JPWO2017006969A1 - 検出装置および検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
図1は、本実施の形態に係るSPFS装置100の構成を示す模式図である。図1に示されるように、SPFS装置100は、光照射部110、光検出部120、送液部130、搬送部140および制御部150を有する。SPFS装置100は、搬送部140のチップホルダー(ホルダー)142に検出チップ10を装着した状態で使用される。そこで、先に検出チップ10について説明し、その後にSPFS装置100について説明する。
検出チップ10は、入射面21、成膜面22および出射面23を有するプリズム20と、成膜面22上に配置され、被検出物質を補足するための捕捉体が固定化された金属膜30と、金属膜30上に配置された流路蓋40とを有する。検出チップ10は、好ましくは各片の長さが数mm〜数cmの構造物であるが、「チップ」の範疇に含まれないようなより小型の構造物、またはより大型の構造物であってもよい。
次に、SPFS装置100の各構成要素について説明する。前述のとおり、SPFS装置100は、光照射部110、光検出部120、送液部130、搬送部140および制御部150を有する。
次に、本実施の形態に係るSPFS装置100の検出動作(本発明の実施の形態に係る検出方法)について説明する。図2は、SPFS装置100の動作手順の一例を示すフローチャートである。本実施の形態では、検体が、比重の異なる複数種類の物質を含む検体である例で説明する。
以上のように、本実施の形態に係る検出方法およびSPFS装置100では、容器131内で検体を十分に攪拌した後、1次反応に必要な量の検体を検出チップ10の流路41内に供給する。それにより、検出チップ10の流路41内に供給される検体の濃度分布が、本来の検体の濃度分布と大きく異ならないので、検体に含まれる被検出物質の量を正確に検出することができる。
(1)ヘマトクリット値の測定
ヘマトクリット値40%の全血サンプルを、容器に500μL注入し、30分間放置し、血球を沈降させた。血球が沈降したサンプルを収容した容器を、本実施の形態に係るSPFS装置にセットした。そして、ピペットチップの先端を、容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置(血球が沈降した領域内)まで移動させた状態で容器内のサンプルを200μL吸引した後、ピペットチップの先端をサンプルの液面よりも2mm上まで移動させた状態で、吸引したサンプル200μLを容器内に吐出した。サンプルの吐出速度は、10000μL/minとした。この攪拌操作を5回行った。撹拌後、容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置から容器内のサンプルを100μL採取し、ミクロヘマトクリット法にてヘマトクリット値を測定した。その結果、ヘマトクリット値は42%であり、本来のヘマトクリット値(40%)からの大きなズレはみられなかった。
(検出チップの準備)
金属膜上の反応場に捕捉体として抗トロポニンI抗体(抗cTnI抗体)が固定されている検出チップを準備した。準備した検出チップを、上記SPFS装置のチップホルダーに設置した。
(全血サンプルの攪拌・検出)
1)抗原としてトロポニンI(cTnI)を含むヘマトクリット値40%の全血サンプルを容器に500μL注入した。サンプルを収容した容器を上記SPFS装置にセットし、前記(1)と同じ条件で撹拌した。その後、容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置(血球が沈降した領域内)からサンプルを100μL採取し、検出チップの流路に供給し、サンドイッチイムノアッセイ法にてアッセイを行った。それにより、シグナル値S1を得た。
2)前記1)と同じ全血サンプルを容器に500μL注入した。その直後に、容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置からサンプルを100μL採取し、検出チップの流路に供給して前記1)と同様のアッセイを行い、シグナル値S2を得た。シグナル値S2は、血球が沈降していない状態でのシグナル値に対応する。
3)前記1)と2)で得られたシグナル値を下記式に当てはめて、シグナル値の低下率を算出した。
シグナル値の低下率(%)={(シグナル値S2−シグナル値S1)/シグナル値S2)}×100
その結果、シグナル値の低下率は2%であり、血球の沈降がない場合と比べて、ほとんど変わらないことがわかった。
(1)ヘマトクリット値の測定
容器内のサンプルの撹拌を行わなかった以外は実施例1と同様にしてヘマトクリット値を測定した。その結果、ヘマトクリット値は62%であり、本来のヘマトクリット値(40%)とは大きく異なることがわかった。
容器内のサンプルの攪拌を行わなかった以外は実施例1と同様にしてアッセイを行った。その結果、シグナル値の低下率は30%程度であり、血球の沈降がない状態と比べてシグナル値の低下率が大きいことがわかった。
(1)ヘマトクリット値の測定
ピペットチップの先端を容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置(血球が沈降した領域内)に固定した状態で、容器内のサンプルを200μL吸引した後、吸引したサンプルを容器内に吐出する撹拌操作を5回行った以外は実施例1と同様にしてヘマトクリット値を測定した。その結果、ヘマトクリット値は60%であり、本来のヘマトクリット値(40%)とは大きく異なることがわかった。
1)の工程において、ピペットチップの先端を容器の底面から容器の高さの1/7の高さにある位置(血球が沈降した領域内)に固定した状態で、容器内のサンプルを200μL吸引した後、吸引したサンプルを容器内に吐出する撹拌操作を5回行った以外は実施例1と同様にしてアッセイを行った。その結果、シグナル値の低下率は28%程度であり、血球の沈降がない状態と比べてシグナル値の低下が大きいことがわかった。
20 プリズム
21 入射面
22 成膜面
23 出射面
30 金属膜
40 流路蓋
41 流路
100 SPFS装置
110 光照射部
111 光源ユニット
112 角度調整部
113 光源制御部
120 光検出部
121 受光光学系ユニット
122 位置切り替え部
123 センサー制御部
124 第1レンズ
125 光学フィルター
126 第2レンズ
127 受光センサー
130 送液部
131 容器
132 ピペット
133 ピペット移動部
134 送液ポンプ駆動部
135 シリンジ
136 プランジャー
137 ピペットノズル
138 ピペットチップ
140 搬送部
141 搬送ステージ
142 チップホルダー
150 制御部
α 励起光
β 蛍光
γ プラズモン散乱光
Claims (18)
- 検体に含まれる被検出物質を検出する検出装置であって、
ピペットチップが着脱可能であり、容器内の検体を吸引または吐出するピペットと、
前記ピペットを移動させるピペット移動部と、
前記ピペットおよび前記ピペット移動部を制御する制御部と、
を有し、
前記ピペット移動部が前記ピペットチップの先端を前記容器の下方側の位置aまで移動させた状態で前記ピペットが前記容器内の少なくも一部の検体を吸引した後、前記ピペット移動部が前記ピペットチップの先端を前記位置aよりも上の位置bまで移動させた状態で前記ピペットが吸引した検体を前記容器内に吐出して前記検体を攪拌するように、前記制御部が前記ピペットおよび前記ピペット移動部を制御する、検出装置。 - 前記ピペット移動部は、前記ピペットを鉛直方向に移動させる、請求項1に記載の検出装置。
- 前記ピペットが吸引した検体を吐出するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体の液面よりも上にある、請求項1または2に記載の検出装置。
- 前記ピペットが吸引した検体を吐出するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体の液面から0mm超15mm以下離れている、請求項3に記載の検出装置。
- 前記ピペットが吸引した検体を吐出するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体の液面の中央部に吐出されるように位置決めされる、請求項3または4に記載の検出装置。
- 前記ピペットが吸引した検体を吐出するときの吐出速度は、1000〜15000μl/minである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記ピペットが吸引または吐出する検体の量は、前記容器に収容された検体の量の20体積%以上である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記制御部は、前記ピペットが検体を吸引および吐出することの繰り返し回数、および前記ピペットが前記検体を吸引または吐出するときの前記ピペットチップの先端の位置の少なくとも一つを、検体の種類または量に応じて切り替える、請求項1〜7のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記検体は、比重の異なる複数種類の物質を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記検体は、血液または血液の希釈液である、請求項9に記載の検出装置。
- 前記ピペットが前記容器内の検体を吸引するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体のうち比重が相対的に高い物質が偏在した領域内にある、請求項9または10に記載の検出装置。
- ピペットに装着されたピペットチップの先端を検体が収容された容器の下方側の位置aまで移動させた状態で前記ピペットが前記容器内の検体の少なくとも一部を吸引した後、前記ピペットチップの先端を前記位置aよりも上の位置bまで移動させた状態で前記ピペットが吸引した検体を吐出して前記容器内の検体を攪拌する工程と、
攪拌された検体に含まれる被検出物質を検出する工程と、を含む、検出方法。 - 前記攪拌する工程において前記ピペットが吸引した検体を吐出するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体の液面よりも上にある、請求項12に記載の検出方法。
- 前記攪拌する工程において前記ピペットが吸引した検体を吐出するときの吐出速度は、1000〜15000μl/minである、請求項12または13に記載の検出方法。
- 前記検体は、比重の異なる複数種類の物質を含む、請求項12〜14のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記検体は、血液または血液の希釈液である、請求項15に記載の検出方法。
- 前記攪拌する工程において前記ピペットが前記容器内の検体を吸引するとき、前記ピペットチップの先端は、前記容器内の検体のうち比重が相対的に高い物質が偏在した領域内にある、請求項15または16に記載の検出方法。
- 前記検出する工程は、表面プラズモン共鳴励起増強蛍光分光法(SPFS)により検出を行う、請求項12〜17のいずれか一項に記載の検出方法。
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