JPWO2008120801A1 - アンチトロンビン組成物の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
続 医薬品の開発, 20, 185 (1992) 血栓止血誌, 10, 93 (1999) J. Biol. Chem., 260, 610 (1985) Sequences of protein of immunological interest Fourth Edition, Public Health Service National Institutes of Health (1987) Blood, 73, 84 (1987) Structure, 2, 257 (1994) Arch. Biochem. Biophys., 203, 458 (1980) Protein Expression and Purification, 41, 323 (2005) Blood, 91, 4561 (1998)
(1)アンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
(2)アンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、該担体に吸着したアンチトロンビン組成物を溶出液の導電率を上げることにより溶出させ、該溶出液より所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
(3)導電率を調整したアンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、該担体への非吸着画分より所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
(4)さらに陰イオン交換クロマトグラフィおよび/または疎水クロマトグラフィを行うことを含む、(1)〜(3)のいずれか1項に記載の方法。
(5)(1)〜(3)に記載の調製を行った後に、疎水クロマトグラフィを行う、(4)に記載の方法。
(6)アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビンに結合する糖鎖1本あたり平均1個以上3個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、(1)〜(5)のいずれか1項に記載の方法。
(7)アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビンに結合する糖鎖1本あたり平均1.5個以上2.5個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、(1)〜(5)のいずれか1項に記載の方法。
(8)アンチトロンビンに結合している糖鎖が3本または4本である、(6)または(7)に記載の方法。
(9)アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビン1分子あたり平均3個以上12個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、(1)〜(6)のいずれか1項に記載の方法。
(10)アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビン1分子あたり平均6個以上8個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、(1)〜(6)のいずれか1項に記載の方法。
(11)(1)〜(10)のいずれか1項に記載の方法で製造されるアンチトロンビン組成物。
アンチトロンビン含有水溶液の取得(1)
アンチトロンビンを生産するCHO細胞株(FERM BP−8472)をEX−CELLTM 302培地(エスエーエフシーバイオサイエンス社製)に、メトトレキセート(シグマ・アルドリッチ・ファインケミカル社製)500nmol/LおよびL−グルタミン(和光純薬工業社製)0.875g/Lを添加し、浸透圧を330mOsm/kg、pH7.1に調整した培地中、37℃にて2週間培養した。得られた培養液(20L)をデプスフィルター(キュノ社製、ゼータプラスマキシマイザー)に透過させることによりアンチトロンビン含有水溶液1を得た。
アンチトロンビンを生産するCHO細胞株(FERM BP−8472)をEX−CELLTM 302培地(エスエーエフシーバイオサイエンス社製、添付説明書に記載されている濃度の1.3倍の濃度に調製)に、メトトレキセート(シグマ・アルドリッチ・ファインケミカル社製)500nmol/LおよびL−グルタミン(和光純薬工業社製)1.75g/Lを添加し、浸透圧を330mOsm/kg、pH7.1に調整した培地中、37℃にて2週間培養した。得られた培養液をデプスフィルター(キュノ社製、ゼータプラスマキシマイザー)に透過させることによりアンチトロンビン含有水溶液2を得た。
アンチトロンビン含有水溶液1(6.2L)を、緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)で平衡化したヘパリンカラム(GEヘルスケア社製 Heparin Sepharose 6 Fast Flow、カラム体積524mL、担体1mL当たりのアンチトロンビン組成物の負荷量4mg)に通過させ、アンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4、10カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)と緩衝液(2.5mol/L塩化ナトリウム、50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)を用いた直線塩濃度勾配(10カラム体積)により溶出させ、アンチトロンビン含有水溶液3(3.68L)を得た。
アンチトロンビン含有水溶液1(36.1L)を、限外ろ過膜(ミリポア社製、バイオマックス30)で1.65Lまで濃縮した後、精製水を6.6L加えた。これを緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で平衡化した陰イオン交換カラム(GEヘルスケア社製、Q Sepharose Fast Flow、カラム体積76mL)を通過させることによりアンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0、5カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(160mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0、5カラム体積)で溶出し、アンチトロンビン含有水溶液4(505mL)を得た。
アンチトロンビン含有水溶液1(1000mL)を、限外ろ過膜(ミリポア社製、バイオマックス30)を用いて200mLまで濃縮した。このうち150mLの濃縮液に精製水を200mL添加した。このうち310mLを緩衝液(50mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で平衡化された陰イオン交換クロマトカラム(GEヘルスケア社製、Q Sepharose Fast Flow、カラム体積50mL)に通塔することにより、アンチトロンビンをカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(50mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で洗浄した後、緩衝液(220mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で溶出し、アンチトロンビン含有組成物5を得た。
アンチトロンビン含有水溶液1を限外ろ過膜(ミリポア社製、バイオマックス30)を用いて6倍濃縮した。シアル酸溶液(309.27g/L、pH7.0および緩衝液(TritonX−100およびリン酸トリブチルを含有する20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)を添加した後、さらに精製水を添加して導電率を4.8mS/cmに調整した。この溶液を緩衝液(50mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で平衡化された陰イオン交換クロマトカラム(GEヘルスケア社製、Q Sepharose Fast Flow)に通塔することにより、アンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(50mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で洗浄した後、緩衝液(180mmol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で溶出し、アンチトロンビン含有水溶液6を得た。
アンチトロンビン含有水溶液1(650mL)を、限外ろ過膜(ミリポア社製、バイオマックス10)を用いて33mLまで濃縮した。このうち15.5mLに緩衝液(150mmol/L塩化ナトリウム、50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)を23.2mL添加し、さらに緩衝液(3mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)を38.7mL添加した。遠心分離(15000rpm、15分間)し、上清を回収した。このうち74mLを緩衝液(1.5mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)で平衡化された疎水カラム[GEヘルスケア社製、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow(high−sub)、カラム体積4mL]に通塔することにより、アンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(1.5mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)で洗浄した後、緩衝液(1.5mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)と緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)を用い直線塩濃度勾配により溶出し、アンチトロンビン含有水溶液7を得た。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィによるアンチトロンビン組成物の調製1
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液4(アンチトロンビン組成物量:16.0mg)に緩衝液(200mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH5.5)および緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を添加し、pH6.0、導電率6.1mS/cmに調整した。これを緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)で平衡化したセルファインサルフェイトmカラム(チッソ社製、カラム体積4mL)を通過させることによりアンチトロンビンを吸着させた。緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0、5カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)と緩衝液(1mol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を用いた直線塩濃度勾配(10カラム体積)によりアンチトロンビン組成物を溶出させた。溶出液は、溶出開始時より2mLずつ均等に分画した。各フラクションのアンチトロンビン組成物量は逆相HPLC法[J. Chromatography B, 662, 209(1994)]、α体含有率はハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806)]、シアル酸結合数は蛍光HPLC法[Anal. Biochem., 164,138,(1987)]を用いて測定した。その結果を表1に示した。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィによるアンチトロンビン組成物の調製2
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液4[アンチトロンビン組成物量:196mg(表4に示す精製例1)または117mg(表4に示す精製例2)]に、緩衝液(200mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH5.5)と緩衝液(1mol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を添加し、pHおよび導電率を調整した。緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0、塩化ナトリウムを加えて導電率を調整)で平衡化したセルファインサルフェイトmカラム(チッソ社製、カラム体積20mL)に接触させ、非吸着画分を回収することにより、アンチトロンビン組成物を得た。非吸着画分のアンチトロンビン組成物量は逆相HPLC法[J.Chromatography B, 662, 209 (1994)]、α体含有率はハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]、シアル酸結合数は蛍光HPLC法[Anal. Biochem., 164, 138 (1987)]を用いて測定した。
ヘパリンクロマトグラフィによるアンチトロンビン組成物の調製(1)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液1(アンチトロンビン組成物量:17.7mg)を緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)で平衡化したヘパリンカラム(GEヘルスケア社製、Heparin Sepharose 6 Fast Flow、カラム体積4mL)を通過させることにより、アンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4、10カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)と緩衝液(2.5mol/L塩化ナトリウム、50mmol/Lトリス、14mmol/Lクエン酸ナトリウム緩衝液、pH7.4)を用いた直線塩濃度勾配(10カラム体積)によりアンチトロンビン組成物を溶出した。溶出液は、溶出開始時より2mLずつ均等に分画した。各フラクションのアンチトロンビン組成物量は逆相HPLC法[J. Chromatography B, 662, 209 (1994)]、α体含有率はハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]、シアル酸結合数は蛍光HPLC法[Anal. Biochem., 164,138 (1987)]を用いて測定した。その結果を表5に示した。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィと疎水クロマトグラフィとの組合せによる高純度のアンチトロンビン組成物の調製(1)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液4(アンチトロンビン組成物量:16mg)より、実施例2に示す方法と同様にしてアンチトロンビン組成物を調製した。セルファインサルフェイトクロマトグラフィにおいて得られた溶出フラクション11〜17を混合し、緩衝液(3mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.7)を添加し、硫酸アンモニウムの終濃度が2mol/Lとなるように調整した。これを緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)で平衡化した疎水カラム[GEヘルスケア社製、Phenyl Sepharose(low−sub)、カラム体積4mL]に通過させることでアンチトロンビンをカラムに吸着させた。緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8、3カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)と緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)を用い、直線塩濃度勾配(10カラム体積)により溶出し、アンチトロンビン組成物を得た。該組成物に含まれる不活性体含有率を疎水HPLC法[Protein Expression and Purification, 21, 149 (2001)]、会合体含有率をゲルろ過HPLC法により測定した。また、α体含有率をハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]、シアル酸結合数を蛍光HPLC法[Anal. Biochem., 164, 138 (1987)]を用いて測定した。その結果を表8に示した。表8に示したように、セルファインサルフェイトクロマトグラフィの吸着画分から得られたアンチトロンビン組成物に、さらに疎水クロマトグラフィを行うことにより、α体含有率およびシアル酸結合数を維持したまま、純度を向上させたアンチトロンビン組成物が調製された。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィと疎水クロマトグラフィとの組合せによる高純度のアンチトロンビン組成物の調製(2)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液4(アンチトロンビン組成物量:180mg)より、実施例3に示す方法(カラム体積:20mL、担体1mL当たりのアンチトロンビン負荷量:9mg、アンチトロンビン組成物の導電率:19.7mS/cm)と同様にして非吸着画分よりアンチトロンビン組成物を調製した。該画分に緩衝液(3mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.7)を添加し、終濃度2mol/L硫酸アンモニウム溶液に調製した。これを緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)で平衡化した疎水カラム[GEヘルスケア社製、Phenyl Sepharose(low−sub)、カラム体積4mL]に通過させることによりアンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8、3カラム体積)で洗浄した後、緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)と緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.8)を用いた直線塩濃度勾配(10カラム体積)により溶出し、アンチトロンビン組成物を得た。該組成物に含まれる不活性体含有率を疎水HPLC法[Protein Expression and Purification, 21, 149 (2001)]、会合体含有率をゲルろ過HPLC法により測定した。また、α体含有率をハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]、シアル酸結合数を蛍光HPLC法[Anal. Biochem., 164, 138 (1987)]を用いて測定した。その結果を表9に示した。表9に示したように、セルファインサルフェイトクロマトグラフィの非吸着画分からで得られたアンチトロンビン組成物に、さらに疎水クロマトグラフィを行うことにより、α体含有率ならびにシアル酸結合数を維持したまま、純度を向上させたアンチトロンビン組成物が調製された。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィと疎水クロマトグラフィとの組合せによる高純度のアンチトロンビン組成物の調製(3)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液5(アンチトロンビン組成物量:76.0mg)に緩衝液(200mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH5.5)および緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を添加し、pH6.0、導電率7mS/cm以下に調整した。本溶液を緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)で平衡化されたセルファインサルフェイトmカラム(チッソ社製、カラム体積19mL)に通過させることにより、アンチトロンビンをカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)で洗浄した後、緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)と緩衝液(1mol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を用いた直線塩濃度勾配により、アンチトロンビン組成物を溶出させた。溶出液は0.5カラム体積(9.5mL)ずつ均等に分画した。分画液5mLに対し1mLの割合で緩衝液(100g/Lグリシン緩衝液、pH9.0)を添加した。各分画液のアンチトロンビン組成物量は逆相HPLC法[J. Chromatography B, 662, 209 (1994)]、α体およびβ体含有率はハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]を用いて測定した。α体含量が90%以上となる画分を統合し、アンチトロンビン組成物Aとした。またβ体含量が85%以上となる画分を統合し、アンチトロンビン組成物Bとした。
ヘパリンクロマトグラフィによるアンチトロンビン組成物の調製(2)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液5(アンチトロンビン組成物量:74.0mg)に緩衝液(200mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH5.5)および緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を添加し、pH6.0、導電率7mS/cm以下に調整した。本溶液を緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)で平衡化されたヘパリンカラム(GEヘルスケア社製、Heparin Sepharose 6 Fast Flow、カラム体積18.5mL)に通過させることにより、アンチトロンビンをカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)で洗浄した後、緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)と緩衝液(2.5mol/L塩化ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH6.0)を用いた直線塩濃度勾配により、アンチトロンビン組成物を溶出させた。溶出液は0.5カラム体積(9.25mL)ずつ均等に分画した。分画液5mLに対し1mLの割合で緩衝液(100g/Lグリシン緩衝液、pH9.0)を添加した。各分画液のアンチトロンビン組成物量は逆相HPLC法[J. Chromatography B, 662, 209 (1994)]、α体およびβ体含有率はハイドロキシアパタイトHPLC法[Protein Expression and Purification, 28, 196 (2003)、特表2003−520806]を用いて測定した。α体含量が90%以上となる画分を統合し、アンチトロンビン組成物Dとした。またβ体含量が85%以上となる画分を統合し、アンチトロンビン組成物Eとした。
セルファインサルフェイトクロマトグラフィと疎水クロマトグラフィとの組合せによる高純度のアンチトロンビン組成物の調製(4)
実施例1で得られたアンチトロンビン含有水溶液5(アンチトロンビン組成物量:226mg)に緩衝液(1.5mol/Lクエン酸ナトリウム、20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)を添加し、終濃度1mol/Lのクエン酸ナトリウムを含む組成物に調製した。本溶液を緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で平衡化された疎水カラム[GEヘルスケア社製、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow(low−sub)、カラム体積23.7mL]に通過させることにより、アンチトロンビン組成物をカラムに吸着させた。カラムを緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)で洗浄した後、緩衝液(2mol/L硫酸アンモニウム、50mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)と緩衝液(20mmol/Lリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.0)を用いた直線塩濃度勾配により溶出させ、アンチトロンビン組成物を得た。該組成物に含まれるアンチトロンビン組成物濃度をUV法により測定した。
実施例6で示したアンチトロンビン含有水溶液5からセルファインサルフェイトクロマトグラフィ−疎水クロマトグラフィの順で調製されたアンチトロンビン組成物C、およびアンチトロンビン含有水溶液5から疎水クロマトグラフィ−セルファインサルフェイトクロマトグラフィの順で調製されたアンチトロンビン組成物Gの結果を表13に示した。表13に示したように、疎水クロマトグラフィ−セルファインサルフェイトクロマトグラフィの順で調製したアンチトロンビン組成物Gの回収率、α体含量、シアル酸結合数および不活性体含量は、実施例6で示したセルファインサルフェイトクロマトグラフィ−疎水クロマトグラフィの順で調製したアンチトロンビン組成物Cと同程度であった。多量体含量はアンチトロンビン組成物Cの方が低かった。
本出願は、2007年4月2日出願の日本特許出願(特願2007−096179)に基づくものであり、その内容はここに参照として取り込まれる。ここに引用されるすべての参照は全体として取り込まれる。
Claims (11)
- アンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
- アンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、該担体に吸着したアンチトロンビン組成物を溶出液の導電率を上げることにより溶出させ、該溶出液より所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
- 導電率を調整したアンチトロンビン含有水溶液をセルファインサルフェイトクロマトグラフィ担体に接触させ、該担体への非吸着画分より所望のα体またはβ体含有率を有するアンチトロンビン組成物を調製することを特徴とする、アンチトロンビン組成物の製造方法。
- さらに陰イオン交換クロマトグラフィおよび/または疎水クロマトグラフィを行うことを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜3に記載の調製を行った後に、疎水クロマトグラフィを行う、請求項4に記載の方法。
- アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビンに結合する糖鎖1本あたり平均1個以上3個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビンに結合する糖鎖1本あたり平均1.5個以上2.5個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- アンチトロンビンに結合している糖鎖が3本または4本である、請求項6または7に記載の方法。
- アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビン1分子あたり平均3個以上12個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- アンチトロンビン組成物が、糖鎖を有するアンチトロンビンからなる組成物であって、該組成物中に含まれるアンチトロンビン1分子あたり平均6個以上8個以下のシアル酸分子を有するアンチトロンビン組成物である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法で製造されるアンチトロンビン組成物。
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