JPS6344893A - リン脂質の酵素分解方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、リン脂質を酵素分解する方法、詳しくは、リ
ン脂質の脱アシル化によりリゾリン脂質を得る方法に関
する。

〔従来の技術及びその問題点〕

従来、リゾリン脂質は、免疫賦活作用及び平滑筋の収縮
に対する抑制作用を有し、また、リン脂質に比べ親水性
でより強いＯ／Ｗ乳化作用を有することが知られており
、このリゾリン脂質にはα型及びβ型の構造が存在する
ことが知られている。

このリゾリン脂質は、天然にも少量存在するが、従来、
次のような方法により製造されている。

０食用水性脂肪エマルジョンの製造方法（特開昭４６−
１３２６３号公報参照） ■水中油型エマルジョン（特公昭５５−４２８１７号公
報参照） 前記方法のうち、■の方法は、大豆ペーストレシチン（
リン脂質６５％含有）に対し２倍量の水を添加（リン脂
質に対し３倍量）し、攪拌反応を行っている。この方法
では、反応液の水が多く、反応液の状態は乳化状となり
、改質リン脂質の分離は水を蒸発乾固するか、あるいは
アセトン１０倍量以上で脱水を行うため、蒸発させるた
め・のエネルギーと多量の溶媒を使用する欠点を有す。

また、■のエマルジョンにおいては、卵黄をそのまま使
用するが、卵黄中に水分がリン脂質１部に対し４〜５倍
含まれ、改質リン脂質の分離操作は■の方法と同様な欠
点を有す。また、これらの反応系は水の含有量が多いた
め、基質濃度が薄く、酵素と基質の接触を良くするため
の強制攪拌を必要とする。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、上記の問題点の解消されたリン脂質の酵素分
解方法を提供するものである。′本発明者らは、フォス
フォリパーゼＡを作用させ、リゾリン脂質を工業的に容
易に得る方法について鋭意研究した結果、動植物の新鮮
タリン脂質を用いて、リン脂質１部（重量部、以下同じ
）に対し０．１〜１．０部の水を加え、静置反応により
、脱アシル化が非常に円滑に進行すると共に高変換率で
目的とするリゾリン脂質が得られること、且つ反応終了
物は脱アシル化が完了すると共に大部分のトリグリセリ
ドや一部の脂肪酸がリン脂質成分と相分離するため、遠
心分離やデカンテーションの操作によりリン脂質成分を
容易に濃縮できる利点を有すること、また従来法に比べ
水分が少ないため、脱水が容易となるという利点を有す
ること、さらに攪拌エネルギーも反応開始時に使うだけ
であるため、省エネとなる利点を有することを見出し、
本発明に到達したちである。

以下、本発明のリン脂質の酵素分解方法について詳述す
る。

本発明のリン脂質の酵素分解方法は、リン脂質１部に対
し０．１〜１．０部の水、及びフォスフォリパーゼＡを
添加し反応させる。このフォスフォリパーゼＡとしては
、Ａ−２活性の高いものが望ましい。

また、反応時のｐｎは、５〜９、好ましくは６〜８が適
しており、添加水、はこのｐｎ条件を満たしていれば蒸
留水、イオン交換水、水道水、井戸水等何でも良い。蒸
留水、イオン交換水等の軟質の水を用いる場合は、塩化
カルシウムを２〜２００ｍＭの範囲で添加することが好
ましい。さらにリン脂質１部に対し０．２〜２部の、酢
酸エチル、ヘキサンなどの溶媒も使用できる。反応は２
０〜８０℃、好ましくは３５〜７０℃で行うのが良く、
また、反応中攪拌するよりも、基質に水を分散させ　、
た後静置で反応させた方が好ましい。

原料として用いる゛リン脂質としては、ペーストレシチ
ンと一般にいわれてしζるトリグリセリドとリン脂質の
混合物でも、トリグリセリドをアセトンで除去した脱脂
リン脂質、さらには分画して特定のリン脂質区分を多く
したものでも良いが、静置反応の特長を生かし、反応の
進行によりトリグリセリドの分離が容易で且つハンドリ
ングがしやすいことから、いわゆるペーストレシチンが
好ましい。

酵素量はリン脂質１ｇ光たり２０〜２００Ｕが適してお
り、反応時間は酵素量、反応温度によっても異なるが、
通常３０分〜５０時間程度である。

而して、上述の本発明のリン脂質の酵素分解方法によれ
ば、同一酵素量を使用した場合、従来法に比較してリン
脂質の脱アシル化が円滑に進行し、リゾリン脂質への変
換率が高い反応生成物が得られる。そして、この反応生
成物は、リン脂質成分とトリグリセリド、脂肪酸の分離
が容易であり、さらにリン脂質の濃縮が容易である。

尚、本発明で言うリゾリン脂質への変換率とは、加水分
解前に存在するフォスファチジルコリンが加水分解した
りゾフォスファチジルコリンに変換した割合のモル％を
もって表す。このモル％は薄層クロマトグラフィーの技
術を使用し測定できる。

またトリグリセリド、脂肪酸、リン脂質の各成分量はイ
ヤトロスキャン（ＴＬＣ−ＦＩＤ法）で分析ができる。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明　　　　
゛する。

実施例１ 市販大豆レシチン（味の素製）５００ｇ　（リン脂質３
２５ｇ、）リグリセリド１７５　寥）に水道水１００ｇ
及びフォスフォリバーゼＡ−２１，５＋ｎｌ　（ノボ社
製、ノボレシターゼＩＯＬ、１万Ｕ／ｍｌ）を混合、分
散のため攪拌し、次いで、これを５０℃の恒温槽中に入
れ静置反応する。反応時間８時間で反応を終了し、反応
物の一部を減圧下６０℃で蒸発乾燥し、分析した。分析
は２次元薄層クロマトグラフィー法（Ｌｉｐｉｄｓ　Ｖ
ｏｌ　５＋　Ｎｏ、５＋　　４９４−４９６　（１９７
０）に記載の方法〕により、原料中のリン脂質のうちフ
ォスファチジルコリンがリゾリン脂質に変換したモル％
によりみた。その結果、リゾリン脂質変換率は８０モル
％であった。また、遠心分離により上層を分離したとこ
ろ、収量は４２％であり、この成分は、イヤトロスキャ
ン分析により分析したところ、トリグリセリド７５％、
脂肪酸２１％、リン脂質４％であった。

実施例２ 市販粉末脱脂レシチン（ツルーレシチン工業製）３００
ｇに０．０５Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８）１５０ｇ、
塩化カルシウム２ｇ及びフォスフォリバーゼＡ　　２　
２ｍｌ添加し、混合後、６０’Ｃの恒温槽中に入れ静置
で１０時間反応した。実施例１と同様な分析をしたとこ
ろ、リゾリン脂質への変換率は８３モル％であった。

実施例３ 市販大豆ペーストレシチンを含水エタノールで抽出し、
エタノールを蒸留し抽出物（リン脂質８６％−トリグリ
セリド１４％の混合物）２００ｇを反応に使用した。

この抽出物に水道水８０ｇ１フオスフオリパーゼＡ−２
１ｍｌ　（５８，ＩＵ／ｇリン脂質）を混合攪拌後、５
０℃の恒温槽中に入れ静置で８時間反応した。実施例１
と同様な分析をしたところ、リゾリン脂質への変換率は
９０モル％であった。

比較例１ 水道水を２０００ｇ用いた以外は実施例１と同条件で反
応を行い、脱水・分析した。その結果、リゾリン脂質へ
の変換率は４５モル％であり、反応液からの上層の分離
は遠心分離では不可能であった。

比較例２ リン酸バッファーを１５００ｇ用いた以外は実施例２と
同条件で反応を行い、分析した。その結果、リゾリン脂
質への変換率は４３モル％であった。

比較例３ 水道水を６００ｇ用いた以外は実施例３と同条件で反応
を行い、分析した。その結果、リゾリン脂質への変換率
は５５モル％であった。

比較例４〜６ 比較例１〜３の条件で静置反応を攪拌反応に変更した以
外は同条件でそれぞれ反応し、脱水後分析した。その結
果、リゾリン脂質への変換率はそれぞれ次の通りであっ
た。

比較例４（比較例１に対応）　変換率６８モル％比較例
５（比較例２に対応）　変換率６５モル％比較例６（比
較例３に対応）　変換率７５モル％上記の実施例及び比
較例の反応条件及びリゾリン脂質への変換率を下記表に
まとめて示す。

註〕　　＊１粉末　　＊２エタノール抽出〔発明の効果
〕 本発明のリン脂質の酵素分解方法によれば、同一酵素量
を使用した場合、従来法に比較してリン脂質の脱アシル
化が円滑に進行し、リゾリン脂質への変換率が高い反応
生成物が得られ、しかも、この反応生成物は、リン脂質
成分とトリグリセリド、脂肪酸の分離が容易であり、さ
らにリン脂質の濃縮が容易である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. リン脂質をフォスフォリパーゼＡ酵素を用いて加水分解
   する際に、リン脂質１重量部に対して水分を０．１〜１
   ．０重量部添加し、反応させることを特徴とするリン脂
   質の酵素分解方法。