JPWO2012002572A1 - 有用物質の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)微生物培養による有用物質の製造方法であって、微生物の前培養工程、得られた前培養液を本培養初発培地に接種する工程、ここで本培養初発培地における炭水化物と炭化水素の酸化物の合計の濃度が炭素当量で0.4重量%未満であり、および微生物が対数増殖を開始した後に炭水化物および/または炭化水素の酸化物を添加する本培養工程、を含む前記製造方法。
(2)本培養初発培地は実質的に炭水化物および/または炭化水素の酸化物が添加されていないものである、(1)記載の製造方法。
(3)微生物が対数増殖を開始した後に添加する炭水化物および/または炭化水素の酸化物が糖類である、(1)または(2)記載の製造方法。
(4)微生物が炭水化物および/または炭化水素の酸化物をエキソ型アミラーゼにより異化する微生物である、(1)ないし(3)のいずれかに記載の製造方法。
(5)微生物がモルティエレラ属微生物である、(1)ないし(4)のいずれかに記載の製造方法。
(6)有用物質が高度不飽和脂肪酸である、(1)ないし(5)のいずれかに記載の製造方法。
得られた前培養液の本培養初発培地への接種は、培養方法に応じて当業者が適宜選択し得る。具体的には、微生物菌株の栄養細胞、胞子および/または菌糸、又は予め培養して得られた種培養液あるいは種培養より回収した栄養細胞、胞子および/または菌糸を、液体培地あるいは固体培地に接種して培養する。
このように微生物を培養して、微生物菌体内、菌体表面、または培地中に目的物質を蓄積させる。微生物菌体を含む培養液自体やその濃縮物を最終の目的物質とすることもできるが、必要に応じて有用物質を採取、精製することもできる。目的とする有用物質が微生物菌体内や菌体表面に蓄積している場合、遠心分離、ろ過などの通常の方法により培養液から微生物菌体を回収し、微生物菌体自体を最終の目的物質とすることもでき、また溶媒などにより目的物質を回収し、イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、晶析等、通常の目的物質の精製方法を用いて、目的物質を精製することもできる。また、目的物質が培地中に蓄積している場合でも、微生物菌体を分離した培養液自体やその濃縮物を最終の目的物質とすることもできるが、上述の通常の精製法を用いて、目的物質を精製することもできる。
実施例1
<2> 初発培地にグルコースを添加した培養系による(5Z,8Z,11Z,14Z)−5,8,11,14−イコサテトラエン酸の生産
モルティエレラ・アルピナ1S−4株を用いた。凍結胞子液を、100μL、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.3の培地100mLに接種し、往復振盪100rpm、温度28℃の条件にて前培養(第一段階)を開始し、3日間培養した。次に、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、大豆油0.1w/w%、pH6.3の培地30Lを50L容培養槽に調製し、これに種培養液(第一段階)200mLを接種して、前培養(第二段階)を開始し、温度28℃の条件にて2日間培養した。次に、本培養の初発培地(2.67w/w% 含水グルコース、5.0w/w% 脱脂大豆粉、0.3w/w% K2HPO4、0.05w/w% MgCl2・6H2O、0.05w/w% CaCl2・2H2O、pH6.0)に、種培養液(第二段階)25Lを接種して、計4000Lの初発培養液量に合わせた。
モルティエレラ・アルピナ1S−4株を用いた。凍結胞子液を、100μL、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.3の培地100mLに接種し、往復振盪100rpm、温度28℃の条件にて前培養(第一段階)を開始し、3日間培養した。次に、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、大豆油0.1w/w%、pH6.3の培地30Lを50L容培養槽に調製し、これに種培養液(第一段階)200mLを接種して、前培養(第二段階)を開始し、温度28度の条件にて2日間培養した。次に、本培養の初発培地(5.0w/w% 脱脂大豆粉、0.3w/w% K2HPO4、0.05w/w% MgCl2・6H2O、0.05w/w% CaCl2・2H2O、pH6.0)に、種培養液(第二段階)25Lを接種して、計4000Lの初発培養液量に合わせた。
<1> 初発培地にグルコースを添加した培養による(8Z,11Z,14Z)−8,11,14−イコサトリエン酸の生産
モルティエレラ・アルピナS14株を用いた。モルティエレラ・アルピナS14株を1白金耳程度、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.3の培地100mLに接種し、往復振盪100rpm、温度28℃の条件にて前培養(第一段階)を開始し、3日間培養した。次に、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、大豆油0.1w/w%、pH6.3の培地30Lを50L容培養槽に調製し、これに種培養液(第一段階)200mLを接種して、前培養(第二段階)を開始し、温度28℃の条件にて2日間培養した。次に、本培養の初発培地(2.00w/w% 含水グルコース、4.32w/w% 脱脂大豆粉、0.3w/w% K2HPO4、0.05w/w% MgSO4・7H2O、0.05w/w% CaSO4・2H2O、pH6.3)に、種培養液(第二段階)25Lを接種して、計4000Lの初発培養液量に合わせた。
モルティエレラ・アルピナS14株を用いる。モルティエレラ・アルピナS14株を1白金耳程度、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.3の培地100mLに接種し、往復振盪100rpm、温度28℃の条件にて前培養(第一段階)を開始し、3日間培養する。次に、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、大豆油0.1w/w%、pH6.3の培地30Lを50L容培養槽に調製し、これに種培養液(第一段階)200mLを接種して、前培養(第二段階)を開始し、温度28℃の条件にて2日間培養する。次に、本培養の初発培地(4.32w/w% 脱脂大豆粉、0.3w/w% K2HPO4、0.05w/w% MgSO4・7H2O、0.05w/w% CaSO4・2H2O、pH6.3)に、種培養液(第二段階)25Lを接種して、計4000Lの初発培養液量に合わせる。
<1> 初発培地にグルコースを添加した培養による(5Z,8Z,11Z)−5,8,11−イコサトリエン酸の生産
モルティエレラ・アルピナJT180株を用いた。モルティエレラ・アルピナJT180株を1白金耳程度、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.0の培地20mLに接種し、往復振盪100rpm、温度℃28の条件にて前培養を開始し、3日間培養した。次に、本培養の初発培地(2.00w/w%グルコース、1.00w/w% 酵母エキス、pH6.0)に、前培養液20mLを接種して、計5Lの初発培養液量に合わせた。温度28℃で2日間培養した後に、培養温度を19℃に変更し、培養を継続した。培養1日目、培養2日目にそれぞれ1.00%のグルコースの流加を行い、合計4.0%のグルコースを添加し培養を行った結果、培地中のグルコースが完全に枯渇したのは培養6日目であった。
モルティエレラ・アルピナJT180株を用いる。モルティエレラ・アルピナJT180株を1白金耳程度、酵母エキス1.0w/w%、含水グルコース2.0w/w%、pH6.0の培地20mLに接種し、往復振盪100rpm、温度℃度の条件にて前培養を開始し、3日間培養する。次に、本培養の初発培地(2.00w/w%グルコース、1.00w/w% 酵母エキス、pH6.0)に、前培養液20mLを接種して、計5Lの初発培養液量に合わせる。温度28℃で2日間培養した後に、培養温度を19℃に変更し、培養を継続する。培養1日目、培養2日目にそれぞれ1.00%のグルコースの流加を行い、合計4.0%のグルコースを添加し培養を行うと、培地中のグルコースが完全に枯渇するのは培養5日目である。
Claims (6)
- 微生物培養による有用物質の製造方法であって、
微生物の前培養工程、
得られた前培養液を本培養初発培地に接種する工程、ここで本培養初発培地における炭水化物と炭化水素の酸化物の合計の濃度が炭素当量で0.4重量%未満であり、
微生物が対数増殖を開始した後に炭水化物および/または炭化水素の酸化物を添加する本培養工程、
を含む前記製造方法。 - 本培養初発培地は実質的に炭水化物および/または炭化水素の酸化物が添加されていないものである、請求項1に記載の製造方法。
- 微生物が対数増殖を開始した後に添加する炭水化物および/または炭化水素の酸化物が糖類である、請求項1または2に記載の製造方法。
- 微生物が炭水化物および/または炭化水素の酸化物をエキソ型アミラーゼにより異化する微生物である、請求項1ないし3のいずれかに記載の製造方法。
- 微生物がモルティエレラ属微生物である、請求項1ないし4のいずれかに記載の製造方法。
- 有用物質が高度不飽和脂肪酸である、請求項1ないし5のいずれかに記載の製造方法。
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