JPWO2008047525A1 - マイクロチップ内での試薬混合方法及びマイクロチップ検査システム - Google Patents

Abstract

本発明は、マイクロチップ上の微細流路において、複数の試薬の混合を十分行うことのできるマイクロチップ内での試薬混合方法、マイクロチップ検査システムを提供する。この試薬混合方法は、複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、複数の試薬が混合流路を通過するまでに、少なくとも１回は複数の試薬の送液を停止させる。

Description

本発明は、マイクロチップ内での試薬混合方法及びマイクロチップ検査システムに関する。

近年、マイクロマシン技術および超微細加工技術を駆使することにより、従来の試料調製、化学分析、化学合成などを行うための装置、手段（例えばポンプ、バルブ、流路、センサーなど）を微細化して１チップ上に集積化したシステムが注目されている。これは、μ−ＴＡＳ（Ｍｉｃｒｏ Ｔｏｔａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ）とも呼ばれ、マイクロチップといわれる部材に、試薬液と試料液（たとえば、検査を受ける被験者の尿、唾液、血液、ＤＮＡ処理した抽出溶液など）を合流させ、その反応を検出することにより検体の特性を調べる方法である。

マイクロチップは、樹脂材料やガラス材料からなる基体に、フォトリソプロセス（パターン像を薬品によってエッチングして溝を作成する方法）やレーザ光を利用して溝加工を行うことで作製される。検体液や試薬液を流すことができる微細な流路や試薬を蓄える液溜部等が設けられており、さまざまなパターンが提案されている。

さらにこのμ−ＴＡＳは、医療検査、診断分野、環境測定分野、農産製造分野でその応用が期待されている。例えば、遺伝子検査では、煩雑な工程、熟練した手技、機器類の操作が必要とされる。このような場合に、自動化、高速化および簡便化されたμ−ＴＡＳを用いることによって、コスト、必要試量、所要時間のみならず、時間および場所を選ばない分析が可能となり、その恩恵は多大と言える。

各種の分析、検査ではこれらのマイクロチップにおける分析の定量性、解析の精度、経済性などが重要視される。そのためにはシンプルな構成で、高い信頼性の送液システムを確立することが課題である。特に２つの液体をより均一な混合比で混合し、信頼性に優れたマイクロチップが求められている。

例えば、特許文献１には、微小領域で効率よく拡散混合を行うことができる液体混合機構として、交差部又は合流部で交差又は合流する微小な第１及び第２の流路を備え、第１の流路を流れる第１の液体と、第２の流路を流れる第２の液体とが交差部又は合流部で交差又は合流して混合する液体混合機構において、第１及び第２の液体の少なくとも一方が、交差部又は合流部に、脈動しながら送液される液体混合機構について記載されている。
特開２００３−２２０３２２号公報

しかし、特許文献１に記載されている混合方法は、脈動混合により液を交互に送っていく方法であり、混合流路の幅数が１０μｍ〜１００μｍの領域では、脈動効果が現れず正確に混合されないという問題がある。

本発明の目的は、マイクロチップ上の微細流路において複数の試薬の混合を十分に行うことのできるマイクロチップ内での試薬混合方法及びマイクロチップ検査システムを提供することである。

上記目的は、下記構成により達成できる。
１．複数の試薬を合流させて混合流路に送液し、混合流路内で複数の試薬を混合するマイクロチップ内での試薬混合方法において、
前記複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、前記複数の試薬が混合流路を通過するまでに、少なくとも１回は前記複数の試薬の送液を停止させることを特徴とするマイクロチップ内での試薬混合方法。
２．前記複数の試薬の前記混合流路内での１回の送液量は、前記混合流路の容積以下であることを特徴とする１に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
３．前記複数の試薬の送液を停止させている時間は、１〜１００秒であることを特徴とする１または２に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
４．前記混合流路内での試薬の送液及び停止を繰り返すことを特徴とする１乃至３の何れかに記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
５．前記混合流路内での試薬の送液を、最初１回停止させた後、送液速度を低減して送液を再開し、その後は送液を停止させないことを特徴とする１乃至３の何れかに記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
６．複数の試薬が合流し混合される混合流路を有するマイクロチップと、
マイクロチップ内の前記複数の試薬を混合流路に送液するマイクロポンプと、
前記複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、前記複数の試薬が混合流路を通過するまでに少なくとも１回は前記複数の試薬の送液を停止させるように前記マイクロポンプを制御する制御部と、
を有することを特徴とするマイクロチップ検査システム。

本発明によれば、複数の試薬の送液を停止している間に混合流路内で複数の試薬が拡散することになり、混合流路内で試薬を均一に混合させることが可能となる。また、送液と停止を繰り返し行うことで、流路の長さを短くすることができ、それに伴いチップの面積を小さくできる。

本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置の外観図である。 本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置の構成図である。 本実施形態に係るマイクロチップの構成図である。 本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置の制御構成の要部を示す図である。 第１の実施形態に係る制御のフローチャートである。 第２の実施形態に係る制御のフローチャートである。 実施例１の動作を示すタイムチャートである。 実施例２の動作を示すタイムチャートである。

符号の説明

１ マイクロチップ
５ マイクロポンプ
８０ 検査装置
１３５ 混合流路
１３９ａ 反応部
１４１ 合流部
ＲＢ 撥水バルブ

本発明の実施の形態を説明する。なお、本発明を図示の実施の形態に基づいて説明するが、本発明は該実施の形態に限らない。また、以下の、本発明の実施の形態における断定的な説明は、ベストモードを示すものであって、本発明の用語の意義や技術的範囲を限定するものではない。
（装置構成）
図１は、本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置８０の外観図である。検査装置８０は、マイクロチップ１に予め注入された検体と試薬とを自動的に反応させ、反応結果を自動的に出力する装置である。

検査装置８０の筐体８２には、マイクロチップ１を装置内部に挿入するための挿入口８３、表示部８４、メモリカードスロット８５、プリント出力口８６、操作パネル８７、外部入出力端子８８が設けられている。

検査担当者は、図１の矢印方向にマイクロチップ１を挿入し、操作パネル８７を操作して検査を開始させる。検査装置８０の内部では、マイクロチップ１内の反応の検査が自動的に行われ、検査が終了すると表示部８４に結果が表示される。検査結果は操作パネル８７の操作により、プリント出力口８６よりプリントを出力したり、メモリカードスロット８５に挿入されたメモリカードに記憶することができる。また、外部入出力端子８８から例えばＬＡＮケーブルを使って、パソコンなどにデータを保存することができる。検査終了後、検査担当者はマイクロチップ１を挿入口８３から取り出す。

図２は、本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置８０の構成図である。図２においては、マイクロチップが図１に示す挿入口８３から挿入され、セットが完了している状態を示している。

検査装置８０は、マイクロチップ１に予め注入された検体及び試薬を送液するための駆動液１１を貯留する駆動液タンク１０、マイクロチップ１に駆動液１１を供給するためのマイクロポンプ５、マイクロポンプ５とマイクロチップ１とを駆動液１１が漏れないように接続するポンプ接続部６、マイクロチップ１の必要部分を温調する温度調節ユニット３、マイクロチップ１をずれないように温度調節ユニット３及びポンプ接続部６に密着させるためのチップ押圧板２、チップ押圧板２を昇降させるための押圧板駆動部２１、マイクロチップ１をマイクロポンプ５に対して精度良く位置決めする規制部材２２、マイクロチップ１内の検体と試薬との反応状態等を検出する光検出部４、等を備えている。

チップ押圧板２は、初期状態においては、図２に示す位置より上方に退避している。これにより、マイクロチップ１は矢印Ｘ方向に挿抜可能であり、検査担当者は挿入口８３（図１参照）から規制部材２２に当接するまでマイクロチップ１を挿入する。その後、チップ押圧板２は、押圧板駆動部２１により下降してマイクロチップ１に当接し、マイクロチップ１の下面が温度調節ユニット３及びポンプ接続部６に密着される。

温度調節ユニット３は、マイクロチップ１と対向する面にペルチェ素子３１及びヒータ３２を備え、マイクロチップ１が検査装置８０にセットされたときに、ペルチェ素子３１及びヒータ３２がマイクロチップ１に密着するようになっている。試薬が収容されている部分をペルチェ素子３１で冷却して試薬が変性しないようにしたり、検体と試薬とが反応する部分をヒータ３２で加熱して反応を促進させたりする。

光検出部４は、発光部４ａ及び受光部４ｂから構成され、発光部４ａからの光をマイクロチップ１に照射し、マイクロチップ１を透過した光を受光部４ｂにより検出する。受光部４ｂはチップ押圧板２の内部に一体的に設けられている。発光部４ａ及び受光部４ｂは、後述のマイクロチップ１の被検出部１４８ａ，ｂのそれぞれに対向するように複数設けられている。

マイクロポンプ５は、ポンプ室５２、ポンプ室５２の容積を変化させる圧電素子５１、ポンプ室５２のマイクロチップ１側に位置する第１絞り流路５３、ポンプ室の駆動液タンク１０側に位置する第２絞り流路５４、等から構成されている。第１絞り流路５３及び第２絞り流路５４は絞られた狭い流路となっており、また、第１絞り流路５３は第２絞り流路５４よりも長い流路となっている。

駆動液１１を順方向（マイクロチップ１に向かう方向）に送液する場合には、まず、ポンプ室５２の容積を急激に減少させるように圧電素子５１を駆動する。そうすると、短い絞り流路である第２絞り流路５４において乱流が発生し、第２絞り流路５４における流路抵抗が長い絞り流路である第１絞り流路５３に比べて相対的に大きくなる。これにより、ポンプ室５２内の駆動液１１は、第１絞り流路５３の方に支配的に押し出され送液される。次に、ポンプ室５２の容積を緩やかに増加させるように圧電素子５１を駆動する。そうすると、ポンプ室５２内の容積増加に伴って駆動液１１が第１絞り流路５３及び第２絞り流路５４から流れ込む。このとき、第２絞り流路５４の方が第１絞り流路５３と比べて長さが短いので、第２絞り流路５４の方が第１絞り流路５３と比べて流路抵抗が小さくなり、ポンプ室５２内には第２絞り流路５４の方から支配的に駆動液１１が流入する。以上の動作を圧電素子５１が繰り返すことにより、駆動液１１が順方向に送液されることになる。

一方、駆動液１１を逆方向（駆動液タンク１０に向かう方向）に送液する場合には、まず、ポンプ室５２の容積を緩やかに減少させるように圧電素子５１を駆動する。そうすると、第２絞り流路５４の方が第１絞り流路５３と比べて長さが短いので、第２絞り流路５４の方が第１絞り流路５３と比べて流路抵抗が小さくなる。これにより、ポンプ室５２内の駆動液１１は、第２絞り流路５４の方に支配的に押し出され送液される。次に、ポンプ室５２の容積を急激に増加させるように圧電素子５１を駆動する。そうすると、ポンプ室５２内の容積増加に伴って駆動液１１が第１絞り流路５３及び第２絞り流路５４から流れ込む。このとき、短い絞り流路である第２絞り流路５４において乱流が発生し、第２絞り流路５４における流路抵抗が長い絞り流路である第１絞り流路５３に比べて相対的に大きくなる。これにより、ポンプ室５２内には第１絞り流路５３の方から支配的に駆動液１１が流入する。以上の動作を圧電素子５１が繰り返すことにより、駆動液１１が逆方向に送液されることになる。

（マイクロチップの構成）
図３は、本実施形態に係るマイクロチップ１の構成図である。一例の構成を示すものであり、これに限定されない。

マイクロチップ１には、液状の試薬と同じく液状の試料（検体）をマイクロチップ１上で混合・反応させるための微細流路及び流路エレメントが配設されている。これらの微細流路および流路エレメントによってマイクロチップ１内で行われる処理の一例について説明する。また、マイクロチップ１は、溝形成基板と、溝形成基板を覆う被覆基板から構成されているが、図３は被覆基板が取り外された状態で流路エレメントとその接合状態を模式的に示している。更に、図３において矢印は、検査装置８０にマイクロチップ１を挿入する挿入方向を示している。

図中１４４ａ〜１４４ｈは、試薬を注入する試薬入口部であり、マイクロチップ１の一方の面から外部へ解放された開口となっている。１３３ａ〜１３３ｉは注入された試薬を収容する試薬収容部である。試薬収容部の上流側には、マイクロチップ１の一方の面から外部へ解放された開口１３２ａ〜１３２ｐが設けられている。これらの開口１３２ａ〜１３２ｐは、ポンプ接続部６を介してマイクロチップ１をマイクロポンプ５に重ね合わせて接続した際に、マイクロポンプ５の接続面に設けられた流路開口と位置合わせされてマイクロポンプ５に連通される。なお、試薬収容部１３３ａ〜１３３ｉと開口１３２ａ〜１３２ｐとの間の流路には、駆動液と試薬との間の空気を抜く空気抜き用流路１４６が設けられている。

試薬収容部１３３ａ〜１３３ｃに収容された試薬は、開口１３２ａ〜１３２ｃに連通するそれぞれ別途のマイクロポンプ５によって、試薬送出流路１４３ａ〜１４３ｃを経由して合流部１４１ａへ流れ込む。合流部１４１ａに流れ込んだ３種類の試薬は、その後２つに分割され、試薬保管部１４５ａ、１４５ｂに保管される。

次に、試料液の流路について説明する。１４７ａ、１４７ｂは試料を注入する試料入口部であり、マイクロチップ１の一方の面から外部へ解放された開口となっており、基本的には試薬入口部と同じ構成となっている。

試料入口部１４７ａから注入され試料収容部１３６ａに収容された試料は、１３２ｇに連通するマイクロポンプ５によって、試料送出流路１３７ａに送り出される。また、開口１４４ｄからは、開口１３２ｆに連通した別途のマイクロポンプ５によって、試薬収容部１３３ｄに収容された試薬が試薬送出流路１４３ｄに送り出される。この結果、試薬保管部１４５ａに保管された試薬と、試料収容部１３６ａに収容された試料と、試薬収容部１３３ｄに収容された試薬との３種類の試薬又は試料が合流部１４１ｂへ流れ込む。それぞれの試薬又は試料が流れ込む合流部１４１ｂの直前には、撥水バルブＲＢが設けられている。撥水バルブＲＢとは、疎水性で、幅が狭まった流路抵抗の高い細流路であり、液体を所定の圧力以下で送液した場合には、細流路の高い流路抵抗によって液の流れをその場で停止させることができるものである。

また、試料入口部１４７ｂからも試料が注入されるが、試料入口部１４７ａから注入される場合と試料及び試薬の流れは基本的に同様であるので、説明は省略する。以降の説明においても、試料入口部１４７ｂから注入される試料に関与する図３における左半分の部分の流路は、右半分の部分の流路と対称であるので、当該左半分の部分の流路の説明は省略する。

ここで試料入口部１４７ｂから注入された試料は、試験回数を増やし検出精度を高めるために１４７ａから注入される試料と同一でも良いし、または比較するための他の試料であっても良い。

合流部１４１ｂに合流した試薬と試料との混合液は、混合流路１３５ａで混合され、マイクロチップ１の反対側の面に設けられた反応部１３９ａへ送出される。反応部１３９ａに送出された混合液は、マイクロチップ１に当接されるヒータ３２からの加熱によって反応が促進される。

反応後の液は、開口１３２ｌ及び１３２ｍに連通した別途のマイクロポンプ５によって送液される試薬収容部１３３ｈ及び１３３ｉからの試薬と合流し、被検出部１４８ａへ送液される。また、開口１３２ｎ及び１３２ｐに連通するそれぞれ別途のマイクロポンプ５によって、試薬収容部１３３ｊ及び１３３ｋに予め収容された各試薬（例えば混合試薬と試料との反応を停止させる液、検出対象の物質に対して標識などの必要な処理を行うための液など）が所定のタイミングで被検出部１４８ａへ送液される。その後、光検出部４により被検出部１４８ａの検出が行われる。検出後、開口１４４ｈから洗浄液等が注入され、被検出部１４８ａの液体は、廃液部６０に送出される。

（制御構成）
図４は、本実施形態に係るマイクロチップを用いる検査装置の制御構成の要部を示す図である。プログラムに従って検査装置８０の制御を実行するＣＰＵ９０を中心に、バス９１により、ＲＯＭ９２、ＲＡＭ９３、不揮発性メモリ９４、光検出部４、マイクロポンプ５、ペルチェ素子３１、ヒータ３２、操作パネル８７、表示部８４等が相互に接続されている。なお、本発明の制御に直接関係しない装置構成要素については省略している。

ＲＯＭ９２は、ＣＰＵ９０によって実行される各種制御プログラムやデータ等を記憶する。

ＲＡＭ９３は、ＣＰＵ９０によってワークエリアとして利用され、ＣＰＵ９０が制御を実行する際に必要なプログラムやデータを一時的に記憶する。不揮発性メモリ９４は、光検出部４による検出結果等を記憶する。

他の構成要素については、上述したので説明を省略する。

（制御フロー）
次に、本発明に係る複数の試薬を混合流路１３５ａ内にて均一に混合する試薬混合方法についてフローチャートを用いて説明する。

図５は、第１の実施形態に係る制御のフローチャートである。本制御は、ＲＯＭ９２に記憶されている制御プログラムに基づいてＣＰＵ９０が処理を実行することにより行われる。尚、前提として、合流部１４１ｂの直前に設けられた撥水バルブＲＢの手前まで各試薬及び試料が送液されており、撥水バルブＲＢにより送液が止められているものとする。

まず、ＣＰＵ９０は、撥水バルブＲＢを通過して送液できるような圧力で、開口１３２ａ〜ｃ、ｆ、ｇに接続されているマイクロポンプ５を駆動させる。（ステップＳ１）。これにより、合流部１４１ｂに各試薬及び試料が流れ込み、混合流路１３５ａに向けて送液される。

次に、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ１経過したか否かを判定する（ステップＳ２）。所定時間Ｔ１は、それぞれ別途のマイクロポンプ５によって押し出される合計の液量が、混合流路１３５ａの容積より少なくなるように設定した時間である。

所定時間Ｔ１を経過したと判断すると（ステップＳ２；ＹＥＳ）、ＣＰＵ９０は、マイクロポンプの駆動を停止する（ステップＳ３）。所定時間Ｔ１を経過していないと判断すると（ステップＳ２；ＮＯ）、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ１を経過するまで待機する。

次に、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ２が経過したか否かを判断する（ステップＳ４）。所定時間Ｔ２は、混合流路内で各試薬及び試料が分子拡散により十分に混合される時間に設定した時間である。混合流路の幅や長さにも依るが、１〜２０秒が好ましい。１秒未満であるとあまり混合されない。２０秒を超えると検査時間が長くなってしまう。

所定時間Ｔ２が経過したと判断すると（ステップＳ４；ＹＥＳ）、ＣＰＵ９０は、送液及び停止の繰り返し回数が所定回数になったか否かを判断する（ステップＳ５）。所定時間Ｔ２を経過していないと判断すると（ステップＳ４；ＮＯ）、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ２を経過するまで待機する。

繰り返し回数が所定回数になっていないと判断すると（ステップＳ５；ＮＯ）、再びマイクロポンプの駆動を開始（ステップＳ１に戻る）し、ステップＳ１〜ステップＳ４を繰り返し行い、繰り返し回数が所定回数になるまで継続する。

繰り返し回数が所定回数になったと判断すると（ステップＳ５；ＹＥＳ）、フローを終了する。

本実施形態によれば、合流部１４１ｂから混合流路内に流れ込んだ各試薬及び試料が、送液が停止している間に分子拡散により混合される。停止を繰り返すことにより、より混合されることになる。これにより、各試薬及び試料が十分混合されないまま混合流路を通過し、反応部１３９ａに到達してしまうことが抑制される。また、送液と停止を繰り返し行うことで、流路の長さを短くすることができる。

図６は、第２の実施の形態に係る制御のフローチャートである。図６において、ステップＳ１からステップＳ４までは図５に示す第１の実施の形態と同じ制御を行う。

ステップＳ６においてＣＰＵ９０は、マイクロポンプ５の送液量を低減させてマイクロポンプ５を駆動する。これは、以下の理由によるものである。

ステップＳ１において、最初マイクロポンプ５を駆動する際には、撥水バルブＲＢを通過させて送液を行うため、送液量を多くして圧力を高める必要がある。しかしながら、このままの送液量の状態で送液した場合には、各試薬及び各試料が短時間のうちに混合流路１３５ａを通過してしまい、十分な混合ができないまま反応部１３９ａに到達してしまう。このため、撥水バルブＲＢを通過させた後は、長めの流路をゆっくりと送液することにより各試薬及び試料が混合流路に滞在する時間を長くし、十分に混合されるようにする。撥水バルブＲＢは、一度濡れた後は送液を堰き止めることができなくなるので、送液量を少なくしてゆっくりと送液することが可能となる。

次に、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ３が経過したか否かを判断する（ステップＳ７）。

所定時間Ｔ３が経過したと判断すると（ステップＳ７：ＹＥＳ）、ＣＰＵ９０は、マイクロポンプ５の駆動を停止する（ステップＳ８）。所定時間Ｔ３が経過していないと判断すると（ステップＳ７；ＮＯ）、ＣＰＵ９０は、所定時間Ｔ３が経過するまで待機する。

本実施形態によれば、合流部１４１ｂに各試薬及び試料を流入させた後は、ゆっくりと送液するようにしたので、各試薬及び試料が混合流路１３５ａを通過するまでの間に十分に混合される。これにより、各試薬が十分に混合されないまま混合流路を通過し、反応部１３９ａに到達してしまうことが抑制される。

（実施例１）
本実施の形態１に対応するものである。

混合流路１３５ａの幅が１００μｍ、長さが５５ｍｍ、深さが２６０μｍのマイクロチップを用いた。このときの混合流路の容積Ａは１．４３μｌ（リッター）であった。

図７に、本実施例の送液制御のタイムチャートを示す。

まず、混合流路１３５ａ内での流速が０．９２μｌ／秒となるように、各マイクロポンプ５の駆動を調整し、各試薬及び試料を１．５秒間送液し、その後各マイクロポンプ５の駆動を１０秒間停止させた。この間に送液された容量Ｂは、１．３８μｌであった。

すなわち、Ａ≧Ｂであり、各試薬及び試料は混合流路を素通りすることなく、混合流路１３５ａ内で必ず停止することになる。

次に、再び０．９２μｌ／秒の流速で１．５秒間送液し、送液及び停止を計４回繰り返した。

（実施例２）
本実施の形態２に対応するものである。

図８に、本実施例の送液制御のタイムチャートを示す。

混合流路１３５ａの構成は、実施の形態１のものと同じである。最初の送液・停止も実施の形態１と同様に流速０．９２μｌ／秒で１．５秒間送液した後、１０秒間送液を一旦停止させた。

その後は、０．０８６μｌ／秒の流速で６０秒間流し、混合された液を反応部１３９ａに充填した。

（結果確認）
確認手段として、色素溶液を試料入口部１４７ａから、純粋を試薬入口部１４４ｄから注入し、反応部１３９ａの混合状態を目視にて確認した。その結果、実施例１及び２の何れにおいても、試薬の混合が充分になされていることが確認された。

さらに比較例として、同じく色素溶液と純水を用いて、一旦停止しないまま、送液を行ったところ反応部１３９ａにおいて、液が２層流のまま通過するのが観察された。

以上より、複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、複数の試薬が混合流路を通過するまでに、少なくとも１回は複数の試薬の送液を停止させることにより、試薬の混合が充分に行うことができる。

Claims (6)

1. 複数の試薬を合流させて混合流路に送液し、混合流路内で複数の試薬を混合するマイクロチップ内での試薬混合方法において、
   前記複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、前記複数の試薬が混合流路を通過するまでに、少なくとも１回は前記複数の試薬の送液を停止させることを特徴とするマイクロチップ内での試薬混合方法。
2. 前記複数の試薬の前記混合流路内での１回の送液量は、前記混合流路の容積以下であることを特徴とする請求の範囲第１項に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
3. 前記複数の試薬の送液を停止させている時間は、１〜１００秒であることを特徴とする請求の範囲第１項または第２項に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
4. 前記混合流路内での試薬の送液及び停止を繰り返すことを特徴とする請求の範囲第１項乃至第３項の何れか１項に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
5. 前記混合流路内での試薬の送液を、最初１回停止させた後、送液速度を低減して送液を再開し、その後は送液を停止させないことを特徴とする請求の範囲第１項乃至第３項の何れか１項に記載のマイクロチップ内での試薬混合方法。
6. 複数の試薬が合流し混合される混合流路を有するマイクロチップと、
   マイクロチップ内の前記複数の試薬を混合流路に送液するマイクロポンプと、
   前記複数の試薬の混合流路内への送液を開始した後、前記複数の試薬が混合流路を通過するまでに少なくとも１回は前記複数の試薬の送液を停止させるように前記マイクロポンプを制御する制御部と、
   を有することを特徴とするマイクロチップ検査システム。