TWI643871B - 含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物及其製造方法 - Google Patents

Abstract

本發明之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物包含結合了人類抗體κ型輕鏈與金屬離子的複合體，該金屬離子係選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上；前述人類抗體κ型輕鏈為二聚物；且，2個前述人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸係透過前述金屬離子而結合，並且，每1莫耳之前述人類抗體κ型輕鏈結合有0.1莫耳以上之前述金屬離子。

Description

含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物及其製造方法 發明領域

本發明係關於含有活性高且穩定性優良的人類抗體κ型輕鏈之組成物，及其製造方法。

本申請案係基於於2013年8月20日於日本提申之日本特願2013-170414號主張優先權，將其內容援引於此。

發明背景

抗體係由重鏈(H鏈：Heavy chain)及輕鏈(L鏈：Light chain)所構成。重鏈及輕鏈係由可變區(VR：Variable Region)及恒定區(CR：Constant Region)所構成，而可變區具有超變異區(CDR：Complimentarity Determining Region)。抗體的輕鏈進一步被分類為κ型及λ型。

近年，帶有類酵素活性(enzyme-like activity)之抗體，即抗體酵素受到矚目。抗體酵素由於兼具抗體的高分子辨識能力與酵素活性的緣故，被期待在醫療、化學工業、食品工業等許多方面的應用。尤其是對標靶分子的專一性高且可藉酵素活性而對標靶分子發揮阻礙性的抗體酵素， 被期許其可成為副作用少的優良抗癌劑。特別是人類型的抗體酵素，由於可預想其對人體投藥時的副作用較少，國內外的製藥公司等正盼望著開發出有用的人類型抗體酵素。

本案發明人等迄今為止一直就抗體酵素逐步進行種種獨創的研究(例如，參照專利文獻1)。其中尤其是專利文獻2，已報告一種由人類抗體κ型輕鏈構成的抗體酵素，其對狂犬病病毒及流行性感冒病毒等具有抗病毒活性。

先行技術文獻 專利文獻

專利文獻1 日本特開2006-197930號公報

專利文獻2 國際公開第2011/102517號

發明概要

為了在臨床上使用抗體酵素作為醫藥品，重要的係使具有充分活性之抗體酵素穩定而能夠量產。然而，許多的抗體酵素，當使用基因重組技術透過細胞內或細胞外表現體系來人工地合成的狀況時，性能並不穩定，有批量間的差異大這樣的問題。

本發明之主要目的在於提供一種由更高活性之人類型抗體輕鏈構成的抗體酵素及可穩定製造該抗體酵素的方法。

本案發明人發現，藉由將人類型抗體輕鏈與選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子一起培育，可穩定地獲得含有更高活性之人類型抗體輕鏈的組成物，進而完成了本發明。

即，本發明涉及之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，及其製造方法係下述[1]~[11]。

[1]一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其特徴在於包含結合了人類抗體κ型輕鏈與金屬離子的複合體，該金屬離子係選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上；前述人類抗體κ型輕鏈為二聚物，且2個前述人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸係透過前述金屬離子而結合；並且，每1莫耳前述人類抗體κ型輕鏈結合有0.1莫耳以上之前述金屬離子。

[2]如前述[1]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其中前述金屬離子係選自於由銅離子、鎳離子、鋅離子、金離子、銀離子及鉑離子所構成群組中之1種以上。

[3]如前述[1]或[2]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其中前述人類抗體κ型輕鏈係選自下述者所構成之群組：(1)可變區係以序列編號1之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(2)可變區係以序列編號3之胺基酸序列或者該胺基酸 序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來所表示的多肽；(3)可變區係以序列編號5之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(4)可變區係以序列編號7之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(5)可變區係以序列編號9之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(6)可變區係以序列編號11之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(7)可變區係以序列編號13之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(8)可變區係以序列編號15的胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(9)可變區係以序列編號17之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(10)可變區係以序列編號19之胺基酸序列或者該胺基 酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(11)可變區係以序列編號21之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(12)可變區係以序列編號23之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(13)可變區係以序列編號25之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(14)可變區係以序列編號27之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(15)以下述胺基酸序列來表示的多肽：序列編號2之胺基酸序列中第219號的半胱胺酸已被取代為丙胺酸的胺基酸序列，或者，該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列；(16)可變區係以序列編號29之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(17)可變區係以序列編號31之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽； (18)可變區係以序列編號33之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(19)可變區係以序列編號35之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(20)可變區係以序列編號37之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(21)可變區係以序列編號39之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(22)可變區係以序列編號41之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(23)可變區係以序列編號43之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(24)可變區係以序列編號45之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(25)可變區係以序列編號47之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽； (26)可變區係以序列編號49之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；以及(27)可變區係以序列編號51之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽。

[4]一種醫藥用組成物，其特徴在於係以如前述[1]~[3]中任一含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物作為有效成分。

[5]如前述[4]之醫藥用組成物，其係抗癌劑。

[6]一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其特徴在於具有下述步驟：表現步驟，其使用包含聚核苷酸的表現用載體，藉由細胞內或細胞外表現體系，而使前述人類抗體κ型輕鏈表現，該聚核苷酸係編碼在C末端具有半胱胺酸殘基之人類抗體κ型輕鏈；及純化步驟，其係從前述表現步驟所得表現產物純化出前述人類抗體κ型輕鏈；並且，(a)在前述表現步驟中，其係在選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子存在下，使前述人類抗體κ型輕鏈表現；或者，(b)將選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子添加至前述表現步驟所得表現產物，並從所得混合物純化出前述人類抗體κ型輕鏈。

[7]如前述[6]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其中前述(b)係將前述混合物培育30分鐘~48小時後，從該混合物純化出人類抗體κ型輕鏈。

[8]如前述[6]或[7]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其中前述純化步驟係由第1純化步驟與第2純化步驟構成：該第1純化步驟係透過使用了包含第1填充劑之管柱的管柱層析法，從前述表現步驟所得表現產物獲得包含前述人類抗體κ型輕鏈的粗純化物；該第2純化步驟係透過使用了包含第2填充劑之管柱的管柱層析法，從前述第1純化步驟所得粗純化物獲得前述人類抗體κ型輕鏈的純化物；並且，在前述第1純化步驟後且在前述第2純化步驟前，將前述金屬離子添加至前述粗純化物。

[9]如前述[8]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其係於前述第2純化步驟前，將經添加前述金屬離子的前述粗純化物培育30分鐘~48小時。

[10]如前述[8]或[9]之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其係在前述表現步驟中將前述金屬離子添加至前述表現體系內後，進一步在前述第1純化步驟後且在前述第2純化步驟前，將前述金屬離子添加至前述粗純化物。

[11]一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其特徴在於：在含有選自於由第10族元素、第11 族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子之溶液中培育人類抗體κ型輕鏈，藉此製造含有複合體的組成物，該複合體係2個前述人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸殘基透過前述金屬離子而結合者。

本發明之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物係一種含有相較於習知未與金屬離子結合者活性更高且可穩定供給之人類抗體κ型輕鏈的組成物。亦即，本發明之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物具有高活性與優良的量產性，可期待其作為可廣泛應用於臨床的醫藥品。

又，藉由本發明之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，能夠穩定地製造高活性的人類抗體κ型輕鏈。

圖1A顯示實施例1中對照例(無添加銅離子)之陽離子交換層析圖(cation exchange chromatogram)之結果。

圖1B顯示實施例1中對照例(無添加銅離子)之各峰SDS-PAGE(非還原)之結果。

圖2A顯示實施例1中例1(一次純化後添加銅離子)之陽離子交換層析圖之結果。

圖2B顯示實施例1中例1(一次純化後添加銅離子)之各峰SDS-PAGE(非還原)之結果。

圖3A顯示實施例1中例2(表現時與一次純化後添加銅離子)之陽離子交換層析圖之結果。

圖3B顯示實施例1中例2(表現時與一次純化後添加銅離子)之各峰SDS-PAGE(非還原)之結果。

圖4顯示：於實施例1中，令已添加對照例之餾份3的組成物(Fr.3)之狀況下的細胞存活率為100%時，添加例1之餾份1A的組成物(Fr.1A)、例2之餾份2A的組成物(Fr.2A)及例2之餾份2B的組成物(Fr.2B)時的相對細胞存活率(%)。

圖5顯示實施例2中例3(於一次純化後添加15μM銅離子並培育)之陽離子交換層析圖。

圖6顯示實施例2中例4(於一次純化後添加40μM銅離子並培育)中之陽離子交換層析圖。

圖7一併顯示有：實施例2中例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)之UV/VIS光譜測定結果，以及，實施例1中對照例之餾份3的組成物(Fr.3)之結果。

圖8顯示實施例3中對照例(無添加銅離子)之陽離子交換層析圖與各峰SDS-PAGE(非還原)之結果。

圖9顯示實施例3中例3(於一次純化後添加15μM銅離子並培育)之陽離子交換層析圖。

圖10顯示實施例3中例4(於一次純化後添加40μM銅離子並培育)之陽離子交換層析圖。

圖11顯示：實施例3中對照例之餾份1的組成物(Fr.1)、例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)的UV/VIS光譜測定結果。

圖12顯示：於實施例4中，令已添加PBS之狀況下的細胞存活率為100%時，添加各組成物時的相對細胞存活率(%)。

圖13顯示實施例4中C51(Lot1)及C51(Lot4)之UV/VIS光譜測定結果。

圖14顯示：於實施例5中，令已對A549株添加PBS之狀況下的細胞存活率為100%時，添加已結合有各種金屬離子之人類抗體κ型輕鏈(C51)時的相對細胞存活率(%)。

圖15顯示：於實施例5中，令已對WI-38株添加PBS之狀況下的細胞存活率為100%時，添加已結合有各種金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈(C51)時的相對細胞存活率(%)。

圖16顯示：於實施例7中，在對ES-2株移植小鼠投予含有包含人類抗體κ型輕鏈(W15)之複合體之組成物之狀況下，相對腫瘤體積之經時變化。

圖17顯示：於實施例7中，在對B-16株移植小鼠投予含有包含人類抗體κ型輕鏈(# 4)之複合體之組成物的狀況下，相對腫瘤體積之經時變化。

用以實施發明之形態

於本發明及本申請案說明書中，「人類抗體κ型輕鏈」係指源自人類之免疫球蛋白之κ型的輕鏈(Light chain)。κ型之抗體輕鏈的基因係藉由自存在於生殖細胞基因(germline gene)之V κ基因群、J κ基因群及恒定區的基因群選擇各基因並重編所建構。

又，於本發明及本申請案說明書中，所謂「抗癌劑」係意味具有殺死癌細胞，或者抑制或阻礙增殖之活性的藥劑，而所謂「細胞傷害性」，係意味使細胞遭受死或機能障礙的性質。

構成多肽之胺基酸殘基中的一些胺基酸，係不會實質地影響此多肽的結構或機能且能夠容易地被改變一事，係於此領域中所周知的。進一步，不單係人為地使改變，在天然的蛋白質中，存在不實質地使該蛋白質的結構或機能變化的突變體一事亦係周知的。又，於本申請案說明書中，將使得特定胺基酸序列X中之1或複數個胺基酸取代、附加或缺失一事，稱為使突變。

本發明涉及之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物(以下，有時稱為「本發明涉及之含有複合體之組成物」)係包含：2個人類抗體κ型輕鏈與特定的金屬離子透過該人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸與該金屬離子的結合(藉由該人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸與該金屬離子的相互作用)，而經以特定的數量比而結合之複合體的組成物。

<金屬離子>

就本發明而言，使與人類抗體κ型輕鏈結合之金屬離子係選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素構成之群組之1種以上。可僅使前述金屬離子1種類結合至人類抗體κ型輕鏈，亦可組合2種類以上再使結合至人類抗體κ型輕鏈。作為該金屬離子，從對生物體之安全性的點來看， 宜係選自於由銅離子、鎳離子、鋅離子、金離子、銀離子及鉑離子構成之群組之1種以上，從量產性之點來看，較佳係選自於由銅離子、鎳離子及鋅離子構成之群組之1種以上，而從能夠提高人類抗體κ型輕鏈對於生物體之活性的點來看，更佳係銅離子。

<人類抗體κ型輕鏈>

本發明涉及的含有複合體之組成物包含之與特定金屬離子結合的人類抗體κ型輕鏈(以下，有時稱為「本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈」)，係前述金屬離子能夠結合的人類抗體κ型輕鏈則未被特別限定，但從應用於醫藥用途之可能性之點來看，較佳係具有類催化三連體殘基結構(catalytic triad residues-like structure)者。再者，所謂類催化三連體殘基結構，例如，係由絲胺酸殘基、組胺酸殘基及天冬醯胺殘基所形成之、被認為具有催化活性之結構。作為具有類催化三連體殘基結構之人類抗體κ型輕鏈，例如，可舉：具有屬於子群II之V κ基因者、至少具有其之可變區者，以及此等的突變體。再者，野生型的人類抗體κ型輕鏈，例如如揭示於專利文獻2般，可藉由以源自於採取自人類的生物樣本(例如，淋巴球等)的核酸為模板之PCR等來獲得，亦可進一步自所獲得之野生型透過已知的基因重組技術獲得各種突變體。

作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，特別地，宜為具有：醯胺酶活性、核酸分解活性、對於癌細胞之細胞有害性或抗病毒活性之至少任一活性者。具有此等活性 之人類抗體κ型輕鏈，作為抗癌劑及抗病毒劑等係特別有用的。

就野生型的抗體κ型輕鏈而言，在C末端存在用以形成雙硫鍵之半胱胺酸，而形成二聚物。該半胱胺酸被取代為其它胺基酸(例如丙胺酸等)之突變型之抗體κ型輕鏈，無法形成二聚物，而以單體存在。就本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈而言，係形成二聚物，2個人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸透過金屬離子而結合者。人類抗體κ型輕鏈透過金屬離子而形成二聚物，藉此，經與前述金屬離子結合之複合體係具有較結合前之人類抗體κ型輕鏈更高的活性。又，依人類抗體κ型輕鏈的種類，亦有二聚體較單體係細胞有害性等活性係高的，就此點而言，二聚物係優良的。

就本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈而言，較佳係下述(1)~(27)之多肽的任一者。

(1)可變區係以序列編號1之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(2)可變區係以序列編號3之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來所表示的多肽；(3)可變區係以序列編號5之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽； (4)可變區係以序列編號7之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(5)可變區係以序列編號9之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(6)可變區係以序列編號11之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(7)可變區係以序列編號13之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(8)可變區係以序列編號15的胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(9)可變區係以序列編號17之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(10)可變區係以序列編號19之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(11)可變區係以序列編號21之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽； (12)可變區係以序列編號23之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(13)可變區係以序列編號25之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(14)可變區係以序列編號27之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(15)以下述胺基酸序列來表示的多肽：序列編號2之胺基酸序列中第219號的半胱胺酸已被取代為丙胺酸的胺基酸序列，或者，該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列；(16)可變區係以序列編號29之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(17)可變區係以序列編號31之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(18)可變區係以序列編號33之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(19)可變區係以序列編號35之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列 來表示的多肽；(20)可變區係以序列編號37之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(21)可變區係以序列編號39之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(22)可變區係以序列編號41之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(23)可變區係以序列編號43之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(24)可變區係以序列編號45之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(25)可變區係以序列編號47之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；(26)可變區係以序列編號49之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列來表示的多肽；以及(27)可變區係以序列編號51之胺基酸序列或者該胺基酸序列中已取代、附加或缺失1或數個胺基酸之胺基酸序列 來表示的多肽。

由可變區係以序列編號1的胺基酸序列表示之多肽所構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱「人類抗體κ型輕鏈(# 7)」。人類抗體κ型輕鏈(# 7)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號2。人類抗體κ型輕鏈(# 7)中之CDR1係在序列編號1及2之胺基酸序列中第24~39號，CDR2係在序列編號1及2之胺基酸序列中第55~61號，CDR3係在序列編號1及2之胺基酸序列中第94~102號。又，與其它的輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號2之胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

再者，序列編號2的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號1的胺基酸序列表示之野生型的人類抗體κ型輕鏈的全長。於是，由序列編號2的胺基酸序列所示多肽所構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱「人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)」。

人類抗體κ型輕鏈(# 7)，如於後述實施例所示，具有對癌細胞，特別係肺癌細胞、胃癌細胞、白血病細胞(癌化的T細胞)、胰臟癌細胞的細胞傷害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。為了人類抗體κ型輕鏈(# 7)之抗癌活性，對於標靶分子之高的分子辨識能力係重要的，因此人類抗體κ型輕鏈(# 7)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。

因此，就人類抗體κ型輕鏈(# 7)而言，可變區 以外的區域亦可與序列編號2的胺基酸序列相異。例如，由以序列編號2的胺基酸序列中FR-1之第1號(序列編號2的胺基酸序列中第1號)的天冬胺酸經取代為麩胺酸之胺基酸序列所表示之多肽，或者FR-1之第2號(序列編號2的胺基酸序列中第2號)的纈胺酸經取代為異白胺酸等之胺基酸序列所表示之多肽構成者，亦包含於人類抗體κ型輕鏈(# 7)。再者，有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)」。

又，本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，亦可係由可變區係以序列編號1的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)之胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(# 7)的突變體」。

可使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈之人類抗體κ型輕鏈(# 7)的突變體係與人類抗體κ型輕鏈(# 7)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(# 7)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3係與序列編號1或2的胺基酸序列同一(被保存)，並且可變區中CDR區域以外以及C末端之半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(# 7)被突變的突變體。

作為人類抗體κ型輕鏈(# 7)的突變體，例如，可舉：由可變區係以序列編號3的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL)、由可變區係以序列編號 5的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(I))、由可變區係以序列編號7的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(RL))，及由可變區係以序列編號9的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 RLI)等。再者，於一實施形態中，人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL)之全長的胺基酸序列係顯示於序列編號4、人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(I))之全長的胺基酸序列係顯示於序列編號6、人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(RL))之全長的胺基酸序列係顯示於序列編號8，而人類抗體κ型輕鏈(# 7 RLI)之全長的胺基酸序列係顯示於序列編號10。

人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL)、人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(I))，及人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(RL))，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性高，而人類抗體κ型輕鏈(# 7 RLI)特別係對於肺癌細胞、胃癌細胞、胰腺癌細胞的細胞有害性高。

由可變區係以序列編號11的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱人類抗體κ型輕鏈(# 4)。人類抗體κ型輕鏈(# 4)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號12。再者，序列編號12的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號11的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(# 4)中CDR1係序列編號11及12之胺基酸序列中第24~40號，CDR2係序列編號11及12之胺基酸序列中第56~62 號，而CDR3係序列編號11及12之胺基酸序列中第95~103號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號12的胺基酸序列中第220號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(# 4)，如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、胃癌細胞之細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(# 4)的抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，作為人類抗體κ型輕鏈(# 4)，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號12的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，亦可係由可變區係以序列編號11的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(# 4)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈之人類抗體κ型輕鏈(# 4)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(# 4)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(# 4)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3，以及C末端的半胱胺酸係與序列編號11或12的胺基酸序列為同一(被保存)，並且可變區中之CDR區域及C末端之第220號的半胱胺 酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(# 4)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號13的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(# 11)。人類抗體κ型輕鏈(# 11)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號14。再者，序列編號14的胺基酸序列，係表示可變區係以序列編號13的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。於人類抗體κ型輕鏈(# 11)中CDR1係序列編號13及14的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號13及14的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號13及14的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號14的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(# 11)如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(# 11)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，作為人類抗體κ型輕鏈(# 11)，可變區以外及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可與序列編號14的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，亦可係由 可變區係以序列編號13的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(# 11)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈之人類抗體κ型輕鏈(# 11)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(# 11)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(# 11)的突變體，較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號13或14的胺基酸序列為同一(被保存)，並且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(# 11)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號15的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(23D4)。人類抗體κ型輕鏈(23D4)，能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號16。再者，序列編號16的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號15的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。人類抗體κ型輕鏈(23D4)中之CDR1係序列編號15及16的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號15及16的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號15及16的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金 屬離子結合之半胱胺酸係序列編號16的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(23D4)係如後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(23D4)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子的結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(23D4)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可與序列編號16的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號15的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(23D4)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(23D4)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(23D4)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(23D4)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3及C末端之半胱胺酸係與序列編號15或16的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(23D4)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號17的胺基酸序列所表示之多肽構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W3)。人類抗體κ型輕鏈(W3)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號18。再者，序列編號18的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號17的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。人類抗體κ型輕鏈(W3)中CDR1係序列編號17及18的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號17及18的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號17及18的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號18的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W3)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、胃癌細胞、胰腺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W3)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W3)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可與序列編號18的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號17的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或具有與該胺基酸序列95% 以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W3)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W3)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W3)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W3)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號17或18的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W3)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號19的胺基酸序列所表示之多肽構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W10)。人類抗體κ型輕鏈(W10)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號20。再者，序列編號20的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號19的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W10)中CDR1係序列編號19及20的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號19及20的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號19及20之胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號20的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W10)係如於後述實施例所 示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、胰腺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W10)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W10)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號20的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號19的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W10)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W10)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W10)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W10)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號19或20之胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號之半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W10)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號21的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(C51)。人類抗體κ型輕鏈(C51)能夠係於上述之可變 區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號22。再者，序列編號22的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號21的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(C51)中CDR1係序列編號21及22的胺基酸序列中第24~34號，CDR2係序列編號21及22的胺基酸序列中第50~56號，而CDR3係序列編號21及22的胺基酸序列中第89~97號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號22之胺基酸序列中第214號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(C51)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(C51)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(C51)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號22的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號21的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(C51)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(C51)的突變體係與人類抗體κ型輕鏈(C51)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(C51)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號21或22的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第214號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(C51)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號23的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱人類抗體κ型輕鏈(C82)。人類抗體κ型輕鏈(C82)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號24。再者，序列編號24的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號23的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(C82)中CDR1係序列編號23及24的胺基酸序列中第24~34號，CDR2係序列編號23及24的胺基酸序列中第50~56號，而CDR3係序列編號23及24的胺基酸序列中第89~98號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號24之胺基酸序列中第215號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(C82)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係卵巢癌細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕 鏈(C82)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(C82)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號24的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號23的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(C82)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(C82)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(C82)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(C82)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號23或24之胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第215號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(C82)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號25的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(C89)。人類抗體κ型輕鏈(C89)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號26。再者，序列編號26 的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號25的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(C89)中CDR1係序列編號25及26的胺基酸序列中第24~35號，CDR2係序列編號25及26的胺基酸序列中第51~57號，而CDR3係序列編號25及26的胺基酸序列中第90~98號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號26的胺基酸序列中第215號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(C89)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(C89)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(C89)而言，可變區以外及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號26之胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號25的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示的多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(C89)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(C89)的突變體係與人類抗體κ型輕 鏈(C89)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(C89)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號25或26的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第215號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(C89)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號27的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W2)。人類抗體κ型輕鏈(W2)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號28。再者，序列編號28的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號27的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W2)中CDR1係序列編號27及28的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號27及28的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號27及28的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號28的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W2)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細胞之細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W2)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端 的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W2)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號28的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號27的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W2)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W2)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W2)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W2)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號27或28的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W2)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號29的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W4)。人類抗體κ型輕鏈(W4)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號30。再者，序列編號30的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號29的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。人類抗體κ型輕鏈(W4)中CDR1係在序列編號29及30的胺基酸序列中 第24~39號，CDR2係序列編號29及30的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號29及30的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號30的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W4)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W4)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W4)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號30的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號29的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W4)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W4)的突變體係與人類抗體κ型輕鏈(W4)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W4)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號29或30之胺基酸序列為同一(被保存)，且 可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W4)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號31的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W7)。人類抗體κ型輕鏈(W7)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號32。再者，序列編號32的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號31的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W7)中CDR1係序列編號31及32的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號31及32的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號31及32的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號32的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W7)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W7)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W7)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號32的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由 可變區係以序列編號31的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W7)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W7)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W7)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W7)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號31或32的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W7)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號33的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W8)。人類抗體κ型輕鏈(W8)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號34。再者，序列編號34的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號33的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W8)中CDR1係序列編號33及34的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號33及34的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號33及34的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號34的胺基酸序列中第219號 的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W8)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於肺癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W8)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W8)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號34的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號33的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W8)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W8)的突變體係與人類抗體κ型輕鏈(W8)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W8)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號33或34的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W8)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號35的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ 型輕鏈(W11)。人類抗體κ型輕鏈(W11)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號36。再者，序列編號36的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號35的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W11)中CDR1係序列編號35及36的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號35及36的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號35及36的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號36之胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W11)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W11)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W11)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號36的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號35的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W11) 的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W11)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W11)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W11)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號35或36的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W11)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號37的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W14)。人類抗體κ型輕鏈(W14)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號38。再者，序列編號38的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號37的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W14)中CDR1係序列編號37及38之胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號37及38的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號37及38的胺基酸序列中第94~103號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號38的胺基酸序列中第220號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W14)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細 胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W14)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W14)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號38的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號37的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W14)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W14)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W14)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W14)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號37或38的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第220號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W14)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號39的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W15)。人類抗體κ型輕鏈(W15)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中， 全長的胺基酸序列係顯示於序列編號40。再者，序列編號40的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號39的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W15)中CDR1係序列編號39及40的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號39及40的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號39及40的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號40的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W15)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞、白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W15)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W15)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號40的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號39的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失之胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W15)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈 的人類抗體κ型輕鏈(W15)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W15)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W15)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號39或40的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W15)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號41的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W17)。人類抗體κ型輕鏈(W17)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號42。再者，序列編號42的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號41的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W17)中CDR1係序列編號41及42的胺基酸序列中第24~40號，CDR2係序列編號41及42的胺基酸序列中第56~62號，而CDR3係序列編號41及42的胺基酸序列中第95~103號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號42的胺基酸序列中第220號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W17)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W17)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在 CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W17)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號42的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，亦可係由可變區係以序列編號41的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成之者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W17)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W17)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W17)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W17)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號41或42的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第220號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W17)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號43的胺基酸序列所表示之多肽構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W18)。人類抗體κ型輕鏈(W18)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號44。再者，序列編號44的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號43的胺基酸 序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W18)中CDR1係序列編號43及44的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號43及44的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號43及44的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號44的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W18)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W18)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W18)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號44的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號43的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W18)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W18)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W18)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈 (W18)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端的半胱胺酸係與序列編號43或44的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W18)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號45的胺基酸序列所表示之多肽構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W19)。人類抗體κ型輕鏈(W19)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號46。再者，序列編號46的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號45的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W19)中CDR1係序列編號45及46的胺基酸序列中第24~40號，CDR2係序列編號45及46的胺基酸序列中第56~62號，而CDR3係序列編號45及46的胺基酸序列中第95~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號46的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W19)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於卵巢癌細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W19)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W19)而言，可變區以外以及C 末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號46的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係由可變區係以序列編號45的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W19)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W19)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W19)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W19)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號45或46的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W19)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號47的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W21)。人類抗體κ型輕鏈(W21)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號48。再者，序列編號48的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號47的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W21)中CDR1係序列編號47及48的胺基酸序列 中第24~39號，CDR2係序列編號47及48的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號47及48的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號48的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W21)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W21)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W21)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號48的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號47的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示的多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W21)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W21)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W21)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W21)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號47或48的胺基酸序列為同一(被保 存)，且可變區中之CDR區域以外以及C末端之第219號的半胱胺酸的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W21)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號49的胺基酸序列所表示之多肽構成的人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W26)。人類抗體κ型輕鏈(W26)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號50。再者，序列編號50的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號49的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W26)中CDR1係序列編號49及50的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號49及50的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號49及50的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號50的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W26)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W26)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W26)而言，可變區以外的區域，亦可係與序列編號50的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號49的胺基酸序列中1或數個胺基酸經 取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W26)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W26)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W26)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W26)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號49或50的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W26)被突變的突變體。

由可變區係以序列編號51的胺基酸序列所表示之多肽構成之人類抗體κ型輕鏈，有時亦稱為人類抗體κ型輕鏈(W28)。人類抗體κ型輕鏈(W28)能夠係於上述之可變區經附加已知之人類抗體恒定區者，於一實施形態中，全長的胺基酸序列係顯示於序列編號52。再者，序列編號52的胺基酸序列係表示：可變區係以序列編號51的胺基酸序列所表示之野生型人類抗體κ型輕鏈的全長。在人類抗體κ型輕鏈(W28)中CDR1係序列編號51及52的胺基酸序列中第24~39號，CDR2係序列編號51及52的胺基酸序列中第55~61號，而CDR3係序列編號51及52的胺基酸序列中第94~102號。又，與其它之輕鏈形成雙硫鍵，且能與金屬離子結合之半胱胺酸係序列編號52的胺基酸序列中第219號 的半胱胺酸。

人類抗體κ型輕鏈(W28)係如於後述實施例所示，具有對於癌細胞，特別係對於白血病細胞的細胞有害性。因此，作為抗癌劑的有效成分係適宜的。人類抗體κ型輕鏈(W28)之抗癌活性的活性中心係在可變區，特別係在CDR序列。又，與金屬離子之結合點係C末端的半胱胺酸。因此，就人類抗體κ型輕鏈(W28)而言，可變區以外以及C末端之半胱胺酸以外的區域，亦可係與序列編號52的胺基酸序列相異。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係，由可變區係以序列編號51的胺基酸序列中1或數個胺基酸經取代、附加或缺失的胺基酸序列，或者具有與該胺基酸序列95%以上之相同性(序列同一性)的胺基酸序列所表示之多肽構成者。有時亦將該多肽稱為「人類抗體κ型輕鏈(W28)的突變體」。

被使用來作為本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的人類抗體κ型輕鏈(W28)的突變體，係與人類抗體κ型輕鏈(W28)同樣地具有抗癌作用。因此，人類抗體κ型輕鏈(W28)的突變體較佳係：CDR1、CDR2及CDR3以及C末端之半胱胺酸係與序列編號51或52的胺基酸序列為同一(被保存)，且可變區中之CDR區域及C末端之第219號的半胱胺酸以外的胺基酸係自人類抗體κ型輕鏈(W28)被突變的突變體。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈亦可係包含 附加性的多肽者。就附加性的多肽而言，例如，可舉：His標籤(His tag)、Myc標籤(Myc tag)、Flag標籤(Flag tag)等表位標識(epitope tag)多肽。

此技術領域之從業人員使用周知技術，能夠容易地使構成多肽之胺基酸殘基中1或數個胺基酸突變，或能夠附加表位標識多肽等。例如，按照已知的點突變導入法，能夠使編碼多肽之聚核苷酸的任意鹼基突變。又，能夠設計對應於編碼多肽之聚核苷酸之任意部位的引子來製作缺失突變體或附加突變體。

本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈包含：天然的純化產物、化學合成程序的產物，及自原核生物宿主或真核生物宿主(包含例如：細菌細胞、酵母細胞、高等植物細胞、昆蟲細胞及哺乳動物細胞)透過重組技術所產生的產物。取決於於重組生產程序所使用之宿主，本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈能夠被醣基化，或者能夠被非醣基化。進一步，本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，在一些狀況下，就宿主媒介處理的結果而言，能夠包含起始之修改甲硫胺酸殘基(modified methionine residue)。

本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，胺基酸係肽鍵結的多肽即可，但並非被限定於此者，亦可係包含多肽以外之結構的複合多肽。於本說明書中所使用的狀況時，就「多肽以外的結構」而言，可舉：糖鏈及類異戊二烯基等，未被特別限定。

本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，能夠使用包含 編碼該人類抗體κ型輕鏈(多肽)之聚核苷酸的載體，並使用重組表現體系及無細胞表現體系等於此技術領域中已知的表現體系來製造。

當使用重組表現體系的狀況時，能夠採用將編碼本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈之聚核苷酸組入至重組表現載體後，透過已知的方法導入至能夠表現的宿主，而將在宿主(形質轉換體)內被轉譯所獲得之多肽予以純化這樣的方法等。重組表現載體可是非係質體亦可非係質體，能將目標的聚核苷酸導入至宿主的話即可。

如此將外源聚核苷酸導入至宿主的狀況時，表現載體較佳係以使得外源聚核苷酸會表現的方式來組入在宿主內會發揮機能的啟動子。將重組地所產生之多肽予以純化的方法，依使用的宿主、多肽的性質不同而異，但透過標籤(tag)的利用等而能夠相對容易地將目標的多肽予以純化。

當使用無細胞表現體系(無細胞蛋白質合成體系)的狀況時，較佳係藉由將編碼本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈的聚核苷酸添加至包含核醣體或t-RNA等蛋白質的轉譯/合成所需成分的溶液，以適當的溫度來培育，來將所合成的多肽予以純化。

就無細胞蛋白質合成體系而言，可舉：使用小麥胚芽萃取液的體系、使用兔子網狀紅血球萃取液的體系、使用大腸桿菌S30萃取液的體系及使用自植物之脫液胞化原生質體所獲得之細胞成分萃取液的體系。一般而言，在 源自真核生物之基因的轉譯來說，選擇真核細胞的體系，即，使用小麥胚芽萃取液的體系或使用兔子網狀紅血球萃取液的體系之任一者，考慮被轉譯之基因的來源(原核生物/真核生物)，及合成後蛋白質的使用目的，來自上述合成體系選擇即可。

作為此等的合成體系，能夠使用種種市售的套組。

再者，種種源自病毒的基因產物，於其轉譯後，因為大多係經內質網、高基氏體等細胞內膜參與之複雜的生物化學反應而表現活性者，而為了在試管內再現各種生物化學反應，需要添加細胞內膜成分(例如，微粒體膜)。因為自植物的脫液胞化原生質體所獲得之細胞成分萃取液，係能夠作為保持了細胞內膜成分之無細胞蛋白質合成液而利用，因而微粒體膜的添加並不是必需的，而為佳。

當於本說明書中所使用之狀況時，「細胞內膜成分」係意指存在於細胞質內之由脂質膜構成的胞器(即，內質網、高基氏體、粒線體、葉綠體、液胞等細胞內顆粒全部)。特別係，內質網及高基氏體係起到對蛋白質轉譯後修飾之重要作用，係膜蛋白及分泌蛋白成熟所必需的細胞成分。

藉由宿主的表現體系及無細胞蛋白質合成體系所合成之人類抗體κ型輕鏈，較佳係被純化。純化人類抗體κ型輕鏈之步驟，利用周知的方法(例如，將細胞或組織予以破壞之後進行離心分離來回收可溶性劃分的方法)來自細胞或組織調製了細胞萃取液之後，較佳係自該細胞萃 取液藉由周知的方法(例如，硫酸銨沉澱或乙醇沉澱、酸萃取、陰離子或陽離子交換層析法、磷酸纖維素層析法(phosphocellulose chromatography)、疏水性交互作用層析法、親和層析法、羥基磷灰石層析法及凝集素層析法)予以純化的步驟，但未被限定於此等。最佳係，高效液相層析法(「HPLC」)係為了純化的目的而被使用。

又，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，亦可由天然地表現該人類抗體κ型輕鏈之細胞或組織予以純化。例如，能夠使用抗體或寡核苷酸，來鑑定天然地表現本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈的細胞或組織。自細胞或組織之人類抗體κ型輕鏈的純化亦能夠與將使用宿主的表現體系等所合成之人類抗體κ型輕鏈予以純化的狀況同樣地進行。

此外，本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈，亦可化學合成。化學合成的方法未被特別限定，亦能夠以在化學合成多肽之際可使用之任一方法來進行。

<含有複合體之組成物>

本發明涉及之含有複合體之組成物，係含有經結合本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈與前述金屬離子而成之複合體的組成物。

本發明涉及之含有複合體之組成物，係含有經結合人類抗體κ型輕鏈與前述金屬離子而成之複合體者，則未被特別限定，進一步亦可含有人類抗體重鏈，亦可不含人類抗體重鏈，但較佳係不含人類抗體重鏈。

就本發明涉及之含有複合體之組成物而言，人類抗體κ型輕鏈每1莫耳，係結合0.1莫耳以上的前述金屬離子。人類抗體κ型輕鏈每1莫耳之前述金屬離子的結合量越多，則該人類抗體κ型輕鏈具有之細胞有害性等活性有變高的傾向。

在本發明涉及之含有複合體之組成物中，人類抗體κ型輕鏈與前述金屬離子之結合數量比(莫耳比)，係於該組成物所包含之人類抗體κ型輕鏈的總分子數，與在該組成物中與該人類抗體κ型輕鏈結合之前述金屬離子之總分子數的比。亦即，所謂「含有人類抗體κ型輕鏈每1莫耳係結合0.1莫耳以上之前述金屬離子之複合體的組成物」係意味，假設當於該組成物中，包含10莫耳之人類抗體κ型輕鏈的狀況時，包含1莫耳之與人類抗體κ型輕鏈結合之前述金屬離子。又，就該組成物而言，二聚物的人類抗體κ型輕鏈係作為2分子的人類抗體κ型輕鏈來測量。又，該組成物係包含經透過金屬離子而結合之二聚物的人類抗體κ型輕鏈者即可，亦可進一步包含單體的人類抗體κ型輕鏈。

本發明涉及之含有複合體之組成物所包含之與人類抗體κ型輕鏈結合的前述金屬離子的量，例如，能夠預先對該含有複合體之組成物進行透析處理等來除去了遊離的金屬離子之後，透過變性劑等來使人類抗體κ型輕鏈變性，將經解離之金屬離子透過比色定量法(colorimetric determination method)等常用方法來測定。

本發明涉及的含有複合體之組成物係藉由使本 發明涉及的人類抗體κ型輕鏈與前述金屬離子接觸，而使前述金屬離子結合至至少一部分的人類抗體κ型輕鏈所獲得。例如，可藉由將本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，在包含前述金屬離子的溶液中培育，而製造本發明涉及的含有複合體之組成物。

與金屬離子培育之人類抗體κ型輕鏈亦可係大量包含夾雜物的純化前之物，但從品質管理之點來看，以粗純化物或純化物為較佳。又，亦可在混雜有人類抗體κ型輕鏈之二聚物與單體的溶液中與金屬離子培育，亦可將經純化為僅包含二聚物之人類抗體κ型輕鏈與金屬離子培育。

本發明涉及之人類抗體κ型輕鏈與前述金屬離子的培育時間，可考慮人類抗體κ型輕鏈的種類、金屬離子的種類、溶劑、培育溫度等來適宜決定，而使得充分量的金屬離子能夠與人類抗體κ型輕鏈結合。例如，藉由於室溫下培育30分鐘~48小時，變得易於獲得含有人類抗體κ型輕鏈每1莫耳係結合0.1莫耳以上之金屬離子之複合體的組成物。

本發明涉及的含有複合體之組成物，亦可透過在人類抗體κ型輕鏈的合成反應或其後之純化步驟的途中，使與前述金屬離子接觸來製造。

例如，使用含編碼該人類抗體κ型輕鏈之聚核苷酸的表現用載體，透過細胞內或細胞外表現體系來使人類抗體κ型輕鏈表現的狀況而言，預先使前述金屬離子存在於在表現體系內。藉此，而成為使人類抗體κ型輕鏈在前 述金屬離子的存在下表現，由於表現出之人類抗體κ型輕鏈能夠迅速地與金屬離子接觸，自表現產物透過管柱層析法等常用方法來將人類抗體κ型輕鏈予以純化，藉此能夠獲得包含含有經與金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈之複合體的組成物。作為預先使前述金屬離子存在於表現體系內的方法，例如，可舉：先將金屬離子添加至表現細胞的培養用培養基或細胞外表現體系的表現溶液的方法。

又，在細胞內或細胞外表現體系使人類抗體κ型輕鏈表現的狀況時，通常係表現的人類抗體κ型輕鏈，係從表現產物藉由各種純化方法而被純化。於是，將前述金屬離子添加至表現後的表現產物，從所獲得之混合物將人類抗體κ型輕鏈予以純化，藉此能夠獲得包含含有經與金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈之複合體的組成物。由於所添加之前述金屬離子能夠充分地與人類抗體κ型輕鏈接觸而結合的緣故，添加前述金屬離子所獲得之混合物，較佳係在培育了30分鐘~48小時之後，供至來自該混合物之人類抗體κ型輕鏈的純化。

透過表現步驟與純化步驟來製造人類抗體κ型輕鏈的狀況而言，亦可在前述金屬離子的存在下使人類抗體κ型輕鏈表現，亦可將前述金屬離子添加至於表現步驟所獲得之表現產物，並自所獲得之混合物將人類抗體κ型輕鏈予以純化；其中該表現步驟係使用包含編碼人類抗體κ型輕鏈之聚核苷酸的表現用載體，透過細胞內或細胞外表現體系，使前述人類抗體κ型輕鏈表現，而該純化步驟 係自於前述表現步驟所獲得之表現產物，將前述人類抗體κ型輕鏈予以純化。進一步，在前述金屬離子的存在下使人類抗體κ型輕鏈表現，而將前述金屬離子進一步添加至所獲得之表現產物，若有需要在培育適當的時間後，亦可將人類抗體κ型輕鏈予以純化。

另外，在純化步驟的途中亦可添加前述金屬離子。例如，當透過第1純化步驟與第2純化步驟來進行純化步驟的狀況而言，藉由在第2純化步驟前，將前述金屬離子添加至透過第1純化步驟所獲得之粗純化物，能夠獲得包含含有經與金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈之複合體的組成物；其中，該第1純化步驟係藉由使用了包含第1填充劑之管柱的管柱層析法，從在表現步驟所獲得之表現產物獲得包含人類抗體κ型輕鏈的粗純化物，而該第2純化步驟係藉由使用了包含第2填充劑之管柱的管柱層析法，從藉由第1純化步驟所獲得之粗純化物獲得人類抗體κ型輕鏈的純化物。由於所添加之前述金屬離子能夠充分地與人類抗體κ型輕鏈接觸而結合，經添加前述金屬離子之粗純化物，較佳係在培育了30分鐘~48小時之後，供至第2純化步驟。又，即便係在第1純化步驟後且於第2純化步驟前添加前述金屬離子的狀況時，亦可於表現步驟中先添加至前述表現體系內。

當透過2階段的管柱層析法來進行純化步驟的狀況時，第1填充劑與第2填充劑的組合，係能夠純化最終地所期望之純化度的人類抗體κ型輕鏈之組合的話，則非係 被特別限定者，能夠考慮人類抗體κ型輕鏈的種類、附加/修飾之有無等來適宜決定。例如，當利用表現體系而合成之人類抗體κ型輕鏈係附加有His標籤等表位標識多肽的狀況時，較佳係使用對於所標識之表位(epitope)的親合力高者作為第1填充劑，而使用陰離子或陽離子交換層析作為第2填充劑。此狀況時，在第1純化步驟中純化人類抗體κ型輕鏈，而於第2純化步驟中，能夠將單體與二聚物予以分離分級，或者以金屬離子之結合的有無來分級。

<醫藥用組成物>

作為本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈，當使用了具有醯胺酶活性、核酸分解活性、對於癌細胞之細胞有害性，或者抗病毒活性之至少任一活性者的狀況而言，本發明涉及的含有複合體之組成物亦至少具有此等之任一活性。因此，本發明涉及的含有複合體之組成物係特別適宜地使用來作為抗癌劑及抗病毒劑等醫藥用組成物。

本發明涉及的抗癌劑(以本發明涉及的含有複合體之組成物作為有效成分的抗癌劑)用以針對人類或動物的使用，能夠透過直接注射來投藥。本發明涉及的抗癌劑又能夠被處方來用以非經口投藥、黏膜投藥、肌肉內投藥、靜脈內投藥、皮下投藥、眼內投藥或經皮投藥。代表性地，於組成物中所包含之蛋白質係以0.01~30mg/kg體重的用量，較佳係以0.1~10mg/kg體重，更佳係能夠以0.1~1mg/kg體重的用量來投藥。

本發明涉及的抗癌劑，在本發明涉及的人類抗體 κ型輕鏈以外，能夠包含：藥學上可接受的載劑(carrier)、稀釋劑或賦形劑(包含其等之組合)。用於治療之使用的藥學上可接受的載劑或賦形劑係藥學領域周知的，而且，例如，記載於Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro編，1985)。藥學上可使用的載劑、賦形劑或稀釋劑的選擇，係按照所意欲的投藥途徑及標準的藥學上的慣例，可容易地由此技術領域之從業人員所選擇。又，本發明涉及的抗癌劑可進一步包含：任意之適切的結合劑、潤滑劑、懸浮劑、被覆劑或增溶劑。

依不同之輸送系統，組成/處方的必要條件可以不同。作為例示，本發明涉及的抗癌劑可使用微量泵或者透過黏膜途徑，例如製成供吸入用的鼻噴劑或氣溶膠來處方，或是處方以供非經口輸送(於此，舉例來說，本發明之抗癌劑係以可注射型態作處方，以供靜脈內途徑、肌肉內途徑或者皮下途徑的輸送)。或者，此處方物可被設計成透過雙方的途徑來輸送。另外，也宜為供吸入用之鼻噴劑或氣溶膠，此等可有效率地從鼻或支氣管等輸送至肺細胞的形態。

又，將本發明涉及的抗癌劑在投藥至生體內的用途來使用的狀況時，能夠使用各種各樣用以提升為有效成分之人類抗體κ型輕鏈在生體內之穩定性(血中半衰期)的技術。例如，已知要是新生兒Fc受體(neonatal Fc receptor(FcRn))與Fc結合，則IgG等抗體的血中半衰期會延長(例如，參照Roopenian，D.C.等人，Nat Rev Immunol vol.7 715-725(2007))，能夠改變本發明涉及的人類抗體κ型輕鏈的C末端，使得具有與FcRn的結合活性。又，亦可本將發明涉及的人類抗體κ型輕鏈二聚物化，亦可附加PEG(聚乙二醇)。

本發明涉及的抗癌劑，例如，亦可與針對服用的態樣之說明書等一起套組化。就該套組而言，另外，亦能夠包含可與本發明涉及的抗癌劑併用的各種醫藥。

又，本發明涉及的抗癌劑，由於係以標靶分子辨識能力高的抗體κ型輕鏈作為有效成分的緣故，抗體κ型輕鏈的標靶分子對於在細胞表面不存在的癌細胞而言不會發揮細胞傷害性。因此，本發明的抗癌劑可期待對於癌症種類的識別係有用的。

實施例

其次，藉由實施例進一步詳細地說明本發明，但本發明並非被限定於此等例者。

[人類抗體κ型輕鏈之表現體系的建構]

在以下的實施例等，使用了由序列編號2的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)、由序列編號2的胺基酸序列中第219號的半胱胺酸被取代為丙胺酸之胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)、由序列編號4的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL)、由序列編號6的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(I))、由序列編號8的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 7 VL(RL))、由序列編號10的胺基酸序列構成之人類抗體κ型 輕鏈(# 7 RLI)、由序列編號12的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 4)、由序列編號14的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(# 11)、由序列編號16的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(23D4)、由序列編號18的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(W3)、由序列編號20的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(W10)、由序列編號22的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(C51)、由序列編號24的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(C82)、由序列編號26的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(C89)及由序列編號40的胺基酸序列構成之人類抗體κ型輕鏈(W15)。

此等人類抗體κ型輕鏈係個別透過大腸桿菌表現體系而表現。具體而言，將由編碼各人類抗體κ型輕鏈之鹼基序列構成的cDNA導入具有His標籤序列位置的質體載體，將該質體載體導入大腸桿菌並製作了形質轉換體。培養各形質轉換體，在進行由IPTG所致之表現誘導時，藉由SDS-PAGE分析及使用了抗人類型(Fab’)₂抗體之西方式墨點法，能夠鑑定出在大腸桿菌中表現之蛋白質係人類型抗體輕鏈。所獲得之人類型抗體輕鏈係在N末端具有M(甲硫胺酸)，且在C末端具有源自質體載體的LEHHHHHH(序列編號53)。

[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]

未使金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈係如以下進行使表現，並純化。

首先，將經導入在前述所製作之表現載體之大腸桿菌 的形質轉換體，在37℃下在LB培養基中培養一晚之後，在培養液中添加IPTG使得終濃度成為10μM(μmol/L)，在18℃下培養了一晚。培養結束後，將含氯化鈉之Tris緩衝液(25mM Tris-HCl，0.25M NaCl，pH8.0)添加至透過離心分離處理而自培養物收穫(harvest)的菌體，透過超音波處理來將菌體破碎之後，進行離心分離處理，來回收可溶性劃分。

其次，作為第1純化步驟，將此可溶性劃分，上樣至經充填有Ni-NTA瓊脂糖(Ni-NTA Agarose)的Ni-NTA管柱(Qiagen公司製)，使適量之前述含有氯化鈉之Tris緩衝液通過該Ni-NTA管柱，使表現之人類抗體κ型輕鏈吸附於該Ni-NTA管柱。其後，使用施加了咪唑濃度從0.03M至0.3M梯度之含咪唑之Tris緩衝液(25mM Tris-HCl，0.25M NaCl，咪唑(imidazole)，pH8.0)作為溶離液，使人類抗體κ型輕鏈自該Ni-NTA管柱溶出，而分取含有人類抗體κ型輕鏈的劃分。經回收之含有人類抗體κ型輕鏈的劃分係利用乙酸緩衝液(50mM乙酸，pH5.5)在4℃下透析了12~24小時。

其後，作為第2純化步驟，將含有經透析之人類抗體κ型輕鏈的劃分，上樣至陽離子交換管柱(製品編號：SP-5PW，TOSOH公司製)，使適量的前述乙酸緩衝液通過該陽離子交換管柱，使表現的人類抗體κ型輕鏈吸附至該陽離子交換管柱。其後，使用施加了氯化鈉濃度從0.15M至0.45M梯度之含氯化鈉的乙酸緩衝液(50mM乙酸，NaCl，pH5.5)作為溶離液，使人類抗體κ型輕鏈自該陽離子交換管柱溶出，而分取了含人類抗體κ型輕鏈的劃分。含有經 回收之人類抗體κ型輕鏈的劃分，係以含氯化鈉之Tris緩衝液(20mM Tris-HCl，0.15M NaCl，pH8.5)在4℃下透析了12~24小時後，進一步以PBS(pH7.4)在4℃下透析了12~24小時。使用了透析後之物作為含有複合體之組成物。

[含有複合體之組成物中，與人類抗體κ型輕鏈結合之銅離子量的測定]

在以下實施例等，為了算出在含有複合體之組成物中，人類抗體κ型輕鏈每1莫耳的銅離子結合量(莫耳)，以以下的方法，測定了與人類抗體κ型輕鏈結合之銅離子的總量(莫耳)。銅離子量的測定係使用市售之測定套組「Metallo Assay低濃度銅測定LS(尿中銅定量套組)」(Metallogenics公司製)來進行。又，供至測定之含有複合體之組成物(樣本)，因應需要，預先使用PBS(磷酸緩衝生理食鹽水)等不含銅離子的溶劑來進行了透析處理。

具體而言，首先，將100μL的樣本置入至低吸附孔型之96孔盤的各孔，進一步，分注了預先先在37℃下培育之140μL的R-A(緩衝液)與3μL的R-R(螯合試劑溶液：3,5-DiBr-PAESA(4-(3,5-二溴-2-吡啶偶氮)-N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺衍生物))，藉由吸移(pipetting)來攪拌。添加R-R等之後，以10分鐘、37℃來培育之後，使用盤式儀「ImmunoMini NJ-2300」(NalgeNunc公司製)，測定了590nm的吸光度。使用預先用套組附屬的銅標準液作成之校準曲線，由所獲得之測定值算出了該樣本中的銅濃度。

又，按照下述式算出了在各含有複合體之組成物 中之銅含量。式中，「銅離子(M)」為複合體組成物中結合至人類抗體κ型輕鏈之銅離子的總量，而「人類抗體κ型輕鏈(M)」則是複合體組成物中所含人類抗體κ型輕鏈的總量。

[細胞有害性檢測]

使用癌細胞株，針對各含有複合體之組成物對癌細胞的細胞有害性進行試驗。就癌細胞株而言，使用了A549株(人類肺泡上皮癌細胞株)、ES-2株(人類卵巢癌細胞株)、MOLT-4株(人類急性淋巴母細胞性白血病T細胞株)、BxPC-3株(人類胰腺癌細胞株)、SNU-1株(人類轉移性胃癌細胞株)及PANC-1株(人類胰癌細胞株)。

又，作為對照，亦使用了為正常細胞株的WI-38株(人類胎兒肺纖維母細胞株)。

此等任一者皆係自ATCC(美國菌種保存中心(American Type Culture Collection))購入。又，分別地A549株係使用含有10%FCS(胎牛血清)之F-12K培養基，ES-2株係使用含有10%FCS之McCoy’s 5A培養基，MOLT-4株、SNU-1株及BXPC-3株係使用含有10%FCS之RPMI-1640培養基，PANC-1株係使用含有10%FCS之DMEM培養基，而WI-38株係使用含有10%FCS之EMEM培養基，以通常的方法來培養。

首先，融解被冷凍之癌細胞株使恢復之後，例如，對96孔盤各接種100μL使得成為5×10³細胞/孔(依細胞類型適宜調整了接種數)。在37℃下培養了24小時後，將添加於該96孔盤之培養基利用傾析法來除去之後，將經調製為約1mg/mL之各含有複合體之組成物，分別添加100μL至各孔。在自添加含有複合體之組成物起培養24小時或48小時後(自細胞接種起培養48小時或72小時後)，分別添加WST-1試劑(Roche公司製)10μL至各孔，在培育1、1.5及2小時之後，測定了所生成之甲色素(Formazan)的吸光度(Abs450nm)(WST檢測)。作為對照，添加未使結合金屬離子的人類抗體κ型輕鏈或PBS來代替含有複合體之組成物，在培養24小時或48小時後進行了WST檢測。基於所獲得之吸光度的結果，令經添加未使結合金屬離子的人類抗體κ型輕鏈之孔或經添加PBS之孔的細胞存活率為100%，求得各孔的細胞存活率，評價了經添加含有複合體之組成物的細胞有害性。

再者，於MOLT-4株的狀況而言，從將細胞接種至96孔盤的時點起，將經調製為約1mg/mL之各含有複合體之組成物分別添加100μL至各孔，於培養24小時或48小時之後進行WST檢測。

[荷瘤模型小鼠中細胞有害性檢測]

使用荷瘤模型小鼠，針對各含有複合體之組成物對於荷瘤模型小鼠中之癌細胞的細胞有害性進行試驗。

首先，以使得成為2.5×10⁶細胞/小鼠(cells/mouse)的方 式，將ES-2株(源自人類卵巢癌之細胞)，或者B-16株(源自小鼠黑色素瘤)移植至小鼠皮下。對建立於小鼠皮下之腫瘤，自移植癌細胞後第4日起投藥了含有複合體之組成物。含有複合體之組成物的投藥係對皮下腫瘤中的複數處，使用注射器從小鼠體外透過直接注射來進行。又，含有複合體之組成物的投藥係在進行了5日且1日1次的投藥之後，停止投藥2日，進一步進行了5日且1日1次的投藥(計投藥10次)。又，作為對照，設了利用同樣的日程投藥了PBS來代替含有複合體之組成物的群。

從小鼠體外隨時間經過測定皮下腫瘤的體積，令移植癌細胞後第1日(移植翌日)之皮下腫瘤的體積為1，求得相對腫瘤體積，評價了含有複合體之組成物在荷瘤模型小鼠中的細胞有害性。

[實施例1]

使用人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)，調查了在表現及純化步驟中銅離子的添加時期，對於所獲得之組成物的細胞有害性造成的影響。

具體而言，係透過下述方法獲得了包含人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)的組成物：如前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]，在銅離子不存在下表現及純化的方法(對照例)中，除了以終濃度成為15μM的方式將銅離子添加至Ni-NTA管柱純化後的溶出液，在4℃下培育12~16小時後利用前述乙酸緩衝液來透析以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行而調製的方法(例1)、除了將導入了 人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)表現用載體之大腸桿菌的形質轉換體，在經添加銅離子使得終濃度成為15μM之LB培養基中培養，且以使得終濃度成為15μM的方式將銅離子添加至前述Ni-NTA管柱純化後的溶出液，在4℃下培育12~16小時之後利用前述乙酸緩衝液來透析以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行而調製的方法(例2)。

分別於圖1A顯示對照例(無添加銅離子)中之陽離子交換層析圖(各滯留時間中溶出液之UV(280nm)吸收值(mAU)與溶離液的氯化鈉濃度(M))，於圖1B顯示在圖1A所示之餾份1~3之SDS-PAGE(非還原)的結果。在餾份1而言，僅含人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)的單體，而在餾份2則包含單體與二聚物雙方，但包含較多的單體。餾份3則主要係包含二聚物。

分別於圖2A顯示例1(一次純化後的銅離子添加)中之陽離子交換層析圖，於圖2B顯示在圖2A所示之餾份1A之SDS-PAGE(非還原)的結果。就例1而言，在相當於對照例之餾份3的位置觀察到1個大的峰。依據SDS-PAGE的結果，於此餾份1A所含之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)幾乎係二聚物，而了解到藉由在銅離子存在下進行純化，二聚物較單體易於形成。

分別於圖3A顯示例2(表現時與一次純化後之銅離子添加)中之陽離子交換層析圖，於圖3B顯示在圖3A所示之餾份2A及2B之SDS-PAGE(非還原)的結果。就例2而言，在相當於對照例之餾份2及餾份3之位置觀察到峰。依據 SDS-PAGE的結果，於兩餾份所含之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)任一者皆幾乎係二聚物，與例1同樣地，了解到藉由在銅離子存在下進行純化，二聚物較單體易於形成。

調查了包含從各餾份所純化之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)之組成物對A549細胞株的細胞有害性。於各孔，添加人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)使成為40μM，求得於添加後培養24小時之時點的細胞存活率。令添加了對照例之餾份3之組成物(Fr.3)之狀況的細胞存活率為100%，求得添加了例1之餾份1A的組成物(Fr.1A)、例2之餾份2A的組成物(Fr.2A)，及例2之餾份2B的組成物(Fr.2B)之狀況時的相對細胞存活率。將結果顯示於圖4。此結果，Fr.2B相對細胞存活率係大於100%，只有與在銅離子不存在下表現/純化且未結合銅離子的Fr.3同程度的細胞有害性。相對於此，就Fr.1A與Fr.2A而言，相對細胞存活率低於40%，相較於未結合銅離子的Fr.3細胞有害性提升。

針對對照例之餾份3的組成物(Fr.3)、例1之餾份1A的組成物(Fr.1A)、例2之餾份2A的組成物(Fr.2A)及例2之餾份2B的組成物(Fr.2B)，求得UV/VIS光譜時，就Fr.1A與Fr.2A而言在約580nm附近觀察到峰，相對於此，就Fr.3與Fr.2B而言則未觀察到該峰。因為銅離子係在約580nm附近有吸収峰，因此了解到：於Fr.1A與Fr.2A係包含結合有銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)，而於Fr.3與Fr.2B則未包含結合有銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)。

由此等的結果，了解到透過結合銅離子，人類抗體κ 型輕鏈(# 7_wt)的細胞有害活性顯著提升。

[實施例2]

使用人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)，在第1純化步驟後添加了銅離子之後，將經培育之物供至第2純化步驟，調查了所獲得之組成物的細胞有害性。

具體而言，係透過下述方法獲得了包含人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)的組成物：除了在以使得終濃度成為15μM的方式將添加銅離子至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，並在4℃下培育12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析12~24小時，其後上樣至陽離子交換管柱以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行來調製之方法(例3)，或者，除了在以使得終濃度成為40μM的方式將銅離子添加至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，並在4℃下培育12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析12~24小時，並上樣至陽離子交換管柱以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行來調製之方法(例4)。

分別於圖5顯示在例3(在一次純化後添加15μM銅離子並培育)中之陽離子交換層析圖，於圖6顯示在例4(在一次純化後添加40μM銅離子並培育)中之陽離子交換層析圖。

就例3而言，與實施例1的例2同樣地有2個峰，分別令為餾份3A及3B。另一方面，就例4而言，僅在相當於例3之餾份3A之位置有1個峰，令包含此峰的劃分為餾份4A。針 對各餾份進行了SDS-PAGE(非還原)時，任一者所包含之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)幾乎皆係二聚物(結果未圖示)。

針對例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)，求得了UV/VIS光譜。將UV/VIS光譜的測定結果，與於實施例1中對照例之餾份3之組成物(Fr.3)的結果一起於圖7顯示。此結果，就Fr.3A與Fr.4A而言在約580nm附近觀察到峰，相對於此，就Fr.3B而言則係與Fr.3同樣地未觀察到該峰。

又，針對例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)，求得銅含量時，Fr.3A係47.5%、Fr.3B係3.2%、Fr.4A係64.6%(表1)。

調查了包含從各餾份所純化之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)之組成物，對SNU-1株及PANC-1株的細胞有害性。於各孔，添加人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)使成為4μM(100μg/mL)，求得了在添加後培養了24小時或48小時之時點的細胞存活率。又，作為陽性對照組，添加抗癌劑順鉑(Cisplatin)使成為4μM或33μM，同樣地進行，調查了細胞有害性。令添加了包含未結合銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)之Fr.3B之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了Fr.3A、Fr.4A及順鉑之狀況時的相對細胞存活率。將結果顯示於表1。此結果，包含經結合銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_wt)之Fr.3A與Fr.4A，就SNU-1株與PANC-1株雙方而言，相對細胞存活率係低的，較未結合銅離子之Fr.3B 細胞有害性提升。

[實施例3]

使用人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)，於第1純化步驟後添加了銅離子之後，將經培育之物供至第2純化步驟，調查了所獲得之組成物的細胞有害性。

具體而言，係透過下述方法而獲得了包含人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)的組成物：如前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]，在銅離子不存在下表現及純化之方法(對照例)，除了以使得終濃度成為15μM的方式添加銅離子至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，在4℃下培育了12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析12~24小時，於其後，上樣至陽離子交換管柱以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行來調製的方法(例3)，或者，除了以使得終濃度成為40μM的方式添加銅離子至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，在4℃下培育12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析12~24小時，並上樣至陽離子交換管柱以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行來調製的方法(例4)。

分別於圖8顯示在對照例(無添加銅離子)中之陽離子交換層析圖，於圖9顯示在例3(在一次純化後添加15μM銅離子並培育)中之陽離子交換層析圖，於圖10顯示在例4(在一次純化後添加40μM銅離子並培育)中之陽離子交換層析圖。就對照例而言，僅在相當於實施例1之對照例的餾份2之位置有1個峰，令包含此峰之劃分為餾份1。就例3而言，與實施例2的例3同樣地有2個峰，分別令為餾份3A及3B。另一方面，就例4而言，與實施例2之例4同樣地僅有1個峰，令包含此峰之劃分為餾份4A。針對各餾份進行了SDS-PAGE(非還原)時，任一者皆僅包含單體的人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)(結果未圖示)。

針對對照例之餾份1的組成物(Fr.1)、例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)，求得了UV/VIS光譜。將UV/VIS光譜的測定結果顯示於圖11。此結果，就Fr.3A與Fr.4A而言，在約580nm附近觀察到峰，相對於此，就Fr.3B而言則係與Fr.1同樣地未觀察到該峰。

又，針對例3之餾份3A的組成物(Fr.3A)、例3之餾份3B的組成物(Fr.3B)及例4之餾份4A的組成物(Fr.4A)，求得銅含量時，Fr.3A係37.5%、Fr.3B係7.4%、Fr.4A係51.5%(表2)。

調查了包含從各餾份所純化之人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)的組成物，對於SNU-1株的細胞有害性。於各孔，添加人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)使成為8.6~9.1 μM，求得添加後經培養24小時之時點的細胞存活率。又，作為陽性對照組，添加抗癌劑順鉑使成為4μM，同樣地進行，調查了細胞有害性。令添加了包含未結合銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)的Fr.3B之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了Fr.3A、Fr.4A及順鉑之狀況時的相對細胞存活率。將結果顯示於表2。此結果：包含經結合銅離子之人類抗體κ型輕鏈(# 7_C219A)的Fr.3A與Fr.4A，就SNU-1株與PANC-1株雙方而言，相對細胞存活率低，相較於未結合銅離子之Fr.3B細胞有害性提升。

[實施例4]

針對將人類抗體κ型輕鏈(C51)在銅離子不存在下表現及純化所獲得之組成物[C51(Lot1)及C51(Lot2)]、將人類抗體κ型輕鏈(C51)在銅離子存在下純化所獲得之含有複合體之組成物[C51(Lot3)]，以及使人類抗體κ型輕鏈(C51)在銅離子存在下表現及純化所獲得之含有複合體之組成物[C51(Lot4)]，調查了對於A549株的細胞有害性。

C51(Lot1)及C51(Lot2)係如前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]進行而調製。任一者就陽離子交換層析圖而言，皆係與實施例1之對照例同樣地獲得了3個峰，但僅將包含峰3的餾份(餾份3)予以純化，調查了細胞有害性。

C51(Lot3)係除了以使得終濃度成為15μM方式添加銅離子至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，在4℃下培育12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行來調製。就陽離子交換層析圖而言，與實施例1之例1同樣地獲得1個峰，僅將包含此峰的餾份(餾份1A)予以純化，調查了細胞有害性。

C51(Lot4)係，除了將經導入了人類抗體κ型輕鏈(C51)表現用載體之大腸桿菌的形質轉換體，利用以使得終濃度成為15μM的方式添加了銅離子之LB培養基來培養，且，以使得終濃度成為15μM的方式將添加銅離子至含有Ni-NTA管柱純化後之人類抗體κ型輕鏈的劃分，在4℃下培育12~16小時之後，利用前述乙酸緩衝液來透析以外，係與前述之[人類抗體κ型輕鏈的表現及純化]同樣地進行而調製。就陽離子交換層析圖而言，與實施例1的例2同樣地獲得2個峰，僅將其中包含含有經與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈(C51)之峰的餾份(峰2A)予以純化，調查了細胞有害性。

調查了包含從各餾份所純化之人類抗體κ型輕鏈(C51)之組成物，對於A549株的細胞有害性。於各孔添加人類抗體κ型輕鏈(C51)使成為40μM，求得了添加後經培養24小時之時點的細胞存活率。又，令經添加抗癌劑順鉑使成為33μM或330μM之物為陽性對照組，令經添加PBS之物為陰性對照組，同樣地進行，調查了細胞有害性。令經添 加PBS之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了C51(Lot1)~C51(Lot4)及順鉑之狀況時的相對細胞存活率。將結果顯示於圖12。此結果，未與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈(C51)[C51(Lot1)及C51(Lot2)]亦見與添加順鉑33μM相同程度的細胞有害性。而包含經與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈(C51)之C51(Lot3)及C51(Lot4)，較C51(Lot1)及C51(Lot2)相對細胞存活率係明顯地低，而細胞有害性提升。

針對包含從各餾份所純化之人類抗體κ型輕鏈(C51)的組成物，求得了UV/VIS光譜。將C51(Lot1)及C51(Lot4)之UV/VIS光譜的測定結果顯示於圖13。就C51(Lot4)及C51(Lot3)而言，在約580nm附近觀察到峰，相對於此，就C51(Lot1)及C51(Lot2)而言，則未觀察到該峰。此結果，銅離子的結合部位被推定為人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸。

[實施例5]

針對將人類抗體κ型輕鏈(C51)在各種金屬離子存在下培育而使結合所獲得之組成物，調查了對於A549株及WI-38株的細胞有害性。

具體而言，首先，與實施例4之C51(Lot1)同樣地進行，調製了包含人類抗體κ型輕鏈(C51)的組成物。其次，以使得最終濃度成為15μM的方式將3價的鐵離子、鈷離子、鎳離子、銅離子、鋅離子、金離子、銀離子或鉑離子添加至經調整使得該人類抗體κ型輕鏈(C51)最終濃度成為40μM 的人類抗體κ型輕鏈(C51)溶液，並培育了24小時。培育後，將利用PBS(pH7.4)在4℃下12小時的透析予以重複2次所獲得之組成物，使用於細胞有害性檢測。

針對經與銅離子培育之後進行透析所獲得之各組成物測定了UV/VIS光譜時，由於在約580nm附近觀察到峰，而確認到藉由將純化後之人類抗體κ型輕鏈與金屬離子培育，能夠獲得包含經與金屬離子結合之人類抗體κ型輕鏈的組成物。

在細胞有害性檢測中，於各孔添加人類抗體κ型輕鏈(C51)使成為4μM，求得在添加後培養了24小時之時點的細胞存活率。又，令經添加了抗癌劑順鉑使成為4μM(A549株)或4.2μM(WI-38株)之物為陽性對照組，令經添加了PBS之物為陰性對照組，同樣地進行，調查了細胞有害性。令添加了PBS之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了各組成物及順鉑之狀況時的相對細胞存活率。

分別將針對A549株的結果顯示於圖14，將針對WI-38株的結果顯示於圖15。該結果，在A549株中，就經與鎳離子、銅離子、鋅離子、金離子、銀離子或鉑離子培育之人類抗體κ型輕鏈(C51)而言，與添加順鉑之狀況時同樣地相對細胞存活率係低至60%左右，具有高的細胞有害性。另一方面，就經與鐵離子或鈷離子培育的人類抗體κ型輕鏈(C51)而言，相對細胞存活率係90%以上，未見細胞有害性。相對地，在WI-38株中，在添加順鉑的狀況時相對 細胞存活率係40%，非常地低，相對於此，經與金屬離子培育之人類抗體κ型輕鏈(C51)，無論金屬離子的種類，相對細胞存活率係高至85%以上，未見到細胞有害性。從此等的結果，顯然地，藉由使人類抗體κ型輕鏈，與銅離子等第10族元素、第11族元素或第12族元素的金屬離子結合，能夠改善癌細胞特異的細胞有害性。

[實施例6]

針對各種人類抗體κ型輕鏈，調查了銅離子結合量對於對癌細胞之細胞有害性的影響。

具體而言，首先，將人類抗體κ型輕鏈與實施例4之C51(Lot1)同樣地進行，調製了包含人類抗體κ型輕鏈之組成物。其次，將銅離子添加至經調整使得該人類抗體κ型輕鏈成為最終濃度40μM之人類抗體κ型輕鏈溶液並培育了24小時。培育後，將利用PBS(pH7.4)在4℃下12小時的透析予以重複2次所獲得之組成物，使用於細胞有害性檢測。

就細胞有害性檢測而言，求得了在添加各組成物後培養了24小時之時點的細胞存活率。又，就未與銅離子培育之人類抗體κ型輕鏈(未與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈)而言，亦同樣地進行，調查了細胞有害性。令經添加了未與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了各組成物之狀況時的相對細胞存活率。

於表3及4顯示在細胞有害性檢測中使用之人類抗體κ型輕鏈、癌細胞株、經添加於各孔之人類抗體κ型 輕鏈的濃度(μM)，及相對細胞存活率(%)。

從此等之結果亦可確認到：藉由使各種人類抗體κ型輕鏈與銅離子結合，可提升對於各種各樣之癌細胞的細胞有害性。

[實施例7]

針對各種人類抗體κ型輕鏈，調查了銅離子結合量對於對癌細胞之細胞有害性的影響。

具體而言，首先，將人類抗體κ型輕鏈與實施例4之C51(Lot1)同樣地進行，調製了包含人類抗體κ型輕鏈之組成物。其次，將銅離子添加至經調整使得該人類抗體κ型輕鏈成為最終濃度40μM之人類抗體κ型輕鏈溶液並培育了24小時。培育後，將利用PBS(pH7.4)在4℃下12小時的透析予以重複2次所獲得之組成物，使用於細胞有害性檢測。又，針對各組成物，亦求得了銅含量。

就細胞有害性檢測而言，求得了在添加各組成物後培養了24小時之時點的細胞存活率。又，就未與銅離子培育之人類抗體κ型輕鏈(未與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈)而言，亦同樣地進行，調查了細胞有害性。令經添加了未與銅離子結合之人類抗體κ型輕鏈之狀況時的細胞存活率為100%，求得了分別添加了各組成物之狀況時的相對細胞存活率。

於表5顯示於細胞有害性檢測使用之人類抗體κ型輕鏈、癌細胞株、經添加於各孔之人類抗體κ型輕鏈的 濃度(μM)、人類抗體κ型輕鏈組成物的銅含量(%)，及相對細胞存活率(%)。此結果，於任一人類抗體κ型輕鏈中，就癌細胞株而言相對細胞存活率係低至約85%以下，但就為正常細胞株之WI-38株而言相對細胞存活率係高至90%以上。由此等的結果亦可確認到，藉由使各種人類抗體κ型輕鏈與銅離子結合，特別係能夠使對於癌細胞的細胞有害性提升。

[實施例8]

針對將人類抗體κ型輕鏈(W15及# 4)，在銅離子存在下培育並使結合銅所獲得之組成物，調查了對於荷瘤模型小鼠的影響。

具體而言，首先，將人類抗體κ型輕鏈與實施例4之C51(Lot1)同樣地進行，調製了包含人類抗體κ型輕鏈的組成物。其次，將銅離子添加至經調整使得該人類抗體κ型輕鏈成為最終濃度40μM之人類抗體κ型輕鏈溶液並培育了24小時。培育後，將利用PBS(pH7.4)在4℃下12小時的透析予以重複2次，調製了含有複合體之組成物。

其次，如前述[荷瘤模型小鼠中細胞有害性檢測]，對荷瘤模型小鼠，投藥上述含有複合體之組成物或PBS，來評價在荷瘤模型小鼠中的細胞有害性。

於圖16顯示，對移植ES-2株所獲得之荷瘤小鼠，將含有包含人類抗體κ型輕鏈(W15)之複合體的組成物，每1次投藥了63.7μg/隻(25.5μM/隻)的結果。又，於圖17顯示，對移植B-16株所獲得之荷瘤小鼠，將含有包含人類抗體κ型輕鏈(# 4)之複合體的組成物，每1次投藥了32.3μg/隻(12.9μM/隻)的結果。任一個狀況皆係設PBS投藥群為對象，各群皆係n=2。

此等之結果，就對於ES-2株移植小鼠投藥了含有包含人類抗體κ型輕鏈(W15)之複合體的組成物之群而言，與投藥了PBS的對照群相比，在移植後第15日之相對腫瘤體積停留在約1/4，確認到明顯的癌細胞有害性。

又，對B-16株移植小鼠投藥了含有包含人類抗體κ型輕鏈(# 4)之複合體的組成物之群，與投藥了PBS之對照群相比，在移植後第15日之相對腫瘤體積停留在約1/3，亦確認到明顯的癌細胞有害性。

產業上之可利用性

本發明能夠利用於：將人類抗體κ型輕鏈作為有效成分之醫藥品的製造領域，及新穎抗癌劑的開發、癌症治療的領域。

<110> 獨立行政法人科學技術振興機構

<120> 含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物及其製造方法

<130> PC18767

<150> JP2013-170414

<151> 2013-08-20

<160> 53

<170> PatentIn version 3.1

<210> 1

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<213> 人類

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<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(#7_wt)

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<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(#11)

<400> 14

<210> 15

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(2304)

<400> 15

<210> 16

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(23D4)

<400> 16

<210> 17

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W3)

<400> 17

<210> 18

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W3)

<400> 18

<210> 19

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W10)

<400> 19

<210> 20

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W10)

<400> 20

<210> 21

<211> 107

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(C51)

<400> 21

<210> 22

<211> 214

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(C51)

<400> 22

<210> 23

<211> 108

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(C82)

<400> 23

<210> 24

<211> 215

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(C82)

<400> 24

<210> 25

<211> 108

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(C89)

<400> 25

<210> 26

<211> 215

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(C89)

<400> 26

<210> 27

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W2)

<400> 27

<210> 28

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W2)

<400> 28

<210> 29

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W4)

<400> 29

<210> 30

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W4)

<400> 30

<210> 31

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W7)

<400> 31

<210> 32

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W7)

<400> 32

<210> 33

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W8)

<400> 33

<210> 34

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W8)

<400> 34

<210> 35

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W11)

<400> 35

<210> 36

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W11)

<400> 36

<210> 37

<211> 113

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W14)

<400> 37

<210> 38

<211> 220

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W14)

<400> 38

<210> 39

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W15)

<400> 39

<210> 40

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W15)

<400> 40

<210> 41

<211> 113

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W17)

<400> 41

<210> 42

<211> 220

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W17)

<400> 42

<210> 43

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W18)

<400> 43

<210> 44

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W18)

<400> 44

<210> 45

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W19)

<400> 45

<210> 46

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W19)

<400> 46

<210> 47

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W21)

<400> 47

<210> 48

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W21)

<400> 48

<210> 49

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W26)

<400> 49

<210> 50

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W26)

<400> 50

<210> 51

<211> 112

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈的可變區(W28)

<400> 51

<210> 52

<211> 219

<212> PRT

<213> 人類

<220>

<223> 人類抗體κ型輕鏈(W28)

<400> 52

<210> 53

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工序列的描述：人工地合成的序列

<400> 53

Claims (11)

1. 一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其特徴在於包含結合了人類抗體κ型輕鏈與金屬離子的複合體，且該金屬離子係選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上；前述人類抗體κ型輕鏈為二聚物，且2個前述人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸係透過前述金屬離子而結合；並且，每1莫耳之前述人類抗體κ型輕鏈結合有0.1莫耳以上之前述金屬離子。
2. 如請求項1之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其中前述金屬離子係選自於由銅離子、鎳離子、鋅離子、金離子、銀離子及鉑離子所構成群組中之1種以上。
3. 如請求項1或2之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物，其中前述人類抗體κ型輕鏈係選自下述者所構成之群組：(1)可變區係以序列編號1之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(2)可變區係以序列編號3之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(3)可變區係以序列編號5之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(4)可變區係以序列編號7之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(5)可變區係以序列編號9之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(6)可變區係以序列編號11之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(7)可變區係以序列編號13之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列所表示，且具有對癌細胞之細胞有害性之多肽；(8)可變區係以序列編號15之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(9)可變區係以序列編號17之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(10)可變區係以序列編號19之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(11)可變區係以序列編號21之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(12)可變區係以序列編號23之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(13)可變區係以序列編號25之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(14)可變區係以序列編號27之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(15)以下述胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽：序列編號2之胺基酸序列中第219號的半胱胺酸已被取代為丙胺酸的胺基酸序列，或者，與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列；(16)可變區係以序列編號29之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(17)可變區係以序列編號31之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性之多肽；(18)可變區係以序列編號33之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性之多肽；(19)可變區係以序列編號35之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性之多肽；(20)可變區係以序列編號37之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(21)可變區係以序列編號39之胺基酸序列或者該與胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(22)可變區係以序列編號41之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(23)可變區係以序列編號43之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(24)可變區係以序列編號45的胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(25)可變區係以序列編號47之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；(26)可變區係以序列編號49之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽；及(27)可變區係以序列編號51之胺基酸序列或者與該胺基酸序列具有95%以上之序列同一性之胺基酸序列來表示，且具有對癌細胞之細胞有害性的多肽。
4. 一種醫藥用組成物，其特徴在於係以如請求項1或2之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物作為有效成分。
5. 如請求項4之醫藥用組成物，其係抗癌劑。
6. 一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其特徴在於具有下述步驟：表現步驟，其使用包含聚核苷酸的表現用載體，藉由細胞內或細胞外表現體系，而使前述人類抗體κ型輕鏈表現，該聚核苷酸係編碼在C末端具有半胱胺酸殘基之人類抗體κ型輕鏈；及純化步驟，其係從於前述表現步驟所獲得之表現產物純化出前述人類抗體κ型輕鏈；並且，(a)在前述表現步驟中，係在選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子的存在下，使前述人類抗體κ型輕鏈表現；或者，(b)將選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子添加至前述表現步驟所獲得之表現產物，並從所得之混合物純化出前述人類抗體κ型輕鏈。
7. 如請求項6之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其中前述(b)係將前述混合物培育30分鐘~48小時後，從該混合物純化出人類抗體κ型輕鏈。
8. 如請求項6或7之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其中前述純化步驟係由第1純化步驟與第2純化步驟構成：該第1純化步驟係透過使用了包含第1填充劑之管柱的管柱層析法，從前述表現步驟所獲得之表現產物獲得包含前述人類抗體κ型輕鏈的粗純化物，該第2純化步驟係透過使用了包含第2填充劑之管柱的管柱層析法，從前述第1純化步驟所獲得的粗純化物獲得前述人類抗體κ型輕鏈的純化物，並且，在前述第1純化步驟後且在前述第2純化步驟前，將前述金屬離子添加至前述粗純化物。
9. 如請求項8之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其係於前述第2純化步驟前，將經添加前述金屬離子的前述粗純化物培育30分鐘~48小時。
10. 如請求項8之含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其係在前述表現步驟中將前述金屬離子添加至前述表現體系內後，進一步在前述第1純化步驟後且在前述第2純化步驟前，將前述金屬離子添加至前述粗純化物。
11. 一種含有人類抗體κ型輕鏈複合體之組成物的製造方法，其特徴在於：在含有選自於由第10族元素、第11族元素及第12族元素所構成群組中之1種以上金屬離子之溶液中培育人類抗體κ型輕鏈，藉此製造含有複合體的組成物，該複合體係2個前述人類抗體κ型輕鏈之C末端的半胱胺酸殘基透過前述金屬離子而結合者。