JPS63501125A - ヒトレトロウイルス遺伝子を発現する組換えワクチニアウイルス - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 する組換えワクチニアウィルス 本発明の背景 技術分野 本発明は、ヒ）Ｔリンパ球指向性つィルスタイプ■（ＨＴＬＶ−ＩＭ）のエンベ ロープタンパク質の合成に関する。

さらに特に本発明は、ＨＴＬＶ−１１１エンベロープ遺伝子を発現することがで き、そして感受性宿主内でのエンベロープタンパク質に対する抗体を誘導するこ とができる組換えワクチニアウィルスに関する。

当該技術の状態 後天性免疫不全症候群（エイズ、ＡＩＤＳ）の病因は。

ＨＴＬＶ−１ｆｆと呼ばれるレトロウィルスであるとみとめられている。マウス レトロウィルスのエンベロープタンパク質は、マウスに保護的な免疫性を誘導し 得るということ頁（１９８１年）〕。工／ペローブタンバク質のための）１’ｌ ’ＬＶ−１１遺伝子（ｅｎｖ　）は、相対分子量（Ｍｒ）に換算して１２Ｑ００ ０（ｇｐ１２０）および４１，０００（ｇｐ４１）膜関連タンパク質に成熟する Ｍｒ１６ＱＯＯＯ（ｇｐ１６０）の前駆体をグリコジル化されて形成する約８６ ０個のアミノ酸からなる初期のポリペプチドヲ特定すると考えられている〔ワイ ン−４０巻：第９−１７頁（１９８５年）；サンチェッーベスヵ第５１３巻：第 ２２７−２８４頁（１９８５年）：ミュージング巻：第５９５−５９５頁（１９ ８５年）：ベロネース（Ｖｅｒｏｎｅｓｃ）（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌ 　ｉ、　Ｂ、ｃｏｌ　ｉ　）内で発現さ扛る〔クロウＡ、　（Ｃｒｏｗｌ　）等 、セル、第４１巻：第９７９−９８６頁（１９８５年）〕。大腸菌によシ合成さ ｎたポリペプチドは、免疫原性であるげれども、初期のウィルスタンパク質よす 小さく、そしてバクテリアによシグリコシル化もプロセスもなさｎていない。Ｈ ＴＬＶ−１［１ｅｎｖ遺伝子は、真核５Ｖ４０一時発現ベクター内にクローン化 さｎもしたが、しかし製造物は外来遺伝子を発現できる生きている組換え体を製 造するオティックベクター（ｏｔｉｃ　ｖｅｃｔｏｒ）系の間接免疫蛍光により てのみ特徴づけらｎる。ＤＮＡおよび几ＮＡウィルスの変種からの表面抗原遺伝 子は、組換えワクチニアウィルスによシ発現された〔バニカリ（Ｐａｎｉｃａｌ ｉ）等。

年）；バオレッテ（ＰａｏＪｅｔｔｉ）等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ　１　、　Ａｃａ ｄ、Ｓｃｉ。

第４５５−４５５頁（１９８５年）　：　りＶ　？　−（Ｃｒｅｍｅｒ）等。

サイエンス、第２２８巻二第７３７−７３９頁（１９８５年）〕。

適当に処理さｎｆｃ場合には、タンパク質は合成畑ｎ、プロセスさｎそして原形 質膜に移送される。ある場合には。

実験動物は中和抗体を産生じ、相当するウィルスの挑戦に対して保護さ扛る。細 胞毒性Ｔ細胞応答のブライミン／　（ｐｒｉｍｉｎｇ）の証拠もまたインフルエ ンザウィルス遺伝子を発現する組換えワクチニアウィルスでもって得らｎた。そ のような発展にもかかわらず、ワクチニアウィルスまたはその他のベクターによ る完全なＨＴＬＶ　−［１ｅｎｖ遺伝子のクローニングおよび発現は、こｎまで 達成嘔ｎていなかった。

発明の概要 完全）ＩＴＬＶ−ＩＩ［エンベロープ前躯体タンパク質ヲエンコードする遺伝子 を有する組換えプラスミドを提供することは１本発明の一つの目的である。

）１ＴＬＶ−１１エンベロープタンパク質全発現し得る組換えワクチニアウィル スを提供することは１本発明の他の目的である。ウィルスは好ましくは低温保存 さｆ′Ｌ得る。

その他のＨＴＬＶ−１ｌｌ遺伝子作用なしに、ｅｎｖポリペプチドの合成、プロ セシングおよび膜移送のための系を提供することは１本発明のさらに他の目的で ある。

う一つの目的である。

Ｈ’１’　Ｌ　Ｖエンベロープタンパク質に対する抗体を産生ずるように、思遺 伝子を有する有効量の組換えワクチニアウィルスを感受性宿主に与えることによ り、該宿主内に前記抗体を誘導することは１本発明のさらにもう一つの目的であ る。

組換えウィルスの増殖を維持する培養細胞からなる成長培地中で、不発明の組換 えワクチニアウィルスを増殖させ、セして該組換えウィルスによシ発現されたｅ ｎｖタンパク質を細胞および成長培地から回収する段階からなる）ｉ’Ｌ’ＬＶ −１［エンベロープタンパク質を生産する方法を提供することは１本発明のもう 一つの目的である。

七の他の目的および利点は１発明の詳細な説明が行われるにつれて明らかになる であろう。

図面の簡単な説明 本発明の上記のおよび七の他の目的、特徴および多くの不随した利点は、添付し た図面に関連した下記の詳細な説明を読むことによってよりよく理解でｎるであ ろう：第１図は、）ｉＴｆ、Ｖ−１１１エンベロープ遺伝子をワクチニアウィル ス内に挿入するために使用Ｉｎるブ２スミドｐｓＣ２５を製造するために用いら れる工程を略記する。

第２図は、ワクチニアウィルスｍ換え体によルＨＴｆ、Ｖ−１［１ｅｎｖ遺伝子 産物の発、ｔｔ示す。Ａ、ワクチニアウィルス組換え体で感染させた細胞からの ＨＴＬＶｅｎｖタンパク質のイムノプロット。標準ワクチニアウィルス（ＶＶ） またはワクチニア組換え体ウィルスｖ２５もしくはｖ２６の３０プラ一ク形成単 位（ｐｆｕ）で、Ｈ９またはヒーラ（ＨｅＬａ　）細胞を感染させ斥。感染後２ ４時間で細胞を果め、溶菌させ、セして８ＤＳ−ポリアクリルアミド（１０％） ゲル電気泳動を行った。ポリペプチドをニトロセルロース膜に移し、そして引き 続いてエイズ患者からの血清および　Ｉ−プロティンＡと一緒に培養し友。確か なｅｎｖタンパク質ｇｐ１６０、　ｇｐ１２０オ！ヒｇｌ）４１０位ｆｉｔｔ” 、　平行す列”ＰＯＨＴＬＶ−■−感染Ｈ９細胞溶醒物の電気泳動によシ決定し た。対照の未感染（ＵＩ）ｄ胞を同様の方法で処理した。Ｂ、（３１（）グルコ サミン−標識ＨＴＬＶ−１ｉｅｎｖタンパク質の免疫精製。

Ｈ９細胞を、ｖｖ、ｖ２５またはｖ２６で感染させ、そして〔３Ｈ〕グルコサミ ンで２ないし２４時間代減的に標識した。

細胞抽出物を最初に正常な供血者の血清と、セして次にプロティン−Ａセファロ ースと培養し、非特異的に結合する親和性を有するタンパク質を除去した。遠心 分離後。

上清をエイズ患者からの血清と、そして再びプロティンＡ−−ｔ＝ファロースト 培養した。タンパク質を該セファロースから溶出させ、５Ｄ８−ポリアクリルア ミド（１０％）グル上で分析し、そしてオートラジオグラフを行りた。

左側の列は、マーカータンパク質ヲ示ス。

第３図は、　）ｉＴＬＶ−１１１ｅｎｖタンパク質の合成およびプロセシングを 示す。野生型（ｖｖ）または組換えｖ２５ワクチニアウィルスでの感染２時間後 に、Ｈ９細胞をメチオニンを貧有しない培地中で１時間培養し、そして次いで〔 ８〕メチオニンで３０分間パルス標識した。細胞を次に過剰なメチオニン金含有 する培地中に、ａ、ｓ、ｚ２．ｓおよび５時間の間再懸濁した。免疫精製および ポリアクリルアミドゲル電気泳動を第２Ｂ図におけるように行りた。左側の列は 、マーカータンパク質を示す。

第４図は１組換えワクチニアウィルスで感染させたＨ９細胞の表面上のＨＴＬＶ −１［［ｅｎヱタンパク質の検出を示す。Ｈ９１１５胞を、５０　ｐｆｕ／ｃｅ ｌｌのｖ２５で１２時間培養させ、遠心分離によｐ集め、ホスフェート緩衝化生 理食塩水で３回洗浄し、そしてワクチニアウィルス感染Ｈ９細胞上に前もって吸 着させた患者の血清と共に３０分間培培誉た。ホスフェート緩衝化生理食塩水で 繰り返し洗浄後、細胞を複合ＦＩＴＣ−ヤギ抗−ヒ）ＩｇＧと共に培養し、そし て蛍光顕微鏡によシ調べた。

第５図は１組換えワクチニアウィルスでのマウスの免疫感作によるエンベロープ タンパク質に対する抗体の誘導を示す。Ｈ９細胞ｔ、）ｉＴＬＶ−１［で感染さ せ、そして（３５ｓ）メチオニン（パネルＡ）または（”）ｌ）グルコサミン（ パネルＢ）で標識する。細胞溶菌物を、エイズ患者からの血清と共に培養しく列 １）、インフルエンザ赤血球凝集素遺伝子（列２）またはＨＴＬＶ−１１１ｅｎ ｖ遺伝子（列３）を含有する１０　ｐｆｕ組換えワクチニアウィルスを内腹膜に 接種したマウスからの血清と共に培養した。抗体に対し特異的な親和性を有し、 そして七ｎらに結合さｎるタンパ９＊ｔ、プロティン人セファロースで免疫精製 し。

そして第２Ｂ図におけるようにポリアクリルアミドゲル電気泳動によシ分析した 。

発明の詳細な説明 本発明の上記のおよびその他の目的並びに利点は、ＨＴＬＶ−１［ｅｎｖタンパ ク［を発現できる新規なワクチニア組換えベクター、および前記組換えベクター による前記ｅｎｖタンパク質を生産する方法により達成される。

本発明は、ヒ）Ｔリンパ球指向性ウィルスタイプ■（）ＩＴＬＶ−１１１）　（ ７）エンベロープタンパク質を発現する遺伝子によ＃）特徴づけらｎる組換えワ クチニアウィルスに係る。前記ウィルスを感受性宿主に免疫感作有効量で与えた 場合に、）ＩＴＬＶ−１１１エンベロープタンパク質に対スる特異的親和性を有 する抗体ｔＷ＆ｉ性宿主内に誘導できるようなウィルスは、特に興味深い、そし て前記エンベロープタンパク質は、ＨＴＬＶ−１１１感染された患者から得られ た血清によシ認められることができる。前記ウィルスは。

好ましくは低温保存さｎ得る。本発明に１組換えウィルスの増殖を維持する陪賓 細胞を含む培地中で、）ＩＴＬＶ−■エンベロープタンパク質の発現のための遺 伝子を有する組換えワクチニアウィルス全増殖させ、そして該ウィルスに！　ｂ ’Ａ現さｎたＨＴＬＶ−１［エンベロープタンパク質をそれらの培養細胞または 培地から回収することによりＨＴＬＶ−１エンベロープタンパク質を生産する方 法にも係る。本発明紘さらに、前記工程によシ生産されたエンベロープタンパク 質にも係る。

特別に限定しない限シ１本明細書内で使用さｎる科学的または技術的な全ての用 語は、本発明が属する分野におσる通常の技術者の１人に一般に理解さｎるのと 同一な意味を有する。下記の全ての刊行物は、参照によシ本明細曹に編入さｎる 。

本明細書内に記載さｎた方法および材′＃＋は、好ましい実施態様のみであシ、 セして当該分野において公知のあらゆる類似か、または同等の方法および材料を １本発明の実施において、またはここに記載された試験のために容易に応用し得 、および／または使用し得ることは％特記さｎる。

不明ｌａ書内で使用されるような用語「組換え体」は、受容体ゲノム内の全体ま たは一部に結合した外来遺伝子を有する遺伝的実体を意味する。本発明の施用に おけるそのような組換え体の実体は１例えばそのゲノム（ＤＮＡ）内に一部また は全体のｅｎｖ−ファクター（遺伝子）が挿入さｎ７ＩＣプラスミドである。こ の例において、プラスミドＤＮＡは受容体ゲノムを供給し、そして挿入さｎたｅ ｎｖファクターは、外来遺伝子である。

組換えウィルスは、下記のように製造し得る。まず敢初に、ワクチニアウィルス の断片を適当なベクター、好ましくはプラスミド内に挿入する。ＨＴＬＶ−１［ ［ｅｎｖ遺伝子のＬ）ＮＡ複製物ヲ、該プラスミド内に、ワクチニアウィルスプ ロモーター配列の制御の下で挿入し、そしてワクチニアウィルス配列によシフラ ンク（ｆｌａｎｋ）する。細胞をワクチニアウィルスで感染させ、そして該感染 細胞を組換えプラスミドで形質転換させる。プラスミドＤＮＡおよびワクチニア ウィルスＤＮＡの相同組換えによシ結果としニアウィルスタンパク質ｔしばしば 破壊するか、または先端部を切断し、それによりワクチニアウィルスの機能を変 えるために、組換えワクチニアウィルスは、この変更された機能に基づいて野生 型から選択可能である〔チャクラバルチ（Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ）等、　Ｍｏ ｌ、Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ　、第５巻：第５４０５−５４０９頁（１９８５年）〕 。

ワワクチニアウィルスＷＲ株）をヒーラ細胞中増殖させ。

第１８巻二第９−１８頁（１９６２年）に記載の標準法に従って／シ日糖密度勾 配遠心分離によシ細胞質抽出物から精製し次。

７５巻：第４８６５−４８６７頁（１９７８年）に記載されるように、ＤＮＡＩ 精製したワクチニアウィルスから分離した。

変更したアルカリ−ナトリウムドデシルスルフェート大腸萌プラスミドＤＮＡ　 ｉ調製した。ここで溶菌段階からりゾチームを省略し、そしてＤＮＡ　’ｉセフ ァロースー４Ｂカラムを通す一段階によシＲＮＡから精製した。ＤＥＡＥ紙上で のエレクトロブロッティングによシアガロースゲルから、ＤＮＡ断片ｔ−！＃製 した〔ウィンバーｆ　（Ｗｉｎｂｅｒｇ）等。

第２７７−２８４貞（１９８５年）〕から切シ出し、Ｔ４ＤＮＡ年）〕。ＤＮＡ ポリメラーゼのフレノウ断片およびデオキシリボヌクレオシドトリホスフェート でブランド末端を形成し、そしてプラスミドＩＴ４ＤＮＡリガーゼで再環化し、 そして大腸菌を形質転換する友めに使用した。個々のコロニーからのプラスミド を配列決定し、　ｅｎｖ遺伝子の上流に残りているヌクレオチドの数を決定した 。全体５・４０３−３４０９頁（ｆ９８５年）〕、各々０または７０ｂｐのｅｎ ｖリーダー配列を有するｐｓｃ　２５およびｐｓｃ２６を形成した。両方ともチ ミジンキナーゼ陰性でβ−ガラクトシダーゼ陽性である組換えワクチニアウィル スｖ２５　およびｖ２６は、各ｋ　ｐｓｃ　２５およびｐｓｃ　２６　ｆ用いる 相同組換えによシ形成された。

上記のように、推定上の翻訳開始コドンの０または７０　ｂｐ上流で始まる全体 のＨＴＬＶ−［１ｅｎｖ遺伝子全含有するＬＩＮＡセグメンＩｆ分離し、そして ｐｓｃｌｌのＳｍａ　１部位に押入して、チャクパルチ等、　Ｍｏｌ、Ｃｅ１１ ．Ｂｉｏｌ、、第５巻：第５４０５−５４０９頁（１９８５年）に記載の方法に 従ってｅｎｖ−ワクチニア組換え体を得た。プラスミドベクターは下記の重要な 特徴を有する：　Ｓｍａ　１部位の少し上流に初期および後期の転写信号を有す るワクチニアウィルスプロモーター；後期ワクチニアウィルスプロモーターの調 節下のＥ、ｃｏｌｉ　１ａｃＺ道伝子；および左半分２よび右半分のワクチニア ウィルスチミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子を官有するフランキング（ｆ　ｌ　ａ ｎｋ　ｉｎｇ）　ＤＮＡ、ワクチニアウィルスで感染させたトランスフェクショ ンする細胞によシ、別々のワクチニアウィルスプロモーターの制御下にあるＨＴ ＬＶ−ｍｅｎｖ遺伝子およびＥ、ｃｏｌ　ｉ　１ａｃＺ遺伝子は。

ワクチニアウィルスゲノムのＴＫ座位内への相同組換えによシ同時に導入さｎた 。組換えウイルスブシークは。

七ｎらのＴＫ−表現型によシ選択され、ｔしてアガロースオーバレイへの指示薬 の添加でのβ−ガラクトシダーゼの発現による濃い青色の形成によシ同定さｎた 。

ｅｎｖ遺伝子を有する組換えワクチニアウィルスｖ２５（ＶＳＣ２５）の寄託は 、アメリカ合衆国、マリ−ランド。

ロックビル、パークロラン　ドライブ１２１０１のアメリカン　タイプ　カルチ ャー　コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅ ｃｔｉｏｎ　（ＡＴＣＣ））に１９８６年５月２７日、受託番号ＶＲ２１３０の 下で行った。特許が係属している場合、寄託は少なくとも６０年間は維持さｎ続 けるであろ５．−ｔしてもちろん法律の規定に従りて制限なしに一般に利用さｎ るであろう。

タンパク質合成： ｍ換えワクチニアウィルスｖ２５およびｖ２６で感染させた細胞の溶菌物のポリ アクリルアミドゲル電気泳動により、ＨＴＬＶ−ｌｅｎヱタンパク質の合成を示 した。こｎらのウィルスは、）ｉ’ｌ’ＬＶ−１１１μＭ選伝子の非翻訳リーダ ー配列の長さの４が異なる。発現さ′ｆした（合成さ扛た）ポリペプチド線、当 該技術分野において十分に公知のあらゆる標準法１例えはクロマトグラフィー、 電気泳動および類似法により培養培地から分離さｎる力為または回収し得る。

離れたポリペプチドの試料をニトロセルロースに移し。

そして引き続いてエイズ、叡者からの血清および　■−プロティンＡと培養した 。Ｈ９細胞を感染のために使用し７′ｃ４合、オートラジオグラフィーによりｉ 出さｎた３つの主バンドは、確かなｇｐ１６０．ｇｐ１２０２よびｇｐ４１と一 緒にｙ動し７’Ｃ（第２Ａ図）。こｎらのポリペプチドは。

未感染の細胞または標準ワクチニアウィルスで感染させｆｃ細胞のいずれの溶菌 物にも検出されなかりた。ヒーラ細胞（第２Ａ図）またはｅＶ−１細胞（図示せ ず）を組換えワクチニアウィルスｖ２５で感染させた場合、ｇｐ１６０およびｇ ｐ４１に相当するバンドは検出さｆ′したが、　ｇｐ１２０に相当するバンドは 検出さ′ｎなかりた。外見上Ｍｒ約１００．０００のものと一緒に移動する。お よび多分ｇｐ１２０の劣化しｆｃまたは不完全グリコジル化形態を示すマイナー バンドが観察δｎた（第２Ａ図）。更に研、究すると組換えワクチニアウィルス で感染させたＮＩＨ３，Ｔ３細胞においてもｇｐｘ２ｏが形成されたということ が示されたのでｇｐ１２０の形成は、リンパ球例えばＨＴＬＶ−ｍの複製をさせ るＨ８細胞に対して特異的ではない。全ての４つノ細胞系にｖ２５に任意だり穴 やら、ワクチニアウィルスの複製が決定因子であるか明らかでない。

円に約２０の浩在的なヘーグリコフル化部位がある。組換えワクチニアウィルス によシ合成さｎｆｃＨＴＬシー■ポリペプチドのグリコジル化を示すために、感 染）１９ＭＢ胞を〔３Ｈ〕グルコサミンで代謝的に標識し、そしてタンパク質を エイズ患者からの血清と培養し１次いでプロティンＡセファロースに結合させた 。ポリアクリルアミドゲルのオートラジオグラフ（第２Ｂ）は、　ｇｐ１６０． 　ｇｐ１２０およびｇｐ４１に相当するグリコジル化ポリペプチドが免疫精製さ れたことを示す。Ｍｒ約８へ０００の付加的なグリコジル化ポリペプチドも検出 された。このポリペプチドの性質は、確認さｎなかりた。

ｅｎｖタンパク質の合成およびプロセシングを決定するために％Ｈ９Ｈ９細胞換 えまたは標準ワクチニアウィルスで′感染させ、〔Ｓ〕メチオニンで３０分間パ ルス標識し、（″して次に過剰な非標識メチオニンで追跡した。細胞溶菌物から の標識タンパク質をエイズ患者からの血清ト培養し、プロティンＡセファロース に結合し、＋ニジてポリアクリルアミドゲル電気泳動によシ分析した。オートラ ジオグラフは、標準２よび組換えウィルス感染細胞の両方に共通な多くのバック グラウンドバンドｔ−［した（第３図）。しかしながら、パルス期間の間にほと んど標識さｎたバンドは、組換えウィルス感染細胞に特異的で、セしてｇｐ１６ ０の大きさに相当するものだった。ｇｐ１６０の速い標識および非グリコジル化 Ｍｒ９０，０００の主生成物の明らかな不在は１合成とグリコキフル化が密接に 関連した事柄であることを示す。追跡期間の間、　ｇｐ１６０バンドは強度が弱 くなり、一方ｇｐ１２０およびｇｐ４１に相当するバンドは、前駆体−生成物の 関係に一致して増加した。

）ＩＴＬＶ−１１１が感染細胞の表面から成長し始めてから。

ｅｎｖタンパク質を原形質膜内に挿入する。間接免疫蛍光を用いて、ＨＴＬＶ− ［１ｅｎｖポリペプチドの表面移送も組換えワクチニアウィルスで感染させた細 胞内で起こっていることを示した（第４図）。この実験のために使用さｎ次エイ ズ血清は、ワクチニアウィルス感染Ｈ９細胞に予め吸着させ、そして認識できる 免疫蛍光は、未感染のまたはワクチニアウィルス感染Ｈ９，ｌｄｌ胞のいずｎに おいても検出さｎなかりた（データは示していない）、。

独立したウィルス分離体のｅｎｖ遺伝子内には配列変異体があるから〔ラットナ −（Ｒａｔｎｅｒ）等、ネーチャー、第３１３巻：第６５６−６５７頁（１９８ ５年）：べｙ　（Ｂｅｎｎ）等。

り質が梅々のエイズ患者からの血清と反応するかどうかを決定することは、ｌ要 だった。第２Ｂ図におけるものと同様な試験を用いると、〔Ｈ〕グルコサミン− 標識ｇｐ１６０およびｇｐ１２０は、６人の非関連性エイズ患者からの血清と特 異的に結合する親和性を有するが、２人の正常なボランティアからの血清とは有 しないということが解った。ｇｐ４１に相当する強いバンドもエイズ患者の血清 で得らｆ′した。しかしながら、同じ位置にかすかなバンドもまた正常な血清で 観察さｎた。

中和抗体を引き出すエピトープはｇｐ１２０に存在し七うであるから％ＨＴＬＶ −［１１ｅｎｖ遺伝子またはインフルエンルスをマウスに接種した。実験および 対照血清を次に。

（３５８）メチオニンｔたは〔３Ｈ〕グルコサミンで代謝的に標識した）ｉＴＬ −Ｖ−！Ｉｔ感染感染側９細胞菌物と一緒に培養した。

ＨＴＬＶ−１１ｅｎｖ組換え体を接種したマウスからの血清のみでのｇｐ　１２ ０の免疫吸着により、抗体の誘導が示された。

この結果は明らかに、組換えワクチニアウィルスがＨＴＬＶ−１１１ｅｎｖタン パク質を合成し、プロセシングし、そしてその他のレトロウィルス遺伝子の発現 なしに原形質膜に移送することを示す。全ての点で１組換えワクチニアウィルス により合成された■タンパク質は、確かなＨＴＬＶ−１１１タンパク質と区別で きなかった。こｎは、組換えＤＮＡ方法による完全な本来の）ｉＴＬＶ−［１μ ワータンパク質の１／！ｍの最初の実証である。作られた）ｉＴＬＶ−１１１μ Ｍタンパク質にはその他の）ｉＴＬ、Ｖ−１１１タンパク質がないから。

タンパク質をエイズに対する免疫的予防のために使用し得るかどうかを試験する ことが今可能である。

本明細簀に記載し７を実施例および実施態様は、説明の目的だけのためであるこ と、そしてそれらを考慮して種々の変更または変化は、当業者にとって考えらｎ 、セして七ｎらは本出願の精神および範囲内におよび添付した精求の範囲内に含 まれるべきことを、理解すべきである。

国際調査報告

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. １．ヒトＴリンパ球指向性ウイルスタイプＩＩＩ（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ）のエンペ ロープタンパク質を発現する遺伝子からなることを特徴とする組換えワクチニア ウイルス。
2. ２．低温保存されることをさらに特徴とする請求の範囲第１項記載のウイルス。
3. ３．感受性宿主に免疫感作するための有効量で組換えワクチニアウイルスを該宿 主に与えた場合に、ＨＴＬＶ−ＩＩＩエンペロープタンパク質に対する特異的親 和性を有する抗体を該宿主内に誘導できることをさらに特徴とする請求の範囲第 １項記載のウイルス。
4. ４．前記エンペロープタンパク質は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ感染された患者から得ら れた血清により認められることができることをさらに特徴とする請求の範囲第１ 項記載のウイルス。
5. ５．ＡＴＣＣＶＲ２１３０の特徴を有することをさらに特徴とする請求の範囲第 １項記載のウイルス。
6. ６．組換えウイルスの増殖を維持する培養細胞を含有する培地中で、ＨＴＬＶ− ＩＩＩエンペロープタンパク質の発現のための遺伝子を有する組換えワクチニア ウイルスを増殖させ、そして該ウイルスにより発現されたＨＴＬＶ−ＩＩＩエン ペロープタンパク質を前記培養細胞または培地から回収することを特徴とするＨ ＴＬＶ−ＩＩＩエンペロープタンパク質を産生する方法。
7. ７．請求の範囲第６項記載の方法により産生されたＨＴＬＶ−ＩＩＩエンペロー プタンパク質。