JPWO2012132335A1 - 培地の製造方法及び該方法により製造された培地 - Google Patents
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Abstract
Description
また、本発明は、微生物を培養するための培地の製造方法であって、(1)窒素源を含まず、糖を含む溶液を殺菌する工程、(2)糖を含まず、窒素源を含む溶液を殺菌する工程、(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの溶液を混合する工程、を含むことを特徴とする前記製造方法である。
また、本発明は、微生物を培養するための培地の製造方法であって、(1)糖のみを含む溶液を殺菌する工程、(2)窒素源のみを含む溶液を殺菌する工程、(3)糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液を殺菌する工程、(4)前記工程(1)〜(3)で得られた3つの溶液を混合する工程、を含むことを特徴とする前記製造方法である。
また、本発明は、糖源原料又は糖が、非還元糖である、上記の製造方法である。
また、本発明は、非還元糖が、ショ糖、トレハロース、ケストース、メレチトース、ゲンチアノース、ネオビフルコース、フンギテトラオースおよびビフルコースからなる群から選択される少なくとも1種である、上記の製造方法である。
また、本発明は、非還元糖がショ糖である、上記の製造方法である。
また、本発明は、窒素源原料又は窒素源が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、尿素、カゼイン加水分解物、コーンスティープリカー、大豆、大豆加水分解物、ピーナッツミール、綿実ミール、魚粉、酵母エキスおよび魚肉エキスからなる群より選択される少なくとも1種である、上記の製造方法である。
また、本発明は、糖源を含む溶液の殺菌又糖を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、窒素源原料を含有する溶液の殺菌又は窒素源を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造された培地である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造された培地を用いることを特徴とする、微生物の培養方法である。
また、本発明は、微生物が乳酸菌である、上記の培養方法である。
また、本発明は、上記の培養方法により培養された微生物である。
また、本発明は、上記の培養方法により培養された乳酸菌である。
また、本発明は、免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、(1)糖源原料を含有する溶液を殺菌する工程、(2)窒素源原料を含有する溶液を殺菌する工程、(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの原料を混合する工程、を含むことを特徴とする前記製造方法である。
また、本発明は、免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、(1)窒素源を含まず、糖を含む溶液を殺菌する工程、(2)糖を含まず、窒素源を含む溶液を殺菌する工程、(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの溶液を混合する工程、を含むことを特徴とする前記製造方法である。
また、本発明は、免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、(1)糖のみを含む溶液を殺菌する工程、(2)窒素源のみを含む溶液を殺菌する工程、(3)糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液を殺菌する工程、(4)前記工程(1)〜(3)で得られた3つの溶液を混合する工程、を含むことを特徴とする前記製造方法である。
また、本発明は、糖源原料又は糖が非還元糖である、上記の製造方法である。
また、本発明は、非還元糖が、ショ糖、トレハロース、ケストース、メレチトース、ゲンチアノース、ネオビフルコース、フンギテトラオースおよびビフルコースからなる群から選択される少なくとも1種である、上記の製造方法である。
また、本発明は、非還元糖がショ糖である、上記の製造方法である。
また、本発明は、窒素源原料又は窒素源が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、尿素、カゼイン加水分解物、コーンスティープリカー、大豆、大豆加水分解物、ピーナッツミール、綿実ミール、魚粉、酵母エキスおよび魚肉エキスからなる群より選択される少なくとも1種である、上記の製造方法である。
また、本発明は、糖源を含む溶液の殺菌又は糖を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、窒素源原料を含有する溶液の殺菌又は窒素源を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、上記の製造方法である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造された培地である。
また、本発明は、上記の培地を用いることを特徴とする、免疫調整剤の製造方法である。
また、本発明は、免疫調整剤が抗アレルギー剤である、上記の製造方法である。
また、本発明は、免疫調整剤がIL−12誘導活性剤である、上記の製造方法である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造された免疫調整剤である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造された抗アレルギー剤である。
また、本発明は、上記の製造方法により製造されたIL−12誘導活性剤である。
<実施例1〜3:糖(ショ糖)の単独殺菌>
(1)培地の調製(実施例1、比較例1)
表1に記載した配合にしたがって、各成分を精製水に溶解して、500mLの培地を作製した。この培地をジャーファーメンター(型番:BMJ−01、エイブル製)に入れ、オートクレーブ(型番:LBS−325、トミー製)を用いて、121℃で90分間殺菌した。その後、約50重量%の苛性ソーダ(食品添加物規格準拠)水溶液を用いて、pHを6.8に調整した(比較例1)。
上記比較例1および実施例1に示した各培地を用いて、乳酸菌ラクトバチラス アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)L−92株(FERM BP−4981)を培養した。乳酸菌は、MRS培地(商品名:Lactobacilli MRS broth、BD製)を用いて培養したものを用い、乳酸菌を比較例1および実施例1に示した各培地500mLに無菌的に1〜5%接種し、pHが4.5以下になるまで(30時間程度)、37℃の温度で、攪拌培養した。経時的に培養液をサンプリングし、菌数の指標として、吸光度計(製品名:Nanophotometer、Implen製)を用いて濁度(OD600)を測定した(図1)。培養終了時の培養液を、遠心分離機(製品名:ユニバーサル冷却遠心機5910、久保田商事株式会社製)を用いて、約2500Gで10分間遠心分離し、その沈殿物(菌体)を捕集した。得られた菌体を精製水500mLで洗浄後、凍結乾燥装置(型番:FDU−830、EYELA製)を用いて乾燥し、さらに粉末化した。得られた各粉末について、培地あたりの菌体量(g/L)および色調を測定した。
上記の比較例2および実施例2において培養した各乳酸菌を用いて、IL−12誘導活性を測定した。
(1)培地の調製その1(実施例4)
表4に示した培地成分のうち、酵母エキス(YP−21CM)25gおよび酵母エキス(HUP−2)10gのみを精製水115mLに溶解し、酵母エキス溶液を得た。また、酵母エキス以外の培地成分を精製水を用いて300mLになるよう溶解し、酵母エキス以外の培地成分の混合溶液を得た。そして、上記の酵母エキス溶液をオートクレーブを用いて、121℃、20分間殺菌した。また、酵母エキス以外の培地成分の混合溶液を、オートクレーブを用いて121℃で120分間殺菌したのち、これらを混合、滅菌水を用いてメスアップして培地500mLを得た。
表4に示した培地成分のうち、酵母エキス(YP−21CM)25gおよび酵母エキス(HUP−2)10gのみを精製水115mLに溶解し、酵母エキス溶液を得た。また、表4に示した培地成分のうち、ショ糖45gのみを精製水55mLに溶解し、ショ糖溶液を得た。さらに、酵母エキスおよびショ糖以外の培地成分に精製水を加えて200mLになるよう溶解し、酵母エキスおよびショ糖以外の培地成分の混合溶液を得た。そして、上記の酵母エキス溶液をオートクレーブを用いて、121℃、20分間殺菌した。また、ショ糖溶液をオートクレーブを用いて121℃で120分間殺菌した。さらに、上記の酵母エキスおよびショ糖以外の培地成分の混合溶液をオートクレーブを用いて121℃で120分間殺菌した。これら3つの溶液を混合し、滅菌水を用いてメスアップして培地500mLを得た。
表5に、各培地の殺菌条件を示す。
上記実施例4および5に示した各培地を用いて、実施例2と同様の方法で、乳酸菌を培養した。但し、濁度は培養液を96穴平底プレート(Nunc製)に分注し、マルチプレートリーダー(大日本製薬製)を用いてOD600を測定した(図3)。
結果を表6に示す。
(1)培地の調製(実施例8、比較例3)
表7に記載した配合にしたがって、各成分を精製水に溶解して、500mLの培地を作製した。この培地を、ラボ用UHTシステム(型番:25HVH、西華産業株式会社製)を用いて、137℃で30秒間、瞬間殺菌した。(比較例3)。
表8に各培地の殺菌条件および殺菌方法を示す。
上記比較例3および実施例8に示した培地を用いたほかは、実施例2と同一の条件で乳酸菌を培養した。
乳酸菌として上記実施例9または比較例4で得られたものを用いた他は、実施例3と同一の条件でIL−12誘導活性を測定した(実施例17、比較例8)。結果を図4に示す。
(1)培地の調製(実施例10、比較例5)
表1に記載の配合に従って、ジャーファーメンター(北興火工機製)を用いて、各成分を4.2tの滅菌水(0.5μmフィルター除菌後、121℃、20分間滅菌)に溶解した。その後、スチームインジェクション方式による殺菌をバッチ式で行った。殺菌価F0=20を目標とし、サーモプロセッサ(型番:CMC821、エラブ社製)を用いて殺菌価管理をした(比較例5)。
まず、表11に記載の配合に従って、各成分を滅菌水を用いて溶解した培地で、乳酸菌・ラクトバチラス アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)L−92株(FERM BP−4981)を培養した。
培養終了後、別途、培養液50mLをラボレベルで遠心分離(3000×g、10分間、室温)の後、上清除去し、その沈殿物(菌体)を精製水50mLで洗浄した。洗浄後、凍結乾燥にて粉末化したものを用いて、実施例3と同様の条件で、IL−12誘導活性を測定した(図6)。
(1)培地の調製その1(実施例13)
表13に示した培地成分のうち、ショ糖45gのみを精製水55mLに溶解し、ショ糖溶液を得た。また、ショ糖以外の培地成分を精製水を用いて400mLとなるよう溶解し、ショ糖以外の培地成分の混合溶液を得た。そして、上記のショ糖溶液をオートクレーブを用いて、121℃、20分間殺菌した。また、ショ糖以外の培地成分の混合溶液を、オートクレーブを用いて121℃で20分間殺菌したのち、これらを混合、滅菌水を用いてメスアップし、培地500mLを得た。表14に殺菌条件を示す。
表13に示した培地成分のうち、酵母エキス(YP−21CM)25gおよび酵母エキス(Yeast peptone MAX)10gのみを精製水115mLに溶解し、酵母エキス溶液を得た。さらに、酵母エキス以外の培地成分を精製水を用いて350mLとなるよう溶解し、酵母エキス以外の培地成分の混合溶液を得た。そして、上記の酵母エキス溶液をオートクレーブを用いて、121℃、20分間殺菌した。また、上記の酵母エキス以外の培地成分の混合溶液をオートクレーブを用いて121℃で20分間殺菌した。これらの溶液を混合し、滅菌水を用いてメスアップし、培地500mLを得た。
表14に、各培地の殺菌条件を示す。
上記実施例13および14に示した各培地を用いて、実施例2と同様の方法で、乳酸菌を培養した。但し、濁度は培養液を96穴平底プレート(Nunc製)に分注し、マルチプレートリーダー(大日本製薬製)を用いてOD600を測定した(図7)。
乳酸菌として上記実施例13または14で得られたものを用いた他は、実施例3と同一の条件でIL−12誘導活性を測定した。結果を表15に示す。
培地栄養成分の相互作用として、メイラード(Maillard)反応と呼ばれる褐変現象は、ショ糖のような非還元糖と窒素源との混合物の殺菌においては問題はないはずである。しかし、本願発明において開示したように、非還元糖においても窒素源と別殺菌をすることにより、微生物の育成速度が高く、また、高い菌体収量を達成することができ、色調がよく、さらに、免疫調整機能が高い微生物を得られることが明確になった。
Claims (32)
- 微生物を培養するための培地の製造方法であって、
(1)糖源原料を含有する溶液を殺菌する工程、
(2)窒素源原料を含有する溶液を殺菌する工程、
(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの溶液を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 微生物を培養するための培地の製造方法であって、
(1)窒素源を含まず、糖を含む溶液を殺菌する工程、
(2)糖を含まず、窒素源を含む溶液を殺菌する工程、
(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの溶液を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 微生物を培養するための培地の製造方法であって、
(1)糖のみを含む溶液を殺菌する工程、
(2)窒素源のみを含む溶液を殺菌する工程、
(3)糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液を殺菌する工程、
(4)前記工程(1)〜(3)で得られた3つの溶液を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 糖源原料又は糖が、非還元糖である請求項1〜3のいずれかに記載の製造方法。
- 非還元糖が、ショ糖、トレハロース、ケストース、メレチトース、ゲンチアノース、ネオビフルコース、フンギテトラオースおよびビフルコースからなる群から選択される少なくとも1種である、請求項4に記載の製造方法。
- 非還元糖がショ糖である、請求項4に記載の製造方法。
- 窒素源原料又は窒素源が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、尿素、カゼイン加水分解物、コーンスティープリカー、大豆、大豆加水分解物、ピーナッツミール、綿実ミール、魚粉、魚肉エキス、牛肉エキスおよび酵母エキスからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項1〜6のいずれかに記載の製造方法。
- 糖源原料を含有する溶液の殺菌又は糖を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項1〜7のいずれかに記載の製造方法。
- 窒素源原料を含有する溶液の殺菌又は窒素源を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項1〜8のいずれかに記載の製造方法。
- 糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項3〜9のいずれかに記載の製造方法。
- 請求項1〜10のいずれかに記載の方法により製造された培地。
- 請求項11に記載の培地を用いることを特徴とする、微生物の培養方法。
- 微生物が乳酸菌である、請求項12に記載の培養方法。
- 請求項12に記載の培養方法により培養された微生物。
- 請求項13に記載の培養方法により培養された乳酸菌。
- 免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、
(1)糖源原料を含有する溶液を殺菌する工程、
(2)窒素源原料を含有する溶液を殺菌する工程、
(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの原料を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、
(1)窒素源を含まず、糖を含む溶液を殺菌する工程、
(2)糖を含まず、窒素源を含む溶液を殺菌する工程、
(3)前記工程(1)および(2)で得られた2つの溶液を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 免疫調整剤を製造するための培地の製造方法であって、
(1)糖のみを含む溶液を殺菌する工程、
(2)窒素源のみを含む溶液を殺菌する工程、
(3)糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液を殺菌する工程、
(4)前記工程(1)〜(3)で得られた3つの溶液を混合する工程、
を含むことを特徴とする前記製造方法。 - 糖源原料又は糖が非還元糖である請求項16〜18に記載の製造方法。
- 非還元糖が、ショ糖、トレハロース、ケストース、メレチトース、ゲンチアノース、ネオビフルコース、フンギテトラオースおよびビフルコースからなる群から選択される少なくとも1種である、請求項19に記載の製造方法。
- 非還元糖がショ糖である、請求項19に記載の製造方法。
- 窒素源原料又は窒素源が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、尿素、カゼイン加水分解物、コーンスティープリカー、大豆、大豆加水分解物、ピーナッツミール、綿実ミール、魚粉、魚肉エキス、牛肉エキスおよび酵母エキスからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項16〜21のいずれかに記載の製造方法。
- 糖源原料を含有する溶液の殺菌又は糖を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項16〜22のいずれかに記載の製造方法。
- 窒素源原料を含有する溶液の殺菌又は窒素源を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項16〜23のいずれかに記載の製造方法。
- 糖および窒素源を含まず、無機塩、ビタミン、脂肪酸、緩衝剤、消泡剤から成る群より選択される少なくとも1種を含む溶液の殺菌が、回分殺菌および/または連続殺菌により行われる、請求項18〜24のいずれかに記載の製造方法。
- 請求項16〜25のいずれかに記載の製造方法により製造された培地。
- 請求項26に記載の培地を用いることを特徴とする、免疫調整剤の製造方法。
- 免疫調整剤が抗アレルギー剤である、請求項27に記載の製造方法。
- 免疫調整剤がIL−12誘導活性剤である、請求項27に記載の製造方法。
- 請求項27に記載の製造方法により製造された免疫調整剤。
- 請求項28に記載の製造方法により製造された抗アレルギー剤。
- 請求項29に記載の製造方法により製造されたIL−12誘導活性剤。
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