JPWO2006082826A1 - Corl2遺伝子を標的としたプルキンエ細胞識別方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(1)以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド
(a)配列番号:2または4記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド
(b)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(c)配列番号:2または4記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド
(d)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列のうち1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
(2)以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(b)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(d)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
(3)上記(1)または(2)に記載のポリヌクレオチドを含むベクター、
(4)上記(1)もしくは2に記載のポリヌクレオチド、または上記(3)に記載のベクターを保持する形質転換体、
(5)以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリペプチド
(a)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド
(b)配列番号:2または4記載の塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド
(c)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列のうち1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド
(d)配列番号:2または4記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチド、
(6)以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリペプチド。
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド
(b)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド
(d)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド
(7)配列番号:2または4記載の塩基配列またはその相補鎖と相補的な塩基配列の少なくとも連続した15塩基長からなるポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド、
(8)少なくとも連続した15塩基長からなるポリヌクレオチドが、配列番号:15,16,17,18,27,28のいずれかに記載のポリヌクレオチドである、上記(7)に記載のポリヌクレオチド、
(9)上記(5)または(6)に記載のポリペプチドに結合しうる抗体、
(10)以下の(a)または(b)のいずれかに記載のポリペプチドを含むポリペプチドに結合しうる、上記(9)に記載の抗体
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の1位から43位、190位から374位、または445位から924位、989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
(b)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の1位から43位、190位から374位、または445位から924位、989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列からなるポリペプチド、
(11)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の836位から924位からなるポリペプチドを含むポリペプチドに結合しうる、上記(9)に記載の抗体、
(12)上記(4)に記載の形質転換体を培養し、該形質転換体または培養上清からタンパク質を回収する工程を含む、上記(5)または(6)に記載のポリペプチドの製造方法、
(13)被検体に上記(7)または(8)に記載のポリヌクレオチドを接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を識別する方法、
(14)被検体に上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を識別する方法、
(15)被検体に上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を分離する方法、
(16)被検体に上記(7)もしくは(8)に記載のポリヌクレオチドまたは上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を含有する、プルキンエ細胞を識別するための試薬、
(17)被検体に上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を含有する、プルキンエ細胞を分離するための試薬、
(18)被検体に上記(7)もしくは(8)に記載のポリヌクレオチドまたは上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を含む、プルキンエ細胞識別用キット、
(19)被検体に上記(9)〜(11)のいずれか一項に記載の抗体を含む、プルキンエ細胞分離用キット。
このような配列番号:1または3のアミノ酸配列において1若しくは複数個のアミノ酸が欠失、挿入、置換および/または付加されたアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドは、『Molecular Cloning, A Laboratory Manual 2nd ed.』(Cold Spring Harbor Press (1989))、『Current Protocols in Molecular Biology』(John Wiley & Sons (1987-1997);特にSection8.1-8.5)、Hashimoto-Goto et al. (1995) Gene 152: 271-5、Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488-92、Kramer and Fritz (1987) Method. Enzymol. 154: 350-67、Kunkel (1988) Method. Enzymol. 85: 2763-6等に記載の部位特異的変異誘発法等の方法に従って調製することができる。
ここで、本発明における「標識物質」とは、前記抗体に物理化学的結合等により結合させることで、それらの存在を検出可能にするために用いられる物質を意味し、具体的には、酵素、蛍光物質、化学発光物質、ビオチン、アビジンあるいは放射性同位体等である。さらに具体的には、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β‐D‐ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース‐6‐ホスフェートデヒドロゲナーゼ、アルコール脱水素酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ペニシリナーゼ、カタラーゼ、アポグルコースオキシダーゼ、ウレアーゼ、ルシフェラーゼ若しくはアセチルコリンエステラーゼ等の酵素、フルオレセインイソチオシアネート、フィコビリタンパク質、希土類金属キレート、ダンシルクロライド若しくはテトラメチルローダミンイソチオシアネート等の蛍光物質、3H、14C、125I若しくは131I等の放射性同位体、ビオチン、アビジン、または、アクリジニウム誘導体等の化学発光物質が挙げられる。
なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に組み入れられる。
[実施例1] Corl2の単離
胎児期脳領域特異的に発現する遺伝子を単離するために、12.5日胚マウス中脳腹側領域と背側領域で発現の異なる遺伝子をサブトラクション(N-RDA)法により同定した。単離した断片の一つは機能未知なタンパク質をコードするcDNA断片であった。
N-RDA法用アダプター:ad2,ad3,ad4,ad5,ad13を調製した。アダプター1種についてオリゴヌクレオチド2種を作製してアニーリングさせ、100μMに調製した。アダプターの配列を下記に示す。
アダプターad2
ad2S: cagctccacaacctacatcattccgt (配列番号5)
ad2A: acggaatgatgt (配列番号6)
アダプターad3
ad3S: gtccatcttctctctgagactctggt (配列番号7)
ad3A: accagagtctca (配列番号8)
アダプターad4
ad4S: ctgatgggtgtcttctgtgagtgtgt (配列番号9)
ad4A: acacactcacag (配列番号10)
アダプターad5
ad5S: ccagcatcgagaatcagtgtgacagt (配列番号11)
ad5A: actgtcacactg (配列番号12)
アダプターad13
ad13S: gtcgatgaacttcgactgtcgatcgt (配列番号13)
ad13A: acgatcgacagt (配列番号14)
日本SLCより入手したマウス12.5日胚より中脳腹側および中脳背側領域を切り出した。RNeasy mini kit (Qiagen)を用いて全RNAを調製し、cDNA synthesis kit (TAKARA)を用いて二本鎖cDNAを合成した。制限酵素RsaIで消化したのち、アダプターad2を付加し、ad2Sをプライマーとして、15サイクルのPCRでcDNAを増幅した。増幅条件は72℃で5分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を15サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした。N-RDA法におけるPCRは、すべて以下の反応液組成で行った。
10×ExTaq 5μl
2.5mM dNTP 4μl
ExTaq 0.25μl
100μM primer 0.5μl
cDNA 2μl
蒸留水 38.25μl
ad2Sを付加して増幅した中脳背側のcDNAを、さらに5サイクルのPCRで増幅した。増幅条件は94℃で2分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を5サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした。Qiaquick PCR purification kit (Qiagen)を用いてcDNAを精製し、RsaI消化した。1回のサブトラクションに3μgずつ使用した。
ad2Sを付加して増幅した中脳腹側のcDNAをさらに5サイクルのPCRで増幅した。増幅条件は94℃で2分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を5サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした。Qiaquick PCR purification kit (Qiagen)を用いてcDNAを精製し、RsaI消化した。60ngのRsaI消化cDNAにアダプターad3を付加した。
上記1-3及び1-4で作製したTesterおよびDriverを混合し、エタノール沈殿した後に、1xPCR buffer 1μlに溶解した。98℃5分の後、1xPCR buffer+1M NaCl 1μlを加えた。さらに98℃5分の後、68℃で16時間ハイブリダイズさせた。
ハイブリダイズさせたcDNAを、ad3Sをプライマーとして10サイクルのPCRで増幅した後(72℃で5分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を10サイクル行った)、Mung Bean Nuclease (TAKARA)で消化し、Qiaquick PCR purification kitで精製した。精製したcDNAを、さらに13サイクルのPCRで増幅した。増幅条件は94℃で2分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を13サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした。
サブトラクション1回目で増幅したcDNA 8ngに2xPCR buffer 1μlを加えた。98℃5分の後、1xPCR buffer+1M NaCl 2μlを加えた。さらに98℃5分の後、68℃で16時間ハイブリダイズさせた。
ハイブリダイズさせたcDNAをRsaIで消化し、Qiaquick PCR purification kitで精製した。精製したcDNAを、ad3Sをプライマーとして11サイクルのPCRで増幅した後(94℃で2分インキュベートし、その後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で2分の反応を11サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした)RsaIで消化し、アダプターad4を付加した。
上記1-6でad4を付加したcDNA 20ngをTesterとして、上記1-3のDriverと混合し、さらに、上記1-5と同様の方法でサブトラクションを行った。最終的にRsaI消化したcDNAにアダプターad5を付加した。
上記1-7でad5を付加したcDNA 2ngをTesterとして、上記1-3のDriverと混合し、さらに、上記1-5と同様の方法でサブトラクションを行った。最終的にRsaI消化したcDNAにアダプターad13を付加した。
上記1-8でad13を付加したcDNA 2ngをTesterとして、上記1-3のDriverと混合し、以下、上記1-5と同様の方法でサブトラクションを行った。増幅したcDNAをpCRII (Invitrogen)にクローニングし、ABI3100シーケンスアナライザー(Aplied Biosystems社製)を用いて塩基配列を解析した。
N-RDA法で得られたcDNA断片の配列からBlast検索を行った結果、この遺伝子は機能未知なタンパク質をコードする遺伝子(Genbank,accession No.: XM_355050)であると考えられた。しかし、この登録配列はゲノム配列からのmRNA予想配列であったので、E12.5マウス脳cDNA libraryよりRACE法で全長cDNA配列をクローニングすることにした。
マウス12.5日胚より間脳、中脳、後脳を含む脳領域を切り出した。RNeasy mini kit (Qiagen)を用いて全RNAを調製し、superscriptII choice system (Invitrogen)を用いてcDNA合成を行った。二本鎖cDNAにBstXI/EcoRI adapter (Invitrogen)を付加した後、BstXI消化したpCRIIベクター(Invitrogen)にクローニングし、cDNA libraryを作製した。
10×buffer 5μl
2.5mM dNTP 4μl
ExTaq (TAKARA) 0.25μl
100μM primer 0.5μl
cDNA 1μl(10ng)
DMSO 3.75μl
蒸留水 35μl
10×buffer 5μl
2.5mM dNTP 4μl
ExTaq (TAKARA) 0.25μl
100μM primer 0.5μl
1回目のPCR産物(100倍希釈) 1μl
DMSO 3.75μl
蒸留水 35μl
Corl2 F1: ACGTCAATGGCTTACCAGACTCCAAG (配列番号15)
Corl2 F2: TGTTCTTCCGTGGAGGAGATGGCTTC (配列番号16)
Corl2 R1: CTTGAGAAGAGTGTTGGAGATCTGCG (配列番号17)
Corl2 R2: ATGGGAATGCCATAGAGGATCACCTG (配列番号18)
TAU2: GGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTC (配列番号19)
TAU4: CAGCTATGACCATGATTACGCCAAGC (配列番号20)
TAD3: AGGCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGG (配列番号21)
TAD4: CCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGG (配列番号22)
配列番号1の1位から643位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号1の643位から772位はNCBI登録配列XM_355050では欠失している。
配列番号1の773位から866位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号1の867位から886位はNCBI登録配列XM_355050と異なる配列である。
配列番号1の887位から965位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号1の966位の位置にNCBI登録配列XM_355050では22アミノ酸の挿入がある。
配列番号1の966位から988位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号1の989位から1008位はNCBI登録配列XM_355050と異なる配列である。
また、塩基配列における相同性は下記のとおりである。
配列番号2の1位から69位はNCBI登録未登録である(新規)。
配列番号2の70位から2284位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号2の2285位から2669位はNCBI登録配列XM_355050で欠失している。
配列番号2の2670位から2955位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号2の2956位から3013位はNCBI登録配列XM_355050と異なる配列である。
配列番号2の3014位から3252位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号2の3253位の位置にNCBI登録配列XM_355050では66塩基の挿入がある。
配列番号2の3253位から3320位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号2の3321位の位置にNCBI登録配列XM_355050では211塩基の挿入がある。
配列番号2の3321位から3878位はNCBI登録配列XM_355050と同一である。
配列番号2の3879位から4129位はNCBI登録配列XM_355050では未登録である。
チンパンジーと鳥のアミノ酸配列では、N末端側の一部のみに配列番号1との相同性が認められたが、残りはまったく相同性の無い配列であった。ヒトについては、3'側の部分cDNA配列が幾つか登録されていたが(accession No.: AK027108,AL136667,CR614259,CR599998,CR596209)、予想アミノ酸配列の登録はなかった。そこで、blast searchでhumanゲノム配列から探し出し、イントロン配列の5’および3’側末端を予測し、エキソンを繋ぎ合わせたところ、マウスとほぼ同じ長さのORFが得られた。アミノ酸配列も良く保存されており、特にギャップも認められないことから、ヒトのCorl2配列をほぼ決定できたと考えられる。ヒトCorl2アミノ酸配列を配列番号3に、ヒトCorl2塩基配列を配列番号4に示す。
マウス Corl1 システインリッチ 配列番号23記載のアミノ酸配列の52位から197位
CH1 配列番号23記載のアミノ酸配列の338位から401位
CH2 配列番号23記載のアミノ酸配列の826位から881位
マウス Corl2 システインリッチ 配列番号1記載のアミノ酸配列の44位から189位
CH1 配列番号1記載のアミノ酸配列の375位から444位
CH2 配列番号1記載のアミノ酸配列の925位から988位
マウスSki システインリッチ 配列番号24記載のアミノ酸配列の101位から260位
マウスSnoN システインリッチ 配列番号25記載のアミノ酸配列の143位から302位
マウスDach1 システインリッチ 配列番号26記載のアミノ酸配列の184位から352位
上記のSki, SnoN, Dachはいずれも転写調節のコファクターと考えられている分子である。Skiは当初癌遺伝子として同定され、その後の解析により、転写調節因子Smadに結合してTGFbetaシグナルを阻害する因子であることが明らかにされている。現在ではSmad以外にも多くの転写調節因子と結合することが知られており、DNAのメチル化による転写抑制等の多くの現象で転写抑制を制御する因子と考えられている。最初はヒトから単離されたが、その後、マウス、ラットなど他の哺乳類でも同定されている。SnoNもSkiと類似した機能を担っていると考えられている。Dachは、Eya, Sixという転写因子に結合し、これらとともに、転写を制御するコファクターであると考えられている。Eya, Sixにも幾つかのファミリーが存在し、発生過程を中心に様々な組織で機能していると考えられている。さらに、Corl1およびCorl2と相同性のあるショウジョウバエの遺伝子(Genbank,accession No.: CG11093)も見出され(図1)、Corl2が進化上保存された機能を有することが示唆された。
3‐1.成体マウス組織におけるCorl1およびCorl2の遺伝子レベル発現解析
生体マウス組織(脳、肺、肝臓、心臓、腎臓、脾臓、胸腺、卵巣、睾丸)におけるCorl1、Corl2の遺伝子レベルの発現をRT-PCRにより解析した。またマウス12.5日胚の脳における発現も解析した。各組織全RNA(Promega)に対して、RNA PCR kit (TAKARA)を用いて1本鎖cDNAを合成し、鋳型に用いた。PCRの増幅条件は、94℃で2分インキュベートした後、94℃で30秒、65℃で30秒、及び72℃で30秒の反応をCorl1およびCorl2は35サイクル、G3PDHは25サイクル行い、最後に72℃で2分インキュベートした。PCRは以下の反応液組成で行った。
10×buffer 1μl
2.5mM dNTP 0.8μl
ExTaq 0.05μl
100μM primer 0.1μl
cDNA 1μl
蒸留水 7.05μl
使用したプライマー配列を下記に示す。
Corl2 F3: GGACATGGCTTCTTCATCACAGATTC (配列番号27)
Corl2 R3: GTAACTGTTGCACCATCTCTTCTCGG (配列番号28)
Corl1 F2: ATGCAGAGAGCATCGCTAAGCTCTAC (配列番号29)
Corl1 R2 AAGCGGTTGGACTCTACGTCCACCTC (配列番号30)
G3PDH F1: ACGACCCCTTCATTGACCTCAACTAC (配列番号31)
G3PDH R1: CCAGTAGACTCCACGACATACTCAGC (配列番号32)
上記解析の結果、Corl2は成体では脳に特異的に発現していることが明らかになった(図2)。また、脳での発現は成体よりも胎児期の方が高いことも明らかとなった(図2)。
Corl2の小脳における発現について、タンパク質レベルで解析を行った。小脳は、12.5日胚および生後12日のものを用いた。
本発現解析を行うにあたり、抗Corl2ポリクローナル抗体を作製した。まず免疫に必要な抗原であるCorl2の836-924 アミノ酸にあたる領域とGSTの融合タンパク質発現ベクターを構築した。このベクターをE.coli(JM109株)に導入した後、IPTGによって発現誘導し、グルタチオンビーズを用いて融合タンパク質を回収した。融合タンパク質をウサギに数回免疫した後に採血し、その血清から免疫に用いたGST-Corl2抗原によるaffinity精製を行うことによって、抗Corl2ポリクローナル抗体を得た。
Claims (19)
- 以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
(a)配列番号:2または4記載の塩基配列を含むポリヌクレオチド
(b)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(c)配列番号:2または4記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチド
(d)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列のうち1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド - 以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリヌクレオチド。
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(b)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(d)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド - 請求項1または2に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 請求項1もしくは2に記載のポリヌクレオチド、または請求項3に記載のベクターを保持する形質転換体。
- 以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリペプチド。
(a)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド
(b)配列番号:2または4記載の塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド
(c)配列番号:1または3記載のアミノ酸配列のうち1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド
(d)配列番号:2または4記載の塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチド - 以下の(a)〜(d)のいずれかに記載の単離されたポリペプチド。
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド
(b)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかによってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド
(c)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の643位から772位、867位から886位、または989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド
(d)配列番号:2に記載の塩基配列の2285位から2669位、または2956位から3013位のいずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドからなる塩基配列によってコードされるポリペプチドを含むポリペプチド - 配列番号:2または4記載の塩基配列またはその相補鎖と相補的な塩基配列の少なくとも連続した15塩基長からなるポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチド。
- 少なくとも連続した15塩基長からなるポリヌクレオチドが、配列番号:15,16,17,18,27,28のいずれかに記載のポリヌクレオチドである、請求項7に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項5または6に記載のポリペプチドに結合しうる抗体。
- 以下の(a)または(b)のいずれかに記載のポリペプチドを含むポリペプチドに結合しうる、請求項9に記載の抗体。
(a)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の1位から43位、190位から374位、または445位から924位、989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチド
(b)配列番号:1に記載のアミノ酸配列の1位から43位、190位から374位、または445位から924位、989位から1008位のいずれかのアミノ酸配列からなるポリペプチドにおいて、1または複数個のアミノ酸が付加、欠失、挿入および/または置換されたアミノ酸配列からなるポリペプチド - 配列番号:1に記載のアミノ酸配列の836位から924位からなるポリペプチドを含むポリペプチドに結合しうる、請求項9に記載の抗体。
- 請求項4に記載の形質転換体を培養し、該形質転換体または培養上清からタンパク質を回収する工程を含む、請求項5または6に記載のポリペプチドの製造方法。
- 被検体に請求項7または8に記載のポリヌクレオチドを接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を識別する方法。
- 被検体に請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を識別する方法。
- 被検体に請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を接触させる工程を含む、プルキンエ細胞を分離する方法。
- 被検体に請求項7もしくは8に記載のポリヌクレオチドまたは請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を含有する、プルキンエ細胞を識別するための試薬。
- 被検体に請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を含有する、プルキンエ細胞を分離するための試薬。
- 被検体に請求項7もしくは8に記載のポリヌクレオチドまたは請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を含む、プルキンエ細胞識別用キット。
- 被検体に請求項9〜11のいずれか一項に記載の抗体を含む、プルキンエ細胞分離用キット。
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