JPWO2015008845A1 - 試料分析装置におけるグラジエント送液装置 - Google Patents
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Abstract
Description
なお本明細書において「流量」とは体積流量を意味し、流体の断面積と流体の速度(流速)との積で表すことができるものとする。
一方、高圧グラジエント方式は、グラジエントの応答性が良いので、キャリア液の流量が少ないときに主に用いられ、理想的なグラジエント操作ができるが、2本以上のプランジャを用いた脈動の少ないポンプを複数台使用するため装置が大きくなり、高価になる。
また、キャリア液の吸引・吐出時間の比が可変となることにより、プランジャの往復動速度を流量に応じて変更する時でも、吸引工程を任意の時間とすることができ、脈動を抑制することができる。さらに、キャリア液の組成変化も好適に実施することができる。
その結果、安価で小型化されたリニア高圧グラジエント送液装置を提供することができる。
図1は本発明の一実施形態として、バルブ16に特願2013−148183号(PCT/JP2014/61256)に記載のバルブを使用した場合のシステム図である。
本実施形態のHPLC方式の試料分析装置は、HPLCの原理により分析可能な各種の分析対象、例えば、血液中のヘモグロビンA1cをはじめとするヘモグロビン各成分などを分析するために用いられる。
試料注入装置6はまた、試料注入部22の下方に試料吸引部(容器保持部)39を備えている。試料吸引部39では、試料吸引位置に移動させたニードル27により、試料を吸引可能である。従って、試料吸引部39にて吸引した試料を試料注入部22にてキャリア液に注入することになる。尚、吸引及び注入は、計量ポンプ(サンプリングポンプ)11を切換バルブ16を介してニードル27への配管12に接続して行う。
検出装置9は、カラム装置8の下流側に配置されて、前記分離された成分を検出し、その信号をデータ処理装置(図示せず)に送る。データ処理装置でのデータ処理結果が分析結果として出力される。
ポートaは、エア抜き及びキャリア液充填用の配管17により、送液ポンプ1のシリンダ室に接続されている。
ポートbは、エア抜き及びキャリア液充填用の配管18により、送液ポンプ2のシリンダ室に接続されている。
ポートcは、配管12により、ニードル27に接続されている。
ポートdは、配管13により、希釈・洗浄液の貯留槽53に接続されている。
ポートeは、ミキサー3からのエア抜き及びキャリア液充填用の配管19に接続され、ポートfは、排液流路20に接続されている。
言い換えれば、切換バルブ16のロータは、計量ポンプ11が接続される中央配管接続ポートと、中央配管接続ポートから連通される第1バルブ内流路16aと、第1バルブ内流路16aの回動に伴って回動する弧状の第2バルブ内流路16bとを備えている。
切換バルブ16のステータは、上記ポートa〜dを含む第1配管接続ポート群と、上記ポートe、fを含む第2配管接続ポート群とを備えている。
第1配管接続ポート群(a〜d)は、第1バルブ内流路16aの回動により、第1バルブ内流路16aを介して中央配管接続ポートと個別に連通され、第1バルブ内流路16aと各ポートa〜dとの接続位置は同一円周上にある。
第2配管接続ポート群(e、f)は、弧状の第2バルブ内流路16bの回動により、第2バルブ内流路16bを介して互いに連通可能であり、第2バルブ内流路16bと各ポートe、fとの接続位置は、ポートa〜dがある円周とは同軸であり、異なる径の円周上にある。
ここで、第1配管接続ポート群のうち、ポートa、bでは、中央配管接続ポートと当該ポートa、bとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって、第2配管接続ポート群の2つのポートe、fが連通される。
第1配管接続ポート群のうち、他のポートc、dでは、中央配管接続ポートと当該ポートc、dとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって、第2配管接続ポート群の2つのポートe、fが連通されない。
運転準備段階では、流路内のエア抜きを行って流路内にキャリア液を満たすため、次のような操作が自動的に行われる。
この状態で、先ず計量ポンプ11を吸引動作させる。すると、貯留槽51内の第1のキャリア液が送液ポンプ1の吸入側の逆止弁61を通り、送液ポンプ1のシリンダ室から配管17を通って、計量ポンプ11内に吸入される。これにより、第1のキャリア液の貯留槽51から送液ポンプ1までの流路がキャリア液で満たされる。
次に計量ポンプ11を吐出動作させる。すると、計量ポンプ11内の第1のキャリア液が配管17により送液ポンプ1に圧送され、吐出側の逆止弁62を開いて、ミキサー3へ流れる。そして、カラム装置8側の抵抗で、キャリア液は、ミキサー3を経て配管19へ流れ、さらに、配管19から切換バルブ16(ポートe、f)を介してつながっている排液流路20を通って排液として排出される。
この状態で、先ず計量ポンプ11を吸引動作させる。すると、貯留槽52内の第2のキャリア液が送液ポンプ2の吸入側の逆止弁63を通り、送液ポンプ2のシリンダ室から配管18を通って、計量ポンプ11内に吸入される。これにより、第2のキャリア液の貯留槽52から送液ポンプ2までの流路がキャリア液で満たされる。
次に計量ポンプ11を吐出動作させる。すると、計量ポンプ11内の第2のキャリア液が配管18により送液ポンプ2に圧送され、吐出側の逆止弁64を開いて、ミキサー3へ流れる。そして、カラム装置8側の抵抗で、キャリア液は、ミキサー3を経て配管19へ流れ、さらに、配管19から切換バルブ16(ポートe、f)を介してつながっている排液流路20を通って排液として排出される。
希釈工程では、ニードル27を試料吸引位置(試料吸引部39)すなわち試料が収容される容器内に位置させる。
切換バルブ16の位置は先ず位置dにする。位置dでは、計量ポンプ11がポートd(配管13)と接続される。この状態で、計量ポンプ11を吸引動作させる。すると、貯留槽53内の希釈液(希釈・洗浄液)が配管13を介して計量ポンプ11内に吸引される。
切換バルブ16の位置は次に位置cにする。位置cでは、計量ポンプ11がポートc(配管12)と接続される。この状態で、計量ポンプ11を吐出動作させる。すると、計量ポンプ11内の希釈液が配管12を介してニードル27に圧送される。ニードル27は試料吸引位置(試料吸引部39)すなわち容器内に位置しており、希釈液が容器内に供給される。計量ポンプ11に吸引・吐出動作を繰り返させ、容器内の試料と希釈液との混合液をニードル27によって吸ったり戻したりすることで、容器内の混合液を撹拌し、試料を均一に希釈する。
切換バルブ16をニードル27側に切換え(位置c)、計量ポンプ11と配管12とを接続する。この状態で、計量ポンプ11を吸引動作させる。すると、容器内の試料がニードル27内に吸引される。
切換バルブ16をニードル27側に切換え(位置c)、計量ポンプ11と配管12とを接続する。この状態で、計量ポンプ11を吐出動作させる。すると、ニードル27内の試料がキャリア液の流路5、7間の試料注入部22に注入される。
切換バルブ16の位置は先ず位置dにする。位置dでは、計量ポンプ11がポートd(配管13)と接続される。この状態で、計量ポンプ11を吸引動作させる。すると、貯留槽53内の洗浄液(希釈・洗浄液)が配管13を介して計量ポンプ11内に吸引される。
切換バルブ16の位置は次に位置cにする。位置cでは、計量ポンプ11がポートc(配管12)と接続される。この状態で、計量ポンプ11を吐出動作させる。すると、計量ポンプ11内の洗浄液が配管12を介してニードル27に圧送される。ニードル27は洗浄位置に位置しており、洗浄液によってニードル27が洗浄される。洗浄後の洗浄液は、排液ポンプ14により回収され、排液流路15を通って排液として排出される。
このとき、排液ポンプ14の流量は計量ポンプ11の流量より大きいので、洗浄後の洗浄液はニードル27の案内孔(図示せず)より入った空気と共に、外部へ漏れることなく排液流路15より排出される。ここで、洗浄液は空気と混合してミスト状となることで、洗浄効率を上げることができ、また洗浄液消費量の減少を図り、ニードル27の洗浄を好適に行うことができる。
送液ポンプ(シングルプランジャポンプ)1、2が運転されると共に、2つの送液ポンプ1、2の流量比が時間と共に変化せしめられる。そして、送液ポンプ1による第1のキャリア液と送液ポンプ2による第2のキャリア液とは、ミキサー3にて混合して均一化され、脈動はパルスダンパ4により吸収される。
このように、送液ポンプ1、2の流量比の変更と、ミキサー3及びパルスダンパ4による混合及び脈動吸収とで、第1のキャリア液の濃度と第2のキャリア液の濃度との間の任意の濃度のキャリア液を得ることができる。
ポンプ1を最大流量で送液させ、ポンプ2を停止させる場合、ポンプ1のプランジャのストローク長は最大流量に応じた長さに、吸引時間と吐出時間との割合は実質的に1:1に制御されればよい。
流量の増減は、ポンプの回転数、プランジャのストローク長等の調整により制御でき、これらを組み合わせて制御してもよい。
キャリア液の吸引時間及び吐出時間の増減は、プランジャのストローク長の調整、一定の往復動サイクル時間内における吸引時間と吐出時間比の変更等により制御でき、これらを組み合わせて制御してもよい。
このように、プランジャのストローク長及びキャリア液の吸引・吐出時間比が可変となることにより、低流量での送液においても脈動の影響を小さくすることが可能となる。上記のポンプ動作とパルスダンパの使用を組み合わせることで、実質的に脈動の少ない送液ができる。
(A)下記(1)〜(3)を具備するロータ。
(1)1個以上の中央配管接続ポート。
(2)上記の中央配管接続ポートから連通される1個以上の第1バルブ内流路。
(3)上記第1バルブ内流路の回動に伴って回動する、流路の長さが回動で移動する長さ1回分以上である1個以上の弧状の第2バルブ内流路。
本実施形態では、1個の中央配管接続ポート、1個の第1バルブ内流路16a、及び、1個の弧状の第2バルブ内流路16bを有している。
(B)下記(4)〜(5)を具備するステータ。
(4)上記ロータの第1バルブ内流路16aの回動により、第1バルブ内流路16aを介して中央配管接続ポートと個別に連通される配管接続ポートを2個以上有し、その接続位置がロータ中心軸回りの1つの円周上にある第1配管接続ポート群。本実施形態では、中央配管接続ポートと個別に連通される配管接続ポートは、a、b、c、dの4個を有している。
(5)上記ロータの第1バルブ内流路16aと第1配管接続ポート群a、b、c、dとの接続位置がある上記円周に対して、径の異なる同軸円の円周上に弧状の第2バルブ内流路16bとの接続位置を持ち、弧状の第2バルブ内流路16bの回動により互いに連通される配管接続ポートを2個以上有する第2配管接続ポート群。本実施形態では、上記の弧状の第2バルブ内流路16bの回動により連通される配管接続ポートは、e、fの2個を有している。
(C)下記(6)〜(7)の関係を満たすロータとステータの配置。
(6)上記ロータの第1バルブ内流路16aと個別に連通する上記ステータの第1配管接続ポート群のうち、1個以上の配管接続ポートでは、中央配管接続ポートと当該配管接続ポートとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって、第2配管接続ポート群の2個以上の隣接する配管接続ポートが連通される。本実施形態では、中央配管接続ポートと配管接続ポートaまたはbとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって配管接続ポートe、fが連通される。
(7)上記第1配管接続ポート群のうち、他の配管接続ポートでは、中央配管接続ポートと当該配管接続ポートとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって、第2配管接続ポート群の上記隣接する配管接続ポートが連通されない。本実施形態では、中央配管接続ポートと配管接続ポートcまたはdとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路16bによって配管接続ポートe、fが連通されない。
かかる構成により、既に述べたようなエア抜きが可能となる。尚、上記(3)の弧状の第2バルブ内流路について、好ましい長さは、回動で移動する長さ1回分以上であり、より好ましくは2回分以上である。
2 第2の送液ポンプ(シングルプランジャポンプ)
3 ミキサー
4 パルスダンパ
5 キャリア液の流路
6 試料注入装置
7 キャリア液の流路
8 カラム装置
9 検出装置
10 排液流路
11 計量ポンプ
12 配管
13 配管
14 排液ポンプ
15 排液流路
16 切換バルブ
16a 第1バルブ内流路
16b 第2バルブ内流路
17〜19 配管
20 排液流路
22 試料注入部
27 ニードル
30 制御装置
33 洗浄部
39 試料吸引部(容器保持部)
50 試薬キット
51 第1のキャリア液の貯留槽
52 第2のキャリア液の貯留槽
53 希釈・洗浄液の貯留槽
54 脱気装置
61〜64 逆止弁
Claims (6)
- 高速液体クロマトグラフィーに用いられるグラジエント送液装置であって、
互いに組成の異なるキャリア液を貯留する複数のキャリア液貯留槽と、
上記複数のキャリア液貯留槽のそれぞれからキャリア液を吸引・吐出可能な複数のシングルプランジャポンプと、
上記複数のシングルプランジャポンプから吐出されるキャリア液を混合して送出するミキサーと、
このミキサーと連通し、送液中の脈動を吸収するパルスダンパと、
を含んで構成され、
上記シングルプランジャポンプが、キャリア液の吸引・吐出のストローク長を可変とする機能、及び、キャリア液の吸引時間と吐出時間との比を可変とする機能のうち、少なくとも一方を有すること
を特徴とする、グラジエント送液装置。 - 上記シングルプランジャポンプと上記ミキサーとの間の流路に、1つ以上のパルスダンパが設置されていることを特徴とする、請求項1記載のグラジエント送液装置。
- 下記(A)〜(C)を具備することを特徴とする切換バルブを介し、切換バルブの中央配管接続ポートと計量ポンプとを接続させるとともに、第1配管接続ポート群のうち少なくとも1以上の配管接続ポートを上記シングルプランジャポンプのシリンダ室に接続させることで、計量ポンプとシングルプランジャポンプのシリンダ室とを連通させる配管を具備する請求項1記載のグラジエント送液装置。
(A)以下(1)〜(3)を具備するロータ。
(1)1個以上の中央配管接続ポート。
(2)上記の中央配管接続ポートから連通される1個以上の第1バルブ内流路。
(3)上記第1バルブ内流路の回動に伴って回動する、流路の長さが回動で移動する長さ1回分以上である1個以上の弧状の第2バルブ内流路。
(B)以下(4)〜(5)を具備するステータ。
(4)上記ロータの第1バルブ内流路の回動により、第1バルブ内流路を介して中央配管接続ポートと個別に連通される配管接続ポートを2個以上有し、その接続位置がロータ中心軸回りの1つの円周上にある第1配管接続ポート群。
(5)上記ロータの第1バルブ内流路と第1配管接続ポート群との接続位置がある上記円周に対して、径の異なる同軸円の円周上に弧状の第2バルブ内流路との接続位置を持ち、弧状の第2バルブ内流路の回動により互いに連通される配管接続ポートを2個以上有する第2配管接続ポート群。
(C)以下(6)〜(7)の関係を満たすロータとステータの配置。
(6)上記ロータの第1バルブ内流路と個別に連通する上記ステータの第1配管接続ポート群のうち、1個以上の配管接続ポートでは、中央配管接続ポートと当該配管接続ポートとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路によって、第2配管接続ポート群の2個以上の隣接する配管接続ポートが連通される。
(7)上記第1配管接続ポート群のうち、他の配管接続ポートでは、中央配管接続ポートと当該配管接続ポートとが連通されるときに、弧状の第2バルブ内流路によって、第2配管接続ポート群の上記隣接する配管接続ポートが連通されない。 - 上記シングルプランジャポンプは、それぞれが、流量範囲1μL/min〜10mL/min、プランジャストローク範囲0.01mm〜20mm、プランジャ容積範囲0.1μL〜100μLの範囲内であることを特徴とする、請求項1記載のグラジエント送液装置。
- 以下(1)〜(3)を具備することを特徴とする、請求項1記載のグラジエント送液装置を含む、高速液体クロマトグラフィー方式の試料分析装置。
(1)ミキサーより下流のキャリア液の流路に試料を注入する試料注入装置。
(2)上記試料注入装置より下流側のキャリア液の流路に配置されて、試料中の成分を分離するカラム装置。
(3)上記カラム装置より下流側のキャリア液の流路に配置されて、試料中の成分を検出する検出装置。 - 上記キャリア液の流路に、上記試料として血液を注入し、血液中のヘモグロビン成分を分離・検出してその成分量を計測することを特徴とする、請求項1記載のグラジエント送液装置を用いるヘモグロビン成分の計測方法。
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