JPWO2012121041A1 - シアル酸含有糖鎖の製造方法 - Google Patents
シアル酸含有糖鎖の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2012121041A1 JPWO2012121041A1 JP2013503458A JP2013503458A JPWO2012121041A1 JP WO2012121041 A1 JPWO2012121041 A1 JP WO2012121041A1 JP 2013503458 A JP2013503458 A JP 2013503458A JP 2013503458 A JP2013503458 A JP 2013503458A JP WO2012121041 A1 JPWO2012121041 A1 JP WO2012121041A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sugar chain
- sialic acid
- derivative
- sugar
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 title claims abstract description 325
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 167
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 title claims abstract description 149
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 55
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 25
- 102000003838 Sialyltransferases Human genes 0.000 claims description 51
- 108090000141 Sialyltransferases Proteins 0.000 claims description 51
- TXCIAUNLDRJGJZ-BILDWYJOSA-N CMP-N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound O1[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(=O)C)[C@@H](O)C[C@]1(C(O)=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(N=C(N)C=C2)=O)O1 TXCIAUNLDRJGJZ-BILDWYJOSA-N 0.000 claims description 45
- TXCIAUNLDRJGJZ-UHFFFAOYSA-N CMP-N-acetyl neuraminic acid Natural products O1C(C(O)C(O)CO)C(NC(=O)C)C(O)CC1(C(O)=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(N=C(N)C=C2)=O)O1 TXCIAUNLDRJGJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 108010064886 beta-D-galactoside alpha 2-6-sialyltransferase Proteins 0.000 claims description 29
- 102100029945 Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Human genes 0.000 claims description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 18
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 claims description 16
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 claims description 15
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 14
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 14
- -1 UDP saccharide Chemical class 0.000 claims description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 102100037982 Alpha-1,6-mannosylglycoprotein 6-beta-N-acetylglucosaminyltransferase A Human genes 0.000 claims description 6
- 101000951392 Homo sapiens Alpha-1,6-mannosylglycoprotein 6-beta-N-acetylglucosaminyltransferase A Proteins 0.000 claims description 6
- HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N UDP-alpha-D-galactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N 0.000 claims description 6
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 claims description 5
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 claims description 5
- LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N UDP-N-acetyl-alpha-D-glucosamine Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-CFRASDGPSA-N 0.000 claims description 5
- LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N UNPD164450 Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(NC(=O)C)C1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 LFTYTUAZOPRMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 88
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract description 29
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 29
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 abstract description 22
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 abstract description 22
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 abstract description 16
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 36
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 35
- IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N cytidine 5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 26
- IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N cytidine monophosphate Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 15
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 15
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 15
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 15
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 13
- 108010057005 beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase Proteins 0.000 description 12
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 11
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 9
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 9
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 8
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 8
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical group CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 7
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 7
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 6
- 101710136188 Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 2 Proteins 0.000 description 5
- 102100029963 Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 2 Human genes 0.000 description 5
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 5
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N N-acetyllactosamine Chemical group O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KFEUJDWYNGMDBV-LODBTCKLSA-N 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 5
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 5
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 238000005918 transglycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobenzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1N PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 102100029962 CMP-N-acetylneuraminate-beta-1,4-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase Human genes 0.000 description 4
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical group OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 4
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 4
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 3
- 101710163570 Alpha-N-acetyl-neuraminyl-2,3-beta-galactosyl-1,3-N-acetyl-galactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 102100031972 Alpha-N-acetyl-neuraminyl-2,3-beta-galactosyl-1,3-N-acetyl-galactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 101710183133 Alpha-N-acetylgalactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100031969 Alpha-N-acetylgalactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100031970 Alpha-N-acetylgalactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase 2 Human genes 0.000 description 3
- 102100031971 Alpha-N-acetylgalactosaminide alpha-2,6-sialyltransferase 3 Human genes 0.000 description 3
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 3
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 3
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000863864 Homo sapiens Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Proteins 0.000 description 3
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 3
- FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N N-glycolyl-beta-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C1OC(O)(C(O)=O)CC(O)C1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010052465 Neu5Ac N-acetylgalactosamine 2,6-sialyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 241001489174 Ogataea minuta Species 0.000 description 3
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 3
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 3
- 102100027107 Type 2 lactosamine alpha-2,3-sialyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 108010082530 galactosyl-1-3-N-acetylgalactosaminyl-specific 2,6-sialyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 3
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 description 2
- HOEWKBQADMRCLO-YKNQQZBYSA-N (2r,4s,5r,6r)-2-[[(2r,3s,4r)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-4-hydroxy-5-[(2-hydroxyacetyl)amino]-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydroxypropyl]oxane-2-carboxylic acid Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)O[C@@]2(O[C@H]([C@H](NC(=O)CO)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)O1 HOEWKBQADMRCLO-YKNQQZBYSA-N 0.000 description 2
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DIDIOPKMWHMWQM-UHFFFAOYSA-N 9-aminopyrene-1,4,6-trisulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C2C(N)=CC3=C(S(O)(=O)=O)C=CC4=C(S(O)(=O)=O)C=C1C2=C34 DIDIOPKMWHMWQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027098 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010033531 CMP-N-acetylneuraminate-poly-alpha-2,8-sialosyl sialyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100021786 CMP-N-acetylneuraminate-poly-alpha-2,8-sialyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 description 2
- 101000616698 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-poly-alpha-2,8-sialyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 2
- SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N N-glycoloyl-neuraminic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(NC(=O)CO)C(O)CC(=O)C(O)=O SUHQNCLNRUAGOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N N-glycolylneuraminic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O[C@](O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-KVNVFURPSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108010017795 Sia(alpha2,3)Gal(beta1,4)GlcNAc alpha-2,8-sialyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100029227 Sia-alpha-2,3-Gal-beta-1,4-GlcNAc-R:alpha 2,8-sialyltransferase Human genes 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KBGAYAKRZNYFFG-BOHATCBPSA-N aceneuramic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO KBGAYAKRZNYFFG-BOHATCBPSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229940060155 neuac Drugs 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N triethylammonium acetate Chemical compound CC(O)=O.CCN(CC)CC AVBGNFCMKJOFIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 9h-fluoren-9-ylmethyl carbonate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)ON1C(=O)CCC1=O WMSUFWLPZLCIHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 101000628802 Bos taurus Alpha-1,3-mannosyl-glycoprotein 4-beta-N-acetylglucosaminyltransferase A Proteins 0.000 description 1
- 102100031973 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101100023203 Homo sapiens MGAT5 gene Proteins 0.000 description 1
- PNIWLNAGKUGXDO-UHFFFAOYSA-N Lactosamine Natural products OC1C(N)C(O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 PNIWLNAGKUGXDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N N-acetyl-alpha-D-muramic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]1NC(C)=O MNLRQHMNZILYPY-MDMHTWEWSA-N 0.000 description 1
- 102100023315 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010056664 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDJKUWYYUZCUJX-AJKRCSPLSA-N N-glycoloyl-beta-neuraminic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@](O)(C(O)=O)C[C@H](O)[C@H]1NC(=O)CO FDJKUWYYUZCUJX-AJKRCSPLSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001327682 Oncorhynchus mykiss irideus Species 0.000 description 1
- 241001517016 Photobacterium damselae Species 0.000 description 1
- 241000493790 Photobacterium leiognathi Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 239000013317 conjugated microporous polymer Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000010460 detection of virus Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 125000005982 diphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229950006191 gluconic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000000350 glycoloyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- DOVBXGDYENZJBJ-ONMPCKGSSA-N lactosamine Chemical compound O=C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DOVBXGDYENZJBJ-ONMPCKGSSA-N 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003643 myeloid progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- RBMYDHMFFAVMMM-PLQWBNBWSA-N neolactotetraose Chemical class O([C@H]1[C@H](O)[C@H]([C@@H](O[C@@H]1CO)O[C@@H]1[C@H]([C@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@@H]1O)O)NC(=O)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RBMYDHMFFAVMMM-PLQWBNBWSA-N 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005017 substituted alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004426 substituted alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003107 substituted aryl group Chemical group 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1081—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
- C12Y204/99001—Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase (2.4.99.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/03—Phosphoric monoester hydrolases (3.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】 本発明では、シアル酸転移酵素が、CMP存在下において、反応生成物上のシアル酸を分解する活性を新たに見いだし、生成するCMPを酵素的に分解することによって、シアル酸含有糖鎖を効率的に製造可能であることを見出した。さらに、従来合成の困難であった、α2,6結合でシアル酸が4分子付加した4分岐N−型糖鎖についても、2分岐型糖鎖を原料として、糖鎖伸長反応を行い、各酵素反応後の精製を行なうことなしに、ワンポット合成で高収率で調製できることを見いだした。
Description
一方、4分岐のN−結合型糖鎖に対するα2,6シアル酸転移反応については、ウシ由来のST6Gal−Iで検討されており、4カ所のN−アセチルラクトサミン構造のうち、まずα1,3結合のマンノース上にβ1,2結合で付加したN−アセチルラクトサミン構造に転移しやすく、次にα1,3結合のマンノース上にβ1,4結合で付加したN−アセチルラクトサミン構造に、さらにα1,6結合のマンノース上に付加した2つのN−アセチルラクトサミン構造のどちらかにシアル酸が転移されるが、4分子シアル酸が入った産物は見いだされなかった(非特許文献2参照。)。またヒトのST6Gal−Iについては、ST6Gal−IIとともに基質特異性が報告されている(非特許文献3、4参照。)が、4分岐のN−結合型糖鎖を受容体基質としたシアル酸付加については検討されていない。
ST6Gal−IのCMPによるプロダクト阻害は0.25mMのCMPで49%阻害される(非特許文献5参照。)、または71%阻害される(非特許文献6参照。)という報告がある。
一方、バクテリア由来のα2,6−シアル酸転移酵素については、Photobacterium damsela JT0160(非特許文献7参照。)、Photobacterium leiognathi JT−SHIZ−145(非特許文献8参照。)などが報告されているが、いずれも4分岐のN−結合型糖鎖を受容体基質としたシアル酸付加については検討されていない。
抗体医薬やサイトカインなどの糖タンパク質医薬品のN−型糖鎖に付加するシアル酸の結合様式に関し、α2,6結合シアル酸を付加したタンパク質は、α2,3結合シアル酸を付加したタンパク質に比べ血中からの消失が早いことが報告されている。糖タンパク質の血中からのクリアランスについては、体内のレクチン分子と結合して細胞内へ取り込まれ、最終的に代謝される。従ってα2,6結合のシアル酸を有する糖タンパク質は特異的なレクチンに結合することで臓器特異的に取り込まれることが期待でき、ドラッグデリバリーへの活用が期待できる。また糖タンパク質は、分子サイズに依存し腎臓において尿中に排出されることが知られている。エリスロポエチンでは、糖鎖の分岐数が多いと見かけの分子サイズが増加し、血中からのクリアランスが遅れると報告されている。従ってα2,3結合及び/又はα2,6結合のシアル酸を有する糖鎖、とりわけ、α2,3結合及び/又はα2,6結合のシアル酸を4分子有する4分岐のN−型糖鎖を合成することが可能となれば、臓器への取り込み効率が異なる糖タンパク質医薬品の生産へ応用できることが期待される。
即ち、本発明は、シアル酸転移酵素、及び、ホスファターゼの存在下において、
第一の糖鎖またはその誘導体に対し、CMP−シアル酸を反応させ、
前記第一の糖鎖またはその誘導体の非還元末端にシアル酸を転移させることにより、
シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体を製造する方法に関する。
また、本発明のシアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記第一の糖鎖またはその誘導体が、
下記式により表わされる化合物
またはその誘導体であることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体が、3分岐型または4分岐型のN−結合型複合型糖鎖であり、糖鎖の各非還元末端のすべてにシアル酸を有する化合物またはその誘導体であることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体が、
下記式により表わされる化合物
またはその誘導体であることを特徴とする。
(a)糖転移酵素の存在下において、
下記式により表わされる糖鎖
(b)シアル酸転移酵素、及び、ホスファターゼの存在下において、
前記工程(a)の生成物に対し、CMP−シアル酸を反応させる工程;
を含む、シアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法に関する。
(a)MGAT4及びMGAT5の存在下において、
アガラクト2分岐複合型糖鎖またはその誘導体に対し、UDP−GlcNAcを反応させる工程;
(b)β4GalT1の存在下において、前記工程(a)の生成物に対し、UDP−Galを反応させる工程;及び
(c)シアル酸転移酵素及びホスファターゼの存在下において、前記工程(b)の生成物に対し、CMP−シアル酸を反応させる工程;
を含む、非還元末端にシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法に関する。
また、本発明のシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記シアル酸転移酵素が、ヒト由来のシアル酸転移酵素であることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記シアル酸転移酵素が、ST6Gal−Iであることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記CMP−シアル酸が、CMP−Neu5Acであることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼであることを特徴とする。
また、本発明のシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法の一実施態様においては、前記ホスファターゼが、大腸菌由来アルカリホスファターゼであることを特徴とする。
シアル酸の構造として、上記ノイラミン酸に対する、アミノ基の置換としては、アミノ基のアセチル化、グライコリル化などが知られている他、アミノ基が脱離したデアミノ化などが知られており、ヒドロキシ基の置換としては、アセチル化、メチル化、リン酸化、ラクチル化などが知られているが、これらに限定されない。
本明細書において、天然に存在する糖タンパク質またはその糖鎖を製造するという観点から、転移させるシアル酸としては、天然に最も多く存在するN−アセチルノイラミン酸(Neu5Ac)、次に多く存在するN−グライコリルノイラミン酸(Neu5Gc)が好ましい。特に、ヒトの糖タンパク質として天然に存在する糖タンパク質またはその糖鎖を製造するという観点から、N−アセチルノイラミン酸がより好ましい。
[式中、シアル酸−糖鎖は、糖鎖の非還元末端にシアル酸がグリコシド結合した化合物を示す。]
シアル酸転移酵素としては、例えば、糖鎖の非還元末端に存在する、ガラクトースの3位や6位、N−アセチルガラクトサミンの6位、また、シアル酸の8位に転移することが知られている。例えば、ガラクトースの3位にシアル酸を転移する酵素はα−2,3シアル酸転移酵素、ガラクトースまたはN−アセチルガラクトサミンの6位にシアル酸を転移する酵素はα−2,6シアル酸転移酵素、シアル酸の8位にさらにシアル酸を転移する酵素はα−2,8ポリシアル酸転移酵素と呼ばれている。
シアル酸転移酵素は、細菌由来のもののほか、ニジマス由来、哺乳類由来のものなどが知られており、また植物からはシアル酸転移酵素様の活性を有するタンパク質が見いだされている。特に、哺乳類の糖タンパク質として天然に存在する糖タンパク質またはその糖鎖を製造するという観点から、哺乳類由来のものが好ましく、ヒトの糖タンパク質として天然に存在する糖タンパク質またはその糖鎖を製造するという観点から、ヒト由来のものがより好ましい。
α−2,6シアル酸転移酵素については、ヒト由来のものとして、例えば、ガラクトースの6位に転移する酵素としてST6Gal−I(ST6Gal1と表記することもある、以下同様。)及びST6Gal−IIが、またN−アセチルガラクトサミンの6位に転移する酵素としてST6GalNAc−I、ST6GalNAc−II、ST6GalNAc−III及びST6GalNAc−IVが知られている。
α−2,3シアル酸転移酵素については、ヒト由来のものとして、例えば、ガラクトースの3位に転移する酵素としてST3Gal−I〜ST3Gal−VIが知られている。
シアル酸転移酵素は、特に、糖タンパク質として天然に存在する糖タンパク質またはその糖鎖を製造するという観点からは、ST6Gal−I、ST6Gal−II、ST3Gal−I、ST3Gal−II、ST3Gal−III、ST3Gal−IV、ST3Gal−VI、ST6GalNAc−I、ST6GalNAc−II、ST6GalNAc−III、ST6GalNAc−IV、ST8Sia−II、ST8Sia−III、ST8Sia−IVが好ましい。また、N−結合型糖鎖を製造するという観点からは、ST6Gal−I、ST6Gal−II、ST3Gal−III、ST3Gal−IV、ST3Gal−VI、ST8Sia−II、ST8Sia−III、ST8Sia−IVが好ましい。
N−結合型糖鎖は、アスパラギン結合型糖鎖、N−型糖鎖等と呼ばれることもある。N−結合型糖鎖は、Man3−GlcNAc−GlcNAcを母核とする糖鎖群である。母核のManに結合する糖鎖の構造により、高マンノース(ハイマンノース)型、複合(コンプレックス)型、混成(ハイブリッド)型と呼ばれる特定の糖鎖構造を有することが知られている。また、糖鎖の分岐構造としても、2分岐型、3分岐型、4分岐型などの多分岐型構造が知られている。これらの糖鎖の構造は、例えば、生化学辞典(第3版、株式会社東京化学同人発行)等にも記載されている。
本明細書において、アシアロ糖鎖としては、例えば、下記式で表される4分岐型の糖鎖またはその誘導体が好ましい。
本明細書において、アシアロ4分岐型N−結合型複合型糖鎖またはその誘導体としては、例えば、下記式で表される糖鎖
本明細書において、アシアロ3分岐型N−結合型複合型糖鎖またはその誘導体としては、例えば、下記式で表される糖鎖
本明細書において、アシアロ2分岐型N−結合型複合型糖鎖またはその誘導体としては、例えば、下記式で表される糖鎖
また、上記糖鎖に対し、各糖鎖の非還元末端のうちの1つないし複数の箇所にシアル酸がグリコシド結合した糖鎖またはその誘導体を、本発明のシアル酸転移反応における糖受容体として用いることもできる。従来の方法では、多分岐型の糖鎖の場合にすべての非還元末端にシアル酸を有する糖鎖を製造することが困難であったところ、これらの従来方法により得られる糖鎖も本発明のシアル酸転移反応によって、すべての非還元末端にシアル酸を有する糖鎖にすることができる。例えば、従来方法により得られる糖鎖としては、下記式で表される化合物
上記化合物は、従来方法により得られる他、本発明の方法において、反応時間を調節することにより製造することもできる。
第一の糖鎖またはその誘導体として、糖鎖の非還元末端のうちの1つないし複数の箇所にシアル酸がグリコシド結合した糖鎖またはその誘導体を用い、当該化合物中のシアル酸のグリコシド結合とは異なるグリコシド結合を生じさせるシアル酸転移酵素を用いることにより、シアル酸のグリコシド結合様式が同一ではない化合物を製造することもできる。
糖鎖の誘導体としては、糖鎖の還元末端に、Rとして、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、リンカー、蛍光基、脂質、低分子化合物、放射性化合物などが付加されたものも含む。アミノ酸は、天然のアミノ酸のみならずアミノ酸変異体及び誘導体といったような非天然アミノ酸を含む。アミノ酸、ペプチド、タンパク質等は、これらに含まれる水酸基、アミノ基、カルボキシル基のような官能基の一部ないし全部を保護基で保護したものであってもよい。水酸基の保護基としては、例えば、メチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、アセチル基、トリメチルシリル(TMS)基、トリエチルシリル(TES)基、tert−ブチルジメチルシリル(TBSまたはTBDMS)基などを挙げることができる。アミノ保護基としては、例えば、脂溶性保護基として、9−フルオレニルメトキシカルボニル(Fmoc)基、t−ブチルオキシカルボニル(Boc)基、ベンジル基、アリルオキシカルボニル基、アセチル基などの、カーボネート系またはアミド系の保護基等を挙げることができる。脂溶性保護基を導入する場合には、例えば、Fmoc基を導入する場合には、9−フルオレニルメチル−N−スクシニミジルカーボネートと炭酸ナトリウムを加えて反応を行うことにより導入できる。
カルボキシル基の保護基としては、例えば、ベンジル基、アリル基、ジフェニルメチル基などを挙げることができる。上記は例示であって、これらに限定されない。シアル酸転移酵素は、糖鎖の非還元末端に作用するものであるから、糖鎖の還元末端に対する付加物は、糖転移反応に大きな影響を及ぼすものでない限り、いかなるものでも用いることができる。リンカーは、糖鎖製造後に、アミノ酸やタンパク質等に結合させる際に有用であり、例えば、−NH−(CO)−(CH2)a−CH2−
(式中、aは整数であり、目的とするリンカー機能を阻害しない限り限定されるものではないが、好ましくは0〜4の整数を示す。)、
C1−10ポリメチレン、−CH2−R1−(ここで、R1は、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、炭素環基、置換された炭素環基、複素環基及び置換された複素環基からなる群より選択される基から水素原子が1つ脱離して生ずる基である)等を挙げることができるが、これらに限定されない。また、蛍光基は、糖鎖製造後の精製や、糖鎖を検査等に用いる際に有用であり、例えば、ダンシル化、ピリジルアミノ(PA)化、2−アミノベンズアミド(2−AB)、2−アミノ安息香酸(2−AA)、9−アミノピレン−1,4,6−トリスルホン酸(APTS)化等を挙げることができる。また、糖鎖アミノ酸にさらにリンカーを付加する、あるいは、糖とアミノ酸がリンカーを介して結合するなど、2つ以上の付加物を任意の順序で付加したものであってもよい。
本明細書において、糖鎖の誘導体は、好ましくは、糖鎖アミノ酸、糖鎖付加ペプチド、糖鎖付加タンパク質であり、天然の糖タンパク質の糖鎖を製造する観点からは、糖鎖アスパラギン(糖鎖−Asnと表記することもある)がより好ましい。また、製造した糖鎖アスパラギンを固相合成に用いる観点からは、糖鎖アスパラギンに保護基が結合した化合物(糖鎖−Asn−R2と表記することもある。ここで、R2は保護基を示す。)が好ましい。保護基としては、脂溶性保護基として、上記に例示したものの他、当業者に公知のものを用いることができる。例えば、脂溶性保護基である、Fmoc、Boc等が付加した、糖鎖アスパラギンFmoc(糖鎖−Asn−Fmoc)、糖鎖アスパラギンBoc(糖鎖−Asn−Boc)等が好ましい。
本明細書において、シアル酸を有する糖鎖またはその誘導体について、糖鎖1分子に対して結合したシアル酸の数を特定する場合、糖鎖1分子に対してシアル酸4分子が結合した場合を「テトラシアロ」と呼び、糖鎖1分子に対してシアル酸3分子が結合した場合を「トリシアロ」と呼び、糖鎖1分子に対してシアル酸2分子が結合した場合を「ジシアロ」と呼び、糖鎖1分子に対してシアル酸1分子が結合した場合を「モノシアロ」と呼ぶ。また、「テトラシアロ糖鎖」や「テトラシアロ体」等の呼び方をすることもある。例えば、4分岐型の糖鎖1分子に対して、シアル酸が4分子結合した化合物であれば、「テトラシアロ」「4分岐型」の糖鎖であり、4分岐型の糖鎖1分子に対して、シアル酸が3分子結合した化合物であれば、「トリシアロ」「4分岐型」の糖鎖であり、3分岐型の糖鎖1分子に対して、シアル酸が3分子結合した化合物であれば、「トリシアロ」「3分岐型」の糖鎖ということができる。
本明細書において、「テトラシアロ」という場合には、糖鎖1分子に対してシアル酸4分子が結合していれば、シアル酸と糖鎖の間のグリコシド結合の種類を問わず、例えば、全て(α2,6)結合である化合物、全て(α2,3)結合である化合物、一部が(α2,6)結合であり、その他が(α2,3)結合である化合物等を含む。ただし、本明細書において、単に「(α2,6)テトラシアロ」と記載した場合には、4分子のシアル酸がすべて(α2,6)結合により糖鎖に結合した化合物をいい、単に「(α2,3)テトラシアロ」と記載した場合には、4分子のシアル酸がすべて(α2,3)結合により糖鎖に結合した化合物をいう。 シアル酸転移酵素により、「第一の糖鎖またはその誘導体」の非還元末端とシアル酸との間に形成されるグリコシド結合の結合様式は特に限定されないが、好ましくは、α2,6結合、α2,3結合、または、α2,8結合である。「シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体」が、糖鎖の非還元末端に複数のシアル酸を有する場合には、「第一の糖鎖またはその誘導体」の非還元末端とシアル酸との間に形成されるグリコシド結合の結合様式は同一であっても異なってもよい。
本明細書において、シアル酸転移反応の生成物としての、「シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体」は、例えば、下記式により表される糖鎖またはその誘導体が好ましい。
「シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体」として、第二の糖鎖の全ての非還元末端にシアル酸を有する4分岐型のN−結合型複合型糖鎖(本明細書において、テトラシアロ4分岐型N−結合型複合型糖鎖ともいう)としては、例えば、下記式により表わされる糖鎖
また、「シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体」として、第二の糖鎖の全ての非還元末端にシアル酸を有する3分岐型のN−結合型複合型糖鎖(本明細書において、トリシアロ3分岐型N−結合型複合型糖鎖ともいう)としては、例えば、下記式により表わされる糖鎖
また、「シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体」として、第二の糖鎖の全ての非還元末端にシアル酸を有する2分岐型のN−結合型複合型糖鎖(本明細書において、ジシアロ2分岐型N−結合型複合型糖鎖ともいう)としては、例えば、下記式により表わされる糖鎖
なお、N−結合型複合型糖鎖としては、上記糖鎖にFucやGnが結合した化合物も存在することが知られており、そのような化合物も含まれる。より具体的には、還元末端のGnに対して、Fucがα1,6結合することや、還元末端のGnに結合したManの4位にGnがβ1,4結合すること、分岐部分のGnにFucがα1,3またはα1,4結合することが知られている。また、上記糖鎖の分岐部分における結合様式が、Gn(β1,6)Manに代えて、Gn(β1,4)ManまたはGn(β1,2)Manである化合物、Gn(β1,4)Manに代えて、Gn(β1,2)Manである化合物や、シアル酸が結合する部分における、Sia(α2,6)Galの一部がSia(α2,6)Galに代えてSia(α2,3)Galである化合物や、Sia(α2,3)Galの一部がSia(α2,3)Galに代えてSia(α2,6)Galである化合物などのグリコシド結合の結合様式が異なる糖鎖も含まれる。
シアル酸転移酵素は、市販のもの(α2,3−(N)−Sialyltransferase, Rat, Recombinant, S. frugiperda、α2,3−(O)−Sialyltransferase, Rat, Recombinant, S. frugiperda、α2,6−(N)−Sialyltransferase, Human, Recombinant S. frugiperda、Recombinant beta−galactoside−alpha−2,3−sialyltransferase、Recombinant beta−galactoside−alpha−2,6−sialyltransferaseなど)を用いる他、公知の遺伝子配列やアミノ酸配列に基づいて、PCR増幅や化学的に遺伝子合成を行い遺伝子を取得することが出来、この得られた遺伝子をプラスミド等の発現ベクターに挿入し、大腸菌、酵母、昆虫細胞、植物細胞、動物細胞などの発現系を用いて組換え体として酵素を得ることができる。またウシ小腸などの組織や培養した動物細胞などの生体試料からシアル酸転移酵素を精製し利用することが出来る。本明細書に記載した方法の他、当業者であれば、適宜変更等を加えて、製造することが可能である。
ホスファターゼも市販のもの、例えばBacterial Alkaline Phosphatase(E.coli)、Calf intestine Alkaline Phosphatase(CIP)、Alkaline Phosphatase from Shrimp(SAP)を用いる他、適宜製造することが可能である。
CMP−シアル酸も市販のものとして、シチヂン−5'−モノホスホ−N−アセチルノイラミン酸(二ナトリウム)等を用いる他、適宜製造することが可能である。
シアル酸転移酵素反応時の反応溶媒としては、シアル酸転移酵素の活性が保たれる条件であれば特に限定されず、ウシ血清アルブミン等の安定化剤や界面活性剤などを入れてもよい。例えば、0.1M Tris−HCl(pH7.5),1mM MnCl2,0.1% Triton X−100を含む水溶液を用いることができる。当業者であれば、適宜変更等を加えて用いることができる。
反応溶媒のpHは、シアル酸転移酵素の活性が保たれる範囲であれば、特に限定されないが、シアル酸転移酵素の至適範囲として、pH5〜10程度が好ましく、pH7〜8程度がより好ましい。また、用いるホスファターゼの活性が保たれる範囲を考慮し、中性よりも少しアルカリ側、又は、酸性側に調製してもよい。
反応温度は、シアル酸転移酵素の活性が保たれる条件であれば特に限定されない。酵素の至適温度としては、37℃前後が好ましい。好ましくは、10℃〜40℃、より好ましくは、20℃〜37℃、さらに好ましくは、25℃〜37℃である。シアル酸転移酵素によるCMP−シアル酸の分解を防ぐ観点からは、25℃〜30℃が好ましい。
反応時間は、シアル酸転移反応が進行するのに十分な時間であれば特に制限されず、当業者であれば、適宜決定することができる。特に、多分岐型糖鎖の各非還元末端にシアル酸を転移する場合には、好ましくは、8時間〜48時間、より好ましくは、16〜24時間とすることができる。
また、反応に際し、一定時間反応させた後、糖供与体となるCMP−シアル酸の他、ホスファターゼやシアル酸転移酵素を追加し、さらに反応させてもよい。これらは同時に追加してもよく、また、異なるタイミングで追加してもよい。例えば、24時間反応させた後、CMP−シアル酸及びシアル酸転移酵素を追加し、さらに24時間反応させることもできる。
(a)N−アセチルグルコサミン転移酵素の存在下において、UDP−GlcNAcを反応させる工程;
(b)(a)の生成物に対し、ガラクトース転移酵素の存在下において、UDP−Galを反応させる工程;
を行うことによって、製造することができる。
N−アセチルグルコサミン転移酵素としては、糖鎖と転移する糖との間に生じさせるグリコシド結合に応じて選択すればよく、例えば、目的とするグリコシド結合がβ1−6結合である場合にはβ1−6結合を生じさせる酵素、目的とするグリコシド結合がβ1−4結合である場合にはβ1−4結合を生じさせる酵素を選択すればよい。β1−6結合を生じさせる酵素(β1,6−N−アセチルグルコサミン転移酵素)としては、例えば、ヒトMGAT5、ウシGnT−V等、β1−4結合を生じさせる酵素(β1,4−N−アセチルグルコサミン転移酵素)としては、例えば、ヒトMGAT4a、ヒトMGAT4b、ウシGnT−IVaなどを挙げることができる。
ガラクトース転移酵素としては、糖鎖と転移する糖との間に生じさせるグリコシド結合に応じて選択し、目的とするグリコシド結合がβ1−4結合である場合には、β1−4結合を生じさせる酵素を選択すればよく、例えば、β4GalT1、β4GalT2、Helicbacter pylori由来β1,4−ガラクトース転移酵素等を挙げることができる。
下記式で表される4分岐型の糖鎖
下記式で表される3分岐型の糖鎖
また、下記式で表される3分岐型の糖鎖
(b)ガラクトース転移酵素の存在下において、UDP−Galを反応させる工程;
を行うことによって、製造することができる。
ガラクトース転移酵素については、4分岐型の場合と同様である。
本明細書において、ワンポット合成とは、目的化合物の合成に至る過程で、中間生成物の単離・精製を行わずに目的化合物を合成する方法をいう。ワンポット合成反応は、
(a)糖転移酵素の存在下において、原料化合物に対し、前記糖転移酵素の基質となるUDP糖を反応させる工程を1回以上行う工程;
(b)シアル酸転移酵素、及び、ホスファターゼの存在下において、工程(a)の生成物に対し、CMP−シアル酸を反応させる工程;
を行うことにより製造することができる。
この際に、(a)の反応としては、例えば、上記の、2〜4分岐型のN−結合型複合型糖鎖の製造工程を行うことができる。
ワンポット合成反応においては、例えば、(a)の糖転移反応((a)において糖転移反応を複数回行う場合には、各糖転移反応)、(b)のシアル酸転移反応を開始する際に、(a)であれば、糖転移酵素濃縮液、及び、その基質となるUDP−糖の濃縮液を調製しておき、これらを少量添加することにより、行うことができる。
ワンポット合成反応においては、(a)の糖転移反応の後((a)において糖転移反応を複数回行う場合には、各糖転移反応の後、次の糖転移反応開始の前に、)、加熱処理を行うことにより、反応系内の糖転移酵素による糖転移反応を停止させることができる。これにより、さらに、反応生成物の収率を上げることができる。また、(b)工程終了後にも、加熱処理を行うことができる。
加熱処理の条件は、酵素が失活する程度のものであれば、特に限定されないが、例えば、90℃以上の温度において一定時間保温することにより行うことができる。好ましくは、90℃から100℃、5〜10分程度とすることができる。加熱処理条件は当業者が適宜変更することができる。
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項(部材、ステップ、要素、数字など)が存在することを意図するものであり、それ以外の事項(部材、ステップ、要素、数字など)が存在することを排除しない。
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語(技術用語及び科学用語を含む。)は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
本発明の実施態様は模式図を参照しつつ説明される場合があるが、模式図である場合、説明を明確にするために、誇張されて表現されている場合がある。
第一の、第二のなどの用語が種々の要素を表現するために用いられるが、これらの要素はそれらの用語によって限定されるべきではないことが理解される。これらの用語は一つの要素を他の要素と区別するためのみに用いられているのであり、例えば、第一の要素を第二の要素と記し、同様に、第二の要素は第一の要素と記すことは、本発明の範囲を逸脱することなく可能である。
ヒトST6Gal−IのmRNA配列は公共のデータベースであるGenBankにAccession No.X62822として、またアミノ酸配列はAccession No.P15907として登録されている。このアミノ酸配列を基に、Ogataea minutaのコドン使用に合わせた形で遺伝子全合成を行なった。なお合成した遺伝子はヒトST6Gal−Iの細胞質ドメインと膜貫通領域を含むN−末端側48アミノ酸を除いて発現させ、その外側には、発現ベクターへの導入を容易にすべく、制限酵素BamHI部位を導入した。その配列を配列番号1に示す。この配列を含む領域をBamHIで切断後、メタノール資化性酵母Ogataea minutaの発現ベクターpOMEA1−10H3FのBamHI部位に導入し、pOMEA1−10H3F−ST6Gal−Iを作製した。このプラスミドpOMEA1−10H3F−ST6Gal−IをNotIで切断後、Ogataea minuta TK−10−1−2株(Δoch1Δpep4Δprb1Δura3Δade1、WO2003/091431)を形質転換した。形質転換はエレクトロポレーション法を用いて行なった。形質転換後、SD−Ade(2%グルコース、0.17%Yeast Nitrogen Base w/o amino acids (Difco社製)、アデニンを除く核酸塩基及びアミノ酸混合物(20−400mg/L))培地にまいて、30℃にて2日間培養し形質転換体を得た。形質転換体をプレートから掻きとり、PCR反応液に懸濁する簡易法PCRにて染色体上への組み込みを確認し、YTY−1株とした。
次に、より発現量を向上させるため、シャペロン遺伝子の導入を行なった。特願2009−539162に記載された、OmPDI1、OmERO1、OmKAR2を恒常的に発現する遺伝子を含むベクターOnaP11007をNotIで切断し、YTY−1の形質転換を行なった。形質転換はエレクトロポレーション法を用いて行なった。形質転換後、SD−Ura(2%グルコース、0.17%Yeast Nitrogen Base w/o amino acids(Difco社製)、ウラシルを除く核酸塩基及びアミノ酸混合物(20−400mg/L))培地にまいて、30℃にて2日間培養し形質転換体を得た。形質転換体をプレートから掻きとり、PCR反応液に懸濁する簡易法PCRにて染色体上への組み込みを確認し、YTY−2株とした。
得られたYTY−2株を培養し、ST6Gal−Iの発現を行なった。5mlのYPAD+KCl培地(2%ポリペプトン、1%酵母エキス、2%グルコース、アデニン(40 mg/L)、0.3 M KCl)に植菌し、30℃、一晩前培養した。次に150mlのYPAD+KCl培地に1mlの前培養液を植菌し、30℃、48時間培養した。集菌後、100mlのBMMY+2%カザミノ酸培地(1%酵母エキス,2%ポリペプトン,1.34% Yeast Nitrogen Base w/o amino acids (Difco社製),0.1M KPi(pH6.0),2%カザミノ酸,0.5%メタノール)に再懸濁し、20℃、96時間培養した。なお、12時間ごとに0.5%になるようにメタノールを添加した。培養終了後遠心して菌体を除き、粗酵素液とした。
粗酵素液はSPバッファー(25mM酢酸ナトリウム(pH5.5),0.1%Triton X−100)に透析後、SPバッファーで平衡化したHiTrap SP HP(5ml)に供した。SPバッファーで洗浄後、1MのNaClを含むSPバッファーで溶出を行なった。ST6Gal−I活性を示す画分を回収し、反応バッファー(25mM MOPS,pH7.3)に透析し、部分精製標品とした。
酵素活性測定は以下のように行った。反応液(0.1M MOPS(pH7.3),5mM CMP−Neu5Ac,50μM PA化Lacto−N−neotetraose(LNnT−PA))18μlに対し、粗酵素液を2μl加え反応を開始した。37℃,30分反応後、煮沸することで反応を停止し、HPLCによる解析を行った。カラムはAsahipak NH2P−50(4.6×250mm:Shodex社)を使用し、移動相は0.2Mトリエチルアミン−酢酸(pH7.0)(A液)とアセトニトリル(B液)を用い、A液:B液=30:70でカラムを平衡化した。試料注入後20分かけてA液:B液の割合を50:50まで直線的に変化させ、グラジェント溶出を行った。検出は蛍光検出器(Ex:315nm,Em:380nm)にて行った。基質であるLNnT−PAは9分に、反応産物である6’−Sialyl−LNnT−PAは18.5分に溶出される。ピーク面積から得られた反応産物を定量し、活性(U)とした。なお1Uは、1分間に1μmolの反応産物を生成する酵素量と定義した。
アシアロ4分岐複合型糖鎖誘導体の1種として、下記式で表わされる化合物(以下、NA4−Fmocという。)を以下の方法により製造した。
得られた反応液から目的糖鎖(NA4−Fmoc)の精製を行なった。カラムはKromasil 100−5C18(4.6×250mm:EKA−CHEMICAL社)を使用し、移動相は25mM酢酸アンモニウム(A液)とアセトニトリル(B液)を用い、A液:B液=82:18でカラムを平衡化した。試料注入後20分で糖鎖を回収した。検出は蛍光検出器(Ex:265nm,Em:315nm)にて行った。基質であるNGA2−Fmocは14分に、反応産物であるNA4−Fmocは8分にシングルピークとして溶出された。反応産物の糖鎖を回収し、NA4−Fmocとして以後の実験に用いた。
α2,6シアル酸が付加した4分岐複合型糖鎖誘導体の1種として、下記式で表わされる化合物(以下、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocという。)
シアル酸が4分子付加した糖鎖に対応するピークを回収し、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocとして以後の実験に用いた。
酵素量の増加に伴う反応産物の増加が見られなかったため、反応産物が分解されている可能性が示唆された。そこで反応産物の分解が起きているかどうかを評価するため以下の実験を行なった。
50pmol分の(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmoc型糖鎖を含む反応液D(0.1M Tris−HCl(pH7.5),1mM MnCl2,0.1% Triton X−100)を調製した。反応液D5μlに50μUのST6Gal−I5μlを添加し、37℃で17時間保温した。同様に50μUのST6Gal−Iと終濃度として2mMとなるようにCMP−Neu5Ac 5μlを加えた反応液を調製した。また同様に、50μUのST6Gal−Iと100℃において5分間加熱処理を行なったCMP−Neu5Acを終濃度として2mMとなるように加えた反応液を調製した。これらも同様に37℃で17時間保温した。反応産物は100℃において5分間加熱後、(2)に示した方法と同様にHPLC解析を行なった。その結果を図2に示す。基質供与体であるCMP−Neu5Acを加えなかった場合にはシアル酸の脱離はほとんど見られなかった。一方、CMP−Neu5Acを加えた場合には、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocのうち約30%が(α2,6)trisialo−NA4−Fmocとなり、シアル酸の脱離が確認できた。さらに、加熱したCMP−Neu5Acを加えた場合では、(α2,6)trisialo−NA4−Fmocが58%みられた。
一方、図3に示す通り、(α2,3)tetrasialo−NA4−Fmocに対してST6Gal−Iを添加しても分解活性は全く見られなかった。また、(α2,3)tetrasialo−NA4−Fmocに対し、α2,3シアル酸転移酵素であるST3Gal−IIIを添加しても分解は見られなかった。このことからST6Gal−Iによるシアル酸の脱離はα2,6結合のシアル酸に特異的であることが示唆された。
基質供与体であるCMP−Neu5Acの分解によってCMPが生成しているかどうかを確認するため、5mMのCMP−Neu5Ac/0.1M MOPS(pH7.3)を25℃、30℃、33℃、37℃で保温し、CMPの生成量を測定した。測定はHPLCで行ない、カラムはTSKgel SuperQ−5PW(7.5×75mm:東ソー社)を用い、溶媒は50mM KPi(pH8.0)を用いた。検出はUV検出器(検出波長254nm)にて行なった。CMPの生成度は[CMPのピーク面積]/[CMPのピーク面積+CMP−Neu5Acのピーク面積]×100(%)として表わした。その結果を図4に示す。24時間後では、37℃で45%のCMPが生成しているのに対し、30℃では21%であり、37℃の場合の約半分であった。従って温度を下げてST6Gal−Iの反応を行なうことにより、CMP依存的なシアル酸分解活性を抑制できることが示唆された。
次に、α2,6シアル酸が付加した4分岐複合型糖鎖の生成率を評価するため、50μM NA4−Fmocを含む反応液E(0.1M MOPS(pH7.3),5mM MnCl2,5mg/mlウシ血清アルブミン,5mM CMP−Neu5Ac)を調製した。反応液E10μlに、(1)で調製したST6Gal−Iを100μU添加し、10℃、20℃、25℃、30℃、37℃で24時間反応を行なった。図5に示すように、反応24時間後において、25℃と30℃で反応させた場合に、目的の糖鎖である(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocの収率が高かった。従って、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocの収率を上げるためには、シアル酸転移酵素の至適温度から外れた25℃〜30℃で反応させた方がよいことが示唆された。
基質供与体であるCMP−Neu5Acの分解の他にも、合成反応の副産物としてCMPが生成するため、これらのCMPを分解することによりシアル酸転移酵素によるシアル酸脱離反応を抑制することを試みた。25pmol分の(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocと2.5nmolのCMPを含む反応液E(0.1M Tris−HCl(pH7.5),1mM MnCl2,0.1% Triton X−100)を調製した。この反応液E10μlに25μUのST6Gal−Iを添加し、37℃で17時間保温した。同様に25μUのST6Gal−Iと50μUの大腸菌由来アルカリホスファターゼ(BAP)(タカラバイオ社)を加えた反応液を調製し、同様に保温した。反応産物は100℃において5分間加熱後、(3)に示した方法で分析を行なった。その結果を図6に示す。CMPを加えた場合には、24時間後には(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocのうち約70%が(α2,6)trisialo−NA4−Fmocとなり、シアル酸の脱離が確認された。一方、大腸菌由来アルカリホスファターゼ(BAP)を添加した場合には、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocの分解はほとんど見られなかった。このことから、CMPをホスファターゼで分解し5’−シチジン酸とすることにより、ST6Gal−Iのテトラシアロ糖鎖に対するシアル酸脱離活性を抑制できることを確認した。
150μlの反応液F(0.1M MOPS(pH7.3),40mM UDP−GlcNAc(6μmol),6.7mM NGA2−Fmoc(1μmol),0.3mU MGAT4a,0.3mU MGAT5,5mg/ml BSA,1mM PMSF)を調製し、37℃において16時間反応を行なった。100℃において5分間保温し反応を停止後、反応液Fに対して250μlの反応液G(0.1M MOPS(pH7.3),24mM UDP−Gal(6μmol),4.8mU β4GalT1,8mM MnCl2,5mg/ml BSA,4mM AMP)を添加し、37℃、16時間反応を行なった。100℃において5分間保温し反応を停止後、減圧乾固を行なった。このチューブに250μlの反応液H(40mM CMP−Neu5Ac(10μmol),3mU ST6Gal−I,15mU BAP)を添加し、30℃において16時間反応を行なった。さらにCMP−Neu5Ac(20mM CMP−Neu5Ac)5μlを添加し、30℃において16時間反応を行なった。反応後、100℃において5分間の加熱処理を行ない、反応を停止させた。上記の一連のワンポット合成反応をフローチャートとして、図7に示す。また、上記の一連のワンポット合成反応における糖鎖付加反応を、構造式を用いて模式的に図8に示す。
反応原料及び反応生成物について、HPLC解析を行ない、(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocの定量を行なった。HPLC解析条件として、カラムはAmido−80(3μm、4.6×150mm:TOSOH社)を使用し、移動相はアセトニトリル(A液)と0.2M TEAA(pH7.0)(B液)を用い、A液:B液=75:25でカラムを平衡化した。試料注入後35分で糖鎖を回収した。検出は蛍光検出器(Ex:265nm,Em:315nm)にて行った。その結果を図9に示す。反応原料であるNGA2−Fmocは約16分に、反応生成物である(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocは約30分にシングルピークとして溶出された。反応原料のNGA2−Fmocのピーク面積に対し、得られた(α2,6)tetrasialo−NA4−Fmocのピーク面積は90%であり、ワンポット合成で非常に収率よく目的糖鎖の合成が出来ることが確認された。
Claims (16)
- シアル酸転移酵素、及び、ホスファターゼの存在下において、
第一の糖鎖またはその誘導体に対し、CMP−シアル酸を反応させ、
前記第一の糖鎖またはその誘導体の非還元末端にシアル酸を転移させることにより、
シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体を製造する方法。 - 請求項1に記載の前記第一の糖鎖またはその誘導体が、3分岐型または4分岐型のN−結合型複合型糖鎖またはその誘導体である、方法。
- 請求項1に記載の前記第一の糖鎖またはその誘導体が、
下記式により表わされる化合物
- 請求項1に記載の前記シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体が、3分岐型または4分岐型のN−結合型複合型糖鎖であり、糖鎖の各非還元末端のすべてにシアル酸を有する化合物またはその誘導体である、方法。
- 請求項1に記載の前記シアル酸を有する第二の糖鎖またはその誘導体が、
下記式により表わされる化合物
- 以下の工程;
(a)糖転移酵素の存在下において、
下記式により表わされる糖鎖
(b)シアル酸転移酵素、及び、ホスファターゼの存在下において、
前記工程(a)の生成物に対し、CMP−シアル酸を反応させる工程;
を含む、シアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法。 - 以下の工程;
(a)MGAT4及びMGAT5の存在下において、
アガラクト2分岐複合型糖鎖またはその誘導体に対し、UDP−GlcNAcを反応させる工程;
(b)β4GalT1の存在下において、前記工程(a)の生成物に対し、UDP−Galを反応させる工程;及び
(c)シアル酸転移酵素及びホスファターゼの存在下において、前記工程(b)の生成物に対し、CMP−シアル酸を反応させる工程;
を含む、非還元末端にシアル酸を有する糖鎖またはその誘導体を製造する方法。 - 請求項1〜7に記載の方法であって、前記シアル酸転移酵素が、α2,6シアル酸転移酵素である方法。
- 請求項1〜7に記載の方法であって、前記シアル酸転移酵素が、ヒト由来のシアル酸転移酵素である方法。
- 請求項1〜7に記載の方法であって、前記シアル酸転移酵素が、ST6Gal−Iである方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法であって、前記CMP−シアル酸が、CMP−Neu5Acである方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法であって、前記ホスファターゼが、アルカリホスファターゼである方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法であって、前記ホスファターゼが、大腸菌由来アルカリホスファターゼである方法。
- 4分岐型のN−結合型複合型糖鎖またはその誘導体の各非還元末端のすべてにシアル酸を有する化合物。
- 4分岐のN−結合型複合型糖鎖またはその誘導体の各非還元末端のすべてにα2,6結合型のシアル酸を有する化合物。
- 下記式により表わされる化合物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011047378 | 2011-03-04 | ||
JP2011047378 | 2011-03-04 | ||
PCT/JP2012/054727 WO2012121041A1 (ja) | 2011-03-04 | 2012-02-27 | シアル酸含有糖鎖の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2012121041A1 true JPWO2012121041A1 (ja) | 2014-07-17 |
JP5975577B2 JP5975577B2 (ja) | 2016-08-23 |
Family
ID=46798009
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013503458A Active JP5975577B2 (ja) | 2011-03-04 | 2012-02-27 | シアル酸含有糖鎖の製造方法 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9376506B2 (ja) |
EP (1) | EP2682473B1 (ja) |
JP (1) | JP5975577B2 (ja) |
KR (1) | KR101906623B1 (ja) |
CN (1) | CN103502462B (ja) |
AU (1) | AU2012225900B2 (ja) |
BR (1) | BR112013022277B1 (ja) |
CA (1) | CA2828905C (ja) |
RU (1) | RU2597975C2 (ja) |
SG (1) | SG193021A1 (ja) |
TW (1) | TWI546385B (ja) |
WO (1) | WO2012121041A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6090738B2 (ja) * | 2011-12-19 | 2017-03-08 | 国立大学法人 香川大学 | 糖ペプチドの製造方法、糖アミノ酸の製造方法および糖タンパク質の製造方法 |
US20160177355A1 (en) * | 2013-03-14 | 2016-06-23 | Adam C. Fisher | Oligosaccharide compositions, glycoproteins and methods to produce the same in prokaryotes |
WO2014149067A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods related to ctla4-fc fusion proteins |
EP3719122A1 (en) * | 2013-05-02 | 2020-10-07 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Sialylated glycoproteins |
ES2708759T3 (es) | 2013-05-13 | 2019-04-11 | Momenta Pharmaceuticals Inc | Procedimientos para el tratamiento de la neurodegeneración |
EP3058084A4 (en) | 2013-10-16 | 2017-07-05 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Sialylated glycoproteins |
KR101755430B1 (ko) * | 2014-09-25 | 2017-07-27 | 한국생명공학연구원 | 개선된 효율을 갖는 시알산전달효소를 이용한 당단백질의 당사슬에 시알산을 부가하는 방법 |
EP3237608B1 (en) * | 2014-12-22 | 2019-10-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cmp-dependent sialidase activity |
WO2017002918A1 (ja) * | 2015-06-30 | 2017-01-05 | 株式会社糖鎖工学研究所 | アルブミン-糖鎖複合体 |
JP6762027B2 (ja) | 2016-08-25 | 2020-09-30 | 株式会社雅嘉貿易 | シアロオリゴ糖の製造方法とその利用 |
JP7341434B2 (ja) * | 2018-11-08 | 2023-09-11 | 株式会社レゾナック・テクノサービス | メタボローム分析用分離材及びメタボローム分析用カラム |
WO2020096057A1 (ja) * | 2018-11-08 | 2020-05-14 | 日立化成テクノサービス株式会社 | メタボロームの分離方法 |
CN110041443A (zh) * | 2019-04-24 | 2019-07-23 | 广东药科大学附属第一医院 | 多分支聚唾液酸衍生物及其制备方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2125092C1 (ru) * | 1991-10-15 | 1999-01-20 | Дзе Скриппс Рисерч Инститьют | Способ получения фукозилированного углевода, способ получения фукозилированной сиалилированной углеводной молекулы, реакционная система in vitro |
US6458574B1 (en) | 1996-09-12 | 2002-10-01 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Treatment of a α-galactosidase a deficiency |
HUP0302299A2 (hu) * | 2000-05-12 | 2003-10-28 | Neose Technologies, Inc. | Rekombináns glikopeptidek glikozilezési mintázatának in vitro módosítása |
EP1505149B1 (en) | 2002-04-26 | 2009-01-07 | Kirin Pharma Kabushiki Kaisha | Methylotroph yeast producing mammalian type sugar chain |
AU2003292641B2 (en) * | 2002-12-26 | 2007-11-29 | Glytech, Inc. | Three-branched sugar-chain asparagine derivatives, the sugar-chain asparagines, the sugar chains, and processes for producing these |
WO2006088017A1 (ja) * | 2005-02-16 | 2006-08-24 | National University Corporation Hokkaido University | 4位ハロゲン化ガラクトース含有糖鎖及びその応用 |
US7461223B2 (en) | 2006-05-29 | 2008-12-02 | Microsoft Corporation | Retaining shadow copy data during replication |
US20120100609A1 (en) * | 2009-03-27 | 2012-04-26 | Crawford Brett E | N-linked glycan biosynthesis modulators |
RU2627184C2 (ru) * | 2011-09-04 | 2017-08-03 | Глитек, Инк. | Гликозилированные полипептиды и лекарственные композиции, содержащие данные полипептиды |
-
2012
- 2012-02-27 CA CA2828905A patent/CA2828905C/en active Active
- 2012-02-27 EP EP12754383.3A patent/EP2682473B1/en active Active
- 2012-02-27 KR KR1020137024893A patent/KR101906623B1/ko active IP Right Grant
- 2012-02-27 CN CN201280011234.5A patent/CN103502462B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-02-27 US US14/002,645 patent/US9376506B2/en active Active
- 2012-02-27 SG SG2013066527A patent/SG193021A1/en unknown
- 2012-02-27 JP JP2013503458A patent/JP5975577B2/ja active Active
- 2012-02-27 BR BR112013022277-8A patent/BR112013022277B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2012-02-27 AU AU2012225900A patent/AU2012225900B2/en not_active Ceased
- 2012-02-27 RU RU2013143650/10A patent/RU2597975C2/ru active
- 2012-02-27 WO PCT/JP2012/054727 patent/WO2012121041A1/ja active Application Filing
- 2012-03-03 TW TW101107162A patent/TWI546385B/zh active
-
2015
- 2015-05-01 US US14/702,535 patent/US20170240655A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5975577B2 (ja) | 2016-08-23 |
TWI546385B (zh) | 2016-08-21 |
EP2682473B1 (en) | 2019-09-25 |
KR101906623B1 (ko) | 2018-10-10 |
RU2597975C2 (ru) | 2016-09-20 |
AU2012225900A1 (en) | 2013-09-19 |
SG193021A1 (en) | 2013-09-30 |
BR112013022277B1 (pt) | 2021-08-03 |
BR112013022277A2 (pt) | 2018-08-21 |
KR20140114279A (ko) | 2014-09-26 |
US20170240655A1 (en) | 2017-08-24 |
CA2828905A1 (en) | 2012-09-13 |
TW201247873A (en) | 2012-12-01 |
EP2682473A4 (en) | 2015-06-03 |
US20140066617A1 (en) | 2014-03-06 |
US9376506B2 (en) | 2016-06-28 |
CA2828905C (en) | 2021-05-04 |
CN103502462B (zh) | 2016-08-10 |
EP2682473A1 (en) | 2014-01-08 |
RU2013143650A (ru) | 2015-04-10 |
WO2012121041A1 (ja) | 2012-09-13 |
AU2012225900B2 (en) | 2015-09-17 |
CN103502462A (zh) | 2014-01-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5975577B2 (ja) | シアル酸含有糖鎖の製造方法 | |
Li et al. | Strategies for chemoenzymatic synthesis of carbohydrates | |
Weijers et al. | Glycosyltransferase-catalyzed synthesis of bioactive oligosaccharides | |
Chao et al. | Recent progress in chemo-enzymatic methods for the synthesis of N-glycans | |
Palcic | Biocatalytic synthesis of oligosaccharides | |
Brockhausen | Crossroads between bacterial and mammalian glycosyltransferases | |
Bojarová et al. | Enzymatic glycosylation of multivalent scaffolds | |
Watt et al. | Enzyme-catalyzed formation of glycosidic linkages | |
Chien et al. | Sequential one-pot enzymatic synthesis of oligo-N-acetyllactosamine and its multi-sialylated extensions | |
Council et al. | Enzymatic glycosylation involving fluorinated carbohydrates | |
KOTANI et al. | Knockout of mouse β1, 4-galactosyltransferase-1 gene results in a dramatic shift of outer chain moieties of N-glycans from type 2 to type 1 chains in hepatic membrane and plasma glycoproteins | |
Cao et al. | General consideration on sialic acid chemistry | |
Ramakrishnan et al. | Role of a single amino acid in the evolution of glycans of invertebrates and vertebrates | |
US10023601B2 (en) | Hydrolysis resistant sialic acid derivatives and methods for their use | |
Crawley et al. | Use Of Glycosylteansferases In The Synthesis Of Unnatural Oligosaccharide Analogues | |
JP4910091B2 (ja) | 4位ハロゲン化ガラクトース含有糖鎖及びその応用 | |
JP5464578B2 (ja) | Ssea系新規糖鎖化合物 | |
Huang | Chemoenzymatic Synthesis of Carbohydrates and Glycoconjugates | |
Liu et al. | Efficient Coupling of Complex Fluorooligosaccharides to Phenolic Peptide Mediated by Calcium Iodide | |
Schachter | Biosynthesis 1. Introduction | |
Li et al. | Chemoenzymatic Synthesis of N-Glycans | |
Flitsch et al. | Enzymes in carbohydrate chemistry: formation of glycosidic linkages | |
Thon | Bacterial Glycosyltransferases, a Disaccharide Phosphorylase, and a Uridylyltransferase for Chemoenzymatic Synthesis of Carbohydrates | |
Shao | Microbial glycosyltransferases and biomedically important oligosaccharides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150206 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160202 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160310 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160627 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160715 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5975577 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |