JPS63316736A - 抗レトロウィルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はカワラタケ属に属する担子菌由来の蛋白多糖体
を１成分とする抗ウィルス感染症剤に係り、詳しくはク
レスチンよりなる抗ウィルス感染症剤に関する。

Ｂ型肝炎、成人工細胞白血病更にはＡＩＤＳと近年法々
にウィルス病が話題の焦点となっている。

ウィルス病に対してはこれまでワクチンによる予防接種
で対応し、天然痘根絶をはじめ、黄熱、ポリオの制圧が
なされてきた。しかし、ＡＩＤＳなどのように持ｌ感染
や潜伏感染が問題となる病気に対してはワクチンだＧＪ
では対抗できず、安全ですぐれた効果を示す抗ウィルス
感染症剤の開発が期待されているのが現状である。そこ
で、本発明者らは各種の薬剤を鋭意検討したところ、驚
くべきことに、本発明の前記蛋白多糖体が抗ｉｓ効果に
加えて抗レトロウィルス感染作用の薬理効果をも有して
いることを知見し、本発明に至ったものである。

該クレスチン（０録商標）は、抗ＩｌＩ瘍剤として既に
社会に提供されており、極めて低毒性で、且つ腸内菌層
攪乱などの心配がなく、長期投与が可能である。また、
変異原性やアレルギー反応などにも影響を与えず、した
がって、Ｉ！小な人に対する催奇形成や、アレルギー反
応の危険もなく、極めて安全な物質である。

本発明の抗ウィルス感染症剤の活性成分である蛋白多糖
体は、出願人が本願と同じである例えば特公昭４６−１
７１４９号公報、特公昭５１−３６３２２０公報。

特公昭５６−１４２７４号公報、特公昭５６−１４２７
６号公報。

特公昭５６−３９２８８号公報などに記載されている公
知の物質であり、カワラタケ属に属する担子菌を培養し
て得られる菌糸体培養物（Ｂｒｏｔｈ）又は子実体の熱
水又はアルカリ溶液による抽出物であって、約１８〜３
８％の蛋白質を含み、ｓ、ｏｏｏ以上（超遠心分離測定
法）の分子量、例えば５，０００〜３００．０００（超
遠心分離測定法）の分子量を有するものである。なお、
上記各特許公報の明細書の記載内容は、本明細書に含め
るものとする。本発明の蛋白多糖体のうち、カワラタケ
菌糸体［Ｆ　Ｅ　ＲＭ　−Ｐ　２４１２（Ａ　Ｔ　ＣＣ
２０５４７）］由来の蛋白多糖体は、前記したとおり、
クレスチンという商品名で市販されているものであり（
最近の新薬、第２８集１４〜１６ベージ、　１９７７年
及び第２９集９６−・１０１ページ、　１９７８年、医
薬品要覧第１３４６ページ、昭和５４年５月第６版。

薬業時報社発行、医療薬　日本医薬品実弟１版２４０ペ
ージ、　１９８３年、薬業時報社発行）、その性状の一
端を示せば次のとおりである。

主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、このグルカン
部分の構造は１→３．１→４および１→６結合を含む分
校構造であり、蛋白質の構成アミノ酸は、アスパラギン
酸、グルカン部分等の酸性アミノ酸とバリン、１］イシ
ン等の中性アミノ酸が多く、リジン、アルギニン等の塩
基性アミノ酸は少ない。水に可溶で、メタノール、とリ
ジン、クロロホルム、ベンゼン、ヘキサンには殆んど溶
けない。約１２０℃から徐々に分解する。

レトロウィルスに属するヒト免疫不全症ウィルス（Ｈｒ
ＶＩを本発明の前記蛋白多糖体で処理することにより、
咳ウィルスのヒトリンパ球への吸着が阻害されること、
及び本発明の蛋白結合多糖体が、該ウィルスの複製に必
須な逆転写酵素の活性を著明に阻害することが判明した
。これらのことは、本発明物質がＨＩＶによってひきお
こされる後人性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）をはじめと
するレトロウィルス感染症に有効であることを示すもの
である。

本発明の蛋白多糖体は、その毒性が極めて低く且つ副作
用も殆んど生起しないなど、生体に対して非常に安全な
物質であると知られている。本発明の蛋白多糖体の急性
出性値を下記表−１に示す。

表　　−１ なお、上掲表−１に示される急性毒性値は、下記試験法
により調べたものである。

マウスはＩｃＲ−ＪＣＬ系、４〜５遍令、体重２１〜２
４９のものを、ラットは６竜系、４〜５週令、体重１０
０〜１５０ヒのものを用いた。本発明の蛋白多糖体の投
与経路は、静脈内、皮下、腹腔内および経口の四経路の
投与を実施した。本発明の蛋白多糖体を生理食塩水に溶
解し°【投与し、７日間にわたり、一般症状、死亡なら
びに体重について観察し、ＩＱ察期間終了後に屠殺剖検
した。

表−１に示されるように、ラット、マウスとも投与可能
な最大投与量においてもまったく死亡例は認められず、
Ｌ　Ｄ　ｓｏ値の算定が事実上不可能な程に、本発明の
蛋白多糖体は生体に対して極めて安全である。

すなわち、本発明の蛋白多糖体は急性毒性も極めて低く
、安全な医薬品であり、レトロウィルス感染を抑制する
作用を示すことより抗レトロウィルス感染症剤としてｈ
用である。即ちレトロウィルス感染症に有効である。

本発明の蛋白多糖体は、抗ウィルス感染症剤として用い
る場合、任意の剤型にすることができる。

又、投与も各経路で行なわれる。更に本発明の薬剤は、
レトロウィルス感染症治療剤として用いられているアジ
ド−３−デオキシチミジン（△ＺＴ）などとの併用にお
いても効力を減することがなく、これら他の薬剤との併
用は有効な手段として使用し得る。

経口投与の場合には、それに適用される錠剤、顆粒剤、
散剤、カプセル剤などは、それらの組成物中に一製剤上
一般に使用される結合剤、包含剤、蹴形剤、潤°滑剤、
崩壊剤、湿潤剤のような添加物を含有していてもよく、
又経日用液体製剤として用いる場合は、内用水剤、振盪
合剤、懸濁液剤、乳剤、シロップ剤の形態であってもよ
く、又使用する前に再溶解させる乾燥生成物の形態であ
ってもよい。さらに、このような液体製剤は普通用いら
れる添加剤、保存剤のいずれを含有してもよい。

注射用の場合には、その組成物は安定剤、緩衝剤、保存
剤、等張化剤などの添加剤を含んでいてもよく、単位投
５吊アンプル、又は多投与吊容器中で提供される。なお
、上記組成物は水溶液、懸濁液、溶液、油性または水性
ビヒクル中の乳液のような形態であってもよく、一方活
性成分は使用する前に適当なビヒクルたとえば発熱物質
不含の滅菌した水で再溶解させる粉末であってもよい。

本発明の抗ウィルス感染症剤は人間及び動物に経口的ま
たは非経口的に投与される。経口的投与は舌下投与を包
含する。非経口的投与は注射、例えば皮下、筋肉、静脈
注射、森滴などを含む。

本充用の抗ウィルス感染症剤の投与量は動物か人間によ
り、また年齢、個人差、病状などに影響されるので場合
によっては下記範囲外の量を投与する場合も生ずるが、
一般に人間を対象とする場合、本発明活性物質の経口投
与量は体重ＩＮ９．１日当り１０〜１０００■、好まし
くは２０〜６００■を１回から３回に分けて投与する。

友１ＪＬｊ− レトロウィルスはＲＮＡを遺伝子としてもち、感染した
細胞内で自前の逆転写酵素を使って、遺伝子ＲＮＡを鋳
型とするＤＮＡ合成を行う。逆転写１１１素はレトロウ
ィルスに特有の酵素であり、本実施例に於いて、本発明
物質が逆転写Ｉｌ素活性を阻害するか否かを調べた。

クレスチン２０１９を滅菌蒸留水１０　ｍに溶解し、２
．０．１．０．’０．５．０．２．０．１又は０．０５
ｒ１１ｇ／　ｄの濃度にＷ４叛した。１屑の２０ａ＋Ｈ
Ｄ、Ｔ、Ｔ、（ジチオスレイトール：シグマ社製）、５
屑の５倍濃度酵素反応液（２５０ｎＨＴｒｉｓ−１１Ｃ
１（ｐＨ８，３）−２５０ｍＨＫＣＩ　　−４０ｍＨＨ
ＣＩＣｊ　２　）、　１１１１の３ｄ　ＮＴＰ溶液（１
ｍＨｄＡＴＰ−ｉ１ｎＨｄＧ丁Ｐ−１ｍＨｄＴ丁Ｐ：シ
グマ社製）、２ｔ１ｉの　１００Ｎ　／　ｄオリゴ（ｄ
Ｔ）１２〜１Ｂ　（ＰＬ−ｂｉｏｃｈｃｍｉｃａｌｓ社
製）、　１成のメツセンジャーＲＮＡ　（正常ラット肝
臓由来：ｕｓ／１２）、　０．５ＩＪｉのｌｔＭａｓｅ
　Ｉｎ旧ｂｉｔｏｒ　（１６ｕｎｉｔ／成：宝酒造社製
）と１成の［α−・３２Ｐ］　　ｄＣ丁Ｐ（〜８００　
Ｃｉ／ｎｍｏｌ　、　１０μｃｉ／１１１：アマジャム
ジャパン社製）を１，５ｍ容Ｍのエツベンドルフチュー
ブに加え、３７℃ウォーターバス中におく。

５分後、先に調製した　１■／ｄ’ａ度のクレスチン１
２．５／ｌｌｊを反応デユープに添加し、更に　１成の
逆転写酵素（１ユニット／成：宝酒造社製、Ｉｔｏｕｓ
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ＶｉｒｌＪＳ由来）を加え、最
終反応液損を２５Ｊｉｉとして、３７℃で反応させた。

１時間１５Ｉｉｔの反応液を２ｃＩＩＸ２ａのＤＥＡＥ
紙（東洋濾紙社製）にしみこませ、風乾侵、濾紙１枚あ
たり１０−の０．５ＨＮ　ａ　２　ＨＰ　Ｏ４水溶液に
浸し、振罎しながら濾紙上のＬ）ＮＡ合成に使用されな
かったＥα−３２Ｐ　］　ｄＣＴＰを洗浄する。（この
操作を５分間おきに５回実施する。） そのｌ　１０ｄの液体シンチレータ」ンカクテル（アマ
ジャムジャパン社製）の入っているガラスバイアル瓶に
上記ＤＥＡＥ紙を入れ、シンブレーションカウンター（
アロノｊ社製）にて１分間放射活性（ｃ、ｐ、Ｉｌｌ、
）をカウントした。

２．０．０．５．０．２．０．１又４．ｔＯ，０５＋＋
！９／ｍｌ）りｔ／スチン溶液についても同様に試料を
調堅し、測定した。

阻害率（％）は以下の式により求めた。

Ｃ８：被験物質添加の放射活性 クレスチンの逆転写酵素活性阻害率を第１図に示す。

第１図から明らかなように、本発明物質は逆転写酵素活
性を週明に阻害した。

実施例　２ ウィルスは標的細胞に吸着、侵入し、標的細胞を利用し
て複製づる。本実施例に於いては、本発明物質がＩＩ　
Ｉ　Ｖのヒトリンパ球への吸着を阻害すと各クレスチン
溶液（Ｃ６１，０，２，０，４又は０．８１１１／ｄ）
１ｍを試験管に入れ、水中に静置した。２時Ｉ？ｆｉ後
各試験管から　１２のウィルス浮遊液をとり、ヒトリン
パ球由来細胞株ＭＴ−４１Ｊｏｎ、　Ｊ、　Ｃａｎｃａ
ｒｌｔｅｓ、　（Ｇａｎｎ）　、　２８．２？９−２２
９　（１９８２）ｌに多重感染度（１４，０，ｌ）ζ２
でウィルスを吸着させた。遠心（毎分２，０００回転、
１０分間）後、上清をすて沈澱したＨＴ−４細胞を２０
％ＦＣ８を含むＲＰＭ１１６４０（Ｇｉｂｃｏ　Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　ＮＹ）中に、細胞濃度２×１０
５／Ｉｄになるように遊離させた。９６穴プレートに上
記１４Ｔ−４細胞浮遊液を１００成づつ分注して、５％
Ｃｏ２．３７℃の条件下で培養した。培養３日日に間接
蛍光抗体法により）−１１Ｖ感染細胞と非感染細胞を算
出した。

すなわち、ＨＴ−４細胞をメタノール処理により固シア
ネート結合ウサギ抗ヒトＩｑＧ（免疫グロブリン）と３
７℃で反応させた。

蛍光顕微競上で５００個の）ＩＴ−４細胞を観察し、蛍
光陽性細胞をＨＩＶ感染細胞として算出した。

その結果を第２図に示す。

同図から明らかなように、本発明物質４００μ３／−以
上の添加により、）ＩＩＶのリンパ球への吸着は完全に
阻害された。

以上、実施例１〜２で述べてきたように、本発明物質は
ＨＩＶのヒトリンパ球への吸着阻害活性並びに逆転写酵
素阻害活性を有しており、ＨＩＶ感染症、即ちＡＩＤＳ
に有効であるといえる。

実施例　３ 圧力式自動充填機を用い、０号硬カプセルにクレスチン
を３００１１１９充填し、カプセルを作成した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、クレスチンの逆転写酵素活性阻害率を示す。 第２図は、ＨＩＶのリンパ球への吸着に対するクレスチ
ンの阻害活性を示す。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）カワラタケ属に属する担子菌を培養して得られる
   菌糸体又は子実体の熱水又はアルカリ溶液による抽出物
   であって、約１８〜３８％の蛋白質を含み、分子量が５
   ，０００以上（超遠心分離測定法）である蛋白多糖体を
   活性成分とする、レトロウィルス感染に有効な抗ウィル
   ス感染症剤。
2. （２）前記蛋白多糖体がクレスチンであることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項に記載の抗ウィルス感染症剤
   。
3. （３）レトロウィルスがヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩ
   Ｖ）であることを特徴とする特許請求の範囲第１項及び
   第２項に記載の抗ウィルス感染症剤。