JPS6362519B2 - - Google Patents
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- JPS6362519B2 JPS6362519B2 JP55053690A JP5369080A JPS6362519B2 JP S6362519 B2 JPS6362519 B2 JP S6362519B2 JP 55053690 A JP55053690 A JP 55053690A JP 5369080 A JP5369080 A JP 5369080A JP S6362519 B2 JPS6362519 B2 JP S6362519B2
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Description
本発明は、広義には、新規な交雑細胞ライン
（hybrid cell line）さらに詳しくはすべての正常
なヒトのヘルパー（helper）Ｔ細胞に見い出され
るある抗原に対するモノクローナル抗体の生成の
ための交雑細胞ライン、そのような生成された抗
体、およびこの抗体を用いる治療および診断方法
および組成物に関する。 1975年におけるKohlerおよびMilsteinによる
免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨髄
腫の融合（fusion）［Nature256、495−497
（1975）］は、均質な（いわゆる「モノクローナ
ル」）抗体をつくる連続な細胞ラインを得ること
ができることを初めて証明した。この基本の研究
以来、種々の交雑細胞［いわゆる「ハイブリドマ
類（hybridomas）」］の生成およびこれらのハイ
ブリドマ類によりつくられた抗体の種々の科学的
研究への使用について多くの努力が向けられてき
た。たとえば、次の文献を参照：Current
Topics in Microbiology and Immunology、
Volume 81−“Lymphocyte Hybridomas”、F.
Melchers、M.Potter、およびN.Warner、
Editors、Springer−Verlag、1978、およびそこ
に含まれる参考文献；C.J.Barnstable、et al.、
Cell、14、９−20（May、1978）；P.Parhamおよ
びW.F.Bodmer、Nature 276、397−399
（November、1978）；Handbook of
Experimental Immunology、Third Edition
Volume ２、D.M.Wier、Editor、Blackwell、
1978、Chapter 25；およびChemical and
Engineering News、January １、1979、15−
17。これの文献は同時にハイブリドマ類からモノ
クローナル抗体を生成する試みによつて得られる
利益および複雑さを示している。一般的技術は概
念的によく理解されているが、各特定の場合に多
くの困難に出合い、そして変更が要求される。事
実、一定のハイブリドマを生成しようと試みる前
には、所望のハイブリドマが得られるか、得られ
た場合抗体を生成するか、あるいはそのように生
成された抗体が所望の特異性をもつか、を確める
ことができない。成功の程度は、主として、使用
する抗原のタイプおよび所望のハイブリドマを単
離するために使用する選択技術によつて影響を受
ける。 人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノク
ローナル抗体を生成する試みは、数例報告されて
いるだけである。たとえば、Current Topics in
Micrbiology and Immunology、ibid、66−69お
よび164−169参照。これらの報告された実験にお
いて使用されている抗原は、培養したリンパ芽球
性白血病およびヒトの慢性リンパ球性白血病の細
胞ラインであつた。得られた多くのハイブリドマ
類は、すべてのヒト細胞の種々の抗原に対して抗
体を生成するように思われた。ハイブリドマ類は
いずれも、ヒトのリンパ球の前もつて定めたクラ
スに対して抗体を生成しなかつた。 人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に
２つの主なクラスが存在することを理解すべきで
ある。これらのうちの第１クラス（胸腺誘導細
胞、すなち、Ｔ細胞）は、ヘモポイエチン幹細胞
から胸腺において分化されている。胸線内にある
間、分化する細胞は「胸線細胞」と名づけられ
る。成熟したＴ細胞は胸腺から出、そして組織、
リンパ管、および血流の間を循環する。これらの
Ｔ細胞は、再循環する小さいリンパ球の貯留
（pool）の大きい比率を形成する。それらは免疫
学的特異性を有し、そして細胞介在免疫応答（組
織移植注入のような）においてエフエクター
（effector）細胞として直接関与する。Ｔ細胞は
液性抗体を分泌しないが、後述するリンパ球の第
２クラスによるこれらの抗体の分泌に時々要求さ
れる。Ｔ細胞のいくつかの型は免疫系の他の面に
おいて調節機能をはたす。この細胞共働の過程の
機構はまだ完全には理解されていない。 リンパ球の第２クラス（骨髄誘導細胞、すなわ
ち、Ｂ細胞）は、抗体を分泌するものである。そ
れらもまたヘモポイエチン幹細胞から発生する
が、それらの分化は胸腺によつて決定されない。
鳥類において、それらはフアブリキウス嚢
（Bursa of Fabricius）と呼ばれる胸線に類似す
る器管において分化されている。しかし、哺乳動
物においては、同等の器管は発見されておらず、
そしてこれらのＢ細胞は骨髄内で分化すると考え
られる。 ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（helper）」、「抑
制体（Auppressor）」および「キラー（killer）」
Ｔ細胞と呼ばれる、少なくともいくつかのサブタ
イプに分けられ、それらは（それぞれ）反応を促
進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す
（分離する）機能を有することが認められた。こ
れらのサブクラスはネズミの系統についてよく理
解されているが、それらは人間の系についてわず
かに最近記載されただけである。たとえば、次の
文献を参照：R.L.Evans、et al.、Journal of
Experimental Medicine、Volume 145、221−
232、1977；およびL.ChessおよびS.F.
Schlossman−“Functional Analysis of
Distinct Human Ｔ−Cell Subsets Bearing
Unique Differentiation Antigens”
“Contemporary Topics in Immunobiolgy”、O.
Stutman、Editor、Plenum Press、1977、
Volume ７、363−379。 Ｔ細胞のクラスまたはサブクラスを同定または
抑制することができることは、種々の免疫調節の
不調または状態の診断または処置にとつて重要で
ある。 たとえば、ある種の白血病およびリンパ腫は、
それらがＢ細胞またはＴ細胞のいずれを源とする
かによつて、異なる予後を有する。こうして、病
気の予後の評価はこれらのリンパ球の２つのクラ
スを区別することに依存する。たとえば、次の文
献を参照：A.C.AisenberyおよびJ.C.Long、The
American Journal of Medicine、58：300
（March、1975）；D.Belpomme、et al.、
Immunological Diagnosis of Leukemias and
Lymphomas、S.Thierfelder、et al.、Editors、
Springer、Heidelberg、1977、33−45；および
D.Belpomme、et al.、British Journal of
Haematology、1978、38、85。 ある種の病気の状態（たとえば、若年性リウマ
トイド関節炎およびある種の白血病）は、Ｔ細胞
のサブクラスの不釣合いに関連する。自己免疫の
病気は一般に「ヘルパー」Ｔ細胞の過剰またはあ
る種の「抑制体」Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪
性の病気は一般に「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連
することが示唆された。 ある種の白血病において、過剰のＴ細胞は発育
の停止した状態において生成される。診断はこう
してこの不釣合い、すなわち、過剰を検知するこ
とができることに依存しうるであろう。たとえ
ば、次の文献を参照：J.Kersey、et al.、
“Surface Mrkers Define Human Lymphoid
Malignancies with Differing Prognoses”、
Haematology and Blood Transfusion、
Volume 20、Springer−Verlag、1977、17−24、
およびその中に含まれる参考文献。 後天性無ガンマアグロブリン血症（aoguired
agammaglobulinemia）、すなわち免疫グロブリ
ンが生成されない病気の状態は、少なくとも２つ
の明確な型からなる。型において、免疫グロブ
リンの生成不能は抑制体（suppressor）Ｔ細胞の
過剰により、一方型においてそれはヘルパーＴ
細胞の不足による。両方の型において、患者のＢ
細胞、すなわち、抗体を実際に分泌するリンパ球
の不足もしくは欠乏は存在しないように見える。
しかしながら、これらのＢ細胞は抑制され、ある
いは「助けられず（“not helped”）」、その結果免
疫グロブリンは生成が大きく減少するか、生成し
なくなる。後天性無ガンマアグロブリン血症の例
はこうして抑制体Ｔ細胞の過剰またはヘルパーＴ
細胞の不存在について試験することによつて決定
することができる。 治療サイドにおいて、まだ明確に証明されてい
ないが、Ｔ細胞のサブクラスに対する抗体を過剰
量で投与することは自己免疫の病気または悪性の
病気において治療上有益であるという、いくらか
の示唆がある。たとえば、ヘルパーＴ細胞のガン
（ある種の皮膚Ｔ細胞リンパ腫およびある種のＴ
細胞急性リンパ芽球性白血病）はヘルパーＴ細胞
の抗原に対する抗体によつて処理することができ
る。ヘルパー細胞の過剰により起こされる自己免
疫（autoimmune）の処置は、同じ方式でまた達
成することができる。 ヒトＴ細胞の全クラス（いわゆる抗ヒト胸腺細
胞のグロブリン、すなわち、ATG）に対する抗
血清は、移植組織を受ける患者において治療上有
用であると報告されている。細胞介在免疫応答
（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に依存する
ので、Ｔ細胞に対する抗体を投与すると、この拒
否の過程を防止または遅延する。たとえば、次の
文献を参照：Cosimi、et al.、“Randomized
Clinical Trial of ATG in Cadaver Renal
Allgraft Recipients：Importance of Ｔ Cell
Monitoring”、Surgery 40：155−163（1976）お
よびその中に含まれる参考文献。 ヒトＴ細胞のクラスおよびサブクラスの同定お
よび抑制は、従来、動物をヒトＴ細胞で免疫し、
その動物を出血させて血清を取り、そしてこの抗
血清を（たとえば）地元（autololgous）である
が、異種ではないＢ細胞で吸着して望まない反応
性もをつ抗体を除去することによつて得た、ヒト
Ｔ細胞のための自発性自己抗体または選択的抗血
清を使用することによつて達成された。これらの
抗血清の製造は、とくに吸着および精製の工程に
おいて、きわめて困難である。吸着され且つ精製
された抗血清でさえ、所望の抗体に加えて、いく
つかの理由で、多くの不純物を含有する。第１
に、血清はＴ細胞で免疫する前に数百万の抗体分
子を含有する。第２に、この免疫法は注入したす
べてのヒト細胞について見い出される種々の抗原
に対する抗体を生成させる。単一の抗原に対する
抗体は選択的に生成されない。第３に、このよう
な方法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて
低く（たとえば１：100より大きい希釈度におい
て不活性）そして非特異性抗体に対する比は１／
106より小である。 たとえば、前述のChessおよびSchlossmanの
文献（365ページ以降参考）および前述の
Chemical and Engineering Newsを参照。ここ
には先行技術の抗血清の欠点およびモノクローナ
ル抗体の利点が記載されている。 今回、本質的にすべての正常なヒト抹消ヘルパ
ーＴ細胞（正常なヒトの抹消Ｔ細胞の約55％）に
ついて見い出される抗原に対する新規なモノクロ
ーナル抗体を生成できる新規なハイブリドマ
（OKT4と標示）が見出された。そのように生成
された抗体は正常なヒトのヘルパーＴ細胞につい
ての単一の決定因子に対して単一特異性
（monospecific）であり、そして他の抗ヒト免疫
グロブリンを本質的に含有しないが、これを対照
的に先行技術の抗血清は多数のヒト抗原に対して
反応性の抗体で本来汚染されており、そして先行
技術のモノクローナル抗体はヒトＴ細胞の抗原に
ついて単一特異性ではない。その上、このハイブ
リドマは培養して抗体を生成することができる。
この場合動物を免疫し、殺し、次いで先行技術の
不純の抗血清を得るときにさえ、必要な長たらし
い吸着および精製の工程を実施することを要しな
い。 したがつて、本発明の１つの目的は、本質的に
すべての正常なヒトのヘルパーＴ細胞について見
い出される抗原に対する抗体を生成するハイブリ
ドマ類を提供することである。 本発明のさらに別の面において、これらのハイ
ブリドマ類を製造する方法を提供する。 本発明の他の目的は、本質的にすべての正常な
ヒトのヘルパーＴ細胞について見い出される抗原
に対する本質的に均質な抗体を提供することであ
る。 さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気
の処置または診断の方法を提供することである。 本発明のその他の目的および利益は、本発明の
開示を検討すると明らかになるであろう。 前述の目的および利益を達成するため、本発明
によれば、本質的にすべての正常なヒトのヘルパ
ーＴ細胞について見い出される抗原に対する新規
な抗体を生成する新規なハイブリドマ、この抗体
それ自体、およびその抗体を用いる診断および治
療の方法が提供される。該ハイブリドマは
MilsteinおよびKohlerの方法に一般に従つて製
造される。正常のＥロゼツト（rosette）陽性の
ヒトＴ細胞でマウスを免疫した後、免疫したマウ
スの脾細胞をマウスの骨髄腫ラインからの細胞と
融合し、そして得られたハイブリドマ類を正常の
Ｅロゼツト陽性のヒトＴ細胞に選択的に結合する
抗体を含有する上澄液を用いてそれらについて選
別した。所望のハイブリドマ類を引き続いてクロ
ーン化し、特徴づけた。その結果、本質的にすべ
ての正常なヒトＴ細胞についての抗原に対する抗
体（OKT4と表示する）を生成するハイブリドマ
が得られた。この抗体は本質的にすべての正常な
ヒトのヘルパー抹消Ｔ細胞と反応するが、非ヘル
パーＴ細胞を含む他の正常な抹消の血液のリンパ
球細胞と反応しない。更に、この抗体より認識さ
れる細胞表面の抗原は正常のヒトの胸腺細胞のほ
ぼ80％について検知される。型の後天性無ガン
マグロブリン血症の患者は、ブラインド（blind）
試験においてOKT4抗体により検知された。ま
た、主題の抗体はRhesusサルの抹消Ｔ細胞の約
55％と反応する。 先行技術において示された困難および抗原とし
て悪性の細胞ラインを用いて報告された成功の不
足をみると、本発明の方法が所望のハイブリドマ
を提供したことは驚くべきことであつた。交雑細
胞のこの予測されえない性質は１つの抗原または
細胞ラインから他のものへの補外（extrapolate）
を許さないことに注意すべきである。事実、本発
明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性細胞ラインを
用いると、所望の抗体を生成しないハイブリドマ
類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終
つた。 主題のハイブリドマおよびそれにより生成され
た抗体は、表示“OKT4”によりここで同定さ
れ、該特定の物質は本明細書から明らかとなる。 このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造およ
び特性は、以下の説明および実施例から一層理解
できるであろう。 ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程
からなる： Ａ Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ
細胞でマウスを免疫する。メスのCAF1マウス
が好ましいことがわかつたが、他のマウスの系
統を使用できると考えられる。免疫スケジユー
ルおよびＴ細胞の濃度は、有効量の適当に準備
した脾細胞を生成するようなものであるべきで
ある。0.2mlのリン酸塩緩衝食塩溶液中の２×
107細胞／マウス／注射を用いて、14日の間隔
で、３回免疫を行うことは有効であることがわ
かつた。 Ｂ 免疫したマウスから脾臓を除去し、適当な媒
体中の脾懸濁液を調製する。約１ml／脾臓の媒
体で十分である。これらの実験の技術はよく知
られている。 Ｃ 懸濁した脾細胞を適当な細胞ラインからのマ
ウスの骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用
により融合する。脾細胞対骨髄腫細胞の好まし
い比は約５対１である。約108個の脾細胞につ
いて合計約0.5〜1.0mlの融合媒体は適当であ
る。多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られてお
り、そして一般に学問的共同体のメンバーまた
は種々の寄託機関、たとえば、ザ・ソーク・イ
ンスチチユート・セル・デイストリビユーシヨ
ン・センター（the Salk Institute Cell
Distributi on Center、La Jolla、CA）から
入手できる。使用する細胞ラインは好ましくは
いわゆる「薬物抵抗性」型であつて、未融合の
骨髄腫細胞が選択した媒体中で生存せず、一方
交雑細胞が生存するようにすべきである。最も
普通のクラスは８−アザグアニン抵抗性の細胞
ラインであり、これは酵素ヒポキサンチン・グ
アニン・ホホリボシル・トランスフエラーゼ
（phophoribosyl transferase）を欠き、それゆ
えHAT（ヒポキサンチン、アミノプテリン、
およびチミジン）媒体により支持されない。ま
た、使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる「非
分泌」型である。すなわち、それはそれ自体抗
体を生成しないことが一般に好ましいが、分泌
型を使用できる。しかしながら、ある場合にお
いて、分泌する骨髄腫ラインは好ましいことが
ある。好ましい融合促進剤は平均分子量が約
1000〜約4000であるポリエチレングリコール
（商業的にPEG1000などとして入手できる）が
好ましいが、この分野において知られている他
の融合促進剤を使用できる。 Ｄ 別の容器内において、未融合の脾細胞、未融
合の骨髄腫細胞、および融合した細胞の混合物
を、未融合の骨髄腫細胞を支持しない選択的媒
体中で希釈し、未融合の細胞を死亡させるのに
十分な時間（約１時間）培養する。この希釈は
限定されたものの型であることができ、この希
釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各
別々の容器［たとえば、マイクロタイタープレ
ートの各ウエル］中である数の細胞（たとえ
ば、１〜４）を単離する。媒体は薬物抵抗性
（たとえば、８−アザグアニン抵抗性）で未融
合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（たと
えば、HAT媒体）である。それゆえ、これら
の骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の脾細胞は非悪性
であるので、有限の数の世代をもつだけであ
る。こうして、ある期間（約１週間）後、これ
らの未融合の脾細胞は再生しない。融合した細
胞は、これに対して、骨髄腫の親の悪性をも
ち、そして脾細胞の親の選択的媒体中で生存で
きるので、再生し続ける。 Ｅ ハイブリドマを含有する各ウエル中の上澄液
を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ細胞に対
する抗体について評価する。 Ｆ 所望の抗体を生成するハイブリドマを選択し
（たとえば、限定希釈により）そしてクローン
化する。 いつたん所望のハイブリドマを選択し、クロ
ーン化すると、終結の抗体は２つの方法の１つ
で生成させることができる。最も純粋なモノク
ローナル抗体は、所望のハイブリドマも適当な
媒体中で適当な長さの時間試験内で培養し、次
いで所望の抗体を上澄液から回収することによ
つて生成される。適当な媒体および適当な培養
時間の長さは、既知であるか、あるいは決定内
容である。この試験管内技術は、他の特異性の
抗ヒト免疫グロブリンを本質的に含まない、単
一特異性モノクローナル抗体を本質的に生成す
る。媒体は外因性血清（たとえば、胎児の子牛
の血清）を含有するので、少量の他の免疫グロ
ブリンが存在する。しかしながら、この試験管
内の方法は、モノクローナル抗体の濃度がわず
かに約50μｇ／mlであるので、十分な量または
濃度を生成できない。 非常に大きい濃度のわずかに純度に劣るモノ
クローナル抗体を生成させるため、所望のハイ
ブリドマをマウス、好ましくは先天性または半
先天性のマウスに注射できる。ハイブリドマは
適当な潜伏時間後抗体生成の腫瘍を形成させ、
その結果宿主マウス血流および腹膜滲出液（腹
水）中に高濃度の所望とする抗体（約５〜20
mg／ml）が生ずる。これらの宿主マウスも正常
の抗体を血流および腹水の中に有するが、これ
らの正常な抗体の濃度はモノクローナル抗体濃
度のわずかに約５℃であるにすぎない。その
上、これらの正常の抗体は特異性が抗ヒトでな
いので収穫した腹水または血清から得たモノク
ローナル抗体は汚染する抗ヒト免疫グロブリン
を本質的に含有しない。このモノクローナル抗
体は力価が高く（１：30000以上の希釈で活性
である）そして特異性免疫グロブリン対非特異
性免疫グロブリンの比が高い（約１／20）。Ｋ
軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免疫グロブ
リンは非特異性の「無意味な」ペプチド類であ
り、これらはモノクローナル抗体をその特異性
を減じないで単に希釈するだけである。 実施例 モノクローナル抗体の生成 Ａ 免疫および体細胞の交雑 メスのCAF1マウス（Jackson研究所；生ま
れてから６週間）を、0.2mlのリン酸塩緩衝食
塩溶液中の２×107のＥロゼツト精製したＴ細
胞で腹膜内的に14日の間隔で免疫した。第３回
目の免疫後、脾をマウスから取り出し、そして
ステンレス鋼の網に組織を通すことによつて単
一細胞の懸濁液をつくつた。 細胞の融合をKohlerおよびMilsteinの方法
に従つて実施した。１×108の脾細胞を、
RPMI1640媒体（Gibco、Grand Island、NY）
中の35％のポリエチレングリコール
（PEG1000）と５％のジメチルスルホキシドと
からなる融合媒体の0.5ml中において、２×107
のP3×63Ag8U1骨髄腫細胞（Br.M.Scharff、
Albert Einstein College of Medicine、
Bronx、NYにより供給）と融合した。これら
の骨髄腫細胞はIgGlκL鎖（light chains）を分
泌する。 Ｂ ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をHAT媒体（ハイポキ
サンチン、アミノプチリン、およびチミジン）
中で37℃において５％のCO2を使用して湿つた
雰囲気中で培養した。数週間後、ハイブリドマ
類を含有する培養液から40〜100μの上澄液
を、Mendes（J.Immunol.111：860、1973）が
記載するように健康なヒトの供与者の血液から
調製した、Ｅロゼツト陽性（E+）個体群とＥ
ロゼツト陰性（E-）個体群とに分けた106の末
梢リンパ球のペレツトに加えた。これらの細胞
へ結合するマウスのハイブリドマ抗体の検出
は、ラジオイムノアセイおよび／または間接免
疫蛍光法により決定した。第１の方法におい
て、細胞は初め100μの親和性精製した 125I
山羊の抗マウスIgG（106cpm／μｇ；500μｇ／
μ）の100μと反応させた（山羊の抗マウ
スのヨウ素化の詳細はKung、et al.、J.Biol.
Chem.251(8)；2399、1976に記載されている）。
別法として、培養液の上澄液で培養した細胞を
蛍光を付与した山羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ
FITC）（Meloy研究所、Sprinafield、VA；
Ｆ／Ｐ＝2.5）で染色し、この蛍光性抗体被覆
細胞を引き続いてシトフルオログラフ
（Cytofluorograf）FC200／4800A（Ortho
Instruments、Westwood、MA）について実
施例に記載するように分析した。E+リンパ
球（Ｔ細胞）と特異的に反応する抗体を含有す
るハイブリドマ培養液を選択し、クローン化し
た。引き続いて、分枝系を２，６，10，14−テ
トラメチルペンタデカン（Aldrich Chemical
Companyから商品名Pristineで市販されてい
る）で準備したCAF1マウスに一定クローンの
１×107細胞（0.2mlの体積）を注射することに
よつて、腹膜内に移植した。次いでこれらのマ
ウスからの悪性腹水を使用して、実施例にお
いて後述するように、リンパ球を特徴づけた。
主題の交雑抗体OKT4は、標準の技術によりサ
ブクラスIgG2であり、補体を固定すると証明
された。 実施例 OKT4の反応性の特性づけ Ａ リンパ球個体群の単離 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者
の提供者（15〜40才）から、Boyum、Scand.
J.Clin.Lab.Invest.21（Suppl.97）：77、1968の技
術に従い、フイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）密度勾配遠心分離（Pharmacia
Fine Chemicals、Piscataway、NJ）により
単離した。分別しない単核細胞を、Chesss、et
al.、J.Immunol.113：1113（1974）にすでに記
載されているように、Sephadex Ｇ−200抗−
Ｆ（ab′）2カラムクロマトグラフイーにより、表
面Ig+(B)およびIg-（ＴプラスNull）の個体群に
分離した。Ｔ細胞はIg-個体群を５％の羊の赤
血球（Microbiological Associates、
Bethesda、MD）でＥロゼツト化することに
よつて回収した。ロゼツト化した混合物をフイ
コール−ハイパツク（Ficoll−Hypaque）上で
層状にし、回収したE+ペレツトを0.155モルの
NH4Cl（10ml／108細胞）で処理した。このよ
うにして得られたＴ細胞の個体群は、標準法に
より決定して、＜２％EACロゼツト陽性および
＞95％Ｅロゼツト陽性であつた。さらに、非ロ
ゼツトIg-（Null細胞）個体群をフイコール表
面から収穫した。 この後者の個体群は＜５％E+および２％
sIg＋であつた。表面Ig+(B)個体群は、前述のよ
うにSephadex Ｇ−200カラムクロマトグラフ
イーおよび引き続く正常なヒト・ガンマグロブ
リンによる溶離から得られた。この個体群は＞
95％表面Ig+および＜５％E+であつた。 正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付
着により、単核個体群から得た。こうして、単
核細胞を最終培地（RPMI1640、2.5ミリモル
のHEPES［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジンプロパンスルホン酸］緩衝剤、
0.5％の重炭酸ナトリウム、200ミリモルのＬ−
グリタミン、および１％ペニシリン−ストレプ
トマイシンからなり、20％の熱失活したヒト
AB血清を補足した）中に２×106細胞濃度で最
懸濁し、プラスチツクのペトリ皿（100×20mm）
（Falcon Tissue Culture Dish；Falcon、
Oxnard、CA）中で37℃において一夜培養し
た。よく洗つた非付着性細胞を除去した後、
2.5ミリモルのEDTAを含有する冷たい血清不
含媒体で強く洗い、時々使い捨て注射器のプラ
ンジヤーのゴムの先端で引つかいて、付着した
個体群を脱着した。85％より多い細胞個体群
は、ラテツクス粒子を摂取することができ、そ
してライト−ギエムサ（Wright−Giemsa）染
色により単球の形態学的特性を有した。 Ｂ 正常な胸腺 正常人の胸腺を２ケ月〜14才の年令の患者か
ら、心臓の矯正手術のもとに得た。胸腺の新し
く得た部分を媒体199（Gibco）中の５％胎児の
子牛の血清中に直ちに入れ、鉗子とはさみで小
さく切り、引き続いて金網を通してプレスする
ことによつて単細胞の懸濁液にした。細胞を次
に前節Ａで説明したように、フイコール−ハイ
パツクで層状にし、回し、洗浄した。このよう
にして得られた胸腺細胞は＞95％生活力があ
り、そして90ロゼツト陽性であつた。 Ｃ 細胞ライン（Cell lines） 正常な４個体（Laz007、Laz156、Laz256お
よびSB）からエプスタイン−バールウイルス
（Epstein−Barr Virus）（EBV）変形したＢ細
胞ラインを前述のように調製した。白血病の患
者から確立したＴ細胞ラインCEM、HJD−１、
Laz91、およびHMIは、Dr.H.Lazarus（Sidney
Farber Cancer Institute、Boston、MA）に
より提供された。 上記細胞を調製するに当つて、確立したリン
パ芽球細胞ラインへのヒトリンパ球の形質転換
は、エプスタイン−バールウイルスの生物学的
性質としてよく知られている。このような細胞
の形質転換は、度々文献に記載され、例えばジ
エイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよ
びダブリユ・スコツトがインタナシヨナル・ジ
ヤーナル・オブ・カンサー号３号857−867頁
［Pope、J.H.、M.k.Horne and W.Scott in
Int.J.Cancer.3；857−867、（1968）］における
「ヘルペス様ウイルスを含有するヒト白血球細
胞ラインから口別したものによる試験管内にお
いてヒト胎児リンパ球の形質転換」［“Tran
sformation of Fetal Human Lymphocytes
In−Vitro By Filtrates of ａ Human
Leukemic Cell Line Containing Herpes−
Like Virus”．］という表題の論文に詳細に説
明されている。 Ｄ Ｔ急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ALL）細
胞およびＴ慢性リンパ球性白血病（Ｔ−CLL）
細胞 白血病細胞は12人のＴ−ALLの患者から得
られた。これらの個体の細胞は、Schlossman、
et al、Proc.Nat.Acad.Sci.73：1288（1976）に
よりすでに記載されているように、羊の赤血球
との自発ロゼツト形成（＞20％E+）、およびＴ
細胞特異性異質抗血清、抗HTL（抗−BK）お
よびA99との反応性によりＴ細胞結合をもつと
すでに決定された。３個体からの腫陽細胞はウ
サギおよび／または馬の抗TH2と反応性
（TH2 +）であつたが、残る９個体からの細胞
は非反応性であつた（TH2 -）。 なお、ここで“ウサギおよび／または馬抗
TH2”は、特有の機能特性“TH2 +”を有す
る、Ｔ細胞個体群の特殊なサブセツトと結合す
るウサギまたは馬から誘導された異種抗血清の
ことである。このことは下記の文献に述べられ
ている：イー・エル・エヌ・ラインヘルツとエ
ス・エフ・シユロスマン［Reinhelz、E.L.N.、
Schlossmann、S.F.］のJornal of
Immunology 122、1335−1341（1979）。 TH2−Ｔ−CLLの２人の患者からの白血病
細胞を使用した。両方の急性および慢性の白血
病細胞を10％のジメチルスルホキシドおよび20
％のABヒト血清中の−196℃の蒸気相液体窒
素中で、表面特性づけの時間まで、凍結保存し
た。分析した腫腸個体群は、すべての場合にお
いてライト−ギユムサ（Wrigh−Giemsa）形
態学により＞90％芽細胞であつた。 実施例 シトフルオログラフ（cytofluorographic）分
析および細胞分離 すべての細胞個体群のシトフルオログラフ分析
を、シトフルオログラフ（Cytofluorograf）
FC200／4800A（Ortho Instruments）で蛍光共役
した羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ FITC）（Meloy
Laboratories）を用いて間接免疫蛍光法により実
施した。要約すると、１〜２×106細胞を0.15ml
のOKT4で１：1000希釈において処理し、４℃で
30分間培養し、２回洗浄した。次いで細胞を0.15
mlの１：40希釈のＧ／Ｍ FITCで４℃において
30分間反応させ、遠心分離し、３回洗浄した。次
いでこれらの細胞をシトフルオログラフで分析
し、蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析器に記録
した。同様な反応性のパターンは１：30000の希
釈で観察されたが、これよりさらに希釈すると反
応性は失なわれた。バツクグラウンドの染色は、
非生成性交雑クローンで腹膜的に免疫した
Balb／cJマウスからの１：1000腹水の0.15ml部分
を代わりに使用することによつて得た。 OKT4+細胞およびOKT4-細胞を分離するよう
に設計した実験において、100×106の未分別単核
細胞または胸腺細胞を、４mlの１：1000希釈の
OKT4で標識付けし、Ｇ／Ｍ FITCで現像した。
同一の染色アプローチを用いて、前記実施例Ａ
におけるように単離したヒトＴ細胞を調製した。
蛍光で活性化したセルソータ（FACS−１）
（Becton−Dickinson、Mountain View、CA）
を用いて、リンパ球をOKT4+個体群とOKT4-個
体群とに分離した。後の種類の生活力はすべての
場合においてトリパン（Trypan）ブルー排除に
より＞95％であつた。すでての分離した個体群の
純度は≧95％であつた。 実施例 エクイン（equine）抗TH2を用いるFACS分離
したOKT4+およびOKT4-部分集合の分析 OKT4+およびOKT4-細胞をFACS上に分離
し、20％のヒトAB血清、１％ペニシリン−スト
レプトマイシン、200ミリモルのＬ−グルタミン、
25ミリモルのHEPES緩衝剤（Microbiological
Associates）および0.5％の重炭酸ナトリウムを
含有するRPMI1640（Grand Island Biological
Company）中に培養する２×106／mlの細胞を入
れた。５％aCO2の湿つた雰囲気中で37℃におい
て24時間後、ReinheryおよびSchlossman、J.
Immunol、122：1335−1341（1979）に記載され
ているように、各個体群の１〜２×106の細胞を
エクイン（equine）抗TH2と反応させ、蛍光共
役IgGフラクシヨンのウサギの抗馬Ig（Cappel
Laboratories、Dowington、PA）で染色した。 実施例 機能的研究 Ａ 増殖の研究 未分離およびFACS分別のリンパ様細胞の有
糸応答の、微量培養において、コンカナバリン
（Concanavalin）Ａ（Con Ａ）（Calbiochem、
La Jolla、CA）およびフイトヘマグクルチニ
ン（phytohemagglutinin）（PHA）の最適投
与に対して試験した（Burrougho−Wellcome
Company、Greeville、NC）。異種抗原増殖応
答を、これらの同じ個体群について、マイトマ
イシン処理Laz156、刺激としてDr.H.Lazarus
から得られたEBV変形したヒトＢリンパ芽球
様細胞ラインを用いて、同時に測定した。破傷
風トキソイド（Massachusetts Department
of Public Health Biological Laboratories、
Boston、MA）に対する増殖を、10μｇ／mlの
最終濃度を用いて試験した。Herpes−Zoster
抗原は、Dr.John Zaia（Harward Medical
School、Bost、MA）から入手し、１：６希
釈度に希釈した。上に記載される方法で得られ
た５％の大食細胞を、すべての個体群に試験管
内培養の開始時に加えた。糸状体（mitogen）
刺激された培養を４日後0.2μCiの 3H−チミジ
ン（ 3H−TdR）（1.9Ci／ミリモルの比活性）
（Schwartz−Mann Division of Becton、
Dickinson Orangeburg、NY）でパルスし、
18時間後MASH装置（Microbiological
Associates）で収穫した。 3H−TdRの結合を
パツカード×シンチレーシヨン・カウンター
（Packard Instrument Company、Downer′s
Grove、IL）で測定した。可溶性抗原および異
種抗原刺激培養物を、５日後、前述のように、
3H−TdRで18時間パルスし、収穫し、計数し
た。 Ｂ 細胞毒性の研究 細胞性リンパ崩壊（cell−mediated
lympholysis）（CML）のための増感培養を、
多マイクロタイタープレートウエル中にすべて
２×106／mlの細胞において、分別しないＴ細
胞、FACS分離OKT4+およびOKT4-のＴ細胞
の部分集合、または異なる比のマイトマイシン
処理した刺激体細胞と再結合したOKT4+およ
びOKT4-のＴ細胞を入れることによつて確立
した。５日の終りにおいて、生育していない細
胞をフイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）遠心分離により除去した。次いで
分別しないＴ細胞の個体群と分別したＴ細胞の
個体群を 51Crクロム酸ナトリウムでラベルし
たターゲツト（target）細胞に加え、そして６
時間の細胞培養後比クロム放出を決定した。他
の実験において、未分別のＴ細胞を前述のよう
にマイトマイシン処理した刺激体細胞で増感
し、次いでMLC中で５日後FACS上でOKT4+
およびOKT4-のＴ細胞の部分集合に分別し、
そして比クロム放出を決定した。次の式を用い
て細胞毒性を決定した： 実験により放出された 51Cr−自発的に放出された
51Cr／凍結−溶解により放出された 51Cr−自発的に放
出された 51Cr×100 すべての試料は３回反復実験し、結果を平均で
表わした。自発的な放出はすべての場合において
最大の崩壊（lysis）の20％より小であつた。 ハイブリドマの生成、および生ずるモノクロー
ナル抗体の生成および特性づけは、上の実施例に
おけるように実施した。大量の主題の抗体を、主
題のハイブリドマのマウスへの腹膜内注射および
悪性腹水の収穫により調製したが、ハイブリドマ
は試験管内でこの分野においてよく知られた技術
により培養し、抗体を上澄液から取り出すことが
できることは、明らかに考えられる。 主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・タ
イプ・カルチヤー・コレクシヨン（12301
Parklawn Drive、Rockville、MD、208 52）に
1979年４月26日に寄託され、ATCC番号
CRL8002が付された。 第１図に示すように、一定の正常な個体のヒト
抹消血液Ｔ細胞の個体群のほぼ45％はOKT4と反
応性であるが、これに対して同じ個体から単離さ
れた全Ｂ細胞、無特徴細胞および大食細胞の個体
群はOKT4と非反応性である。他の正常な15個体
からのリンパ球の個体群について同様な結果が得
られた。こうしてモノクローナル抗体は、正常な
ヒト抹消Ｔ細胞のほぼ５％の表面上に含有される
抗原と反応性であるが、前述の３つの細胞の型の
表面上の抗原と非反応性であると、特性づけられ
る。後述するように、ヒト抹消Ｔ細胞の個体群の
OKT4+部分はヘルパーＴ細胞の亜群である。こ
の特異の反応性は、主題の抗体OKT4を検出で
き、そして他の抗体と区別できる１つの試験であ
る。 第２図に示すように、６カ月の乳児からの正常
なヒト胸腺細胞の約80％はOKT4と反応性であ
る。２カ月〜19才の年令の正常な個体からの６つ
の追加の胸腺の試料を用いて、同様な結果（約80
％の反応性）が得られた。第２図における反応性
のパターンは、主題の抗体OKT4を検出し、それ
を他の抗体と区別する第２の方法を提供する。 第３図に示すように、主題の抗体はＢ細胞慢性
リンパ芽球性白血病からの白血球細胞と非反応性
である。 主題の抗体OKT4のほかに特徴づけは、第４お
よび５図に図解される種々のヒトＴ細胞ラインに
対する反応によつて示される。この図からわかる
ように、主題の抗原のヒトＴ細胞ラインに対する
反応性は不均質であり、ラインCEMについて強
く、ラインHDJ−１について不存在である。ま
た細胞ラインLaz191およびHM1との反応性は存
在しない。このOKT4の種々の入手容易なヒトＴ
細胞ラインに対する特異の反応性は、主題の抗体
を特徴づけかつ説明するなお他の方法を提供す
る。 第６図は、OKT4の分離した部分集合
（subsets）の抗TH2との反応性を示す。分別しな
いＴ細胞個体群の約25％は抗TH2と反応性であ
る。これと対照的に、OKT4+個体群は抗TH2と
反応性の細胞を含有しないが、OKT4-の固体群
は主としてTH2+であり、そして分別しないＴ細
胞個体群中に見いだされるすべてのTH2 +細胞を
含有する。このことが示すように、TH2 +および
OKT4+の部分集合は相反であり、互いに区別さ
れる。 第７図は、分別しないＴ細胞、OKT4+T細胞
およびOKT4−Ｔ細胞の細胞毒性能力を図解した
ものである。OKT4+固体群はほんのわずかに毒
性であるが、OKT4-固体群により仲介される毒
性は分別しないＴ細胞の固体群よりも大きい。第
６図と第７図に示されたOKT4+およびOKT4-の
Ｔ細胞の固体群の特異的反応性は、主題の抗体を
特性づける手段をさらに提供するものである。 第１〜５図に図解される結果は要約であり、下
表の追加のデータで補足する。この表はOKT1
（ハイブリドマATCCNo.CAL800）、OKT3（ハイ
ブリドマATCCNo.8001）およびOKT4（最後は本
願の主題である）と標示されるハイブリドマによ
り生成されたモノクローナル抗体を比較するもの
である。第１〜５図中のデータに加えて、表は
またはOKT4は正常のヒト末梢Ｂ細胞、無特徴
（null）細胞および大食細胞（macrophage）、な
らびにＴ細胞および無特徴細胞急性リンパ芽球性
白血病患者からの白血病細胞およびEBV変形Ｂ
細胞のラインと非反応性であることを明らかにす
る。OKT1と対照的に、OKT4はＴ細胞慢性リン
パ芽球白血病患者からの白血病細胞と反応しな
い。 機能的研究を、蛍光活性化細胞セパレーター
（FACS）で分離したリンパ様固体群について実
施した。これらの研究は下表〜に示されてお
り、そしてさらに主題のモノクローナル抗体の前
述の特徴づけを裏書きする。 これらの研究において、分別しないＴ細胞個体
群を１：1000希釈のOKT4およびＧ／Ｍ FITC
で処理し、OKT4+およびOKT4-の部分集合にお
いてFACSで分離した。得られた個体群の純度
（95％以上）がわかつたとき、５％の大食細胞を
試験管内培養前に分離した個体群に加えた。次い
で分別しないＴ細胞の個体群および単離した
OKT4+およびOKT4-のＴ細胞の部分集合を
PHA、ConA、可溶性抗原、および異常抗原で刺
激してそれらの試験管内の増殖の応答を評価し
た。 分別しないＴ細胞個体群のPHAおよびConAに
対する増殖の応答を表に示す。分別しないＴ細
胞個体群による最大の増殖応答は、1μｇ／106細
胞のPHAを用いて得られ、減少した応答は0.5μ
ｇおよび0.1μｇ／106細胞において生ずる。分別
しないＴ細胞をOKT4およびヤギ−マウスFITC
で処理し、引き続いて分別しないと、増殖応答は
変化しなかつた。対照的に、PHAに対する応答
の差は分離したOKT4+およびOKT4-のＴ細胞の
部分集合を用いて得られた。細胞のOKT4+個体
群はPHAのすべての投与量に対して分離しない
Ｔ細胞個体群と同様な方法で応答した。しかしな
がら、OKT4-細胞の増殖応答は試験したPHAの
すべての投与量において有意に少ない。さらに、
0.1μｇ／106細胞のPHAの投与量において、
OKT4-のＴ細胞はまつたく増殖しないが、
OKT4+細胞の部分集合および分別しない細胞は
なお応答性であつた。これらの部分集合のConA
への増殖応答は、他方において、同様であつた
が、２つの部分群の細胞は互いにまたは分別しな
いＴ細胞個体群と区別されえなかつた。異常抗原
に対するMLCにおける応答および可溶性抗原に
対する応答を次に検査した。表に示すように、
OKT4およびＧ／Ｍ FITCで処理した分別しな
いＴ細胞個体群、両方のOKT4+およびOKT4-の
Ｔ細胞サブセツトは同様な方法でMLCにおいて
Laz156に対して応答性であつた。しかしながら、
６の個体のうちの２からのOKT4−細胞を試験
し、MLCにおいて有意に増殖したが、それらの
応答性OKT4-部分集合よりも少ない Ｈ−TdR
を組込んだことに注意すべきである（データは示
されていない）。これと対照的に、可溶性抗原へ
の増殖応答は部分集合間の明確な区別を提供し
た。試験したすべての例において、OKT4+のＴ
細胞は可溶性抗原、破傷風トキソイド（tetanus
toxoid）および帯疱疹（Herpes−Zoster）に対
してよく増殖したが、OKT4−のＴ細胞部分集合
は実際上非応答性であつた。 表は、Ｔ細胞のOKT4-部分集分は、MLCに
おいて単独で増感したとき、あつたとして、細胞
崩壊を多く発生できないことを示す。こうして、
OKT4-T細胞は分別しない異常増感したＴ細胞
個体群中で細胞毒性／奏効体となつたが、それ自
体でそのMICにおける応答にかかわらずCMLを
仲介することを誘発されえなかつた。その上、
OKT4+個体群をMICにおいてOKT4-T細胞の不
存在で増感するとき、それらは中程度であるが、
有意の、MICにおける崩壊を仲介できた。しか
しながら、OKT4+およびOKT4-のＴ細胞の再結
合した混合物は、分離したＴ細胞個体群のそれに
似ず、最高の細胞崩壊を行つた。これらの発見
は、OKT4-部分集合は最高の細胞毒性の応答の
みを行うことができないが、OKT4+個体群から
の助けを要求する。このＴ−Ｔ相互作用は、最高
の細胞毒性の発生においてTH2 -T細胞部分集合
群によつてTH2 +T細胞部分集合へ提供されたＴ
細胞の助けに類似する。 本発明によれば、本質的にすべての正常なヒト
のヘルパーＴ細胞上に見い出される抗原に対する
抗体を生成できるハイブリドマ、このハイブリド
マを生成する方法、本質的にすべてのヒトＴ細胞
上に見い出される抗原に対するモノクローナル抗
体、この抗体を生成する方法、およびこの抗体を
用いる病気の処置または診断の方法および組成物
が提供される。 ヒトのヘルパーＴ細胞の抗原に対する単一の単
分枝系孔体を生成する単一のハイブリドマだけを
説明してきたが、本発明はここに説明する特性を
示すすべてのモノクローナル抗体を包含すると考
えられる。主題の抗体OKT4はねずみのIgGの４
つのサブクラスの１つであるサブクラスIgG2に
属することが決定された。免疫グロブリンＧのこ
れらのサブクラスは互いにいわゆる「固定され
た」領域において異なるが、特定の抗原に対する
抗体はいわゆる「可変の」領域をもち、この領域
は免疫グロブリンＧのどのサブクラスがそれに属
するかに無関係に機能的に同一である。すなわ
ち、ここに説明した特性を示すモノクローナル抗
体はサブクラスIgG1、IgG2a、IgG2b、または
IgG3、あるいはクラスIgM、IgA、あるいは他の
既知のクラスIgであることができる。これのクラ
スまたはサブクラスの間の差異は抗体の反応パタ
ーンの選択性に影響を及ぼさないが、抗体と他の
物質、たとえば、相補的抗体および抗マウス抗体
とのほかの反応に影響を及ぼすことがあるであろ
う。主題の抗体はIgG2に特定したが、ここに例
示した反応性のパターンを有する抗体類はそれら
が属する免疫グロブリンのクラスまたはサブクラ
スに無関係に本発明の範囲内に包含されると考え
られる。 さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したハ
イブリドマの技術を用いて前述のモノクローナル
抗体を生成する方法が包含される。ハイブリドマ
のただ１つの例をここに記載したが、当業者はこ
こに提供した免疫法、融合法および選択法に従
い、ここに説明した反応性の特性を有する抗体類
を生成しうる他のハイブリドマ類を得ることがで
きると考えられる。マウスの既知の種からの既知
の骨髄腫細胞系統から生成した個々のハイブリド
マはこのハイブドマにより生成された抗体を参照
する以外それ以上同定できないので、前述の反応
性の特性を有する抗体を生成するすべてのハイブ
リドマ類は本発明の範囲内に包含され、これらの
ハイブトリドマを用いるこの抗体をつくる方法も
同様に包含されると、考えられる。 本発明のほかの面は、モノクローナル抗体
OKT4またはここに明らかにした反応性のパター
ンを示す他のモノクローナル抗体を用いて病気を
処理または診断する方法である。主題の抗体を使
用して、個体からのＴ細胞の組成物とOKT4抗体
との反応によつて、型の後天性無ガンマグロブ
リン血症を検知できる。ヘルパーＴ細胞の不存在
または不足は、OKT4と反応する合計の末梢Ｔ細
胞個体群の55％より少量の存在によつて示され
る。また、この試験を使用して一般にヘルパーＴ
細胞の不足または過剰を検知できる。ヘルパーＴ
細胞のガンの処置は、治療的に有効量のOKT4抗
体をこのような処置を必要とする個体に投与する
ことによつて達成できる。ヘルパーＴ細胞の抗原
との選択的反応より、有効量のOKT4抗体は過剰
のヘルパーＴ細胞を減少し、こうしてヘルパーＴ
細胞の悪性を軽減する。ヘルパーＴ細胞の過剰に
よつて起こる自己免疫の病気を、治療的に有効量
のOKT4抗体をこのような処置の必要な個体に投
与することによつて処置することでもきる。有効
量のOKT4抗体を、それぞれ、診断学的にまたは
製薬学的に許容できる担体として、含有する診断
組成物および治療組成物も本発明の範囲内であ
る。
（hybrid cell line）さらに詳しくはすべての正常
なヒトのヘルパー（helper）Ｔ細胞に見い出され
るある抗原に対するモノクローナル抗体の生成の
ための交雑細胞ライン、そのような生成された抗
体、およびこの抗体を用いる治療および診断方法
および組成物に関する。 1975年におけるKohlerおよびMilsteinによる
免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨髄
腫の融合（fusion）［Nature256、495−497
（1975）］は、均質な（いわゆる「モノクローナ
ル」）抗体をつくる連続な細胞ラインを得ること
ができることを初めて証明した。この基本の研究
以来、種々の交雑細胞［いわゆる「ハイブリドマ
類（hybridomas）」］の生成およびこれらのハイ
ブリドマ類によりつくられた抗体の種々の科学的
研究への使用について多くの努力が向けられてき
た。たとえば、次の文献を参照：Current
Topics in Microbiology and Immunology、
Volume 81−“Lymphocyte Hybridomas”、F.
Melchers、M.Potter、およびN.Warner、
Editors、Springer−Verlag、1978、およびそこ
に含まれる参考文献；C.J.Barnstable、et al.、
Cell、14、９−20（May、1978）；P.Parhamおよ
びW.F.Bodmer、Nature 276、397−399
（November、1978）；Handbook of
Experimental Immunology、Third Edition
Volume ２、D.M.Wier、Editor、Blackwell、
1978、Chapter 25；およびChemical and
Engineering News、January １、1979、15−
17。これの文献は同時にハイブリドマ類からモノ
クローナル抗体を生成する試みによつて得られる
利益および複雑さを示している。一般的技術は概
念的によく理解されているが、各特定の場合に多
くの困難に出合い、そして変更が要求される。事
実、一定のハイブリドマを生成しようと試みる前
には、所望のハイブリドマが得られるか、得られ
た場合抗体を生成するか、あるいはそのように生
成された抗体が所望の特異性をもつか、を確める
ことができない。成功の程度は、主として、使用
する抗原のタイプおよび所望のハイブリドマを単
離するために使用する選択技術によつて影響を受
ける。 人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノク
ローナル抗体を生成する試みは、数例報告されて
いるだけである。たとえば、Current Topics in
Micrbiology and Immunology、ibid、66−69お
よび164−169参照。これらの報告された実験にお
いて使用されている抗原は、培養したリンパ芽球
性白血病およびヒトの慢性リンパ球性白血病の細
胞ラインであつた。得られた多くのハイブリドマ
類は、すべてのヒト細胞の種々の抗原に対して抗
体を生成するように思われた。ハイブリドマ類は
いずれも、ヒトのリンパ球の前もつて定めたクラ
スに対して抗体を生成しなかつた。 人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に
２つの主なクラスが存在することを理解すべきで
ある。これらのうちの第１クラス（胸腺誘導細
胞、すなち、Ｔ細胞）は、ヘモポイエチン幹細胞
から胸腺において分化されている。胸線内にある
間、分化する細胞は「胸線細胞」と名づけられ
る。成熟したＴ細胞は胸腺から出、そして組織、
リンパ管、および血流の間を循環する。これらの
Ｔ細胞は、再循環する小さいリンパ球の貯留
（pool）の大きい比率を形成する。それらは免疫
学的特異性を有し、そして細胞介在免疫応答（組
織移植注入のような）においてエフエクター
（effector）細胞として直接関与する。Ｔ細胞は
液性抗体を分泌しないが、後述するリンパ球の第
２クラスによるこれらの抗体の分泌に時々要求さ
れる。Ｔ細胞のいくつかの型は免疫系の他の面に
おいて調節機能をはたす。この細胞共働の過程の
機構はまだ完全には理解されていない。 リンパ球の第２クラス（骨髄誘導細胞、すなわ
ち、Ｂ細胞）は、抗体を分泌するものである。そ
れらもまたヘモポイエチン幹細胞から発生する
が、それらの分化は胸腺によつて決定されない。
鳥類において、それらはフアブリキウス嚢
（Bursa of Fabricius）と呼ばれる胸線に類似す
る器管において分化されている。しかし、哺乳動
物においては、同等の器管は発見されておらず、
そしてこれらのＢ細胞は骨髄内で分化すると考え
られる。 ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（helper）」、「抑
制体（Auppressor）」および「キラー（killer）」
Ｔ細胞と呼ばれる、少なくともいくつかのサブタ
イプに分けられ、それらは（それぞれ）反応を促
進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す
（分離する）機能を有することが認められた。こ
れらのサブクラスはネズミの系統についてよく理
解されているが、それらは人間の系についてわず
かに最近記載されただけである。たとえば、次の
文献を参照：R.L.Evans、et al.、Journal of
Experimental Medicine、Volume 145、221−
232、1977；およびL.ChessおよびS.F.
Schlossman−“Functional Analysis of
Distinct Human Ｔ−Cell Subsets Bearing
Unique Differentiation Antigens”
“Contemporary Topics in Immunobiolgy”、O.
Stutman、Editor、Plenum Press、1977、
Volume ７、363−379。 Ｔ細胞のクラスまたはサブクラスを同定または
抑制することができることは、種々の免疫調節の
不調または状態の診断または処置にとつて重要で
ある。 たとえば、ある種の白血病およびリンパ腫は、
それらがＢ細胞またはＴ細胞のいずれを源とする
かによつて、異なる予後を有する。こうして、病
気の予後の評価はこれらのリンパ球の２つのクラ
スを区別することに依存する。たとえば、次の文
献を参照：A.C.AisenberyおよびJ.C.Long、The
American Journal of Medicine、58：300
（March、1975）；D.Belpomme、et al.、
Immunological Diagnosis of Leukemias and
Lymphomas、S.Thierfelder、et al.、Editors、
Springer、Heidelberg、1977、33−45；および
D.Belpomme、et al.、British Journal of
Haematology、1978、38、85。 ある種の病気の状態（たとえば、若年性リウマ
トイド関節炎およびある種の白血病）は、Ｔ細胞
のサブクラスの不釣合いに関連する。自己免疫の
病気は一般に「ヘルパー」Ｔ細胞の過剰またはあ
る種の「抑制体」Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪
性の病気は一般に「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連
することが示唆された。 ある種の白血病において、過剰のＴ細胞は発育
の停止した状態において生成される。診断はこう
してこの不釣合い、すなわち、過剰を検知するこ
とができることに依存しうるであろう。たとえ
ば、次の文献を参照：J.Kersey、et al.、
“Surface Mrkers Define Human Lymphoid
Malignancies with Differing Prognoses”、
Haematology and Blood Transfusion、
Volume 20、Springer−Verlag、1977、17−24、
およびその中に含まれる参考文献。 後天性無ガンマアグロブリン血症（aoguired
agammaglobulinemia）、すなわち免疫グロブリ
ンが生成されない病気の状態は、少なくとも２つ
の明確な型からなる。型において、免疫グロブ
リンの生成不能は抑制体（suppressor）Ｔ細胞の
過剰により、一方型においてそれはヘルパーＴ
細胞の不足による。両方の型において、患者のＢ
細胞、すなわち、抗体を実際に分泌するリンパ球
の不足もしくは欠乏は存在しないように見える。
しかしながら、これらのＢ細胞は抑制され、ある
いは「助けられず（“not helped”）」、その結果免
疫グロブリンは生成が大きく減少するか、生成し
なくなる。後天性無ガンマアグロブリン血症の例
はこうして抑制体Ｔ細胞の過剰またはヘルパーＴ
細胞の不存在について試験することによつて決定
することができる。 治療サイドにおいて、まだ明確に証明されてい
ないが、Ｔ細胞のサブクラスに対する抗体を過剰
量で投与することは自己免疫の病気または悪性の
病気において治療上有益であるという、いくらか
の示唆がある。たとえば、ヘルパーＴ細胞のガン
（ある種の皮膚Ｔ細胞リンパ腫およびある種のＴ
細胞急性リンパ芽球性白血病）はヘルパーＴ細胞
の抗原に対する抗体によつて処理することができ
る。ヘルパー細胞の過剰により起こされる自己免
疫（autoimmune）の処置は、同じ方式でまた達
成することができる。 ヒトＴ細胞の全クラス（いわゆる抗ヒト胸腺細
胞のグロブリン、すなわち、ATG）に対する抗
血清は、移植組織を受ける患者において治療上有
用であると報告されている。細胞介在免疫応答
（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に依存する
ので、Ｔ細胞に対する抗体を投与すると、この拒
否の過程を防止または遅延する。たとえば、次の
文献を参照：Cosimi、et al.、“Randomized
Clinical Trial of ATG in Cadaver Renal
Allgraft Recipients：Importance of Ｔ Cell
Monitoring”、Surgery 40：155−163（1976）お
よびその中に含まれる参考文献。 ヒトＴ細胞のクラスおよびサブクラスの同定お
よび抑制は、従来、動物をヒトＴ細胞で免疫し、
その動物を出血させて血清を取り、そしてこの抗
血清を（たとえば）地元（autololgous）である
が、異種ではないＢ細胞で吸着して望まない反応
性もをつ抗体を除去することによつて得た、ヒト
Ｔ細胞のための自発性自己抗体または選択的抗血
清を使用することによつて達成された。これらの
抗血清の製造は、とくに吸着および精製の工程に
おいて、きわめて困難である。吸着され且つ精製
された抗血清でさえ、所望の抗体に加えて、いく
つかの理由で、多くの不純物を含有する。第１
に、血清はＴ細胞で免疫する前に数百万の抗体分
子を含有する。第２に、この免疫法は注入したす
べてのヒト細胞について見い出される種々の抗原
に対する抗体を生成させる。単一の抗原に対する
抗体は選択的に生成されない。第３に、このよう
な方法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて
低く（たとえば１：100より大きい希釈度におい
て不活性）そして非特異性抗体に対する比は１／
106より小である。 たとえば、前述のChessおよびSchlossmanの
文献（365ページ以降参考）および前述の
Chemical and Engineering Newsを参照。ここ
には先行技術の抗血清の欠点およびモノクローナ
ル抗体の利点が記載されている。 今回、本質的にすべての正常なヒト抹消ヘルパ
ーＴ細胞（正常なヒトの抹消Ｔ細胞の約55％）に
ついて見い出される抗原に対する新規なモノクロ
ーナル抗体を生成できる新規なハイブリドマ
（OKT4と標示）が見出された。そのように生成
された抗体は正常なヒトのヘルパーＴ細胞につい
ての単一の決定因子に対して単一特異性
（monospecific）であり、そして他の抗ヒト免疫
グロブリンを本質的に含有しないが、これを対照
的に先行技術の抗血清は多数のヒト抗原に対して
反応性の抗体で本来汚染されており、そして先行
技術のモノクローナル抗体はヒトＴ細胞の抗原に
ついて単一特異性ではない。その上、このハイブ
リドマは培養して抗体を生成することができる。
この場合動物を免疫し、殺し、次いで先行技術の
不純の抗血清を得るときにさえ、必要な長たらし
い吸着および精製の工程を実施することを要しな
い。 したがつて、本発明の１つの目的は、本質的に
すべての正常なヒトのヘルパーＴ細胞について見
い出される抗原に対する抗体を生成するハイブリ
ドマ類を提供することである。 本発明のさらに別の面において、これらのハイ
ブリドマ類を製造する方法を提供する。 本発明の他の目的は、本質的にすべての正常な
ヒトのヘルパーＴ細胞について見い出される抗原
に対する本質的に均質な抗体を提供することであ
る。 さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気
の処置または診断の方法を提供することである。 本発明のその他の目的および利益は、本発明の
開示を検討すると明らかになるであろう。 前述の目的および利益を達成するため、本発明
によれば、本質的にすべての正常なヒトのヘルパ
ーＴ細胞について見い出される抗原に対する新規
な抗体を生成する新規なハイブリドマ、この抗体
それ自体、およびその抗体を用いる診断および治
療の方法が提供される。該ハイブリドマは
MilsteinおよびKohlerの方法に一般に従つて製
造される。正常のＥロゼツト（rosette）陽性の
ヒトＴ細胞でマウスを免疫した後、免疫したマウ
スの脾細胞をマウスの骨髄腫ラインからの細胞と
融合し、そして得られたハイブリドマ類を正常の
Ｅロゼツト陽性のヒトＴ細胞に選択的に結合する
抗体を含有する上澄液を用いてそれらについて選
別した。所望のハイブリドマ類を引き続いてクロ
ーン化し、特徴づけた。その結果、本質的にすべ
ての正常なヒトＴ細胞についての抗原に対する抗
体（OKT4と表示する）を生成するハイブリドマ
が得られた。この抗体は本質的にすべての正常な
ヒトのヘルパー抹消Ｔ細胞と反応するが、非ヘル
パーＴ細胞を含む他の正常な抹消の血液のリンパ
球細胞と反応しない。更に、この抗体より認識さ
れる細胞表面の抗原は正常のヒトの胸腺細胞のほ
ぼ80％について検知される。型の後天性無ガン
マグロブリン血症の患者は、ブラインド（blind）
試験においてOKT4抗体により検知された。ま
た、主題の抗体はRhesusサルの抹消Ｔ細胞の約
55％と反応する。 先行技術において示された困難および抗原とし
て悪性の細胞ラインを用いて報告された成功の不
足をみると、本発明の方法が所望のハイブリドマ
を提供したことは驚くべきことであつた。交雑細
胞のこの予測されえない性質は１つの抗原または
細胞ラインから他のものへの補外（extrapolate）
を許さないことに注意すべきである。事実、本発
明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性細胞ラインを
用いると、所望の抗体を生成しないハイブリドマ
類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終
つた。 主題のハイブリドマおよびそれにより生成され
た抗体は、表示“OKT4”によりここで同定さ
れ、該特定の物質は本明細書から明らかとなる。 このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造およ
び特性は、以下の説明および実施例から一層理解
できるであろう。 ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程
からなる： Ａ Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ
細胞でマウスを免疫する。メスのCAF1マウス
が好ましいことがわかつたが、他のマウスの系
統を使用できると考えられる。免疫スケジユー
ルおよびＴ細胞の濃度は、有効量の適当に準備
した脾細胞を生成するようなものであるべきで
ある。0.2mlのリン酸塩緩衝食塩溶液中の２×
107細胞／マウス／注射を用いて、14日の間隔
で、３回免疫を行うことは有効であることがわ
かつた。 Ｂ 免疫したマウスから脾臓を除去し、適当な媒
体中の脾懸濁液を調製する。約１ml／脾臓の媒
体で十分である。これらの実験の技術はよく知
られている。 Ｃ 懸濁した脾細胞を適当な細胞ラインからのマ
ウスの骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用
により融合する。脾細胞対骨髄腫細胞の好まし
い比は約５対１である。約108個の脾細胞につ
いて合計約0.5〜1.0mlの融合媒体は適当であ
る。多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られてお
り、そして一般に学問的共同体のメンバーまた
は種々の寄託機関、たとえば、ザ・ソーク・イ
ンスチチユート・セル・デイストリビユーシヨ
ン・センター（the Salk Institute Cell
Distributi on Center、La Jolla、CA）から
入手できる。使用する細胞ラインは好ましくは
いわゆる「薬物抵抗性」型であつて、未融合の
骨髄腫細胞が選択した媒体中で生存せず、一方
交雑細胞が生存するようにすべきである。最も
普通のクラスは８−アザグアニン抵抗性の細胞
ラインであり、これは酵素ヒポキサンチン・グ
アニン・ホホリボシル・トランスフエラーゼ
（phophoribosyl transferase）を欠き、それゆ
えHAT（ヒポキサンチン、アミノプテリン、
およびチミジン）媒体により支持されない。ま
た、使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる「非
分泌」型である。すなわち、それはそれ自体抗
体を生成しないことが一般に好ましいが、分泌
型を使用できる。しかしながら、ある場合にお
いて、分泌する骨髄腫ラインは好ましいことが
ある。好ましい融合促進剤は平均分子量が約
1000〜約4000であるポリエチレングリコール
（商業的にPEG1000などとして入手できる）が
好ましいが、この分野において知られている他
の融合促進剤を使用できる。 Ｄ 別の容器内において、未融合の脾細胞、未融
合の骨髄腫細胞、および融合した細胞の混合物
を、未融合の骨髄腫細胞を支持しない選択的媒
体中で希釈し、未融合の細胞を死亡させるのに
十分な時間（約１時間）培養する。この希釈は
限定されたものの型であることができ、この希
釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各
別々の容器［たとえば、マイクロタイタープレ
ートの各ウエル］中である数の細胞（たとえ
ば、１〜４）を単離する。媒体は薬物抵抗性
（たとえば、８−アザグアニン抵抗性）で未融
合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（たと
えば、HAT媒体）である。それゆえ、これら
の骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の脾細胞は非悪性
であるので、有限の数の世代をもつだけであ
る。こうして、ある期間（約１週間）後、これ
らの未融合の脾細胞は再生しない。融合した細
胞は、これに対して、骨髄腫の親の悪性をも
ち、そして脾細胞の親の選択的媒体中で生存で
きるので、再生し続ける。 Ｅ ハイブリドマを含有する各ウエル中の上澄液
を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ細胞に対
する抗体について評価する。 Ｆ 所望の抗体を生成するハイブリドマを選択し
（たとえば、限定希釈により）そしてクローン
化する。 いつたん所望のハイブリドマを選択し、クロ
ーン化すると、終結の抗体は２つの方法の１つ
で生成させることができる。最も純粋なモノク
ローナル抗体は、所望のハイブリドマも適当な
媒体中で適当な長さの時間試験内で培養し、次
いで所望の抗体を上澄液から回収することによ
つて生成される。適当な媒体および適当な培養
時間の長さは、既知であるか、あるいは決定内
容である。この試験管内技術は、他の特異性の
抗ヒト免疫グロブリンを本質的に含まない、単
一特異性モノクローナル抗体を本質的に生成す
る。媒体は外因性血清（たとえば、胎児の子牛
の血清）を含有するので、少量の他の免疫グロ
ブリンが存在する。しかしながら、この試験管
内の方法は、モノクローナル抗体の濃度がわず
かに約50μｇ／mlであるので、十分な量または
濃度を生成できない。 非常に大きい濃度のわずかに純度に劣るモノ
クローナル抗体を生成させるため、所望のハイ
ブリドマをマウス、好ましくは先天性または半
先天性のマウスに注射できる。ハイブリドマは
適当な潜伏時間後抗体生成の腫瘍を形成させ、
その結果宿主マウス血流および腹膜滲出液（腹
水）中に高濃度の所望とする抗体（約５〜20
mg／ml）が生ずる。これらの宿主マウスも正常
の抗体を血流および腹水の中に有するが、これ
らの正常な抗体の濃度はモノクローナル抗体濃
度のわずかに約５℃であるにすぎない。その
上、これらの正常の抗体は特異性が抗ヒトでな
いので収穫した腹水または血清から得たモノク
ローナル抗体は汚染する抗ヒト免疫グロブリン
を本質的に含有しない。このモノクローナル抗
体は力価が高く（１：30000以上の希釈で活性
である）そして特異性免疫グロブリン対非特異
性免疫グロブリンの比が高い（約１／20）。Ｋ
軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免疫グロブ
リンは非特異性の「無意味な」ペプチド類であ
り、これらはモノクローナル抗体をその特異性
を減じないで単に希釈するだけである。 実施例 モノクローナル抗体の生成 Ａ 免疫および体細胞の交雑 メスのCAF1マウス（Jackson研究所；生ま
れてから６週間）を、0.2mlのリン酸塩緩衝食
塩溶液中の２×107のＥロゼツト精製したＴ細
胞で腹膜内的に14日の間隔で免疫した。第３回
目の免疫後、脾をマウスから取り出し、そして
ステンレス鋼の網に組織を通すことによつて単
一細胞の懸濁液をつくつた。 細胞の融合をKohlerおよびMilsteinの方法
に従つて実施した。１×108の脾細胞を、
RPMI1640媒体（Gibco、Grand Island、NY）
中の35％のポリエチレングリコール
（PEG1000）と５％のジメチルスルホキシドと
からなる融合媒体の0.5ml中において、２×107
のP3×63Ag8U1骨髄腫細胞（Br.M.Scharff、
Albert Einstein College of Medicine、
Bronx、NYにより供給）と融合した。これら
の骨髄腫細胞はIgGlκL鎖（light chains）を分
泌する。 Ｂ ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をHAT媒体（ハイポキ
サンチン、アミノプチリン、およびチミジン）
中で37℃において５％のCO2を使用して湿つた
雰囲気中で培養した。数週間後、ハイブリドマ
類を含有する培養液から40〜100μの上澄液
を、Mendes（J.Immunol.111：860、1973）が
記載するように健康なヒトの供与者の血液から
調製した、Ｅロゼツト陽性（E+）個体群とＥ
ロゼツト陰性（E-）個体群とに分けた106の末
梢リンパ球のペレツトに加えた。これらの細胞
へ結合するマウスのハイブリドマ抗体の検出
は、ラジオイムノアセイおよび／または間接免
疫蛍光法により決定した。第１の方法におい
て、細胞は初め100μの親和性精製した 125I
山羊の抗マウスIgG（106cpm／μｇ；500μｇ／
μ）の100μと反応させた（山羊の抗マウ
スのヨウ素化の詳細はKung、et al.、J.Biol.
Chem.251(8)；2399、1976に記載されている）。
別法として、培養液の上澄液で培養した細胞を
蛍光を付与した山羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ
FITC）（Meloy研究所、Sprinafield、VA；
Ｆ／Ｐ＝2.5）で染色し、この蛍光性抗体被覆
細胞を引き続いてシトフルオログラフ
（Cytofluorograf）FC200／4800A（Ortho
Instruments、Westwood、MA）について実
施例に記載するように分析した。E+リンパ
球（Ｔ細胞）と特異的に反応する抗体を含有す
るハイブリドマ培養液を選択し、クローン化し
た。引き続いて、分枝系を２，６，10，14−テ
トラメチルペンタデカン（Aldrich Chemical
Companyから商品名Pristineで市販されてい
る）で準備したCAF1マウスに一定クローンの
１×107細胞（0.2mlの体積）を注射することに
よつて、腹膜内に移植した。次いでこれらのマ
ウスからの悪性腹水を使用して、実施例にお
いて後述するように、リンパ球を特徴づけた。
主題の交雑抗体OKT4は、標準の技術によりサ
ブクラスIgG2であり、補体を固定すると証明
された。 実施例 OKT4の反応性の特性づけ Ａ リンパ球個体群の単離 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者
の提供者（15〜40才）から、Boyum、Scand.
J.Clin.Lab.Invest.21（Suppl.97）：77、1968の技
術に従い、フイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）密度勾配遠心分離（Pharmacia
Fine Chemicals、Piscataway、NJ）により
単離した。分別しない単核細胞を、Chesss、et
al.、J.Immunol.113：1113（1974）にすでに記
載されているように、Sephadex Ｇ−200抗−
Ｆ（ab′）2カラムクロマトグラフイーにより、表
面Ig+(B)およびIg-（ＴプラスNull）の個体群に
分離した。Ｔ細胞はIg-個体群を５％の羊の赤
血球（Microbiological Associates、
Bethesda、MD）でＥロゼツト化することに
よつて回収した。ロゼツト化した混合物をフイ
コール−ハイパツク（Ficoll−Hypaque）上で
層状にし、回収したE+ペレツトを0.155モルの
NH4Cl（10ml／108細胞）で処理した。このよ
うにして得られたＴ細胞の個体群は、標準法に
より決定して、＜２％EACロゼツト陽性および
＞95％Ｅロゼツト陽性であつた。さらに、非ロ
ゼツトIg-（Null細胞）個体群をフイコール表
面から収穫した。 この後者の個体群は＜５％E+および２％
sIg＋であつた。表面Ig+(B)個体群は、前述のよ
うにSephadex Ｇ−200カラムクロマトグラフ
イーおよび引き続く正常なヒト・ガンマグロブ
リンによる溶離から得られた。この個体群は＞
95％表面Ig+および＜５％E+であつた。 正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付
着により、単核個体群から得た。こうして、単
核細胞を最終培地（RPMI1640、2.5ミリモル
のHEPES［４−（２−ヒドロキシエチル）−１
−ピペラジンプロパンスルホン酸］緩衝剤、
0.5％の重炭酸ナトリウム、200ミリモルのＬ−
グリタミン、および１％ペニシリン−ストレプ
トマイシンからなり、20％の熱失活したヒト
AB血清を補足した）中に２×106細胞濃度で最
懸濁し、プラスチツクのペトリ皿（100×20mm）
（Falcon Tissue Culture Dish；Falcon、
Oxnard、CA）中で37℃において一夜培養し
た。よく洗つた非付着性細胞を除去した後、
2.5ミリモルのEDTAを含有する冷たい血清不
含媒体で強く洗い、時々使い捨て注射器のプラ
ンジヤーのゴムの先端で引つかいて、付着した
個体群を脱着した。85％より多い細胞個体群
は、ラテツクス粒子を摂取することができ、そ
してライト−ギエムサ（Wright−Giemsa）染
色により単球の形態学的特性を有した。 Ｂ 正常な胸腺 正常人の胸腺を２ケ月〜14才の年令の患者か
ら、心臓の矯正手術のもとに得た。胸腺の新し
く得た部分を媒体199（Gibco）中の５％胎児の
子牛の血清中に直ちに入れ、鉗子とはさみで小
さく切り、引き続いて金網を通してプレスする
ことによつて単細胞の懸濁液にした。細胞を次
に前節Ａで説明したように、フイコール−ハイ
パツクで層状にし、回し、洗浄した。このよう
にして得られた胸腺細胞は＞95％生活力があ
り、そして90ロゼツト陽性であつた。 Ｃ 細胞ライン（Cell lines） 正常な４個体（Laz007、Laz156、Laz256お
よびSB）からエプスタイン−バールウイルス
（Epstein−Barr Virus）（EBV）変形したＢ細
胞ラインを前述のように調製した。白血病の患
者から確立したＴ細胞ラインCEM、HJD−１、
Laz91、およびHMIは、Dr.H.Lazarus（Sidney
Farber Cancer Institute、Boston、MA）に
より提供された。 上記細胞を調製するに当つて、確立したリン
パ芽球細胞ラインへのヒトリンパ球の形質転換
は、エプスタイン−バールウイルスの生物学的
性質としてよく知られている。このような細胞
の形質転換は、度々文献に記載され、例えばジ
エイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよ
びダブリユ・スコツトがインタナシヨナル・ジ
ヤーナル・オブ・カンサー号３号857−867頁
［Pope、J.H.、M.k.Horne and W.Scott in
Int.J.Cancer.3；857−867、（1968）］における
「ヘルペス様ウイルスを含有するヒト白血球細
胞ラインから口別したものによる試験管内にお
いてヒト胎児リンパ球の形質転換」［“Tran
sformation of Fetal Human Lymphocytes
In−Vitro By Filtrates of ａ Human
Leukemic Cell Line Containing Herpes−
Like Virus”．］という表題の論文に詳細に説
明されている。 Ｄ Ｔ急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ALL）細
胞およびＴ慢性リンパ球性白血病（Ｔ−CLL）
細胞 白血病細胞は12人のＴ−ALLの患者から得
られた。これらの個体の細胞は、Schlossman、
et al、Proc.Nat.Acad.Sci.73：1288（1976）に
よりすでに記載されているように、羊の赤血球
との自発ロゼツト形成（＞20％E+）、およびＴ
細胞特異性異質抗血清、抗HTL（抗−BK）お
よびA99との反応性によりＴ細胞結合をもつと
すでに決定された。３個体からの腫陽細胞はウ
サギおよび／または馬の抗TH2と反応性
（TH2 +）であつたが、残る９個体からの細胞
は非反応性であつた（TH2 -）。 なお、ここで“ウサギおよび／または馬抗
TH2”は、特有の機能特性“TH2 +”を有す
る、Ｔ細胞個体群の特殊なサブセツトと結合す
るウサギまたは馬から誘導された異種抗血清の
ことである。このことは下記の文献に述べられ
ている：イー・エル・エヌ・ラインヘルツとエ
ス・エフ・シユロスマン［Reinhelz、E.L.N.、
Schlossmann、S.F.］のJornal of
Immunology 122、1335−1341（1979）。 TH2−Ｔ−CLLの２人の患者からの白血病
細胞を使用した。両方の急性および慢性の白血
病細胞を10％のジメチルスルホキシドおよび20
％のABヒト血清中の−196℃の蒸気相液体窒
素中で、表面特性づけの時間まで、凍結保存し
た。分析した腫腸個体群は、すべての場合にお
いてライト−ギユムサ（Wrigh−Giemsa）形
態学により＞90％芽細胞であつた。 実施例 シトフルオログラフ（cytofluorographic）分
析および細胞分離 すべての細胞個体群のシトフルオログラフ分析
を、シトフルオログラフ（Cytofluorograf）
FC200／4800A（Ortho Instruments）で蛍光共役
した羊の抗マウスIgG（Ｇ／Ｍ FITC）（Meloy
Laboratories）を用いて間接免疫蛍光法により実
施した。要約すると、１〜２×106細胞を0.15ml
のOKT4で１：1000希釈において処理し、４℃で
30分間培養し、２回洗浄した。次いで細胞を0.15
mlの１：40希釈のＧ／Ｍ FITCで４℃において
30分間反応させ、遠心分離し、３回洗浄した。次
いでこれらの細胞をシトフルオログラフで分析
し、蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析器に記録
した。同様な反応性のパターンは１：30000の希
釈で観察されたが、これよりさらに希釈すると反
応性は失なわれた。バツクグラウンドの染色は、
非生成性交雑クローンで腹膜的に免疫した
Balb／cJマウスからの１：1000腹水の0.15ml部分
を代わりに使用することによつて得た。 OKT4+細胞およびOKT4-細胞を分離するよう
に設計した実験において、100×106の未分別単核
細胞または胸腺細胞を、４mlの１：1000希釈の
OKT4で標識付けし、Ｇ／Ｍ FITCで現像した。
同一の染色アプローチを用いて、前記実施例Ａ
におけるように単離したヒトＴ細胞を調製した。
蛍光で活性化したセルソータ（FACS−１）
（Becton−Dickinson、Mountain View、CA）
を用いて、リンパ球をOKT4+個体群とOKT4-個
体群とに分離した。後の種類の生活力はすべての
場合においてトリパン（Trypan）ブルー排除に
より＞95％であつた。すでての分離した個体群の
純度は≧95％であつた。 実施例 エクイン（equine）抗TH2を用いるFACS分離
したOKT4+およびOKT4-部分集合の分析 OKT4+およびOKT4-細胞をFACS上に分離
し、20％のヒトAB血清、１％ペニシリン−スト
レプトマイシン、200ミリモルのＬ−グルタミン、
25ミリモルのHEPES緩衝剤（Microbiological
Associates）および0.5％の重炭酸ナトリウムを
含有するRPMI1640（Grand Island Biological
Company）中に培養する２×106／mlの細胞を入
れた。５％aCO2の湿つた雰囲気中で37℃におい
て24時間後、ReinheryおよびSchlossman、J.
Immunol、122：1335−1341（1979）に記載され
ているように、各個体群の１〜２×106の細胞を
エクイン（equine）抗TH2と反応させ、蛍光共
役IgGフラクシヨンのウサギの抗馬Ig（Cappel
Laboratories、Dowington、PA）で染色した。 実施例 機能的研究 Ａ 増殖の研究 未分離およびFACS分別のリンパ様細胞の有
糸応答の、微量培養において、コンカナバリン
（Concanavalin）Ａ（Con Ａ）（Calbiochem、
La Jolla、CA）およびフイトヘマグクルチニ
ン（phytohemagglutinin）（PHA）の最適投
与に対して試験した（Burrougho−Wellcome
Company、Greeville、NC）。異種抗原増殖応
答を、これらの同じ個体群について、マイトマ
イシン処理Laz156、刺激としてDr.H.Lazarus
から得られたEBV変形したヒトＢリンパ芽球
様細胞ラインを用いて、同時に測定した。破傷
風トキソイド（Massachusetts Department
of Public Health Biological Laboratories、
Boston、MA）に対する増殖を、10μｇ／mlの
最終濃度を用いて試験した。Herpes−Zoster
抗原は、Dr.John Zaia（Harward Medical
School、Bost、MA）から入手し、１：６希
釈度に希釈した。上に記載される方法で得られ
た５％の大食細胞を、すべての個体群に試験管
内培養の開始時に加えた。糸状体（mitogen）
刺激された培養を４日後0.2μCiの 3H−チミジ
ン（ 3H−TdR）（1.9Ci／ミリモルの比活性）
（Schwartz−Mann Division of Becton、
Dickinson Orangeburg、NY）でパルスし、
18時間後MASH装置（Microbiological
Associates）で収穫した。 3H−TdRの結合を
パツカード×シンチレーシヨン・カウンター
（Packard Instrument Company、Downer′s
Grove、IL）で測定した。可溶性抗原および異
種抗原刺激培養物を、５日後、前述のように、
3H−TdRで18時間パルスし、収穫し、計数し
た。 Ｂ 細胞毒性の研究 細胞性リンパ崩壊（cell−mediated
lympholysis）（CML）のための増感培養を、
多マイクロタイタープレートウエル中にすべて
２×106／mlの細胞において、分別しないＴ細
胞、FACS分離OKT4+およびOKT4-のＴ細胞
の部分集合、または異なる比のマイトマイシン
処理した刺激体細胞と再結合したOKT4+およ
びOKT4-のＴ細胞を入れることによつて確立
した。５日の終りにおいて、生育していない細
胞をフイコール−ハイパツク（Ficoll−
Hypaque）遠心分離により除去した。次いで
分別しないＴ細胞の個体群と分別したＴ細胞の
個体群を 51Crクロム酸ナトリウムでラベルし
たターゲツト（target）細胞に加え、そして６
時間の細胞培養後比クロム放出を決定した。他
の実験において、未分別のＴ細胞を前述のよう
にマイトマイシン処理した刺激体細胞で増感
し、次いでMLC中で５日後FACS上でOKT4+
およびOKT4-のＴ細胞の部分集合に分別し、
そして比クロム放出を決定した。次の式を用い
て細胞毒性を決定した： 実験により放出された 51Cr−自発的に放出された
51Cr／凍結−溶解により放出された 51Cr−自発的に放
出された 51Cr×100 すべての試料は３回反復実験し、結果を平均で
表わした。自発的な放出はすべての場合において
最大の崩壊（lysis）の20％より小であつた。 ハイブリドマの生成、および生ずるモノクロー
ナル抗体の生成および特性づけは、上の実施例に
おけるように実施した。大量の主題の抗体を、主
題のハイブリドマのマウスへの腹膜内注射および
悪性腹水の収穫により調製したが、ハイブリドマ
は試験管内でこの分野においてよく知られた技術
により培養し、抗体を上澄液から取り出すことが
できることは、明らかに考えられる。 主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・タ
イプ・カルチヤー・コレクシヨン（12301
Parklawn Drive、Rockville、MD、208 52）に
1979年４月26日に寄託され、ATCC番号
CRL8002が付された。 第１図に示すように、一定の正常な個体のヒト
抹消血液Ｔ細胞の個体群のほぼ45％はOKT4と反
応性であるが、これに対して同じ個体から単離さ
れた全Ｂ細胞、無特徴細胞および大食細胞の個体
群はOKT4と非反応性である。他の正常な15個体
からのリンパ球の個体群について同様な結果が得
られた。こうしてモノクローナル抗体は、正常な
ヒト抹消Ｔ細胞のほぼ５％の表面上に含有される
抗原と反応性であるが、前述の３つの細胞の型の
表面上の抗原と非反応性であると、特性づけられ
る。後述するように、ヒト抹消Ｔ細胞の個体群の
OKT4+部分はヘルパーＴ細胞の亜群である。こ
の特異の反応性は、主題の抗体OKT4を検出で
き、そして他の抗体と区別できる１つの試験であ
る。 第２図に示すように、６カ月の乳児からの正常
なヒト胸腺細胞の約80％はOKT4と反応性であ
る。２カ月〜19才の年令の正常な個体からの６つ
の追加の胸腺の試料を用いて、同様な結果（約80
％の反応性）が得られた。第２図における反応性
のパターンは、主題の抗体OKT4を検出し、それ
を他の抗体と区別する第２の方法を提供する。 第３図に示すように、主題の抗体はＢ細胞慢性
リンパ芽球性白血病からの白血球細胞と非反応性
である。 主題の抗体OKT4のほかに特徴づけは、第４お
よび５図に図解される種々のヒトＴ細胞ラインに
対する反応によつて示される。この図からわかる
ように、主題の抗原のヒトＴ細胞ラインに対する
反応性は不均質であり、ラインCEMについて強
く、ラインHDJ−１について不存在である。ま
た細胞ラインLaz191およびHM1との反応性は存
在しない。このOKT4の種々の入手容易なヒトＴ
細胞ラインに対する特異の反応性は、主題の抗体
を特徴づけかつ説明するなお他の方法を提供す
る。 第６図は、OKT4の分離した部分集合
（subsets）の抗TH2との反応性を示す。分別しな
いＴ細胞個体群の約25％は抗TH2と反応性であ
る。これと対照的に、OKT4+個体群は抗TH2と
反応性の細胞を含有しないが、OKT4-の固体群
は主としてTH2+であり、そして分別しないＴ細
胞個体群中に見いだされるすべてのTH2 +細胞を
含有する。このことが示すように、TH2 +および
OKT4+の部分集合は相反であり、互いに区別さ
れる。 第７図は、分別しないＴ細胞、OKT4+T細胞
およびOKT4−Ｔ細胞の細胞毒性能力を図解した
ものである。OKT4+固体群はほんのわずかに毒
性であるが、OKT4-固体群により仲介される毒
性は分別しないＴ細胞の固体群よりも大きい。第
６図と第７図に示されたOKT4+およびOKT4-の
Ｔ細胞の固体群の特異的反応性は、主題の抗体を
特性づける手段をさらに提供するものである。 第１〜５図に図解される結果は要約であり、下
表の追加のデータで補足する。この表はOKT1
（ハイブリドマATCCNo.CAL800）、OKT3（ハイ
ブリドマATCCNo.8001）およびOKT4（最後は本
願の主題である）と標示されるハイブリドマによ
り生成されたモノクローナル抗体を比較するもの
である。第１〜５図中のデータに加えて、表は
またはOKT4は正常のヒト末梢Ｂ細胞、無特徴
（null）細胞および大食細胞（macrophage）、な
らびにＴ細胞および無特徴細胞急性リンパ芽球性
白血病患者からの白血病細胞およびEBV変形Ｂ
細胞のラインと非反応性であることを明らかにす
る。OKT1と対照的に、OKT4はＴ細胞慢性リン
パ芽球白血病患者からの白血病細胞と反応しな
い。 機能的研究を、蛍光活性化細胞セパレーター
（FACS）で分離したリンパ様固体群について実
施した。これらの研究は下表〜に示されてお
り、そしてさらに主題のモノクローナル抗体の前
述の特徴づけを裏書きする。 これらの研究において、分別しないＴ細胞個体
群を１：1000希釈のOKT4およびＧ／Ｍ FITC
で処理し、OKT4+およびOKT4-の部分集合にお
いてFACSで分離した。得られた個体群の純度
（95％以上）がわかつたとき、５％の大食細胞を
試験管内培養前に分離した個体群に加えた。次い
で分別しないＴ細胞の個体群および単離した
OKT4+およびOKT4-のＴ細胞の部分集合を
PHA、ConA、可溶性抗原、および異常抗原で刺
激してそれらの試験管内の増殖の応答を評価し
た。 分別しないＴ細胞個体群のPHAおよびConAに
対する増殖の応答を表に示す。分別しないＴ細
胞個体群による最大の増殖応答は、1μｇ／106細
胞のPHAを用いて得られ、減少した応答は0.5μ
ｇおよび0.1μｇ／106細胞において生ずる。分別
しないＴ細胞をOKT4およびヤギ−マウスFITC
で処理し、引き続いて分別しないと、増殖応答は
変化しなかつた。対照的に、PHAに対する応答
の差は分離したOKT4+およびOKT4-のＴ細胞の
部分集合を用いて得られた。細胞のOKT4+個体
群はPHAのすべての投与量に対して分離しない
Ｔ細胞個体群と同様な方法で応答した。しかしな
がら、OKT4-細胞の増殖応答は試験したPHAの
すべての投与量において有意に少ない。さらに、
0.1μｇ／106細胞のPHAの投与量において、
OKT4-のＴ細胞はまつたく増殖しないが、
OKT4+細胞の部分集合および分別しない細胞は
なお応答性であつた。これらの部分集合のConA
への増殖応答は、他方において、同様であつた
が、２つの部分群の細胞は互いにまたは分別しな
いＴ細胞個体群と区別されえなかつた。異常抗原
に対するMLCにおける応答および可溶性抗原に
対する応答を次に検査した。表に示すように、
OKT4およびＧ／Ｍ FITCで処理した分別しな
いＴ細胞個体群、両方のOKT4+およびOKT4-の
Ｔ細胞サブセツトは同様な方法でMLCにおいて
Laz156に対して応答性であつた。しかしながら、
６の個体のうちの２からのOKT4−細胞を試験
し、MLCにおいて有意に増殖したが、それらの
応答性OKT4-部分集合よりも少ない Ｈ−TdR
を組込んだことに注意すべきである（データは示
されていない）。これと対照的に、可溶性抗原へ
の増殖応答は部分集合間の明確な区別を提供し
た。試験したすべての例において、OKT4+のＴ
細胞は可溶性抗原、破傷風トキソイド（tetanus
toxoid）および帯疱疹（Herpes−Zoster）に対
してよく増殖したが、OKT4−のＴ細胞部分集合
は実際上非応答性であつた。 表は、Ｔ細胞のOKT4-部分集分は、MLCに
おいて単独で増感したとき、あつたとして、細胞
崩壊を多く発生できないことを示す。こうして、
OKT4-T細胞は分別しない異常増感したＴ細胞
個体群中で細胞毒性／奏効体となつたが、それ自
体でそのMICにおける応答にかかわらずCMLを
仲介することを誘発されえなかつた。その上、
OKT4+個体群をMICにおいてOKT4-T細胞の不
存在で増感するとき、それらは中程度であるが、
有意の、MICにおける崩壊を仲介できた。しか
しながら、OKT4+およびOKT4-のＴ細胞の再結
合した混合物は、分離したＴ細胞個体群のそれに
似ず、最高の細胞崩壊を行つた。これらの発見
は、OKT4-部分集合は最高の細胞毒性の応答の
みを行うことができないが、OKT4+個体群から
の助けを要求する。このＴ−Ｔ相互作用は、最高
の細胞毒性の発生においてTH2 -T細胞部分集合
群によつてTH2 +T細胞部分集合へ提供されたＴ
細胞の助けに類似する。 本発明によれば、本質的にすべての正常なヒト
のヘルパーＴ細胞上に見い出される抗原に対する
抗体を生成できるハイブリドマ、このハイブリド
マを生成する方法、本質的にすべてのヒトＴ細胞
上に見い出される抗原に対するモノクローナル抗
体、この抗体を生成する方法、およびこの抗体を
用いる病気の処置または診断の方法および組成物
が提供される。 ヒトのヘルパーＴ細胞の抗原に対する単一の単
分枝系孔体を生成する単一のハイブリドマだけを
説明してきたが、本発明はここに説明する特性を
示すすべてのモノクローナル抗体を包含すると考
えられる。主題の抗体OKT4はねずみのIgGの４
つのサブクラスの１つであるサブクラスIgG2に
属することが決定された。免疫グロブリンＧのこ
れらのサブクラスは互いにいわゆる「固定され
た」領域において異なるが、特定の抗原に対する
抗体はいわゆる「可変の」領域をもち、この領域
は免疫グロブリンＧのどのサブクラスがそれに属
するかに無関係に機能的に同一である。すなわ
ち、ここに説明した特性を示すモノクローナル抗
体はサブクラスIgG1、IgG2a、IgG2b、または
IgG3、あるいはクラスIgM、IgA、あるいは他の
既知のクラスIgであることができる。これのクラ
スまたはサブクラスの間の差異は抗体の反応パタ
ーンの選択性に影響を及ぼさないが、抗体と他の
物質、たとえば、相補的抗体および抗マウス抗体
とのほかの反応に影響を及ぼすことがあるであろ
う。主題の抗体はIgG2に特定したが、ここに例
示した反応性のパターンを有する抗体類はそれら
が属する免疫グロブリンのクラスまたはサブクラ
スに無関係に本発明の範囲内に包含されると考え
られる。 さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したハ
イブリドマの技術を用いて前述のモノクローナル
抗体を生成する方法が包含される。ハイブリドマ
のただ１つの例をここに記載したが、当業者はこ
こに提供した免疫法、融合法および選択法に従
い、ここに説明した反応性の特性を有する抗体類
を生成しうる他のハイブリドマ類を得ることがで
きると考えられる。マウスの既知の種からの既知
の骨髄腫細胞系統から生成した個々のハイブリド
マはこのハイブドマにより生成された抗体を参照
する以外それ以上同定できないので、前述の反応
性の特性を有する抗体を生成するすべてのハイブ
リドマ類は本発明の範囲内に包含され、これらの
ハイブトリドマを用いるこの抗体をつくる方法も
同様に包含されると、考えられる。 本発明のほかの面は、モノクローナル抗体
OKT4またはここに明らかにした反応性のパター
ンを示す他のモノクローナル抗体を用いて病気を
処理または診断する方法である。主題の抗体を使
用して、個体からのＴ細胞の組成物とOKT4抗体
との反応によつて、型の後天性無ガンマグロブ
リン血症を検知できる。ヘルパーＴ細胞の不存在
または不足は、OKT4と反応する合計の末梢Ｔ細
胞個体群の55％より少量の存在によつて示され
る。また、この試験を使用して一般にヘルパーＴ
細胞の不足または過剰を検知できる。ヘルパーＴ
細胞のガンの処置は、治療的に有効量のOKT4抗
体をこのような処置を必要とする個体に投与する
ことによつて達成できる。ヘルパーＴ細胞の抗原
との選択的反応より、有効量のOKT4抗体は過剰
のヘルパーＴ細胞を減少し、こうしてヘルパーＴ
細胞の悪性を軽減する。ヘルパーＴ細胞の過剰に
よつて起こる自己免疫の病気を、治療的に有効量
のOKT4抗体をこのような処置の必要な個体に投
与することによつて処置することでもきる。有効
量のOKT4抗体を、それぞれ、診断学的にまたは
製薬学的に許容できる担体として、含有する診断
組成物および治療組成物も本発明の範囲内であ
る。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
第１図は、正常のヒトの末梢Ｔ細胞を１：1000
の希釈でOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させ
た後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンを
示す。比較のため、モノクローナル抗体OKT1お
よびOKT3を用いた結果を第１〜５図におけるの
と同等の条件下で示す。第２図は、ヒト胸腺細胞
をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得られた蛍光パターンを示
す。第３図は、Ｂ細胞の慢性リンパ芽球性白血病
患者からの白血病細胞をOKT4およびＧ／Ｍ
FITCと反応させた後、シトフルオログラフで得
た蛍光パターンである。第４図は、ヒトＴ細胞ラ
インHJD−１をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反
応させた後、シトフルオログラフで得た蛍光パタ
ーンを示す。第５図は、ヒトＴ細胞ラインCEM
をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得た蛍光パターンを示す。
第６図は、Ｔ細胞の個体群をエクイン抗TH2血
清と反応させた結果を示す。第７図は、分別しな
いＴ細胞およびＴ細胞の部分集合の細胞毒性能力
を示す。比崩解（specificlysic）百分率は縦座標
で示し、そして奏効体（effector）／ターゲツト
（Ｅ／Ｔ）比は横座標で示す。
の希釈でOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させ
た後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンを
示す。比較のため、モノクローナル抗体OKT1お
よびOKT3を用いた結果を第１〜５図におけるの
と同等の条件下で示す。第２図は、ヒト胸腺細胞
をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得られた蛍光パターンを示
す。第３図は、Ｂ細胞の慢性リンパ芽球性白血病
患者からの白血病細胞をOKT4およびＧ／Ｍ
FITCと反応させた後、シトフルオログラフで得
た蛍光パターンである。第４図は、ヒトＴ細胞ラ
インHJD−１をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反
応させた後、シトフルオログラフで得た蛍光パタ
ーンを示す。第５図は、ヒトＴ細胞ラインCEM
をOKT4およびＧ／Ｍ FITCと反応させた後、
シトフルオログラフで得た蛍光パターンを示す。
第６図は、Ｔ細胞の個体群をエクイン抗TH2血
清と反応させた結果を示す。第７図は、分別しな
いＴ細胞およびＴ細胞の部分集合の細胞毒性能力
を示す。比崩解（specificlysic）百分率は縦座標
で示し、そして奏効体（effector）／ターゲツト
（Ｅ／Ｔ）比は横座標で示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ヒトのＴ細胞で前もつて免疫されたマウスか
らの脾細胞とマウスの骨髄腫ラインからの細胞と
の融合により形成されたハイブリドマにより生成
され、 (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢ヘルパーＴ
細胞（すべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の約55％
である）と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細
胞、無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約80％と反応し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性
リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性
白血病、または無特徴細胞急性リンパ芽球性白
血病をもつヒトからの白血病細胞とは反応せ
ず、 (d) Rhesusサル末梢Ｔ細胞の約55％と反応し、 (e) 補体を固定し、そして (f) 抗−TH2血清と非反応性であり且つほんの
わずかに細胞毒性であるＴ細胞個体群
（OKT4+）を定める、 クラスIgGのモノクローナル抗体。 ２ サブクラスIgG2である特許請求の範囲第１
項記載のモノクローナル抗体。 ３ P3×63Ag8U1骨髄腫の細胞と、Ｅロゼツト
精製したヒトＴ細胞で前もつて免疫したCAF1マ
ウスからの脾細胞との融合によつて形成されたハ
イブリドマから生成された特許請求の範囲第１項
記載のモノクローナル抗体。 ４ OKT4の同定特性を有するハイブリドマから
生成された特許請求の範囲第１項記載のモノクロ
ーナル抗体。 ５ (i) マウスをＥロゼツト陽性の精製したヒト
Ｔ細胞で免疫し、 (ii) 脾臓を該マウスから取り出し、そして脾細胞
の懸濁液をつくり、 (iii) 該脾細胞をマウスの骨髄腫の細胞と融合促進
剤の存在下で融合し、 (iv) 融合した細胞を別のウエルにおいて、末融合
の骨髄腫の細胞を支持しない媒体中で希釈し、
そして培養し、 (v) ハイブリドマを含有するウエル中の上澄液を
所望の抗体の存在について評価し、 (vi) 所望の抗体を生成するハイブリドマ類を選び
且つクローニングし、そして (vii) クローニングした上澄液から抗体を回収す
る、 ことを特徴とする、 (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢ヘルパーＴ
細胞（すべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の約55％
である）と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細
胞、無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約80％と反応し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性
リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性
白血病、または無特徴細胞急性リンパ芽球性白
血病をもつヒトからの白血病細胞と反応せず、 (d) Rhesusサル末梢Ｔ細胞の約55％と反応し、 (e) 補体を固定し、そして (f) 抗−TH2血清と非反応性であり且つほんの
わずかに細胞毒性であるＴ細胞個体群
（OKT4+）を定める、 モノクローナル抗体の製造方法。 ６ 該マウスが系統CAF1であり、そして該骨髄
腫細胞がP3X63Ag8U1である特許請求の範囲第
５項記載の方法。 ７ (i) マウスをＥロゼツト陽性の精製したヒト
Ｔ細胞で免疫し、 (ii) 脾臓を該マウスから取り出し、そして脾細胞
の懸濁液をつくり、 (iii) 該脾細胞をマウスの骨髄腫の細胞と融合促進
剤の存在下で融合し、 (iv) 融合した細胞を別のウエルにおいて、末融合
の骨髄腫の細胞を支持しない媒体中で希釈し、
そして培養し、 (v) ハイブリドマを含有する各ウエル中の上澄液
を所望の抗体の存在について評価し、 (vi) 所望の抗体を生成するハイブリドマ類を選び
且つクローニングし、 (vii) クローニングした上澄液から抗体を回収し、 (viii) 該クローンをマウスの腹膜内に移植し、そし
て (ix) 悪性の腹水または血清を該マウスから収穫す
る、 ことを特徴とする、 (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢ヘルパーＴ
細胞（すべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の約55％
である）と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細
胞、無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約80％と反応し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性
リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性
白血病、または無特徴細胞急性リンパ芽球白血
病をもつヒトからの白血病細胞と反応せず、 (d) Rhesusサル末梢Ｔ細胞の約55％と反応し、 (e) 補体を固定し、そして (f) 抗−TH2血清と非反応性であり且つほんの
わずかに細胞毒性であるＴ細胞個体群
（OKT4+）を定める、 モノクローナル抗体の製造方法。 ８ 該マウスが系統CAF1であり、そして該骨髄
腫細胞がPBX63Ag8U1である特許請求の範囲第
７項記載の方法。 ９ ヒトのＴ細胞で前もつて免疫されたマウスか
らの脾細胞とマウスの骨髄腫ラインからの細胞と
の融合により形成されたハイブリドマにより生成
され、 (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢ヘルパーＴ
細胞（すべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の約55％
である）と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細
胞、無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約80％と反応し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性
リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性
白血病、または無特徴細胞急性リンパ芽球性白
血病をもつヒトからの白血病細胞とは反応せ
ず、 (d) Rhesusサル末梢Ｔ細胞の約55％と反応し、 (e) 補体を固定し、そして (f) 抗−TH2血清と非反応性であり且つほんの
わずかに細胞毒性であるＴ細胞個体群
（OKT4+）を定める、 クラスIgGのモノクローナル抗体の診断的に有効
な量を、個体からのＴ細胞の組成物と反応させ、
そして該抗体と反応する合計の末梢Ｔ細胞個体群
の百分率を測定することを特徴とする個体中のヘ
ルパーＴ細胞の不足または過剰を検知する方法。 １０ ヘルパーＴ細胞の不足が型後天的無ガン
マグロブリン血症である特許請求の範囲第９項記
載の方法。 １１ ヒトのＴ細胞で前もつて免疫されたマウス
からの脾細胞とマウスの骨髄腫ラインからの細胞
との融合により形成されたハイブリドマにより生
成され、 (a) 本質的にすべての正常なヒト末梢ヘルパーＴ
細胞（すべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の約55％
である）と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細
胞、無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 (b) 正常ヒト胸腺細胞の約80％と反応し、 (c) Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞慢性
リンパ芽球性白血病、Ｔ細胞急性リンパ芽球性
白血病、または無特徴細胞急性リンパ芽球性白
血病をもつヒトからの白血病細胞とは反応せ
ず、 (d) Rhesusサル末梢Ｔ細胞の約55％と反応し、 (e) 補体を固定し、そして (f) 抗−TH2血清と非反応性であり且つほんの
わずかに細胞毒性であるＴ細胞個体群
（OKT4+）を定める、 クラスIgGのモノクローナル抗体を、診断学的に
許容しうる担体との混合物として、ヘルパーＴ細
胞の不足を検知するのに有効な量を含んで成るこ
とを特徴とするヘルパーＴ細胞の不足を検知する
ための診断用組成物。
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