JPWO2008016107A1 - アルキルエーテル誘導体またはその塩を含有するプロテインキナーゼｃ活性促進剤 - Google Patents

Abstract

一般式「式中、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルキル、アリール、アルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルケニル、アミノ、複素環式、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシルおよびオキソ基などから選ばれる一つ以上の基を；Ｒ３は、アルキルアミノ、アミノまたはヒドロキシル基などを；ｍおよびｎは、同一または異なって、１〜６の整数をそれぞれ示す。」で表されるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有することを特徴とするプロテインキナーゼＣ促進剤は、プロテインキナーゼＣが関与する種々の疾患の治療または予防などの処置に有用である。

Description

本発明は、アルキルエーテル誘導体またはその塩を含有する優れたプロテインキナーゼＣ活性促進剤に関する。

プロテインキナーゼＣ（以下、ＰＫＣとする）は、哺乳類では１２種類のアイソフォームからなるファミリーから構成され、シグナル伝達に関与するセリン・スレオニンキナーゼであることが知られている。また、ＰＫＣは、シナプス伝達、イオンフラックスの活性化、分泌、細胞周期制御、分化、増殖、腫瘍の形成および転移並びにアポトーシスなどの種々の細胞機能制御に関与することが知られている。ＰＫＣ活性促進効果を有する化合物（以下、ＰＫＣ活性促進剤とする）は、たとえば、肝硬変モデル動物におけるグルコース代謝障害改善効果を有すること（非特許文献１）および抗新生物効果を有すること（非特許文献２）などが知られている。ＰＫＣ活性促進剤は、肝硬変患者におけるグルコース代謝障害および腫瘍などの新生物性疾患などの種々の疾患の治療剤として注目されている。

ＰＫＣ活性促進剤として、たとえば、ロイシンなどが知られている（非特許文献３）。肝硬変患者の分岐鎖アミノ酸補充療法に使用される分岐鎖アミノ酸（特に、ロイシンおよびイソロイシン）は、ＰＩ３キナーゼを介してＰＫＣを活性化させ、骨格筋におけるグルコース取り込みを促進し、肝硬変モデルラットにおけるグルコース代謝障害を改善する（非特許文献１）。
また、ＰＫＣ活性促進剤として、たとえば、ブリオスタチンおよびグニディマクリンなどが知られている。ブリオスタチンは、ＰＫＣに結合し（非特許文献４）、インビトロでＰＫＣアイソザイムを活性化させ（非特許文献５）、抗新生物効果を発揮する（非特許文献６）。

これまでに、本願記載のアルキルエーテル誘導体は、神経保護作用、神経再生作用および神経突起伸展促進作用を有することが報告されている（特許文献１）。しかしながら、ＰＫＣの活性を促進させることは全く知られていない。

国際公開第０３／０３５６４７号パンフレット アメリカン ジャーナル オブ フィジオロジー・ガストロインテスティナル アンド リバー フィジオロジー（Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver. Physiol.）、2005年、第288巻、p.G1292−1300 カレント キャンサー ドラッグ ターゲッツ（Curr. Cancer Drug Targets）、2004年、第4巻、p.125−146 バイオケミカル アンド バイオフィジカル リサーチ コミュニケーションズ（Biochem. Biophys. Res. Commun.）2002年、第299巻、第5号、p.693−696 バイオケミカル ファーマコロジー（Biochem. Pharmacol.）、1992年、第43巻、第9号、p.2007−2014 モレキュラー ファーマコロジー（Mol. Pharmacol.）、1994年、第46巻、第2号、p.374−379 レビューズ オブ フィジオロジー バイオケミストリー アンド ファーマコロジー（Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol.）、2001年、第142巻、p.1−96

副作用の少ない優れたＰＫＣ活性促進剤が求められている。

このような状況下において、本発明者らは、以下の一般式［１］
「式中、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、アリール、アルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルケニル、アルケニルオキシ、アミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、カルバモイルもしくは複素環式基、保護されていてもよいアミノ、ヒドロキシルもしくはカルボキシル基、ニトロ基およびオキソ基から選ばれる一つ以上の基を；Ｒ^３は、置換されていてもよいアルキルアミノ基または保護されていてもよいアミノもしくはヒドロキシル基を；ｍおよびｎは、同一または異なって、１〜６の整数をそれぞれ示す。」で表されるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩が、ＰＫＣ活性促進作用を示し、ＰＫＣ活性促進剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。

本発明の一般式［１］で表されるアルキルエーテル誘導体またはその塩は、ＰＫＣ活性促進作用を示し、肝硬変患者におけるグルコース代謝障害または腫瘍などの新生物性疾患などのＰＫＣが関与する種々の疾患の治療または予防などの処置に有用である。

以下に本発明について詳細に説明する。
本明細書において、特に断らない限り、各用語は、次の意味を有する。
ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を；アルキル基とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチルおよびオクチルなどの直鎖状または分岐鎖状のＣ_１−１２アルキル基を；低級アルキル基とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルおよびヘキシルなどの直鎖状または分岐鎖状のＣ_１−６アルキル基を；アルケニル基とは、ビニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニルおよびオクテニルなどのＣ_２−１２アルケニル基を；低級アルケニル基とは、ビニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニルおよびヘキセニルなどのＣ_２−６アルケニル基を；アシルアルキル基とは、たとえば、アセチルメチル、ベンゾイルメチル、ｐ−ニトロベンゾイルメチル、ｐ−ブロモベンゾイルメチル、ｐ−メトキシベンゾイルメチルおよび１−ベンゾイルエチルなどのアシルＣ_１−６アルキル基を；アシルオキシアルキル基とは、たとえば、アセトキシメチル、プロピオニルオキシメチルおよびピバロイルオキシメチルなどのアシルオキシＣ_１−６アルキル基を；アリールチオアルキル基とは、たとえば、フェニルスルフェニルメチルおよび２−（ｐ−ニトロフェニルスルフェニル）エチルなどのアリールチオＣ_１−６アルキル基を；アリールスルホニルアルキル基とは、たとえば、ｐ−トルエンスルホニルエチルなどのアリールスルホニルＣ_１−６アルキル基を；含窒素複素環式アルキル基とは、たとえば、フタルイミドメチルおよびスクシンイミドメチルなどの含窒素複素環式Ｃ_１−６アルキル基を；シクロアルキル基とは、たとえば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルなどのＣ_３−８シクロアルキル基を；アルキルチオアルキル基とは、たとえば、メチルチオメチル、エチルチオメチルおよびプロピルチオメチルなどのＣ_１−６アルキルチオＣ_１−６アルキル基を；アルコキシアルキル基とは、たとえば、メトキシメチルおよび１−エトキシエチルなどのＣ_１−６アルキルオキシＣ_１−６アルキル基を；アルアルキルオキシアルキル基とは、たとえば、ベンジルオキシメチルおよびフェネチルオキシメチルなどのアルＣ_１−６アルキルオキシＣ_１−６アルキル基を；

アルコキシ基とは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、ヘプチルオキシおよびオクチルオキシなどの直鎖状または分岐鎖状のＣ_１−１２アルキルオキシ基を；低級アルコキシ基とは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ペンチルオキシおよびヘキシルオキシなどの直鎖状または分岐鎖状のＣ_１−６アルキルオキシ基を；アルケニルオキシ基とは、ビニルオキシ、プロペニルオキシ、ブテニルオキシ、ペンテニルオキシ、ヘキセニルオキシ、ヘプテニルオキシおよびオクテニルオキシなどのＣ_２−１２アルケニルオキシ基を；

アルキルチオ基とは、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ペンチルチオ、ヘキシルチオ、ヘプチルチオおよびオクチルチオなどのＣ_１−１２アルキルチオ基を；低級アルキルチオ基とは、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、ブチルチオ、イソブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ペンチルチオおよびヘキシルチオなどのＣ_１−６アルキルチオ基を；

アリール基とは、フェニル、ナフチル、インダニルおよびインデニル基を；アリールオキシ基とは、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、インダニルオキシおよびインデニルオキシ基を；アルアルキル基とは、ベンジル、ジフェニルメチル、トリチルおよびフェネチルなどのアルＣ_１−６アルキル基を；アリールチオ基とは、フェニルチオ、ナフチルチオ、インダニルチオおよびインデニルチオ基を；

アシル基とは、ホルミル基、アセチル、イソバレイル、プロピオニルおよびピバロイルなどのＣ_２−１２アルカノイル基、ベンジルカルボニルなどのアルＣ_１−６アルキルカルボニル基並びにベンゾイルおよびナフトイルなどのアロイル基を；アルキルオキシカルボニル基とは、たとえば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、１，１−ジメチルプロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、２−エチルヘキシルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルおよびｔｅｒｔ−ペンチルオキシカルボニルなどの直鎖状または分枝鎖状のＣ_１−１２アルキルオキシカルボニル基を；アルアルキルオキシカルボニル基とは、たとえば、ベンジルオキシカルボニルおよびフェネチルオキシカルボニル基などのアルＣ_１−６アルキルオキシカルボニル基を；アリールオキシカルボニル基とは、たとえば、フェニルオキシカルボニルなどの基を；複素環オキシカルボニル基とは、たとえば、２−フルフリルオキシカルボニルおよび８−キノリルオキシカルボニルなどの基を；

アルキルスルホニル基とは、メチルスルホニル、エチルスルホニル、プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル、ペンチルスルホニル、ヘキシルスルホニル、ヘプチルスルホニルおよびオクチルスルホニルなどのＣ_１−１２アルキルスルホニル基を；低級アルキルスルホニル基とは、たとえば、メチルスルホニル、エチルスルホニルおよびプロピルスルホニルなどのＣ_１−６アルキルスルホニル基を；アリールスルホニル基とは、フェニルスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルおよびナフチルスルホニルなどの基を；

アルキルアミノ基とは、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジイソプロピルアミノおよびジブチルアミノなどのモノ−またはジ−Ｃ_１−６アルキルアミノ基を；

複素環式基とは、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ホモピペリジニル、モルホリル、チオモルホリル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリル、キヌクリジニル、イミダゾリニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジル、キノリル、キノリジニル、チアゾリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、ピロリニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、プリニル、フリル、チエニル、ベンゾチエニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾフラニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノキサリル、ジヒドロキノキサリル、２，３−ジヒドロベンゾチエニル、２，３−ジヒドロベンゾピロリル、２，３−４Ｈ−１−チアナフチル、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾ［ｂ］ジオキサニル、イミダゾ［２，３−ａ］ピリジル、ベンゾ［ｂ］ピペラジニル、クロメニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、ピリダジニル、イソインドリル、イソキノリル、１，３−ベンゾジオキソニルおよび１，４−ベンゾジオキサニルなどの窒素、酸素もしくは硫黄原子から選ばれる少なくとも一つ以上の異項原子を含む５員もしくは６員環、縮合環または架橋環の複素環式基を；

含酸素複素環式基とは、たとえば、２−テトラヒドロピラニルおよび２−テトラヒドロフラニルなどの基を；含硫黄複素環式基とは、たとえば、テトラヒドロチオピラニルなどの基を；置換シリル基とは、たとえば、トリメチルシリル、トリエチルシリルおよびトリブチルシリルなどの基を；アルキルシリルアルキル基とは、たとえば、２−（トリメチルシリル）エチルなどのＣ_１−６アルキルシリルＣ_１−６アルキル基を意味する。

アミノ保護基としては、通常のアミノ基の保護基として使用しうるすべての基を含み、たとえば、Ｗ．グリーン（W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第3版、第494−615頁、1999年、ジョン・ウィリイ・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、たとえば、アシル基、アルキルオキシカルボニル基、アルアルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アルアルキル基、アルコキシアルキル基、アルアルキルオキシアルキル基、アリールチオ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基および置換シリル基などが挙げられる。

ヒドロキシル保護基としては、通常のヒドロキシル基の保護基として使用し得るすべての基を含み、たとえば、Ｗ．グリーン（W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第3版、第17−245頁、1999年、ジョン・ウィリイ・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、たとえば、アシル基、アルキルオキシカルボニル基、アルアルキルオキシカルボニル基、複素環オキシカルボニル基、アルキル基、アルケニル基、アルアルキル基、含酸素複素環式基、含硫黄複素環式基、アルコキシアルキル基、アルアルキルオキシアルキル基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基および置換シリル基などが挙げられる。

カルボキシル保護基としては、通常のカルボキシル基の保護基として使用し得るすべての基を含み、たとえば、Ｗ．グリーン（W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第3版、第369−453頁、1999年、ジョン・ウィリイ・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、たとえば、アルキル基、アルケニル基、アリール基、アルアルキル基、アシルアルキル基、アリールチオアルキル基、アリールスルホニルアルキル基、含酸素複素環式基、アルキルシリルアルキル基、アシルオキシアルキル基、含窒素複素環式アルキル基、シクロアルキル基、アルコキシアルキル基、アルアルキルオキシアルキル基、アルキルチオアルキル基および置換シリル基などが挙げられる。

Ｒ^１およびＲ^２におけるアルキル基、アリール基、アルアルキル基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルケニル基、アルケニルオキシ基、アミノ基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、カルバモイル基および複素環式基並びにＲ^３におけるアルキルアミノ基の置換基としては、ハロゲン原子、低級アルキル基、シクロアルキル基、アリール基、低級アルコキシ基、アリールオキシ基、低級アルキルチオ基、アリールチオ基、低級アルケニル基、低級アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、アルキルアミノ基、保護されていてもよいアミノ基、保護されていてもよいヒドロキシル基、保護されていてもよいカルボキシル基、アシル基および複素環式基などから選ばれる基が挙げられる。

一般式［１］の化合物の塩としては、通常知られているアミノ基などの塩基性基またはヒドロキシルもしくはカルボキシル基などの酸性基における塩を挙げることができる。
塩基性基における塩としては、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硝酸および硫酸などの鉱酸との塩；ギ酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、アスパラギン酸、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸との塩；並びにメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸などのスルホン酸との塩が挙げられる。

酸性基における塩としては、たとえば、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属との塩；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩；並びにトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミンおよびＮ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどの含窒素有機塩基との塩などが挙げられる。
上記した塩の中で、好ましい塩としては、薬理学的に許容される塩が挙げられる。

一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩において、異性体（たとえば、光学異性体、幾何異性体および互変異性体など）が存在する場合、本発明は、それらすべての異性体を包含し、また、水和物、溶媒和物およびすべての結晶形を包含するものである。

本発明の一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩として、好ましいものは、以下の化合物が挙げられる。
Ｒ^１が、水素原子である化合物が好ましい。
Ｒ^２が、水素原子、ハロゲン原子またはアルコキシ基である化合物が好ましく、水素原子である化合物がより好ましい。
Ｒ^３が、ヒドロキシル基である化合物が好ましい。
ｍが、２である化合物が好ましい。
ｎが、２または３の化合物が好ましく、３である化合物がより好ましい。
Ｒ^１およびＲ^２が、水素原子；Ｒ^３が、ヒドロキシル基；ｍが、２；ｎが、３である化合物がさらに好ましい。
一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩が、１−（３−（２−（１−ベンゾチオフェン−５−イル）エトキシ）プロピル）アゼチジン−３−オール（以下、Ｔ−８１７とする）またはその塩である化合物がよりさらに好ましく、Ｔ−８１７のマレイン酸塩（以下、Ｔ−８１７ＭＡとする）である化合物が最も好ましい。

本発明の一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩は、ＰＫＣ活性促進作用を有し、一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有する薬剤は、ＰＫＣ活性促進作用が効果を示す疾患の治療または予防などの処置に有用である。

本発明に使用される一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩は、自体公知の方法またはそれらを適宜組み合わせることによって、また、特許文献１に記載の方法によって製造することができる。

本発明に使用される一般式［１］のアルキルエーテル誘導体またはその塩は、賦形剤、結合剤、崩壊剤、崩壊抑制剤、固結・付着防止剤、滑沢剤、吸収・吸着担体、溶剤、増量剤、等張化剤、溶解補助剤、乳化剤、懸濁化剤、増粘剤、被覆剤、吸収促進剤、ゲル化・凝固促進剤、光安定化剤、保存剤、防湿剤、乳化・懸濁・分散安定化剤、着色防止剤、脱酸素・酸化防止剤、矯味・矯臭剤、着色剤、起泡剤、消泡剤、無痛化剤、帯電防止剤および緩衝・pH調節剤などの各種医薬品添加物を配合して、経口剤（錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤など）、注射剤および点眼剤などの医薬品製剤とすることができる。
上記各種製剤は、通常の方法により製剤化される。

錠剤、散剤および顆粒剤などの経口用固形製剤は、たとえば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、無水第二リン酸カルシウム、部分アルファ化デンプン、コーンスターチおよびアルギン酸などの賦形剤；単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、水およびエタノールなどの結合剤；乾燥デンプン、アルギン酸、寒天末、デンプン、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウムおよびデンプングリコール酸ナトリウムなどの崩壊剤；ステアリルアルコール、ステアリン酸、カカオバターおよび水素添加油などの崩壊抑制剤；ケイ酸アルミニウム、リン酸水素カルシウム、酸化マグネシウム、タルク、無水ケイ酸などの固結防止・付着防止剤；カルナバロウ、軽質無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム、硬化油、硬化植物油誘導体、胡麻油、サラシミツロウ、酸化チタン、乾燥水酸化アルミニウムゲル、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、リン酸水素カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリエチレングリコールなどの滑沢剤；第4級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム、尿素および酵素などの吸収促進剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、無水ケイ酸、含水二酸化ケイ素、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムおよびコロイド状ケイ酸などの吸収・吸着担体などの固形製剤化用医薬用添加物を用い、常法に従い調製すればよい。
さらに錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、たとえば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、胃溶性被覆錠、腸溶性被覆錠および水溶性フィルムコーティング錠とすることができる。
カプセル剤は、上記で例示した各種の医薬品と混合し、硬質ゼラチンカプセルおよび軟質カプセルなどに充填して調製される。
また、溶剤、増量剤、等張化剤、溶解補助剤、乳化剤、懸濁化剤および増粘剤などの上記した各種の液体製剤化用添加物を用い、常法に従い調製して、水性または油性の懸濁液、溶液、シロップおよびエリキシル剤とすることもできる。

注射剤は、たとえば、水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、クエン酸、酢酸、リン酸、乳酸、乳酸ナトリウム、硫酸および水酸化ナトリウムなどの希釈剤；クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよびリン酸ナトリウムなどのpH調整剤および緩衝剤；ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、チオグリコール酸およびチオ乳酸などの安定化剤；食塩、ブドウ糖、マンニトールおよびグリセリンなどの等張化剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロピレングリコール、安息香酸ナトリウム、安息香酸ベンジル、ウレタン、エタノールアミンおよびグリセリンなどの溶解補助剤；グルコン酸カルシウム、クロロブタノール、ブドウ糖およびベンジルアルコールなどの無痛化剤；並びに局所麻酔剤などの液体製剤化用の医薬品添加物を用い、常法に従い調製すればよい。

点眼剤は、たとえば、クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化セチルピリジウム、フェネチルアルコール、パラオキシ安息香酸メチルおよび塩化ベンゼトニウムなどの保存剤；ホウ砂、ホウ酸およびリン酸二水素カリウムなどの緩衝剤；メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびコンドロイチン硫酸などの増粘剤；ポリソルベート80およびポリオキシエチレン硬化ヒマシ油60などの溶解補助剤；エデト酸ナトリウムおよび亜硫酸水素ナトリウムなどの安定化剤；並びに塩化ナトリウム、塩化カリウムおよびグリセリンなどの等張化剤を適宜配合し、常法に従い調製すればよい。

上記製剤の投与方法は、特に限定されないが、製剤の形態、患者の年齢、性別その他の条件、患者の症状の程度に応じて適宜決定される。
本発明製剤の有効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の形態、その他の条件などに応じて適宜選択されるが、通常成人に対して1日0.1〜500mgを1回から数回に分割して投与すればよい。

次に、本発明を試験例および製剤例で説明するが、本発明はこれらに限定されない。
この試験において、被験物質として、Ｔ−８１７ＭＡを用いた。

試験例１ 培養細胞におけるＰＫＣ活性促進作用
ＰＫＣ活性の評価は、エチェベリガレイ（Etcheberrigaray）らの方法［米国科学アカデミー紀要（Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America）、2004年、第101巻、第30号、p.11141−11146］に準じて実施した。ＰＫＣは、活性化する際に細胞質から膜へ移行する。よって、細胞質分画に対する膜分画におけるＰＫＣの量をＰＫＣ活性化の指標とした。また、ＰＫＣのアイソフォームの一つとして知られているＰＫＣεの活性を測定した。
培養細胞の調製は、ヒラタ（Hirata）らの方法［ジャーナル オブ ファーマコロジー アンド エクスペリメンタル セラピューティックス（J. Pharmacol. Exp. Ther.）、2005年、第314巻、第1号、p.252−259］に従って実施した。
ウイスター／ＳＴ（Wistar/ST）系ラット胎児（胎齢18日）より大脳皮質を取り出し、0.25％トリプシンおよび40 Kunitz units/mL DNaseIを含むリン酸緩衝生理食塩水（以下、PBSとする）中で37℃、20分間インキュベートした。ついで、牛胎児血清（JRH社製）およびダルベッコ変法イーグル培地（以下、DMEMとする）の等量混和液を加え、ピペッティングして分散させた細胞懸濁液をレンズペーパーで濾過し、1000rpm、5分間、遠心操作をした後、10％牛胎児血清を含むDMEM中でピペッティングにより分散させた。細胞を5mLの培地中に4×10⁵cells/mLの密度で、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングした60mm組織培養ディッシュに播種し、培養した。培養開始2日目に1mmol/L AraC 溶液50μLを各ディッシュに添加した。24時間後、培地を10％牛胎児血清を含むDMEM5mLに交換した。
培養開始8日目の細胞にＴ−８１７として最終濃度0.1μmol/LとなるようにＴ−８１７ＭＡを添加した。添加後、0（無処置）、1、2および4時間後に細胞をPBSで洗浄し、セルスクレーパーを用いて抽出バッファー（20mmol/L Tris・HCl、pH 7.5、2mmol/L EDTA、2mmol/L EGTA、5mmol/L DTT、0.32mol/Lスクロースおよび1/100容量のプロテアーゼインヒビターカクテル（protease inhibitor cocktail、ＳＩＧＭＡ社製））で細胞を掻き集めた。細胞抽出液を超音波処理し、12000×g、20分間の遠心操作により得られた上清を細胞質画分とした。ペレットに1％Triton X-100を含む抽出バッファーを加え、超音波処理後、45分間氷上に静置した。再び12000×g、20分間の遠心操作により得られた上清を膜画分とした。細胞質画分および膜画分に含まれる蛋白質濃度を測定し、抽出バッファーあるいはTriton X-100を含む抽出バッファーを用いて各試料に含まれる蛋白質量を一定に調整した。これらの試料を２−メルカプトエタノールを含む電気泳動用緩衝液（和光純薬製）で希釈し、10％ポリアクリルアミドゲルにてSDS-PAGE（40mA、30分）を行った。SDS-PAGEが終了後、ゲル上の蛋白質をPVDFメンブレンに転写した（150mA、90分）。5％スキムミルクを含むPBST（0.1％Tween20を含むPBS）中でメンブレンを60分間振盪後、マウスＰＫＣε抗体（500倍希釈、BD Transduction Laboratories社製）を含むPBSに浸して90分間静置した。メンブレンをPBSTで洗浄後、HRP標識抗マウスIgG抗体（2500倍希釈、GE Healthcare Bio-Sciences社製）を含むPBSTで90分間振盪した。PBSTで洗浄後、メンブレンをECL plus（GE Healthcare Bio-Sciences社製）で発光させ、ルミノ・イメージアナライザーで検出した。各試料におけるＰＫＣεのバンドを比較した。結果を図１に示す。

細胞にＴ−８１７ＭＡを処置した2時間および4時間後にＰＫＣεが細胞質から膜へ移行することが示された。ＰＫＣの細胞質から膜への移行は、活性化の指標となることから、Ｔ−８１７ＭＡは、ＰＫＣεの活性促進作用を有することが示された。

製剤例１
Ｔ−８１７ＭＡ50mg、乳糖20mg、とうもろこし澱粉25mgおよびアビセルＰＨ１０１（旭化成社製）40mgの混合物をポリビニルピロリドンＫ３０の5％水溶液で練合し、60℃で乾燥した後、コリドンＣＬ（ＢＡＳＦ社製）10mg、アビセルＰＨ３０２（旭化成社製）10mg、軽質無水ケイ酸18mgおよびステアリン酸マグネシウム2mgの混合物を混合し、1錠重量175mg、直径7mmの円形錠に打錠し、Ｔ−８１７ＭＡ50mgを含有する錠剤を得た。

製剤例２
Ｔ−８１７ＭＡ50mg、乳糖20mgおよびとうもろこし澱粉53mgの混合物をポリビニルピロリドンＫ３０の5％水溶液で練合し、60℃で乾燥した後、コリドンＣＬ（ＢＡＳＦ社製）7mg、アビセルＰＨ３０２（旭化成社製）18mgおよびステアリン酸マグネシウム2mgの混合物を混合し、１カプセル当たり150mgを４号ゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を得た。

培養細胞におけるＰＫＣ活性測定試験におけるウェスタンブロッティングの結果

本発明のアルキルエーテル誘導体またはその塩は、ＰＫＣ活性促進作用を示し、肝硬変患者におけるグルコース代謝障害または腫瘍などの新生物性疾患などのＰＫＣが関与する種々の疾患の治療または予防などの処置に有用である。

Claims (5)

1. 一般式
   「式中、Ｒ^１およびＲ^２は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、アリール、アルアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルケニル、アルケニルオキシ、アミノ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、カルバモイルもしくは複素環式基、保護されていてもよいアミノ、ヒドロキシルもしくはカルボキシル基、ニトロ基およびオキソ基から選ばれる一つ以上の基を；Ｒ^３は、置換されていてもよいアルキルアミノ基または保護されていてもよいアミノもしくはヒドロキシル基を；ｍおよびｎは、同一または異なって、１〜６の整数をそれぞれ示す。」で表されるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有することを特徴とするプロテインキナーゼＣ活性促進剤。
2. Ｒ^１が、水素原子；Ｒ^２が、水素原子、ハロゲン原子またはアルコキシ基であるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有することを特徴とする請求項１記載のプロテインキナーゼＣ活性促進剤。
3. ｍが、２；ｎが、２または３であるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有することを特徴とする請求項１または２記載のプロテインキナーゼＣ活性促進剤。
4. Ｒ^２が、水素原子；Ｒ^３が、ヒドロキシル基；ｎが、３であるベンゾチオフェンアルキルエーテル誘導体またはその塩を含有することを特徴とする請求項１〜３記載のプロテインキナーゼＣ活性促進剤。
5. １−（３−（２−（１−ベンゾチオフェン−５−イル）エトキシ）プロピル）アゼチジン−３−オールまたはその塩を含有することを特徴とする請求項１記載のプロテインキナーゼＣ活性促進剤。