JPWO2017154867A1 - ホエイタンパク質の分画方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物の製造方法及びβ−ラクトグロブリンを含む組成物の製造方法 - Google Patents
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Abstract
第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と、第一のホエイタンパク質及び前記第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と、を備え、第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくともいずれか１つと複合体を形成するものであり、第二のホエイタンパク質は、下記（１）（２）
（１）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（２）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、
の少なくとも１つを満たすホエイタンパク質の分画方法。
（１）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（２）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、
の少なくとも１つを満たすホエイタンパク質の分画方法。
Description
本発明は、ホエイタンパク質の分画方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物の製造方法及びβ-ラクトグロブリンを含む組成物の製造方法に関する。
ホエイタンパク質は乳に含まれるタンパク質であり、牛乳のホエイタンパク質は約５０重量％のβ-ラクトグロブリンと約２０重量％α-ラクトアルブミンを含んでいる。
α-ラクトアルブミンを含む組成物は人乳と類似したタンパク質組成の母乳代替品や経腸栄養剤等の栄養組成物に利用できる。また、β‐ラクトグロブリンは様々な食品の物性の制御や栄養の強化に利用できる。よって、これまでにホエイタンパク質の分画方法、α-ラクトアルブミンを含む組成物を得るための方法、及びβ‐ラクトグロブリンを含む組成物を得るための方法が検討され開示されている。
特許文献１は、各種の牛乳ホエイからβ-ラクトグロブリン、α-ラクトアルブミン及びラクトフェリンを効率的に分画する方法として、ホエイにＮａＣｌを加え、β-ラクトグロブリン以外の蛋白質を疎水クロマトグラフィー樹脂に吸着させることにより、ホエイ蛋白質の約５０％を占めるβ-ラクトグロブリンとその他の蛋白質を最初に分別し、次いで樹脂に吸着したβ-ラクトグロブリンやラクトフェリンなどを溶出し、限外濾過法で分画する方法を開示している。
特許文献２は、未殺菌のチーズホエイあるいは未殺菌の乳酸ホエイのｐＨを６．３〜７．０、温度を３０〜６０℃に調整し、これを分子量カットオフが５，０００以上の限外濾過膜で処理し、これにより得られる透過液をさらに分子量カットオフが１，２００又は２，０００の限外濾過膜を用いてダイアフィルトレーションすることによりα-ラクトアルブミン高含有画分を得る方法を開示している。ここで得られる組成物は、α-ラクトアルブミンを５６重量％、β-ラクトグロブリンを３７重量％含むものであり、これは母乳と同様のタンパク質組成を有する組成物や集中治療に用いる経腸栄養剤に利用できることを開示している。
特許文献３は、ホエイ又は精製ホエイタンパク質を用い、灰分含量が ０〜１％のときはｐＨを４〜６に、灰分含量が１〜３％のときはｐＨを６〜８に調整した後、強塩基性陰イオン交換体と接触させることでβ-ラクトグロブリンを該イオン交換体に吸着させ、次いで高イオン強度の溶液によりβ-ラクトグロブリンを該イオン交換体から溶出させる方法を開示しているが、特許文献３には得られる組成物中のβ-ラクトグロブリンおよびα-ラクトアルブミン含量は開示されていない。
上記した方法が開示されているが、工業レベルでより簡便にホエイタンパク質を分画する方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物を製造する方法及びβ-ラクトグロブリンを含む組成物を製造する方法が望まれている。
本発明は、ホエイタンパク質の分画方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物の製造方法及びβ-ラクトグロブリンを含む組成物の製造方法を提供することを課題とする。
上記課題を解決するため、本発明には以下の構成が含まれる。
（１）第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と；第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と；を備え、第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくとも１つと複合体を形成するものであり、第二のホエイタンパク質は、下記（ｉ）、（ｉｉ）
（ｉ）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（ｉｉ）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、の少なくとも１つを満たすホエイタンパク質の分画方法。
（２）第一のホエイタンパク質が主としてβ‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質であり、第二のホエイタンパク質が主としてα‐ラクトアルブミンを含むホエイタンパク質である（１）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（３）膜の分画分子量が５０，０００以下である（１）又は（２）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（４）膜の分画分子量が３００，０００以下である（１）又は（２）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（５）溶液は、第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、ｐＨが５以上１０以下である（１）から（４）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（６）軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下である（１）から（５）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（７）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（１）から（６）のいずれか１つに記載のホエイタンパク質の分画方法。
（８）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と；を含むα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（９）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下である（８）に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１０）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と；を含むα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１１）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下、溶液の軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、である（１０）に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１２）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（８）から（１１）のいずれか１つに記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１３）（８）から（１２）に記載の全ての工程の処理温度を６２℃未満することを特徴とする組成物に含まれるα‐ラクトアルブミンの７０％以上が未変性α‐ラクトアルブミンである組成物の調製方法。
（１４）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；を含むβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１５）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下である（１４）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１６）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液として、β‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；を含むβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１７）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下、溶液の軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、である（１６）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１８）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（１４）から（１７）のいずれか１つに記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１９）金属イオンを低減させる工程を含む（１６）から（１８）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（２０）（１４）から（１９）に記載の全ての工程の処理温度を７２℃未満にすることを特徴とする組成物に含まれるβ‐ラクトグロブリンの７０％以上が未変性β‐ラクトグロブリンである組成物の調製方法。
（１）第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と；第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と；を備え、第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくとも１つと複合体を形成するものであり、第二のホエイタンパク質は、下記（ｉ）、（ｉｉ）
（ｉ）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（ｉｉ）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、の少なくとも１つを満たすホエイタンパク質の分画方法。
（２）第一のホエイタンパク質が主としてβ‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質であり、第二のホエイタンパク質が主としてα‐ラクトアルブミンを含むホエイタンパク質である（１）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（３）膜の分画分子量が５０，０００以下である（１）又は（２）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（４）膜の分画分子量が３００，０００以下である（１）又は（２）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（５）溶液は、第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、ｐＨが５以上１０以下である（１）から（４）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（６）軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下である（１）から（５）に記載のホエイタンパク質の分画方法。
（７）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（１）から（６）のいずれか１つに記載のホエイタンパク質の分画方法。
（８）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と；を含むα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（９）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下である（８）に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１０）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と；を含むα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１１）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下、溶液の軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、である（１０）に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１２）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（８）から（１１）のいずれか１つに記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
（１３）（８）から（１２）に記載の全ての工程の処理温度を６２℃未満することを特徴とする組成物に含まれるα‐ラクトアルブミンの７０％以上が未変性α‐ラクトアルブミンである組成物の調製方法。
（１４）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；を含むβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１５）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下である（１４）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１６）β‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と；分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて溶液を処理する工程と；膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、膜の濃縮液として、β‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と；を含むβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１７）溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液の炭酸イオン及び炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、溶液のｐＨが５以上１０以下、溶液の軽金属イオン及び遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、である（１６）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１８）濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む（１４）から（１７）のいずれか１つに記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（１９）金属イオンを低減させる工程を含む（１６）から（１８）に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
（２０）（１４）から（１９）に記載の全ての工程の処理温度を７２℃未満にすることを特徴とする組成物に含まれるβ‐ラクトグロブリンの７０％以上が未変性β‐ラクトグロブリンである組成物の調製方法。
本発明は、ホエイタンパク質の分画方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物の製造方法及びβ-ラクトグロブリンを含む組成物の製造方法を提供するものである。
本発明のホエイタンパク質の分画方法、α−ラクトアルブミンを含む組成物の製造方法、及びβ-ラクトグロブリンを含む組成物の製造方法について以下に詳細に説明する。
なお、以下α−ラクトアルブミンを「ＬＡ」、β−ラクトグロブリンを「ＬＧ」、ホエイタンパク質濃縮物を「ＷＰＣ」、精製ホエイタンパク質を「ＷＰＩ」と記載することもある。
なお、以下α−ラクトアルブミンを「ＬＡ」、β−ラクトグロブリンを「ＬＧ」、ホエイタンパク質濃縮物を「ＷＰＣ」、精製ホエイタンパク質を「ＷＰＩ」と記載することもある。
本発明者等は、（イ）ホエイタンパク質と、（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を混合すると、（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの複合体（以下、「複合体１」と記載する）が形成されるが、ＬＡは複合体１の形成には関与せず複合体１を形成しないことを知見した。すなわち、本発明の第一の態様は、複合体１にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
また、本発明者等は、（イ）ホエイタンパク質と、（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を混合すると、
（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体、及び／又は、
複合体１−（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体（以下、これらを「複合体２」と記載する）が形成されるが、ＬＡは複合体２の形成には関与せず複合体２を形成しないことを知見した。すなわち、本発明の第二の態様は、複合体２にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体、及び／又は、
複合体１−（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体（以下、これらを「複合体２」と記載する）が形成されるが、ＬＡは複合体２の形成には関与せず複合体２を形成しないことを知見した。すなわち、本発明の第二の態様は、複合体２にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
（ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法）
ホエイタンパク質の分画方法は、第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と；第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と；を備える。
ここで、第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくともいずれか１つと複合体を形成し、また第二のホエイタンパク質は、下記（１）（２）
（１）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（２）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、の少なくとも１つを満たすものである。
ホエイタンパク質の分画方法は、第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と；第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と；を備える。
ここで、第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくともいずれか１つと複合体を形成し、また第二のホエイタンパク質は、下記（１）（２）
（１）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（２）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、の少なくとも１つを満たすものである。
（タンパク質材料）
ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いるタンパク質材料について説明する。
上記（第一、第二の）タンパク質材料は、ホエイタンパク質を含むものであればよく、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の哺乳類に由来するものであり、上述の要件を満たすものであればどのようなものでも用いることができ、１種類あるいは複数の原材料を組み合わせて用いることもできる。
具体的には、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の乳を用いてチーズを製造する際に得られるホエイ、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の乳に乳酸などの酸等を添加した際に得られるホエイ、これらのホエイを粉末にしたもの、これらのホエイ中の乳糖やミネラル等を低減してホエイタンパク質を濃縮したもの等を例示できる。この中で、ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いるタンパク質材料としては、乳糖や脂肪分等の夾雑成分が少なく、ＬＡとＬＧの合計が全固形分に対して５０重量％以上のＷＰＣやＷＰＩが好ましい。
ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いるタンパク質材料について説明する。
上記（第一、第二の）タンパク質材料は、ホエイタンパク質を含むものであればよく、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の哺乳類に由来するものであり、上述の要件を満たすものであればどのようなものでも用いることができ、１種類あるいは複数の原材料を組み合わせて用いることもできる。
具体的には、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の乳を用いてチーズを製造する際に得られるホエイ、牛、水牛、羊、ヤギ、馬等の乳に乳酸などの酸等を添加した際に得られるホエイ、これらのホエイを粉末にしたもの、これらのホエイ中の乳糖やミネラル等を低減してホエイタンパク質を濃縮したもの等を例示できる。この中で、ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いるタンパク質材料としては、乳糖や脂肪分等の夾雑成分が少なく、ＬＡとＬＧの合計が全固形分に対して５０重量％以上のＷＰＣやＷＰＩが好ましい。
第一のホエイタンパク質としては主としてβ‐ラクトグロブリンを例示できる。また第二のホエイタンパク質としては主としてα‐ラクトアルブミンを例示できる。
上記炭酸イオンと炭酸水素イオンについて説明する。
ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いる炭酸イオンと炭酸水素イオンは、水溶液中でこれらのイオンを生じるものであればどのような成分や方法を用いて生成させてもよく、下記に例示した１種類あるいは複数の化合物及び／又は方法を組み合わせて炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じさせればよい。
気体状の二酸化炭素の吹き込み、液状あるいは固体状の二酸化炭素の添加といった二酸化炭素を添加する方法、炭酸水素ナトリウムや炭酸水素カリウムなどの炭酸水素塩や、炭酸ナトリウムや炭酸カリウムなどの炭酸塩を添加する方法、炭酸水を添加する方法等が例示される。
ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いる炭酸イオンと炭酸水素イオンは、水溶液中でこれらのイオンを生じるものであればどのような成分や方法を用いて生成させてもよく、下記に例示した１種類あるいは複数の化合物及び／又は方法を組み合わせて炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じさせればよい。
気体状の二酸化炭素の吹き込み、液状あるいは固体状の二酸化炭素の添加といった二酸化炭素を添加する方法、炭酸水素ナトリウムや炭酸水素カリウムなどの炭酸水素塩や、炭酸ナトリウムや炭酸カリウムなどの炭酸塩を添加する方法、炭酸水を添加する方法等が例示される。
上記軽金属イオンと遷移金属イオンについて説明する。
上記軽金属イオンと遷移金属イオンは、軽金属あるいは遷移金属の１価から３価の陽イオンであればどのようなものでもよく、１種類又は複数の金属イオンを用いることができる。これらの金属イオン源として、軽金属及び／又は遷移金属の無機塩や有機塩を用いることができる。
ＬＡを含む組成物を食品や医薬品に用いる場合は、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンとして、食品やヒト中に存在するナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などを用いることが好ましい。
なお、上記の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じさせる際に、炭酸イオンや炭酸水素イオンの塩を使用する場合は、別途金属イオン源の添加は必須ではない。例えば、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用いた場合は、別途、ナトリウム、あるいはその他の軽金属や遷移金属の無機塩や有機塩を添加してもよいし、添加しなくてもよい。
上記軽金属イオンと遷移金属イオンは、軽金属あるいは遷移金属の１価から３価の陽イオンであればどのようなものでもよく、１種類又は複数の金属イオンを用いることができる。これらの金属イオン源として、軽金属及び／又は遷移金属の無機塩や有機塩を用いることができる。
ＬＡを含む組成物を食品や医薬品に用いる場合は、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンとして、食品やヒト中に存在するナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛などを用いることが好ましい。
なお、上記の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じさせる際に、炭酸イオンや炭酸水素イオンの塩を使用する場合は、別途金属イオン源の添加は必須ではない。例えば、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用いた場合は、別途、ナトリウム、あるいはその他の軽金属や遷移金属の無機塩や有機塩を添加してもよいし、添加しなくてもよい。
ホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法に用いる膜について説明する。上記膜は、複合体１とＬＡを分画する際は、分画分子量が５０，０００以下のもので、ＬＡが透過できる膜であればどのようなものでも使用できる。複合体２とＬＡを分画する際は、分画分子量が３００，０００以下のもので、ＬＡが透過できるものであればどのようなものでも使用できる。
上記の膜処理の透過画分として得られるＬＡを含む組成物を濃縮する場合は、分画分子量が１４，０００以下でＬＡを濃縮可能な膜であればどのようなものでも使用できる。
分画分子量が上記の範囲であれば、膜の材質や膜濾過の方式は一般的に使用されているものであればどのようなものを用いてもよい。
膜の材質はポリアクリルアミド、再生セルロース、ポリエチレン、４フッ化エチレン、ポリプロピレン、酢酸セルロース、ポリアクリロニトリル、ポリイミド、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン等の有機膜や、酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム、酸化チタン、ステンレス、ガラス等の無機膜を例示できる。
膜モジュールの種類は、プリーツ型モジュール、スパイラル型モジュール、モノリス型モジュール、チューブ型モジュール等を例示できる。
膜濾過の方式は全量濾過方式、クロスフロー方式、ダイアフィルトレーション方式等を例示できる。
膜の材質はポリアクリルアミド、再生セルロース、ポリエチレン、４フッ化エチレン、ポリプロピレン、酢酸セルロース、ポリアクリロニトリル、ポリイミド、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン等の有機膜や、酸化アルミニウム、酸化ジルコニウム、酸化チタン、ステンレス、ガラス等の無機膜を例示できる。
膜モジュールの種類は、プリーツ型モジュール、スパイラル型モジュール、モノリス型モジュール、チューブ型モジュール等を例示できる。
膜濾過の方式は全量濾過方式、クロスフロー方式、ダイアフィルトレーション方式等を例示できる。
（フローチャート）
図１はホエイタンパク質の分画方法／ＬＡを含む組成物の製造方法のフローチャートである。ホエイタンパク質の分画方法、及びＬＡを含む組成物を製造する方法について図１のフローチャートを用いて説明する。なお、説明には図１の方法例を用いるが、本発明はこの方法例に限定されるものではない。
図１はホエイタンパク質の分画方法／ＬＡを含む組成物の製造方法のフローチャートである。ホエイタンパク質の分画方法、及びＬＡを含む組成物を製造する方法について図１のフローチャートを用いて説明する。なお、説明には図１の方法例を用いるが、本発明はこの方法例に限定されるものではない。
まずステップ１０１：溶液調製において、（第一、第二の）ホエイタンパク質を含む溶液を調製する。ホエイタンパク質を含む溶液について、金属イオンを含まない場合はステップ１０１ａ、金属イオンを含む場合はステップ１０１ｂに分かて、かかる溶液を調製することが好ましい。
ステップ１０１ａ：ホエイタンパク質を含む溶液が金属イオンを含まない場合、（第一、第二の）ホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、かつｐＨが５以上１０以下となるように前記した原材料を用いて水溶液を調製することが好ましい。
ｐＨが５以上１０以下で上記した濃度のホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを含む水溶液中を調製すると、ＬＡを除くホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンとの相互作用により複合体１が形成される。ＬＡはこの複合体１の形成には関与せず、ＬＡは複合体１を形成しない。前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含む沈殿物は観察されない。タンパク質原料と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン源となる材料はどのような順番で添加してもよい。溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
ｐＨが５以上１０以下で上記した濃度のホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを含む水溶液中を調製すると、ＬＡを除くホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンとの相互作用により複合体１が形成される。ＬＡはこの複合体１の形成には関与せず、ＬＡは複合体１を形成しない。前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含む沈殿物は観察されない。タンパク質原料と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン源となる材料はどのような順番で添加してもよい。溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
ステップ１０１ｂ：ホエイタンパク質を含む溶液が金属イオンを含む場合、（第一、第二の）ホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、軽金属及び／又は遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０％重量以下、かつｐＨが５以上１０以下となるように上述の原材料を用いて水溶液を調製することが好ましい。ｐＨが５以上１０以下で上記した濃度のホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属及び／又は遷移金属イオンとを含む水溶液中を調製することが好ましい。
ＬＡを除くホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属及び／又は遷移金属イオンとの相互作用により複合体２が形成される。ＬＡはこの複合体２の形成には関与せず、ＬＡは複合体２を形成しない。
複合体２の調製において、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、反応して沈殿物を生じるような金属イオン源のみが溶解している状態は好ましくないが、これを除いては、各材料はどのような順番で添加してもよく、前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含む沈殿物は観察されない。
溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
ＬＡを除くホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属及び／又は遷移金属イオンとの相互作用により複合体２が形成される。ＬＡはこの複合体２の形成には関与せず、ＬＡは複合体２を形成しない。
複合体２の調製において、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、反応して沈殿物を生じるような金属イオン源のみが溶解している状態は好ましくないが、これを除いては、各材料はどのような順番で添加してもよく、前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含む沈殿物は観察されない。
溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
次に、ステップ１０３：濃縮処理Ａにおいて、ステップ１０１において得られた溶液を濃縮処理できる膜を用いて濃縮処理を行なう。ステップ１０１において、ＬＡと複合体１を含む水溶液を調製した場合は複合体１を、ＬＡと複合体２を含む水溶液を調製した場合は複合体２を濃縮処理することになる。ＬＡと複合体１を分画する際は、分画分子量が５０，０００以下の膜を用いることが好ましい（ステップ１０３ａ）。ＬＡと複合体２を分画する際は、分画分子量が３００，０００以下の膜を用いることが好ましい（ステップ１０３ｂ）。なお、複合体１、複合体２の含有量に応じて、ステップ１０３ａ、１０３ｂの何れか一方又は両工程を行うことができる。
この処理により得られる濃縮液１には、複合体１を含む水溶液を調製した場合は複合体１、複合体２を含む水溶液を調製した場合は複合体２が多く含まれる。
一方、透過液、即ちＬＡ含有透過液２には、ＬＡが多く含まれるものとなり、ここでＬＡとＬＧが分画され、ＬＡを含む組成物を得ることができる。
この処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、透過液中のＬＡ含量及び／又は濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
この処理により得られる濃縮液１には、複合体１を含む水溶液を調製した場合は複合体１、複合体２を含む水溶液を調製した場合は複合体２が多く含まれる。
一方、透過液、即ちＬＡ含有透過液２には、ＬＡが多く含まれるものとなり、ここでＬＡとＬＧが分画され、ＬＡを含む組成物を得ることができる。
この処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、透過液中のＬＡ含量及び／又は濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
ステップ１０５：濃縮処理Ｂにおいて、ＬＡ含有透過液２について、ＬＡを濃縮処理できる膜を用いて濃縮処理を行なうことができる。これにより、ＬＡを含む組成物の固形分等を所望のものとすることができる。濃縮処理Ｂには、分画分子量が１４，０００以下のＬＡを濃縮可能な膜を用いることが好ましい。
この処理により得られる濃縮液、即ちＬＡ濃縮液３は、ＬＡを含む組成物である。一方、透過液、即ち透過液４はタンパク質をほとんど含まないものとなる。
濃縮処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、ＬＡを含む組成物が効率よく濃縮できるよう適宜調整すればよい。
ステップ１０５のＬＡを含む組成物の濃縮処理は、上記した膜による濃縮のほかに、凍結濃縮や減圧蒸発濃縮等の方法を用いてもよい。
この処理により得られる濃縮液、即ちＬＡ濃縮液３は、ＬＡを含む組成物である。一方、透過液、即ち透過液４はタンパク質をほとんど含まないものとなる。
濃縮処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、ＬＡを含む組成物が効率よく濃縮できるよう適宜調整すればよい。
ステップ１０５のＬＡを含む組成物の濃縮処理は、上記した膜による濃縮のほかに、凍結濃縮や減圧蒸発濃縮等の方法を用いてもよい。
ステップ１０８：ＤＦ処理Ｃにおいて、所望のＬＡの純度や回収率等に応じて、ステップ１０３で得られた濃縮液１（複合体１、あるいは複合体２を含んだ画分）を、ダイアフィルトレーション（以下、「ＤＦ」と記す）処理に供することができる。「ＤＦ処理」とは、濃縮液１を濃縮可能な膜を用いて、濃縮液１に適当な液を適宜添加しながら処理する方法である。ＤＦ処理には、一般的にＤＦ処理に使用される濾過水、イオン交換水、蒸留水、超純水、膜処理工程で生じる透過液、ｐＨやイオン強度等を調整した溶液、又はこれらの複数を混合したものを用いることができる。
このＤＦ処理によって、膜に保持される画分、即ち濃縮液５は、全固形分あたりの複合体１、あるいは複合体２の含量が高くなる。一方、膜の透過液であるＬＡ含有透過液６として、ＬＡを含む組成物が得られる。
ステップ１０８のＤＦ処理Ｃの際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、透過液中のＬＡ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
このＤＦ処理によって、膜に保持される画分、即ち濃縮液５は、全固形分あたりの複合体１、あるいは複合体２の含量が高くなる。一方、膜の透過液であるＬＡ含有透過液６として、ＬＡを含む組成物が得られる。
ステップ１０８のＤＦ処理Ｃの際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、透過液中のＬＡ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
ステップ１１０：濃縮処理Ｄにおいて、ＬＡ含有透過液６はステップ１０５と同様の濃縮処理をすることができる。この処理により得られる濃縮液、即ちＬＡ濃縮液７は、ＬＡを含む組成物である。一方、透過液８は、ステップ１０５で得られる透過液４と同様に、タンパク質をほとんど含まないものとなる。
図１のステップ１０３、１０８、１０５、１１０（濃縮処理Ａ、ＤＦ処理Ｃ、濃縮処理Ｂ又は濃縮処理Ｄ）のそれぞれは２つ以上を組み合わせることができ、所望のＬＡ含量やＬＡ回収率、あるいは設備、エネルギーコスト、排水の制御等の目的により、適宜組合せればよい。
得られたＬＡを含む組成物は、必要に応じて常法により殺菌処理をした後に、常法により乾燥して粉末状態とすることができる。
また、本方法に用いるタンパク質原料の製造工程、及び上記したＬＡを含む組成物の調製方法の工程の温度をＬＡの変性に大きな影響を与えない温度（例えば６２℃未満）とすることで、含まれるＬＡのほとんどが（例えば７０％以上）未変性であるＬＡを含む組成物を得ることができる。
ホエイタンパク質の分画方法／ＬＡを含む組成物の製造方法は、濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含めることができる。
（ＬＧを含む組成物の製造方法）
ＬＧを含む組成物の製造方法は、（イ）ホエイタンパク質と、（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を混合すると、（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの複合体（以下、「ＬＧを含む複合体１」と記載する）が形成されるが、ＬＡはＬＧを含む複合体１の形成には関与せずＬＧを含む複合体１を形成しないという知見に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明はＬＧを含む複合体１にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
ＬＧを含む組成物の製造方法は、（イ）ホエイタンパク質と、（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を混合すると、（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの複合体（以下、「ＬＧを含む複合体１」と記載する）が形成されるが、ＬＡはＬＧを含む複合体１の形成には関与せずＬＧを含む複合体１を形成しないという知見に基づいて完成されたものである。すなわち、本発明はＬＧを含む複合体１にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
また、ＬＧを含む組成物の製造方法は、（イ）ホエイタンパク質と、（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を混合すると、（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体、及び／又は、ＬＧを含む複合体１−（イ）ホエイタンパク質―（ロ）炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン−（ハ）軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの複合体（以下、これらを「ＬＧを含む複合体２」と記載する）が形成されるが、ＬＡはＬＧを含む複合体２の形成には関与せずＬＧを含む複合体２を形成しない。すなわち、本発明はＬＧを含む複合体２にはＬＡが含まれない性質を見出してなされたものである。
ＬＧを含む組成物の製造方法用いるタンパク質材料、炭酸イオンと炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオン、膜、は上述したホエイタンパク質の分画方法及びＬＡを含む組成物の製造方法で用いるものと同じでよい。
（フローチャート）
図２はＬＧを含む組成物の製造方法のフローチャートである。ＬＧを含む組成物を製造する方法について図２のフローチャートを用いて説明する。なお、説明には図２の方法例を用いるが、本発明はこの方法例に限定されるものではない。
図２はＬＧを含む組成物の製造方法のフローチャートである。ＬＧを含む組成物を製造する方法について図２のフローチャートを用いて説明する。なお、説明には図２の方法例を用いるが、本発明はこの方法例に限定されるものではない。
まずステップ２０１：溶液調製において、（第一、第二の）ホエイタンパク質を含む溶液を調製する。その際、ホエイタンパク質を含む溶液について、金属イオンを含まない場合はステップ２０１ａ、金属イオンを含む場合はステップ２０１ｂに分かて、かかる溶液を調製することが好ましい。
ステップ２０１ａ：ホエイタンパク質を含む溶液が金属イオンを含まない場合、（第一、第二の）ホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、かつｐＨが５以上１０以下となるように前記した原材料を用いて水溶液を調製することが好ましい。ｐＨが５以上１０以下で上記した濃度のホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを含む水溶液中を調製すると、ＬＡを除くホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンとの相互作用によりＬＧを含む複合体１が形成される。ＬＡはこのＬＧを含む複合体１の形成には関与せず、ＬＡはＬＧを含む複合体１を形成しない。前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含んだ沈殿物は観察されない。タンパク質原料と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン源となる材料はどのような順番で添加してもよい。溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
ステップ２０１ｂ：ホエイタンパク質を含む溶液が金属イオンを含む場合、（第一、第二の）ホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、軽金属及び／又は遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、かつｐＨが５以上１０以下となるように前記した原材料を用いて水溶液を調製する。ｐＨが５以上１０以下で上記した濃度のホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと軽金属及び／又は遷移金属イオンを含む水溶液中を調製すると、ＬＡを除くホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと軽金属及び／又は遷移金属イオンとの相互作用によりＬＧを含む複合体２が形成される。ＬＡはこのＬＧを含む複合体２の形成には関与せず、ＬＡはＬＧを含む複合体２を形成しない。
ＬＧを含む複合体２の調製において、炭酸イオン及び/又は炭酸水素イオンと、反応して沈殿物を生じるような金属イオン源のみが溶解している状態は好ましくないが、これを除いては、各材料はどのような順番で添加してもよく、前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含んだ沈殿物は観察されない。
溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
ＬＧを含む複合体２の調製において、炭酸イオン及び/又は炭酸水素イオンと、反応して沈殿物を生じるような金属イオン源のみが溶解している状態は好ましくないが、これを除いては、各材料はどのような順番で添加してもよく、前記した原材料を用いた水溶液の調製中または調製後に、タンパク質を含んだ沈殿物は観察されない。
溶液の温度調整は不要であるが、微生物の繁殖を考慮して０℃以上１５℃以下とすることが好ましい。
次に、ステップ２０３：濃縮処理Ａにおいて、ステップ２０１において得られた溶液を濃縮処理できる膜を用いて濃縮処理を行なう。ステップ２０１において、ＬＧを含む複合体１を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体１を、ＬＧを含む複合体２を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体２を濃縮処理することになる。ＬＧを含む複合体１とＬＡを分画する際は、分画分子量が５０，０００以下の膜を用いることが好ましい（ステップ２０３ａ）。ＬＧを含む複合体２とＬＡを分画する際は、分画分子量が３００，０００以下の膜を用いることが好ましい（ステップ２０３ｂ）。なお、ＬＧを含む複合体１、ＬＧを含む複合体２の含有量に応じて、ステップ２０３ａ、２０３ｂの何れか一方又は両工程を行うことができる。
この処理によりＬＡは主に透過液であるＬＡ含有透過液２に移行する。これにより、濃縮液１は、ＬＧを含む複合体１を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体１、ＬＧを含む複合体２を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体２が多く含まれるようになり、ここでＬＧを含む組成物を得ることができる。
この処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
この処理によりＬＡは主に透過液であるＬＡ含有透過液２に移行する。これにより、濃縮液１は、ＬＧを含む複合体１を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体１、ＬＧを含む複合体２を含む水溶液を調製した場合はＬＧを含む複合体２が多く含まれるようになり、ここでＬＧを含む組成物を得ることができる。
この処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
ステップ２０８：ＤＦ処理Ｃにおいて、所望のＬＧの純度や回収率等に応じて、ステップ２０３で取得した濃縮液１（ＬＧを含む複合体１、あるいはＬＧを含む複合体２を含んだ画分）を、ＤＦ処理に供することができる。ＤＦには、一般的にＤＦ処理に使用される濾過水、イオン交換水、蒸留水、超純水、膜処理工程で生じる透過液、ｐＨやイオン強度等を調整した溶液、又はこれらの複数を混合したものを用いることができる。
この処理によって、膜に保持される画分、即ち濃縮液３は、全固形分あたりのＬＧを含む複合体１、あるいはＬＧを含む複合体２の含量が高くなる。一方、膜の透過液であるＬＡ含有透過液５はＬＡを含む組成物となる。
ＤＦ処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
この処理によって、膜に保持される画分、即ち濃縮液３は、全固形分あたりのＬＧを含む複合体１、あるいはＬＧを含む複合体２の含量が高くなる。一方、膜の透過液であるＬＡ含有透過液５はＬＡを含む組成物となる。
ＤＦ処理の際の試料温度、平均運転圧力、膜面流速、濃縮倍率等の処理条件は、濃縮液中のＬＧ含量が全固形分あたり５０〜１００重量％程度となるよう適宜調整することができる。
ステップ２１０：脱金属処理において、濃縮液３（得られたＬＧを含む複合体１、あるいはＬＧを含む複合体２を含む画分）は、必要に応じて金属のキレート作用を有する成分を添加あるいは画分のｐＨを３．０以下に低下できる作用を有する成分を添加し、金属イオンを、ＬＧを含む複合体１又はＬＧを含む複合体２から解離させることができる。
これを膜あるいは電気透析等の処理に供することにより、金属を低減したＬＧを含む組成物を得ることができる。
キレート作用を有する成分としては、クエン酸、アスコルビン酸、エチレンジアミン四酢酸類等が例示できる。
ｐＨを低下させる成分としては、塩酸、硫酸、硝酸類等を例示できる。
これを膜あるいは電気透析等の処理に供することにより、金属を低減したＬＧを含む組成物を得ることができる。
キレート作用を有する成分としては、クエン酸、アスコルビン酸、エチレンジアミン四酢酸類等が例示できる。
ｐＨを低下させる成分としては、塩酸、硫酸、硝酸類等を例示できる。
さらに、必要に応じて常法により、ステップ２１４：殺菌処理をし、ステップ２１６：乾燥して粉末状態とすることが可能である。得られた乾燥粉末は金属の可溶化剤としても使用することができる。
本方法に用いるタンパク質原料の製造工程、および上記したＬＧを含む組成物の工程の温度を全て７８℃未満とすることで、含まれるＬＧのほとんどが（例えば７０％以上）未変性である組成物を得ることができる。
図２のステップ２０３、２０８、２１２、２１４、２１６（濃縮処理Ａ、ＤＦ処理Ｂ、及び脱金属処理や殺菌処理や乾燥処理）のそれぞれは２つ以上を組み合わせることができ、所望のＬＧ含量やＬＧ回収率、あるいは設備、エネルギーコスト、排水の制御等の目的により、適宜組合せればよい。
ＬＧを含む組成物の製造方法は、濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含む含めることができる。また全ての工程の処理温度を７２℃未満し、組成物に含まれるβ‐ラクトグロブリンの７０％以上が未変性であるβ‐ラクトグロブリンを含む組成物を得ることができる。
以下、本発明の実施例を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
（試験例１：複合体２の形成によるＬＡとＬＧの分画）
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。ホエイ粉１は、チーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．９重量％としたものである。ホエイ粉２は、酸ホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．５重量％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。
軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、塩化カリウム、遷移金属イオンの材料は塩化マンガン４水和物、硫酸第一鉄７水和物、塩化第二鉄６水和物、硫酸第二鉄、硫酸銅５水和物を用いた。
比較例の調製には水酸化ナトリウムを用いた。実施例及び比較例に使用した水は全てイオン交換水を用いた。
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。ホエイ粉１は、チーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．９重量％としたものである。ホエイ粉２は、酸ホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．５重量％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。
軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、塩化カリウム、遷移金属イオンの材料は塩化マンガン４水和物、硫酸第一鉄７水和物、塩化第二鉄６水和物、硫酸第二鉄、硫酸銅５水和物を用いた。
比較例の調製には水酸化ナトリウムを用いた。実施例及び比較例に使用した水は全てイオン交換水を用いた。
上記材料を用いて表１に示す実施例１から実施例２０と比較例１から比較例５に係る水溶液を調製した。調製した水溶液のｐＨは７．８〜８．３であった。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて、４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００、１００，０００、及び３００，０００のものと、材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、透過液に含まれるＬＡとＬＧの量を測定した。ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
調製した水溶液は遠心機を用いて、４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００、１００，０００、及び３００，０００のものと、材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、透過液に含まれるＬＡとＬＧの量を測定した。ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
複合体２を形成させ、膜で濾過することにより得られた透過液を、ＬＡを含む透過液として得た実施例１から実施例２０は表１のとおり、ＬＡ／ＬＧ比が高くなった。すなわち、複合体２は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＡと複合体２とが分画され、透過液としてＬＡを含む組成物が得られた。
表１に示した実施例は全ての条件において、金属塩のみが添加された比較例よりもＬＡ／ＬＧ比が高く、実施例１から実施例２０は比較例１から比較例５よりもＬＡとＬＧが効率よく分画されていた。
ＬＡ／ＬＧ比は濾過膜の分画分子量が５０，０００の時に高かった。一方で、膜の材質は再生セルロースとポリエーテルスルホンで差はなかった。
なお、濾過前の実施例１から実施例２０と比較例１から比較例５の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＡ／ＬＧ比は、表１に示す値の９８〜１０３％であり、ほぼ同様であった。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
なお、濾過前の実施例１から実施例２０と比較例１から比較例５の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＡ／ＬＧ比は、表１に示す値の９８〜１０３％であり、ほぼ同様であった。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
（試験例２：複合体１の形成によるＬＡとＬＧの分画）
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。
実施例２１には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用い、水はイオン交換水を用いた。
実施例２２と実施例２３には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として二酸化炭素を飽和させたイオン交換水（炭酸水）を用いた。
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。
実施例２１には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用い、水はイオン交換水を用いた。
実施例２２と実施例２３には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として二酸化炭素を飽和させたイオン交換水（炭酸水）を用いた。
上記した材料を用いて表２に示す実施例２１から実施例２３に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、ここに含まれるＬＡとＬＧの量を高速液体クロマトグラフィーで測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、ここに含まれるＬＡとＬＧの量を高速液体クロマトグラフィーで測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
表２に示したとおり、ホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じる成分とを添加し、これら含む溶液を膜で濾過することにより、得られる透過液のＬＡ／ＬＧ比が高くなった。すなわち、複合体１は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＡと複合体１とが分画され、透過液としてＬＡを含む組成物が得られた。
また、表２に示した実施例２１から実施例２３は全ての条件において、処理前及び表１に示した比較例よりもＬＡ／ＬＧ比が高く、効率よく分画されていた。
また、表２に示した実施例２１から実施例２３は全ての条件において、処理前及び表１に示した比較例よりもＬＡ／ＬＧ比が高く、効率よく分画されていた。
なお、濾過前の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＡ／ＬＧ比は、表２に示す値の９５〜１０１％であり、ほぼ同様であった（データは示していない）。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
（試験例３：ＬＡとＬＧの分画に及ぼすｐＨの影響）
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉３を用いた。ホエイ粉３はチーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９５．１％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は、炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料は、硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。ｐＨの調整には、和光純薬工業(株)の１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液を用いた。水溶液のｐＨは常法に従い測定した。
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉３を用いた。ホエイ粉３はチーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９５．１％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は、炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料は、硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。ｐＨの調整には、和光純薬工業(株)の１ｍｏｌ／Ｌ塩酸水溶液を用いた。水溶液のｐＨは常法に従い測定した。
上記した材料を用いて表３に示す実施例２４から実施例２６に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、ここに含まれるＬＡとＬＧの量を高速液体クロマトグラフィーで測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
ホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じる成分と軽金属及び／又は遷移金属塩とを添加し、これら含む溶液のｐＨ調整した後に膜で濾過することにより得た透過液のＬＡ／ＬＧ比は、すべてのｐＨで処理前よりも高かった。すなわち、複合体２は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＡと複合体２とが分画され、透過液としてＬＡを含む組成物が得られた。実施例２４から実施例２６のＬＡの回収率はそれぞれ３５％、３９％、２９％であった。
（試験例４：ＬＡを含む組成物の製造）
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属及び／又は遷移金属イオンの材料は硫酸第一鉄７水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属及び／又は遷移金属イオンの材料は硫酸第一鉄７水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
上記した材料を用いて表４に示す実施例２７に係る水溶液を３０ｋｇ調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇと透過液２０ｋｇ（ＬＡを含む組成物）を得た。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇと透過液２０ｋｇ（ＬＡを含む組成物）を得た。
この透過液２０ｋｇを濾過膜（ポリエーテルスルホン素材、分画分子量１０，０００、膜面積１．００平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濃縮処理を行なった。処理条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液２ｋｇ（ＬＡを含む組成物）と透過液１８ｋｇを得た。透過液へのＬＡとＬＧの移行は認められなかった。
続いて、前段落で得られた濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落と同じである。ＤＦ処理は透過液（ＬＡを含む組成物）が１８ｋｇとなった時点で終了した。
前々段落の濃縮液と前段落の透過液を常法に従い加熱殺菌処理した後に、凍結乾燥処理し、粉末状のＬＡを含む組成物（実施例２７）を得た。
乾燥粉末状のＬＡを含む組成物のＬＡ／ＬＧ比は６．８であり、処理前のホエイ粉１の０．３から著しく高かった。ＬＡの回収率は８５％であった。
乾燥粉末状のＬＡを含む組成物のＬＡ／ＬＧ比は６．８であり、処理前のホエイ粉１の０．３から著しく高かった。ＬＡの回収率は８５％であった。
（試験例５：未変性のＬＡを含む組成物の製造）
材料
タンパク質源として生乳（全固形分１４％、脂肪分４．１％）を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオン及び／又は遷移金属の材料は塩化第二鉄６水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
材料
タンパク質源として生乳（全固形分１４％、脂肪分４．１％）を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオン及び／又は遷移金属の材料は塩化第二鉄６水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
生乳を遠心機で処理し脂肪分を除去した脱脂乳を得た。この脱脂乳を濾過膜（セラミック素材、分画分子量０．１μｍ、膜面積１．０５平方メートル）を用いてクロスフロー方式により濾過処理を行い、０．０５重量％のホエイタンパク質を含んだ透過液を得た。
このホエイタンパク質を含む水溶液に０．０５重量％の炭酸水素ナトリウム及び鉄イオンとして０．００５重量％となるように塩化第二鉄６水和物を加えた実施例２８に係る水溶液を３０ｋｇ調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理した。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇと、透過液（ＬＡを含む組成物）２０ｋｇを得た。この透過液のＬＡ／ＬＧ比４．１３であり、処理前の０．５から著しく高くなった。
前段落で得られた濃縮液のＤＦ処理を行った。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。透過液（ＬＡを含む組成物）が１８ｋｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
前々段落と前段落で得られた透過液を濾過膜（ポリエーテルスルホン素材、分画分子量１０，０００、膜面積１．００平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．４ＭＰａであった。この処理により濃縮液（ＬＡを含む組成物）４ｋｇと透過液３４ｋｇを得た。透過液へのＬＡとＬＧの移行はなかった。
前段落の濃縮液を常法に従い、凍結乾燥処理し乾燥粉末状のＬＡを含む組成物（実施例２８）を得た。実施例２８のＬＡ／ＬＧ比は４．１であり、変性したＬＡは１％であった。またＬＡの回収率は６２％であった。
（試験例６：ＬＡを含む組成物の製造）
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉２を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料は硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉２を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料は硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
表５に記載の実施例２９に係る水溶液を３００ｇ調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルホン素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．０５０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転２．５ｂａｒであった。この処理により濃縮液９０ｇと透過液２００ｇ（ＬＡを含む組成物）を得た。
この水溶液を、濾過膜（ポリエーテルスルホン素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．０５０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転２．５ｂａｒであった。この処理により濃縮液９０ｇと透過液２００ｇ（ＬＡを含む組成物）を得た。
前段落で得られた濃縮液をＤＦ処理に供した。使用した濾過膜と運転条件は前段落の記載と同じである。透過液（ＬＡを含む組成物）が１８０ｇとなった時点でＤＦ処理を終了した。
前々段落と前段落の透過液３８０ｇを濾過膜（ポリエーテルスルホン素材、分画分子量５，０００、膜面積０．０５０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転２．５ｂａｒであった。この処理により濃縮液４０ｇ（ＬＡを含む組成物）と透過液３４０ｇを得た。透過液へのＬＡとＬＧの移行は認められなかった。
この濃縮液を常法に従い、凍結乾燥処理し乾燥粉末状のＬＡを含む組成物（実施例２９）を得た。乾燥粉末中のＬＡ／ＬＧ比は５．２であり、変性したＬＡは３１％であった。また、ＬＡの回収率は９６％であった。
（試験例7：複合体２の形成によるＬＡとＬＧの分画）
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉２を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、遷移金属イオンの材料は硫酸第二鉄を用いた。水はイオン交換水を用いた。上記材料を用いて表６に示す実施例３０から実施例３６に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉２を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、遷移金属イオンの材料は硫酸第二鉄を用いた。水はイオン交換水を用いた。上記材料を用いて表６に示す実施例３０から実施例３６に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて、４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜を透過した溶液を回収し、透過液に含まれるＬＡとＬＧの量を測定した。ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
濾過膜を透過した溶液を回収し、透過液に含まれるＬＡとＬＧの量を測定した。ＬＡとＬＧの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
複合体２を形成させ、膜で濾過することにより得られた透過液を、ＬＡを含む透過液として得た実施例３０から実施例３６、は表６のとおりＬＡ／ＬＧ比が高くなった。すなわち、複合体２は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＡと複合体２とが分画され、透過液としてＬＡを含む組成物が得られた。
また、表６に示した実施例３０から実施例３６は全ての条件において、処理前及び表１に示した比較例よりもＬＡ／ＬＧ比が高く、効率よく分画されていた。ＬＡの回収率は３３％から４５％であった。
また、表６に示した実施例３０から実施例３６は全ての条件において、処理前及び表１に示した比較例よりもＬＡ／ＬＧ比が高く、効率よく分画されていた。ＬＡの回収率は３３％から４５％であった。
（試験例８）
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。ホエイ粉１は、チーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．９重量％としたものである。ホエイ粉２は、酸ホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．５重量％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。
軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、塩化カリウム、遷移金属イオンの材料は塩化マンガン４水和物、硫酸第一鉄７水和物、塩化第二鉄６水和物、硫酸第二鉄、硫酸銅５水和物を用いた。
比較例の調製には水酸化ナトリウムを用いた。実施例及び比較例に使用した水は全てイオン交換水を用いた。
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。ホエイ粉１は、チーズホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．９重量％としたものである。ホエイ粉２は、酸ホエイをイオン交換と限外濾過処理に供し、ホエイタンパク質含量を９３．５重量％としたものである。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。
軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、塩化カリウム、遷移金属イオンの材料は塩化マンガン４水和物、硫酸第一鉄７水和物、塩化第二鉄６水和物、硫酸第二鉄、硫酸銅５水和物を用いた。
比較例の調製には水酸化ナトリウムを用いた。実施例及び比較例に使用した水は全てイオン交換水を用いた。
表７に示す実施例３７から実施例５６と比較例６から比較例１０に係る水溶液を調製した。調製した水溶液のｐＨは７．８〜８．３であった。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００、１００，０００、及び３００，０００のものと、材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜に保持された濃縮液として実施例３７から実施例５６と比較例６から比較例１０を取得し、濃縮液に含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００、１００，０００、及び３００，０００のものと、材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜に保持された濃縮液として実施例３７から実施例５６と比較例６から比較例１０を取得し、濃縮液に含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
表７に示したとおり、ホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じる成分と軽金属及び／又は遷移金属塩とを添加し、これらを含む溶液を膜で濾過することにより、得られる濃縮液のＬＧ／ＬＡ比は高くなっていた。すなわち、ＬＧを含む複合体２は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＧを含む複合体２とＬＡとが分画され、濃縮液としてＬＧを含む組成物が得られた。
表７に示した実施例は全ての条件において、軽金属のみが添加された比較例よりもＬＧ／ＬＡ比が高く、実施例３７から実施例５６は比較例６から比較例１０よりも効率よくＬＧとＬＡが分画されていた。
ＬＧ／ＬＡ比は濾過膜の分画分子量が５０，０００の時に高かった。一方で、膜の材質は再生セルロースとポリエーテルスルホンで差はなかった。
なお、濾過前の実施例３７から実施例５６と比較例６から比較例１０の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＧ／ＬＡ比は、表７に示す値の９７〜１０２％であり、ほぼ同様であった（データは示していない）。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
なお、濾過前の実施例３７から実施例５６と比較例６から比較例１０の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＧ／ＬＡ比は、表７に示す値の９７〜１０２％であり、ほぼ同様であった（データは示していない）。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
（試験例９）
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料として硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属／遷移金属イオンの材料として硫酸銅５水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
上記材料を用いて表８の実施例５７に係る水溶液３０ｋｇを調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇ（ＬＧを含む組成物）と透過液２０ｋｇを得た。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により濃縮液１０ｋｇ（ＬＧを含む組成物）と透過液２０ｋｇを得た。
続いて、得られた１０ｋｇの濃縮液をＤＦ処理に供した。ＤＦ処理は透過液が１８ｋｇ得られた時点で終了した。
ＤＦ処理した濃縮液にＬ−アスコルビン酸を１重量％となるように添加し、ゆるやかに６０分間、室温で攪拌後、これをさらに濾過処理に供した。濾過は濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用い、１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａの条件でおこなった。
前段落で得た濃縮液を凍結乾燥処理により粉末化した。これにより、処理前のＬＧ／ＬＡ比３．２４と比較してＬＧ／ＬＡ比が高くなったＬＧ／ＬＡ比が７．２１、金属含量が０．５重量％のＬＧを含む組成物を得た（実施例５７）。
（試験例１０）
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。
実施例５８の調製には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用い、水はイオン交換水を用いた。
実施例５９と実施例６０の調製には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として二酸化炭素を飽和させたイオン交換水（炭酸水）を用いた。
材料
ホエイタンパク質材料としてホエイ粉１とホエイ粉２を用いた。
実施例５８の調製には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として炭酸水素ナトリウムを用い、水はイオン交換水を用いた。
実施例５９と実施例６０の調製には炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料として二酸化炭素を飽和させたイオン交換水（炭酸水）を用いた。
上記した材料を用いて表９に示す実施例５８から実施例６０に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濃縮液を回収し、ここに含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
調製した水溶液は遠心機を用いて４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質がポリエーテルスルホンで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濃縮液を回収し、ここに含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
表９に示したとおり、ホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じる成分とを添加し、これら含む溶液を膜で濾過することにより、得られる濃縮液のＬＧ／ＬＡ比が高くなった。すなわち、ＬＧを含む複合体１は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＧを含む複合体１とＬＡとが分画され、濃縮液としてＬＧを含む組成物が得られた。
また、表９に示した実施例５８から実施例６０は全ての条件において、処理前及び表７に示した比較例６から比較例１０よりもＬＧ／ＬＡ比が高く、効率よくＬＧとＬＡが分画されていた。
また、表９に示した実施例５８から実施例６０は全ての条件において、処理前及び表７に示した比較例６から比較例１０よりもＬＧ／ＬＡ比が高く、効率よくＬＧとＬＡが分画されていた。
なお、濾過前の実施例５８から実施例６０の水溶液を、１０℃で２４時間静置してから、上記と同様に濾過して得られる透過液のＬＧ／ＬＡ比は、表９に示す値の９５〜１０１％であり、ほぼ同様であった（データは示していない）。また、２４時間静置後の各溶液に沈殿物は観察されなかった。
（試験例１１）
実施例６０を凍結乾燥により粉末化した（実施例６１）。１０℃で1ヶ月間保存した実施例６１の水分含量は５．１重量％であった。これをイオン交換水に溶解させ、１重量％の水溶液を調製した。この水溶液に塩化第二鉄６水和物を０．０１重量％となるように添加し、攪拌後、９５℃達温の条件で加熱殺菌した。加熱殺菌後、直ちに１０℃に冷却し、冷却直後と１０℃で３日間保存した後の水溶液の状態を目視で観察した。
その結果、冷却直後と１０℃保存３日間後のいずれにおいても、沈殿物や白濁は認められず、粉末化したＬＧを含む組成物は、金属可溶化能を有していた。
実施例６０を凍結乾燥により粉末化した（実施例６１）。１０℃で1ヶ月間保存した実施例６１の水分含量は５．１重量％であった。これをイオン交換水に溶解させ、１重量％の水溶液を調製した。この水溶液に塩化第二鉄６水和物を０．０１重量％となるように添加し、攪拌後、９５℃達温の条件で加熱殺菌した。加熱殺菌後、直ちに１０℃に冷却し、冷却直後と１０℃で３日間保存した後の水溶液の状態を目視で観察した。
その結果、冷却直後と１０℃保存３日間後のいずれにおいても、沈殿物や白濁は認められず、粉末化したＬＧを含む組成物は、金属可溶化能を有していた。
（試験例１２）
タンパク質源として生乳（全固形分１４％、脂肪分４．１％）を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオン及び／又は遷移金属の材料は塩化第二鉄６水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
タンパク質源として生乳（全固形分１４％、脂肪分４．１％）を用いた。
炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオン及び／又は遷移金属の材料は塩化第二鉄６水和物を用いた。水はイオン交換水を用いた。
ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
生乳を遠心機で処理し脂肪分を除去した脱脂乳を得た。この脱脂乳を濾過膜（セラミック素材、分画分子量０．１μｍ、膜面積１．０５平方メートル）を用いてクロスフロー方式で濾過処理を行い、０．０５重量％のホエイタンパク質を含んだ透過液を得た。
このホエイタンパク質を含む水溶液に０．０５重量％の炭酸水素ナトリウム、及び鉄イオンとして０．００５重量％となるように塩化第二鉄６水和物を加えた実施例６２に係る水溶液を３０ｋｇ調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
この水溶液を、濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用いてクロスフロー方式により濾過処理を行なった。濾過処理の条件は温度１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａであった。この処理により透過液２０ｋｇと、濃縮液としてＬＧを含む組成物１０ｋｇを得た。
この濃縮液のＬＧ／ＬＡ比は５．２２であり、処理前の２．１４から著しく高くなった。
この濃縮液をさらにＤＦ処理に供した。ＤＦ処理は透過液量１８ｋｇが得られた時点で終了した。
この濃縮液をさらにＤＦ処理に供した。ＤＦ処理は透過液量１８ｋｇが得られた時点で終了した。
ＤＦ処理した濃縮液にＬ−アスコルビン酸を１重量％となるように添加し、ゆるやかに６０分間、室温で攪拌後、これをさらに濾過処理に供した。濾過は濾過膜（ポリアクリロニトリル素材、分画分子量５０，０００、膜面積０．２０平方メートル）を用い、クロスフロー方式により１０℃、平均運転圧力０．２ＭＰａの条件でおこなった。
前段落の濃縮液を常法に従い、凍結乾燥処理し乾燥粉末状のＬＧを含む組成物（実施例６２）を得た。乾燥粉末中のＬＧ／ＬＡ比は４．９８であり、変性したＬＧは１％であった。またＬＧの回収率は６５％であった。
（試験例１３）
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉２を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、遷移金属イオンの材料は硫酸第二鉄を用いた。水はイオン交換水を用いた。上記材料を用いて表１０に示す実施例６３から実施例６９に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
材料
ホエイタンパク質材料はホエイ粉２を用いた。炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの材料は炭酸水素ナトリウムを用いた。軽金属イオンの材料は塩化マグネシウム６水和物、遷移金属イオンの材料は硫酸第二鉄を用いた。水はイオン交換水を用いた。上記材料を用いて表１０に示す実施例６３から実施例６９に係る水溶液を調製した。水溶液の調製中あるいは調製後に沈殿物は観察されなかった。
調製した水溶液は遠心機を用いて、４０００Ｇ、１５分の条件で全量濾過方式により濾過した。濾過膜は材質が再生セルロースで分画分子量が５０，０００のものを用いた。
濾過膜に保持された溶液を回収し、濃縮液に含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
濾過膜に保持された溶液を回収し、濃縮液に含まれるＬＧとＬＡの量を測定した。ＬＧとＬＡの量は高速液体クロマトグラフィーを用いて測定した。測定条件はＢｏｒｄｉｎらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ．（２００１）９２８、１、６３―７６）に従った。
表１０に示したとおり、ホエイタンパク質と炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンを生じる成分と軽金属及び／又は遷移金属塩とを添加し、これらを含む溶液を膜で濾過することにより、得られる濃縮液のＬＧ／ＬＡ比は高くなっていた。すなわち、ＬＧを含む複合体２は濾過膜を透過せず、ＬＡが濾過膜を透過する傾向が認められ、ＬＧを含む複合体２とＬＡとが分画され、濃縮液としてＬＧを含む組成物が得られた。
Claims (20)
- 第一のホエイタンパク質及び第二のホエイタンパク質を含む溶液を調製する工程と、
前記第一のホエイタンパク質及び前記第二のホエイタンパク質を膜により分離する工程と、を備え、
前記第一のホエイタンパク質は、炭酸イオン、炭酸水素イオン、軽金属イオン及び遷移金属イオンの少なくとも１つと複合体を形成するものであり、
前記第二のホエイタンパク質は、下記（１）、（２）
（１）炭酸イオン及び炭酸水素イオンのいずれとも複合体を形成しない、
（２）軽金属イオン及び遷移金属イオンのいずれとも複合体を形成しない、
の少なくとも１つを満たすことを特徴とするホエイタンパク質の分画方法。 - 前記第一のホエイタンパク質が主としてβ‐ラクトグロブリンを含むホエイタンパク質であり、前記第二のホエイタンパク質が主としてα‐ラクトアルブミンを含むホエイタンパク質であることを特徴とする請求項１に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- 前記膜の分画分子量が５０，０００以下であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- 前記膜の分画分子量が３００，０００以下であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- 前記溶液は、前記第一のホエイタンパク質及び前記第二のホエイタンパク質の全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、前記炭酸イオン及び／又は前記炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、ｐＨが５以上１０以下であることを特徴とする請求項１から請求項４に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- 前記軽金属イオン及び／又は前記遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下であることを特徴とする請求項１から請求項５に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- 濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含むことを特徴とする請求項１から請求項６のいずれか１項に記載のホエイタンパク質の分画方法。
- ホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と、
分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて前記溶液を処理する工程と、
前記膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、前記膜の濃縮液としてβ‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と、
前記α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と、を含むことを特徴とするα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。 - 前記溶液の前記ホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液のｐＨが５以上１０以下であることを特徴とする請求項８に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。 - ホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と、
分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて前記溶液を処理する工程と、
前記膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、前記膜の濃縮液として前記β‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と、
前記α‐ラクトアルブミンを含む溶液を分画分子量が１４，０００以下の膜で処理する工程と、を含むことを特徴とするα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。 - 前記溶液のホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液のｐＨが５以上１０以下、
前記溶液の軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、であることを特徴とする請求項１０に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。 - 濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含むことを特徴とする請求項８から請求項１１のいずれか１項に記載のα‐ラクトアルブミンを含む組成物の調製方法。
- 請求項８から請求項１２に記載の全ての工程の処理温度を６２℃未満することを特徴とする組成物に含まれるα‐ラクトアルブミンの７０％以上が未変性α‐ラクトアルブミンである前記組成物の調製方法。
- ホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、を含む溶液を調製する工程と、
分画分子量が５０，０００以下の膜を用いて前記溶液を処理する工程と、
前記膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、前記膜の濃縮液として前記β‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と、を含むことを特徴とするβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。 - 前記溶液の前記ホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液のｐＨが５以上１０以下であることを特徴とする請求項１４に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。 - ホエイタンパク質と、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンと、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンと、を含む溶液を調製する工程と、
分画分子量が３００，０００以下の膜を用いて前記溶液を処理する工程と、
前記膜の透過液としてα‐ラクトアルブミンを含む溶液と、前記膜の濃縮液として、前記β‐ラクトグロブリン、炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオン、軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンで形成された複合体を含む溶液と、を得る工程と、を含むことを特徴とするβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。 - 前記溶液の前記ホエイタンパク質の濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液の炭酸イオン及び／又は炭酸水素イオンの全濃度が０．００１重量％以上３５重量％以下、
前記溶液のｐＨが５以上１０以下、
前記溶液の軽金属イオン及び／又は遷移金属イオンの全濃度が０．００００１重量％以上１０重量％以下、であることを特徴とする請求項１６に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。 - 濃縮工程、ダイアフィルトレーション工程、殺菌工程、凍結工程、乾燥工程、粉末化工程から選択される１つ、又は複数の工程を含むことを特徴とする請求項１４から請求項１７のいずれか１項に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
- 前記軽金属イオン及び／又は前記遷移金属イオンを低減させる工程を含むことを特徴とする請求項１６から請求項１８に記載のβ‐ラクトグロブリンを含む組成物の調製方法。
- 請求項１４から請求項１９に記載の全ての工程の処理温度を７２℃未満することを特徴とする組成物に含まれるβ‐ラクトグロブリンの７０％以上が未変性β‐ラクトグロブリンである前記組成物の調製方法。
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