JPWO2015025786A1 - ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物及びその製造方法 - Google Patents
ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2015025786A1 JPWO2015025786A1 JP2015532834A JP2015532834A JPWO2015025786A1 JP WO2015025786 A1 JPWO2015025786 A1 JP WO2015025786A1 JP 2015532834 A JP2015532834 A JP 2015532834A JP 2015532834 A JP2015532834 A JP 2015532834A JP WO2015025786 A1 JPWO2015025786 A1 JP WO2015025786A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amino acid
- acid sequence
- light chain
- human antibody
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 164
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 17
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 140
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims abstract description 133
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 87
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims abstract description 18
- 229910001849 group 12 element Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 629
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 177
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 174
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 174
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 136
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 128
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 85
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 80
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 80
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 78
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 22
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 15
- -1 gold ion Chemical class 0.000 claims description 15
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical group C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 12
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 10
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 7
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 6
- 229910001453 nickel ion Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 5
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 5
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 claims description 5
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012264 purified product Substances 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 claims description 4
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 82
- 150000001945 cysteines Chemical group 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 132
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 101
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 89
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 64
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 61
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 61
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 47
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 44
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 37
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 27
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 21
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 19
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 19
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 18
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 12
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 11
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 11
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 11
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 11
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 10
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 10
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 10
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 4
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 231100000480 WST assay Toxicity 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 3
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 2
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 2
- VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N Nickel(2+) Chemical compound [Ni+2] VEQPNABPJHWNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229910001429 cobalt ion Inorganic materials 0.000 description 2
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003228 microsomal effect Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- DQANXBWQUCOGLQ-UHFFFAOYSA-N 3-[4-[(3,5-dibromopyridin-2-yl)diazenyl]-n-ethylanilino]propane-1-sulfonic acid Chemical class C1=CC(N(CCCS(O)(=O)=O)CC)=CC=C1N=NC1=NC=C(Br)C=C1Br DQANXBWQUCOGLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010063916 Metastatic gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L copper(ii) acetate Chemical compound [Cu+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O OPQARKPSCNTWTJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0002—Antibodies with enzymatic activity, e.g. abzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
本願は、2013年8月20日に、日本に出願された特願2013−170414号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
[1]ヒト抗体κ型軽鎖と、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンとが結合した複合体を含み、
前記ヒト抗体κ型軽鎖は二量体であって、2つの前記ヒト抗体κ型軽鎖のC末端のシステインが、前記金属イオンを介して結合しており、
前記ヒト抗体κ型軽鎖1モル当たり、前記金属イオンが0.1モル以上結合していることを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。
[2]前記金属イオンが、銅イオン、ニッケルイオン、亜鉛イオン、金イオン、銀イオン、及び白金イオンからなる群より選択される1種以上である、前記[1]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。
[3]前記ヒト抗体κ型軽鎖が、
(1)可変領域が配列番号1のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(2)可変領域が配列番号3のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(3)可変領域が配列番号5のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(4)可変領域が配列番号7のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(5)可変領域が配列番号9のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(6)可変領域が配列番号11のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(7)可変領域が配列番号13のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(8)可変領域が配列番号15のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(9)可変領域が配列番号17のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(10)可変領域が配列番号19のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(11)可変領域が配列番号21のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(12)可変領域が配列番号23のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(13)可変領域が配列番号25のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(14)可変領域が配列番号27のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(15)配列番号2のアミノ酸配列中の219番目のシステインがアラニンに置換されたアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(16)可変領域が配列番号29のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(17)可変領域が配列番号31のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(18)可変領域が配列番号33のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(19)可変領域が配列番号35のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(20)可変領域が配列番号37のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(21)可変領域が配列番号39のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(22)可変領域が配列番号41のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(23)可変領域が配列番号43のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(24)可変領域が配列番号45のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(25)可変領域が配列番号47のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(26)可変領域が配列番号49のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、及び
(27)可変領域が配列番号51のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
からなる群より選択される、前記[1]又は[2]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。
[4]前記[1]〜[3]のいずれかのヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物を有効成分とすることを特徴とする、医薬用組成物。
[5]抗がん剤である、前記[4]の医薬用組成物。
[6]C末端にシステイン残基を有するヒト抗体κ型軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む発現用ベクターを用いて、細胞内又は細胞外発現系によって、前記ヒト抗体κ型軽鎖を発現させる発現工程と、
前記発現工程で得られた発現産物から、前記ヒト抗体κ型軽鎖を精製する精製工程と、を有し、(a)前記発現工程において、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンの存在下で前記ヒト抗体κ型軽鎖を発現させる、又は(b)前記発現工程で得られた発現産物に、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンを添加し、得られた混合物から、前記ヒト抗体κ型軽鎖を精製することを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
[7]前記(b)において、前記混合物を30分間〜48時間インキュベートした後に、当該混合物からヒト抗体κ型軽鎖を精製する、前記[6]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
[8]前記精製工程が、
前記発現工程で得られた発現産物から、第1の充填剤を含むカラムを用いたカラムクロマトグラフィー法により、前記ヒト抗体κ型軽鎖を含む粗精製物を得る第1の精製工程と、
前記第1の精製工程により得られた粗精製物から、第2の充填剤を含むカラムを用いたカラムクロマトグラフィー法により、前記ヒト抗体κ型軽鎖の精製物を得る第2の精製工程と、
からなり、前記金属イオンを、前記第1の精製工程後、前記第2の精製工程前に、前記粗精製物に添加する、前記[6]又は[7]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
[9]前記第2の精製工程前に、前記金属イオンを添加した前記粗精製物を、30分間〜48時間インキュベートする、前記[8]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
[10]前記金属イオンを、前記発現工程において前記発現系内に添加し、さらに、前記第1の精製工程後前記第2の精製工程前に前記粗精製物に添加する、前記[8]又は[9]のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
[11]ヒト抗体κ型軽鎖を、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンを含有する溶液中でインキュベートすることにより、2つの前記ヒト抗体κ型軽鎖のC末端のシステイン残基が前記金属イオンを介して結合している複合体を含む組成物を製造することを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
また、本発明に係るヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法により、高活性なヒト抗体κ型軽鎖を安定的に製造することができる。
本発明において、ヒト抗体κ型軽鎖と結合させる金属イオンは、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上である。ヒト抗体κ型軽鎖には、前記金属イオンを1種類のみ結合させてもよく、2種類以上を組み合わせて結合させてもよい。当該金属イオンとしては、生体への安全性の点から、銅イオン、ニッケルイオン、亜鉛イオン、金イオン、銀イオン、及び白金イオンからなる群より選択される1種以上であることが好ましく、量産性の点から、銅イオン、ニッケルイオン、及び亜鉛イオンからなる群より選択される1種以上であることがより好ましく、ヒト抗体κ型軽鎖の生体に対する活性をより高められる点から、銅イオンであることがさらに好ましい。
本発明に係る複合体含有組成物が含有する、特定の金属イオンと結合するヒト抗体κ型軽鎖(以下、「本発明に係るヒト抗体κ型軽鎖」ということがある。)は、前記金属イオンが結合可能なヒト抗体κ型軽鎖であれば特に限定されるものではないが、医薬用途への適用可能性の点から、触媒三つ組残基様構造を有しているものが好ましい。なお、触媒三つ組残基様構造とは、例えば、セリン残基、ヒスチジン残基及びアスパラギン残基によって形成された、触媒活性を有していると考えられる構造である。触媒三つ組残基様構造を有しているヒト抗体κ型軽鎖としては、例えば、サブグループIIに属するVκ遺伝子を有するものや、少なくともその可変領域を有するもの、及びこれらの変異体が挙げられる。なお、野生型のヒト抗体κ型軽鎖は、例えば特許文献2に開示されているように、ヒトから採取した生体サンプル(例えば、リンパ球等)由来の核酸を鋳型としたPCR等により得ることができ、さらに得られた野生型から公知の遺伝子組換え技術により各種変異体を得ることもできる。
(1)可変領域が配列番号1のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(2)可変領域が配列番号3のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(3)可変領域が配列番号5のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(4)可変領域が配列番号7のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(5)可変領域が配列番号9のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(6)可変領域が配列番号11のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(7)可変領域が配列番号13のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(8)可変領域が配列番号15のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(9)可変領域が配列番号17のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(10)可変領域が配列番号19のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(11)可変領域が配列番号21のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(12)可変領域が配列番号23のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(13)可変領域が配列番号25のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(14)可変領域が配列番号27のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(15)配列番号2のアミノ酸配列中の219番目のシステインがアラニンに置換されたアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(16)可変領域が配列番号29のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(17)可変領域が配列番号31のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(18)可変領域が配列番号33のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(19)可変領域が配列番号35のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(20)可変領域が配列番号37のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(21)可変領域が配列番号39のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(22)可変領域が配列番号41のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(23)可変領域が配列番号43のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(24)可変領域が配列番号45のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(25)可変領域が配列番号47のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(26)可変領域が配列番号49のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、又は
(27)可変領域が配列番号51のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド。
これらの合成系としては、種々の市販のキットが用いられ得る。
本発明に係る複合体含有組成物は、本発明に係るヒト抗体κ型軽鎖と前記金属イオンとが結合した複合体を含有する組成物である。
本発明に係る複合体含有組成物は、ヒト抗体κ型軽鎖と前記金属イオンとが結合した複合体を含むものであれば特に限定されず、さらにヒト抗体重鎖を含んでいてもよく、ヒト抗体重鎖を含んでいなくてもよいが、ヒト抗体重鎖を含んでいないことが好ましい。
本発明に係る複合体含有組成物では、ヒト抗体κ型軽鎖1モル当たり、前記金属イオンが0.1モル以上結合している。ヒト抗体κ型軽鎖1モル当たりの前記金属イオンの結合量が多くなるほど、当該ヒト抗体κ型軽鎖が有する細胞障害性等の活性が高くなる傾向にある。
金属イオンとインキュベートするヒト抗体κ型軽鎖は、夾雑物を多く含む精製前のものであってもよいが、品質管理の点から、粗精製物又は精製物のほうがより好ましい。また、ヒト抗体κ型軽鎖の二量体と単量体が混在している溶液中で金属イオンとインキュベートしてもよく、二量体のみを含むように精製されたヒト抗体κ型軽鎖を金属イオンとインキュベートしてもよい。
本発明に係るヒト抗体κ型軽鎖として、アミダーゼ活性、核酸分解活性、がん細胞に対する細胞障害性、又は抗ウィルス活性の少なくともいずれかの活性を有するものを用いた場合には、本発明に係る複合体含有組成物も、少なくともこれらのいずれかの活性を有する。このため、本発明に係る複合体含有組成物は、抗がん剤や抗ウィルス剤等の医薬用組成物として特に好適に用いられる。
以下の実施例等において、配列番号2のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)、配列番号2のアミノ酸配列中の219番目のシステインがアラニンに置換されたアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7_C219A)、配列番号4のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7 VL)、配列番号6のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7 VL(I))、配列番号8のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7 VL(RL))、配列番号10のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#7 RLI)、配列番号12のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#4)、配列番号14のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(#11)、配列番号16のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(23D4)、配列番号18のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(W3)、配列番号20のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(W10)、配列番号22のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(C51)、配列番号24のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(C82)、配列番号26のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(C89)及び配列番号40のアミノ酸配列からなるヒト抗体κ型軽鎖(W15)を用いた。
これらのヒト抗体κ型軽鎖は、それぞれ、大腸菌発現系により発現させた。具体的には、各ヒト抗体κ型軽鎖をコードする塩基配列からなるcDNAを、Hisタグ配列サイトを有するプラスミドベクターに導入し、当該プラスミドベクターを大腸菌に導入して形質転換体を作製した。各形質転換体を培養し、IPTGによる発現誘導を行ったところ、SDS−PAGE分析及び抗ヒト型(Fab’)2抗体を用いたウエスタンブロッティングにより、大腸菌において発現したタンパク質がヒト型抗体軽鎖であることを同定することができた。得られたヒト型抗体軽鎖は、N末端にM(メチオニン)を、C末端にプラスミドベクター由来のLEHHHHHH(配列番号53)を有していた。
金属イオンを結合させていないヒト抗体κ型軽鎖は、以下のようにして発現させ、精製した。
まず、前記で作製した発現ベクターを導入した大腸菌の形質転換体を、37℃で一晩、LB培地中で培養した後、培養液にIPTGを終濃度10μM(μmol/L)となるように添加し、18℃で一晩培養した。培養終了後、遠心分離処理により培養物から集菌した菌体に、塩化ナトリウム含有トリスバッファー(25mM Tris−HCl、0.25M NaCl、pH8.0)を添加し、超音波処理により菌体を破砕した後、遠心分離処理を行い、可溶性画分を回収した。
次に、第1の精製工程として、この可溶性画分を、Ni−NTA Agaroseを充填したNi−NTAカラム(Qiagen社製)にアプライし、適量の前記塩化ナトリウム含有トリスバッファーを当該Ni−NTAカラムに通過させて、発現させたヒト抗体κ型軽鎖を当該Ni−NTAカラムに吸着させた。その後、溶離液として、イミダゾール濃度を0.03Mから0.3Mまでグラジエントをかけたイミダゾール含有トリスバッファー(25mM Tris−HCl、0.25M NaCl、imidazole、pH8.0)を用いて、当該Ni−NTAカラムからヒト抗体κ型軽鎖を溶出させ、ヒト抗体κ型軽鎖含有画分を分取した。回収したヒト抗体κ型軽鎖含有画分は、酢酸バッファー(50mM 酢酸、pH5.5)で4℃、12〜24時間透析した。
その後、第2の精製工程として、透析済のヒト抗体κ型軽鎖含有画分を、陽イオン交換カラム(製品番号:SP−5PW、TOSOH社製)にアプライし、適量の前記酢酸バッファーを当該陽イオン交換カラムに通過させて、発現させたヒト抗体κ型軽鎖を当該陽イオン交換カラムに吸着させた。その後、溶離液として、塩化ナトリウム濃度を0.15Mから0.45Mまでグラジエントをかけた塩化ナトリウム含有酢酸バッファー(50mM 酢酸、NaCl、pH5.5)を用いて、当該陽イオン交換カラムからヒト抗体κ型軽鎖を溶出させ、ヒト抗体κ型軽鎖含有画分を分取した。回収したヒト抗体κ型軽鎖含有画分は、塩化ナトリウム含有トリスバッファー(20mM Tris−HCl、0.15M NaCl、pH8.5)で4℃、12〜24時間透析した後、さらにPBS(pH7.4)で4℃、12〜24時間透析した。透析後のものを、複合体含有組成物として用いた。
以下の実施例等において、複合体含有組成物における、ヒト抗体κ型軽鎖1モル当たりの銅イオン結合量(モル)を算出するために、以下の方法にて、ヒト抗体κ型軽鎖と結合している銅イオンの総量(モル)を測定した。銅イオン量の測定は、市販の測定キット「メタロアッセイ 低濃度銅測定LS(尿中銅定量キット)」(メタロジェニックス社製)を用いて行った。また、測定に供される複合体含有組成物(サンプル)は、必要に応じて、予めPBS(リン酸緩衝生理食塩水)等の銅イオンを含まない溶媒を用いて透析処理した。
具体的には、まず、低吸着タイプの96ウェルプレートの各ウェルに、100μLのサンプルを入れ、さらに、予め37℃でインキュベートしておいた140μLのR−A(緩衝液)と3μLのR−R(キレート試薬液:3,5−DiBr−PAESA(4−(3,5−ジブロモ−2−ピリジルアゾ)−N−エチル−N−(3−スルホプロピル)アニリン誘導体))とを分注し、ピペッティングにより撹拌した。R−R等を添加した後10分間、37℃でインキュベートした後、プレートリーダー「ImmunoMini NJ−2300」(ナルジェヌンク社製)を使用して、590nmの吸光度を測定した。予めキット付属の銅標準液を用いて作成した検量線を用いて、得られた測定値から、当該サンプル中の銅濃度を算出した。
がん細胞株を用い、各複合体含有組成物のがん細胞に対する細胞障害性について試験した。がん細胞株としては、A549株(ヒト肺胞上皮がん細胞株)、ES−2株(ヒト卵巣がん細胞株)、MOLT−4株(ヒト急性リンパ芽球性白血病T細胞株)、BxPC−3株(ヒト膵臓腺がん細胞株)、SNU−1株(ヒト転移性胃がん細胞株)、及びPANC−1株(ヒト膵臓がん細胞株)を用いた。
また、対照として、正常細胞株であるWI−38株(ヒト胎児肺繊維芽細胞株)も用いた。
これらは、いずれもATCC(American Type Culture Collection)より購入した。また、A549株は10%FCS(ウシ胎児血清)含有F−12K培地を、ES−2株は10%FCS含有McCoy’s 5A培地を、MOLT−4株、SNU−1株及びBxPC−3株は10%FCS含有RPMI−1640培地を、PANC−1株は10%FCS含有DMEM培地を、WI−38株は10%FCS含有EMEM培地を、それぞれ用い、通常の方法で培養した。
なお、MOLT−4株の場合には、96ウェルプレートに細胞を播種した時点から、約1mg/mLに調製した各複合体含有組成物を各ウェルに100μLずつ添加し、24時間又は48時間培養した後にWSTアッセイを行った。
担癌モデルマウスを用い、各複合体含有組成物の、担癌モデルマウス中のがん細胞に対する細胞障害性について試験した。
まず、ES−2株(ヒト卵巣がん由来細胞)、又はB−16株(マウスメラノーマ由来)を、2.5×106cells/mouseとなるようにマウス皮下に移植した。マウス皮下に定着した腫瘍に対して、がん細胞移植後4日目から複合体含有組成物を投与した。複合体含有組成物の投与は、皮下腫瘍中の複数個所に対して、マウス体外からシリンジを用いて直接注入することにより行った。また、複合体含有組成物の投与は、5日間且つ1日1回の投与を行った後、2日間投与を休止し、さらに5日間且つ1日1回の投与を行った(計10回投与)。また、対照として、複合体含有組成物に代えて、PBSを同様のスケジュールで投与した群を設けた。
皮下腫瘍の体積をマウス体外から経時的に測定し、がん細胞移植後1日目(移植翌日)の皮下腫瘍の体積を1として、相対腫瘍体積を求め、複合体含有組成物の担癌モデルマウスにおける細胞障害性を評価した。
ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)を用いて、発現及び精製工程における銅イオンの添加時期が、得られた組成物の細胞障害性に対して及ぼす影響を調べた。
具体的には、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]の通り、銅イオン非存在下で発現及び精製する方法(コントロールケース)において、Ni−NTAカラム精製後の溶出液に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に前記酢酸バッファーで透析した以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース1)、ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)発現用ベクターを導入した大腸菌の形質転換体を終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加したLB培地で培養し、かつ、前記Ni−NTAカラム精製後の溶出液に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に前記酢酸バッファーで透析した以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース2)により、ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)を含む組成物を得た。
これらの結果から、銅イオンが結合することにより、ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)の細胞障害活性が顕著に向上することがわかった。
ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)を用いて、第1の精製工程後に銅イオンを添加した後、インキュベートしたものを第2の精製工程に供し、得られた組成物の細胞障害性を調べた。
具体的には、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に、前記酢酸バッファーで12〜24時間透析し、その後に陽イオン交換カラムにアプライした以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース3)により、又は、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が40μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に、前記酢酸バッファーで12〜24時間透析し、陽イオン交換カラムにアプライした以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース4)により、ヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)を含む組成物を得た。
ケース3では、実施例1のケース2と同様に2つのピークがあり、それぞれフラクション3A及び3Bとした。一方で、ケース4では、ケース3のフラクション3Aに相当する位置に1つのピークのみがあり、このピークを含む画分をフラクション4Aとした。各フラクションについてSDS−PAGE(非還元)を行ったところ、いずれも含まれているヒト抗体κ型軽鎖(#7_wt)はほぼ二量体であった(結果図示せず。)。
ヒト抗体κ型軽鎖(#7_C219A)を用いて、第1の精製工程後に銅イオンを添加した後、インキュベートしたものを第2の精製工程に供し、得られた組成物の細胞障害性を調べた。
具体的には、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]の通り、銅イオン非存在下で発現及び精製する方法(コントロールケース)、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に、前記酢酸バッファーで12〜24時間透析し、その後に陽イオン交換カラムにアプライした以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース3)、又は、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が40μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に、前記酢酸バッファーで12〜24時間透析し、陽イオン交換カラムにアプライした以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製する方法(ケース4)により、ヒト抗体κ型軽鎖(#7_C219A)を含む組成物を得た。
ヒト抗体κ型軽鎖(C51)を、銅イオン非存在下で発現及び精製して得た組成物〔C51(Lot1)及びC51(Lot2)〕と、銅イオン存在下で精製して得た複合体含有組成物〔C51(Lot3)〕と、銅イオン存在下で発現及び精製させて得た複合体含有組成物〔C51(Lot4)〕について、A549株に対する細胞障害性を調べた。
C51(Lot1)及びC51(Lot2)は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]の通りにして調製した。いずれも、陽イオン交換クロマトグラムでは、実施例1のコントロールケースと同様に3つのピークが得られたが、ピーク3を含むフラクション(フラクション3)のみを精製して、細胞障害性を調べた。
C51(Lot3)は、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に前記酢酸バッファーで透析した以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製した。陽イオン交換クロマトグラムでは、実施例1のケース1と同様に1つのピークが得られ、このピークを含むフラクション(フラクション1A)のみを精製して、細胞障害性を調べた。
C51(Lot4)は、ヒト抗体κ型軽鎖(C51)発現用ベクターを導入した大腸菌の形質転換体を、終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加したLB培地で培養し、かつ、Ni−NTAカラム精製後のヒト抗体κ型軽鎖含有画分に終濃度が15μMとなるように銅イオンを添加して4℃、12〜16時間インキュベートした後に前記酢酸バッファーで透析した以外は、前記の[ヒト抗体κ型軽鎖の発現及び精製]と同様にして調製した。陽イオン交換クロマトグラムでは、実施例1のケース2と同様に2つのピークが得られ、このうち銅イオンと結合したヒト抗体κ型軽鎖(C51)を含むピークを含むフラクション(ピーク2A)のみを精製して、細胞障害性を調べた。
ヒト抗体κ型軽鎖(C51)を、各種金属イオン存在下でインキュベートして結合させて得られた組成物について、A549株及びWI−38株に対する細胞障害性を調べた。
具体的には、まず、実施例4のC51(Lot1)と同様にして、ヒト抗体κ型軽鎖(C51)を含む組成物を調製した。次いで、このヒト抗体κ型軽鎖(C51)が最終濃度40μMとなるように調整したヒト抗体κ型軽鎖(C51)溶液に、3価の鉄イオン、コバルトイオン、ニッケルイオン、銅イオン、亜鉛イオン、金イオン、銀イオン、又は白金イオンを最終濃度15μMとなるように添加して24時間インキュベートした。インキュベート後、PBS(pH7.4)で4℃、12時間の透析を2回繰り返して得られた組成物を、細胞障害性アッセイに用いた。
各種ヒト抗体κ型軽鎖について、がん細胞に対する細胞障害性に対する銅イオン結合量の影響を調べた。
具体的には、まず、ヒト抗体κ型軽鎖を実施例4のC51(Lot1)と同様にして、ヒト抗体κ型軽鎖を含む組成物を調製した。次いで、このヒト抗体κ型軽鎖が最終濃度40μMとなるように調整したヒト抗体κ型軽鎖溶液に銅イオンを添加して24時間インキュベートした。インキュベート後、PBS(pH7.4)で4℃、12時間の透析を2回繰り返して得られた組成物を、細胞障害性アッセイに用いた。
これらの結果からも、各種ヒト抗体κ型軽鎖を、銅イオンと結合させることにより、様々ながん細胞に対する細胞障害性を向上させられることが確認できた。
各種ヒト抗体κ型軽鎖について、がん細胞に対する細胞障害性に対する銅イオン結合量の影響を調べた。
具体的には、まず、ヒト抗体κ型軽鎖を実施例4のC51(Lot1)と同様にして、ヒト抗体κ型軽鎖を含む組成物を調製した。次いで、このヒト抗体κ型軽鎖が最終濃度40μMとなるように調整したヒト抗体κ型軽鎖溶液に銅イオンを添加して24時間インキュベートした。インキュベート後、PBS(pH7.4)で4℃、12時間の透析を2回繰り返して得られた組成物を、細胞障害性アッセイに用いた。また、各組成物について、銅含有量も求めた。
ヒト抗体κ型軽鎖(W15及び#4)を、銅イオン存在下でインキュベートして銅を結合させて得られた組成物について、担癌モデルマウスに対する影響を調べた。
具体的には、まず、ヒト抗体κ型軽鎖を実施例4のC51(Lot1)と同様にして、ヒト抗体κ型軽鎖を含む組成物を調製した。次いで、このヒト抗体κ型軽鎖が最終濃度40μMとなるように調整したヒト抗体κ型軽鎖溶液に銅イオンを添加して24時間インキュベートした。インキュベート後、PBS(pH7.4)で4℃、12時間の透析を2回繰り返し、複合体含有組成物を調製した。
次いで、前記[担癌モデルマウスにおける細胞障害性アッセイ]の通り、担癌モデルマウスに対して、上記複合体含有組成物又はPBSを投与し、担癌モデルマウスにおける細胞障害性を評価した。
また、B−16株移植マウスに対してヒト抗体κ型軽鎖(#4)を含む複合体含有組成物を投与した群でも、PBSを投与した対照群に比して、移植後15日目における相対腫瘍体積が約1/3に留まり、明らかながん細胞障害性が認められた。
Claims (11)
- ヒト抗体κ型軽鎖と、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンとが結合した複合体を含み、
前記ヒト抗体κ型軽鎖は二量体であって、2つの前記ヒト抗体κ型軽鎖のC末端のシステインが、前記金属イオンを介して結合しており、
前記ヒト抗体κ型軽鎖1モル当たり、前記金属イオンが0.1モル以上結合していることを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。 - 前記金属イオンが、銅イオン、ニッケルイオン、亜鉛イオン、金イオン、銀イオン、及び白金イオンからなる群より選択される1種以上である、請求項1に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。
- 前記ヒト抗体κ型軽鎖が、
(1)可変領域が配列番号1のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(2)可変領域が配列番号3のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(3)可変領域が配列番号5のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(4)可変領域が配列番号7のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(5)可変領域が配列番号9のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(6)可変領域が配列番号11のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(7)可変領域が配列番号13のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(8)可変領域が配列番号15のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(9)可変領域が配列番号17のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(10)可変領域が配列番号19のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(11)可変領域が配列番号21のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(12)可変領域が配列番号23のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(13)可変領域が配列番号25のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(14)可変領域が配列番号27のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(15)配列番号2のアミノ酸配列中の219番目のシステインがアラニンに置換されたアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(16)可変領域が配列番号29のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(17)可変領域が配列番号31のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(18)可変領域が配列番号33のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(19)可変領域が配列番号35のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(20)可変領域が配列番号37のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(21)可変領域が配列番号39のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(22)可変領域が配列番号41のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(23)可変領域が配列番号43のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(24)可変領域が配列番号45のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(25)可変領域が配列番号47のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
(26)可変領域が配列番号49のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、及び
(27)可変領域が配列番号51のアミノ酸配列、又は当該アミノ酸配列において1若しくは数個のアミノ酸が置換、付加、若しくは欠失したアミノ酸配列によって示されるポリペプチド、
からなる群より選択される、請求項1又は2に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物。 - 請求項1〜3のいずれか一項に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物を有効成分とすることを特徴とする、医薬用組成物。
- 抗がん剤である、請求項4に記載の医薬用組成物。
- C末端にシステイン残基を有するヒト抗体κ型軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む発現用ベクターを用いて、細胞内又は細胞外発現系によって、前記ヒト抗体κ型軽鎖を発現させる発現工程と、
前記発現工程で得られた発現産物から、前記ヒト抗体κ型軽鎖を精製する精製工程と、を有し、(a)前記発現工程において、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンの存在下で前記ヒト抗体κ型軽鎖を発現させる、又は(b)前記発現工程で得られた発現産物に、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンを添加し、得られた混合物から、前記ヒト抗体κ型軽鎖を精製することを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。 - 前記(b)において、前記混合物を30分間〜48時間インキュベートした後に、当該混合物からヒト抗体κ型軽鎖を精製する、請求項6に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
- 前記精製工程が、
前記発現工程で得られた発現産物から、第1の充填剤を含むカラムを用いたカラムクロマトグラフィー法により、前記ヒト抗体κ型軽鎖を含む粗精製物を得る第1の精製工程と、
前記第1の精製工程により得られた粗精製物から、第2の充填剤を含むカラムを用いたカラムクロマトグラフィー法により、前記ヒト抗体κ型軽鎖の精製物を得る第2の精製工程と、
からなり、前記金属イオンを、前記第1の精製工程後、前記第2の精製工程前に、前記粗精製物に添加する、請求項6又は7に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。 - 前記第2の精製工程前に、前記金属イオンを添加した前記粗精製物を、30分間〜48時間インキュベートする、請求項8に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
- 前記金属イオンを、前記発現工程において前記発現系内に添加し、さらに、前記第1の精製工程後前記第2の精製工程前に前記粗精製物に添加する、請求項8又は9に記載のヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
- ヒト抗体κ型軽鎖を、第10族元素、第11族元素、及び第12族元素からなる群より選択される1種以上の金属イオンを含む溶液中でインキュベートすることにより、2つの前記ヒト抗体κ型軽鎖のC末端のシステイン残基が前記金属イオンを介して結合している複合体を含む組成物を製造することを特徴とする、ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物の製造方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2013170414 | 2013-08-20 | ||
JP2013170414 | 2013-08-20 | ||
PCT/JP2014/071379 WO2015025786A1 (ja) | 2013-08-20 | 2014-08-13 | ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物及びその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2015025786A1 true JPWO2015025786A1 (ja) | 2017-03-02 |
JP6488520B2 JP6488520B2 (ja) | 2019-03-27 |
Family
ID=52483562
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015532834A Active JP6488520B2 (ja) | 2013-08-20 | 2014-08-13 | ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物及びその製造方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10633429B2 (ja) |
EP (1) | EP3037434B1 (ja) |
JP (1) | JP6488520B2 (ja) |
TW (1) | TWI643871B (ja) |
WO (1) | WO2015025786A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10583191B2 (en) | 2016-12-19 | 2020-03-10 | Mosaic Biomedicals Slu | Antibodies against LIF and uses thereof |
SI3555132T1 (sl) | 2016-12-19 | 2024-04-30 | Medimmune Limited | Protitelesa proti LIF in njihove uporabe |
WO2021015237A1 (ja) * | 2019-07-24 | 2021-01-28 | 国立研究開発法人科学技術振興機構 | 抗体酵素の革新的製造技術 |
AU2022340645A1 (en) * | 2021-09-02 | 2024-02-29 | Memorial Hospital For Cancer And Allied Diseases | Anti-cd33 antibodies and uses thereof |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05508073A (ja) * | 1990-03-23 | 1993-11-18 | イゲン,インコーポレーテッド | 触媒抗体成分 |
WO2008029807A1 (fr) * | 2006-09-06 | 2008-03-13 | Japan Science And Technology Agency | Nouveau polypeptide ayant une cytotoxicité contre le cancer, procédé pour cribler le polypeptide et utilisation du polypeptide |
WO2011102517A1 (ja) * | 2010-02-19 | 2011-08-25 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 抗ウイルス剤、抗体酵素、プライマーセット、ポリヌクレオチドの製造方法、および、ポリペプチドの製造方法 |
WO2012041863A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-04-05 | Bioanalytica Sa | Compositions and methods for treating neoplasia |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5236825A (en) | 1989-01-17 | 1993-08-17 | Scripps Clinic And Research Foundation | Polyvalent metal ion-containing antibody combining site catalysts |
US5236836A (en) | 1989-04-25 | 1993-08-17 | Igen, Inc. | Autoantibodies which enhance the rate of a chemical reaction |
CA2566647A1 (en) * | 2004-05-13 | 2005-12-22 | Imclone Systems Incorporated | Inhibition of macrophage-stimulating protein receptor (ron) |
JP4829609B2 (ja) | 2004-12-22 | 2011-12-07 | 独立行政法人科学技術振興機構 | ヒト抗体酵素およびその生産方法 |
WO2008054471A2 (en) * | 2006-03-09 | 2008-05-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Monolayer-protected gold clusters: improved synthesis and bioconjugation |
JP5798199B2 (ja) | 2012-03-08 | 2015-10-21 | 国立研究開発法人科学技術振興機構 | 抗がん剤 |
-
2014
- 2014-08-13 EP EP14838038.9A patent/EP3037434B1/en active Active
- 2014-08-13 WO PCT/JP2014/071379 patent/WO2015025786A1/ja active Application Filing
- 2014-08-13 JP JP2015532834A patent/JP6488520B2/ja active Active
- 2014-08-13 US US14/912,444 patent/US10633429B2/en active Active
- 2014-08-15 TW TW103128124A patent/TWI643871B/zh active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05508073A (ja) * | 1990-03-23 | 1993-11-18 | イゲン,インコーポレーテッド | 触媒抗体成分 |
WO2008029807A1 (fr) * | 2006-09-06 | 2008-03-13 | Japan Science And Technology Agency | Nouveau polypeptide ayant une cytotoxicité contre le cancer, procédé pour cribler le polypeptide et utilisation du polypeptide |
WO2011102517A1 (ja) * | 2010-02-19 | 2011-08-25 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 抗ウイルス剤、抗体酵素、プライマーセット、ポリヌクレオチドの製造方法、および、ポリペプチドの製造方法 |
WO2012041863A1 (en) * | 2010-09-27 | 2012-04-05 | Bioanalytica Sa | Compositions and methods for treating neoplasia |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
一二三恵美ほか: "目標タンパク質であるHIVgp41を破壊する「スーパー抗体酵素」の各種性質と酵素活性発現機構の解析", 第10回バイオ・高分子シンポジウム, vol. vol.10, JPN6014048275, 2000, pages 31 - 32 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3037434A4 (en) | 2016-11-09 |
TWI643871B (zh) | 2018-12-11 |
WO2015025786A1 (ja) | 2015-02-26 |
US20190256576A1 (en) | 2019-08-22 |
JP6488520B2 (ja) | 2019-03-27 |
EP3037434A1 (en) | 2016-06-29 |
US10633429B2 (en) | 2020-04-28 |
EP3037434B1 (en) | 2018-07-18 |
TW201536800A (zh) | 2015-10-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107814845B (zh) | 新的抗pd-1纳米抗体及其应用 | |
EP3444277A1 (en) | Anti-pd-l1 nanobody, coding sequence and use thereof | |
US9493569B2 (en) | Structural isomers of sc(Fv)2 | |
CN110914297B (zh) | 抗人白细胞介素2抗体及其用途 | |
JP6488520B2 (ja) | ヒト抗体κ型軽鎖複合体含有組成物及びその製造方法 | |
US10040863B2 (en) | Anticancer agent | |
JP2016519108A (ja) | インターロイキン−10を疾病及び疾患の治療に用いる方法 | |
Zhang et al. | Rational design of humanized dual-agonist antibodies | |
US20230272089A1 (en) | Il2rg binding molecules and methods of use | |
US20210317213A1 (en) | Anti-CD3 Antibody Folate Bioconjugates and Their Uses | |
CN116322754A (zh) | Il10ra结合分子及使用方法 | |
WO2022224997A1 (ja) | 抗cldn4-抗cd137二重特異性抗体 | |
CN108101988A (zh) | 针对cd16的全人源单域抗体、其抗原结合片段及应用 | |
CN116731169B (zh) | 一种分拣蛋白1特异性的纳米抗体及其应用 | |
CN102924579B (zh) | 一种具有提高人nk及nkt细胞杀伤肿瘤细胞活性的多肽及其应用 | |
US20220259290A1 (en) | Innovative production technique for antibody-enzyme | |
CN113667008A (zh) | 一种识别afp抗原的高亲和力t细胞受体 | |
CN106674352B (zh) | 抗肿瘤蛋白内皮抑素的衍生物及应用 | |
US20230201365A1 (en) | Modified cd20 antibodies and uses thereof | |
US20230357424A1 (en) | Cd45 binding molecules and methods of use | |
US20230250181A1 (en) | Modified checkpoint inhibitors and uses thereof | |
CN117043188A (zh) | Gp130结合分子及使用方法 | |
CN117615794A (zh) | 与il-2缀合的检查点抑制剂及其用途 | |
EP0452505A1 (en) | M-csf derivative, expression vector of said derivative, product of transformation by said vector, and production of them |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170517 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180703 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20180827 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181101 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20181116 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20190129 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190207 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6488520 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |