JPS6377891A - 抗性物質ａ／１６６８６複合体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗生物質Ａ／１６６８（３はアクチノプラネス・エスピ
ー（Ａｅｔｉｈｏｐｌａｎｅ乏；　　ｓｐ、）八ＴＣＣ
３３０７６（徴工研菌寄第５４７７号）の培貧物から単
Ｂされるデプシベプチド物質である。

主にグラム陽性バクテリアに対して活性であるこの物質
は、その製造方法及び対応する製薬学的組成物と共に、
米国特許第４，３０３，６４６号に記載されている。

因子はＡ１、Ａ２及びＡ、と称する３種の密接に関連し
た成分が抗生物質Ａ／１６６８６から単離し得ることが
見出された。因子Ａ２は顕著な策で得られる成分であり
、生物学的活性に対して最も適当であり、−刀、因子Ａ
１及びＡ、ｌは少量で得られる。これらの物質並びにそ
の製造及び用途は米国特許第４，４２７，６５６号に記
載されている。

許容性及び現在の抗生物質処置に対する耐性を開発する
ために、新しい抗生物質に対する要求がなお高い。

極めてよく定義され且つ規格化された組成を有する簡単
に単離された形態または複合体における抗生物質が殊に
望まれる。

従って、本発明の−ｌ］的は、発酵中にＡ／１６６８６
産生培養物に所望の抗生物質因子の適当な前駆物質を加
えることからなる因子Ａ２及び／またはＡ、の単一成分
を嚇離するか、或いは詠成分の１つまたは双方において
複合体を′ｍませるために抗生物′ＩＩＡ／１６６８Ｇ
の該因子の生成を選択的に高める方法である。

本発明の方法によれば、例えば工業的大規模発酵におい
て、抗生物’ｆｌ　Ａ　／　１６６８６複合体の１ｉｔ
−の大１’ｆｆ１分の成分の比を実際に副面することが
ｉＪ’ｆｌｌＲである。従って、水力法は楳亭仕様を固
′；〕！するために最終生成物の組成をＡ節する有用な
手段を表わす。

更に、本発明の方法に従えば、産生菌株の発酵塊から直
接、抗生物Ｔｆ１Ａ／１６６８Ｇ因子Ａ、に極めて富ん
だ粗製の生成物を得ることができ、次にこのものを＾収
率及び短期間］１程で純粋な状態において１ｔｆｉする
ことができる。

抗生物質Ａ　／　１６６８６複合体における因−ｔＡ２
の比を増加させる適当な前駆物質はロイシン、産生微生
物に対して無毒性である酸及び塩基とのその塩、イソ吉
草酸、産生微生物に対して無毒性である塩基とのその塩
、モ／−及びポリヒドロキシ低級アルカノールとのその
エステル、α−ケト−イソカプロン酸、産生微生物に対
して無毒性て・ある塩基とのその塩、モノ−及びポリヒ
ドロキシ低級゛ｒルカノールとのそのエステル、イソア
ミルアルコール及び産生微生物に対して無す性である酸
とのそのエステルから選ばれる。

抗生物質Ａ　／　１６６８６複合体におけろ因子Ａ、の
比を増加させる適当な前駆物質はバリン、産生微生物に
対して無毒性である酸及び塩基とのその塩、α−ケト−
イン吉草酸、産生微生物に対して無毒性である塩基との
その塩、モ／−及びポリヒドロキシ低級アルカノールと
のそのエステル、イソ醋酸、産生微生物に灯してｊ？、
（毒性て・ある塩）、（どのその塩、モノ−及びポリヒ
ドロキシ低級アルカノールとのそのエステル、イソブタ
／−ル及びチルから選ばれる。

微生物に対してＳ毒性である塩基との塩は、法えたカナ
オンのタイプ及び濃度が、発酵塊に用（また濃度で顕著
な程度に微生物培養物の増イ１または所望の抗生物質の
産生をそこなわぬような塩である６該カチオンの例はア
ルカリ金属及びアルカリ土類金属、例えばナトリウム、
カリウム、カルシラノ、またはマグネシウムによるカチ
オン、並びにアミン、例えばアンモニウム、第一、第二
または第三（Ｃ，−Ｃ，）アルキルアンモニウム及びヒ
ドロキシ（Ｃ＋〜Ｃ，）アルキルアンモニウムによるカ
ナオンである。好ましい塩はすトリウム、カリワムまｒ
こはアンモニウムイオンによる塩である。

産生微生物に対して無毒性である酸との塩、即も、発酵
塊中に存在する濃度で、微生物培養物の増殖または所望
の抗生物質の産生を顕著にそこなわぬ酸による塩の例は
好ましくはＫＰ［２、例えば塩酸であり、ある場合には
、また有機酸が存在していてもよい、 モノ−及びポリヒドロキシ低級アルカノールとの上に定
義した如き適当な前駆物質のエステルは１分子光Ｑｌ、
２．３．４．５また１、ｔ６個のヒドロキシ官能基をも
−）（Ｃ１〜Ｃａ）アルカノールエステルである。（Ｃ
１〜Ｃ４ンアルカノールをｍいる場合、双方の因子の相
（’Ｐう増加を望まぬならば、該アルコールは他の抗生
物質因子（即ち、インブタノールまたはイソアミルアル
コール）に対する前駆物質として作用するものとは異な
らなければならない。

ポリヒドロキシアルカノールの好ましい例はグリセリン
及びプロピレングリコールである。

本明細書において、低級アルカ７ールがｙ４なるエナン
チオマー及びエピマー型で存在し得る場合、別個の各噴
−型拒びにあらゆる割合における該単一型の混合物を意
図する。

微生物に灯して無毒性である上に定義した如き適当なヒ
ドロキシ含有Ａｆｆ　［　？Ｉ質のエステルは（Ｃ。

〜Ｃ２２）アルカ／イルエステルであり、その際に、発
＃媒質中のアルカ／イル部分のタイプ及び濃度は微生１
＃培養液の増！または所望の抗生物質の生成を顕７トな
程度にそこなわぬようなものである。

一般に、ｉｎ鎖状（　Ｃ　２〜Ｃ，）アルカ７ールが好
ましν１。

抗生物質Ａ／１６０８６産生培養物は、培養した際に抗
生物質Ａ／１６６８６の回収ｑ能な５ｔを産生し得るア
クチノプラネス・エスピーＡ　Ｔ　Ｃ　Ｃ３　３　０　
７　６様菌株或いはその突然変異体または変種の培養物
である。

本発明の方法には、一般にアクチノプラネスの培養に対
して、そして殊にΔ／１６６８６産生培養物に公知の普
通の条件下で（上記引用の米国特許第４，３　０　３，
６　４　６号参照）、同化可能な炭素源、同化可能なｇ
．素源及び無蝦塩を含有する栄文培″！Ｉｅ媒質中で抗
生物質Ａ　／　１　６　６　８　６産生培養物を培養し
、そして抗生物質Ａ／１６６８６囚子Ａ２及び／または
因子へつの産生を選択的に肯めるために適当なｄｉＪ駆
物質の有効量を加えることが含まれる。

適当な前駆物質を発酵中に発酵液に連続的または回分式
に加えるが、或いは発酵萌に培養媒質に加えることがで
きる。該前駆物質を、発酵温度で適当な液体である場合
、直接加えることＩＪＣできるか、或いは溶液、懸濁液
または乳液として加えることができ、そして好ましくは
懸濁液の水溶液である。

適当な前駆物質の「有効量１とは、発酵液に加えた場合
、産生微生物の増殖培養物に毒性効果をもたらすことな
く、抗生物質Ａ／１６６８Ｂの特定の因子の選択的増加
をもｔこらすために十分な選択的前駆物質の濃度を与え
る上に定義した如き前駆物質の耽を意味する。

前駆物質の添加割合は、発酵に毒性作用を勺えることな
く、顕著なまたは最適な程度に所望の因子のｉ率を高め
るために［・分に大きくなければならない。

一般に、発酵の開始時、または生成段階中に適当なｆ＋
ｔｉ駆物質の有効量を連続的または一部づつ供給するこ
とが有利である。

発酵に続いて、必要に応じて、抗４＋を物質Ａ／１知の
方法またはその明白な変法に従って「す収することがで
きる。

本発明の方法に使用し得るＡ／　１　６　６　８　Ｆ；
産生菌株の発酵に適する栄養発酵媒質は通常人のものを
含有する：例えば糖（例えばグルコース、スクロース、
マルトース）、多糖Ｍ（例えば殿粉、デキストラン）、
ポリアルコール（例えばグリセリン、プロピレングリコ
ール）から選ぶことができる適当な炭素源；例えばアン
モニウム塩、７スバラギン、落花生粉、大豆粉、肉エキ
ス、トリプトン、酸１迂氷解物、酵ｌ迂エキス及びトウ
モロコシ処理液から選ばれる適当な窒素源；止びに無檄
塩．培養媒質に混合し得る無機塩の中には、ナトリウノ
い　カリウム、鉄、亜鉛、コバルト、マグネシウム、カ
ルシウム、アンモニウム、クロライド、カルボネート、
スルフェート、ホスフェート、ナイトレート等のイオン
を与え得る普通の可溶性塩がある。

通常、抗生？ｌ性質−生菌株を振盪フラスコ中で前培養
し、犬にこの培養物を用いて、抗生物質のＩ：１７’Ｆ
／　／自たｇ　ｔ−　ｐｈ　ｔＤ　＋　Ｘ　ｒ・ｈ　ｙ
　！ｊ　セ−　Ｑ　醪５’！　１．−　ｊｆｓ　ｋＭす
る。前培養に用いる媒質は多酸の発酵に用いるものと同
一であることができるが、しかし、また他の媒質を用い
ることもできる。

発酵は２５℃乃至３５℃間、好ましくは２７℃乃至３３
℃間の温度で、水中に沈めた好気性条件ドで５０〜１５
　（１１０１１ｒ１の範囲で行われる。適当な前駆物質
の選択的有効量を産生偵株の接種０１ｊに発酵媒質に添
加することができるが、しかしながら、発酵開始後、２
４〜４８時間目に添加することが好ましい。添加を１回
に、または数回に分けて、或いは連続的に行うことがで
きる。

本発明を具体化する典型的な実験によれば、オートミー
ル寒天斜面に保持されたＡ／１６６８Ｇ産生菌株の培養
物を植物性媒質１００ｚｆを含むフラスコ中に接種する
。３６時間後、培養物の試料（５ｚ１）を用いて、発酵
媒質１（、）ＯｉＮを含む一連の発酵用フラスコに接種
する。発酵の２４〜４　ｓ　ｎ；ｉ間抜、前駆物質の選
択的イｊ＠喰を適当に加える。

Ａ　／　１６６８６１１．合体の２種の因子の相イ゛ｌ
゛う増加を望む場合には、同一発酵フラスコに２種の適
当な！前駆物質を加える。発酵を更に６０〜１５０時間
続け、次に発酵ケーキを除去し、汁試料をｔｌ　Ｉ）Ｌ
　Ｃによって分析する。

抗生物質の回収は当Ｉ該分野において公知の方法によっ
て行うことができる。

獣医薬として適用するためには、全体の発酵ケーキまた
は濃縮した１１を用いることがＣきる。

発酵液に前駆物質の添加は、該物質がその前もって決め
られたｐＨ値範囲に顕著に彰シクを及ぼさぬようにして
行われる。かくして、例えばＭｍ酸萌駆物質を媒質に直
接加えろ場合、媒質を緩衝するか、または微生物に対し
て無ｒｐｋ性の塩基でｉばちに中和することによって、
ｐＨ値を調節下で保持する。

加える前駆物質がアミノ酸である場合１．二のらのを産
生微生物に対して無毒性である酸または塩基とのその塩
、例えば塩酸塩及びナトリウム塩の水溶液として発酵液
に供給することができ、多くの例があるにしても、アミ
ノ酸を［分子内塩−１の溶液として有利に加えることが
できる。前駆物質として、フセミ混合物及びた学的活性
異性体の双）７を用いることができる。

しかしながら、一般にＬ−型の添加により、対応するＤ
−型よりも高い収率が得られる。

従って、本発明の方法の好ましい＋ｔ、体例は、抗生物
質Ａ／１６６８６複合体の因子Ａｉ（１、−バリン、そ
の塩またはエステル）及び／または因子Ａ２（Ｌ−ロイ
シン、その塩またはエステル）の濃度を高めるために、
アミノ酸前駆物質のＬ−型の使用を表わす。この好まし
い具体例によれば、また曳合体の８（）５以上に発酵生
成物にす９ける因子Ａ２の百分率を増加させることかび
きる。

低級アルカン酸前ｗＡ物質（イソ酪酸、イソ吉をン。

酸、ａ−ケト−イソ吉草酸及びα−ケト−イソカプロン
酸）を用いて、添加を無毒性の塩基によるその塩の水溶
液として行うことができる；通常、アンモニウム及びナ
トリウム塩が好ましい。

モノヒドロキシ低級アルカノールによる上記低級アルカ
ン酸及び不飽和脂肪酸のエステルをＭＯ駆物質として用
いる場合、該エステルは通常メタ／−ル、エタ／−ル及
びプロパツールから誘導されるが、またＣ４〜Ｃ６アル
カノールによるエステルを用いることもできる。この場
合、他の因子の相伴う増加を望まぬならば、Ｃ１〜Ｃ６
アルカノールは他の因子に対して前駆？ｌ質として作用
し９１トるものとは異ならなければならない（イソブタ
７−ルまたはイソ７ミルアルコール）。

アルカノール前駆物質、例えばイソブタ／−ル及びイソ
アミルアルコールを通常発酵液にそのまま加える。しか
しながら、またこれらのものを１８λ生物に対して無毒
性である酸のエステルとして０（給することもできる。

これらの酸は、他の因子の相伴う増加を望まぬならば、
他のＡ　／　１　ｆ”＋　６８６因子に対する前駆物質
として作用し得るものとは異ならなければならない。通
常、直鎖状（Ｃ７・−Ｃ４）アルカン酸、例えば酢酸、
プロピオン酸及プｆｆ６酸によるエステルが好ましい。

本発明による発酵Ｉ葉質に加える１゛選択的有効ｉｉｔ
　１は前駆物質のタイプに依存する。通常、低板アルカ
ン酸（イソ酪酸、インバレリアン酸）によっては、発酵
媒質中に酸の濃度０．Ｉｇ／Ｖ乃至５ｇ／１間の範囲を
与える量を用い、０．Ｉｇ／ｆ乃’ｔ１ｇ／ｌ間の範囲
が好ましい。低級アルカノール（イソブタ／−ル、イソ
アミルアルコール）または微生物に対して無毒性である
酸によるそのエステルによって、通常０．５．／ｉ乃至
５ｇ／β間のアルコール濃度範囲を与える鼠を用い、１
８／１乃至２ｇ／ｌ間の範囲が好ましい。

アミノ酸（バリン、ロイシン）及びケト−ａ＜ａ−ケト
−イソ吉草酸、α−ケト−イソカプロン酸）または酸及
び塩基とのその塩によっては、通常、発酵媒質に加える
「選択的有効ｆｉ、Ｉは０．２ｇ／ｌ乃至５ｇ／１間、
好ましくは０．５ｇ／ｉ乃至４ｇ／１間の範囲であり：
最も好ましくは２乃至４．／ｌ間の範囲である。

低級アルカン酸（例えばイン酪酸、インバレリアン酸）
、またはその塩を発酵媒質に１ｈ接加える場合、［選択
的有効量１は通常、０．Ｉｇ／ｐ乃至２゜５ｇ／＆間の
範囲であり、０．３ｇ／Ｚ乃至ｉ、ｓ、、、”１間の範
囲が好ましい。

上に示したよりも高い濃度がＡ　／　Ｉ　６６８　（ｉ
因子の１つの相対的百分率を高める際に有効であるが、
しかし、一般に全体の収率は培養液における毒性作用の
ために抑制される。

本発明の他の［］的及び好ましい具体例は、酪酸誘導体
または発＾デ条件下で酪酸を放出し得る前駆物質をＡ／
１６６８６産生培養物に加えることからなる抗生物質Ａ
／１６６８６複合体、Ａ／１６６８６因子Ａ２または因
子Ａ、の生成を尚める方法を表わす。

驚くべきことに、事実上、本発明の方法によるＡ　／　
１６６８６因子の生成の選択的強化は、Ａ／ｌ　（ｉ　
６１１６因子の適当な１１ｉ７駆物質と共に酪酸誘導体
または前駆物質を加えた場合、更に増加することが見出
された。

酪酸誘導体または前駆物質の好ましい例は（Ｃ＋〜ＣＳ
）アルキルエステル、モノ−及びポリヒドロキシアルキ
ルエステルである。

酪酸エチル及びトリーブチリンが殊に好ましい。

発酵媒質にいずれかのｑ！ｌＪ質の添加に関連して、殊
に適当な前駆９ＩＪ質及び酪酸またはその誘導体もしく
は前駆物質の添加に関連して、「共に」なる用語には、
加えた物質の合同した効果が発酵において明示され得る
ような間隔で、示した物質を同時にまたは逐次的に（か
わるがわる及び逆に）加えることが包含される９ 明らかに、またこの定義には１共に１加える１種または
双方の物質が培養媒質にすでに加えられているか、或い
はその中にすでに存在している場合が含まれる。

一般に、酪酸誘導体または前駆物質を発酵媒質に０．５
ｇ７Ｑ〜２［？／ｌの酸の濃度を与える量で加える。

一般に、抗生物質複合体の収率が顕著に増加し、また適
当な前駆物質を加えた場合、得られた抗生物質因子の６
分率を約９５〜９８％に増加させることができる。

ロイシン、そして最も好ましくはＪ、−ロイシンをトリ
ーブチリンまたは酪酸エチルとＪＩ２にＡ　／　１６６
８６産’：、培養物に発酵中に加えることからなる＾収
率及び純度での抗生物質Ａ　／　１６　Ｂ　Ｂ　ｆｉ因
子Ａ２の製造方法が殊に好ましい。

以下の実施例は本発明の方法のある特定の具体例を更に
詳細に述べるものである。

実施例１ アクチノプラネス・エスピーＡＴＣＣ３３０７６（Ｆ［
ＥＲＭ−Ｐ　　Ｎｏ、５４７７）のオートミールＱ天斜
面を次の栄養媒質１００ｚｆを含む容Ｍ５００ｘ（ｌの
フラスコに接種した（ｇ／ｌ）。

大豆粉　　　　　　　　　　　１３ グルコース　　　　　　　　　　１２ 殿粉　　　　　　　　　　　　１３ Ｃａ　ＣＯ３４ 回転振ｆ！機上で２８〜３０“Ｃで３６時間後、培養１
＆５ｘｅを用いて、次の発Ｉｖ媒貿１００ｚＮを含む容
量５００ｉ１１のフラスコに接種した（＋？／ｌ）。

大豆粉　　　　　　　　　　　３０ グリセリン　　　　　　　　２０ 殿粉　　　　　　　　　　　　　・ｔ グルコース　　　　　　　　　　４ マルトース　　　　　　　　　２０ スクロース　　　　　　　　　２０ Ｃａ　ＣＯｓ　　　　　　　　　　　　６回転振盪機上
で２８〜３０℃で２４時間培交した後、適当な前駆物質
を加えた。９０〜９６時間培養後、発酵ケーキを遠心分
離によって除去し、汁を次のＨＰＬＣ法に従って、抗生
物質Ａ／１６６８６因子１こおけるその含有量を分析し
た：ａ、グラジエ２！ト′ｆ、−徂夕−ｒｑｑ、Ｂ主２
て一次遠一！−昇：ポンプ：パリアン（Ｖ　ａｒｉａｎ
）　５０００　Ａ　；検出器パリアン、２５４ｎｍ インジエクタｍ：しオグイン（Ｒｈｅｏｄｙｎｅ）モデ
ル／ｌ２５： インテグレータ一二スペクトラ・フイノイクス（Ｓ　ｐ
ｅｃＬｒａ　　Ｐ　ｈｙｓｉｃｓ）モデル４０００゜Ｌ
７人ニジラン処理したシリカデル： ブラウンリー・ラボラトリイー（１３ｒｏｗｎｌｅｅＬ
ａｂ、）ＲＰ　１８ス７エリイ（Ｓｐｂｃｒｉ）＄肱框
：０，０５Ｍ　　Ｎａ！Ｉ□ＰＯ，／アセトニトリル、
６５：３５　　、　　ｐＨ６ ンイ乙−ｊＬ：　１　　、８　ｚ　１／　分注ノ（＝２
０μ！ 毘作条件二同−濃度溶媒条件 久ｔ？　ＩＱ」１１−：　Ａ　／　１６６８６因子Ａ、
　　　［３，６９分Ａ／１６６８６囚子Ａ２１０．１０
分 Ａ／１６６８６因子Ａ３１６．２９分 す、茨欠３ｉ− 成分を上記のｈ法によって分離し、その相対分布を、面
積百分重性によって、：３本のピークの合計の％として
得た。代表的な実験結果を以下に示す：

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、アクチノプラネス・エスピー（Ａｃｔｉｎｏｐｌａ
   ｎｅｓ　ｓｐ．）ＡＴＣＣ３３０７６またはその抗生物
   質Ａ／１６６８６産生突然変異体の培養物に適当な前駆
   物質の選択的有効量を加えることからなり、その際に、
   抗生物質Ａ／１６６８６複合体における因子Ａ＿２の比
   を増加させるための適当な前駆物質を、ロイシン、該産
   生微生物に対して無毒性である酸または塩基とのその塩
   、イソ吉草酸、該産生微生物に対して無毒性である塩基
   とのその塩、モノ−及びポリヒドロキシ低級アルカノー
   ルとのそのエステル、α−ケト−イソカプロン酸、該産
   生微生物に対して無毒性である塩基とのその塩、モノ−
   及びポリヒドロキシ低級アルカノールとのそのエステル
   、イソアミルアルコール及び産生微生物に対して無毒性
   である酸とのそのエステルから選び、そして抗生物質Ａ
   ／１６６８６複合体における因子Ａ＿３の比を増加させ
   るための適当な前駆物質を、バリン、該産生微生物に対
   して無毒性である酸及び塩基とのその塩、α−ケト−イ
   ソ吉草酸、該産生微生物に対して無毒性である塩基との
   その塩、モノ−及びポリヒドロキシ低級アルカノールと
   のそのエステル、イソ酪酸、産生微生物に対して無毒性
   である塩基とのその塩、モノ−及びポリヒドロキシ低級
   アルカノールとのそのエステル、イソブタノール及び産
   生微生物に対して無毒性である酸とのそのエステルから
   選ぶことを特徴とするその因子Ａ＿２及び／またはＡ＿
   ３に富んだ抗生物質Ａ／１６６８６複合体の製造方法。 ２、加える適当な前駆物質がバリンまたは微生物に対し
   て無毒性の酸及び塩基によるその塩であり、そしてぞれ
   ぞれ選択的有効量が０．２ｇ／ｌ乃至５ｇ／ｌ間、好ま
   しくは０．５ｇ／ｌ乃至４ｇ／ｌ間の範囲である特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ３、加える適当な前駆物質がイソ酪酸または微生物に対
   して無毒性の酸及び塩基によるその塩であり、そしてそ
   れぞれ選択的有効量が０．１ｇ／ｌ乃至２．５ｇ／ｌ間
   、好ましくは０．３ｇ／ｌ乃至１．５ｇ／ｌ間の範囲で
   ある特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、加える適当な前駆物質がイソ酪酸のモノ−またはポ
   リヒドロキシ低級アルカノールとのエステルであり、そ
   してそれぞれ選択的有効量が０．１ｇ／ｌ乃至５ｇ／ｌ
   間、好ましくは０．１ｇ／ｌ乃至１ｇ／ｌ間の範囲であ
   る特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、加える適当な前駆物質がイソブタノールまたは微生
   物に対して無毒性の酸とのそのエステルであり、そして
   それぞれ選択的有効量が０．５ｇ／ｌ乃至５ｇ／ｌ間、
   好ましくは１ｇ／ｌ乃至２ｇ／ｌ間の範囲である特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ６、加える適当な前駆物質がロイシンまたは微生物に対
   して無毒性の酸及び塩基とのその塩であり、そしてそれ
   ぞれ選択的有効量が０．２ｇ／ｌ乃至５ｇ／ｌ間、好ま
   しくは０．５ｇ／ｌ乃至４ｇ／ｌ間の範囲である特許請
   求の範囲第１項記載の方法。 ７、加える適当な前駆物質がイソ吉草酸または微生物に
   対して無毒性の酸及び塩基によるその塩であり、そして
   それぞれ選択的有効量が０．１ｇ／ｌ乃至２．５ｇ／ｌ
   間、好ましくは０．３ｇ／ｌ乃至１．５ｇ／ｌ間の範囲
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ８、加える適当な前駆物質がイソ吉草酸のモノ−または
   ポリヒドロキシ低級アルカノールとのそのエステルであ
   り、そしてそれぞれ選択的有効量が０．１ｇ／ｌ乃至５
   ｇ／ｌ間、好ましくは０．１ｇ／ｌ乃至１ｇ／ｌ間の範
   囲である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、加える適当な前駆物質がイソアミルアルコールまた
   は微生物に対して無毒性の酸とのそのエステルであり、
   そしてそれぞれ選択的有効量が０．５ｇ／ｌ乃至５ｇ／
   ｌ間、好ましくは１ｇ／ｌ乃至２ｇ／ｌ間の範囲である
   特許請求の範囲第１項３記載の方法。 １０、加える適当な前駆物質がα−ケト−イソカプロン
   酸または微生物に対して無毒性の塩基とのその塩、また
   はモノ−またはポリヒドロキシ低級アルカノールとのそ
   のエステルであり、そしてそれぞれ選択的有効量が０．
   ２ｇ／ｌ乃至５ｇ／ｌ間、好ましくは０．５ｇ／ｌ乃至
   ４ｇ／ｌ間の範囲である特許請求の範囲第１項記載の方
   法。 １１、微生物に対して無毒性の塩基との塩がナトリウム
   塩またはアンモニウム塩である特許請求の範囲第１項、
   第２項、第３項、第６項、第７項または第１０項記載の
   方法。 １２、エステルが次のアルカノール：メタノール、エタ
   ノール、プロパノール、エチレングリコール及びグリセ
   リンの１つとのエステルである特許請求の範囲第１項、
   第４項、第８項または第１０項記載の方法。 １３、アミノ酸がＬ−型である特許請求の範囲第１項、
   第２項または第６項記載の方法。 １４、微生物に対して無毒性の酸との塩が塩酸塩または
   硫酸塩である特許請求の範囲第１項、第２項または第６
   項記載の方法。 １５、微生物に対して無毒性の酸とのエステルが次の酸
   ：酢酸、プロピオン酸及び酪酸の１つとのエステルであ
   る特許請求の範囲第１項、第５項または第９項のいずれ
   かに記載の方法。 １６、菌株がアクチノプラネス・エスピーＡＴＣＣ３３
   ０７６である上記特許請求の範囲のいずれかに記載の方
   法。 １７、発酵を２５℃乃至３５℃間、好ましくは２７℃乃
   至３３℃間の温度で行う上記特許請求の範囲のいずれか
   に記載の方法。 １８、適当な前駆物質の添加を発酵開始後２４〜４８時
   間に行う上記特許請求の範囲のいずれかに記載の方法。 １９、特許請求の範囲第１〜１８項のいずれかに記載の
   方法において、Ａ／１６６８６因子Ａ＿２またはＡ＿３
   の適当な前駆物質と共に、酪酸の前駆物質または誘導体
   の有効量を添加することを特徴とする方法。 ２０、アクチノプラネス・エスピーＡＴＣＣ３３０７６
   またはその産生突然変異体の培養物に酪酸の前駆物質ま
   たは誘導体の有効量を加えることを特徴とする抗生物質
   Ａ／１６６８６複合体の生成を増加させる方法。