JPS6345223A - ひと免疫不全ウイルス性疾患処置剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ この発明はレトロウィルス感染により生ずる疾曵の予防
、治療等に有用な医薬（動物薬を含む）に関するもので
ある。

［要約］ この発明は、糖構成炭素原子上に低分子量の連結基を介
して少なくとも１９１のＳ−オキソ酸基が結合している
天１体もしくは合成少ｖＩ類もしくは多糖類またはそれ
らの塩類を有効成分として含有する医薬または動物薬を
提供するものである。上記医薬または動物薬は、レトロ
ウィルスによろ吹気、特にエイズ（ＡＩＤＳ、後天性免
疫不全症候ｎ）、ＡＲＣ（エイズ関連コンプレックス）
、Ｐ　Ｇ　Ｌ　（進行性一般リンパ腺症）、ＬＡＳ（リ
ンフォアデノパシー症候群）の予防及び治療、および無
症状エイズウィルス保有者の発病阻止に対して有効であ
る。

［背景技術および発明の経緯］ レトロウィルスは、ＲＮＡと逆転写酵素（ＲＮＡ依存性
ＤＮＡポリメラーゼ）をもち、逆転写酵素のはたらきに
よりＲＮＡを鋳型としてＤ　Ｎ　Ａを合成することを自
己複製の第一段階とするウィルスである。レトロウィル
スには、とり白血病ウィルス（ａｖｉａｎ　　ｌｅｕｋ
ｅｍｉａ　　ｖｉｒｕｓ）、とり肉腫ウィルス（ａｖｉ
ａｎ　　ｓａｒｃｏｍａ　　ｖｉｒｕｓ）、とり細網肉
皮種層ウィルス（ａｖｉａｎ　　ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎ
ｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ　　ｖｉｒｕｓ）、マウス乳が
んウィルス（＋ｕｒｉｎｅ　　ｍａｍｍａｒｙ　　ｃａ
ｎｃｅｒｖｉｒｕｓ）、マウス白血病ウィルス（ｍｕｒ
ｉｎｅ　　Ｉｅｕｋｅｍｉａ　　ｖｉｒｕｓ）、マウス
肉腫ウィルス（ｍｕｒｉａｅ　　ｓａｒｃｏｍａ　　ｖ
ｉｒｕｓ）、モルモットタイプＣウィルス（ｇｕｉｎｅ
ａ　　ｐｉｇ　　ｔｙｐｅ　　Ｃｖｉｒｕｓ）、ハムス
タータイプＣウィルス（ｈａａ＋５ｔｅｒ　　ｔｙｐｅ
　　Ｃｖｉｒｕｓ）、ラット白血病ウィルス（ｒａｔ　
　ｌｅｕｋｅｍｉａ　　ｖｉｒｕｓ）、ねこ白血病ウィ
ルス（ｒｅｌｉｎｅ　　ｌｅｕｋｅｍｉａ　、ｖｉｒｕ
ｓ）、ねこ肉腫ウィルス（ｆｅｌｉｎｅ　　ｓａｒｃｏ
ｍａ　　ｖｉｒｕｓ）、ねこタイプＣウィルス（ｒｅｌ
ｉｎｅ　　ｔｙｐｅ　　Ｃｖｉｒｕｓ）、ひつじ白血病
ウィルス（ｏｖｉｎｅ　　ｌｅｕｋｅｍｉａ　　ｖｉｒ
ｕｓ）、うし白血病ウィルス（ｂｏｖｉｎｅ　　ｌｅｕ
ｋｅｍｉａ　　ｖｉｒｕｓ）、ぶたタイプＣウィルス（
ｓｗｉｎｅ　　ｔｙｐｅ　　Ｃｖｉｒｕｓ）、さる白血
病ウィルス（ｓｉｍｉａｎ　　ｌｅｕｋｅｍｉａ　　ｖ
ｉｒｕｓ）、メイソンーフィツァーウイルス（Ｍａｓｏ
ｎ　−Ｐ　ｆｉｚｅｒｖｉｒｕｓ）、さる肉腫ウィルス
（ｓｉｍｉａｎ　　５ａｒｃｏ＋ａａｖｉｒｕｓ）、さ
る１９２６球し好性ウィルス（ｓｉｍｉａｎＴ−１ｙｍ
ｐｈｏｔｒｏｐｉｃ　　ｖｉｒｕｓ）、ひひタイプＣウ
ィルス（ｂａｂｏｏｎ　　ｔｙｐｅ　　Ｃｖｉｒｕｓ）
、等のような多種類のかんまたは肉腫の原因となるウィ
ルスが含まれ、ひとでは重要なのは成人Ｔリンパ球し好
性ウィルス（ＡＴＬＶ）またはひと１９２６球し好性ウ
ィルスＩ型（ＨＴＬＶ−１）および■型（ＨＴＬＶ−１
１）が知られる。成人Ｔ細胞白血病は、日本、特に西日
本に多く、発病後の治療法は確立されていない。　一方
、レトロウィルスで腫瘍性をもたないものとして、ひつ
じの脱髄性神経炎ウィルス（ｖｉｓｎａ　　ｖｉｒｕｓ
）、ひつじ進行性間質肺炎ウィルス（ｏｖｉｎｅ　　ｐ
ｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ　　ｖｉ
ｒｕｓ）、ひつじマエデイウイルス（ｏｖｉｎｅ　　ｍ
ａｅｄｉ　　ｖｉｒｕｓ）、さる１９２６球し好性ウィ
ルス■型（ＳＴＬＶ−ＩＩＩ）、うま伝染性貧血症ウィ
ルス（ｅｑｕｉｎｅ　　ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍ
ｉａ　　ｖｉｒｕｓ）などが知られ、ひとでは、エイズ
、ＡＲＣｌＰＧＬ、ＬＡＳの病因ウィルス（ＨＴＬＶ−
ＩＩＩ、ＬＡＶ　１．ＬＡＶ２、ＡＲＶなどのいわゆる
エイズウィルス）がこれに属する。最近では、エイズ原
因ウィルスＩ（ＩＶ類（ひと免疫不全ウィルス）と呼ば
れている。また、第３の亜科としてさるフォーミングウ
ィルス（ｓｉｍｉａｎ　　ｆｏａｍｉｎｇ　　ｖｉｒｕ
ｓ）の属するスブマウイルス亜科が知られる。また川崎
病の原因ウィルスとしてレトロウィルスが単離された。

エイズは、予後不良の免疫不全症として注目を集めてい
る疾病であって、カリニ肺炎、カボシ肉腫などの臨床像
を特徴とし、免疫応答能が破壊されることにより９０％
以上の高死亡率を招くことが知られている。また、ヘル
パーＴ細胞が特異的に感染破壊されることも知られてい
る。さらに、エイズウィルスに関連する状態には無症状
のキャリアー状態、進行性一般リンパ腺症（ＰＧＬ）、
リンフォアデノパシー症候群（ＬＡＳ）及びエイズ関連
コンプレックス（ＡＲＣ）がある。

この発明者は、エイズ、ＡＲＣｌＰＧＬＳＬＡＳ、エイ
ズウィルス保有症等のエイズウィルス性疾患の予防及び
治療に有効な薬剤を見出すため、成人Ｔ細胞白血病患者
のＴ細胞から樹立された株化細胞ＭＴ４にエイズウィル
スであるＨＴＬＶ−ｍを感染させ、その際種々の物質を
存在さけて、効果を調べた。上記ＭＴ−４細胞株は、Ｈ
Ｔ　Ｌ　Ｖ−ＩＩＩにより１００％感染が成立し、感染
後に細胞破壊が起ることが知られている。ところが、種
々の物質を用いて実験してみると、スルホネート基を有
する多糖類またはムコ多糖類もしくはその硫酸化物を上
記実験的ＨＴＬＶ−ＩＩ［感染系に加えると、細胞障害
を招くことなしにＭＴ−４細胞に対するＨＴＬＶ−Ｉ［
１の感染とウィルスの増殖が強く抑制されろことを見出
した。さらに、上記多糖が、エイズウィルスを含めたレ
トロウィルスの感染及び増殖に必要な逆転写酵素活性を
阻害し、それによってウィルスの増殖を抑制することを
見出した。

［先行技術］ 多糖類の硫酸エステルのうち、低分子量のデキストラン
硫酸は、抗高脂血剤または抗動脈硬化剤として市販され
ている。また、比較的高分子量のデキストラン硫酸はヘ
ルペスウィルスに対して抑制作用を有することが知られ
ている（ヨーロッパ特許公開第００６６３７９号）。し
かし、ヘルペスウィルスはＤＮＡウィルスであるから、
ＤＮＡの合成を全面的に逆転写酵素に頼るレトロウィル
スとは増殖機序が全く異なっている。したがって、ヘル
ペスウィルスに対して効果があることはレトロウィルス
に対しても有効であることを意味するものではない。さ
らに、低分子量のデキストラン硫酸（分子量ｔｏｏｏｏ
以下）はヘルペスウィルスにほとんど無効であることが
知られている。

ムコ多糖類もしくはその硫酸化物のうち、コンドロイチ
ン硫酸は、感音性難聴、神経痛、腰痛、慢性腎炎などに
対する治療及び点眼薬として市販されている。また、ケ
ラタン硫酸は軟骨から、ティクロン酸はバチルス・ズブ
チリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）の細胞壁
から、ヒアルロン酸はさめの皮、くじらの軟骨またはひ
との血清から、ヘパラン硫酸はうしの肝臓または肺臓か
ら、キチンは節足動物または真菌、酵母からそれぞれ得
られることが知られ、コンドロイチン硫酸の硫酸化物の
製造法は特公昭４６−９５７０号に記載されている。

ヘパリンは、インビトロで種々の酵素、例えばフィトヘ
マグルチニン刺激ひとリンパ球のＤＮＡポリメラーゼお
よびさる肉腫ウィルス（ｓｉｍｉａｎ　　ｓａｒｃｏｍ
ａ　　ｖｉｒｕｓ）の逆転写酵素を阻害することが知ら
れている［カンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ）３８巻２４０１−２４０７頁］が、細胞
レベルでレトロウィルス感染を阻害するか否かは知られ
ていない。

［発明の構成］ この発明は、糖構成炭素原子上に低分子量の連結基を介
して少なくとも１個のＳ−オキソ酸基が結合している天
然もしくは合成少糖類もしくは多糖類またはそれらの塩
類を有効成分とする、動物またはひとレトロウィルス性
疾患処置剤である。

ここにいう処置には、予防、維持（すなわち悪化防止）
、軽減（すなわち症状の改善）および治療を含めたあら
ゆる管理が含まれるものとする。

レトロウィルスとしては、前に例示したものを含めて、
ＲＮＡと逆転写酵素とを基本成分とするすべてのウィル
スが含まれる。

この発明にいう疾患には、前に例示したウィルス名に付
されている疾患およびウィルス名には付されていないが
そのウィルスが病因となる疾患を含めて、レトロウィル
スにより起されるすべての疾患が含まれる。１つの重要
な疾患はエイズウィルス感染により引きおこされる疾患
（ＰＧＬ、ＬＡＳ、ＡＲＣ，エイズなど）である。

この発明で用いる少糖類は、糖構成炭素原子上に低分子
量の連結基を介して少なくとも１個のＳ−オキソ酸基が
結合しているものである。これには、天然品と合成品が
含まれる。天然の語は、少糖類または多糖類が、植物、
微生物または動物のような天然資源から抽出等の手段に
より得られることを意味する。合成の語は少糖類または
多糖類が、例えばＳ−オキソ酸基を有するかまたは有し
ない天然もしくは非天然（合成）少糖類または多糖類に
Ｓ−オキソ酸基を導入することにより合成的に得られる
ことを意味する。

少糖類の語は、互いに結合する２〜約９個の単糖類を含
む炭水化物を意味する。例えば少糖類が３個の単糖類か
らなる場合、そのうちｌ、２または３個が少なくとも１
個のＳ−オキソ酸基を有し得る。

多糖類の語は、互いに結合する約１０個以上の単糖類を
含む炭水化物を意味する。構成単糖類の少なくとも１個
、小部分、大部分または全部が、少なくとも１個で通常
４個以下のＳ−オキソ酸基を有し得る。

Ｓ−オキソ酸基には、スルホ基（−ＳＯ３Ｈ）およびヒ
ドロキシスルフィニル基（−Ｓｏ−ＯＨ）が含まれる。

好ましいのはスルホ基である。

糖構成炭素原子の語は、少糖類または多糖類に含まれる
単糖類のテトラヒドロフラン環またはテトラヒドロピラ
ン環を構成する炭素原子を意味する。

低分子量の連結基の語は、オキシ（−０−）、イミノ（
−ＮＨ−）、チオ（−Ｓ−）、メチレン（−ＣＨ！−）
、エチリデン（−ＣＨ（ＣＨ３）　　）等を含む。

低分子１の語は、その基が約１４〜約３２の分子量を有
することを意味する。好ましい連結基はオキシおよびイ
ミノである。

この発明で用いる少糖類または多糖類には、植物もしく
は微生物から得られた少なくとも１個の硫酸水素エステ
ル基（−０−Ｓｏ３Ｈ）を有する天然多糖類、または植
物もしくは微生物から得られた多糖類を硫酸エステル化
して生じた少なくとも１個の硫酸水素エステル基（−０
−Ｓ０３Ｈ）を有する合成多糖類が含まれる。

そのうち好ましいものは、非アミノ単糖（酸を含む）を
くり返し単位とする多糖類の硫酸エステルであるが、微
量の窒素を含有する場合も含まれる。くり返し単位の非
アミノ糖としては、キシロース、アラビノース、ラムノ
ース、フコース、グルコース、ガラクトース、グルクロ
ン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸等が含まれる。天
然に産生される多糖類としては、カラゲニン（すぎのり
、やはずつのまた等から得られたガラクタン硫酸エステ
ル）およびフコイジン（こんぶ属の褐藻から得られるポ
リフコース硫酸エステル）が含まれる。

カラゲニンには、に−カラゲニン、λ−カラゲニン、ｌ
−カラゲニン等硫酸基含量の異なるものが含まれる。合
成的に得られるものとしては、多糖類、例えばでんぷん
およびその部分加水分解物、ロイコノストック属（Ｌ　
ｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）が生産するデキストランおよび
その部分加水分解物（通常分子！５００−２００万、普
通２０００−３０万、好ましくは２０００−１万、最適
には３０００−８０００）、グリコゲン、ペクチン、セ
ルロース、植物粘液質（アラビアゴム、トラガカントゴ
ム等）、植物粘質物（おくら、アロエ、じゅんさい等か
ら得られるもの）、海藻および淡水産藻類の粘液質（ア
ルギン酸、ラミナリン等）、微生物由来多糖類（レンチ
ナン、プルラン、マンナンなど）または合成多糖を硫酸
化して得られるものが含まれる。これらの中には公知の
もの（デキストラン硫酸、ヨーロッパ特許公開第００６
６３７９号参照）および新規なものがある。新規なもの
は、公知のものと同様にして製造される。製造法の一例
を示すと次の通りである。

クロルスルホン酸を８−１０倍８の乾燥ピリジンに冷却
しながら滴下する。これに小型のホルムアミドとデキス
トラン（クロルスルホン酸の約４分の１重量）を加え、
撹拌しなから５５−６５℃に加熱する。数時間撹拌後、
溶媒を留去し、残留物を例えば再沈殿、透析等により精
製する。合成多糖中、硫酸エステル基を有する多糖類を
さらに硫酸化して得られたものは、ポリ硫酸の語で表わ
す。

また、この発明で用いる少糖類または多糖類には、動物
から得られた少なくとも１個のスルホ基（−ＳＯ，Ｈ）
を有する天然多糖類、または動物から得られた多糖類を
硫酸エステル化して生じた少なくとも１個のスルホ基（
−ＳＯ３Ｈ）を有する合成多糖類が含まれる。

そのうち好ましいものは、アミノ単糖（Ｎ−アシル化さ
れたものおよび硫酸化物（−０−ＳＯ，Ｈ又は−ＮＨＳ
Ｏ３Ｈ）を含む）を基本的くり返し単位とするムコ多糖
類であって、さらに単糖類またはそれから誘導される酸
を別の基本的くり返し単位として含有し得るものである
。くり返し単位のアミノ糖またはそのＮ−アシル化物（
好ましくはＮ−アセチル化物）としては、グルコサミン
、ガラクトサミン、これらのＮ−アセチル化物および上
記化合物の硫酸化物または部分加水分解物が含まれる。

また、単糖類または酸（好ましくはへキスロン酸）とし
ては、グルコース、ガラクトース、グルクロン酸、イズ
ロン酸等が含まれる。このようなくり返し単位を含むム
コ多糖類には、ヘパリン、ケラタン硫酸、コンドロイチ
ン−４−硫酸、コンドロイチン−６−硫酸、デルマタン
硫酸、ティクロン酸、ヒアルロン酸、ヘパリチン硫酸、
キチン、およびこれらの部分加水分解物、修飾（例えば
部分アシル化）物、並びに上記のようなくり返し単位を
含む合成多糖類が含まれる。

また、ムコ多糖類ポリ硫酸は、上記ムコ多糖類をさらに
硫酸化したものである。硫酸化は、例えば特公昭４６−
９５７０号公報記載の方法によって行うことができるが
、一般的にはムコ多糖類に濃硫酸またはクロルスルホン
酸のような反応性誘導体を反応させることによって行な
われろ。

この反応は、通常無溶媒下または溶媒中、低温で行なわ
れる。反応生成物は、常法、例えば中和、濃縮、沈殿、
再沈殿、クロマトグラフィー等によって単離される。

この発明で用いるムコ多糖類もしくはその硫酸化物の塩
としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩
等の無機塩基との塩、およびジエタノールアミン塩、シ
クロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との塩
が含まれる。これらの塩は、常法により対応する遊離酸
から製造される。これらのムコ多糖類もしくはその硫酸
化物およびその塩は、単独で使用されるほが、亜鉛、ア
ルミニウムなどの金属塩との混合物としても使用できる
。

上記少糖類または多糖類またはその塩の投与量は、体内
において目的とする治療効果を生ずるに充分な量である
。例えば上記多糖類硫酸エステルが抗ウィルス活性をも
たらす血中濃度を生ずる用量は、一般に０．２〜２００
幻／に９、好ましくは０゜５〜１００　ｍｇ／　ｋｇで
あり、ひとの場合１口約１０Ｒ９〜１０９、好ましくは
約５０１９〜５９を１日１〜４回に投与するが、または
持効性製剤として投与する。投与方法は、経口、肛門、
鼻、局所（舌下を含む）、膣、注射（皮下、筋肉内、静
脈内、陵内を含む）、塗布などの任意の方法をとり得る
。

好ましい投与経路は、受容者の条件と年齢、感染の程度
などにより異なる。

上記ムコ多糖類もしくはその硫酸化物またはその塩の体
内において抗ウィルス活性を示す濃度を生ずるに充分な
量は、一般に０．２〜２００３１ｇ／に９、好ましくは
０．５〜ｌ　００　ｎ／に９であり、ひとの場合１口約
１０ｘｇ〜２０ｇ、好ましくは約５０ＪＩｇ〜ＩＯ９を
１日１〜４回に投与するが、または持効性製剤として投
与する。投与方法は、多糖類の硫酸エステルの場合と同
様任意の方法をとり得る。

投与に際しては、有効成分を上記の投与方法に適した有
機または無機の固体または液体賦形剤のような医薬用担
体と混合して、常用の医薬製剤の形で投与することがで
きる。このような製剤には、錠剤、顆粒剤、散剤、カプ
セル剤等の固体、および液剤、乳剤、懸濁剤等の液体や
軟膏が含まれる。

上記担体としては、でんぷん、乳糖、ぶどう糖、しょ糖
、デキストリン、セルロース、パラフィン、脂肪酸グリ
セリド、水、アルコール、アラビアゴム等が含まれる。

また必要に応じて、補佐薬、安定剤、乳化剤、滑沢剤、
結合剤、ｐｉ−１ｎ節剤、等張化剤および他の常用添加
剤を加えることができる。

この発明はまた、処置（予防あるいは治療を含む）を必
要とする対象（動物またはひと）にこの発明の処置剤の
有効】を投与することからなる、レトロウィルス性疾徹
の予防及び治療法を提供するものである。

この発明で用いる少糖類または多糖類の毒性は極めて低
い。例えば、デキストラン硫酸ナトリウム（分子量７０
００〜８０００、Ｓ含量１７〜２０％）の急性毒性（Ｌ
　Ｄ　ｓｏ）は、マウスに経口投与した場合２１０００
ｘ９／ｋｇ、静脈注射した場合４５００　ｍｇ／　ｋｇ
である。コンドロイチン硫酸ナトリウムの急性毒性（Ｌ
　Ｄ　ｓ。）は、マウスに経口投与した場合７５００ｆ
ｆ１ｇ／ｋｇ、腹腔的投与した場合４０００ｘｙ／ｋｇ
以上で中毒例および致死例かみられない。ヘパリンナト
リウムおよびヘパリン力ルンウムの急性毒性（Ｌ　Ｄ　
ｓｏ）は、マウスに静脈注射した場合、いずれら１５０
０〜２０００ｘ９／に９である。

［実施例］ 以下、実施例によりこの発明をさらに詳細に説明し、試
験例によりこの発明の効果を明らかにする。

製造例１ コンドロイチン硫酸の硫酸化物（コンドロイチンポリ硫
酸）の製造。

コンドロイチン１ｆＥＰ１（５９）を−２５℃以下に冷
却した９５％濃硫酸１Ｏｘ（ｌに撹拌しながら加える。

反応混合物を同温度で９０分撹拌後、氷（１２０ｇ）上
に反応液を撹拌しながら注ぎ炭酸カルシウムと混和する
。減圧濾過し、沈澱を洗い、この濾液と洗液に２０％（
Ｖ／Ｖ）になるようにエタノールを加え、−夜５℃に放
置し生成した硫酸カルシウムを除く。このシ戸液に炭酸
ナトリウムを撹拌しながら加えてｐＨ１０にする。次い
で酢酸で微酸性にしたのち２０ｍ１まで′ａ縮し１００
ｍ１のエタノールを加えて一夜５℃に保存後、沈澱を遠
心分離して、エタノール、次いでエーテルで洗い、減圧
乾燥し、白色粉末の標記化合物を得る。

製造例２ ケラタン硫酸の硫酸化物（ケラタンポリ硫酸）の製造。

ケラタン硫酸（１００１９）を出発原料とし濃硫酸１１
１２を使用するほかは、実施例１と同様に操作して標記
化合物を得る。

製剤例１ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量７，０００〜８．ＯＤＤ、Ｓ含量１７〜２０％
）１５０所 コーンスターチ　　　　　　　　　　４５所乳糖　　　
　　　　　　　　　　　３００ｍ９ステアリン酸マグネ
シウム　　　　　　５＋ｙ上記を常法により混合、造粒
、打錠とて錠剤とする。

製剤例２ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量６０００〜８０００、Ｓ含量１７〜２０％）生
理食塩水　　　適量加えて全＊ＯｘＱとする。

製剤例３ デキストラン硫酸ナトリウム （分子量５０００、Ｓ含量１３〜１４％）６００ｒ、９ 生理食塩水　　　適量加えて全１０ｘ（とする。

製剤例４ コンドロイチン硫酸ナトリウム　　１５０ｘ９コーンス
ターチ　　　　　　　　　　　４５ｊＪ乳糖　　　　　
　　　　　　　　３００次９ステアリン酸マグネシウム
　　　　　　５１９上記を常法により混合、造粒、打錠
して錠剤とする。

製剤例５ ケラタンポリ硫酸（ケラタン硫酸の硫酸化物）のナトリ
ウム塩 乳糖　　　　　　　　　　　　　　１９５ｍｇステアリ
ン酸マグネシウム　　　　　　５ｍ９上記を常法により
混合してゼラチン硬カプセルに充填する。

製剤例６ コンドロイチンポリ硫酸（コンドロイチン硫酸の硫酸化
物）のナトリウム塩　　　３００ｍｇ生理食堝水　　　
適量加えて全１０ｍＱとする。

製剤例７ ヘパリンナトリウム　　　　　２５０００単位生理食塩
水　適量加えて全１（１！とする。

製剤例８ ヘパリンカルシウム　　　　　　５０００単位塩酸プロ
力イン　　　　　　　　　　１０１９水　　　　　　　
適量加えて全１０ｄとする。

試験例１（逆転写酵素阻害活性） とりミニロブラストシス・ウィルス（Ａｖｉａｎ　Ｍｙ
ｅｌｏｂｌａｓｔｏｓｉｓ　Ｖ　１ｒｕｓ、略号ＡＭＶ
、レトロウィルスの１種であるとり骨髄芽腫ウィルス）
から得られた逆転写酵素（標品）の酵素活性に対する試
験物質の効果を調べた。

（γＡ）ｎ（鋳型ＲＮＡ）５μＣ１（ｄＴ＞＋ｔ　　＋
ｓ（ブライマーＤＮＡ）４．＋ｌ（！、水ＩｕＱに、０
，５〜１トリスＨＣＱ、（ｐＨ８，４）＋０．１％トリ
トンＸ−１００混合物５μＱＳ　１ｍＭ　　ＭｇＣ（ｂ
　５μ（！、２０ｍＭ−Ｄ’ｒ’ｒｓμＬ水５μ＆およ
び［３ＨコーＴＴＰ（トリヂウム標識チミジン３燐酸）
を混合し、種々の粗景の試験物質溶液（最終濃度ｌ、０
．１および０゜０１　ｕｇ／ｘＱ）または緩衝液（対照
）５μｇを加えた。

上記ウィルス（Ａ　Ｍ　Ｖ　）から得た逆転写酵素の標
品５μｍ２（１単位）を加え、３７℃で３０分間インキ
ュベートした。トリクロロ酢酸を加えて反応を停止させ
、濾過後、フィルター上に残った［３Ｈ−Ｔｉｎの放射
活性を液体シンチレーションカウンターで計数定量した
。試験物質としては、デキストラン硫酸ナトリウム（分
子量５０００）、同（分子量８０００）、同（分子ｆｆ
１５０００００）、フコイジン、に−カラゲニン、λ−
カラゲニン、と−力ラゲニンを用いた。結果を第１−７
図に示す。

第１７図から、上記試験物質の用量が増すにしたがって
ＡＭＶ由来逆転写酵素を阻害する効果が上昇することか
わかる。

試験例２（逆転写酵素阻害活性） ＨＴＬＶ−ＩＩＩ（エイズウィルス）のウィルス粒子破
砕物を逆転写酵素粗製品として用い、試験例１と同様に
してデキストラン硫酸（ＤＳ、分子量７０００〜８００
０、Ｓ含量１７〜２０％）の逆転写酵素阻害効果を調べ
た。結果を第８図に示す。

第８図から、ＤＳはＨＴ　Ｌ　Ｖ　−Ｉより得た逆転写
酵素に対しても阻害効果をもつことが明らかになった。

試験例３（抗エイズウイルス活性） １０％うし胎仔血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培地で培
養したＭＴ−４細胞（３０Ｘ　１０　’／１１２）にＨ
Ｔ　Ｌ　Ｖ　−ＩＩ［のウィルス粒子を加え、３７℃で
１時間インキュベートして吸着させた。この時の比率は
、細胞：ウィルスが約５００：１になるようにした。吸
着後細胞を洗浄し、種々の用量の試験物質（試験例１と
同じ）を加えて３７℃、５％ＣＯ５の条件下に３日間培
養し、細胞の増殖、生存率および感染細胞率を調べた。

、感染細胞率は、間接蛍光抗体法により測定した。すな
わち、細胞をスライドグラス上に固定し、ウィルス抗原
に対する抗体を反応さけ、さらにこの抗体に対する２次
抗体（蛍光標識したもの）を加えて反応させた。結果を
第９−２９図に示す。図中、、△および口は非感染対照
、マ、ムおよび■は感染試験を示す。増殖は細胞数、生
存率は生存細胞数Ｘ１００／全細胞数、感染細胞率は蛍
光陽性細胞数ｘ１００／全細胞数である。

第９−２２図から、試験物質を加えない場合には細胞が
増殖せず、また元の細胞も死滅するが、試験物質の用量
が増すにしたがって、非感染対照の値に近づくことがわ
かる。また第２３−２９図から、試験物質を加えない場
合にはほぼ全細胞が感染するが、試験物質の用量が増す
にしたがって感染しなくなることがわかる。すなわち、
これらの試験物質は、エイズウィルスの細胞への感染及
びウィルスの増殖を阻止する物質であることがわかる。

試験例４（細胞毒性） 抗ウィルス剤は宿主細胞にも毒性を示すことが多いので
、試験物質（試験例１参照）がこのような毒性を示すか
否かを調べた。

ウィルスを用いない、で、ＭＴ−４細胞を試験例３と同
様に培養し、増殖および生存率を調べた。

結果は下表の通りである。

物質（μ９＃Ｉ＆）　　　増殖（ｘ　Ｉｏ’細胞）生存
率（％）デキストラン硫酸ナトリウム（分子ｆｆ１５０
００、Ｓ含量１３％） デキストラン硫酸ナトリウム（分子１７，０００〜８，
０００、Ｓ自重１７〜２０％） １００　　　　　　　１３０　　　　　９．１１Ｑ　　
　　　　　　＋３８　　　　　９１デキストラン硫酸ナ
トリウム（分子ｍ５０００００．Ｓ含量１６％） フコイジン ＋０　　　　　　１１２　　　　９９ ０　　　　　　　＋２４　　　　８７ に一カラゲニン８０％＋λ−カラゲニン２０％１　　　
　　　　　＋４７　　　　９３λ−カラゲニン １００　　　　　　　８３　　　　９＝１１０　　　　
　　２０３　　　　９＝１を一カラゲニン 上記の結果から、試験物質がほとんど細胞毒性を示さな
いことがわかる。

試験例５（逆転写酵素阻害活性） 試験例】と同様の方法によりＡＭＶの逆転写酵素活性に
対する試験物質の効果を調べた。試験物質としては、コ
ンドロイチン硫酸（Ｓ含量６．２−６．９％）、コンド
ロイチンポリ硫酸（Ｓ含ｊｌｌ　１゜６−１２．１％）
、ケラタン硫酸（Ｓ含量７．０−８゜０％）、およびケ
ラタンポリ硫酸（Ｓ含量９．７％）を用いた。結果を第
３０−３３図に示す。

第３０−３３図から、上記試験物質の用量が増すにした
がって酵素阻害率が上昇することがわかる。また、上記
試験物質の逆転写酵素阻害活性は、分子内に存在する硫
酸基の数に密接に関係し、合成的に多硫酸化した試験物
質（コンドロイチンポリ硫酸、ケラタンポリ硫酸）の方
が天然物質（コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸）より
強い活性を示すことがわかる。

試験例６（抗エイズウイルス活性） 試験例３と同様の方法により培養細胞を用いて試験物質
の抗エイズウイルス活性を調べた。試験物質は試験例５
と同じである。結果を第３４−４５図に示す。図中、、
△および口は非感染対照、マ、ムおよび■は感染試験を
示す。増殖は細胞数、生存率は生存細胞数Ｘ　１００／
全細胞数、感染細胞率は蛍光陽性細胞数Ｘ　ｌ　００／
全細胞数である。

第３４−４１図から、試験物質を加えない場合には細胞
が増殖せず、また元の細胞も死滅するが、試験物質の用
量が増すにしたがって、非感染対照の値に近づくことが
わかる。また第ｔｉ　２−４５図から、試験物質を加え
ない場合にはほぼ全細胞が感染するが、試験物質の用量
が増すにしたがって感染しなくなることがわかる。

なお、上記各結果から、合成的硫酸化によりＳ含有量を
増加させたものの方が天然のものより抗エイズウイルス
活性が強いことがわかる。

試験例７（抗エイズウイルス活性） 試験例３と同様の方法によりヘパリンの抗エイズウイル
ス活性を調べた。結果を第４６−４８図に示す。図中、
、△および口は非感染対照、マ、ムおよび膿は感染試験
を示す。増殖は細胞数、生存率は生存細胞数ｘ１００／
全細胞数、感染細胞率は蛍光陽性細胞数ｘ　ｌ　ＯＯ／
全細胞数である。

第４６および４７図から、ヘパリンを加えない場合には
細胞が増殖せず、また元の細胞も死滅するが、ヘパリン
の用量が増すにしたがって、非感染対照の値に近づくこ
とがわかる。また第４８図から、ヘパリンを加えない場
合にはほぼ全細胞が感染するが、ヘパリンの用量か増す
にしたがって感染しなくなることがわかる。

試験例８（細胞毒性） 抗ウィルス剤は宿主細胞にも毒性を示すことが多いので
、ヘパリンがこのような毒性を示すか否かを調べた。

ウィルスを用いないで、ＭＴ−４細胞を試験例７と同様
に培養し、増殖率および生存率を調べた。

結果は、下表の通りである。

ヘパリン（μｙ／ｘ□増殖（Ｘ　１０’細胞）生存率（
％）１　　　　　　　　＋４３　　　　９１上記の結果
から、ヘパリンがほとんど細胞毒性を示さないことがわ
かる。

試験例９（抗エイズウイルス活性） 試験例１〜７に示した種々の試験物質の抗エイズウイル
ス活性発現と分子構造（特に分子量及びＳ食潰）との相
関を調べるために、天然に存在する多種多糖類、多糖類
の硫酸エステル、ムコ多糖類、およびそれらの硫酸化物
の抗エイズウイルス活性を調べた。さらに、合成的に得
られろ種々の硫酸化物についても、同様に検査した。方
法は上記試験例と同じく培ａＭ’ｒ−４細胞にＨＴＬＶ
−■を感染させ、６日後の感染細胞率（％）に対する各
種試験物質の抑制効果を調べた。結果を下表に示す。（
感染細胞率は前恥の試験例と同じく蛍光陽性細胞数Ｘ　
１００／全細胞数である。）ｌ）デキストラン、デキス
トラン硫酸及び単糖類硫酸エステル＊二こでいうＳ含量
は糖鎖に結合した硫酸基またはスルホン酸基に起因する
ものである。

不＊無添加対照は１００％を示した。

２）海藻由来多糖類及びその硫酸化物 ３）キチン及びキトサン類及びその硫酸化物４）動物由
来ムコ多糖類及びその硫酸化物性の多糖類 ペクチン、ココミン酸、イヌリン、ラフィノース、メチ
ルセルロースはいずれも抗エイズウイルス活性を示さな
かった。

以上の結果から、抗エイズウイルス活性の発現は、Ｓ含
量（硫酸基またはスルホン酸基）と密接な関係があり、
Ｓ原子を含まないものはすべて活性を示さなかった。さ
らにＳ含量が増すに従って抗エイズウイルス活性が強く
なった。分子量との関係は、弔糖類では全く効果がない
が、例えばデキストラン硫酸において分子［５０００以
上では、分子量の増加は抗エイズウイルス活性に影響し
なかった。これは、これまで知られた硫酸多糖類のヘル
ペス等に対する抗ウィルス活性の発現の仕方と大きく異
なる。高分子虫特に５０，０００以」二の多糖類、多糖
類の硫酸エステルはひと及び動物に対し毒性が高いこと
が知られており、今回低分子量のデキストランＷ’Ｄが
十分抗エイズウイルス活性を示したことは、医薬として
開発する上で極めて重要である。上記試験物質の中で特
に抗エイズウイルス活性の強いのは、Ｓ含量１０５以上
のデキストラン硫酸、λ−カラケニン、アルギン酸の硫
酸化物、キトサンの硫酸化物、コンドロイチンボリ硫酸
、コンドロイチン−４−硫酸および−６−硫酸の硫酸化
物、ヘパリンなどであった。

試験例１０（抗フレンド白血病ウィルス（Ｆ−ＭｕＬＶ
）活性） マウスフレンド白血病ウィルス（Ｆ−ＭｕＬＶ）に対す
る下記試験物質の抗ウィルス活性をＸＣ−プラーク法に
より調べた。

（方法１） ＢＡＬＢ３Ｔ３細胞を、直径３５ｍｍのペトリ皿に５Ｘ
１０’個／皿（２，ｗｔ２）の割合で入れ、所定濃度の
薬剤を含む培地または含まない培地（対照）及びウィル
ス希釈液０　、２　ｚＱを加えて一夜培養した。翌日、
各々の培地で培地交換を行ない、更に３日間培養し、ウ
ィルス感染及び増殖を進行させた。その後、培地を取り
除き、ＵＶ照射してＢＡＬＢ３Ｔ３細胞及びウィルスの
増殖を停止さ仕た。ここにｘＣ細胞懸濁液（２ｍｌ）を
加え３日間培養し、Ｂ　Ａ　Ｌ　Ｂ　３　Ｔ　３に感染
し増殖したウィルスによってＸＣ細胞が融合することに
より生ずるプラークの数を測定した。

（方法２） 方法ｌにおいて、ウィルス吸着後未吸着ウィルスを除き
所定濃度の薬剤を含むかまたは含まない培地２ｘＱを入
れて培俺を行なった。翌日の培地交換をせずに、以下方
法１と同様にして、プラーク数を計数した。

薬剤としては、方法１方法２共にデキストラン硫酸（分
子量７０００〜８０００、Ｓ含量１７％〜２０％、ＤＳ
略記）を用いた。２つの方法の結果を下表に示す。

上記の表から、ＤＳはｌ−１００ｕ９／ｍＱでウィルス
の感染、増殖を反映するプラーク形成を９０％以上抑制
し、１０００μｇ／２Ｑでは完全に駆出することがわか
る。また１〜１００μｇ／ｍｌのＤＳはＢＡＬＢ３Ｔ３
細胞に対し、全く細胞毒性を示さなかった。

方法２による抗フレンド白皿病つィルス活性上記の表か
ら、方法２においてもＤＳはｔＪｉｙ／πＱで約６０％
、５００μ９／１Ｑでほぼ完全にウィルスの感染、増殖
を抑制することがわかる。

以上の結果から、デキストラン硫酸はエイズウィルスな
どの細胞破壊型（レンチウィルス亜科）のみならず、腫
瘍形成型（オンコウイルス亜科）のレトロウィルスの感
染及び増殖ら抑制することが明らかになっに。

【図面の簡単な説明】

第１−７図は、試験例１における、試験物質の逆転写酵
素阻害活性を示すグラフである。 第８図は、試験例２における、試験物質の逆転写酵素阻
害活性を示すグラフである。 第９−１５図、１６−２２．２３−２９図は、それぞれ
、試験例３における、ＩＩＴＬＶ−１感染ＭＴ−＝１細
胞の増殖、生存率および感傷細胞率に対する試験物質の
効果を示すグラフである。 第３０−３３図は、試験例５における、試験物質の逆転
写酵素阻害活性を示すグラフである。 第３　、ｔ　−３７，３８−・Ｘｌ、４２−４５図は、
それぞれ、試験例６におけろ、ＩＩ　Ｔ　Ｌ　Ｖ　−１
感染ＭＴ−４細胞の増殖、生存率および感染細胞率に対
する試験物質の効果を示すグラフである。 第４６−４８図は、それぞれ試験例７における、ＨＴ　
Ｌ　Ｖ　−Ｉｎ　／　Ｌ　Ａ　Ｖウィルス感染ＭＴ−４
細胞の増殖、生存率および感染細胞率に対するヘパリン
の効果を示すグラフである。

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. （１）糖構成炭素原子上に低分子量の連結基を介して少
   なくとも１個のＳ−オキソ酸基が結合している天然もし
   くは合成少糖類もしくは多糖類またはそれらの塩類を有
   効成分とする、動物またはひとレトロウイルス性疾患処
   置剤。
2. （２）Ｓ−オキソ酸基がスルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ）であ
   る、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
3. （３）連結基がオキソ基（−Ｏ−）またはイミノ基（−
   ＮＨ−）である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
4. （４）処置がＰＧＬ、ＬＡＳ、ＡＲＣ、エイズ、成人Ｔ
   細胞白血病または川崎病の感染及び発病の予防または治
   療である、特許請求の範囲第１項記載の処置剤。
5. （５）レトロウイルスがひとレトロウイルスである、特
   許請求の範囲第１項記載の処置剤。
6. （６）ひとレトロウイルスがＨＴＬＶ−III、ＬＡＶお
   よびＡＲＶ等のＨＩＶ類から選ばれるものである、特許
   請求の範囲第５項記載の処置剤。
7. （７）ひとレトロウイルスがＨＴＬＶ− I 、ＨＴＬＶ
   −IIまたは川崎病原因ウィルスである、特許請求の範囲
   第５項記載の処置剤。
8. （８）レトロウイルスが動物レトロウイルスである、特
   許請求の範囲第１項記載の処置剤。
9. （９）レトロウイルスがとりミエロブラストシスウイル
   スまたはフレンド白血病ウィルスである、特許請求の範
   囲第１項記載の処置剤。
10. （１０）処置がレトロウイルスの感染予防である、特許
    請求の範囲第１項記載の処置剤。
11. （１１）レトロウイルスがＨＩＶ類である、特許請求の
    範囲第１０項記載の処置剤。
12. （１２）少糖類または多糖類がレトロウイルスの逆転写
    酵素阻害活性を有するものである、特許請求の範囲第１
    項記載の処置剤。
13. （１３）少糖類または多糖類が天然または合成少糖類も
    しくは多糖類硫酸エステルまたはその塩類である、特許
    請求の範囲第１項記載の処置剤。
14. （１４）天然または合成少糖類もしくは多糖類が、植物
    もしくは微生物から得られた少なくとも１個の硫酸水素
    エステル基（−Ｏ−ＳＯ＿３Ｈ）を有する天然少糖類も
    しくは多糖類、または植物もしくは微生物から得られた
    少糖類もしくは多糖類を硫酸エステル化して生じた少な
    くとも１個の硫酸水素エステル基（−Ｏ−ＳＯ＿３Ｈ）
    を有する合成少糖類もしくは多糖類、またはそれらの塩
    類である、特許請求の範囲第１３項記載の処置剤。
15. （１５）合成多糖類が、デキストラン硫酸、アルギン酸
    硫酸、レンチナン硫酸またはプルラン硫酸である、特許
    請求の範囲第１４項記載の処置剤。
16. （１６）デキストラン硫酸が、分子量５００〜２００万
    、通常２０００〜３０万、好ましくは２０００〜１万、
    最適には３０００〜８０００のものである、特許請求の
    範囲第１５項記載の処置剤。
17. （１７）デキストラン硫酸が、Ｓ含量５〜２２％、好ま
    しくは１０〜２０％、最適には１５〜２０％のものであ
    る、特許請求の範囲第１５項記載の処置剤。
18. （１８）天然多糖類が、カラゲニンまたはフコイジンで
    ある、特許請求の範囲第１４項記載の処置剤。
19. （１９）天然または合成少糖類もしくは多糖類が、動物
    から得られた少なくとも１個のスルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ
    ）を有する天然少糖類もしくは多糖類、または動物から
    得られた少糖類もしくは多糖類を硫酸エステル化して生
    じた少なくとも１個のスルホ基（−ＳＯ＿３Ｈ）を有す
    る合成少糖類もしくは多糖類、またはそれらの塩類であ
    る、特許請求の範囲第１３項記載の処置剤。
20. （２０）多糖類が、ムコ多糖類から選ばれた天然多糖類
    、または天然ムコ多糖類を硫酸エステル化して生じたム
    コ多糖類硫酸エステルから選ばれた合成多糖類である、
    特許請求の範囲第１９項記載の処置剤。
21. （２１）多糖類がヘパリンまたはその塩である、特許請
    求の範囲第１９項記載の処置剤。
22. （２２）多糖類が、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫
    酸、ヘパリチン硫酸、ケラタン硫酸、ヒアルロン酸、テ
    イクロン酸、キチンおよびキトサンから選ばれた天然多
    糖類、またはコンドロイチンポリ硫酸、デルマタンポリ
    硫酸、ヘパリチンポリ硫酸、ケラタンポリ硫酸、ヒアル
    ロン酸硫酸エステル、テイクロン酸硫酸エステル、キチ
    ン硫酸エステルおよびキトサン硫酸エステルから選ばれ
    た合成多糖類、またはそれらの塩類である、特許請求の
    範囲第１９項記載の処置剤。
23. （２３）レトロウイルスの逆転写酵素を抑制する物質を
    選択することからなる、抗レトロウイルス作用物質のス
    クリーニング法。