JPWO2016052657A1 - 万能性幹細胞の培養方法 - Google Patents
万能性幹細胞の培養方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2016052657A1 JPWO2016052657A1 JP2016552141A JP2016552141A JPWO2016052657A1 JP WO2016052657 A1 JPWO2016052657 A1 JP WO2016052657A1 JP 2016552141 A JP2016552141 A JP 2016552141A JP 2016552141 A JP2016552141 A JP 2016552141A JP WO2016052657 A1 JPWO2016052657 A1 JP WO2016052657A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- culture
- spheroids
- cell
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/40—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of pressure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/72—Transferases (EC 2.)
- C12N2501/727—Kinases (EC 2.7.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2525/00—Culture process characterised by gravity, e.g. microgravity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2531/00—Microcarriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2539/00—Supports and/or coatings for cell culture characterised by properties
Abstract
Description
[1]単離された万能性幹細胞を擬微小重力環境下で培養することにより、万能性幹細胞を未分化性を保持した状態で増殖させ、万能性幹細胞のスフェロイドを形成及び成長させることを含む、万能性幹細胞の培養方法。
本発明において、「擬微小重力環境」とは、宇宙空間等における微小重力環境を模して人工的に作り出された微小重力(simulated microgravity)環境を意味する。こうした擬微小重力環境は、例えば、回転で生じる応力によって地球の重力を相殺することにより実現される。回転している物体は、地球の重力と応力のベクトル和で表される力を受けるため、その大きさと方向は時間により変化する。回転している物体には、結局、時間平均すると物体には地球の重力(1g)よりもはるかに小さな重力しか作用しないこととなり、宇宙空間によく似た「擬微小重力環境」が実現される。
本発明の方法で培養する万能性幹細胞は、限定するものではないが、好ましくはiPS細胞とも呼ばれる人工多能性幹細胞(induced pluripotent stem cells)、又はES細胞と呼ばれる胚性幹細胞であってよい。iPS細胞は体細胞に初期化因子を導入して(典型的には1つ又は複数の初期化誘導遺伝子を導入して)リプログラミングすることによって誘導される多能性幹細胞であり、当業者には周知である。初期化因子としては、Octファミリー、Klfファミリー、Soxファミリー、Mycファミリー、Nanogファミリー、Linファミリー等が挙げられるが、これらに限定されない。初期化因子の具体例としては、以下に限定されないが、Oct3/4、Klf4、Klf2、Sox1、Sox2、Sox3、Sox15、Sox17、c-Myc、N-Myc、L-Myc、T58A、Nanog、Lin28、Fbx15、ERas、ECAT15-2、Tcl1、β-カテニン、Lin28b、Sall1、Sall4、Esrrb、Nr5a2、Tbx3、p53shRNA、及びGlis1が挙げられる。初期化因子として、少なくともOctファミリー、特にOct3/4を体細胞に導入することが好ましい。初期化因子の導入は、初期化因子をコードする遺伝子(初期化誘導遺伝子)を体細胞に導入することにより、行うことができる。
本発明の方法により培養した万能性幹細胞(増殖させた万能性幹細胞又は生成させたスフェロイドから分散させた万能性幹細胞)やスフェロイドを得た後、それらの細胞を分化誘導することができる。例えば、万能性幹細胞を、外胚葉分化培地、中胚葉分化培地、又は内胚葉分化培地等の分化誘導培地で培養することにより、それぞれ外胚葉、中胚葉、又は内胚葉への分化を誘導することができる。外胚葉分化培地、中胚葉分化培地、及び内胚葉分化培地は市販されており、例えば、三胚葉分化キットStem Cell Kit: Human Pluripotent Stem Cell Functional Identification Kit(R&D Systems)に含まれるものが挙げられる。分化誘導培地に播種する万能性幹細胞は、小スフェロイドであっても単一細胞に分散させたものであってもよい。分化誘導培地での培養は、MEF等のフィーダー細胞上又はコーティング剤等の細胞足場材料上で行ってもよいし、上述のような擬微小重力環境下での回転培養により実施してもよい。分化誘導培地での培養により、万能性幹細胞の目的の胚葉又は細胞への分化を誘導し、万能性幹細胞から分化した細胞を作製することができる。したがって本発明は、上記の万能性幹細胞の培養方法を実施し、それによって得られた万能性幹細胞(増殖させた万能性幹細胞又は生成したスフェロイドから分散させた万能性幹細胞)及び/又はスフェロイドを分化誘導培地でさらに培養することを含む、万能性幹細胞の分化を誘導する方法(万能性幹細胞から分化した細胞を作製する方法)も提供する。分化誘導培地での培養は、上述のような擬微小重力環境下での培養(回転培養等)により行ってもよいし、分化誘導のために用いられる他の細胞培養法により行ってもよい。
253G1細胞は、マトリゲル(BD MatrigelTM, BD Biosciences)をコートした6cm又は10cm培養ディッシュを用いて、ヒトES/iPS細胞維持用培地mTeSR1(STEMCELL Technologies)中で培養し、毎日培養液交換を行い、5mM EDTAと0.5x TrypLETM Select(Life Technologies)を用いて継代維持した。
より好適なROCKインヒビター濃度について調べるため、3μM、10μM、又は30μMの3種類のROCKインヒビター濃度を用いること以外は上記と同じ条件で、253G1細胞を3日間回転培養した。培養後、生成した球状スフェロイドの数は、3μMで10個、10μMで50個、30μMで20個であった。
より好適な細胞播種数を調べるため、10ml RWVベッセルに、5mM EDTAとTrypLETM Selectを用いておよそ20〜40細胞からなる小スフェロイドに剥離した253G1細胞を4.27x105細胞、8.55x105細胞、又は1.28x106細胞播種し、ROCKインヒビターY27632(10μM)含有又は不含有のmTeSR1培地中で上記(1)と同様の方法で5日間回転培養した。培養後、上記と同様にして細胞数をカウントし、増殖倍率を算出した。結果を以下の表1に示す。
実施例1に記載の方法に従い、5 mM EDTAを用いて剥離した253G1細胞を10mlベッセルに播種し、10μM ROCKインヒビターY27632含有mTeSR1培地中でRWVバイオリアクターを用いて3日間回転培養した。培養後、生成したスフェロイドをアキュターゼTMで処理して単一細胞にし、マトリゲルでコートした24ウエルプレートに播種し、3日間培養した。培養後、253G1細胞における多能性幹細胞マーカーの発現を解析するため、フローサイトメトリーによる解析を行った。フローサイトメトリーは、フローサイトメーターAttune(R) Acoustic Focusing Cytometer(Applied Biosystems)により、多能性幹細胞を染色する蛍光標識抗体(抗SSEA-4抗体:Alexa Fluor488 anti-human SSEA4(Cat330441, BioLegend)、及び抗TRA-1-60抗体:PE anti-human TRA-1-60(Cat330609, BioLegend))を使用して行った(試験サンプル)。ネガティブコントロールはAlexa Fluor 488 Mouse IgG3,κIsoType Ctrl(Cat401323, BioLegend)及びPE Mouse IgM,κIsoType Ctrl(Cat401609, BioLegend)を用いて行った。
RWVバイオリアクターで培養した253G1細胞におけるiPS細胞のマーカー遺伝子の発現状態を評価するため、リアルタイムPCRを用いた解析を行った。未分化マーカー遺伝子Nanog、Oct3/4(Pou5f1)、及びSox2をターゲットとした。
実施例1に記載の方法に従い、5 mM EDTAを用いて剥離した253G1細胞を10mlベッセルに播種し、10μM ROCKインヒビターY27632含有mTeSR1培地中でRWVバイオリアクターを用いて3日間回転培養し、球状スフェロイドを作製した。
実施例1(1)に記載の方法に従い、5 mM EDTAを用いて小スフェロイドに剥離した253G1細胞を50mlベッセルに播種し、10μM ROCKインヒビターY27632含有mTeSR1培地中でRWVバイオリアクターを用いて3日間、8rpmの回転速度で回転培養し、球状スフェロイドを作製した。実施例1(3)の記載と同様の方法で細胞の好適な播種密度を検討した結果、50mlベッセルにトータル2.5x106個播種した場合に最も増殖倍率が高く、すなわち、10mlベッセルと同程度の播種密度(5.0x104細胞/cm3)で特に高い増殖倍率を示した。その増殖率は3日間で3.8〜4.5倍であった。
本実施例では連続継代培養試験を行った。その手順を模式的に図7に示す。
50mlベッセルを用いたRWVバイオリアクターで連続継代培養した253G1細胞におけるiPS細胞マーカー遺伝子の発現状態を評価するため、各回転培養(3次元培養;P5〜P8)後にフィルターにかける前の球状スフェロイドを一部採取し、リアルタイムPCRを用いた解析を行った。未分化マーカー遺伝子Nanog、Oct3/4(Pou5f1)、及びSox2をターゲットとした。リアルタイムPCRの実験手法は、実施例3と同じである。
実施例5に記載の方法に従い、50mlベッセルを用いたRWVバイオリアクターを用いて、253G1細胞を10μM ROCKインヒビターY27632含有mTeSR1培地中で37℃で3日間、8rpmの回転速度で回転培養し、球状スフェロイド(iPSスフェロイド)を作製した。その後、mTeSR1培地を神経分化培地(STEMdiffTM Neural Induction Medium, STEMCELL Technologies Inc., cat#05835)に全交換し(0日目)、同じ条件で培養を継続した。その後の培地交換は、3日目、5日目、7日目及び10日目に行い、12日目まで回転培養を行った。iPSスフェロイドを構成する細胞の神経細胞への分化の評価は、免疫抗体染色法及びリアルタイムPCR法により行った。
Claims (14)
- 単離された万能性幹細胞を擬微小重力環境下で培養することにより、万能性幹細胞を未分化性を保持した状態で増殖させ、万能性幹細胞のスフェロイドを形成及び成長させることを含む、万能性幹細胞の培養方法。
- 万能性幹細胞がiPS細胞である、請求項1に記載の方法。
- 細胞足場材料の不在下で前記培養を行う、請求項1又は2に記載の方法。
- 万能性幹細胞が4x104〜6x104細胞/cm3の細胞密度で播種される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- アポトーシス阻害因子の存在下で培養を行う、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- アポトーシス阻害因子がROCKインヒビターである、請求項5に記載の方法。
- 擬微小重力環境が、時間平均して地球の重力の1/10〜1/100に相当する重力を物体に与える環境である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 擬微小重力環境が、回転で生じる応力により地球の重力を相殺することにより擬微小重力環境を地上で実現する1軸回転式バイオリアクターを用いて得られるものである、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記1軸回転式バイオリアクターがRWVバイオリアクターである、請求項8に記載の方法。
- スフェロイドから細胞を分散させ、培養することをさらに含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- スフェロイドをろ過粒度40〜100μmのフィルターを通して1回又は2回以上破砕し、破砕されたスフェロイドを擬微小重力環境下で培養してスフェロイドを形成及び成長させる工程を1回又は2回以上繰り返すことを含む、請求項10に記載の方法。
- 前記の破砕されたスフェロイドを擬微小重力環境下で2〜7日間培養してスフェロイドを形成及び成長させる、請求項11に記載の方法。
- 請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法を実施し、得られた万能性幹細胞及び/又はスフェロイドを分化誘導培地でさらに培養することを含む、万能性幹細胞の分化を誘導する方法。
- 分化誘導培地での培養を、擬微小重力環境下で行う、請求項13に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014201875 | 2014-09-30 | ||
JP2014201875 | 2014-09-30 | ||
JP2015017679 | 2015-01-30 | ||
JP2015017679 | 2015-01-30 | ||
PCT/JP2015/077824 WO2016052657A1 (ja) | 2014-09-30 | 2015-09-30 | 万能性幹細胞の培養方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016052657A1 true JPWO2016052657A1 (ja) | 2017-07-20 |
JP6421374B2 JP6421374B2 (ja) | 2018-11-14 |
Family
ID=55630681
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016552141A Active JP6421374B2 (ja) | 2014-09-30 | 2015-09-30 | 万能性幹細胞の培養方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10696951B2 (ja) |
EP (1) | EP3202896B1 (ja) |
JP (1) | JP6421374B2 (ja) |
WO (1) | WO2016052657A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6127301B1 (ja) * | 2016-01-08 | 2017-05-17 | 株式会社ジェイテックコーポレーション | 回転培養装置及び該回転培養装置に用いる培養ベッセル |
JP7198488B2 (ja) * | 2016-03-04 | 2023-01-04 | 良考 山口 | 多能性幹細胞マーカーを発現するスフェロイドの製造方法および多能性幹細胞マーカーを発現させる方法 |
JP6268342B2 (ja) | 2016-04-27 | 2018-01-31 | 株式会社ジェイテックコーポレーション | 大量細胞培養システム及びそれに用いる回転細胞培養装置 |
JPWO2017199737A1 (ja) * | 2016-05-16 | 2019-03-07 | 富士フイルム株式会社 | 培養細胞の回収方法および培養細胞分散液 |
JP2020099202A (ja) * | 2017-04-12 | 2020-07-02 | Agc株式会社 | 分化細胞スフェロイドの製造方法 |
CN112608842B (zh) * | 2020-12-17 | 2022-08-02 | 清华大学 | 一种基于微卫星的细胞水凝胶三维培养装置 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008099662A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-05-01 | Institute Of Physical & Chemical Research | 幹細胞の培養方法 |
WO2010143651A1 (ja) * | 2009-06-09 | 2010-12-16 | 株式会社ジェイテック | 回転培養ベッセル及びそれを用いた自動細胞培養装置 |
WO2014115799A1 (ja) * | 2013-01-23 | 2014-07-31 | 東京エレクトロン株式会社 | 多能性幹細胞の継代培養方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5496722A (en) * | 1988-06-30 | 1996-03-05 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Method for producing non-neoplastic, three dimensional, mammalian tissue and cell aggregates under microgravity culture conditions and the products produced therefrom |
US20070116676A1 (en) * | 2003-12-11 | 2007-05-24 | Naoka Kida | Method for three-dimensional cartilage tissue engineering using bone marrow cells in tissue engineering bone marrow cells in simulated microgravity environment |
US20090104695A1 (en) * | 2004-12-29 | 2009-04-23 | Etti Ben Shushan | Stem Cells Culture Systems |
US20100221835A1 (en) | 2005-06-15 | 2010-09-02 | National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology | Method for cartilage tissue regeneration via simulated microgravity culture using scaffolds |
WO2009017254A1 (ja) * | 2007-07-31 | 2009-02-05 | Asubio Pharma Co., Ltd. | 心筋細胞の細胞塊作製方法及び当該心筋細胞塊の用途 |
JP5360525B2 (ja) * | 2008-01-07 | 2013-12-04 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 擬微小重力培養による骨・軟骨ハイブリッド組織構築 |
EP2784153B1 (en) * | 2011-11-25 | 2018-01-03 | Kyoto University | Method for culturing pluripotent stem cell |
-
2015
- 2015-09-30 US US15/515,449 patent/US10696951B2/en active Active
- 2015-09-30 WO PCT/JP2015/077824 patent/WO2016052657A1/ja active Application Filing
- 2015-09-30 EP EP15845721.8A patent/EP3202896B1/en active Active
- 2015-09-30 JP JP2016552141A patent/JP6421374B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008099662A (ja) * | 2006-09-22 | 2008-05-01 | Institute Of Physical & Chemical Research | 幹細胞の培養方法 |
WO2010143651A1 (ja) * | 2009-06-09 | 2010-12-16 | 株式会社ジェイテック | 回転培養ベッセル及びそれを用いた自動細胞培養装置 |
WO2014115799A1 (ja) * | 2013-01-23 | 2014-07-31 | 東京エレクトロン株式会社 | 多能性幹細胞の継代培養方法 |
Non-Patent Citations (10)
Title |
---|
CYTOTECHNOLOGY, 2014.01, VOL.66, NO.1, PP.119-131, JPN6018008891, ISSN: 0003759010 * |
STEM CELL RES., 2014.06(ONLINE), VOL.13, NO.2, PP.181-201, JPN6018008887, ISSN: 0003759008 * |
再生医療, 2009, VOL.8, SUPPL., P.183, JPN6018008897, ISSN: 0003759013 * |
再生医療, 2010, VOL.9, SUPPL., P.264, JPN6018008894, ISSN: 0003759011 * |
再生医療, 2010, VOL.9, SUPPL., P.269, JPN6018008883, ISSN: 0003759006 * |
再生医療, 2014.02, VOL.13, SUPPL., P.304, JPN6018008879, ISSN: 0003759004 * |
医学のあゆみ, 2008, VOL.227, NO.4, PP.254-258, JPN6018008896, ISSN: 0003759012 * |
日本機械学会第24回バイオエンジニアリング講演会論文集, 2012, P.7C14, JPN6018008882, ISSN: 0003759005 * |
理学療法学, 2014.04, VOL.41, NO.2, PP.90-91, JPN6018008885, ISSN: 0003759007 * |
生活生命支援医療福祉工学系学会連合大会講演論文集, 2010, VOL.2010, P.169(2A2-3), JPN6018008890, ISSN: 0003759009 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3202896A1 (en) | 2017-08-09 |
WO2016052657A1 (ja) | 2016-04-07 |
US10696951B2 (en) | 2020-06-30 |
EP3202896B1 (en) | 2019-05-15 |
EP3202896A4 (en) | 2018-07-04 |
US20170218343A1 (en) | 2017-08-03 |
JP6421374B2 (ja) | 2018-11-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6421374B2 (ja) | 万能性幹細胞の培養方法 | |
Zhang et al. | A thermoresponsive and chemically defined hydrogel for long-term culture of human embryonic stem cells | |
Drozd et al. | Generation of human iPSCs from cells of fibroblastic and epithelial origin by means of the oriP/EBNA-1 episomal reprogramming system | |
Sugii et al. | Feeder-dependent and feeder-independent iPS cell derivation from human and mouse adipose stem cells | |
Rodrigues et al. | Scalable culture of human induced pluripotent cells on microcarriers under xeno‐free conditions using single‐use vertical‐wheel™ bioreactors | |
US9650602B2 (en) | Reprogramming cells by three-dimensional cultivation | |
Pan et al. | SNL fibroblast feeder layers support derivation and maintenance of human induced pluripotent stem cells | |
Manzini et al. | A comparative view on easy to deploy non-integrating methods for patient-specific iPSC production | |
US20150166964A1 (en) | Systems and methods for producing stem cells and differentiated cells | |
WO2016105578A1 (en) | Improved systems and methods for producing stem cells, differentiated cells, and genetically edited cells | |
JP2022177161A (ja) | すぐに使える凍結保存細胞 | |
Cuesta-Gomez et al. | Suspension culture improves iPSC expansion and pluripotency phenotype | |
CN106381282B (zh) | 一种诱导多能干细胞传代方法 | |
Escobedo-Lucea et al. | Development of a human extracellular matrix for applications related with stem cells and tissue engineering | |
AU2016281627B2 (en) | Adhesive signature-based methods for the isolation of cancer-associated cells and cells derived therefrom | |
WO2018124119A1 (ja) | 染色体の異常の検出方法および誘発性を評価する方法 | |
WO2012165287A1 (ja) | 人工癌幹細胞の作製方法及びその分化誘導方法 | |
TWI814716B (zh) | 人工多能性幹細胞的評估方法及選拔方法,以及人工多能性幹細胞的製造方法 | |
CN111019884B (zh) | 一种抑制人羊膜上皮细胞上皮间质转化的方法 | |
JP7033318B2 (ja) | 多能性幹細胞の製造方法 | |
WO2014210533A1 (en) | Improved systems and methods for producing stem cells and differentiated cells | |
Morales et al. | Thermal inkjet bioprinting drastically alters cell phenotype | |
LE PHUONG | ANALYSIS ON TRANSCRIPTIONAL REGULATION IN THE EARLY PHASE OF SOMATIC CELL REPROGRAMMING | |
Thanuthanakhun | Study on Culture-Driven Epigenetic Memory | |
JP2020174644A (ja) | がん幹細胞又はそれを含む細胞集団、その製造方法並びにがん治療薬のスクリーニング方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170329 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170329 |
|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A801 Effective date: 20170329 |
|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20170329 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170330 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180320 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20180514 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180517 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180514 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180904 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180926 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6421374 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |