JPS63502798A - 乳頭腫ウイルス（ｈｐｖ）―３３のゲノムに由来するｄｎａ又はそのｄｎａ断片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 乳頭腫　イルス′ツムにＬ　し　ヌクレオチ゛　の・　したＤＮＡ断片、それら のｉｎ　ＶｉｔｒＯでの　゛よび糺巌ｌ旦豆ユ１ 本発明は、乳頭腫ウィルスゲノムに由来し、ヌクレオチド配列の決定したＤＮＡ 断片、特に、以下の方法によって、このＤＮＡ断片によって修飾した、各種ベク ターを含むＤＮＡ組換体に関する。その方法とは、これらのＤＮＡ組換体の複製 を可能にする適当な宿主細胞に導入されたとき、これらのＤＮＡ配列が対応する タンパクとなって発現し得るようなものである。さらに、本発明は、様々な免疫 性組成物を産生するために、ＩＩ製１ノで使用し得るタンパク自体にも関する。

なお更に、本発明は、ＩＰ−２と命名された乳頭腫ウィルス（現在では、ＨＰＶ −３３と命名）の様々なりＡＮ産物にも関する。これらのウィルスは、１９８５ 年１１月２９日、第８り１．４０２３６２．９号として出願された欧州特許出願 中に記載されているが、その内容は、本明細書に参考例として含まれている。こ のウィルスのＤＡＮを含むプラスミドの寄託は、第１−４５０号としてＣＮＣＭ （パリのパスツール研究所付属の［微住物培養物の国立寄託所（Ｃｏ１１ｅｃｔ ｉｏｎ　ｎａｔｉｏｎａｌｅ　ｄｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ｄｅ　Ｍｉｃｒｏ−Ｏｒ ｇａｎｉｓｍｅｓ）　Ｊ　）に行った。

乳頭腫ウィルスは、パボーバウイルス科に属しており、共有結合による閉環ＤＮ Ａ分子から成る約７，９００塩基対（ｂｐ）を有する。ヒト乳頭腫ウィルス（Ｈ ＰＶ）は、そのＤＮＡ配列の相同性を基準に分類され（６）、現在までに、約４ ０の型が記録されている。ＨＰＶに関する生物学的研究が著しく進み、それらが 関与するヒトの疾病が、分子生物学の様々な手法を応用して解明されている。性 器いぼの悪性転換から生じた腫瘍においてＨＰＶのＤＮＡが検出されたことから 、ヒトの癌にＨＰＶが関与している可能性が考えられた（３３）。さらに、子宮 頚癌から２種のＨＰＶゲ／ム、ＨＰＶ−１６＃Ｊ：ヒＨＰＶ−１８カクｒｌ−ニ ンクされたこと（３，１１）により、社会経済的に極めて重要なこの分野での研 究が一層刺激された。これらのウィルスは、検査した悪性性器腫瘍の７０％を越 えるものに見いだされており、その他、ＨＰＶ・−１６に関連性のあるヌクレオ チド配列が検出されたものも多い（３，１６，３３）。このヌクレオチド配列の 一つとして、最近、Ｍ縮怜の低下した条件ＦでプローブとしてＨＰＶ−１６を使 用して浸潤性子宮頚癌からクローニングされたトＩ　Ｐ　Ｖ　−３３を挙げるこ とができる（１）。本研究において、我々は、ＨＰＶ−３３のＤＮＡ配列を決定 し、ＨＰＶ−１６との関連を記載した。乳頭腫ウィルスの中では、ＨＰＶ−３３ は特異な存在であって、５ｖ４０のエンハンサ−と極めて類似性の高い７８ｂｐ の同方向反復（ｔａｎｄｅｉ　ｒｅｐｅａｔ）配列を有している（　４．１４　 ）。

本発明は、以降に開示する１−（ＰＶ−３３ゲノムのクローニング法Ｅｌづいて 行われたものである。この方法は、特定のＤＮＡ配列の同定を可能にするもので ある。更に、様々なハイブリダイゼーシヨン・プローブ、特に、ヒト組織中でＨ ＰＶ−３３に関連し−た乳頭腫ウィルスＤＮＡの検出に極めて有用な該プローブ を提供することができるＤＮＡ配列に基づいている。これらを用いて組織の陽性 反応を検出することによって、宿主における浸潤性子宮頚癌の発生の可能性を調 べることができる。

次に、各番号の付いた図面について説明する。

第１ａ図および第１ｂ図：ＨＰＶ−３３のヌクレオブト配列。

環状ゲノム上の１位は、ＨＰＶ−６ｂの配列中で見いだされるｒｔ−＋ｐａ様」 配列に相当する。

第２図：ＨＰＶ−３３ゲノムにおいて、主要なリーディングフレームの分布。各 リーディングフレームは、他のＨＰＶ配列との比較によって同定し、停止コドン は縦線で示した。単一の制限酵素切断部位（Ｓ、江Ｉ　：　Ｅ、　ＥｃｏＲＶ　 ：　Ｂ２　、江■；Ｂ１　、　ＢｏｌＩ）の位置、および転写の初期ならびに後 期に必要なポリアデニル化シグナル（ＰＡ）と思われるものの位置にも記号を付 けた。これらの他に、８６２．１２１５．１２２１．２６６６．５８３７、およ び６２３９の位置に６つの潜在的ＰＡ部位（ＡＡＴＡＡＡ＞を検出した。

第３図：非コード領域の基本的特性。７５００ないし１１４位の非コード領域の 一部を示す。７８ｂｐの同方向の反復配列の上に線を引き、ＳＶ４０エンハンサ −のＺ−ＤＮＡの形成因子に類似して星印を付し、１２ｂｐのパリンドロームの ３コピーは２列の点線で好ましい配列は、完全なタンパクをコードするものであ り、更に、第１表に挙げる読み取り枠を夫々有するヌクレオチド配列である。

ＤＮＡヌクレオチド配列の解析条件は、以下の［材料および方法Ｊ中に示す。こ の配列解析より得られた結論は以下の検討の欄に記載する。

材料および方法 ＤＮＡ配列解析二本研究でヌクレオチド配列の決定を行ったＨ　Ｐ　Ｖ　−３３ の出発材料は、ｐ１５−５（１）であり、これは、ｌ魁■で直線化したＨＰＶ− ３３ゲノムを１）ＢＲ３２２１導物ヘクローニングして構成されている。ランダ ムＤＮＡ断片（４００〜８００ｂｌ））のライブラリーは、従来から記載されて いる基本的な方法（２８）に従って、ｐ１５−５の超音波処理および末端修復し た後Ｍ１３■ｐ８内で作製した。ＤＮＡ塩基の配列決定は、ジデオキシチェーン ターミネータ−法（１９，２０）をＢｉｇｇｉｎらが改良した方法（２）によっ て実施した。殆どの配列は、この方法によって決定したが、非コード領域の一部 は欠落が認められたか、またはＭ１３ライブラリー（＞３００クローン）中では 充分に表現されていなかった。この領域のヌクレオチド配列は、５ｗ１ｔｈの方 法（２４）を用いて、ｐ１５−５から直接決定した。すなわち、２つの「相補的 」Ｍ１３クローンから単離した制限断片を使用し、制限酵素で直線化したのちエ キソヌクレアーゼ■で処３３ｐ　（２００単位／ｐｉｏｌＤＮＡで２２℃にて１ 時間）してｐ１５−５から調製した鋳型上でＤＮＡ合成を開始させた。

コンピューター　：　ＤＮＡヌクレオヂド配列を収集し、Ｂ。

Ｃａｕｄｒｏｎが修正した５ｔａｄｅｎのプログラム（２６，２７）を用いて解 析した。ＤＮＡの塩基またはタンパク質のアミノ酸の最適配列は、ｌ１ｉｌｂｕ ｒおよびＬｉｐｍａｎの開発した計算法（３１）を用いて得られた。

結果及び検討 ＨＰＶ−３３のｌ゛ツム　：　７９０９個のヌクレオグ・ドから成るＨＰ　Ｖ　 −３３の完全配°列は、Ｍ１３ショットガン法またはジブ第１シ法により決定し 、この結果を第１図に示す。平均で、各ヌクレオチド位を６．５回の配列測定に よって決定した。その他の乳頭腫ウィルスのヌクレオチド配列に於ける慣例に従 って、番号付は、非コード領域におけるｈＬＩＩの認識配列に類似した部位から 始めた。

ナンセンスコドンの分布（第２図）に関する解析によれば、その他の配列決定済 みのあらゆる乳頭腫ウィルスでの場合と同様に、８つの主要な読み取り枠は同− 鎖上に位置していることが分かる。ＨＰＶ−３３、およびＨＰＶ型１ａ、　６ｂ ならびに１６、ワタオウサギ乳頭腫ウィルス、および原型ウシ乳頭腫ウィルスの −ＢＰＶ−１、（５，７，８，１３，２１，２２）　ニ幾つかの共通の性質とし て、初期領域中の最大読み取り枠であるＥｌとＥｌ及びＥｌをコードする区域中 に含まれるＥ４との間に重複が存在する。興味深いことに、ＨＰＶ−３３の分子 クローニングで用いられるＢａ１Ｉ［部位は、ＥｌとＥｌの重複領域内に位置し ている。ＢＰＶ−１以外の全ての乳頭腫ウィルスに共通するもう１つの性質は、 に重複が存在することである。Ｌｌに続いて、８９２ｂＤ非コード領域が存在し 、これには、Ｂ　Ｐ　Ｖ　−１（１５，２９）から類推して、複製の起点および 多数の転写調節因子が確実に含まれる。ＨＰＶ　−３３ゲノムの基本特性を第１ 表に総括する。

Ｐ　Ｖ　−１６とのヌクレオチド配Ｊ比較：ＨＰＶ−１６は、肛門生殖器の１１ 瘍から単離され、そのヌクレオチド配列が完全に決定されている、ＨＰＶ−１６ 以外の唯一の発癌性乳頭腫ウィルスである（２２）。ＨＰ　Ｖ−３３とＨＰ　Ｖ 　−１６とでは、少者のＥ１リーディングフレームが途中で切断されている以外 、大概の性質は類似している。Ｅ５コード配列を除外して、ＨＰ　Ｖ　−３３中 のコード配列は、ＨＰ　Ｖ　−１６の各対応部分より若干短い。このために、Ｌ ｌとＥ６　（第２図）間での非コード領域が７６ｂｐだけ長くても、ゲノムのサ イズが一定に保たれている。

各読み取り枠を対にして比較する（第２表）と、Ｅｌ　、　Ｅｌ　。

Ｅ６．Ｅ７，１１およびＬ２は、その間の相同性が６５〜７５％であるが、Ｅ４ とＥ５との相同性はより発散している（約５０％の相同性）。これらの知見は、 従来行われたヘテロ二重鎮解析の結果と一致する　（１）。乳頭腫ウィルスＥ１ 遺伝子産物との比較研究（８）によれば、そのポリペプチドには、アミノ酸の可 変性が極めて高いＮ末端領域、および−泡構造の保存性が非常によいＣ末端領域 が含まれている。相同性を有する最長領域である３３個のヌクレオチド配列（１ ２７５〜１３０７位、第１図）が、上記ポリペプチドの可変領域をコードする領 域中のＥ１リーディングフレームの５゛末端近くに見いだされる。そのほか完全 に同一な領域（１９〜２８ヌクレオチド）の幾つかは、Ｅｌ　、Ｅｌ　、１２及 びＬ１中の別の場所に検出される。これらの配列は、ＨＰＶ−１ａおよびＨＰＶ −６ｂのような伯のＨＰＶのゲノム中には認めら在住の発癌病巣からの生検材料 をスクリーニングするための診断用ハイプリダイゼイションプローブとして使用 できる可能竹がある。

潜在的遺伝子産物：乳頭静ウィルスの遺伝子産物群は、純粋に構造的役割を果す と考えられているもの（ＬｌおよびＬ２）、およびウィルスの増殖と存続に必要 なものに分けられる。ＨＰＶ−３３，１６ならびに６ｂの主要リーディングフレ ームのから生じると見られる産物を比較した結果を第２表に総括する。予想どお り、特にここに呈示したＥｌ　、Ｅ６　、Ｅ７．１２ならびにＬ１タンパクに関 して、発癌性のｌ（Ｐ　Ｖ　−３３と１６との間に著しい同一性が認められる。

保存性の置換が含まれているとすれば、２つの１１ポリペプチド間の相同性は、 ９０％に増大し、対応するヤヤブシドは抗原性からみて関連があるに違いないこ とが示唆される。これとは対照的に、良性の性器いぼを形成するＨＰＶ−６ｂを 含めた広範な解析を実施すると、非常に低い相同性が検出された（第２表）。Ｈ ＰＶ−１６のタンパク群との比較を行った場合、ＨＰＶ−３３との比較より若干 高い相同性の存在がＨＰ　Ｖ　−６ｂで明らかになり、進化上より近い関係が示 唆された。

Ｌユニ上１！！：ＨＰｖ−３３の非コード領域を検討すると、ユニークな特性、 およびＨＰ　Ｖ　−１６の相当物に対して極めて弱い類似性を有することが分か る。後期転写産物に関する、Ｌ１停止コドンと推定ポリアデニル化シグナルを含 むコドンとの距離は、長さ２２３ｂｐ　（７０９７〜１３２０番、第１図）に相 当し、丁トＧ含量が以上に高い（７９％）。この領域内には、１９ｂｐ同方向反 復配列が２コピー（ミスマツチの１コピーとともに）、およびモチーフ配列ＴＴ ＧＴＲＴＲ（ここで、ＲはＡまたはＧ）が７コピー含まれる。後者は、ＨＰ　Ｖ 　−１６の対応領域にも７回見いだされるので、これは複製に関するタンパク群 の認識部位である可能性が示唆される。５ｐｖ−ｉゲノムでは、この領域に初期 の複製フォークが位置しく２９）、さらに、ニブシュタイン−バール・ウィルス では、複製の起点に反復配列群（３２）が存在することに着目しなければならな い。

最近、検索した全ての乳頭腫ウィルスの非コード領域のみに１２ｂｐのバリンド ーム構造（ＡＣＣＧ・・・・・・ＣＧＧＴ）の生じていることがＤａｒｔｍａｎ ｎらによって報告された（９）。３コピーがＨＰＶ−３３ゲノム中に見いだされ （第３図）、これらは、ＨＰＶ−１６の非コード領域中と同−位を占めている。

バリンドームの役割として、初期プロモーターの調節部位の可能性が提唱されて いる（４，９．１５）。そして、これは、ＨＰＶ−３３等のＨＰＶ群の非コード 領域が、プロモーターに特異的な活性因子Ｓｐ１に対する認識部位の集団配列を 示すものではないという我々の知見によってｒ１接的に支持される（１２）。こ れは、もう１つのバボーバウイルス、ＳＶ４０に於ける状況（１２，１４）と直 接的な対照を示すものである。

ＨＰ　Ｖ　−３３の最も顕著な特徴は、複製の推定領域後２００ｂｐの位置に完 全な７８ｂｐ同方向反復配列が存在することである（第３図）。その他の乳頭腫 ウィルスのゲノムにおいて、この秒の大きさまたは順序の反復配列を有するもの は、未だ記載されていない。ＨＰＶ−３３の初期プロモーターは、該反復配列の 下流的３００　ｂｐの位置に存在していると推定され、その特徴的なプロモータ ー因子を同定することができた（第３図）。ＨＰＶ−３３における７ａｂｐ同方 向反復配列の大きざ、位置、および配列順序から、それらがウィルス転写のエン ハンサ−として機能することが示唆される。７２．７３および６８ｂｐの同方向 反復配列は、ＳＶ４０の初期プロモーター近傍（４，１４）　、モロニーマウス 肉腫ウィルスのＬＴＲ中（１０）、およびＢＫウィルスゲノム中（２３）に位置 しており、これらは、シス活性様式で已虹■依存性プロモーターからの転写を促 進することが示された。５Ｖ４Ｇエンハンサ−の突然変異原性（１４，３０）　 、および特徴的な転写アクチベーターのヌクレオチド配列を比較することから、 エンハンサ−の共通ヌクレオチド配列が認められた。この構造は７８ｂｐ反復配 列中に検出されなかったが、潜在的Ｚ−ＤＮＡ形成領域が見いだされた。Ｚ−Ｄ ＮＡは調節分子を真核Ｉｌ胞のプロモーターに引きつけると考えられ、Ｚ　−Ｄ ＮＡ抗体の結合部位は５Ｖ４Ｇエンハンサ−中にあることが示された（１８）。

この抗体が結合する配列が、単一のミスマツチを伴うものの、ＨＰＶ−３３の推 定エンハンサ−中に見いだされた（　７５２０〜７５２７位、７５９９〜７６０ ６位、第１図、第３図）。

上記で提唱されたＨＰＶ−３３エンハンサ−には、特徴のよく分ったエンハンサ −１または他の乳頭腫・フィルス調節領域との広範な相同性はない。しかし、エ ンハンサ一様因子がＢＰＶ−１の非コード領域に位置すること、およびその因子 は活性化のためにＥ２産物を要求することが最近水された（２５）。これらの知 見から、７ａｂｐ同方向反復配列がエンハンサ−機能をｈするという我々の提唱 が支持され、そして、ＨＰ　Ｖ　−３３ならびにＨＰ　Ｖ　−１６のＥ２タンパ ク間の比較的低い相同性（第２表）は、対応するエンハンサ−／調節領域の特異 性を反映したものであるということが示される。

本明細書中で言及した第１表および第２表は以下の通りである。

第１表　ＨＰＶ−３３ゲノムの基本的特性Ｅ　６　７６　１０９　５５６　ＴＧ Ａ　１７，６３２Ｅ　７　５４３　５７３　８５４　ＴＡＡ　１０，８２５Ｅ　 １　８６７　８７９　２８１１　ＴＧＡ　７２，３８７Ｅ　２　２７２８　２７ ４９　３８０８　ＴＡＡ　４０，２０７Ｅ　４　３３２６　３５７５　ＴＡＧ　 ９，４５２Ｅ５　３８４２　４０７９　ＴＡＡ　９，３８５Ｌ２　４１９８　４ ２１０　５１６１　ＴＡＧ　５０，５３９Ｌｌ　５５１６　５５９４　７０９１ 　ＴＡＡ　５５，８３９ａ、　これが存在する最初のＡＴＧ、または読み取り枠 の開始点から計算した。

第２表　ＨＰＶタンパク８の比較 ＨＰ　Ｖ群 タンパク　３３　ｖ　１６　３３　ｖ　６ｂ　１６　ｖ　６ｂＥ　６　６５（７ ０）　３６（５１）　３７Ｅ　７　６１（６９）　５５（６０）　５６Ｅ　１　 ６Ｈ６９）　５０（６０）　５３Ｅ　２　５３（６５）　４６（５８）　４５Ｅ 　４　５２（５り）　３９（４６）　４８Ｅ　５　４０（５２）　３９（４３） 　３３ａ：（３１）のプログラムでの配列後、％相同性として表現。

括弧内の数値は、ヌクレオチド配列の相同性を％で表している。

本発明は、特に、Ｅ６　、　Ｅ７　、　Ｅｌ　、　Ｅ２　、　Ｅ４　、　Ｅ５　 。

Ｌ２．Ｌｌの読み取り枠に対応するヌクレオチド配列群にも関する。

また、本発明は、ハイブリダイゼーション・プローブとしての上記ヌクレオチド 配列、すなわち、他の乳頭腫ウィルス群の検出にも有用なもの、つまり、Ｌｌに 対応する読み取り枠の一部もしくは全部を含むプローブ、または、よりウィルス に特異的なプローブ、すなわち、それに対応する読み取り枠の一部もしくは全部 を含むプローブの使用法にも関する。

また、本発明は、乳頭腫ウィルスの亜群を検出するプローブ、特に、重篤な疾病 に関連し得るウィルス、つまり、ＨｔｔＡ関連ウィルスの検出用プローブにも関 する。該プローブの１例として、第１Ａ図、第１Ｂ図におけるヌクレオチドの配 列に従って、１２７５番と１３０７番との間に位置するヌクレオチド配列を含む ものを挙げることができる。

言うまでもなく、本発明は、標識が適当なラベル、すなわち、放射活性、酵素ま たは免疫蛍光ラベルで行われた場合のＦ記すべてのＤＮＡヌクレオヂド配列にも 関する。

ウィルスゲノム由来であって、および抗体がｍｌし得る化学基によって修飾され たヌクレオチドをｈするＤＮＡ群も本発明の一部を成している。周知のごとく、 この種のＤＮＡは、適切な修飾を行ったヌクレオチドの存在下、ニックトランス レージ１ンによって産生することができる。

これらのＤＮＡは、検索ずべき相補鎖を含むＤＡＮ調製物にハイブリダイズさせ るとき、上記の抗体によって検出し得るという点で極めて価値が高いハイブリダ イゼーションブローブである。

同様に、本発明は、診断法にも関する。以下、適切な方法の実例を挙げる。

数種のハイブリダイゼーション法を使用することができる。

例えば、スポットハイブリダイゼーション法は、ＤＮＡの変性後、ＤＮＡのアリ コートをフィルム支持体にトロセルロース、またはシーンスクリーンプラス）上 にスポットし、通常の条件下で該フィルムをプローブとハイブリダイズさせ、そ して、ハイブリダイゼーションの起きたフィルムを放射線写真用フィルムに接触 露出させることによって、放射活性のあるハイブリッドを検出する方法である。

もう１つの可能性として、制限酵素によるＤＮＡの処理から生じたＤＮＡ断片群 を７ガロースゲル電気泳動で分離し、アルカリ変性させた後、該断片群をフィル ムにトロセルロース、またはシーンスクリーンプラス）上に移し、そして、通常 条件下でプローブの様々な混合物とハイブリダイズさせる複製培養ハイブリダイ ゼーション法がある。放射活性のあるハイブリッドが形成したかは、ハイブリダ イゼーションの支持体フィルムを放射線写真用フィルム上に接触露出させて検出 する。

例えば、本発明のプローブは、病巣から採取した生検用細胞試料、またはカルノ ア（Ｃａｒｎｏｙ）液（エタノール、クロロホルム、酢酸−６：３：１）で固定 してパラフィン中に包埋した生検用組織試料から成る調製物中において、重要な ウィルス群（または、そのＤＮＡ群）の検出に用いることができる。

上記ヌクレオチド配列は、ベクターに挿入して修飾ベクターを作製し、これを適 当な細胞の宿主に導入した場合、転写を起こさせ、そして、適宜、１ＤＮＡヌク レオチド配列を対応のタンパクに翻訳させて宿主の細胞抽出物から該タンパクを 単離することができる。適当なベクター、特に、トランスフォーメーションを起 こす宿主に関連して適切なベクターを選択することは、当該技術分野の技術者に は周知の知識である。例えば、ベクターは、プラスミドまたはファージであって 、すでに認められている、これらに対応する原核細胞（または、酵母）中で複製 を起こす能力、およびそれらが有するＤＮＡヌクレオチド配列を発現させる能力 に従って選ばれる。

さらに、本発明は、先に定義した読み取り枠のどれか、またはそれらの一部に対 応するＤＮＡヌクレオチド配列からなる挿入片を含み、そして、真核細胞、特に 瀉血動物の細胞中での該挿入片の発現に適するような処理を行ったＤＮＡ組換体 にも関する。これに適したＤＮＡ組換体は、選択した細胞のポリメラーゼにｇ＊ されるウィルスまたは真核細胞のプロモーターの調節下に該挿入片を有し、そし て、更に、その挿入片の下流に適当なポリアデニル化部位を含む遺伝子構成物で ある。

−例として挙げるならば、本発明は、ＳＶ４０ウィルスのゲノムに由来するプロ モーターの調節下で上記読み取り枠のどれかを含むＤＮＡ組換体群にも関する。

そのようなりＮＡ組組体体群またはベクタ一群は、高等真核細胞、特に哺乳動物 の細胞（例えば、ＶｅｒＯ細胞）のトランスフォーメーションに使用することが できる。さらに、本発明は、このように同定したＤＮＡヌクレオチド配列の一部 であって、類似のベクターに挿入した場合、対応するタンパク部分をコードし得 るものにも関する。なお、このタンパク部分は、上記の完全なヌクレオチド配列 によってコードされたタンパクに類似した免疫的特性を有している。この類似し た免疫的特性は、関連する宿主から産生された、対応するポリペプチドの能力に よって認識し得る。この能力とは、先に上記の全ＤＮＡヌクレオチド配列を含む ベクターで前駅てトランスフオームした細胞の産生するタンパク群に対して形成 した抗体によって認識されるものである。

また当然のことながら、本発明は、上記のヌクレオチド配列を少なくとも部分的 に合成して得られるものと関連のあるいかなるヌクレオチド配列にも関する。な お、これらのヌクレオチド配列は、遺伝コードの制約内で変異し得るものであっ て、その程度は、修飾ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド配列 の実質的修飾を伴わないようなものとすることができる。

前記の考察から明らかなように、本発明は、前記の方法で得られる生成タンパク またはポリペプチドそれ自体にも関する。

これらのポリペプチドは、適当な宿主中で産生させる際、例えば、細胞壁を破壊 した後の細胞から得られるか、またはその細胞の培地中に分泌される場合はその 培地から得られる。これは、使用する細胞のＤＮＡ組換体系に応じて異なる。ざ らに、得られたポリペプチドは、通常の精製法によって精製することができる。

水明細めにおいて使用した「精製」とは、５Ｏ８−ＰＡＧＥで電気泳動を行った 際、精製タンパクが検出可能な単一バンドとなって現れる（例えば、ウェスタン 法）程度の精製レベルをいう。

例えば、大腸菌中で上記ＤＮＡ配列が発現した結果として得られたウィルスのタ ンパク、特に構造タンパクは、乳頭腫ウィルス感染の可能性がある患者の組織試 料中で検出し得る乳頭腫ウィルスに対する抗体のｉｎ　ｖｉｔｒｏ検出法に使用 することができる。

特に重要なのは、遺伝子工学的に得られる、ＬｌおよびＬ２読み取り枠から誘導 し得るペプチド配列を有するタンパク群である。興味あるもう１つのペプチドは 、Ｅ６　＊　（Ｅｆ３スター）タンパクである。このタンパクは、スプライング による誘尋で合成することができ、ＨＰ　Ｖ　−３３ヌクレオチド配列（詳細は 、第１図参照）の２２９番（ドナーサイト）と４０４番（アクセプターサイト） との間に位置するヌクレオチド配列によってコードされている。これらの部位は 、）−ＩＰＶ−３３のＥ６＊読み取り枠中の推定スプライシング部位を規定する ものである。そのようなタンパクの産生条件に関する引例として、５Ｃｈｎｅｉ ｄｅｒ−ＧａｒｄｉｃｋｅおよびＳｃｈｗａｒｔｚ、　［ｎ＋ｂｏ、　Ｊ、、５ ．２２８５−２２９２の文献を挙げることができる。

続いて、これらの精製ポリペプチドは、体液、特に患者の血清または組織培養液 中のウィルス由来ポリペプチドの存在をＤＶｉｔｒＯで診断し得る関連抗体の産 生に用いることができる。前記の例と同様に、本発明は、上記のポリペプチドの 一部、特に同一抗体によって認識されるもの、または、ｉｎ　ｖｉｔｒｏとは対 照的に、完全タンパクを認識する抗体の産生をｉｎ　ｖｉｖｏで生起させるもの にも関する。

当然、本発明は、前記の開示で特に言及したＤＡＮＡ域によってコードされる特 定のペプチドにも関する。そして、これらのペプチドは、極めて興味深く重要で あることが分っている。

さらに、本発明は、上記の様々なペプチドの発現を指示するヌクレオチド配列を 含むＤ　Ａ　Ｎ　Ｉｌｉ！７に体でトランスフォーメーションを起こし、そして 、適切な培地中で培養すればこれらのペプチドを効果的に産生じ得る宿主細胞に も関する。

特に最後の例として、本発明は、標準的な方法で前記のポリペプチドによって免 疫したウサギ等の動物、及び／またはいずれかの既Ｐ方法で前駅て調製したハイ ブリドーマから得られる抗体自体にも関する。特に興味深いのは、構造タンパク に対する抗体（ポリクローナルおよびモノクローナル抗体）である。

これらの抗体は、ウィルス感染の検出にｈ用である。ＨＰＶ−３３のＬｌ、Ｌ２ ｅよびＥ６＊タンパクに特異的な抗体は特に重要である。Ｌｌに特異的な抗体は 、ＨＰＶ−３３と類似し２タンパクをコードする配列を共有する特異的なウィル スの」ＬＶｉｔｒＯ検出の診断手段として用いることができる。Ｌｌに特異的な 抗体は、ＨＰＶ−３３が属するウィルス群の検出に有用である。Ｅ６＊タンパク に特異的な抗体は、前記のウィルス感染を引き起こすウィルス発癌性の検出にｍ ｍである。

なお、本発用は、非常に興味のある遺伝Ｔ間配列、特に７８ｂｐヌクレオチド配 列にも関する。この配列は、真核細胞のベクター、特に、プロモーターの上流域 、および一定部位の下流（特定の遺伝子またはヌクレオチド配列の転写を重要な 宿主中で開始するとき必要な領域）に挿入し得る断片として極めて興味深い。

本明細書中で引用した全ての文献は、参考文献として本明細書に組み入れられて いる。特に、これらの文献は、本明細書で用いられる様々な発現の定義に関して 、適宜参考にすることができる。従って、これらは本開示の一部を成す。

１、Ｂｅａｕｃｉｅｎｏｎ、Ｓ。

ＤＮＡ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｄａｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、　υＳ＾、旦Ω、３９６３−３９６５ ゜３、　Ｂｏｓｈａｒｔ、　Ｍ、、　Ｔａ、　Ｇｊ：ｓｓｍａｎｎ、　Ｈ，Ｘｋ ｅｎｂｕｘｑ、　ｋ、　Ｋｌｅｉｎｈｅｉｎｚ。

Ｗ、５ｃｈｅｕｒｌｅｎ、ａｎｄ　Ｈ，Ｚｕｒ　Ｈａｕｓｅｎ、１９８４゜Ａ　 ｎｅｗ　ｔｙｐａ　ｏｆ　ｐａｐｉｌｌｏｍａ−ｖｉｒｕｓ　ＤＮＡ、ｉｔｓ　 ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｉｎｇｅｎｉｔａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｉｏｐｓｉｅｓ　ａ ｎｄ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅｓ　ｄｅｚｉｖｅｄ　ｆｒｏｍｃｅｒｖｉｃａ ｌ　ｃａｎｃｅｒ。

ＥＭＢＯＪ、ユ、１１５１−１１５７゜４、Ｂｒｅａｔｈｎａｃｈ、Ｒ，ａｎｄ 　Ｐ、Ｃｈａｍｂｏｎ、１９８１゜Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐ ｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　５ｐｌｉｔ　ｇｅｎｅｓｃｏｄ ｉｎｇ　ｆｏｒ　ｐｚｏｔｅｉｎｓ。

Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｂｉｏｃｂｅｍ、シ；！、３４９−３８３゜５、　Ｃｈｅｎ、 　Ｙ、、Ｐ、Ｍ、　Ｈｏｗｌｅｙ、　Ａ、Ｄ、　Ｌｅｖｉｎｓｏｎ　ａｎｄ　Ｐ 、Ｍ、　Ｓｅｅｂｕｒｇ。

ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　（ＢＰＶ）　ｔｙｐｅ　１　ｇｅｎｏｍｅ。

Ｎａｔｕｒｅ　ｍ、５２９−５３４゜ ６、Ｃｏｇｇｉｎ、Ｊ、ｌ　ａｎｄ　Ｈ，Ｚｕｒ　Ｈａｕｓｅｎ、１９フ９゜Ｗ ｏｒｋｓｈｏｐ　ｏｎ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎｄ　ｃａｎｃ ｅｒ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、、３ｊｌ、５４５−５４６゜７、　Ｄａｎｏｓ、　Ｏ， 、Ｍ−Ｋａｔｉｎｋａ、　ａｎｄ　Ｍ、　Ｙａｎｉｖ、１９８２゜Ｈｕｍａｎ　 ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　１ａ　ＤＮＡ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　：　ａ　ｎ ｏｖｅｌ　ｔｙｐｅ　ｏｆｇｅｎｏｍｅ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ａｍｏｎ ｇ　ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａａ。

ＥＭＢＯＪ、ユ、２３１−２３６゜ ８、　Ｄａｎｏｓ、　Ｏ，、’Ｘ、　Ｇｉｒｉ、　Ｆ、　Ｔｈ１ｅｒｒｙ　ａｎ ｄ　Ｍ、　Ｙａｎｉｖ、　１９８４゜Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｇｅｎｏ ｍｅｓ　：　５ｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ。

Ｊ、Ｉｎｖｅｓｔｉｇ、　Ｄｅｒｍａｔｏｌ、　■、　７５−１１５゜９、　Ｄ ａｒｔｍａｎｎ、　Ｋ、、Ｅ、　Ｓｃｈｗａｒｚ、　Ｘａ、　にＧｉｓｓｍａｎ ｎ　ａｎｄ　Ｈ−ＺｕｒＦｌ＆ｕＳｅｎ、１９８５゜ 丁ｈｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｇｅｎｏｍｅ　ｏ ｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆｈｕｍａｎ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔ ｙｐｅ　１１゜Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、Ｉｎ　ｐｒｅｓｓ。

１０、Ｄｈａｒ、Ｒ，、Ｗ、Ｌ、ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ、Ｌ、Ｗ、Ｅｎｑｕｉｓ ｔ　ａｎｄ　Ｇ、Ｆ。

Ｖａｎｄｅ−Ｗｏｕｄｅ、１９８０゜ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｍｏ １ｏｎｅｙ　ｓａｒｃｏｍａｐｒｏｖｉｒｕｓ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　 ｒｅｐｅａｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｈｏｓｔ　ａｎｄｖｉｚａｌ　ｆｕｎｃ ｔｉｏｎｓ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ−Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　’：ｌＪ−、３９３７−３９ ４１゜１１、Ｄｕｒｓｔ、Ｍ、、Ｌ、Ｇｉｓｓｍａｎｎ、Ｈ，Ｉｋｅｎｂｕｒｇ 　ａｎｄ　Ｈ，Ｚｕｒ　Ｈａｕｓｅｎ１９８３゜ Ａ　ｎｅｗ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ＤＮＡ　ｆｒｏ ｍ　ａ　ｃｅｒｖｉｃａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒｅｖａｌ ｅｎｃｅ　ｉｎ　ｇｅｎｉｔａｌ　ｃａｎｃｅｒｂｉｏｐｓｉｅｓ　ｆｒｏｍ　 ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ　ｒｅｇｉｏｎｓ。

Ｐｘｏｃ、Ｎａｔｌ、入ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、旦Ｑ、３８１２−３８１５゜ １２、　Ｄｙｎａｎ、　Ｗ、Ｓ、　ａｎｄ　Ｒ，τ１ｊａｎ、１９８５゜Ｃｏｎ ｔｒｏｌ　ｏｆ　ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　５ｙｎ ｔｈｅｓｉｓ　ｂｙｓｅｑｕｅｎｃｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉ ｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ。

Ｎａｔｕｒｅ　Ｊｌｉｉ、７７４−７７８゜１３、Ｇｉｒｉ、Ｘ、、Ｏ，Ｄａｎ ｏｓ　ａｎｄ　Ｍ、Ｙａｎｉｖ、１９＋１５゜Ｇｅｎｏｍｉｃ　５ｔｒｕｃｔｕ ｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｔｔｏｎｔａｉｌ　ｒａｂｂｉｔ　（Ｓｈｏｐｅ）ｐ ａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、入ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、旦、Ｚ、１５８０−１５８４ ゜１４、Ｇｒｕｓｓ、Ｐ、、Ｒ，Ｄｈａｒ　ａｎｄ　Ｇ、Ｋｈｏｕｒｙ、１９８ １Ｓｉｍｉａｎ　ｖｉｒｕｓ　４０　ｔａｎｄｅｍ　ｒｅｐｅａｔｅｄ　５ｅｑ ｕｅｎｃｅｓ　ａｓ　ａｎｅｌｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｐｒｏ ｍｏｔｅｒ。

ＰＫＯＣ，Ｎａｔｌ、入ｅａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　２旦、９４３−９４７゜１５ 、Ｈｏｗｌｅｙ、Ｐ、Ｍ、、Ｙ、Ｃ，Ｙａｎｇ　ａｎｄ　Ｍ、Ｓ、Ｒａｂｓｏｎ 、１９８５゜Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｂｏｖｉｎ ｅ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｚｕｓｅｓ＋ｐｐ、６７Ｊ１　ｉｎ　Ｐ、Ｗ、Ｊ、 Ｒｉｇｂｙ　ａｎｄ　Ｎ、Ｍ、Ｗｉｌｋｉｅ　（ｅｄｓ）。

”Ｖｉｒｕｓｅｓ　ａｎ４　Ｃａｎｃｅｚ”、５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｇｅｎ ｅｒａｌ　Ｍｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ、　Ｊｕ、Ｃａｍ ｂｒｉｄｇｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｃｏｎｅｎ　ａｎｄ　Ｈ，Ｚｕｒ　Ｈａｕｓｅｎ、１９８４Ｈｕｍａｎ　Ｐａｐ ｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ−１６ｒｅｌａｔｅｄ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｇｅ ｎｉｔａｌＢｏｗｅｎ’ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ｉｎ　Ｂｏｗｅｎｏｉｄ 　ｐａｐｕｌｏｓｉｓ。

工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　、１２， ５６３−５６５゜ｉ７．Ｍｅｓｓｉｎｇ、Ｊ、ａｎｄ　Ｊ、Ｖｉｅｉｒａ、１９ ８２゜Ａ　ｎｅｗ　ｐａｉｒ　ｏｆ　Ｎ１３　ｖｅｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｓｅｌ 、ｅｃｔｉｎｇ　ｅｉｔｈｅｒ　ＤＮＡ５ｔｒａｎｄ　ｏｆ　ｄｏｕｂｌｅ　ｄ ｉｇｅｓｔ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ−Ｇｅｎｅ　ｊ、ｔ 、２６９−２７６゜ ＩＬ　Ｎｏｒｄｈｅｉｍ、入、ａｎｄ　Ａ、Ｒｌｃｈ、１９８３゜Ｚ−ＤＮＡ　 Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｈａｎｃｅｒ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　 ５ｕｐｅｒｃｏｉｌｅｄＳＶ４０゜ ｐｐ、　４５−５０．　ｉｎ　Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ　ａｎｄ　Ｅｕｋａｒｙｏｔ ｉｃ　Ｇａｎｇ　−Ｅｘｐｚｅｓｓｉｏｎ、　Ｃ０Ｉ（！　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａ ｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、　Ｃｏ１ｃ！　ＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、 Ｎ、Ｙ。

１９、Ｓａｎｇｅｒ、Ｆ、、Ｓ、Ｎ１ｃｌｃｅｎ、Ａ、Ｒ，Ｃｏｕｌｓｏｎ、１ ９７）。

ＤＮＡ、ａ＝ｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｃｈａ支ｎ　ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎ ｇ　１ｎｈｉｂｉｔｏｒｓ。

−Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　入ｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　１」１５４６３−５４６ ７゜２０、　Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、、　Ａ、　Ｒ，Ｃｏｕｌｓｏｎ、　Ｂ、Ｇ、 　Ｂａｒｒｅｌ、＾、Ｊ、Ｈ，Ｓｍ１ｔｈ。

Ｂ、Ａ、Ｒｏｅ、１９８０゜ Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｉｎ　ｓｉｎｇｌｅ　５ｔｚａｎｄｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐ ｈａｇｅ　ａｓ　ａｎ　ａｉｄ　ｔ。

ｒａｐｉｄ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ＋Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、　工ｕ、 １６１−１７８゜２１、　Ｓｃｈｗａｒｔｚ、　Ｅ、、　Ｍ、　ＤＣｌｉｓｔ、 　Ｃ，Ｄｅｍｅｎｋｏｗｓｋｉ、　Ｏ，Ｌａｔｔｅｒｍａｎｎ。

Ｒ，Ｚｅｃｈ、　Ｅ、　Ｗｏｌｆｓｐｅｒｇｅｒ、　Ｓ、　５ｕｈａｉ　ａｎｄ 　Ｈ，Ｚｕｒ　Ｈａｕｓｅｎ。

１９８３゜ ＤＮＡ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｇｅｎｏｍｅ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ 　ｏｆ　ｇａｎｉｔａｌ　ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ 　６ｂ。

ＥＭＢＯＪ、２．２３６１−２３６Ｌ ２２、５ｅｅｄｏｘｆ、　Ｋ、、　Ｇ、　ｉｃｚａｍｍｅｒ、　Ｍ、　Ｄｆｊｒ ｓｔ、　Ｓ、　５ｕｈａｉ　ａｎｄ　Ｍ、Ｇ。

Ｒｏｗｅｎｋａｍｐ、１９８５゜ Ｈｕｍａｎ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　１６　ＤＮＡ　５ｅｑ ｕｅｎｃｅ＋Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　黒、１８１−１８５゜２３、５ｅｉｆ、Ｘ、、 　Ｇ、　Ｋｈｏｕｒｙ　ａｎｄ　Ｒ，Ｄｈａｒ、１９７９゜Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍ ｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐａｐｏｖａｖｉｒｕｓ　ＢＫＶ。

Ｃｅ１ｌユ旦、９６３−９７７゜ ２４、Ｓｍ１ｔｈ、Ａ、Ｊ、Ｈ，１９７９゜Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｅｘｏｎｕ ｃｌｅａｓｅ　ＭＩＸ　ｆｏｒ　ｐｒｅｐａｒｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅｓｔｒａｎ ｄｅｄ　ＤＮＡ　ｆｏｒ　ｕｓｅ　ａｓ　ａ　ｔｅｍｐｌａｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ 　ｃｈａｉｎｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ。

２５、　５ｐａｌｈｏｌｚ、　Ｂ、Ａ、、　Ｙ、Ｃ，Ｙａｎｇ　ａｎｄ　Ｐ、Ｍ 、　Ｈｏｗｌｅｙ、１９８５゜丁ｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｂ ｏｖｉｎｅ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ−ｔｉｏｎａ ｌ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｅ２　ｇｅｎｅ　 ｐｒｏｄｕｃｔ。

Ｃｅ１ｌ　Ａ！、１８３−１９１゜ ２６．５ｔａｄｅｎ、Ｒ，１９７９゜ 入ｓｔｒａｔｅｇｙ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｅｍｐｌｏｙｉｎ ｇ　ｃｏｍｐｕｔｅｒｐｒｏｇｒａｍｓ。

Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄ！５　Ｒｅｓ、　五、２６０１−２６１０゜２７、　 ５ｔａｄｓｎ　Ｒ，１９８０゜Ａ　ｎｅｗ　ｃｏｍｐｕｔｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ　 ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｓｔｏｒａｇｅ　ａｎｄ　ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆ　Ｄ ＮＡ　ｇｅｌ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｄａｔａ。

Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　Ｊｌ、３６７３−３６９４゜２８、　 Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ、Ｓ、、Ｐ、　Ｓｏｎｉｇｏ、　Ｏ，Ｄａｎｏｓ、　Ｓ 、　Ｃｏｍｅ、　ａｎｄに、入１ｉｚｏｎ＋ １９８５゜ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＡＩＤＳ　ｖｉｒｕ ｓ、ＬＡＶ。

Ｃｅ１ｌ　Ａｆ２．９−１７゜ ２９、Ｗａ１４ｅｃｋ、Ｗ、、Ｆ、Ｒｏｓｌ、ａｎｄ　Ｈ，Ｚｅｎｔｇｒａｆ、 １９８４゜０ｒ１９１ｎ　ｏｆ　ｒｅｐｌｉｃａｔｘｏｎ　ｉｎ　ｅｐｌｓＯｍ ａｌ　ｂｏｖｉｎｅ　ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ　ｔｙｐｅ　Ｉ　ＤＮＡ　 １ｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ　ｃｅｌｌｇ。

ＥＭＢＯＪ、　ユ、２１７３−２１７８゜ｅｎｈａｎｃｅｒ＋ ５ｃｉｅｎｃｅ　ｚｕ、６２６−６３１゜３１、　Ｗｉｌｂｕｒ、　Ｗ、Ｊ、　 ａｎｄ　Ｄ、Ｊ、　Ｌｉｐｍａｎ、１９８３゜Ｒａｐｉｄ　５１ｍ１ｌａｒｉｔ ｙ　５ｅａｒｃｈｅｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅ ｉｎｄａｔａ　ｂａｎｋｓ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＥＡ　ｉＱ、７２６−７３０゜３２ 、Ｙａｔｅｓ、Ｊ＋、Ｎ、Ｗａｒｎｅｒ、Ｄ、Ｒｅｉｓｍａｎ　ａｎｄ　Ｂ−Ｓ ｕｇｄｅｎ＋　１９８４＋Ａ　劇１−ａｃｔｉｎｇ　ｅｌｅｍｅｎｔ　ｆｒｏｍ 　ｔｈｅ　Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ　ｖｉｒａｌｇｅｎｏｍｅ　ｔｈａｔ　ｐ ｅｒｍｉｔｓ　５ｔａｂｌｅ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉ ｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓ　ｉｎ　１ａｔｅｎｔｌｙ　１ｎｆｅｃｔｅｄ　ｃｅ ｌｌｇ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、ＳｃＬ、ＵＥＡ　ｉｉ、３８０６−３８１０゜ ＧＧＡＣＴＡＡＣＣＧＴＴＴＴＡＧＧＴＣＡＴＡＴＴににＴＣＡＴＴＴＡＴＡＡ ＴＣＴＴＴＴＡＴＡＴＡＡＴＡｊｌｌ；ＴＡＡＡＣＴＡＴＡ會會會會　豐會會慟 　雷豐會會 閏瞥謹審斡牛 □＾−１Ｐαｌ四８７１００１５８２ ＡＮＮＥＸ　Ｔｏ　ＴＨＥ　ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡｆ、５ＥＡＲＣＦ！　Ｒ ＥＰＯＲＴ　ｕＮ

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．．ＨＰＶ−３３のゲノムＤＮＡ由来であって読み取り枠から構成されており 、第１ａ図および第１ｂ図において、それぞれ７６〜５５６、５４３〜８６４、 ８６７〜２８１１、２７２８〜３８０８、３３２６〜３５７５、３８４２〜４０ ７９、４１９８〜５６１１及び５５１６〜８０９１というヌクレオチドの配列番 号で規定されるヌクレオチド末端間を占有する断片群から選ばれるＤＮＡ断片。
2. ２．ＨＰＶ−３３のゲノム由来であって、タンパク質をコードし、第１ａ図およ び第１ｂ図において、それぞれ１０９〜５５６、５７３〜８６４、８７９〜２８ １１、２７４９〜３８０８、３３２６〜３５７５、３８４２〜４０７９、４２１ ０〜５６１１及び５５９４〜７０９１というヌクレオチドの配列番号で規定され るヌクレオチド末端間を占有する断片群から選ばれるＤＮＡ断片。
3. ３．クローニングされた断片であって、請求の範囲１または２に記載の断片。
4. ４．宿主細胞、特に大腸菌等の細菌中において複製可能であって、外来ＤＮＡと 融合した請求の範囲１ないし３で定義したいずれかの断片を含む挿入片を含むＤ ＮＡ組換体。
5. ５．ベクターであって、前記挿入片が該ベクターと共に復製可能である、請求の 範囲４に記載のＤＮＡ組換体。
6. ６．請求の範囲５のベクターによってトランスフォームされ前記挿入片がその中 で発現されている宿主細胞から得られた精製ペプチド。
7. ７．請求の範囲６の精製ペプチドから成るペプチドに対する抗体。
8. ８．請求の範囲１ないし３のいずれか１つの断片を含むこと、または、請求の範 囲４または５のＤＮＡ組換体もしくはその一部から形成されることを特徴とする 、ウイルスＤＮＡ検出のためのＤＮＡ−ハイブリダイゼーション・プローブ。