JPWO2005090972A1 - 生物学的物質の分析キット、分析装置及び分析方法 - Google Patents

生物学的物質の分析キット、分析装置及び分析方法 Download PDF

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Abstract

分析装置の製造過程に熱の負荷や、接着剤に含まれている有機化合物等の影響が存在しても、失活等の影響が無く、しかもマイクロチャンネルの流路となる部分に免疫物質等を容易に固定化可能な分析装置を提供する。分析キットは、分析装置と試薬を組み合わせたものである。分析キットに使用される分析装置１は、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の流路２が形成された、極微量の液体試料の分析に適したいわゆるマイクロ流体システムに属するものであり、生物学的物質の分析に適する。分析キットに用いられる分析装置１は、第１部材５、第２部材６の何れかに流路２幅５ｍｍ以下の溝を形成し、２枚の部材を接合したときに流路２となる箇所の一部（捕獲ゾーン７）に核酸を結合させておき、これら２枚の部材を接合する。試薬は、分析装置１の２枚の部材を接合した後に、使用されるので、融着や接着剤の影響を受けることがない。

Description

本発明は、微小断面の流路を有するマイクロチップと呼ばれる生物学的物質を分析するための分析装置、該分析装置と試薬からなる分析キット、及び該分析装置を用いた分析方法に関する。
最も一般的に生体高分子を分析する方法は、臨床検査である。臨床検査において、通常５〜１０ｍＬ の採血管に血液を収集し、血漿や血清部分に含まれる抗原、抗体などを分析する。疾病の診断は、複数の検査項目の組み合わせと臨床症状によって為されるため、医師はその疾病の可能性によって検査項目の組み合わせを考察する。このような検査において、患者からの採血後、検査室に検体が搬送され、そこに設置された大型の検査装置で、複数の異なった項目が測定される。その後、測定結果が医師に通知され、数日後に来院した患者に検査結果を基にした疾病の結果が通知される。こうした分析装置としては、検査室などに備え付けられる大型のものが一般的であり、運転の際に予めウォーミングアップが必ず必要であるため、緊急を要する検査にはあまり適していない。このような分析装置を用いる検査においては、乳幼児、高齢者にとっては、採血量が多いため、非常に負担であり、また、検査にタイムラグが生じ、適切な治療が行えないという問題もあった。
こうした点を打開するために、種々の検査法を用いた試薬開発が行われてきている。例えば、特開昭６３−５０３５１８号公報（特許文献１）を用いた方法や、米国特許６，４４８，００１（特許文献２）に示すイムノクロマトグラフ法が挙げられる。これらの技術を用いた方法では、名刺の１／２程度の大きさの試薬を室温で保存でき、ベットサイドで極めて簡便に分析対象物の有無を判定することが可能となっている。しかしながら、これらの方法は判定を目視により行うため、感度が必ずしも高くなく、また、定量を行う事はできず、１回の分析に採血量１００μＬ程度を要することから、患者負担を軽減するに至っていない。
こうした点を打開するために、特開昭６３−２７３０４２号公報（特許文献３）に記載されているようなエバネッセント波を用いた分析装置も開発されている。この装置を用いると、定量を行う事は可能となるが、１回の分析に採血量２０〜５０μＬを要するために、先の分析技術よりも改善されているものの、解決には至っていない。
近年、MicroTAS（Micro Total Analysis System,マイクロ総合分析システム）といわれるマイクロ流体システム技術を用いた分析方法が考案され、生体高分子の分析、同定、精製等に用いられてきている。その背景には、ゲノム解析、プロテオミクスなどに代表されるバイオ技術分野において、極微量のサンプルから短時間で多くの情報を入手したいという要望が高まっていることがある。
マイクロ流体システムでは、流路を小型化、マイクロ化することにより、単位体積あたりの反応表面積が増大することがわかっているので、このことから反応時間が大幅に短縮でき、単位時間あたりに入手できる情報が多くなる。さらに、その容量が微量なので流体の温度均一性を保つのが容易になり、また、試薬使用量及び廃液を大幅に削減できるなど、多くの効果が得られる。
このように、マイクロ流体システムは、化学産業、製薬産業をはじめ、食品産業、農業技術など多くのバイオ関連産業を含む、非常に多くの産業に大きな影響を与えるものと考えられる。
こうしたマイクロ流体システムを用いた免疫測定は、Ｓａｔｏらによって実証されている（Analytical Chemistry 2001, 73, 1213-1218（非特許文献１）、特開昭２００１−４６２８号公報（特許文献４））。彼らの方法では、ガラス製のマイクロチップ中の幅２００μｍ、深さ１００μｍ、長さ５０．４ｍｍの流路の途中にダムのような構造を設け、このダムで堰き止められることが可能な粒径のポリスチレンビーズにマウス抗癌胎児性抗原抗体を結合させておく。流路入口から、このマウス抗癌胎児性抗原抗体結合ビーズを流し込みダム手前に該抗体結合ビーズを堰き止めることにより、抗体結合ビーズ領域を作る。ここに、種々の濃度の癌胎児性抗原を流し込み、マウス抗体結合ビーズ−抗原結合体を作る。洗浄後、ウサギ抗癌胎児性抗原抗体を反応させて、マウス抗体結合ビーズ−抗原−ウサギ抗癌胎児性抗原抗体結合体を作る。さらに洗浄後、金コロイド標識抗ウサギＩｇＧ抗体を反応させて、マウス抗癌胎児性抗原抗体結合ビーズ−抗原−ウサギ抗癌胎児性抗原抗体−金コロイド標識抗ウサギＩｇＧ抗体結合体を作る。この後、洗浄後、熱レンズ顕微鏡（Analytical Chemistry 2001, 73, 2112-2116（非特許文献２））で、結合した金コロイド量から結合した抗原である、癌胎児性抗原の濃度を定量するというものである。彼らは、従来の酵素免疫測定法（ELISA)で、４５時間要していた反応をマイクロ流体システムを用いることにより３０分にまで短縮することに成功しており、測定感度もELISA で１ｎｇ／ｍＬであったのに対して、マイクロ流体システムを用いることにより、０．０３ｎｇ／ｍＬの検出感度に達している。さらに、用いるサンプル容量も５μＬと微量になっている。
しかしながら、Ｓａｔｏら分析に用いるマイクロチップ作製の工程が非常に複雑で、コストダウンが図れないのが最大の欠点である。例えば、該マイクロチップの作成の具体的な工程には、次のものが挙げられる。始めに、パイレックス（登録商標：コーニング社製）製などのガラスの洗浄を行う。通常、数種類の薬液を用いて洗浄を行う。乾燥後、このガラスにフォトレジストを塗布する。この後、露光装置にマスク、ガラスをセットして露光する。この後、現像液に浸して現像を行い、所定時間経過後にリンス液中で洗浄する。洗浄後、フッ化水素でエッジングを行い、この時点で流路を作製する。この後、フォトレジストを除去して、流路が彫られた側は完成となる。流体を流せるようにするには、この流路が彫られたガラスに、流路入口及び流路出口をドリルなどで穴開け加工した対となるガラスを密着させ、６５０℃５時間程度融着させる。こうして、流体を流すことが可能なマイクロチップが完成する。しかし、抗原などの生体高分子の結合を分析するためにはこれだけでは不十分で、抗体を結合させたポリスチレンビーズを、流路入口から流し込み、反応領域となる箇所に堰き止め、これで始めて生体高分子の分析に用いることが可能になる。以上のように、ガラスを用いたチップは工程が非常に多く、大量生産に必ずしも向いておらず、コストダウンを図ることができない。
このように、Ｓａｔｏらの分析に用いるマイクロチップ作製においては、マイクロチャンネルを形成するための２枚の基板の融着に６５０℃程度の加熱を必要とする。このため、抗体等のタンパク質に対して加熱を避けるために、２枚の基板の融着することによりマイクロチャンネルを形成した後に、抗原抗体反応により試料中の免疫物質を捕獲させるための固相としてガラスビーズ又は高分子ビーズに結合させた抗体を、該マイクロチャンネル内に導入して、マイクロチャンネル内部に堰き止めた状態として使用しなければならない。
素材にプラスチックを用いたマイクロチップ製造技術も報告されている（Analytical
Chemistry;69(14);2626-2630（非特許文献３））。非特許文献３に示されているマイクロチップはＤＮＡを電気泳動で分離するための装置にすぎず、生物学的物質を特異的結合により捕獲し分析するものではない。非特許文献３に示されているマイクロチップの作製方法は、射出成型により微細流路に対応する鋳型に融解したプラスチックを流し込み、微細流路に対応する部材を成型し、これとは別に準備した部材を何らかの方法で接着することにより、微細流路を有するマイクロチップを作製するというものである。この方法は、ガラスチップなどに比べると、工程が少なく大量生産、コストの面で非常に有利である。しかしながら、この方法でＳａｔｏらの行った様な様式で生物学的物質を特異的結合により捕獲し分析するには、ダムのような形状を鋳型となる側に設けておき、上述のような方法でマイクロチップを作製し、抗体結合ビーズを導入することにより実施するしかない。そのため、マイクロチップ自体は安価にできるにもかかわらず、その後の工程のために、必ずしもコスト的にメリットがあるとは考えられない。
ＷＯ０１／０３４３０２（特許文献５）に、ミクロ流体デバイスを用いた生体材料とのハイブリダイゼーションのためのバイオチャンネルアッセイが報告されている。該文献にはマイクロチャンネル内に形成されたミクロ構造物、または充填されたビーズ上に、特異的結合対メンバー、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチド、核酸および抗体／抗原を固定した状態で、マイクロチャンネル内に試料を流して、結合対を生成し検出することが示されているが、生物学的物質が失活しないように、分析装置を製造することに関して具体的な提案はない。
ＷＯ０２／０６５１３８（特許文献６）に、生体高分子と試料との結合の検出をマイクロチップ上で行ったり、結合した化合物を回収しその同定を行うことが示されている。
特開昭６３−５０３５１８号公報 米国特許６，４４８，００１ 特開昭６３−２７３０４２号公報 特開昭２００１−４６２８号公報 ＷＯ０１／０３４３０２ ＷＯ０２／０６５１３８ 特開平１１−１８７９００号公報 米国特許５，４４５，９３４ 米国特許５，８０７，５２２ 特開２０００−３５６６１１号公報 特表平９−５０３０６０号公報（ＷＯ９５／０８７７４） Analytical Chemistry 2001, 73, 1213-1218 Analytical Chemistry 2001, 73, 2112-2116 Analytical Chemistry;69(14);2626-2630 FASEB J. 2000 Jun;14(9):1041-60. J.Biomol Struct Dyn. 1999 Oct;17(2):175-91
抗原、抗体の免疫学的物質等の相互に特異的結合性を有する生物学的物質の何れか一方を、マイクロチップ内のチャンネルと呼ばれる流路内に固定化するのに、流路を形成するための２枚の部材の流路となる箇所に予め、測定すべき生物学的物質の何れか一方を固定化して、次いで２枚の部材を熱融着や接着剤により接合する方法が用いられる。この接合の際に必要とされる熱や、或いは接着剤の影響により、生物学的物質の特異的結合性の失活が引き起こされるという問題があった。マイクロチップのような極めて微量な生物学的物質を正確な量で固定化し、極めて微量な検体に含まれていると疑われる測定すべき生物学的物質を精度よく分析するための分析装置を構築するには、接合時の熱や、接着剤に含まれる揮発性有機化合物の影響は無視できない。
そこで、分析装置の製造過程に熱の負荷や、接着剤に含まれている有機化合物等の影響が存在しても、失活等の影響が無く、しかもマイクロチャンネルの流路となる部分に免疫物質等を容易に固定化可能な分析装置の出現が望まれる。
従来のマイクロチャンネルを形成した生物学的物質の分析装置は、測定すべき特定の生物学的物質に特化したものであり、他の生物学的物質の分析に容易に転用できず、汎用性がないので、製造コストにおいて不利であった。
本発明はこれらの課題を解決するためになされるものである。
本発明の生物学的物質の分析に使用される分析装置は、極微量の液体試料の分析に適したいわゆるマイクロ流体システムに属するものである。本発明の分析キットに用いられる分析装置は、２枚の部材の何れかに流路幅５ｍｍ以下の溝を形成し、２枚の部材を接合して、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の流路を形成している。これら２枚の部材を接合する前に、流路となる箇所の一部に核酸を結合させておき、その後、接合した後に、該核酸に相補的結合性を有する核酸と、測定されるべき生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドを結合させてなる結合体を含む試薬を分析装置の流路に導入して、該リガンドを分析装置内に固定化させているので、該リガンドは、分析装置の製造における２枚の部材の接合の際の熱融着による熱や接着剤からの有機溶剤の影響を受けることがなく、生物学的物質を捕獲する機能が保たれる。
本発明の分析方法の一番目の基本的な発明は、液体試料と分析試薬を混合したものを分析装置に導入する方法であり、次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法である。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置を用意すること；
ii） 該第１核酸（Ｎ１）に少なくとも相補的な塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）に、測定すべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）を結合させてなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、前記分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること;
iv) 固定化された複合体を測定すること。
本明細書において「少なくとも相補的」とは、核酸の相補鎖の組合せが完全に一致した場合に一番強力な結合が期待できるが、完全でない場合でも結合性を期待できることを意味する。
本発明の分析方法の二番目の基本的な発明は、液体試料と分析試薬を混合せずに別々に分析装置に導入する方法であり、次のｉ）−iii)の要件を含む分析方法である。
次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法である。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置を用意すること；
ii） 該第１核酸（Ｎ１）に少なくとも相補的な塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）に、測定すべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）を結合させてなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合せずに別々に該分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること;
iv) 固定化された複合体を測定すること。
本発明の分析方法は、複数種類の分析されるべき生物学的物質の分析方法にも適用できる。本発明の分析方法の三番目の基本的な発明は、液体試料と分析試薬を混合したものを分析装置に導入する方法であり、次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法である。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
ii） 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、前記分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
iv) 固定化された複合体を測定すること。
本発明の分析方法の四番目の基本的な発明は、液体試料と分析試薬を混合せずに別々に該分析装置の流路に導入する方法であり、次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法である。

ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
ii） 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを前記分析装置の流路に別々に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
iv) 固定化された複合体を測定すること。
上記の各分析方法において、試薬と液体試料を分析装置に導入することにより、分析装置の流路内に複合体として固定化させ、また、形成された複合体に標識物を結合させ、該標識物を測定することにより、生物学的物質を測定することができる。
本発明の分析方法は、サンドイッチ測定方法だけではなく、競合法を原理とする種々の低分子化合物から高分子化合物の測定にも適用できる。
本発明の分析方法における分析対象物は、生物学的物質であり、高分子としては、抗原、抗体、糖鎖、糖タンパク質、レクチン、受容体、ＤＮＡ、ＲＮＡであり、その他、生体中の物質と特異的に結合することができる物質であり、その物質の分子量に依存しないものが挙げられる。これらの分析対象物を分析するための試料には、血液、血漿、血清、尿、唾液、その他体液や、ＤＮＡ、ＲＮＡ、染色体や、ＤＮＡ、ＲＮＡを増幅させたもの、抗原、抗体、糖鎖、受容体を含む物体が試料となりうる。
分析装置
図１は本発明に用いられる分析装置の概略を示した平面図であり、図２はその断面図の１例である。１は分析装置であり、第１部材５と第２部材６が接合されて構成されている。第１部材５には、幅１μｍ−５ｍｍ、好ましくは５μｍ−２ｍｍ、最も好ましくは１０μｍ−５００μｍ、深さ１μｍ−７５０μｍ、好ましくは５μｍ−５００μｍ、最も好ましくは１０μ−１００μｍの断面の溝が形成されており、第２部材６と接合されたときに、流路２を形成する。流路の一方の端には流路入口３と他方の端には流路出口４が設けられている。この流路入口、流路出口の間に試薬、試料を導入するするための導入口を１個以上設けることや、目的に応じてこうした流路につながる別の流路を設けることも可能である。流路２内には、生物学的物質を捕獲し、分析するための捕獲ゾーン７が設けられている。
図３は、流路入口が一つであり、流路の途中で複数の流路に分岐し、流路出口が複数ある場合の分析装置の態様を示す。図３の分析装置１Ａでは、一つの流路２から分岐した複数の各流路内に、生物学的物質を捕獲し、分析するための捕獲ゾーン７−１、７−２、７−３、７−４、７−５、７−６が設けられ、流路において一つの流路入口３と複数の流路出口４−１、４−２、４−３、４−４、４−５、４−６が設けられている。
図４は、流路入口が複数であり、各流路の途中で１本の流路に収束し、流路出口が一つの場合の分析装置の態様を示す。図４の分析装置１Ｂでは、複数の各流路２内に、生物学的物質を捕獲し、分析するための捕獲ゾーン７−１、７−２、７−３、７−４、７−５、７−６が設けられ、流路において複数の流路入口３−１、３−２、３−３、３−４、３−５、３−６と一つの流路出口４が設けられている。
図５は、流路入口が一つであり、流路の途中で複数の流路に分岐し、さらに各流路の途中で１本の流路に収束し、流路出口が一つの場合の分析装置の態様を示す。図５の分析装置１Ｃでは、一つの流路２から分岐した複数の各流路内に、生物学的物質を捕獲し、分析するための捕獲ゾーン７−１、７−２、７−３、７−４、７−５、７−６が設けられ、分岐する手前の流路において一つの流路入口３が設けられ、収束した後の流路において一つの流路出口４が設けられている。
図６は、１種類以上の生物学的物質を分析するための分析装置であり、流路入口が一つであり流路出口が一つである場合の態様を示す。試料中に含まれる生物学的物質を捕獲するための捕獲ゾーンにおいて、該生物学的物質を含む複合体を捕獲するための第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化されている。
前記に説明した流路を複数有する図３、図４、図５のタイプの分析装置では、各流路内に捕獲ゾーンを設け、各捕獲ゾーン毎に種類の異なる生物学的物質を含む複合体を捕獲させるための第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）を固定化してもよく、また、各捕獲ゾーンにおいて第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）を種類毎に各々独立して固定化してもよい。又、各捕獲ゾーンにおいて、複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g ）を混在させて固定化することもできる。勿論、複数の捕獲ゾーンにおいて全て同一種類の第１核酸（Ｎ１）を固定することもできる。これらの流路入口、流路出口の途中に試薬、試料を導入するための導入口をさらに１個以上設けることや、目的に応じてこうした流路につながる別の流路を設けることも可能である。
本発明における分析装置１内に形成される流路２の断面は、正方形、長方形、多角形、半円形、円弧形、Ｕ字形、Ｖ字形の何れであってもよい。
第１部材５及び第２部材６の材質としては、ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ：略語、Anal.Chem.,Vol.69,pp.3451-3457,1997 ）、アクリル系樹脂(Anal.Chem.,Vol.69,pp.2626,1997)、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ：略語、Anal.Chem.,Vol.69,pp.4783,1997）、ガラス、環状オレフィンコポリマー、あるいは、これらの部材の表面にダイアモンドもしくはダイアモンドライクカーボン（特開２００２−３６５２９３号公報）、cetyltrimethylammonium bromide(CTAB)、Surmodics 、Reacti-Bind （Analytical Biochemistry, 317 (2003) 76-84 ）、ポリ−Ｌ−リジン、カルボジイミド、アミノ基、アルデヒド基、マレイミド基、デキストランなどで表面が修飾された物質等が用いられる。
第１部材及び第２部材は、例えば、次の方法により製造することができる。まず鋳型をシリコンウエハーのエッチングにより作成しておく。これに融解したポリマーを流し込んで構造を転写し、ポリマーを固化させる。転写により、幅１μｍ−５ｍｍ、好ましくは５μｍ−２ｍｍ、最も好ましくは１０μｍ−５００μｍ、深さ１μｍ−７５０μｍ、好ましくは５μｍ−５００μｍ、最も好ましくは１０μ−１００μｍの断面の溝の流路が形成され、分析有効長が数ｍｍ〜数１０ｃｍの分析装置の部材が形成される。ＰＤＭＳを素材とすればガラスやＰＤＭＳとの自然吸着により簡単に流路のシーリングが行える。プラスチックを用いたマイクロチャンネルは量産化が容易なので、コストの点で有利である。またガラスの場合は、フッ化水素の反応時間によって深さを調整しなければならないが、プラスチック製の場合は、一度鋳型を作製してしまえば射出成型の技術により再現性高く生産することが可能となる。
分析キット
前記した課題を解決するための本発明の分析キットには、次の一番目〜十番目の分析キットが挙げられる。
本発明の一番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａと試薬Ｂと分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａと試薬Ｂが同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キットである。すなわち、本発明の一番目の分析キットに用いられる分析装置は、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置である。また、本発明の一番目の分析キットに用いられる試薬Ａは、該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的な配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬である。また、本発明の一番目の分析キットに用いられる試薬Ｂは、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と標識物（Ｍ）が結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬である。
本明細書に記載の分析キットにおいて、「試薬Ａと試薬Ｂが同一の系に含まれている」とは、試薬Ａと試薬Ｂが均一に混ざり合った状態のことを意味し、「試薬Ａと試薬Ｂが独立して存在する」とは、試薬Ａと試薬Ｂが別体となって、分離した状態であることを意味する。
図７は、本発明の一番目の分析キットの概念図を示し、第１リガンド（Ｌ１）と第２リガンド（Ｌ２）が抗体である場合の、分析装置、第１試薬、第２試薬が独立して存在する例を示す。枠で囲った意味は他とは独立して存在していること、すなわち、別体となって、分離した状態で使用可能なことを意味する。図７における１１は、分析装置の流路内の捕獲ゾーンのみを示しており、固相（Ｓ）上に第１核酸（Ｎ１）が固定されている状態の図である。図７における１２は、第２核酸（Ｎ２）に第１リガンド（Ｌ１）としての抗体が結合されてなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを表す図である。図７における１３は、第２リガンド（Ｌ２）としての抗体に標識（Ｍ）が結合してなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂを表す図である。
標識（Ｍ）と第２リガンド（Ｌ２）の結合様式は、本発明の一番目の分析キットに限られず、本発明の全ての分析キットに適用される。図７では試薬Ａ１２と試薬Ｂ１３は異なる枠の中に表され、即ち、互いに独立して存在することが示されているが、図７とは異なる形態として、試薬Ａ１２と試薬Ｂ１３が同一の枠に存在し、均一に混合された形態、即ち、同一の系でもよい。
本発明の二番目の分析キットは、前記第一番目の分析キットにおいて、第２リガンド（Ｌ２：抗体）に標識（Ｍ）が結合してなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂに代えて、次の試薬Ｂ’と試薬Ｃを使用するものである。即ち、本発明の二番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ，試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上は同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；
ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的な配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ； iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’；及び、
iv) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
本発明の三番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、以下の分析装置と試薬Ａからなり、標識物を含まないキットである。本発明の三番目の分析キットは、標識物を予め導入した生物学的物質を分析対象物としているため、キットの構成要素として標識物を含ませる必要がない。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；及び、
ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的な配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ。

本発明の四番目の分析キットは、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合のキットである。即ち、本発明の四番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ｂと分析装置を組み合わせてなる分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と標識物（Ｍ）が結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ。
図８は、前記本発明の四番目の分析キットの概念図であって、特に、第１リガンド（Ｌ１）と第２リガンド（Ｌ２）が抗体である場合の分析キットを示す。図８において四角い枠で囲った意味は、分析装置、試薬が独立して存在していることを示す。図８における１４は、分析装置の流路内の捕獲ゾーンのみを示した分析装置であり、固相（Ｓ）上に第１核酸（Ｎ１）が固定され、第２核酸（Ｎ２）と第１リガンド（Ｌ１）からなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）が相補的核酸塩基の特異的結合により該第１核酸（Ｎ１）に結合された状態を示す。図８における１５は、第２リガンド（Ｌ２：抗体）に標識（Ｍ）が結合してなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂを表す。
本発明の五番目の分析キットは、前記四番目の分析キットにおいて、第２リガンド（Ｌ２）に標識（Ｍ）が結合してなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂに代えて、次の試薬Ｂ’と試薬Ｃを使用するものである。即ち、本発明の五番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ、試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上が同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
ii） 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’。
iii) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
本発明の六番目の分析キットは、前記一番目の分析キットの構成を基にして、１種類以上の生物学的物質の分析ができるように改造したものである。即ち、本発明の六番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａ、試薬Ｂ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａと試薬Ｂは同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
ii) 該捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ；及び、
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j と lは独立した整数）を含む試薬Ｂ。
本明細書において、複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）とは、Ｎ１1 、Ｎ１2 、…、Ｎ１g ( g は整数）からなる複数種類の第１核酸を意味する。同様に、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）もＮ２1 、Ｎ２2 、…、Ｎ２h ( h は整数）からなる複数種類の第２核酸を意味する。複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）に付したi 、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）に付したj 、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に付したk 、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）も、各々の物質の種類が１、２、…等の１種類以上又は複数種類存在することを意味する。
本発明の七番目の分析キットは、前記二番目の分析キットの構成を基にして、１種類以上の生物学的物質の分析ができるように改造したものであり、かつ、前記六番目の分析キットにおいて、第２リガンド−標識物（試薬Ｂ）に代えて、第２リガンド（試薬Ｂ’）、第３リガンド−標識物（試薬Ｃ）とした分析キットである。即ち、本発明の七番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ，試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上は同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
ii) 該捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ；
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’；及び、
iv) 該１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）に種類毎に特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ。
本発明の八番目の分析キットは、前記三番目の分析キットの構成を基にして、１種類以上の生物学的物質の分析ができるように改造したものである。本発明の八番目の分析キットは、標識物を導入した複数種類の分析対象物のための分析キットであり、標識物を含まない。即ち、本発明の八番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ａと分析装置とからなる分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ。
本発明の九番目の分析キットは、前記四番目の分析キットの構成を基にして、１種類以上の生物学的物質の分析ができるように改造したものである。本発明の九番目の分析キットは、試薬の一部としての、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが分析装置内に固定化されている場合のキットであり、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ｂと分析装置を組み合わせてなる分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数) を、第１核酸と第２核酸の特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質の種類毎に特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j と lは独立した整数）を含む試薬Ｂ。
本発明の十番目の分析キットは、前記五番目の分析キットの構成を基にして、１種類以上の生物学的物質の分析ができるように改造したものである。本発明の十番目の分析キットは、試薬の一部としての、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが分析装置内に固定化されている場合のキットであり、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ｂ’と試薬Ｃと分析装置を組み合わせてなる分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数) を、第１核酸と第２核酸の特異的結合性により形成して捕獲ゾーンに各々独立して固定化してなる分析装置；及び、
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’；
iii) 該１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ。
本発明の分析キットに含まれる第１リガンド（Ｌ１）、場合によって含まれる第２リガンド（Ｌ２）、及び第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）には、免疫学的物質、受容体、受容体に結合する物質、糖類、糖タンパク質、糖脂質、レクチン及び核酸から選ばれたものが挙げられる。本発明の分析キットを構成するために使用することができる核酸には、５塩基以上の核酸塩基からなるＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ（FASEB J. 2000 Jun;14(9):1041-60.（非特許文献４））、あるいはＬＮＡ（Locked Nucleic Acid の略語：J Biomol Struct Dyn. 1999 Oct;17(2):175-91（非特許文献５））が挙げられる。
本発明の分析キットに含まれる第１リガンド（Ｌ１）及び第２リガンド（Ｌ２）は、反応性が同一であっても、異なっていてもよい。例えば、第１リガンド（Ｌ１）及び第２リガンド（Ｌ２）が抗体であって、測定されるべき生物学的物質が抗原である場合には、各々第１リガンド（Ｌ１）及び第２リガンド（Ｌ２）は、同一の生物学的物質に存在する異なるエピトープに反応性を有するものであってもよいし、同一のエピトープに反応性を有するものであってもよい。
分析対象物が核酸である場合にも、前記各分析キットと同様な分析キットを構成することができる。具体的には、前記各分析キットにおいて、第１リガンド（Ｌ１）として、測定すべき核酸の少なくとも相補的塩基配列を含む第１プローブ核酸（ＰｒＮ１）を用い、且つ、第２リガンド（Ｌ２）として、測定すべき核酸において、第１プローブ核酸（ＰｒＮ１）の結合部位とは異なる部位に結合することができる第２プローブ核酸（ＰｒＮ２）を用いることにより、前記各分析キットと同様な構成の核酸を分析する分析キットを作製することができる。
本発明の分析キットに使用できる標識物（Ｍ）には、蛍光物質、金属コロイド、酵素、核酸、金属、糖、レクチン、ビオチン、ビオチンに結合性を有する物質（ストレプトアビジン、アビジン、ニュートリアビジンが挙げられる。１種類以上の生物学的物質の分析のための本発明の分析キットにおける第２リガンド又は第３リガンドに結合される１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）は、各々同一の物質であってもよく、異なる物質であってもよい。
標識を導入された分析対象物としての生物学的物質を分析する装置として、試薬が分析装置の流路内の捕獲ゾーンに固定化されている分析装置であれば、該試薬を別体として用いることなく、分析装置を構築することができる。このような生物学的物質の分析装置は、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置である。該分析装置では、標識が導入された生物学的物質を分析対象物としているので、分析するのに標識物を含む試薬を用いる必要がなく、後記に詳述する分析方法で適用できる。
また、標識を導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、次の分析装置を構成することができる。即ち、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｌ１i −Ｎ２h :iとh は独立した整数）を、第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性により結合して捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化してなる分析装置である。
上記の本発明の各分析キットに用いられる分析装置、あるいは本発明の各分析装置において、第１部材、或いは第２部材の流路となる箇所の捕獲ゾーンとなる部位に、ＤＮＡを結合させる方法としては、サーマルインクジェットヘッドにより核酸を含む液体を液滴として、固相に付着させて、核酸を固定化する方法（特開平１１−１８７９００（特許文献７））、シリコン等の支持体にフォトリソグラフ法で複数のオリゴヌクレオチドを並べて形成するアフィメトリクス方式（米国特許５，４４５，９３４（特許文献８）等）、またはスライドガラスに多種の核酸をスポッティングによって並べて固定化するスタンフォード式（米国特許５，８０７，５２２（特許文献９））などが本発明における分析装置の製造方法に適用可能である。
上記の本発明に用いられる各分析装置では、流路内に固定化された第１核酸（Ｎ１）に、さらに該第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列の第２核酸（Ｎ２）と第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む溶液を流路内に送液して、結合体（Ｎ２−Ｌ１）を該第１核酸（Ｎ１）に特異的に結合させて固定化させているので、結合体（Ｎ２−Ｌ１）の固定化の作業は、第１部材と第２部材を接合した後に行うことができる。即ち、本発明では結合体（Ｎ２−Ｌ１）の固定化の作業は、第１部材と第２部材を接合の後に行われるので、第１リガンド（Ｌ１）が抗体、タンパク質等の熱や、接着剤により失活しやすい物質である場合、第１部材と第２部材の接合時の熱や接着剤の影響が第１リガンド（Ｌ１）に及ばないという利点がある。
また、本発明に用いられる分析装置では、固定化された第１核酸（Ｎ１）と、その後に固定化を行う第２核酸（Ｎ２）と第１リガンド（Ｌ１）からなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）は、別体として作製されているので、固定化された第１核酸（Ｎ１）を有する分析装置を作製しておけば、第１リガンドの種類を変えた種々の結合体（Ｎ２−Ｌ１i ：i は整数）を作製し、目的とする生物学的物質の種類に応じて、特異的に結合できる結合体（Ｎ２−Ｌ１1 ）、（Ｎ２−Ｌ１2 ）、…（Ｎ２−Ｌ１n ）の内の一つを選択し、前記固定化した第１核酸（Ｎ１）に結合させて固定化できる。したがって、本発明に用いられる分析装置は、生物学的物質の種類に特化した専用の分析装置を製造するための個々の多段の製造プロセスを行うことなく、生物学的物質の種類に応じた、第２核酸と第１リガンドからなる種々の結合体（Ｎ２−Ｌ１1 ）、（Ｎ２−Ｌ１2 ）、…（Ｎ２−Ｌ１i ：i は整数）を用意しておけば、固定化された第１核酸（Ｎ１）を有する一種類の分析装置で無限の種類の生物学的物質に対応した分析や、或いは分析装置の調製が簡単なプロセスで行える。
分析方法
本明細書において「分析」とは、分析対象物の存在の有無の確認、或いはその量を測定することを意味する。
本発明の４種類の基本的な分析方法は、前記した通りである。さらに具体的な本発明の分析方法の態様を以下に示す。
前記一番目の分析キット（即ち、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置を含む分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法は、試薬Ａ、試料、試薬Ｂの２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後、残りの材料があればさらに導入する分析方法である。即ち、前記一番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記一番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の内、任意の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記一番目の分析キット（即ち、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置を含む分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法は、試薬Ａ、試料、試薬Ｂを混合することなく別々に任意の順で分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記一番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記一番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記二番目の分析キット（即ち、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなる分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法は、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃの２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後、残りの材料があればさらに導入する分析方法である。即ち、前記二番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記二番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と第３リガンド（Ｌ３）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記二番目の分析キット（即ち、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなる分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法は、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃを別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記二番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記二番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ． 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と第３リガンド（Ｌ３）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
生物学的物質（Ｏ）が抗原である場合について、前記一番目の分析キットを用いた本発明の一番目、二番目の各分析方法、或いは前記二番目の分析キットを用いた本発明の一番目、二番目の各分析方法を適用したときの、適用後の捕獲ゾーンにおける状態を図９に示す。図９の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）に、結合体（Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）が捕獲されている。
また、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）が核酸（ＯＮ）である場合について、前記一番目の分析キットを用いた本発明の一番目、二番目の各分析方法、或いは前記二番目の分析キットを用いた本発明の一番目、二番目の各分析方法を適用したときの、適用後の捕獲ゾーンにおける状態を図１０に示す。図１０は、図９におけるリガンドＬ１を、測定されるべき核酸（ＯＮ）に特異的に結合する第１プローブ核酸（ＰｒＮ１）に置き換え、さらに図９におけるリガンドＬ２を、測定されるべき核酸（ＯＮ）のさらに別の部位へ特異的に結合する第２プローブ核酸（ＰｒＮ２）に置き換えたものである。すなわち、固相（Ｓ）上に第１核酸（Ｎ１）が固定化されており、該第１核酸の塩基配列に対して少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき核酸（ＯＮ）に対して特異的結合性を有する第１プローブ核酸（ＰｒＮ１）とを結合させてなる第１プローブ結合体（Ｎ２−ＰｒＮ１）が、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性により結合されており、さらに測定されるべき核酸（ＯＮ）が、第１プローブ核酸（ＰｒＮ１）と核酸（ＯＮ）との特異的結合性により前記プローブ核酸結合体（Ｎ２−ＰｒＮ１）と結合されており、さらに、測定されるべき核酸（ＯＮ）に対して特異的結合性を有する第２プローブ核酸（ＰｒＮ２）と標識物（Ｍ）とからなる第２プローブ結合体（ＰｒＮ２−Ｍ）が、第２プローブ核酸（ＰｒＮ２）と測定されるべき核酸（ＯＮ）との特異的結合性により結合されている。
前記三番目の分析キット（即ち、標識物を含まない分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法は、標識を導入した生物学的物質を分析対象物とした分析方法であり、液体試料と試薬Ａを予め混合しておいたものを、分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記三番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記三番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａと、前記標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）とを、予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
ｖ) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記三番目の分析キット（即ち、標識物を含まない分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法は、標識を導入した生物学的物質を分析対象物とした分析方法であり、液体試料と試薬Ａを混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記三番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記三番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａと、前記標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）とを、混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
ｖ) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
本発明の標識物導入生物学的物質は、公知の種々の方法で作製することができる。例えは、試料からｐｏｌｙ（Ａ）+ ＲＮＡを精製し、ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）12-18ｐｒｉｍｅｒ、ｄＮＴＰ、及び、蛍光色素であるＣｙ５或いはＣｙ３で標識されたｄＵＰＴ存在下で、Ｔ７ＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅを反応させることによって、ＲＮＡを増幅させ、この増幅したＲＮＡを生物学的物質とすることが可能である。あるいはこれを鋳型として逆転写酵素を反応させることによって、Ｃｙ５或いはＣｙ３で標識されたＤＮＡを調製しこれを生物学的物質とすることも可能である。
したがって、本発明の標識物導入生物学的物質は、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に標識物（Ｍ）を導入したものだけではなく、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）を基にして合成された別の種類の生物学的物質（Ｏ）、例えば、ＲＮＡから逆転写酵素によって合成されたＤＮＡ、に標識物（Ｍ）を導入したものを含む。
本発明の四番目の分析キット（即ち、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合のキット）を用いた一番目の分析方法であり、液体試料と試薬を予め混合したものを分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記四番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記四番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料と、
ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び結合体（Ｌ２−Ｍ）中の第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記四番目の分析キット（即ち、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合のキット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料と試薬を別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記四番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記四番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．の材料を混合することなく別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料と、
ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び結合体（Ｌ２−Ｍ）中の第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記五番目の分析キット（即ち、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合のキットであって、四番目のキットにおいて、第２リガンド−標識物（試薬Ｂ）に代えて、第２リガンド（試薬Ｂ’）、第３リガンド−標識物（試薬Ｃ）とした分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃのうち２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記五番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記五番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び第２リガンドと第３リガンドとの特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記五番目の分析キット（即ち、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合のキットであって、四番目のキットにおいて、第２リガンド−標識物（試薬Ｂ）に代えて、第２リガンド（試薬Ｂ’）、第３リガンド−標識物（試薬Ｃ）とした分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃのうち２種以上を混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記五番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記五番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び第２リガンドと第３リガンドとの特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記六番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂのうち２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記六番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記六番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記六番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂを混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記六番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記六番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記七番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃを予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記七番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記七番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記七番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃを混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記七番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記七番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記八番目の分析キット（即ち、標識物が組み込まれた１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、を予め混合したものを分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記八番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記八番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを、予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記八番目の分析キット（即ち、標識物が組み込まれた１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、を混合することなく別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記八番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記八番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記九番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キットであって、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料と試薬を予め混合したものを分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記九番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記九番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i : ｇ、h 、i は独立した整数）中の複数の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び試薬中の結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）の１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記九番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キットであって、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料と試薬を混合することなく別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記九番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記九番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i : ｇ、h 、i は独立した整数）中の複数の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び試薬中の結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）の１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記十番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質のための分析キットであって、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃのうち２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記十番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記十番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
． ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記十番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質のための分析キットであって、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃを混合することなく別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記十番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記十番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合することなく別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
標識物が分析対象物に導入されている場合の分析装置及び分析方法
標識物が導入された分析対象物としての生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている装置は、本発明の分析に利用できる。該分析装置は、即ち、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置である。
また、標識物が導入された分析対象物としての生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている分析装置を用いた本発明の分析方法は、次のｉ）−ｖ) の要件を含む：
ｉ） 標識物が導入された分析対象物としての生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている前記した装置を用意すること；
ii） 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
iii)該分析装置の流路に、該標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１リガンド（Ｌ１）と第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｌ１−Ｎ２）における第１リガンド（Ｌ１）と、該標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）における生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
ｖ） 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
前記標識物を導入された生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている装置を用いて、１種類以上の生物学的物質を分析するための分析装置及びその分析方法は次のようになる。
即ち、該１種類以上の生物学的物質の分析装置は、即ち、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｌ１i −Ｎ２h ）を、第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合により形成して捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化してなる分析装置である。
また、標識物が導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている分析装置を用いた本発明の分析方法は、次のｉ）−ｖ) の要件を含む：
ｉ） 標識物が導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている前記した装置を用意すること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 該分析装置の流路に、該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）における１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍ1 ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ） 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
本発明の上記何れの分析方法において用いる分析装置の流路の流速が０．１〜５０μＬ／分であることがマイクロ流体システムを構築する上で望ましい。
本発明の上記何れの分析方法において、分析装置の流路に、試料、試薬を導入するには、例えば、シリンジポンプ、ペリスタポンプを用いて液体を加圧して送液する場合、シリンジポンプ、ペリスタポンプを用いて吸引することにより送液する方法、電気浸透流を用いて溶液自体を流さずに溶質のみを流す方法が挙げられる。
本発明の上記何れの分析方法において、標識物を検出する方法は、蛍光測定、発光測定、分光光度的測定、熱レンズ測定、表面プラズモン吸収測定、電気化学的測定、目視による測定があげられる。熱レンズ測定には、特開２０００−３５６６１１号公報（特許文献１０）に記載された分析方法で、非常に高感度に検出できる。マイクロ化学技研株式会社より販売されている、ITML−１０やITML−１１を用いて測定が可能である。また、Yamaguchi ら（Y. Baba et al. (eds), Micro Total Analysis Systems 2002, Vol. 1, 281-283）の技術によるSELFOCレンズを用いた小型化された熱レンズ顕微鏡デバイスを用いた測定も可能である。
本発明の上記何れの分析方法において、分析対象物は、前記分析キットに関する説明に示したとおりである。
ランダムアクセス分注システムを用いることによって、無限大の測定の組み合わせの中から、選択された任意の１つの組み合わせ項目の測定を実施することが可能となる。特表平９−５０３０６０号公報（ＷＯ９５／０８７７４）（特許文献１１）に記載されているようなランダムアクセス分注システムを本発明における分析装置に適用することによって、無限大の測定の組み合わせの中から選択された、任意の１つの組み合わせ項目の自動測定を実施することが可能となる。例えば、１つのマイクロチップ中に１０種類の異なる配列Ａ、Ｂ〜Ｊを有するオリゴヌクレオチドを結合させておき、それぞれ、Ａ〜Ｊに相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドに異なる１０種類の免疫学的配位子を結合させ、それぞれの免疫学的配位子に相当する標識物質を結合させた物質を準備しておくことで、１０10の組み合わせから選択された１つの任意の組み合わせ測定を実施することができる。さらに、それぞれ、Ａ〜Ｊに相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドに異なる１００種類の免疫学的配位子を結合させ、それぞれの免疫学的配位子に相当する標識物質を結合させた物質を準備しておくことで、１００10の組み合わせから選択された１つの組み合わせの測定を実施することができる。
分析装置の製造方法
本発明の分析装置の製造方法は、２枚の部材を融着する前に２枚の部材の流路となることが予定されている箇所に、リガンドを結合するための核酸を固定化しておくことに特徴を有する。本発明の分析装置の製造方法には、次の方法が挙げられる。
（１）幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材を用意し、
該溝は第１部材と第２部材を接合したときに流路となる部分であり、該第１部材又は第２部材の何れかに、或いは両方に、流路入口及び流路出口を有し、
（２）第１部材及び／又は第２部材における流路となることが予定されている部分であって、測定されるべき生物学的物質を捕獲するためのゾーンとなる部分に、任意の塩基配列の核酸（Ｎ）を固定化し、
（３）次いで、第１部材及び第２部材を熱融着又は接着剤により接合することにより流路を形成した接合体とし、
（４）該接合体の流路に、捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを導入し、捕獲ゾーンの第１核酸（Ｎ１）に該結合体（Ｎ２−Ｌ１）を特異的結合により結合させて固定化することにより分析装置を得る。
測定すべき生物学的物質が複数種類の場合には次の分析装置の製造方法が好ましい。
（１）幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材を用意し、
該溝は第１部材と第２部材を接合したときに流路となる部分であり、該第１部材又は第２部材の何れかに、あるいは両方に流路入口及び流路出口を有し、
（２）第１部材及び／又は第２部材における流路となることが予定されている部分であって、測定されるべき生物学的物質を捕獲するためのゾーンとなる部分に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）を各々独立させて固定化し、
（３）次いで、第１部材及び第２部材を融着又は接着剤により接合することにより流路を形成した接合体とし、
（４）該接合体の流路に、捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２ｈ：ｈは整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１ｉ：ｉは整数）とからなる結合体（Ｎ２ｈ−Ｌ１ｉ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａを流して、捕獲ゾーンの複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）に該結合体（Ｎ２ｈ−Ｌ１ｉ：ｈとｉは独立した整数）を特異的結合により固定化することにより１種類以上の生物学的物質の分析に適した分析装置を得る。
本発明における分析装置の製造に用いる第１部材及び第２部材の材質は、ガラス、ポリジメチルシロキサン、セラミックス、アクリロニトリル・ブタジエンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリル・エチレンプロピレンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリルスチレン樹脂、メタクリルスチレン樹脂、ポリアミド・ナイロン樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート・ポリエステル樹脂、ポリイミド樹脂、メタクリル樹脂、ポリアセタール樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリフェニレンエーテル樹脂、ポリフェニレンサルファイド樹脂、ポリスチレン樹脂、熱可塑性エラストマー樹脂、アロイ、液晶ポリマー樹脂、シクロオレフィン樹脂、熱可塑性樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、ジアリルフタレート樹脂、環状オレフィンコポリマー、及び、これらの部材表面が修飾されたものから選ばれたものが挙げられる。第１部材と第２部材は、同じ材質であっても、異なる材質であってもよい。
本発明の分析装置の製造において、上記の各材質の第１部材及び第２部材の融着温度は、７０℃−１４０℃であることが好ましい。７０℃未満であると融着が十分ではなく、また１４０℃を越えると、これらの部材に直接固定される第１核酸が熱により影響を受けるからである。また、核酸はタンパク質に比べて溶剤に対して失活しないことが知られていることから（Molecular cloning second edition, Sambrook、Fritsch、Maniatis著、ColdSpring Harbor Lavoratory Press, 1989（非特許文献６）; Applied Biosystem DNA Synthesizer model 391 user manual （非特許文献７））
前記に説明した、分析キット、分析装置、分析方法、分析装置の製造方法において、使用されるリガンドは、測定されるべき生物学的物質に対して特異的結合性を有するものである。例えば、測定されるべき生物学的物質が、抗原である場合にはリガンドは抗体であり、抗体である場合にはリガンドは抗原であり、核酸である場合にはリガンドはプローブ核酸（ＰｒＮ）である。
本発明の分析装置の製造方法を用いると、生体高分子等の生物学的物質の分析を行うための、マイクロ流体システムによる生物学的物質の分析装置を簡単な製造プロセスで、再現性高く製造することができるようになる。また、本発明の分析装置と試薬を組み合わせた分析キットを用いると、精度高く生体高分子を分析することができるようになり、臨床診断において有用である。
本発明に使用する分析装置における第１核酸（Ｎ１）を結合した流路中に、該核酸に少なくとも相補的塩基配列を有する核酸に第１リガンド（Ｌ１）を結合させることにより、直接、第１リガンド（Ｌ１）を固相に結合させる場合に比べて、以下の１．〜３．の優位点が出現する。
１．生物学的物質を捕捉するためのリガンドとしての免疫学的配位子は一般的にタンパク質で有ることが多いが、タンパク質の場合は、熱、有機溶媒などに不安定で、例えば、プラスチック素材のシーリングなどにおいて７５〜１１２℃５分以上の条件が必要となるが（L.E. Locascio ら、J. Chromatogr. A、８５７（１９９９）２７５−２８４）、タンパク質はこうした温度ではきわめて不安定である。そのため、免疫学的配位子を直接プラスチックなどに固定化を行い、シーリングを行った場合、失活してしまう可能性が極めて高い。しかしながら、オリゴヌクレオチドなどの核酸は、タンパク質に比べて熱や種々の有機溶媒に対して安定であることがわかっているため、１００℃以上の温度でシーリングを行っても、相補的な核酸と結合能を保持していることが容易に予測される。実際、本明細書中、実施例で記載するが１１０℃で１時間加温してもハイブリダイゼーションの効率に影響が無いことが確認されている。そのため、本発明の様式により製造されたチップを用いると、固定化された核酸に対する相補的な核酸を免疫学的配位子に結合させ、相補的核酸−免疫学的配位子複合体を流路に流し、固相に結合された核酸と該相補的核酸−免疫学的配位子複合体を結合させることにより、容易に免疫学的配位子を結合させた微細流路を有するチップを作製することが可能となる。この一連の反応は、それぞれの試薬ごとに反応を行っても、反応の一部あるいは全てを同時に行うこともできる。例えば、Ｃａｉｎら（Ａｌｌｅｒｇｙ（１９９８）５３、１２１３−１２１５）は、ダニ由来のアレルゲンの一種であるＤｅｒ ｐ１、Ｄｅｒｆ１などを熱処理してその抗原性の失活の程度を確認している。この実験成績によると、Ｄｅｒ ｐ１は１００℃ ３０分の加熱によってもとの抗原性の８５％が、また、Ｄｅｒｆ１は、１００℃３０分の加熱によって９８％の抗原性が失活することが確認されている。アレルギー検査のためにプラスチック材料上にこうした抗原を塗布し、溝を有する部材との熱融着を行う工程により抗原性が失活してしまい、正しい測定を行うことができない可能性が非常に高い。しかしながら、本発明による方法を用いるとこうした熱による抗原性の失活を回避できるため、抗原性失活のない状態で測定を行うことが可能となる。
次に接着剤を用いて第１部材と第２部材を接合した場合を考察する。例えば、核酸を抽出する際に、フェノール抽出が一般的に行われている。これは、生体試料から核酸を抽出する際に、フェノールによってタンパク質を変性させて沈殿させ、変性しない核酸を水相中に回収するという方法である。核酸はこの条件、つまりフェノールに曝露されても変性することはないし、これ以外にも、有機溶媒を用いた精製として、フェノール／クロロホルム／イソアミルアルコール（２５／２４／１）、クロロホルム／フェノール（１／１）、イソプロパノールを用いた方法（非特許文献６）があるが、こうした条件下でも変性することはない。しかしながら、タンパク質はこうした条件下で変性してしまうことが知られている。また、オリゴヌクレオチド合成時に、アセトニトリル（１００％）、ジクロロメタン（８６％）、テトラヒドロフラン（８４％）を用いるが（非特許文献７）、こうした溶媒中でも核酸は変性しないが、タンパク質は多くの場合変性してしまう。
以上のことから、タンパク質を固相に結合させた場合は、固相化したタンパク質が接着剤に含まれる有機溶媒に曝露されることにより、変性してしまう可能性が非常に高いが、核酸を固相化させた場合には、結合性が低下する可能性はタンパク質に比べると遙かに低い。
２．免疫学的配位子を安定に微細流路中に固定できても、分析項目が変わると それに対応した免疫学的配位子を固定化したチップを作製する必要があった。そのため、固定化する免疫学的配位子の物性に適切な固定化条件を実験的に求め、その条件で固定化する必要があった。この作業は、比較的物性が一定している抗体の場合は難しい作業ではないが、物性の大きく異なる抗原の場合は再現性良く固定化することは非常に難しい作業であった。しかしながら、本発明の方法によると、固定化するのは核酸であり、アミノ酸配列により物性が大きく異なる免疫学的配位子に比べて、配列の違いで大きく物性が異なることはなく、ほとんど同条件で結合させることができることが知られている、核酸の固定化方法をそのまま流用することが可能である。
また、安定に固定化できる条件を見いだすことができても、測定すべき生物学的物質の種類に応じて異なるリガンドとしての免疫学的配位子や核酸を固定化したチップを調製する必要があり、製造計画を綿密に立てる必要があった。そうしなければ、不良在庫を抱え込んでしまうことになりかねなかった。しかしながら、本発明の方法によれば、測定対象物が免疫学的活性物質であっても、あるいは、核酸であっても、測定対象物とは全く関係がない任意の配列の核酸を固定化することで、それぞれの測定項目と用いるチップは完全に独立に考えることができるようになる。例えば、塩基配列１を結合した微細流路中に結合させたチップがあれば、塩基配列１に相補的な塩基配列１’に抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体を結合させたものと組み合わせれば、そのチップはＢ型肝炎表面抗原用に用いることができるし、このチップと塩基配列１’にＣ型肝炎抗原を結合させたものを組み合わせれば、そのチップはＣ型肝炎抗体検出用に用いることができる。さらに、塩基配列１’に、脂肪細胞分化に関連する遺伝子の配列の一部に結合する配列を結合させておき、脂肪細胞分化に関連する遺伝子の配列に結合する標識された核酸があれば、今まで免疫学的配位子の検出・測定に用いていたチップをそのまま、脂肪細胞分化に関連する遺伝子配列の検出にも用いることが可能になる。このことは、１つの核酸固定化チップと、これに結合する相補的核酸が結合した分析対象物に結合する複合体が有れば、ありとあらゆる測定対象物を１種類の核酸固定化チップで分析できるようになることを意味しており、チップ製造コストの大幅なコストダウンを実施することが可能となる。
本発明に用いられる分析装置の一例を示す概略的な平面図である。 図１の断面図である。 流路入口が一つであり、流路の途中で複数の流路に分岐し、流路出口が複数ある場合の分析装置の態様を示す図である。 流路入口が複数であり、各流路の途中で１本の流路に収束し、流路出口が一つの場合の分析装置の態様を示す図である。 流路入口が一つであり、流路の途中で複数の流路に分岐し、さらに各流路の途中で１本の流路に収束し、流路出口が一つの場合の分析装置の態様を示す図である。 １種類以上の生物学的物質を分析するための分析装置であり、流路入口が一つであり流路出口が一つである場合の態様を示す図である。 本発明の一番目の分析キットの概念図を示し、第１リガンド（Ｌ１）と第２リガンド（Ｌ２）が抗体である場合の、分析装置、第１試薬、第２試薬が独立して存在する場合の例を示す図である。 本発明の四番目の分析キットの概念図を示し、第１リガンド（Ｌ１）と第２リガンド（Ｌ２）が抗体である場合の、分析装置、試薬が独立して存在している場合の例を示す図である。 生物学的物質（Ｏ）が抗原である場合について、一番目の分析キット及び二番目の分析キットを用いた一番目、二番目の各分析方法を適用したときの、適用後の捕獲ゾーンにおける状態を示す図である。 測定されるべき生物学的物質が核酸（ＯＮ）である場合の、捕獲ゾーンに結合される結合体を示す図である。 実施例１の分析の結果をグラフとして示す図である。 チップＡ、チップＢ、チップＣ−１、チップＣ−２を用いて、ＨＢｓ抗原を含む、或いは含まない試料と反応させた場合に、ＤＮＡマイクロアレイスキャナー（Biodetect 645 Reader：商品名、GeneScan社製）で蛍光強度を検出した結果を表すグラフである。 基板にオリゴヌクレオチドを塗布した後に熱融着により調製したプラスチック製チップを用いた免疫測定の結果を表すグラフである。
符号の説明
１、１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１１、１４ 分析装置
２ 流路
３、３−１、３−２、３−３、３−４、３−５、３−６ 流路入口
４、４−１、４−２、４−３、４−４、４−５、４−６ 流路出口
５ 第１部材
６ 第２部材
７、７−１、７−２、７−３、７−４、７−５、７−６ 捕獲ゾーン
１２ 試薬Ａ
１３，１５ 試薬Ｂ
５’末端にアミノ基を導入した配列番号１に示したAmino group-CGA CGG ATC CCC GGG AAT TC（配列番号１）なる配列を有するオリゴヌクレオチドＡを合成し、オリゴヌクレオチドＡ８．４５μＭとなるように、ＥＤＴＡ １ｍＭを含むＰＢＳ（−）で希釈した。この溶液を、ジーンスライド（商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上に直径１ｍｍになるようにスポットした。この後、１００℃に加温したホットプレート上で１時間加温し、オリゴヌクレオチドＡを共有結合により固定化した。次いで、２×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳで１５分洗浄し、９０℃の２×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳで５分洗浄後、滅菌水で洗浄して、乾燥させて、オリゴヌクレオチドＡ固定化スライドガラスを調製した。
前記工程（１）で調製したオリゴヌクレオチドＡを固定化したオリゴヌクレオチド固定化スライドガラスに、微細流路となる溝（幅：３００μｍ、高さ、１００μｍ）が形成されているポリジメチルシロキサン（以下、ＰＤＭＳと呼ぶ）の平板を、スライドガラス上に固定化したオリゴヌクレオチドＡ上に流路が設置されるように圧着するように貼り合わせることにより接合して、チップを作製した。チップの内部に形成された流路（幅：３００μｍ、高さ、１００μｍ）に、２％ＢＳＡおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、次いで、固定化したオリゴヌクレオチドＡと相補的なオリゴヌクレオチドＢ結合抗ＨＢｓ抗体（Oku らの方法（J Immunol Methods. 2001 Dec 1;258(1-2):73-84.）により調製）を５００μｇ／ｍＬの濃度になるように０．１％ＢＳＡおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ（以下、０．１％ＰＢＳ）で希釈したものを１５分間送液した。次いで、０．１％ＰＢＳで５分間送液することにより洗浄し、５０ｎｇ／ｍＬになるように０．１％ＰＢＳで調製したＨＢｓ抗原を１５分間送液した。この後、０．１％ＰＢＳで５分間送液して洗浄し、１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、３０μｇ／ｍＬあるいは５０μｇ／ｍＬの濃度に０．１％ＰＢＳで調製したＣｙ５標識抗ＨＢｓ抗体を１５分間送液した。すべての反応は、３７℃、流速１μｌ／ｍｉｎで行った。
（３）分析
スライドガラス部とＰＤＭＳ部を分離し、スライドガラス部について、Biodetect ６４５／４チップリーダー（商品名、ジーンスキャン社製）を用いてＣｙ５の蛍光強度を測定した。その結果を表１、図１１に示した。単位はシグナル強度ユニットである。この結果より、Ｃｙ５標識抗体の濃度としては、３０μｇ／ｍＬが適していると考えられた。
Figure 2005090972
（４）抗体の直接固定化
前記工程（２）のオリゴヌクレオチドＢ結合抗ＨＢｓ抗体に用いた同じ抗体を、１０００μｇ／ｍＬとなるように、ＰＢＳ（−）で希釈した。この溶液を、ジーンスライド （商品名、株式会社日本パーカーライジング製）に直径１ｍｍになるようにスポットした。この後、１１０℃に加温したホットプレート上の１時間加温下で、あるいは、室温で抗体を固定化した。次いで、ＰＢＳ（−）で５分洗浄後、滅菌水で洗浄して、乾燥させて、抗ＨＢｓ抗体固定化スライドガラスを調製した。
（５）流路の作製および反応２
前記工程（４）で調製した抗ＨＢｓ抗体固定化スライドガラスに、微細流路となる溝（幅：３００μｍ、深さ、１００μｍ）が形成されているポリジメチルシロキサンを、常温で圧着するようにして貼り合わせチップを作製した。内部に形成された微細流路に、２％ＢＳＡおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、次いで、５０ｎｇ／ｍＬになるように０．１％ＰＢＳで調製したＨＢｓ抗原を１５分間送液した。この後、０．１％ＰＢＳで５分間送液して洗浄し、３０μｇ／ｍＬの濃度に０．１％ＰＢＳで調製したＣｙ５標識抗体を１５分間送液した。すべての反応は、３７℃、流速１μｌ／ｍｉｎで行った。この後、前記工程（３）と同様にチップ上の反応性をチップリーダーで確認した。この結果、室温で抗体を固定化した場合には、反応を確認することができたが、１１０℃で固定化した場合には、反応性を確認することができなかった。
（実施例１の考察）
前記工程５と工程３の結果から、抗体を固定化する従来の方法では、射出成型によって調製した流路溝を有する部材とフィルムあるいは平板を熱融着などで接着させて、マイクロ流体チップを作製する際の熱で抗体が失活してしまう可能性が非常に高く、免疫学的な検出には用いるチップを調製することができない。しかしながら、本発明による方法を用いれば、核酸は、１１０℃１時間加熱しても安定に結合性を示していることから、射出成型によって調製した流路溝を有する部材と、フィルムあるいは平板を熱融着などで接着させて、マイクロ流体チップを作製し、チップ流路内に結合させたＤＮＡと少なくとも相補的塩基配列を有するＤＮＡ’を抗体に結合させたものを反応させ、（基板−ＤＮＡ）−（ＤＮＡ’−抗体）なる複合体を形成させ、この後、抗原を反応させた後、Ｃｙ５標識抗体を結合させて、（基板−ＤＮＡ）−（ＤＮＡ’−抗体）−（抗原）−（Ｃｙ５標識抗体）が形成されることによって免疫学的な検出が可能であることがわかった。
３種類の材料（Ｂ型肝炎表面抗原であるＨＢｓに対するモノクローナル抗体、マウス正常抗体、オリゴヌクレオチドＡ）を、材料毎に別々の各ジーンスライド （商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上に、加熱して 固定化させて（固定化処理ａ、固定化処理ｂ、固定化処理ｃ）３種類の固定化処理された固定化基板を得た。得られた３種類の固定化基板上に、微細流路となる溝を形成した平板部材を接着させて、接合体の内部に形成された微細流路内に固定化材料が固定化されている３種類の異なる接合体を得た。
その後、オリゴヌクレオチドＡが固定されている固定化基板については当該オリゴヌクレオチドＡに相補的なオリゴヌクレオチドＢで標識した抗ＨＢｓ抗体、あるいは、相補的オリゴヌクレオチドＢで標識したマウス正常抗体を、オリゴヌクレオチドの相補的結合により、固定化し、免疫反応を実施した。一方、抗体（Ｂ型肝炎表面抗原であるＨＢｓに対するモノクローナル抗体、マウス正常抗体）を直接、基板に固定化した固定化基板においても同様に、免疫反応を行った。これらの処理の詳細及び結果を以下に具体的に記載する。
（１）ＤＮＡ又は抗体の固定化
〈固定化処理ａ〉
ジーンスライド（商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上にマウスモノクローナル抗ＨＢｓ抗体５００μｇ／ｍＬを含むＰＢＳをマイクロピペットでスポットし、３７℃で１時間インキュベーションし固相化後、MilliQ水で洗浄し、乾燥させた。この後、固定化基板を１３０℃で２０分間加熱することによりガラス固定化基板Ａを得た。
〈固定化処理ｂ〉
ジーンスライド（商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上にマウス正常抗体５００μｇ／ｍＬを含むＰＢＳをマイクロピペットでスポットし、３７℃で１時間インキュベーションして固相化した後、MilliQ水で洗浄し、乾燥させた。この後、固定化基板を１３０℃で２０分間加熱することによりガラス固定化基板Ｂを得た。
〈固定化処理ｃ〉
前記実施例１で用いたオリゴヌクレオチドと同一の５’末端にアミノ基を導入した配列番号１で示すオリゴヌクレオチドＡ２５μＭを含むＰＢＳをジーンスライド（商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上に塗布して、８０℃で１時間インキュベーションして固相化した。９５℃水浴中で５分間ブロッキングを行い、MilliQ水で洗浄し乾燥させた。その後、基板を１３０℃で２０分間加熱することによりガラス固定化基板Ｃを得た。
前記工程（１）で調製したガラス固定化基板Ａ、ガラス固定化基板Ｂ、ガラス固定化基板Ｃに、微細流路となる溝（幅３００ｍμｍ、深さ１００μｍ）が形成されたポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）の平板（フルイドウェアテクノロジーズ社製、ストレート型）を、ＰＤＭＳの粘着性を利用してそれぞれ圧着して、各ガラス固定化基板と平板の間に微細流路（流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍ）を形成したチップＡ、チップＢ、チップＣを作製した（なお、Ａ、Ｂ、Ｃはガラス固定化基板のＡ、Ｂ、Ｃに対応する。）。得られた各チップは、全長が７５ｍｍで、幅が２５ｍｍの直方体であり、該チップには流路の入口及び出口が末端より５ｍｍの位置に口径１ｍｍφで形成され、流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍの流路が４本、各流路の間隔が７ｍｍで平行に形成されている。次いで、各チップの内部に形成された流路に、１％ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを送液することによりブロッキングを行った。
次いで、前記工程で得られたブロッキングされたチップＣの微細流路に、５０μｇ／ｍＬ ＧＡＡＴＴＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧ（配列番号２で表されるオリゴヌクレオチドＢ）標識抗ＨＢｓ抗体、および１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを３分間送液し洗浄して、チップＣ−１を得た。一方、前記工程で得られた別のブロッキングされたチップＣの微細流路に、５０μｇ／ｍＬ ＧＡＡＴＴＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＧＴＣＧ（配列番号２で表されるオリゴヌクレオチドＢ）標識マウス正常抗体および１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを３分間送液し洗浄して、チップＣ−２を得た。
（３）抗原結合量の検討
〈チップＡによる 抗原結合量の確認〉
前記工程（２）で得られた、ブロッキングされたチップＡの微細流路に、５０ｎｇ／ｍＬ ＨＢｓ抗原、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを３分間送液し洗浄して、ＨＢｓ抗原を含むＰＢＳで処理したチップＡを得た。
一方、ＨＢｓ抗原を含まず、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを送液した以外は、前記ＨＢｓ抗原で処理したチップＡを得る工程と同様にして、ＨＢｓ抗原を含まないＰＢＳで処理したチップＡを得た。
次いで、前記工程で得られた各チップＡに対して、３０μｇ／ｍＬビオチン修飾抗ＨＢｓ抗体、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを３分間送液し洗浄した。前記工程で得られた各チップ（ＨＢｓ抗原を含むＰＢＳで処理したチップＡ、ＨＢｓ抗原を含まないＰＢＳで処理したチップＡ）に対して、最後に、１０μｇ／ｍＬ Ｃｙ５標識ストレプトアビジン、１％
ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを３分間送液し洗浄した。この後、ＰＤＭＳ部分を剥がし、基板をMilliQ水で洗浄後、チップリーダー で蛍光強度を検出して、抗原結合量を確認した。その結果を縦軸に蛍光強度を表すグラフとして図１２に示す。
〈チップＢによる 抗原結合量の確認〉
前記「チップＡによる抗原結合量の確認」の欄に示した抗原結合量を確認する処理において、チップＡの代わりにチップＢを用いた以外は、同様にして抗原結合量を確認した。その結果を縦軸に蛍光強度を表すグラフとして図１２に示す。
〈チップＣ−１による 抗原結合量の確認〉
前記「チップＡによる抗原結合量の確認」の欄に示した抗原結合量を確認する処理において、チップＡの代わりにチップＣ−１を用いた以外は、同様にして抗原結合量を確認した。その結果を縦軸に蛍光強度を表すグラフとして図１２に示す。
〈チップＣ−２による 抗原結合量の確認〉
前記「チップＡによる抗原結合量の確認」の欄に示した抗原結合量を確認する処理において、チップＡの代わりにチップＣ−２を用いた以外は、同様にして抗原結合量を確認した。その結果を縦軸に蛍光強度を表すグラフとして図１２に示す。
（４）結果
図１２のグラフによれば、ＨＢｓ抗原とは反応することの無いマウス正常抗体を基板に結合させ加熱処理した場合でも、ＨＢｓ抗原を流路内に送液した場合に、ＨＢｓ抗原を含まない溶液を送液した場合よりも高い値が得られている。この結果から、抗ＨＢｓ抗体を直接基板に結合させ、加熱処理を行った場合の反応は非特異的な結合によるものと考えられる。これは加熱処理により抗体が失活し、失活した抗体に非特異的に抗原が吸着した結果と考えられる。これに対して、オリゴヌクレオチドを介した結合の場合は、抗ＨＢｓ抗体を用いた場合と、正常抗体を用いた場合で明確な差が認められることがわかる。このことは、この反応が非特異的な反応ではなく、抗原抗体反応に由来する反応であることを示唆している。
したがって、プラスチックの熱融着工程において、基板を約１３０℃程度で約２０分間程度加熱するような熱融着工程を含む、微細流路中に生体分子を結合させる方法として、オリゴヌクレオチドを介する方法は、マイクロ流路内に生体高分子を直接結合させるよりも優れていることが図１２の結果より強く示唆される。
本実施例３は、基板にオリゴヌクレオチドを塗布した後に熱融着により調製したプラスチック製チップを用いた免疫測定に関する。
（１）プラスチック製チップの製造
アルデヒド活性化処理されたシクロオレフィン基板（住友ベークライト社製）を用い、外形の全長が７５ｍｍで、幅が２５ｍｍの直方体の基板とし、該基板に口径１ｍｍφの流路入口及び流路出口を基板の末端から５ｍｍの位置に切削加工により形成し、流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍの流路を形成するための溝を４本、各流路が平行で間隔が７ｍｍとなるように、切削加工により形成して流路溝基板を得た。
これとは別に、アルデヒド活性化処理シクロオレフィン基板に２５ｍＭ NH2- ATA GTG TTC TGG GTT AGC AA なる配列を有するオリゴヌクレオチド（配列番号３で表されるオリゴヌクレオチドＣ）を含む溶液をマイクロピペットを用いて、流路溝基板と貼り合わせた場合に流路溝上に並ぶように、直径約１ｍｍのスポットを１５カ所塗布して固相化処理を行った。このオリゴヌクレオチドＣを固定化した基板と前記工程で得られた流路溝基板を１１０〜１３５℃の間で熱融着処理により接合させ、流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍの流路を形成してなるプラスチック製チップを得た。
（２）免疫測定
前記工程で得たプラスチック製チップの流路内に、１％ ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ（以下、ＰＢＳ−ＢＳＡ）を送液することによりブロッキングを行った。前記工程（１）で固相化したオリゴヌクレオチドＣと相補的な配列であるTTG CTA ACC CAG AAC ACT AT（配列番号４で表されるオリゴヌクレオチドＤ）を結合させた抗ＨＢｓ 抗体５０μｇ／ｍＬを含むＰＢＳ−ＢＳＡを１０分間送液し、次いで、ＰＢＳ−ＢＳＡのみを３分間送液することにより洗浄した。次いで、ＨＢｓ１００ｎｇ／ｍＬを含むＰＢＳ−ＢＳＡを１０分間送液し、次いで、ＰＢＳ−ＢＳＡのみを３分間送液することにより洗浄した。この後、ビオチン標識抗ＨＢｓ抗体１μｇ／ｍＬを含むＰＢＳ−ＢＳＡを１０分間送液し、次いで、ＰＢＳ−ＢＳＡのみを３分間送液することにより洗浄した。続いて、ＨＲＰ（西洋ワサビ由来ペルオキシダーゼ）標識ストレプトアビジン（ロシュ社製）５０ｍＵ／ｍＬを含むＰＢＳ−ＢＳＡを１０分間送液し、次いで、ＰＢＳ−ＢＳＡのみを３分間送液することにより洗浄した。続いてＨＲＰの基質であるＳＡＴＢｌｕｅ（同仁化学研究所）を送液しながら、ＨＲＰの酵素活性により発色したＳＡＴＢｌｕｅをSELFOC型熱レンズ顕微鏡GRIN Spectra（マイクロ化学技研社製）により検出した。得られた熱レンズ信号強度（Voltage ）を縦軸に示したグラフとして図１３に示す。
（３）結果
図１３のグラフによれば、ＨＢｓＡｇを反応させていないＢｌａｎｋに比べ、１００ｎｇ／ｍＬのＨＢｓＡｇを反応させたときに高いシグナルが得られたことがわかる。このことはプラスチック製チップの作製に必要な熱融着処理によっても固定化したオリゴヌクレオチドは失活せず、オリゴヌクレオチドを固定化後に熱融着したチップを用いて生体高分子の検出が可能であることを示している。
生体高分子等の生物学的物質の存在の確認、量の計測が、微量な試料で迅速に行えるため、試料採取における人体への苦痛が和らげ、臨床診断において有用である。本発明の生物学的物質の分析は、化学産業、製薬産業をはじめ、食品産業、農業技術など多くのバイオ関連産業において有用である。
こうした点を打開するために、種々の検査法を用いた試薬開発が行われてきている。例えば、特表平１−５０３１７４号公報（特許文献１）を用いた方法や、米国特許６，４４８，００１（特許文献２）に示すイムノクロマトグラフ法が挙げられる。これらの技術を用いた方法では、名刺の１／２程度の大きさの試薬を室温で保存でき、ベットサイドで極めて簡便に分析対象物の有無を判定することが可能となっている。しかしながら、これらの方法は判定を目視により行うため、感度が必ずしも高くなく、また、定量を行う事はできず、１回の分析に採血量１００μＬ程度を要することから、患者負担を軽減するに至っていない。
ＷＯ０２／０６５１３８（特許文献６）に、生体高分子と試料との結合の検出をマイクロチップ上で行ったり、結合した化合物を回収しその同定を行うことが示されている。
特表平１−５０３１７４号公報 米国特許６，４４８，００１ 特開昭６３−２７３０４２号公報 特開２００１−４６２８号公報 ＷＯ０１／０３４３０２ ＷＯ０２／０６５１３８ 特開平１１−１８７９００号公報 米国特許５，４４５，９３４ 米国特許５，８０７，５２２ 特開２０００−３５６６１１号公報 特表平９−５０３０６０号公報（ＷＯ９５／０８７７４） Analytical Chemistry 2001, 73, 1213-1218 Analytical Chemistry 2001, 73, 2112-2116 Analytical Chemistry;69(14);2626-2630 FASEB J. 2000 Jun;14(9):1041-60. J.Biomol Struct Dyn. 1999 Oct;17(2):175-191 Molecular cloning second edition, Sambrook、Fritsch 、Maniatis著、ColdSpring Harbor Lavoratory Press, 1989, 9.14-9.19 Applied Biosystems DNA Synthesizer model 391 user manual"User Bulletin No.50 "
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
ii) 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる複数種類の結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、前記分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
iv) 固定化された複合体を測定すること。
本発明の分析方法の四番目の基本的な発明は、液体試料と分析試薬を混合せずに別々に該分析装置の流路に導入する方法であり、次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法である。 ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
ii） 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる複数種類の結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを前記分析装置の流路に別々に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
iv) 固定化された複合体を測定すること。
本発明の分析方法における分析対象物は、生物学的物質であり、高分子としては、抗原、抗体、糖鎖、糖タンパク質、レクチン、受容体、ＤＮＡ、ＲＮＡであり、その他、生体中の物質と特異的に結合することができる物質であり、その物質の分子量に依存しないものが挙げられる。これらの分析対象物を分析するための試料には、血液、血漿、血清、尿、唾液、その他体液や、ＤＮＡ、ＲＮＡを含むもの、染色体や、ＤＮＡ、ＲＮＡを増幅させたもの、抗原、抗体、糖鎖、受容体を含む物体が試料となりうる。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；
ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的な配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ； iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’；及び、
iv) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
本発明の五番目の分析キットは、前記四番目の分析キットにおいて、第２リガンド（Ｌ２）に標識（Ｍ）が結合してなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂに代えて、次の試薬Ｂ’と試薬Ｃを使用するものである。即ち、本発明の五番目の分析キットは、試薬と分析装置が別体であり、次の試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットである。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）の形態で形成して固定化してなる分析装置；
ii） 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’；及び、
iii) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数) を、第１核酸と第２核酸の特異的結合性により形成して捕獲ゾーンに結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 及びi は独立した整数) の形態で各々独立して固定化してなる分析装置；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’；及び、
iii) 該１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ。
本発明の分析キットに含まれる第１リガンド（Ｌ１、又はＬ１i ：i は整数）、場合によって含まれる第２リガンド（Ｌ２、又はＬ２j ：j は整数）、及び第３リガンド（Ｌ３、又はＬ３m ：m は整数）には、免疫学的物質、受容体、受容体に結合する物質、糖類、糖タンパク質、糖脂質、レクチン及び核酸から選ばれたものが挙げられる。本発明の分析キットを構成するために使用することができる核酸には、５塩基以上の核酸塩基からなるＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡ（FASEB J. 2000 Jun;14(9):1041-60.（非特許文献４））、あるいはＬＮＡ（Locked Nucleic Acid の略語：J Biomol Struct Dyn. 1999 Oct;17(2):175-191(非特許文献５))が挙げられる。
本発明の分析キットに使用できる標識物（Ｍ）には、蛍光物質、金属コロイド、酵素、核酸、金属、糖、レクチン、ビオチン、ビオチンに結合性を有する物質（ストレプトアビジン、アビジン、ニュートリアビジン）が挙げられる。１種類以上の生物学的物質の分析のための本発明の分析キットにおける第２リガンド又は第３リガンドに結合される１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）は、各々同一の物質であってもよく、異なる物質であってもよい。
また、標識を導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、次の分析装置を構成することができる。即ち、幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i :iとh は独立した整数）を、第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性により結合して捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化してなる分析装置である。
前記六番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂのうち２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記六番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記六番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記六番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、試薬Ａ、試薬Ｂ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂを混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記六番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記六番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記七番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃを予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記七番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記七番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記七番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質の分析のための、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ、分析装置からなるキット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃを混合することなく、別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記七番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記七番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記八番目の分析キット（即ち、標識物が組み込まれた１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、を予め混合したものを分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記八番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記八番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを、予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記八番目の分析キット（即ち、標識物が組み込まれた１種類以上の生物学的物質を分析するための分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ａ、を混合することなく別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記八番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−v)の要件を含む：
ｉ） 前記八番目の分析キットを用いること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記十番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質のための分析キットであって、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の一番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃのうち２種以上を予め混合したものを分析装置に導入し、その後残りの種類の材料がある場合には、残りの材料を分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記十番目の分析キットを用いた本発明の一番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記十番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
． ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
前記十番目の分析キット（即ち、１種類以上の生物学的物質のための分析キットであって、試薬の一部、即ち、生物学的物質に特異的結合性を有するリガンドが、分析装置内に固定化されている場合の分析キット）を用いた本発明の二番目の分析方法であり、液体試料、試薬Ｂ’、試薬Ｃを混合することなく別々に分析装置に導入する分析方法である。即ち、前記十番目の分析キットを用いた本発明の二番目の分析方法は、次のｉ）−iv) の要件を含む：
ｉ） 前記十番目の分析キットを用いること；
ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合することなく別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
また、標識物が導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている分析装置を用いた本発明の分析方法は、次のｉ）−ｖ) の要件を含む：
ｉ） 標識物が導入された分析対象物としての１種類以上の生物学的物質を分析する装置として、該分析装置内に試薬が固定されている前記した装置を用意すること；
ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
iii) 該分析装置の流路に、該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を導入すること；
iv) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）における１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍ1 ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
ｖ） 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
（１）幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材を用意し、
該溝は第１部材と第２部材を接合したときに流路となる部分であり、該第１部材又は第２部材の何れかに、或いは両方に、流路入口及び流路出口を有し、
（２）第１部材及び／又は第２部材における流路となることが予定されている部分であって、測定されるべき生物学的物質を捕獲するためのゾーンとなる部分に、任意の塩基配列の核酸（Ｎ１）を固定化し、
（３）次いで、第１部材及び第２部材を熱融着又は接着剤により接合することにより流路を形成した接合体とし、
（４）該接合体の流路に、捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを導入し、捕獲ゾーンの第１核酸（Ｎ１）に該結合体（Ｎ２−Ｌ１）を特異的結合により結合させて固定化することにより分析装置を得る。
本発明における分析装置の製造に用いる第１部材及び第２部材の材質は、ガラス、ポリジメチルシロキサン、セラミックス、アクリロニトリル・ブタジエンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリル・エチレンプロピレンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリルスチレン樹脂、メタクリルスチレン樹脂、ポリアミド・ナイロン樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート・ポリエステル樹脂、ポリイミド樹脂、メタクリル樹脂、ポリアセタール樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリフェニレンエーテル樹脂、ポリフェニレンサルファイド樹脂、ポリスチレン樹脂、熱可塑性エラストマー樹脂、アロイ、液晶ポリマー樹脂、シクロオレフィン樹脂、熱可塑性樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、ジアリルフタレート樹脂、環状オレフィンコポリマー、及び、これらの部材表面が修飾されたものから選ばれたものが挙げられる。第１部材と第２部材は、同じ材質であっても、異なる材質であってもよい。
本発明の分析装置の製造において、上記の各材質の第１部材及び第２部材の融着温度は、７０℃−１４０℃であることが好ましい。７０℃未満であると融着が十分ではなく、また１４０℃を越えると、これらの部材に直接固定される第１核酸が熱により影響を受けるからである。また、核酸はタンパク質に比べて溶剤に対して失活しないことが知られていることから（Molecular cloning second edition, Sambrook、Fritsch 、Maniatis著、ColdSpring Harbor Lavoratory Press, 1989, 9.14-9.19 （非特許文献６）; Applied Biosystems DNA Synthesizer model 391 user manual “User Bulletin No.50 ”（非特許文献７））である。
前記に説明した、分析キット、分析装置、分析方法、分析装置の製造方法において、使用されるリガンドは、測定されるべき生物学的物質に対して特異的結合性を有するものである。例えば、測定されるべき生物学的物質が、抗原である場合にはリガンドは抗体であり、抗体である場合にはリガンドは抗原であり、核酸である場合にはリガンドはプローブ核酸（ＰｒＮ）である。
（１）ＤＮＡの固定化
５’末端にアミノ基を導入した配列番号１に示したAmino group-CGA CGG ATC CCC GGG AAT TC（配列番号１）なる配列を有するオリゴヌクレオチドＡを合成し、オリゴヌクレオチドＡ８．４５μＭとなるように、ＥＤＴＡ １ｍＭを含むＰＢＳ（−）で希釈した。この溶液を、ジーンスライド（商品名、株式会社日本パーカーライジング製）上に直径１ｍｍになるようにスポットした。この後、１００℃に加温したホットプレート上で１時間加温し、オリゴヌクレオチドＡを共有結合により固定化した。次いで、２×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳで１５分洗浄し、９０℃の２×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳで５分洗浄後、滅菌水で洗浄して、乾燥させて、オリゴヌクレオチドＡ固定化スライドガラスを調製した。
（２）流路の作製および反応１
前記工程（１）で調製したオリゴヌクレオチドＡを固定化したオリゴヌクレオチド固定化スライドガラスに、微細流路となる溝（幅：３００μｍ、高さ、１００μｍ）が形成されているポリジメチルシロキサン（以下、ＰＤＭＳと呼ぶ）の平板を、スライドガラス上に固定化したオリゴヌクレオチドＡ上に流路が設置されるように圧着するように貼り合わせることにより接合して、チップを作製した。チップの内部に形成された流路（幅：３００μｍ、高さ、１００μｍ）に、２％ＢＳＡおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを１５分間送液し、次いで、固定化したオリゴヌクレオチドＡと相補的なオリゴヌクレオチドＢ結合抗ＨＢｓ抗体（Oku らの方法（J Immunol Methods. 2001 Dec 1;258(1-2):73-84. ）により調製）を５００μｇ／ｍＬの濃度になるように０．１％ＢＳＡおよび１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳ（以下、０．１％ＰＢＳ）で希釈したものを１５分間送液した。次いで、０．１％ＰＢＳで５分間送液することにより洗浄し、５０ｎｇ／ｍＬになるように０．１％ＰＢＳで調製したＨＢｓ抗原を１５分間送液した。この後、０．１％ＰＢＳで５分間送液して洗浄し、１μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、３０μｇ／ｍＬあるいは５０μｇ／ｍＬの濃度に０．１％ＰＢＳで調製したＣｙ５標識抗ＨＢｓ抗体を１５分間送液した。すべての反応は、３７℃、流速１μｌ／ｍｉｎで行った。
（２）チップの作製及びブロッキング
前記工程（１）で調製したガラス固定化基板Ａ、ガラス固定化基板Ｂ、ガラス固定化基板Ｃに、微細流路となる溝（幅３００ｍμｍ、深さ１００μｍ）が形成されたポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）の平板（フルイドウェアテクノロジーズ社製、ストレート型）を、ＰＤＭＳの粘着性を利用してそれぞれ圧着して、各ガラス固定化基板と平板の間に微細流路（流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍ）を形成したチップＡ、チップＢ、チップＣを作製した（なお、Ａ、Ｂ、Ｃはガラス固定化基板のＡ、Ｂ、Ｃに対応する。）。得られた各チップは、全長が７５ｍｍで、幅が２５ｍｍの直方体であり、該チップには流路の入口及び出口が末端より５ｍｍの位置に口径１ｍｍφで形成され、流路幅３００μｍ、流路深さ１００μｍの流路が４本、各流路の間隔が７ｍｍで平行に形成されている。次いで、各チップの内部に形成された流路に、１％ＢＳＡ、１ｍＭ ＥＤＴＡを含むＰＢＳを送液することによりブロッキングを行った。

Claims (57)

  1. 次の試薬Ａ、試薬Ｂ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａと試薬Ｂは同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；
    ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ；及び、
    iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と標識物（Ｍ）が結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ。
  2. 次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ，試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上は同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；
    ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ；
    iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’；及び、
    iv) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
  3. 次の試薬Ａと分析装置を組み合わせてなる標識物を含まない分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置；及び、
    ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ。
  4. 次の試薬Ｂと分析装置を組み合わせてなる分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
    ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と標識物（Ｍ）が結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ。
  5. 次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ、試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上が同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
    ii） 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’。
    iii) 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ。
  6. 次の試薬Ａ、試薬Ｂ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａと試薬Ｂは同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
    ii) 該捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ；及び、
    iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j と lは独立した整数）を含む試薬Ｂ。
  7. 次の試薬Ａ、試薬Ｂ’、試薬Ｃ及び分析装置を組み合わせてなる分析キットであって、試薬Ａ，試薬Ｂ’及び試薬Ｃの内２種以上が同一の系に含まれていても、或いは独立して存在してもよい分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
    ii) 該捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ；
    iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’；及び、
    iv) 該１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）に種類毎に特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ。
  8. 次の試薬Ａと分析装置を組み合わせてなる標識物を含まない分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置；
    ii) 該分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａ。
  9. 次の試薬Ｂと分析装置とを組み合わせてなる分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数) を、第１核酸と第２核酸の特異的結合により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置；及び、
    ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質の種類毎に特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j と lは独立した整数）を含む試薬Ｂ。
  10. 次の試薬Ｂ’及び試薬Ｃと分析装置とを組み合わせてなる分析キット：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数) を、第１核酸と第２核酸の特異的結合性により形成して捕獲ゾーンに各々独立して固定化してなる分析装置；及び、
    ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’；
    iii) 該１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：l 及びm は整数）を含む試薬Ｃ。
  11. 前記生物学的物質、第１リガンド（Ｌ１又はＬ１i ：i は整数）、第２リガンド（Ｌ２又はＬ２j ：j は整数）及び／又は第３リガンド（Ｌ３又はＬ３m ：m は整数）が、免疫学的物質、受容体、受容体に結合する物質、糖類、糖タンパク質、糖脂質、レクチン及び核酸から選ばれたものである請求項１乃至１０の何れか１項記載の分析キット。
  12. 前記第１リガンド（Ｌ１又はＬ１i ：i は整数）及び／又は第２リガンド（Ｌ２又はＬ２j ：j は整数）が、異なる反応性を有する請求項１、２、３、４、５、６、７、９又は１０記載の分析キット。
  13. 前記第１リガンド（Ｌ１又はＬ１i ：i は整数）及び／又は第２リガンド（Ｌ２又はＬ２j ：j は整数）が、同一の反応性を有する請求項１、２、３、４、５、６、７、９又は１０記載の分析キット。
  14. 前記標識物（Ｍ又はＭl ：l は整数）が、酵素、金属コロイド、ラテックス、核酸、発光物質、蛍光物質、インタカレーター、ビオチン、アビジン、及びストレプトアビジンから選ばれたものである請求項１乃至１０の何れか１項記載の分析キット。
  15. 前記第１部材又は第２部材が、ガラス、ポリジメチルシロキサン、セラミックス、アクリロニトリル・ブタジエンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリル・エチレンプロピレンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリルスチレン樹脂、メタクリルスチレン樹脂、ポリアミド・ナイロン樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート・ポリエステル樹脂、ポリイミド樹脂、メタクリル樹脂、ポリアセタール樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリフェニレンエーテル樹脂、ポリフェニレンサルファイド樹脂、ポリスチレン樹脂、熱可塑性エラストマー樹脂、アロイ、液晶ポリマー樹脂、シクロオレフィン樹脂、熱可塑性樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、ジアリルフタレート樹脂、環状オレフィンコポリマー、及び、これらの部材表面が修飾されたものから選ばれたものである請求項１乃至１０の何れか１項記載の分析キット。
  16. 前記第１部材又は第２部材の材質は同一である請求項１乃至１０の何れか１項記載の分析キット。
  17. 前記第１部材又は第２部材の材質は異なる請求項１乃至１０の何れか１項記載の分析キット。
  18. 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置であって、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に対し特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）と、前記固定化第１核酸（Ｎ１）に対し少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を、第１核酸（Ｎ１）と第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性により捕獲ゾーンに形成して固定化してなる分析装置。
  19. 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置であって、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と、前記複数種類の固定化第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）とからなる結合体（Ｌ１i −Ｎ２h :iとh は独立した整数）を、第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性により結合して捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化してなる分析装置。
  20. 前記生物学的物質（Ｏ又はＯk ：k は整数）及び／又は第１リガンド（Ｌ１又はＬ１i ：i は整数）が、免疫学的物質、受容体及び核酸から選ばれたものである請求項１８又は１９記載の分析装置。
  21. 前記第１部材又は第２部材が、ガラス、ポリジメチルシロキサン、セラミックス、アクリロニトリル・ブタジエンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリル・エチレンプロピレンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリルスチレン樹脂、メタクリルスチレン樹脂、ポリアミド・ナイロン樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート・ポリエステル樹脂、ポリイミド樹脂、メタクリル樹脂、ポリアセタール樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリフェニレンエーテル樹脂、ポリフェニレンサルファイド樹脂、ポリスチレン樹脂、熱可塑性エラストマー樹脂、アロイ、液晶ポリマー樹脂、シクロオレフィン樹脂、熱可塑性樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、ジアリルフタレート樹脂、環状オレフィンコポリマー、及び、これらの部材表面が修飾されたものから選ばれたものである請求項１８又は１９記載の分析装置。
  22. 前記第１部材又は第２部材の材質は同一である請求項１８又は１９記載の分析装置。
  23. 前記第１部材又は第２部材の材質は異なる請求項１８又は１９記載の分析装置。
  24. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置を用意すること；
    ii） 該第１核酸（Ｎ１）に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）に、測定すべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）を結合させてなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを用意すること；
    iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
    iv) 固定化された複合体を測定すること。
  25. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）が固定化された分析装置を用意すること；
    ii） 該第１核酸（Ｎ１）に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）に、測定すべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）を結合させてなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを用意すること；
    iii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合せずに別々に該分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
    iv) 固定化された複合体を測定すること。
  26. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
    ii） 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
    iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析装置の流路に導入し、複合体を流路内に固定化させること；
    iv) 固定化された複合体を測定すること。
  27. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材とを接合することにより液体が通過できる流路が形成され、該流路内に設けた第１部材上及び／又は第２部材上の捕獲ゾーンにおいて、第１部材と第２部材の接合前に、任意の複数種類の塩基配列の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）が種類毎に各々独立して固定化された分析装置を用意すること；
    ii） 該複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）に、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に応じて特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）を結合させてなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａを用意すること；
    iii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、及び試薬Ａを該分析装置の流路に別々に導入し、複合体を流路内に固定化させること、
    iv) 固定化された複合体を測定すること。
  28. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
    ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  29. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
    ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬Ｂ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  30. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項２記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
    ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、及び、
    ｄ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と第３リガンド（Ｌ３）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  31. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項２記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａ、
    ｃ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、及び、
    ｄ． 該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合性、第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）との特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２）と第３リガンド（Ｌ３）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  32. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項３記載の分析キットを用いること；
    ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
    iii) 捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａと、前記標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）とを、予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
    ｖ) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  33. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項３記載の分析キットを用いること；
    ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
    iii) 捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａと、前記標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）とを、混合せずに別々に、該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１核酸（Ｎ１）と、第２核酸（Ｎ２）との特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
    ｖ) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  34. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項４記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料と、
    ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び結合体（Ｌ２−Ｍ）中の第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  35. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項４記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．の材料を混合することなく別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料と、
    ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）と、標識物（Ｍ）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２−Ｍ）を含む試薬；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び結合体（Ｌ２−Ｍ）中の第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  36. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項５記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、
    ｃ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び第２リガンドと第３リガンドとの特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  37. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項５記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき生物学的物質（Ｏ）に特異的結合性を有する第２リガンド（Ｌ２）を含む試薬Ｂ’、
    ｃ．該第２リガンド（Ｌ２）に特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３）と、標識物（Ｍ）とからなる結合体（Ｌ３−Ｍ）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１）中の第１リガンド（Ｌ１）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２）と生物学的物質（Ｏ）の特異的結合性、及び第２リガンドと第３リガンドとの特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｌ２−Ｌ３−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  38. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項６記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
    ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  39. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項６記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
    ｃ．該生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）からなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬Ｂ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    iv) 前記工程で得られた複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  40. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項７記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料の内２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
    ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
    ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  41. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項７記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．ｃ．及びｄ．の材料を混合せずに別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、１種類以上の被測定生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：h とi は独立した整数）を含む試薬Ａの溶液；
    ｃ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、及び、
    ｄ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類ごとに対応した特異的結合性を有する１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍl ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性、及び１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、種類毎に独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  42. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項８記載の分析キットを用いること；
    ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
    iii) 捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応して少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを、予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  43. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項８記載の分析キットを用いること；
    ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
    iii) 捕獲ゾーンに各々独立して固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）の塩基配列に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）に特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）とからなる結合体（Ｎ２h −Ｌ１i ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａと、前記１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl ：k とl は独立した整数）とを混合せずに別々に、該分析キットの分析装置の流路に導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１核酸（Ｎ１g ：g は整数）と、複数種類の第２核酸（Ｎ２h ：h は整数）との特異的結合性、複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）との特異的結合性により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    ｖ) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：ｌは整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  44. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項９記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が直接的に結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i : ｇ、h 、i は独立した整数）中の複数の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び試薬中の結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）の１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  45. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項９記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．の材料を混合せずに別々に、該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）が結合されてなる結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）を含む試薬；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに種類毎に各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i : ｇ、h 、i は独立した整数）中の複数の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び試薬中の結合体（Ｌ２j −Ｍl ：j とl は独立した整数）の１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、各々独立して固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該複数種類の固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｍl ：g 、h 、i 、j 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  46. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１０記載の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料の２種以上の材料を予め混合して複合体を形成した後、あるいは形成させながら、該分析キットの分析装置の流路に導入し、その後、残りの種類の材料がある場合には、更に該材料を該流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
    ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  47. 次のｉ）−iv) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１０の分析キットを用いること；
    ii) 次のａ．ｂ．及びｃ．の材料を混合することなく別々に該分析キットの分析装置の流路に導入すること：
    ａ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料、
    ｂ．測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する１種類以上の第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）を含む試薬Ｂ’、
    ｃ．該第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）の種類毎に対応した特異的結合性を有する第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）と、１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）とからなる結合体（Ｌ３m −Ｍ1 ：m とl は独立した整数）を含む試薬Ｃ；
    iii) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i ：g 、h 、i は独立した整数）中の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合性、及び第２リガンド（Ｌ２j ：j は整数）と第３リガンド（Ｌ３m ：m は整数）との特異的結合性により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）を形成すること；
    iv) 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｌ２j −Ｌ３m −Ｍ1 ：g 、h 、i 、j 、k 、l 、m は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  48. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１８記載の分析装置を用いること；
    ii) 測定されるべき生物学的物質（Ｏ）の存在が疑われる液体試料から、予め標識物（Ｍ）を導入してなる標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を調製しておくこと、
    iii) 該分析装置の流路に、該標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）を導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに固定化されている第１リガンド（Ｌ１）と第２核酸（Ｎ２）とからなる結合体（Ｌ１−Ｎ２）における第１リガンド（Ｌ１）と、該標識物導入生物学的物質（Ｏ−Ｍ）における生物学的物質（Ｏ）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）を形成すること；
    ｖ） 該固定化結合体（Ｎ１−Ｎ２−Ｌ１−Ｏ−Ｍ）に含まれる標識物（Ｍ）を測定することによって、生物学的物質（Ｏ）を測定すること。
  49. 次のｉ）−ｖ) の要件を含む分析方法：
    ｉ） 請求項１９記載の分析装置を用いること；
    ii) 測定されるべき１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の存在が疑われる液体試料から、予め１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を導入してなる１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を調製しておくこと、
    iii) 該分析装置の流路に、該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）を導入すること；
    iv) 分析装置の捕獲ゾーンに各々独立して固定化されている複数種類の第１リガンド（Ｌ１i ：i は整数）と該１種類以上の標識物導入生物学的物質（Ｏk −Ｍl 、k とl は独立した整数）における１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）の特異的結合により、固定化された結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍ1 ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）を形成すること；
    ｖ） 該固定化結合体（Ｎ１g −Ｎ２h −Ｌ１i −Ｏk −Ｍl ：g 、h 、i 、k 、l は独立した整数）に含まれる１種類以上の標識物（Ｍl ：l は整数）を測定することによって、１種類以上の生物学的物質（Ｏk ：k は整数）を測定すること。
  50. 請求項２４−４９の何れか１項記載の分析方法であって、流路の流速が０．１〜５０μＬ／分である分析方法。
  51. （１）幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材を用意し、
    該溝は第１部材と第２部材を接合したときに流路となる部分であり、該第１部材又は第２部材の何れかに、あるいは両方に、流路入口及び流路出口を有し、
    （２）第１部材及び／又は第２部材における流路となることが予定されている部分であって、測定されるべき生物学的物質を捕獲するためのゾーンとなる部分に、任意の塩基配列の第１核酸（Ｎ１）を固定化し、
    （３）次いで、第１部材及び第２部材を融着又は接着剤により接合することにより流路を形成した接合体とし、
    （４）該接合体の流路に、捕獲ゾーンに固定化された第１核酸（Ｎ１）の塩基配列に少なくとも相補的塩基配列を有する第２核酸（Ｎ２）と、測定されるべき生物学的物質に特異的結合性を有する第１リガンド（Ｌ１）とからなる結合体（Ｎ２−Ｌ１）を含む試薬Ａを導入し、捕獲ゾーンの第１核酸（Ｎ１）に該結合体（Ｎ２−Ｌ１）を特異的結合により固定化させることを特徴とする分析装置の製造方法。
  52. （１）幅１μｍ−５ｍｍ、深さ１μｍ−７５０μｍの断面の溝を有する第１部材と、該溝を覆うことができる第２部材を用意し、
    該溝は第１部材と第２部材を接合したときに流路となる部分であり、該第１部材又は第２部材の何れかに、あるいは両方に流路入口及び流路出口を有し、
    （２）第１部材及び／又は第２部材における流路となることが予定されている部分であって、測定されるべき生物学的物質を捕獲するためのゾーンとなる部分に、任意の塩基配列の複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）を各々独立させて固定化し、
    （３）次いで、第１部材及び第２部材を融着又は接着剤により接合することにより流路を形成した接合体とし、
    （４）該接合体の流路に、捕獲ゾーンに固定化された複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）の種類毎に対応した少なくとも相補的塩基配列を有する複数種類の第２核酸（Ｎ２ｈ：ｈは整数）と、測定されるべき１種類以上の生物学的物質の種類毎に対応した特異的結合性を有する複数種類の第１リガンド（Ｌ１ｉ：ｉは整数）とからなる結合体（Ｎ２ｈ−Ｌ１ｉ：ｈとｉは独立した整数）を含む試薬Ａを流して、捕獲ゾーンの複数種類の第１核酸（Ｎ１ｇ：ｇは整数）に該結合体（Ｎ２ｈ−Ｌ１ｉ：ｈとｉは独立した整数）を特異的結合により固定化させることを特徴とする分析装置の製造方法。
  53. 融着温度が７０℃−１４０℃である請求項５１又は５２記載の分析装置の製造方法。
  54. 前記生物学的物質及び／又は第１リガンド（Ｌ１）が、免疫学的物質、受容体及び核酸から選ばれたものである請求項５１又は５２記載の分析装置の製造方法。
  55. 前記第１部材又は第２部材が、ガラス、ポリジメチルシロキサン、セラミックス、アクリロニトリル・ブタジエンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリル・エチレンプロピレンゴム・スチレン樹脂、アクリロニトリルスチレン樹脂、メタクリルスチレン樹脂、ポリアミド・ナイロン樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリエチレンテレフタレート・ポリエステル樹脂、ポリイミド樹脂、メタクリル樹脂、ポリアセタール樹脂、ポリプロピレン樹脂、ポリフェニレンエーテル樹脂、ポリフェニレンサルファイド樹脂、ポリスチレン樹脂、熱可塑性エラストマー樹脂、アロイ、液晶ポリマー樹脂、シクロオレフィン樹脂、熱可塑性樹脂、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、ジアリルフタレート樹脂、環状オレフィンコポリマー、及び、これらの部材表面が修飾されたものから選ばれたものである請求項５１又は５２記載の分析装置の製造方法。
  56. 前記第１部材又は第２部材の材質は同一である請求項５１又は５２記載の分析装置の製造方法。
  57. 前記第１部材又は第２部材の材質は異なる請求項５１又は５２記載の分析装置の製造方法。
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