JPS6353465A - 分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は分析素子、特に流体試料中の特定成分を分析す
るための分析素子に関し、更に詳しくは生物学的流体試
料中の特定成分を分析するための多層型乾式の分析素子
に関する。

〔従来の技術〕

生物学的流体試料中の特定成分を分析するための多層型
乾式の分析素子は種々の構成のものが知られている。そ
れらの中で、試薬層と多孔性展開層の間にポリ（２！−
ビニルピロリドン）、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリル
アミド）等の重合体から成る中間層を設けて、試薬層と
多孔性展開層との接着性を向上させる方法が、例えば特
公昭５１３−１９０６２号公報、特開昭５Ｏ−ｉ５７１
９２号、同５２−１５１７１３６号、同５５−２４１３
９！１号、同５４−２６７９３号、同６０−２５６０６
８号各公報等の明細書実施例中に記載されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

上記のような重合体から成る中間層の塗設は、確かに試
薬層と多孔性展開層の間の接着性の向上にかなり効果は
あるが、それでも分析素子（スライド）を作成するため
、小片に断裁する際には、試薬層と多孔性展開層の間で
はく離が認められ、接着性としてはまだ充分満足できる
ものとは言い難く、更なる改善が望まれている。

本発明の目的は、試薬層と多孔性展開層の間の接着性が
著しく改善され、かつそれに伴って測定精度（同時再現
性）も大幅に改善された多層型乾式の分析素子を提供す
ることにある。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明は分析素子に関する発明で
あって、光透過性かつ液体不浸透性の支持体上に少なく
とも１つの試薬層及び多孔性展開層を有する流体試料中
の特定成分を分析するための分析素子において、前記試
薬層と前記多孔性展開層との間に下記一般式ｌ及び■：
〔式中、Ｒ１は低級アルキル基、Ｘば２０〜９５モルチ
、ｙは５〜８０モルチなる数を示す〕〔式中、Ｒ１は水
素原子又はメチル基、”４はフェニル基、シアン基又は
式−００ＯＲ，で表わされる基（式中Ｒ４は低級アルキ
ル基？示す）、ｘｌは５０〜９５モル％　、７１は５〜
５０モルチなる数を示す〕 で表わされる共重合体よシなる群から選択した少なくと
も１種の共重合体を含む層を設けたことを特徴とする。

以下、本発明を具体的に説明する。

本発明において測定し得る流体試料中の特定成分として
は、例えばグルコース（Ｇ／ｕ）　、総コレステロール
（Ｔ　−Ｃｈｏ　）、ヘモグロビン（ａ’ｂ）、アルブ
ミン（Ａｚｂ）　、総タンパク（ＴＰ）、尿酸（ＵＡ）
、総ビリルビン（Ｔ−Ｂｌ）、クレアチニン（ＣＡＲ）
、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯ
Ｔ）　、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（
ＧＰＴ）、乳酸脱水素酵素（ＩＪＤＨ）、γ−グルタミ
ルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＴＰ）、アルカリホス
ファターゼ（ＡＬＰ）、アミラーゼ（ＡＭＹ）　、ロイ
シンアミノペプチダーゼ（ＬＡＰ）　等種々の成分が挙
げられる。

本発明に係る試薬層には、流体試料中の特定成分と直接
的又は間接的に関与する試薬を含有し、これらの試薬と
しては色素形成前駆物質、酵素、補酵素、緩衝剤、必要
に応じて基質等が包含される。

本発明に係る試薬層に含有される試薬とじては、例えば
Ｇｌｎを測定する場合は、４−アミノアンチピリン、１
．７−シヒドロキシナフタレン、グルコースオキシダー
ゼ（ＣＯＤ）　、ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）、リン酸
塩バッファー等を、Ｔ−Ｃｈ。

の場合は、４−アミノアンチピリン、１，７−シヒドロ
キシナフタレン、ＰＯＤ、　　リン酸塩バッファー等を
、Ｅｂの場合は、アジ化ナトリウム、亜硝酸ナトリウム
、トリスバッファー等を、Ａｔｂの場合は、クエン酸バ
ッファー等を、ＴＰの場合は、硫酸鋼、酒石酸カリウム
ナトリウム、水酸化ナトリウム等を、ｒＪＡの場合は、
カプラー、ウリカーゼ、ＰＯＤ、ホウ酸塩バッファー等
を、Ｔ−Ｂｉ／の場合は、ジアゾニウム塩、重合体酸物
質等を、ＯＲの場合は、クレアチニンアミドヒドロラー
ゼ、クレアチンアミジノヒドロラーゼ、ザルコシンオキ
シダーゼ、カプラー、ＰＯＤ、　　リン酸塩バッファー
等を、ＧＯＴの場合は、リンゴ酸脱水素酵素（ＭＤＨ）
　、ＬＤＨ、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チド（ＮＡＤＨ）　、ピリドキサール−５′−リン酸、
リン酸塩バッファー等を、ＧＰＴの場合は、ＬＤＨＸＮ
ＡＤＨ、ピリドキサ−ルーダ−リン酸、リン酸塩バッフ
ァー等を、ＬＤＨの場合は、Ｎ１）Ｈ、ＩＪン酸塩バッ
ファー等ヲ、γ−ＧＴＰＯ場合は、γ−グルタミルーｐ
−ニトロアニリド、グリシルグリシン、塩化マグネシウ
ム、トリスバッファー等を、ＡＬＰの場合は、リン酸塩
バッファー等を、ＬＡＰの場合は、Ｌ−ロイシル−ｐ−
ニトロアニリド、塩化マグネシウム、トリスバッファー
等が挙げられる。上記試薬層には、まだ他の付加的な添
加剤として、例えば保恒剤、界面活性剤等、種々の添加
剤も所望に応じて添加することができる。

本発明において測定し得る流体試料中の特定成分は上記
のものに限定されるものではなく、上記以外の鍾々の成
分に対しても適応可能であり、また試薬層に含有される
試薬も上記のものに限定されるものではなく、成分の４
類あるいは同じ成分であっても異なる分析反応分用いる
場合は、上記の試薬類以外のものも用いることができる
。

上記試薬層は水溶性ポリマー又は親水性かつ有機溶媒可
溶性のポリマーをバインダーとして支持体上に塗布する
ことによって層として設けることができる。水溶性ポリ
マーバインダーとしてはゼラチン、フタル化ゼラチン等
のゼラチン誘導体、ヒドロキシエチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム塩等の水溶性上ルロ
ース誘導体、ホリヒニルアルコール、ポリ（Ｎ−ビニル
ピロリドン）、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルア
ミド、アクリルアミドとアクリル酸エステルの共重合体
、ポリ（モノ又はジアルキル置換）アクリルアミド、ポ
リ（モノ又はジアルキル置換）メタクリルアミド及びこ
れらの水溶性共重合体等が挙げられ、好ましくはゼラチ
ン、ポリアクリルアミド及びアクリルアミドとアクリル
酸エステルの共重合体が用いられる。親水性かつ有機溶
媒可溶性ポリマーバインダーとしては、ポリ（Ｎ−ビニ
ルピロリドン）、ポリ（Ｎ−ビニルイミダゾール）、ポ
リ（Ｎ−ビニルトリアゾール）及びこれらの誘導体又は
それらの共重合体、エチルセルロース、メチルセルロー
ス等のセルロース’３　導体等が挙げられる。これらの
ポリマーバインダーは主としてアルコール類、例えばエ
タノール、グロバノール、ブタノール等に溶解し且つ親
水性の高分子物質である。

上記ポリマーバインダーは、選ばれる特定成分及びその
分析反応によって任意に選ぶことができる。また、選ば
れる分析反応が２種以上の試薬から構成されている場合
、この試薬を同一試薬層内に一緒に混合して含有させて
も、また、２種以上の試薬を２つ又はそれ以上の別々の
試薬層として含有させてもよい。これらは分析反応自体
の作用機構によって決定されることもあり、好ましくな
い影響を及ぼさない限りにおいて、その構成は任意であ
る。

上記試薬層の膜厚は所望に応じて任意に選択することが
可能であるが、好ましくは１〜２００μ慣、更に好まし
くは５〜１００μ倶である。

本発明に係る多孔性展開層は、（１）一定容量の流体試
料を単位面積当り試薬層に均一に配布する機能を有する
ものである。その上、更に、特公昭５３−２１６７７号
明細書に記載された性能、すなわち（２）　ａ体試料中
の分析反応を阻害する物、質又は要因を除去する機能及
び／又は（３）分光光度分析を行うときに支持体分経て
透過する測定光を反射するバックグランド作用を行う機
能を有するものであれば好ましい。したがって、本発明
に係る多孔性展開層は、上記（１）の機能のみを有する
層、（１）に加えて（２）及び／又は（３）の機能を併
せて有する層のいずれかとすることができ、あるいは（
１）を包含する複数の機能を適宜分離し、各機能ごとに
別の層を使用することも可能である。更に（１）、（２
）及び（３）の機能のうち、２つの機能を有する層と、
残りの１つの機能を有する層を組合せて使用することも
できる。例えば、前述の特公昭５５−２１６７７号公報
に記載された二酸化チタン及び二酢酸セルロースから成
るプラッシュポリマーと呼称される非繊維多孔質媒体の
展開層、特開昭５５−１６４５５６号明細書に記載され
た親水化処理した織物の展開１、％開昭５７−９４６５
８号、同５７−１２５８４７号、同５７−１９７４６６
号及び閾５８−７０１６１号等の各明細書に記載された
繊維構造展開層、特開昭５８−９０１６７号明細書に記
載された粒子結合体構造展開層が挙げられる。特に、上
記繊維構造展開層及び粒子結合体構造展開層は、血球部
分も速やかに移送することが可能な素材として特に有用
である。本発明の分析素子における展開層の膜厚は、そ
の空隙率によって決定されるべきであるが、好ましくは
約１００〜６００μ慣、更に好ましくは約約１５０〜４
００μ慣である。また、空隙率は好ましくは約２０〜８
５チである。

上記多孔性展開層には、選ばれる特定成分及びその分析
反応によっては、前述の試薬層の場合と同様、流体試料
中の特定成分と直接的又は間接的に関与する試薬を含有
することができる。

例えば、Ｔ−Ｏｈｏを測定する場合は、コレステロール
ニステラー−”　（ＣＯＥ）　、コレステコールオキシ
ダーゼ（ｃｏＤ）等を、Ａ／ｂの場合は、ブロムクレゾ
ールグリーン等を、ＵＡの場合は、水素供与体等を、Ｔ
−Ｂｉ／の場合は、ダイフィリン等ｔ１ＧＯＴの場合は
、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、α−５ケトグルタル
酸等を、ＧＰＴの場合は、Ｌ−アラニン、α−ケトグル
タル酸等を、ＬＤＨの場合は、ピルビン酸す）　ＩＪウ
ム等を、ＡＬＰの場合は、ｐ−ニトロフェニルリン酸二
ナトリウム、塩化マグネシウム等が拳げられる。

これらは−例であり、特定成分の揮類あるいは上記と同
じ特定成分であっても異なる分析反応を用いる場合は、
上記の試薬類以外のものも含有することができる。

また他の付加的な添加剤として、例えば保恒剤、界面活
性剤等、穏々の添加剤も所望に応じて添加することがで
きる。

特に界面活性剤は、流体試料を本発明の素子に適用した
際の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性）、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の例としては、例えば２，５−ジー
ｔ−ブチルフェノ中シポリエチレングリコール、ｐ−、
ｔクテルフエノキシポリエチレングリコール、ｐ−イソ
ノニルフェノキシポリエチレングリフール等のアルキル
置換フェノールのポリアルキレングリコール誘導体、高
級脂肪酸のポリアルキレングリコールエステルなどが挙
げられる。これらの界面活性剤は流体試料の試薬層への
浸透速度を調節し、同時に好ましからざる［クロマトグ
ラフィー現象ｊ発生を抑制する効果を有する。

上記界面活性剤は広範に選択された量を用いることが可
能であるが、塗布液の重量に対して２５重量％〜ａ、ｏ
ｏｓ重量％、好ましくは１５重量％〜ＣＬＯ５重量多用
いることができる。

本発明に係る共重合体としては、前記一般式（Ｉｌ及び
／又はｆｌｌｌで示される共重合体を用いることができ
る。

以下に本発明に係る共重合体の代表的な具体例を示すが
、これによって本発明が限定されるものではない。

例示共重合体 （１）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比９５：５） （２）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比８０：２０） （３）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比７０　：　５０） （４）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比６０：４０） （５）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比５０：５０） （６）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比４０：６０） （７）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比５０ニア０） （８）　　Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体
（モル比２０：８０） （９）　　Ｎ−ビニルビロリドンープロヒオン酸ビニル
共重合体（モル比６０：４０） αＩＮ−ビニルピロリドンー酪酸ビニル共重合体（モル
比７０：！１０） α］）Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸メチル共重合
体（モル比９５：５） （６）　Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸メチル共重
合体（モル比９０：１０） ＜１３　　Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸メチル共
重合体（モル比７５：２５） ０４　Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸エチル共重合
体（モル比８５：１５） α→　Ｎ−ビニルピロリドン−アクリル酸−ｎ　−ブチ
ル共重合体（モル比９０　：　１０）（１６Ｎ−ビニル
ピロリドン−メタクリル酸メチル共重合体（モル比９０
：１０） αη　Ｎ−ビニルピロリド／−メタクリル酸エチル共重
合体（モル比８０：２０） αＩＮ−ビニルピロリドンーメタクリル酸−ｎ−ブチル
共重合体（モル比９５：５） （至）　Ｎ−ビニルピロリドン−アクリロニトリル共重
合体（モル比８５：１５） ＩＮ−ビニルピロリドン−スチレン共重合体（１モル比
９０：１０） ａｌ）　　Ｎ−ビニルピロリドン−スチレン共重合体（
モル比７５：２５） （イ）　Ｎ−ビニルピロリドン−スチレン共重合体（モ
ル比ｓｏ：ｓｏ） 本発明に係る共重合体は、公知の重合法を用いて容易に
得ることができる。

上記共重合体から成る眉は、所望に応じて任意に選択す
ることが可能であるが、好ましくは０．１〜５０μ惧、
更に好ましくは０．５〜３０μ慣である。まだ、上記共
重合体から成る層には、場合によっては前述の試薬類を
含有することもできる。

上記共重合体は、エタノール、プロパツール、ブタノー
ル等のアルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等
のケトン類、テトラヒドロフラン、トルエン、キシレン
、クロロホルム、ジクロロエタン等の有機溶媒に溶解し
て塗設することができる。

本発明の分析素子に係る前記の液体不浸透性の光透過性
支持体（以下、本発明に係る支持体と略す）は、液体不
浸透性で、かつ光透過性であればその種類を問わないが
、例えば酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート
、ポリカーボネート又はポリスチレンのような種々の重
合体材料がこの使用目的に適する。更には上記重合体材
料のみならず、ガラスのごとき無機材料も同様に用いる
ことが可能である。本発明に係る支持体の厚さは任意で
あるが、好ましくは５０〜２５０μｍである。また、本
発明【係る支持体の観測側の一側面は、その目的に応じ
て任意に加工することが可能である。更に試薬層を積層
する側の支持体面に、場合によっては光透過性の下塗り
層を使用して試薬と支持体との接着性を改良することが
できる。

本発明の分析素子は必要に応じて、例えば米国特許第５
，９９２，１５８号明細書記載の反射層、下塗り層、米
国特許第４．Ｏ１２，５５５号明細書記載の放射線ブロ
ッキング層、米国特許第４，０６６．４０３号明細書記
載のバリヤー層、米国特許第、４．１６６．０９５号明
細書記載のマイグレーション阻止層、特開昭５５−９０
８５９号明細書記載のスカベンジャー層、及び米国特許
第４ｉ１Ｑ、０７９号明細書記載の破壊性ボッド状部材
等を任意に組合せて本発明の目的に合せた任意の構成と
することができる。

これら分析素子の種々の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において公知のスライ
ドホッパー塗布法、押出し塗布法、浸漬塗布法等を適宜
選択して用い、順次積層することで任意の厚みの層を塗
設することができる。

本発明の分析素子を用いて、流体試料中の特定成分の量
を、本発明に係る支持体側から反射スペクトロフォトメ
トリーによシ初速度法又は反応終点法に従って測定する
ことができる。こ■ようにして得られた測定値は、あら
かじめ作成しておいた検量線に当てはめることで特定成
分の量を決定することができる。

本発明の分析素子に適用される流体試料の量は任意に定
めることができるが、好ましくは約５μｌから約５０μ
ｊであり、更に好ましくは５μｊから２，０μｌである
。通常１０μｇの流体試料を適用するのが好ましい。

本発明の分析素子は全血液、血清及び血漿のいずれの分
析にも不都合なく用いることができる。更には尿、リン
パ液、髄液等の他の体液も不都合なく用いられる。全血
液を用いる場合には、必要に応じて検出のための放射線
が血球により妨害を受けるのを避けるために、前述の放
射線プロツキフグ層又は他の反射層を設けることができ
る。

本発明の分析素子に用いられる分析反応は、その目的に
よシ任意に定めることができるが、例えば臨床化学の分
野に有用であり、特に生物学的液体試料、すなわち血液
又は尿中の成分の分析に用いられる。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが
、本発明はこれら実施例に限定されるも、のではない。

実施例−１（グルコース用分析素子） 膜厚１８０μ情の透明な下引済ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に下記組成の試薬層を設けた。

試薬層（Ｒ−１−１） ゼラチ７１４．ｏ　ｔ／ｎｃ” １．７−シヒドロキシナフタレン　　α８４９７ｍ”４
−アミノアンチピリン・塩酸塩　　　０．８１９７ｍ２
ペルオキシダーゼ　　　　　　６ス０ＯＯＵ／ｍ２グル
コースオキシダーゼ　　　４へＯＯＯＴ：３７ｍ２ジメ
ドン　　　　　　　　　　　　　α１９　？／、Ｌ２リ
ン酸カリウム緩衝剤（ｐＨす）　　　　　２．８２９７
ｍ”トリイソプロピルナフタレンスルホ／　　α２２　
ｆ／−酸ナトリウム １．２−ビス（ビニルスルホニル）エタン、　　ａ１ｏ
ｐ／、２上記試薬層上に、下表の中間１１及び展開層を
順次設け、表−１に示す本発明の分析素子−１〜６並び
に比較分析素子−１及び２を作成した。

中間層（１） ・いずれも乾燥膜厚２μ惧になるように塗設。

展開層（Ｓ） 表−１ 上記本発明の分析素子−１〜６並びに比較分析素子−１
及び２に各種グルコース濃度のヒト血清を１０μｇ点着
し、３７℃で７分間インキュベーションを行った後、５
４６ｎｍのフィルターを用いて反射濃度を測定し、この
反射濃度と、ユニキットグルコース−Ｅ〔中外製薬■製
〕で検定したヒト血清のグルコース濃度値から、あらか
じめ検量線を作成した。

更にヒト血清の中から正常値（８５■／ａＺ　）及び異
常値（２６ｏｍ９／ａｚ）のものを各々１０回点着し、
上記と同様の操作を行い反射濃度を測定し、あらかじめ
作成した検量線に当てはめてグルコース濃度値を算出し
た後、変動係数ａｖチを求めた。結果を表−２に示す。

表−２ 表−２の結果から明らかなように、本発明の分析素子−
１〜６は、比較分析素子−１及び２に比し、良好な同時
再現性を示すことが判る。

なお、比較分析素子−１及び２では、分析素子（スライ
ド）を作成するため、小片に断裁する際に、試薬、１と
展開１の間ではく離が認められたが、本発明の分析素子
−１〜６では全くはく離が認められず良好な接着性を示
した。

実施例−２（ヘモグロビン用分析素子）膜厚１８０μ情
の透明カ下引済ポリエチレンテレフタレート支持体上に
下記組成の第１の試薬層を設けた。

第１の試薬’ｉ　（Ｒ−１−２） ゼラチン　　　　　　　　　　　　　Ｉａｌ　　タン−
アジ化ナトリウム　　　　　　　　２．７２　ｆ　／ｍ
”塩酸トリスヒドロキシメチル　　　　　　　１５２９
／ｍ”アミノメタン トリイソプロピルナフタレンスルホン　　　　　　　　
［１５８９７ｍ”酸ナトリウム １．２−ビス（ビニルスルホニル）エタン　　　　　　
α２２ｆ／−上記第１の試薬１上に、更に下記組成の第
２の試薬層を設けた。

第２の試薬層（Ｒ−２−１） ゼラチン　　　　　　　　　　　４瓜５ｆ／−亜硝酸ナ
トリウム　　　　　　　　？、　５０　ｙ／−ト　リ　
ト　ン　Ｘ−１０ｎ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１１０ｆ／ｍ”１．２−ビス（ビニルスルホニ
ル）エタン　　　　　　Ｉ１５０９７ｍ”上記第２の試
薬層上に、更に下表の中間層及び下記の展開１１を頭次
設け、表−３に示す本発明の分析素子−７〜１２並びに
比較分析素子−５分作成した。

中間１（１） 、いずれも乾燥膜厚３μ倶になるように塗設。

展開層（Ｅ＋−５） 粉末Ｆ紙　　　　　　　　　　　７９．０ｔ／ｍ”〔東
洋ｒ紙■４０〜１００メツシュ〕 スチレン−グリシジルメタクリレ−）　　　　　　　２
７．５　ｆ　／ｌｎ”共重合体（重量比９：１） ト　リ　ト　ｙ　　Ｘ　−１００７，９ｆ／ｍ”表−３ 上記本発明の分析素子−７〜１２並びに比較分析素子−
５に各種ヘモグロビン濃度のヒト全血を１０μを点着し
、３７℃で７分間インキュベーションを行った後、５４
６ｎｍのフィルターを用いて反射濃度を測定し、この反
射濃度と、ユニキットヘモグロビン−Ａ〔中外製薬■製
〕で検定したヒト全血のヘモグロビン値から、あらかじ
め検量線を作成した。

更にヒト全血の中から正常値（１５，７Ｐ／ｄ／）及び
異常値（ａ６ｙ／ａｚ）のものを各々１０回点着し、上
記と同様の操作を行い反射濃度を測定し、あらかじめ作
成した検量線に当てはめてヘモグロビン濃度値を算出し
た後、変動係数ｃｖチを求めた。結果を表−４に示す。

表−４ 表−４の結果から明らかなように、本発明の分析素子−
７〜１２は、比較分析素子−３に比し、良好な同時再現
性を示すことが判る。

なお、比較分析素子−３では、分析素子（スライド）と
作成するため、小片に断裁する際に、試薬層と展開１の
間ではく離が認められたが、本発明の分析素子−７〜１
２では全くはく離が認められず良好な接着性を示した。

実施例−５（アルブミン用分析素子） 膜厚１８０μ慣の透明な下引済ポリエチレンテレフタレ
ート支持体上に下記組成の試薬層を設けた。

試薬層（ＩＲ−１−５） アクリルアミド−メチルメタクリレ−）　　　１２．５
　　′？／ｍ”共重合体（重量比９：１） クエン酸緩衝剤（ｐＨ２，８）　　　　　　　　Ｉ　Ｚ
ｏ　６　Ｐ／ｙ＋ｓ”エマルゲン−１２０４，５０９７
ｍ” （化工アトラス社製） 上記試薬層上に、下表の中間層及び下記の展開層を順次
設け、表−５に示す本発明の分析素子−１３〜１８並び
に比較分析素子−４を作成した。

中間層（わ ・いずれも乾燥膜厚２μ倶になるように塗設。

展開層（Ｓ−４） 粉末７紙　　　　　　　　　　　９１．０　ｒ／ｍ”〔
東洋ＰＨＩ■４０〜１００メツシュ〕スチレン−グリシ
ジルメタクリレート　　　　　２ｓｏ　　５１／７ｎ２
共重合体（重量比９；１） ブロムクレゾールクリーン　　　　　　　２．８０　ｆ
／□２トリトｙＸ−１００９，０ｆ／、Ｌｚ 表−５ 上記本発明の分析素子−）３〜１８並びに比較分析素子
−４に各種アルブミン濃度のヒト血清を１０μｇ点着し
、３７℃で７分間インキュベーションを行った後、６５
０ｎｍのフィルターを用いて反射濃度を測定し、この反
射濃度と、ユニキットアルブミン−９〔中外製薬■製〕
で検定したヒト血清のアルブミン値から、あらかじめ検
量線を作成した。

更にヒト血清の中から正常値（ａ、７ｒ／ａｚ）及び異
常値（２，４ｒ／ａ／）のものを各々１０回点着し、上
記と同様の操作を行い反射濃度を測定し、あらかじめ作
成した検量線に当てはめてアルブミン濃度値を算出した
後、変動係数ＣＶ％を求めた。結果２表−６に示す。

表−６ 表−６の結果から明らかなように、本発明の分析素子−
１５〜１８は比較分析素子−４に比し、良好な同時再現
性を示すことが判る。

なお、比較分析素子−４では、分析素子（スライド）を
作成するため、小片に断裁する際に、試薬層と展開層の
間ではく離が認められたが、本発明の分析素子−１３〜
１８では全くはく離が認められず、良好な接着性を示し
た。

実施例−４（総コレステロール用分析素子）膜厚１８０
μｍの透明々下引済ポリエチレンテレフタレート支持体
上に下記組成の試薬層を設けた。

試薬層（Ｒ−１−４） ゼラチン　　　　　　　　　　　１５．９９７ｍ”１．
７−シヒドロキシナフタレン　　　　　　Ｑ、６１９７
ｍ”４−アミノアンチピリン・塩酸塩　　　　　［１Ｌ
８２ｆ／ｍ”ペルオキシダーゼ　　　　　　　　　１２
，５００　Ｕ／ｍ”ジメドン　　　　　　　　　　　　
　Ｑ、１４？／惧２リン酸カリウム緩衝剤ＣｐＢ　ｉ　
）　　　　　　　ｌ　５　ｔ、７ｍ２トリインプロピル
ナフタレンスルホン　　　　　　　　０．２５ｔ／□２
酸ナトリウム １．２−ビス（ビニルスルホニル）エタン　　　　Ｑ、
１１　ｆ／Ｊ上記試薬層上に、下表の中間層及び下記の
展開層を順次設け、表−７に示す本発明の分析素子−１
９〜２５並びに比較分析素子−５を作成した。

中間層（１） ・いずれも乾燥膜厚２μ惧になるように塗設。

展開層（Ｓ−５） 粉末Ｆ紙　　　　　　　　　　　９１．０９７ｍ”〔東
洋ｒ紙■４０〜１００メツシュ〕 スチレン−グリシジルメタクリレ−）　　　　　　２１
０９７ｍ”共重合体（重量比９：１） トリト：／Ｘ−１００９，０ｆ／−２ 餐コレステロールエステラーゼ　　　　　　４．５００
Ｕ／ｍ”黄コレステロールオキシグーゼ　　　　　　４
５０［］Ｕ／−”牛血清アルブミン　　　　　　　　　
　２．０　？／−２÷コレステロールエステラーセ、コ
レステロールオキシダーゼ及び牛血清アルブミンを水に
溶解し、凍結乾燥後微粉末化したものを添加して塗設。

表−７ 上記本発明の分析素子−１９〜２５並びに比較分析素子
−５に各種コレステロール濃度のヒト血清を１０μ！点
着し、３７℃で７分間インキュベーションを行った後、
５４６ｎｍのフィルターを用いて反射濃度を測定し、こ
の反射濃度と、ユニキットコレステロール−Ｋ　（中外
ｉ薬■製〕で検定したヒト血清のコレステロール値から
、あらかじめ検量線を作成した。

更にヒト血清の中から正常値（１８７■／ｄｔ）及び異
常値（５６２ｍｇ／ｄ／）のものを各々１０回点着し、
上記と同様の操作を行い、反射濃度分測定し、あらかじ
め作成した検量線に轟てはめてコレステロール濃度値を
算出した後、変動係数ｃｖ４を求めた。その結果、本発
明の分析素子−１９〜２５は比較分析素子−５に比し、
同時再現性が良好であることが確認された。

なお、比較分析素子−５では、分析素子（スライド）を
作成するため、小片に断裁する際に、試薬層と展開層の
間ではく離が認められたが、本発明の分析素子−１９〜
２５では全くはく離が認められず、良好な接着性を示し
た。

〔発明の効果〕

以上説明したように、本発明の分析素子では、試薬層と
多孔性展開１層の間の接着性が著しく改善され、それに
伴って測定精度（同時再現性）も大幅に改善されるとい
う顕著な効果が奏せられる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 光透過性かつ液体不浸透性の支持体上に少なくとも１つ
   の試薬層及び多孔性展開層を有する流体試料中の特定成
   分を分析するための分析素子において、前記試薬層と前
   記多孔性展開層との間に下記一般式 I 及びII： ▲数式、化学式、表等があります▼・・・〔 I 〕 〔式中、Ｒ＿１は低級アルキル基、ｘは２０〜９５モル
   ％、ｙは５〜８０モル％なる数を示す〕▲数式、化学式
   、表等があります▼・・・〔II〕 〔式中、Ｒ＿２は水素原子又はメチル基、Ｒ＿３はフェ
   ニル基、シアノ基又は式−ＣＯＯＲ＿４で表わされる基
   （式中Ｒ＿４は低級アルキル基を示す）、ｘ＿１は５０
   〜９５モル％、ｙ＿１は５〜５０モル％なる数を示す〕 で表わされる共重合体よりなる群から選択した少なくと
   も１種の共重合体を含む層を設けたことを特徴とする分
   析素子。