JPWO2014061411A1 - 抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体および抗体医薬の製造過程で生産される抗体単量体とその重合体の分離方法 - Google Patents
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Abstract
Description
[式中、R1、R2およびR3は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、A1およびA2は、−R4−SO3Mであり、ここで、R4はC2〜C4のアルキレンであり、Mは、水素原子、NaまたはKである。]
で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位をモノマー全体の30〜100mol%の範囲で含む重合体が結合してなる抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体であって、そのイオン交換容量が60〜300μmol/mlである陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
[式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、R5およびR6は、それぞれ独立して、水素原子、C1〜C4のアルキルまたはC1〜C4のアルコキシメチルである。]
で示される少なくとも1種の中性モノマー単位、または、式(4):
[式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、A3は、水素原子、NaまたはKである。]
で示される少なくとも1種の弱カチオン性モノマー単位をさらに含む、上記[1]記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
本発明の抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体は、多孔性粒子を含むベース担体に、リガンドとして、式(1)または(2):
[式中、R1、R2およびR3は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、A1およびA2は、−R4−SO3Mであり、ここで、R4はC2〜C4のアルキレンであり、Mは、水素原子、NaまたはKである。]
で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位をモノマー全体の30〜100mol%の範囲で含む重合体が結合した構造を有しており、そのイオン交換容量が60〜300μmol/mlであることを特徴としている。
本発明の陽イオン交換クロマトグラフィー担体において、ベース担体として用いる多孔性粒子としては、強カチオン性モノマー単位、ならびに必要に応じて、中性モノマー単位および弱カチオン性モノマー単位を導入するための官能基(例えば、水酸基またはカルバモイル基など)を有するものであれば特に制限されない。そのような多孔性粒子としては、上記のような官能基を有する、例えば、アガロース、デキストラン、でんぷん、セルロース、プルラン、キチン、キトサン、三酢酸セルロース、二酢酸セルロースなどの多糖類およびその誘導体;ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアルキルビニルエーテル、ポリビニルアルコールなどの有機重合体などが好ましく挙げられる。これらの多孔性粒子は、機械的強度を確保できることから、架橋構造を形成していることが好ましい。これらの中でも、本発明においては、架橋反応によってセルロース粒子の骨格が補強された架橋セルロース粒子を用いることが好ましい。
体積平均粒子径(MV)=Σ(nd4)/Σ(nd3)
[式中、ndは光学顕微鏡写真から求めたそれぞれの粒子径の値を表し、nは測定した粒子の個数を表す。]
Kav=(Ve−V0)/(Vt−V0)
[式中、Veはサンプルの保持容量(mL)、Vtは空カラム体積(mL)、V0はブルーデキストラン保持容量(mL)を表す。]
本発明の抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体においては、前記多孔性粒子に、リガンドとして、式(1)または(2):
[式中、R1、R2およびR3は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、A1およびA2は、−R4−SO3Mであり、ここで、R4はC2〜C4のアルキレンであり、Mは、水素原子、NaまたはKである。]
で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位をモノマー全体の30〜100mol%の範囲で含む重合体が結合している。R4のC2〜C4のアルキレンとしては、特に制限されないが、エチレン、n−プロピレン、iso−プロピレン、n−ブチレン、iso−ブチレン、sec−ブチレンなどが好ましく挙げられる。
[式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、R5およびR6は、それぞれ独立して、水素原子、C1〜C4のアルキルまたはC1〜C4のアルコキシメチルである。]
で示される少なくとも1種の中性モノマー単位、または、式(4):
[式中、R1およびR2は、それぞれ独立して、水素原子またはメチルであり、A3は、水素原子、NaまたはKである。]
で示される弱カチオン性モノマー単位が好ましく挙げられる。
さらに動的吸着容量を考慮すると、イオン交換容量は60μmol/ml以上であり、70μmol/ml以上が好ましく、90μmol/ml以上がより好ましく、100μmol/ml以上が特に好ましい。また、イオン交換容量は、300μmol/ml以下であり、250μmol/ml以下が好ましく、210μmol/ml以下がより好ましく、150μmol/ml以下が特に好ましい。
最適な実施形態では、強カチオン性モノマー単位の割合は40mol%以上、100mol%未満であり、且つ、イオン交換容量は60〜150μmol/mlである。
さらに動的吸着容量を考慮すると、イオン交換容量は60μmol/ml以上であり、70μmol/ml以上が好ましく、90μmol/ml以上がより好ましい。また、イオン交換容量は、300μmol/ml以下であり、250μmol/ml以下が好ましい。
最適な実施形態では、強カチオン性モノマー単位の割合は50mol%以上、100mol%未満であり、且つ、イオン交換容量は90〜250μmol/mlである。
次に、本発明の抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体の製造方法について述べる。
本発明の抗体精製用陽イオン交換クロマトグラフィー担体は、抗体医薬製造過程で生産される抗体単量体とその重合体との分離性能が優れているため、バイオ医薬品などの精製工程において好適に使用することができる。具体的にはカラムに本発明の陽イオン交換クロマトグラフィー担体を充填し、そこへ目的物と不純物を含む液を流し目的物あるいは不純物のみを吸着させる目的や目的物と不純物を共に吸着させ溶出時の塩濃度を段階的あるいは連続的に増加させることでクロマトグラフィー担体への親和性の違いを利用して分離する目的に使用することができる。
吸着モードの溶出方法としては、目的の抗体単量体と担体との親和性が低下するような特定の塩濃度またはpHの緩衝液を通液して溶出させる一段階溶出法、段階的に塩濃度またはpHを変化させて目的の抗体単量体を溶出させるステップワイズ法または連続的に塩濃度またはpHを変化させて目的の抗体単量体を溶出させるグラジエント法が挙げられる。
〔6%球状セルロース粒子(含水)の製造〕
(1)100gのチオシアン酸カルシウム60重量%水溶液に6.4gの結晶性セルロース(旭化成ケミカルズ株式会社製、商品名:セオラスPH101)を加え、110〜120℃に加熱して溶解した。
(2)この溶液に界面活性剤としてソルビタンモノオレエート6gを添加し、130〜140℃に予め加熱したo−ジクロロベンゼン480ml中に滴下し、200〜300rpmにて攪拌分散した。
(3)次いで、上記分散液を40℃以下まで冷却し、メタノール190ml中に注ぎ、粒子の懸濁液を得た。
(4)この懸濁液を濾過分別し、粒子をメタノール190mlにて洗浄し、濾過分別した。この洗浄操作を数回行った。
(5)さらに大量の水で洗浄した後、球状セルロース粒子を得た。
(6)次いで、この球状セルロース粒子をJIS標準ふるい規格53μm〜125μmのふるいにかけて、所望の粒子径(実粒子サイズ間隔50〜150μm、平均粒子径約100μm)にし、目的の6%球状セルロース粒子(含水:セルロース溶解濃度6%)を得た。なお、ここでの平均粒子径は、光学顕微鏡で撮影した画像の粒子径を、ノギスなどを用いて計測して撮影倍率から元の粒子径を求め、それぞれの粒子径の値から、下記の式によって算出して求めた。
体積平均粒子径(MV)=Σ(nd4)/Σ(nd3)
[式中、ndは光学顕微鏡写真から求めたそれぞれの粒子径の値を表し、nは測定した粒子の個数を表す。]
(1)上記で得られた6%球状セルロース粒子(含水)100gに121gの純水を加え、攪拌しながら加温した。30℃に到達したところで45重量%のNaOH水溶液3.3gとNaBH40.5gとを加え、撹拌した。初期アルカリ濃度は0.69%(w/w)であった。
(2)30分後、60gのNa2SO4を反応液に加え、溶解させた。混合物の温度が50℃に到達した時点で、2時間撹拌を継続した。
(3)50℃で混合物の撹拌を継続しながら、45重量%のNaOH水溶液48gと、エピクロロヒドリン50gとをそれぞれ25等分した量を、15分置きにおよそ6時間かけて添加した。
(4)添加終了後、この混合物を温度50℃で16時間反応させた。
(5)この混合物を温度40℃以下に冷却した後、酢酸2.6gを加え、中和した。
(6)反応混合物を濾過してゲルを回収し、純水で濾過洗浄し、目的の架橋6%セルロース粒子を得た。この時、株式会社堀場製作所のレーザ回折/散乱式の粒子径分布測定装置LA−950を用いて分析した平均粒子径は85μmであった。また、重量平均分子量1.5×105Daの標準ポリエチレンオキシドにおいて純水を移動相として使用したときのゲル分配係数Kavは0.38であった。
〔10%球状セルロース粒子(含水)の製造〕
(1)313gのチオシアン酸カルシウム60重量%水溶液に34.8gの結晶性セルロース(旭化成ケミカルズ株式会社製、商品名:セオラスPH301)を加え、110〜120℃に加熱して溶解した。
(2)この溶液に界面活性剤としてソルビタンモノオレエート1.83gを添加し、130〜140℃に予め加熱したo−ジクロロベンゼン480ml中に滴下し、200〜300rpmにて攪拌分散した。
(3)次いで、上記分散液を40℃以下まで冷却し、メタノール533ml中に注ぎ、粒子の懸濁液を得た。
(4)この懸濁液を濾過分別し、粒子をメタノール620mlにて洗浄し、濾過分別した。この洗浄操作を数回行った。
(5)さらに大量の水で洗浄した後、球状セルロース粒子を得た。
(6)次いで、この球状セルロース粒子をJIS標準ふるい規格53μm〜125μmのふるいにかけて、所望の粒子径(実粒子サイズ間隔50〜150μm、平均粒子径約100μm)にし、目的の10%球状セルロース粒子(含水:セルロース溶解濃度10%)を得た。ここでの平均粒子径は、参考例1の「6%球状セルロース粒子(含水)の製造」において述べた方法と同様の方法で求めた。
(1)上記で得られた10%球状セルロース粒子(含水)100gに199gの純水を加え、攪拌しながら加温した。30℃に到達したところで45重量%のNaOH水溶液4.46gとNaBH40.71gとを加え、撹拌した。初期アルカリ濃度は0.69%(w/w)であった。
(2)30分後、81gのNa2SO4を反応液に加え、溶解させた。混合物の温度が50℃に到達した時点で、2時間撹拌を継続した。
(3)50℃で混合物の撹拌を継続しながら、45重量%のNaOH水溶液62gと、エピクロロヒドリン64gとをそれぞれ25等分した量を、15分置きにおよそ6時間かけて添加した。
(4)添加終了後、この混合物を温度50℃で16時間反応させた。
(5)この混合物を温度40℃以下に冷却した後、酢酸3.3gを加え、中和した。
(6)反応混合物を濾過してゲルを回収し、純水で濾過洗浄し、目的の架橋10%セルロース粒子を得た。この時、株式会社堀場製作所のレーザ回折/散乱式の粒子径分布測定装置LA−950を用いて分析した平均粒子径は93μmであった。また、重量平均分子量1.5×105Daの標準ポリエチレンオキシドにおいて純水を移動相として使用したときのゲル分配係数Kavは0.27であった。
500mlセパラブルフラスコに純水64.4gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸8.7g加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液3.4g加え中和した。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子80.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム5.19gを0.17mol/ml硝酸18.1mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを80mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸120mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液160mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は110μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は61mg/ml、S含量は3.1%(w/w)、ΔCは6.6mS/cm、ΔCpは26mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水64.4gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸8.7g加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液3.4g加え中和した。次にN,N−ジメチルアクリルアミド2.3gを加えた。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子80.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム5.19gを0.17mol/ml硝酸に溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを80mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸120mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液160mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は126μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は114mg/ml、S含量は2.8%(w/w)、N含量は2.1%、ΔCは6.1mS/cm、ΔCpは22mS/cmであった。
N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を4.5gに変えたことを除いて実施例2と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は130μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は119mg/ml、S含量は2.6%(w/w)、N含量は2.9%(w/w)、ΔCpは18mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水50.6gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸3.0g加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液1.2g加え中和した。次にN,N−ジメチルアクリルアミド0.62gを加えた。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子60.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム3.7gを0.17mol/ml硝酸13.9mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを60mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸90mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液120mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は66μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は73mg/ml、S含量は1.7%(w/w)、N含量は1.2%、ΔCは6.8mS/cm、ΔCpは22mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を12.2gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込みを4.85gに、N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を6.4gに変えたことを除いて実施例4と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は210μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は101mg/ml、S含量は3.8%(w/w)、N含量は4.2%(w/w)、ΔCpは17mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を13.1gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込みを5.2gに、N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を5.30gに変えたことを除いて実施例2と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は172μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は93mg/ml、S含量は3.2%(w/w)、N含量は3.5%(w/w)、ΔCは5.8mS/cm、ΔCpは18mS/cmであった。
N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を10.1gに変えたことを除いて実施例2と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は130μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は125mg/ml、S含量は2.3%(w/w)、N含量は4.1%(w/w)、ΔCpは13mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を12.6gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込みを5.0gに、N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を23.2gに変えたことを除いて実施例2と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は102μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は5mg/ml、S含量は2.6%(w/w)、N含量は6.2%(w/w)であった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を18.5gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込みを7.35gに、N,N−ジメチルアクリルアミドの仕込み量を8.49gに変えたことを除いて実施例4と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は318μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は44mg/ml、S含量は4.6%(w/w)、N含量は4.9%(w/w)、ΔCpは19mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水33.3gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸1.25g加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液0.49g加え中和した。次にアクリル酸0.14gを加えた。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子40.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム2.45gを0.17mol/ml硝酸9.2mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを40mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸60mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液80mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は48μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は45mg/ml、S含量は0.95%(w/w)、Na含量は1.1%、ΔCは6.6mS/cm、ΔCpは23mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を2.02gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込み量を0.82gに、アクリル酸の仕込み量を0.39gに変えたことを除いて比較例Dと同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は97μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は77mg/ml、S含量は1.5%(w/w)、Na含量は2.0%(w/w)、ΔCは6.5mS/cm、ΔCpは22mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を4.07gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込みを1.62gに、アクリル酸の仕込み量を1.56gに変えたことを除いて比較例Dと同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は246μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は70mg/ml、S含量は2.3%(w/w)、Na含量は4.8%(w/w)、ΔCは4.7mS/cm、ΔCpは19mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水32.7gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸2.16gを加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液0.86g加え中和した。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子40.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム2.60gを0.17mol/ml硝酸9.1mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを40mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸60mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液80mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は60μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は53mg/ml、S含量は1.6%(w/w)、ΔCは6.3mS/cm、ΔCpは26mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を4.07gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込み量を1.62gに変えたことを除いて実施例1と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は240μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は38mg/ml、S含量は5.1%(w/w)、ΔCpは25mS/cmであった。
2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の仕込み量を19.4gに、48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液の仕込み量を7.70gに変えたことを除いて実施例9と同様に湿ゲルを得た。このときのイオン交換容量は404μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は26mg/ml、S含量は7.4%(w/w)、ΔCは7.9mS/cm、ΔCpは25mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水66.4gと3−スルホプロピルメタクリレートカリウム塩7.02gを加え溶解させた。次に参考例1の架橋6%セルロース粒子80.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム5.20gを0.17mol/ml硝酸18.1mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを80mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸120mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液160mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は124μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は45mg/ml、ΔCpは28mS/cmであった。
500mlセパラブルフラスコに純水91.5gと2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸4.20gを加え溶解させた。次に48.7%(w/w)水酸化ナトリウム水溶液1.67g加え中和した。次に参考例2の架橋10%セルロース粒子50.0gを加えスラリーとした。この状態でセパラブルフラスコ内に窒素を吹き込みながら1時間攪拌した。1時間後、硝酸アンモニウムセリウム5.07gを0.17mol/ml硝酸17.7mlに溶解させた溶液を滴下ロートからゆっくりセパラブルフラスコ内に加えた。滴下終了後40℃に昇温し、22時間攪拌した。22時間後攪拌を止めスラリーを吸引ろ過した。得られた湿ゲルを50mlの純水で5回洗浄した。次に1mol/L硫酸75mlで10回洗浄したあと純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。このときの湿ゲルの一部を取り出し別途イオン交換容量の測定に使用した。その後0.5mol/L水酸化ナトリウム水溶液100mlで洗浄した。最後に純水で洗浄液が中性になるまで洗浄した。得られた湿ゲルは余分な水分を取り除いた状態で保存した。このときのイオン交換容量は111μmol/ml、ポリクローナル抗体の10%動的結合容量は38mg/ml、S含量は1.5%(w/w)、ΔCpは24mS/cmであった。
ポリクローナル抗体を用いた10%動的結合容量(DBC)の測定
(1)使用機器および試薬
LCシステム :AKTA explorer 10S(登録商標)
バッファー :酢酸バッファーpH5.0、0.05mol/LのNaCl
ポリクローナル抗体:γ−グロブリン、人血清由来(和光純薬)
カラム :直径5mm、長さ5cm
(2)測定方法
まず抗体をバッファーに溶かし1mg/mlの抗体溶液を作製した。そしてカラムにイオン交換基を付加したゲルを隙間のないよう充填した。次にカラムをシステムに接続しバッファーを用いて、カラム流出液のUV(紫外線吸光度、280nm)と電気伝導度、pHが一定になるまで流速1mL/分で平衡化した。その後、ベースラインのUVをゼロにした。次にカラムに抗体溶液を流速0.5mL/minで流した。カラム流出液のUVをモニターし、カラム流出液のUVが、予め測定しておいた抗体溶液のUVの10%に達した時点で抗体溶液を流すのを止めた。以下の式により10%動的結合容量を求めた。なお、この分析は25℃の部屋で行った。
{抗体溶液濃度(mg/ml)×抗体溶液を流し始めてから終えるまでの時間(min)×流速(ml/min)−デッドボリューム}/カラム体積=10%動的結合容量(mg/ml)
ここで、デッドボリュームは、システム配管体積とカラム空隙体積を足した体積(ml)である。
重合体を含むモノクローナル抗体を用いた分離度(ΔC)の測定
(1)使用機器および試薬
LCシステム :AKTA explorer 10S(登録商標)
Aバッファー :クエン酸バッファーpH5.0
Bバッファー :クエン酸バッファーpH5.0、0.5mol/LのNaCl
カラム :直径5mm、長さ5cm
(2)分離度(ΔC)の測定
ゲルを充填したカラムをシステムに接続しAバッファーを80容量%、Bバッファーを20容量%の混合溶液からなる平衡化緩衝液で平衡化した。1mlのモノクローナル抗体溶液をカラムへアプライした。アプライ終了後、5カラム容量の平衡化緩衝液をカラムに通液した。Bバッファーの割合を30カラム容量かけて20容量%から100容量%まで増加させ、吸着したモノクローナル抗体を溶出した。流速はすべて0.66ml/minで実施した。
(3)分離度(ΔC)の計算方法
(2)の分析によって単量体および重合体のピークが得られた。単量体のピークトップに対応する電気伝導度をC1(mS/cm)、重合体のピークトップに対応する電気伝導度をC2(mS/cm)とし、以下の式よりΔCを求めた。
ΔC(mS/cm)=C2(mS/cm)−C1(mS/cm)
(4)精製結果
本分離度(ΔC)の測定により得られた実施例1および実施例2のゲルを用いたモノクローナル抗体の分析結果(クロマトグラム)をそれぞれ図1および図2に示す。
変性ポリクローナル抗体を用いた分離度(ΔCp)の測定
(1)使用機器および試薬
LCシステム :AKTA explorer 10S(登録商標)
Aバッファー :酢酸バッファーpH5.0、0.05mol/LのNaCl
Bバッファー :酢酸バッファーpH5.0、1.0mol/LのNaCl
変性ポリクローナル抗体:(2)に記載
カラム :直径5mm、長さ5cm
(2)変性ポリクローナル抗体の作製方法
変性ポリクローナル抗体はJournal of PHARMACEUTICAL SCIENCES、 2011、 100、2104−2119記載の方法に従って作製した。すなわち、2mgのγ−グロブリン、人血清由来(和光純薬)を20mmol/Lリン酸/クエン酸バッファーpH3.5、1mlに溶かした。ブロックヒーターを用いて55℃で15分加熱した。その後、氷浴で冷やした。PD−10(GEヘルスケア)を用い、酢酸バッファーpH5.0、0.05MのNaClにバッファー交換を行った。変性ポリクローナル抗体の生成の確認はゲルろ過クロマトグラフィーを用いて行った。使用するまでは冷蔵で保存した。
(3)分離度(ΔCp)の測定
ゲルを充填したカラムをシステムに接続しAバッファーで平衡化した。サンプルループを用いて1mlの変性ポリクローナル抗体溶液をカラムへアプライした。未吸着部分を洗浄後、Bバッファーの割合を120分かけて0容量%から100容量%まで増加させた。流速はすべて0.5ml/minで実施した。
(4)分離度(ΔCp)の計算方法
(3)の分析によって二つのピークが得られた。前のピークのピークトップの溶出容量に対応する電気伝導度をC1(mS/cm)、後ろのピークのピークトップに対応する電気伝導度をC2(mS/cm)とし、以下の式よりΔCpを求めた。
ΔCp(mS/cm)=C2(mS/cm)−C1(mS/cm)
イオン交換容量の測定
実施例1〜12および比較例A〜Dにおいては、硫酸洗浄後、純水洗浄したゲル1mlをビーカーに加え、0.01mol/L水酸化ナトリウム溶液40mlとフェノールフタレイン溶液1滴を加えた。この溶液に、0.1mol/L塩酸を溶液の色が透明になるまで加えた。透明になるまで加えた塩酸量をAmlとすると、各ゲル1mlあたりのイオン交換容量(IEC)は、次式:
(0.01×40/1000−0.1×A/1000)×1000000(μmol/ml)
で求めることができる。
比較例Eにおいては、0.01mol/L水酸化ナトリウム溶液の量を40mlから60mlに変更し、その他は上記と同様にして溶液を調製した。比較例Eで得られたゲル1mlのイオン交換容量は、次式:
(0.01×60/1000−0.1×A/1000)×1000000(μmol/ml)
で求めることができる。
S含量の測定
実施例1〜10、12、比較例A〜Eのゲルを乾燥させICP(INDUCTIVELY COUPLED PLASMA)発光分光分析により乾燥重量あたりのS含量(重量%)を求めた。
N含量の測定
実施例2〜6および比較例A〜Cのゲルを乾燥させCHN(Carbon Hydrogen Nitrogen)元素分析により乾燥重量あたりのN含量(重量%)を求めた。
Na含量の測定
実施例7、8および比較例Dのゲルを乾燥させ原子吸光分析により乾燥重量あたりのNa含量(重量%)を求めた。
(i)実施例1〜6および比較例A〜C
測定法4、測定法5で測定したS含量、N含量の値を使用し、以下の式から共重合ポリマー中の強カチオン性モノマー単位の割合(s密度)を求めた。
{(S含量/32)/(N含量/14)}×100(%)
(ii)実施例7、8および比較例D
測定法4、測定法7で測定したS含量、Na含量の値を使用し、以下の式から共重合ポリマー中の強カチオン性モノマー単位の割合(S密度)を求めた。
(S含量/32)/(Na含量/23)×100(%)
なお、上記実施例では、強カチオン性モノマーとして式(1)で示されるモノマー単位を用いているため、便宜上、上式で示されるS密度を求めることで、共重合ポリマー中に含まれる強カチオン性モノマー単位の割合を概算することができる。
Claims (15)
- 前記重合体が、式(1)で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位と、式(3)で示される少なくとも1種の中性モノマー単位とを含む、請求項2記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体が、2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸と、N,N−ジメチルアクリルアミドとの重合体である、請求項3記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体に含まれる強カチオン性モノマー単位の割合が40mol%以上、100mol%未満であり、かつ、イオン交換容量が60〜150μmol/mlである、請求項3または4記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体が、式(1)で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位と、式(4)で示される少なくとも1種の弱カチオン性モノマー単位とを含む、請求項2記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体が、2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸と、アクリル酸との重合体である、請求項6記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体に含まれる強カチオン性モノマー単位の割合が50mol%以上、100mol%未満であり、かつ、イオン交換容量が90〜250μmol/mlである、請求項6または7記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体が、式(1)で示される少なくとも1種の強カチオン性モノマー単位からなる重合体である、請求項1記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記重合体が、2−アクリルアミド−2−メチルプロパンスルホン酸の重合体である、請求項9記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- イオン交換容量が70〜250μmol/mlである、請求項9または10記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記多孔性粒子が架橋セルロース粒子である、請求項1〜11のいずれか1項記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 前記多孔性粒子が、重量平均分子量1.5×105Daの標準ポリエチレンオキシドにおいて純水を移動相として使用したときのゲル分配係数Kavが0.3〜0.5であることを特徴とする多孔性粒子である、請求項1〜12のいずれか1項記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 抗体医薬製造過程で生産される抗体単量体とその重合体を分離するためのものである、請求項1〜13のいずれか1項記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体。
- 請求項1〜14のいずれか1項記載の陽イオン交換クロマトグラフィー担体を用いて、抗体医薬製造過程で生産される抗体単量体とその重合体を分離する方法。
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Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2019192877A1 (en) * | 2018-04-03 | 2019-10-10 | Merck Patent Gmbh | Cex chromatography media and low salt elution of target proteins from biopharmaceutical feeds |
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CN115728433A (zh) * | 2021-08-27 | 2023-03-03 | 联邦生物科技(珠海横琴)有限公司 | IgG4型单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010095673A1 (ja) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | チッソ株式会社 | 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル |
WO2012015379A1 (en) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Millipore Corporation | Grafting method to improve chromatography media performance |
JP2012032392A (ja) * | 2010-07-28 | 2012-02-16 | Rohm & Haas Co | クロマトグラフィー媒体性能を向上させるグラフト化方法 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS537759A (en) | 1976-07-09 | 1978-01-24 | Yoshiaki Motozato | Spherical cellulose particle production method |
JPS5386749A (en) | 1977-01-11 | 1978-07-31 | Yoshiaki Motozato | Production method of spherical particles of cellulose |
JPS5544312A (en) | 1978-09-25 | 1980-03-28 | Shigenori Kuga | Production of granular cellulose gel |
ATE15378T1 (de) * | 1980-06-27 | 1985-09-15 | Akzo Nv | Mit einer unbeweglichen organischen phase ueberzogenes anorganisches poroeses traegermaterial, anwendung fuer die chromatographie und sein herstellungsverfahren. |
US4329373A (en) * | 1980-07-17 | 1982-05-11 | International Flavors & Fragrances Inc. | Use of carboamidoalkyl norbornanes for augmenting or enhancing the aroma or taste of a foodstuff |
JPS5938203A (ja) | 1982-08-25 | 1984-03-02 | Daicel Chem Ind Ltd | アモルフアスセルロ−スの製造方法 |
DE3811042A1 (de) | 1988-03-31 | 1989-10-19 | Merck Patent Gmbh | Ionenaustauscher |
US5445732A (en) * | 1992-06-19 | 1995-08-29 | Sepracor Inc. | Passivated porous polymer supports and methods for the preparation and use of same |
JP3663666B2 (ja) | 1995-04-19 | 2005-06-22 | チッソ株式会社 | 球状セルロース及びその製造法 |
US5906747A (en) * | 1995-11-13 | 1999-05-25 | Biosepra Inc. | Separation of molecules from dilute solutions using composite chromatography media having high dynamic sorptive capacity at high flow rates |
DE60138345D1 (de) * | 2000-08-11 | 2009-05-28 | Rohm & Haas | Verfahren zur Bestimmung chromatographischer Medienparameter in gepackten Betten hydrophobischer Polymerteilchen |
ATE471166T1 (de) * | 2001-11-21 | 2010-07-15 | Basf Se | Vernetzte polyaminbeschichtung auf superabsorbierenden hydrogelen |
US20050181378A1 (en) * | 2004-02-18 | 2005-08-18 | Applera Corporation | Polyelectrolyte-coated size-exclusion ion-exchange particles |
SE529259C2 (sv) | 2005-08-31 | 2007-06-12 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | Tillverkning av kromarografimatriser, en kromarografimatris, en vätskekromatografikolonn, prcess för att isolera målföreningar och användning av en kromarografimatris för vätskekromatografi |
WO2007123242A1 (ja) | 2006-04-25 | 2007-11-01 | Tosoh Corporation | IgG精製用分離剤、及びそれを用いたIgG単量体の精製方法 |
CA2687930C (en) | 2007-05-25 | 2016-05-17 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Graft copolymers for cation exchange chromatography |
US8664152B2 (en) * | 2007-08-31 | 2014-03-04 | Jnc Corporation | Porous cellulose gel, method for producing the same and use thereof |
EP2153877A1 (de) * | 2008-07-30 | 2010-02-17 | MERCK PATENT GmbH | Mischpfropfpolymere für die Ionenaustauschchromatographie |
US20120282654A1 (en) | 2009-04-29 | 2012-11-08 | Schering Corporation | Antibody purification |
KR20130031351A (ko) * | 2010-07-30 | 2013-03-28 | 이엠디 밀리포어 코포레이션 | 크로마토그래피 매질 및 방법 |
CN102603872A (zh) * | 2012-04-11 | 2012-07-25 | 苏州纳微生物科技有限公司 | 单分散聚甲基丙烯酸酯混合型阳离子交换层析介质在万古霉素柱层析纯化中的应用 |
EP2682168A1 (en) * | 2012-07-02 | 2014-01-08 | Millipore Corporation | Purification of biological molecules |
-
2013
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Patent Citations (3)
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---|---|---|---|---|
WO2010095673A1 (ja) * | 2009-02-20 | 2010-08-26 | チッソ株式会社 | 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル |
JP2012032392A (ja) * | 2010-07-28 | 2012-02-16 | Rohm & Haas Co | クロマトグラフィー媒体性能を向上させるグラフト化方法 |
WO2012015379A1 (en) * | 2010-07-29 | 2012-02-02 | Millipore Corporation | Grafting method to improve chromatography media performance |
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