞または角化細胞ともよばれる。Muse細胞からケラチノサイトへの分化誘導は、例えば、Muse細胞をケラチノサイト増殖因子(KGF)と上皮増殖因子(EGF)を含む培地で培養する、好ましくはMuse細胞をKGFとEGFを含む培地で培養した後に、KGFとEGFと肝細胞増殖因子(HGF)とインスリン様増殖因子2(IGF2)を含む培地で培養することによって行うことができる。ここで、KGFの好ましい濃度範囲は例えば5〜20ng/mlであり、EGFの好ましい濃度範囲は例えば20〜40ng/mlであり、IGF2の好ましい濃度範囲は例えば40〜80ng/mlである。好ましい培養期間は例えば7〜28日である。
線維芽細胞とは、コラーゲンやエラスチンなどの真皮成分を産生する細胞であり、Muse細胞から線維芽細胞への分化誘導は、例えば、Muse細胞をトランスフォーミング増殖因子−β2(TGF−β2)とアスコルビン酸(AA)を含む培地で培養する、好ましくはMuse細胞をTGF−β2とAAを含む培地で培養した後に、AAを含む培地で培養することによって行うことができる。ここで、TGF−β2の好ましい濃度範囲は例えば30〜60μg/mlであり、AAの好ましい濃度範囲は例えば20〜80mmol/lである。好ましい培養期間は例えば7〜28日である。
ヒトMuse細胞の分離及び同定に関する国際公開第WO2011/007900号に記載された方法に準じて、Muse細胞を得た。Muse細胞は間葉系幹細胞をストレス条件下で培養することにより拡大富化培養した。また、市販のMSCを購入してMSC群として使用した。
成体C57BL/6マウスの背面に全層創傷を施してモデルとして用いた。全層創傷を施してから30分以内に、上記で調製したMuse細胞 (3×105/マウスまたは3×104/マウス)、MSC (3×105/mouse)またはHBSS 200μlを尾静脈注射し、治療効果を調べた。
なお、上皮化率は以下のようにして算出した。
創傷作成時および作成後3、6、9、11日目の背部皮膚を、定規とともにデジタルカメラで撮影し、それぞれの皮膚潰瘍面積(mm2)をImage Jソフトウェア(バージョン1.50i)を用いて算出した。創傷作成時の面積を基準値として、面積の縮小率を%で算出した。
COL17遺伝子ノックアウトマウス(参考文献Nat Med. 2007 Mar;13(3):378-83.)(3〜4週齢)において、表皮を摩擦して水疱を形成させ、水疱形成から30分以内にMuse細胞 (3 ×105/マウス)を尾静脈より注射した。1ヶ月後に皮膚の状態を観察した結果、図4に示すように、HBSSを投与したコントロールマウスでは被毛状態が悪く、傷や粘膜びらんの形成が広範に認められたが、Muse細胞を投与したマウスでは被毛状態、傷の形成ともに軽度であった。また、投与1ヶ月後の皮膚組織を単離し、そこからRNAを抽出し、RT−PCRにより、ヒト由来COL7遺伝子およびCOL17遺伝子の発現を調べた。結果を図5に示す。その結果、Muse細胞投与マウスではヒトCOL7およびヒトCOL17の存在が確認され、投与されたMuse細胞が接着因子を供給していることが確認できた。ヒトCOL7の発現はタンパク質レベルでも確認できた(図6)。
以下の手順でMuse細胞を培養することにより、ケラチノサイトへの分化誘導を行った。
0日目 Muse細胞のプレーティング
1日目 DMEM lowグルコース培地+10%FBS+KGF(10ng/ml)+EGF(20〜30ng/ml)で3日間培養
4日目 DMEM lowグルコース培地+10%FBS+KGF(10ng/ml)+EGF(20〜30ng/ml)+HGF(10ng/ml)+IGF2(60ng/ml)で1日おきに培地を交換しながら8〜14日間培養
以下の手順でMuse細胞を培養することにより、線維芽細胞への分化誘導を行った。
0日目 Muse細胞のプレーティング
1日目 10ml DMEM lowグルコース培地+2μl TGF−β2(50μg/ml)+60μl AA(50mM)+100μl ITS−A(インスリン、トランスフェリン、亜セレン酸ナトリウム)で1日おきに培地を交換しながら6日間培養
7日目 DMEM lowグルコース培地+20%FBS+60μl AA(50mM)で1日おきに培地を交換しながら10日間培養
17日目 DMEM lowグルコース培地+10%FBSで培養
Claims (11)
- 生体の間葉系組織又は培養間葉系細胞に由来するSSEA−3陽性の多能性幹細胞を含む、表皮水疱症を治療するための細胞製剤。
- 表皮水疱症が、単純型表皮水疱症である、請求項1に記載の細胞製剤。
- 表皮水疱症が、接合部型表皮水疱症である、請求項1に記載の細胞製剤。
- 表皮水疱症が、栄養障害型表皮水疱症である、請求項1に記載の細胞製剤。
- 栄養障害型表皮水疱症が、優性栄養障害型表皮水疱症又は劣性栄養型表皮水疱症である、請求項4に記載の細胞製剤。
- 前記多能性幹細胞が、以下の性質の全てを有する多能性幹細胞である、請求項1〜5のいずれかに記載の細胞製剤:
(i)テロメラーゼ活性が低いか又は無い;
(ii)三胚葉のいずれの胚葉の細胞に分化する能力を持つ;
(iii)腫瘍性増殖を示さない;及び
(iv)セルフリニューアル能を持つ。 - 前記多能性幹細胞が、以下の性質の全てを有する多能性幹細胞である、請求項1〜5のいずれかに記載の細胞製剤:
(i)SSEA−3陽性;
(ii)CD105陽性;
(iii)テロメラーゼ活性が低いか又は無い;
(iv)三胚葉のいずれかの胚葉に分化する能力を持つ;
(v)腫瘍性増殖を示さない;及び
(vi)セルフリニューアル能を持つ。 - 生体の間葉系組織又は培養間葉系細胞に由来するSSEA−3陽性の多能性幹細胞から分化誘導された皮膚細胞。
- 皮膚細胞がケラチノサイトおよび/または線維芽細胞である、請求項8に記載の皮膚細胞。
- 請求項8または9に記載の皮膚細胞を含む、皮膚疾患を治療するための細胞製剤。
- 皮膚疾患が表皮水疱症である、請求項10に記載の細胞製剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023032458A JP2023060125A (ja) | 2017-06-19 | 2023-03-03 | 表皮水疱症の治療剤 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017119854 | 2017-06-19 | ||
JP2017119854 | 2017-06-19 | ||
PCT/JP2018/023352 WO2018235834A1 (ja) | 2017-06-19 | 2018-06-19 | 表皮水疱症の治療剤 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023032458A Division JP2023060125A (ja) | 2017-06-19 | 2023-03-03 | 表皮水疱症の治療剤 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018235834A1 true JPWO2018235834A1 (ja) | 2020-04-16 |
Family
ID=64737127
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019525640A Pending JPWO2018235834A1 (ja) | 2017-06-19 | 2018-06-19 | 表皮水疱症の治療剤 |
JP2023032458A Pending JP2023060125A (ja) | 2017-06-19 | 2023-03-03 | 表皮水疱症の治療剤 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023032458A Pending JP2023060125A (ja) | 2017-06-19 | 2023-03-03 | 表皮水疱症の治療剤 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200206272A1 (ja) |
EP (1) | EP3643316A4 (ja) |
JP (2) | JPWO2018235834A1 (ja) |
KR (1) | KR20200016298A (ja) |
CN (1) | CN110831607A (ja) |
AU (1) | AU2018289935A1 (ja) |
CA (1) | CA3067963A1 (ja) |
SG (1) | SG11201912683QA (ja) |
WO (1) | WO2018235834A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2020209687A1 (en) * | 2019-01-18 | 2021-07-29 | Osaka University | Composition for use in treating dystrophic epidermolysis bullosa |
JPWO2021201286A1 (ja) | 2020-04-02 | 2021-10-07 | ||
WO2022018884A1 (ja) * | 2020-07-22 | 2022-01-27 | 国立大学法人大阪大学 | 栄養障害型表皮水疱症の治療薬 |
WO2023164241A1 (en) * | 2022-02-28 | 2023-08-31 | Jlm Exograde, Llc | Method for enriching muse cells and obtaining exosomes, microvesicles or the secretome therefrom |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011007900A1 (ja) * | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Dezawa Mari | 生体組織から単離できる多能性幹細胞 |
WO2012133948A1 (ja) * | 2011-03-30 | 2012-10-04 | 株式会社Clio | 生体組織から単離できるssea-3陽性の多能性幹細胞を含む他家移植用細胞治療用組成物 |
JP2016056109A (ja) * | 2014-09-05 | 2016-04-21 | 国立大学法人 東京大学 | 糖尿病性皮膚潰瘍治療のための多能性幹細胞 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5185443A (ja) | 1975-09-12 | 1976-07-27 | Hitachi Ltd | Kenshutsukairo |
JP2014132830A (ja) * | 2011-03-30 | 2014-07-24 | Clio Inc | 生体の臍帯又は脂肪組織から単離できる多能性幹細胞 |
US9399758B2 (en) * | 2009-07-15 | 2016-07-26 | Mari Dezawa | SSEA3(+) pluripotent stem cell that can be isolated from body tissue |
SI2785359T1 (sl) * | 2011-11-30 | 2018-11-30 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Mezenhimske stromalne celice in uporabe povezane z njimi |
JP2016516394A (ja) * | 2013-04-02 | 2016-06-09 | 株式会社Clio | ヒト線維芽細胞において特徴的な幹細胞であるMuse細胞から容易に分化した機能性メラノサイトの使用 |
-
2018
- 2018-06-19 KR KR1020197038843A patent/KR20200016298A/ko active Search and Examination
- 2018-06-19 JP JP2019525640A patent/JPWO2018235834A1/ja active Pending
- 2018-06-19 WO PCT/JP2018/023352 patent/WO2018235834A1/ja unknown
- 2018-06-19 US US16/624,081 patent/US20200206272A1/en active Pending
- 2018-06-19 CA CA3067963A patent/CA3067963A1/en active Pending
- 2018-06-19 EP EP18820712.0A patent/EP3643316A4/en active Pending
- 2018-06-19 SG SG11201912683QA patent/SG11201912683QA/en unknown
- 2018-06-19 AU AU2018289935A patent/AU2018289935A1/en not_active Abandoned
- 2018-06-19 CN CN201880040443.XA patent/CN110831607A/zh active Pending
-
2023
- 2023-03-03 JP JP2023032458A patent/JP2023060125A/ja active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011007900A1 (ja) * | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Dezawa Mari | 生体組織から単離できる多能性幹細胞 |
WO2012133948A1 (ja) * | 2011-03-30 | 2012-10-04 | 株式会社Clio | 生体組織から単離できるssea-3陽性の多能性幹細胞を含む他家移植用細胞治療用組成物 |
JP2016056109A (ja) * | 2014-09-05 | 2016-04-21 | 国立大学法人 東京大学 | 糖尿病性皮膚潰瘍治療のための多能性幹細胞 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
DEZAWA, M.: "Muse Cells Provide the Pluripotency of Mesenchymal Stem Cells; Direct Contribution of Muse Cells to", CELL TRANSPLANTATION, vol. 25, JPN6018036607, 2016, pages 849 - 861, XP055496472, ISSN: 0005073922 * |
PETROF, G., ET AL.: "Potential of Systemic Allogenic Mesenchymal Stromal Cell Therapy for Children with Recessive Dystrop", JOURNAL OF INVESTIGATIVE DERMATOLOGY, vol. 135, JPN6018036600, 2015, pages 2319 - 2321, ISSN: 0005073925 * |
PNAS, vol. 107, no. 19, JPN6022051500, 2010, pages 8639 - 8643, ISSN: 0005073924 * |
STEM CELLS TRANSLATIONAL MEDICINE, vol. 4, JPN6022051497, 2015, pages 146 - 155, ISSN: 0005073923 * |
TOLAR, J. ET AL.: "HEMATOPOIETIC AND MESENCHYMAL CELL TRANSPLANTATION AFTER MYELOABLATIVE AND NON-MYELOABLATIVE CONDITI", WOUND REP. REG., vol. 20, JPN6018036602, 2012, pages 67, ISSN: 0005073926 * |
玉井克人, 表皮水疱症に対する間葉系幹細胞移植再生医療の実用化研究 平成24-26年度 総合研究報告書, JPN6018036599, May 2015 (2015-05-01), pages 1 - 16, ISSN: 0005073921 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SG11201912683QA (en) | 2020-01-30 |
JP2023060125A (ja) | 2023-04-27 |
AU2018289935A1 (en) | 2020-01-23 |
CN110831607A (zh) | 2020-02-21 |
CA3067963A1 (en) | 2018-12-27 |
KR20200016298A (ko) | 2020-02-14 |
EP3643316A1 (en) | 2020-04-29 |
EP3643316A4 (en) | 2021-01-20 |
US20200206272A1 (en) | 2020-07-02 |
WO2018235834A1 (ja) | 2018-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230405180A1 (en) | Mesenchymal stem cell-hydrogel-biodegradable or mesenchymal stem cell-hydrogel-undegradable support composition for skin regeneration or wound healing | |
Gugjoo et al. | Equine mesenchymal stem cells: properties, sources, characterization, and potential therapeutic applications | |
JP6010112B2 (ja) | 不死化幹細胞及びその産生物を有効成分とする医薬組成物並びに医薬製剤 | |
JP5240715B2 (ja) | 脂肪組織由来多分化能幹細胞を含有する細胞製剤 | |
JP2023060125A (ja) | 表皮水疱症の治療剤 | |
WO2014027684A1 (ja) | 心筋梗塞の修復再生を誘導する多能性幹細胞 | |
WO2008100083A1 (en) | A composition of the injectable agents for tissues repaire containing mesenchymal stem cells and optimized culture media | |
KR20160115764A (ko) | 분화촉진 및 지속형 스페로이드 형태의 편도 유래 줄기세포의 배양 방법 | |
WO2019139137A1 (ja) | 重層扁平上皮細胞の正常分化・成熟促進剤、上皮疾患治療剤及び重層扁平上皮細胞の正常分化・成熟促進方法 | |
JP2017502071A (ja) | 栄養膜基底層から由来した幹細胞及びそれを含む細胞治療剤 | |
KR20170108325A (ko) | 성체줄기세포의 연골세포 분화용 조성물 및 분화 방법 | |
WO2021201286A1 (ja) | ハイポテンシャル多能性幹細胞 | |
KR102306231B1 (ko) | 편도 유래 중간엽 줄기세포로부터 건 세포의 분화방법 | |
WO2021085639A1 (ja) | 多能性幹細胞による間質性膀胱炎の治療 | |
TWI810918B (zh) | 自包皮組織取得人類間質幹細胞的方法及其用途 | |
WO2016158670A1 (ja) | 脱分化脂肪細胞を有効成分とする血管再生療法用組成物 | |
WO2018003997A1 (ja) | 臓器線維症の予防または治療剤 | |
WO2020111249A1 (ja) | 末梢血流障害の治療剤 | |
JP2023041486A (ja) | 毛髪損傷の治療剤 | |
WO2019216380A1 (ja) | 脊髄損傷の治療剤 | |
Sutelman | Stem Cell Research in Aesthetic Medicine | |
CN118165927A (zh) | 一种人脐带间充质干细胞制剂、制备方法及其在治疗膝骨关节炎中的应用 | |
KR20160125759A (ko) | 인간 피부조직 유래 성체줄기세포 및 이를 함유하는 세포치료제 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20191213 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210616 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220712 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20220909 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221107 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20221206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230303 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20230303 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230303 |
|
C11 | Written invitation by the commissioner to file amendments |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C11 Effective date: 20230328 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230509 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20230602 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230721 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230721 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230822 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230822 |