JPS6367862B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は採取された血液の凝固を促進する作用
を有する血液凝固促進剤に関し、詳しくは、短時
間で血清を分離する目的あるいは血液凝固検査に
おける凝固時間の判定を短時間で遂行する目的の
ために、採取された血液に混入させて使用される
血液凝固促進剤に関する。 近年予防医学の目ざましい進歩と相俟つて、血
清生化学検査、血清免疫学検査、血球検査等の血
液検査が広く普及し、とりわけ血清検査は血液検
査の主体をなしており、検査に要する血清は血液
検査用容器に採取した血液を凝固させた後、遠心
分離により、比重の異なる血餅（フイブリンと血
球とが混合して形成されるゲル様塊状物）から分
離採取される。 上記の血清検査において、従来問題とされてき
た点は、検体より血液を採取した後短時間に検査
を実施し、測定値を得ることができないことにあ
り、この原因は採取された血液が凝固するまでに
かなりの時間を要することにあつた。 上記の問題点を解決するため従来、血液検査用
容器中に採取された血液にカオリン、セライト、
ガラス、酸化シリコン、ベントナイト等の無機質
粉末を加え、凝固を促進させる方法、ポリスチレ
ンなどのプラスチツクの小球あるいはペレツトを
加える方法あるいは、生物体より抽出された凝固
促進活性を有する物質、例えば蛇毒より得られる
トロンビン様物質、動物脳より抽出されるトロン
ボプラスチン物質を用いる方法等が用いられて来
た。しかしながら上記無機質粉末やプラスチツク
の小球あるいはペレツトを用いる方法において
は、血液凝固時間の短縮効果が未だ不十分であつ
たり、多量に使用する場合、溶血を生じるなどの
問題が存していた。 また上記の生物体よりの抽出物質を用いる方法
においては、保存中に活性を失ない易いこと、高
価であること等の問題が存していた。 上記の問題点を解消するために、本発明者等は
血液凝固における凝固因子や血小板を活性化する
ために有効な物質を鋭意探索した。 その結果、担体表面に界面活性剤と吸着性無機
物を並存させることにより、血液凝固促進作用を
有し、血液凝固に要する時間を短縮すると共に、
遠心分離により血清と血餅を良好に分離すること
ができることを見出し本発明を完成するに至つ
た。 本発明の要旨は、担体表面に、(1)非イオン性界
面活性剤が１×10^-10〜１×10^-3ｇ／cm²及び(2)ア
マニ油吸油量が20〜40ml／100ｇ、BET比表面積
値が5000〜30000cm²／ｇ、比抵抗値が１×
10¹⁰Ω・cm以下であつて、ガラス、シリカ、カオ
リン、セライト及びベントナイトからなる群より
選ばれ、粒径が50μ以下であつて平均粒径が10μ
以下である吸着性無機物が１×10^-6〜１×10^-3
ｇ／cm²存在せしめられてなり、血液検査用容器内
に添加して用いられるための血液凝固促進剤に存
する。 次に本発明血液凝固促進剤について更に詳細に
説明する。 担体としては、例えば金属、セラミツク、プラ
スチツク、ゴム等の粒状体が使用される。担体が
粒状体である場合には、その表面に界面活性剤及
び吸着性無機物を存在させたものを血液中に分散
させ遠心分離にかけた際に血清と血餅との分離を
しやすいものとなる。しかしながら担体の形状は
粒状に限られるものでなく棒状、筒状、フイルム
状、シート状、繊維状、織布状、不織布状等の
種々の形状をとりうる。 担体の表面に界面活性剤及び吸着性無機物が存
在せしめられている。界面活性剤としては、非イ
オン性界面活性剤が用いられ、なかでもポリグリ
セリンの脂肪酸エステル、ソルビツトの脂肪酸エ
ステル、ポリエーテル変性を施したシリコーンオ
イル等が好適であり、更に具体的には、例えばス
テアリン酸ポリグリセライド、オレイン酸ポリグ
リセライド、ソルビタンモノステアレート、ソル
ビタンモノオレート、ポリエチレングリコール変
性シリコーンオイル、ポリプロピレングリコール
変性シリコーンオイルなどがある。 吸着性無機物としては、吸着剤として使用され
ていたような無機物、すなわちガラス、シリカ、
カオリン、セライト、ベントナイト等の水不溶性
の無機質微粉末がこれに該当する。 又、吸着性無機物は粒径が50μ以下であつて、
平均粒径が10μ以下のものを使用する。そして特
に血液凝固時間を短縮させるに有効な吸着性無機
物はシリカであり、とり分け無定形成分を20重量
％以上含有する多孔性のシリカがすぐれた効果を
発揮する。 かゝる吸着性無機物は、血液と接触した場合に
血液凝固因子の活性化を促進し、又血小板の凝集
を促がす作用を有する。しかしながら吸着性無機
物が血液凝固促進作用を効果的に発揮するために
は、アマニ油吸油量、BET比表面積値、比抵抗
値が一定の範囲内に存在することが必要である。 アマニ油吸油量及びBET比表面積値は、吸着
性無機質微粉末の表面積の程度を表わし、又表面
積は吸着性無機物の有する表面孔隙の程度と関連
するので、吸油量及び比表面積によつて表面孔隙
の程度を知ることができる。そして本発明におけ
る吸着性無機物は、アマニ油吸油量が20〜40ml／
100ｇ、BET比表面積値が5000〜30000cm²／ｇで
あるものが使用される。 アマニ油吸油量は日本工業規格Ｋ−5101に準拠
して測定される値を示し、吸着性無機物１乃至５
ｇをガラス板（約250×250×５mm）にとり、アマ
ニ油をピユレツトから少量ずつ前記試料の中央に
滴下し、その都度全体をヘラで充分に練り合わ
せ、前記試料がアマニ油の一滴で急激にやわらか
くなりガラス板に粘りつく直前を終点としそれ迄
に使用したアマニ油の量を求め、試料100ｇに対
するアマニ油のml数を以つてアマニ油吸油量とす
る。 BFT比表面積値は、Brunauer−Emmett−
Tellerによつて提案され多分子層吸着理論から求
められる値であり、その理論は、Journal of
American Chemical Society60・309（1938）；
59、2682（1937）等において詳説されている。 BET比表面積値は、吸着性無機物の表面に吸
着される気体の吸着量、その時の平衝圧、吸着ガ
スの飽和蒸気圧から単分子層として表面をおゝい
切る気体量を求め、これに吸着気体分子の平均断
面積を乗じて算出された値を指すものであり、吸
着気体としては窒素ガス、酸素ガス、アルゴンガ
ス、メタンガス等が使用される。そしてこの方法
によれば、アマニ油吸油量の測定によつては測定
できない細孔を含めた表面積値が測定される。 血液凝固に際しては、第XII因子、すなわち接
触因子が活性化されるが、このためには異物表面
上に第XII因子、ブレカリクレイン、高分子キニ
ノーゲンの３種の物質が錯体を形成して吸着され
ることが必要であり、これらの一つ又は二つが欠
けた状態での吸着は活性化に至らないとされてい
る。ところで、血液凝固促進作用を期待して吸着
性無機物を使用した場合に、表面積が非常に大き
なものであると、吸着性無機物の表面上には錯体
を形成しない状態での第XII因子、ブレカリクレ
イン、高分子キニノーゲンの吸着の割合が高まる
ことになり、言い換えると、第XII因子の活性化
に必要な三者の錯体形成割合は減少することにな
り、かえつて血液凝固促進作用は減殺されること
になる。また逆に吸着性無機物の表面積が小さす
ぎると、凝固因子の吸着の確率が小さくなり、血
液凝固促進作用を期待することができなくなる。
このために本発明における吸着性無機物はアマニ
油吸油量が20〜40ml／100ｇ、BET比表面積値が
5000〜30000cm²／ｇの範囲の表面積を有すること
が必要である。 又、本発明における吸着性無機質微粉末の比抵
抗値は１×10¹⁰Ω・cm以下、より好ましくは５×
10⁴Ω・cm以下であるものが使用される。 比抵抗値は電気伝導度の逆数であり、常温にお
ける値である。 血液が異物に接触すると、血液凝固現象に先立
つてアルブミン、グロブリンや種々の血液凝固因
子等の蛋白質が直ちに異物表面へ吸着し、その際
の蛋白質分子のコンフオーメーシヨンの変化が、
引続いて生ずる生化学反応に様々な影響を及ぼ
す。特に酵素反応である血液凝固因子の活性化機
構は大きな影響を受け場合によつては凝固機能を
損なう。 又、大きなコンフオーメーシヨンの変化を生じ
た吸着グロブリン、アルブミンの上に付着した血
小板は異常な溶融変形をきたし、重合析出したフ
イブリン鎖が吸着性無機物に強く固着するという
現象を引き起こす。後者の現象が血清採取を目的
とする容器内で生ずると、遠心分離を行なつて
も、血餅と血清とに分離せず、その目的を達成す
ることができなくなる。 蛋白質のコンフオーメーシヨンの変化は吸着性
無機物と蛋白質間の疎水性相互作用、水素結合性
相互作用、静電的相互作用等の様々な相互作用の
結果生ずるが、このうち静電的相互作用について
は比較的導電性の高い吸着性無機物を用いると緩
和される。すなわち、蛋白質の持つ極性基群によ
り吸着性無機物中には、それらに応じた分布を持
つ双極子モーメント群が誘起されるわけである
が、吸着性無機物が非導電性であれば導電性の場
合に比して応答性が悪くなり、表面に吸着してい
る蛋白質の有する電位分布と吸着性無機物の有す
る電位分布とは相互に整合性を欠き、これが蛋白
質に局所的で不均一な歪みを生じさせコンフオー
メーシヨンの変化へとつながる。従つて吸着性無
機物が導電性を有することは、蛋白質と吸着性無
機質微粉末との間の電位分布の整合性を保持し、
蛋白質のコンフオーメーシヨンの変化を防止する
ために必要である。 このために本発明における吸着性無機物は、比
抵抗値が１×10¹⁰Ω・cm以下のものとされるので
ある。 吸着性無機物は、血液を吸着される性質を有
し、又、血液凝固因子に対する活性化作用により
血液凝固促進作用を有する。しかし吸着性無機物
が、担体表面に単独で存在される場合は、血液凝
固速度は早められるものの、凝固により生じた血
餅を担体表面に付着させる働きをも有するものと
なり、遠心分離にかけた際に担体とその表面に付
着した血餅との間に強いずり応力が発生し、この
ために赤血球が破壊されて血清中に溶け込んでし
まうことになりやすい。 しかしながら担体表面に吸着性無機物と共に界
面活性剤が存在される場合は、血餅の担体表面へ
の付着を防ぎ、遠心分離にかけた際の血清中への
溶血を防ぐことができる。 担体表面への界面活性剤の存在量は１×10^-10
〜１×10^-3ｇ／cm²とされる。担体表面への界面活
性剤の存在量が１×10^-10ｇ／cm²よりも少ない場
合は、担体表面への血餅の付着防止が充分となら
ず、又１×10^-3ｇ／cm²よりも多い場合は、界面活
性剤が血清中に混つてしまい血清検査を阻害する
おそれが生ずる。又担体表面への吸着性無機物の
存在量は１×10^-6〜１×10^-3ｇ／cm²とさらる。担
体表面への吸着性無機物の存在量が１×10^-6ｇ／
cm²よりも少ない場合は血液凝固因子に対する活性
化作用が充分得られないものとなり、又１×10^-3
ｇ／cm²よりも多い場合は吸着性無機物の血清中へ
の混入を生じ血清検査を阻害するおそれが生ず
る。 担体表面に界面活性剤及び吸着性無機物を存在
させるには、たとえば、界面活性剤と吸着性無機
物を適当な結合剤や溶剤中に溶解、分散させた状
態で、あらかじめ用意された担体に塗付、あるい
は含浸させてやればよい。また、担体がプラスチ
ツク製である場合は、成形材料としてのプラスチ
ツクにあらかじめ、界面活性剤を混合しこれを押
出成形、射出成形、ブロー成形、圧縮成形、トラ
ンスフアー成形、真空成形、流延成形等適宜の成
形方法によつて担体を成形し、これに適当な結合
剤や溶剤中に分散させた吸着性無機物を塗付して
もよい。 担体表面に界面活性剤及び吸着性無機物が存在
せしめられてなる、血液凝固促進剤の比重は1.03
〜1.08とされるのが好適であり、かゝる場合は血
清と血餅との中間程度の比重を有するものとなる
ので、遠心分離にかけた際に血清と血餅の境界部
分に集合し、血清や血餅への混入が防がれる。 本発明血液凝固促進剤によれば、血液凝固因子
が迅速に活性化せしめられ、血液凝固に要する時
間が著しく短縮されると共に血清と血餅との分離
が容易に行なわれ、血餅成分の血清中への溶け込
みを防ぐことができる等の利点が存する。 実施例 １ ポリスチレン100重量部当たり、ポリエチレン
グリコール変性シリコーンオイル10重量部を添加
した成形材料を押出成形して、直径２mm長さ２mm
の粒状体を得た。この粒状体100重量部当たり、
微粉末状シリカ（平均粒径4.0μm、アマニ油吸油
量30ml／100ｇ、BET比表面積値12000cm²／ｇ、
比抵抗値2.6×10⁴Ω・cm）、の２重量％メチルアル
コール分散液１重量部を加えて、充分に混合し、
次いで乾燥させて血液凝固促進剤を得た。粒状体
表面のポリエチレングリコール変性シリコーンオ
イルの存在量は１×10^-5ｇ／cm²であり、シリカの
存在量は１×10^-4ｇ／cm²であつた。この凝固促進
剤を10ml用アクリル樹脂製スピツツ、及びガラス
製スピツツに夫々１ｇ添加し、これに人新鮮血８
mlを注入した後、20℃で放置して、全血が完全に
流動しなくなるまでに要した時間を血液凝固時間
として測定し、血液凝固性を評価した。血液凝固
後、直ちに3000回転／分の回転速度で５分間遠心
分離を行ない、血清分離状態を観察するととも
に、上澄み血清をピペツトにて採取し、その量を
血清収量とした。表１の実施例１の欄の結果から
明らかなように、この血液凝固促進剤は、血液凝
固が極めて速やかであり、血清分離状態も極めて
良好で溶血を生ずることもなく、血清収量も良好
であつた。 実施例 ２ ソルビタンモノステアレート0.1重量％、実施
例１におけると同じ微粒子状シリカ１重量％を
各々含有するメチルアルコール分散液を再生セル
ロース製不織布に含浸させ、乾燥させて、血液凝
固促進剤を得た。この不織布表面のソルビタンモ
ノステアレートの存在量は１×10^-5ｇ／cm²であ
り、シリカの存在量は１×10^-4ｇ／cm²であつた。
これを10ml用アクリル樹脂製スピツツ、及びガラ
ス製スピツツに４cm²投入し、これに人新鮮血８ml
を注入して、実施例１と同様にして血液凝固性、
血清分離状態、血清収量を評価した。その結果を
表１の実施例２の欄に示す。この結果からも明ら
かなように、この血液凝固促進剤は血液凝固が極
めて速やかで血清分離状態も極めて良好で溶血を
生ずることもなく、又血清収量も良好であつた。 比較例 １ 実施例１において、ポリエチレングリコール変
性シリコーンオイルが添加されない以外は実施例
１と同様にして表面に微粉末状シリカが付着され
たポリスチレン微粉末を得た。これを10ml用アク
リル樹脂製スピツツ及びガラス製スピツツに夫々
１ｇ添加し、実施例１と同様にして人新鮮血によ
る評価を行なつた。 その結果を表１の比較例１の欄に示す。この結
果からも明らかなように、血清分離状態が悪く血
清への溶血を生じ、また血清収量も低かつた。 比較例 ２ 実施例２において、ソルビタンモノステアレー
トが使用されない以外は実施例１と同様にして、
微粉末状シリカが付着された再生セルロース製不
織布を得た。これを10ml用アクリル樹脂製スピツ
ツ及びガラス製スピツツに４cm²量投入し、実施例
２と同様にして人新鮮血による評価を行なつた。 その結果を表１の比較例２の欄に示す。この結
果からも明らかなように、血清分離状態が悪く、
血清への溶血を生じ、また血清収量も低かつた。 【表】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 担体表面に、(1)非イオン性界面活性剤が１×
   10^-10〜１×10^-3ｇ／cm²及び(2)アマニ油吸油量が
   20〜40ml／100ｇ、BET比表面積値が5000〜
   30000cm²／ｇ、比抵抗値が１×10¹⁰Ω・cm以下で
   あつて、ガラス、シリカ、カオリン、セライト及
   びベントナイトからなる群より選ばれ、粒径が
   50μ以下であつて平均粒径が10μ以下である吸着
   性無機物が１×10^-6〜１×10^-3ｇ／cm²存在せしめ
   られてなり、血液検査用容器内に添加して用いら
   れるための血液凝固促進剤。