JPS63313733A - 抗腫瘍剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は抗腫瘍剤、更に詳しくは、硫酸化多糖体と非ス
テロイド性抗エストロジエン剤を有効成分とする抗腫瘍
剤に関する。

〔従来の技術およびその課題〕

非ステロイド性抗エストロジエン剤は副作用が少ないこ
とから、乳癌、なかでも再発進行帰に対する長期内分泌
療法剤として広く用いられている。

斯かる内分泌療法は、化学療法に比べて緩解期間が長く
、副作用が少なく、手術侵襲もなく、シかも患者は在宅
治療が受けられるという利点があり、近年脚光をあびて
いる。

しかしながら、非ステロイド性抗エストロジエン剤の適
用はホルモン受容体を有するホルモン依存性癌に限られ
ており、当該癌に対する有効率は５０〜６０％であると
報告されているが、ホルモン非依存性癌に対する有効率
は１０％程度と極めて低い。しかも、ホルモン依存性癌
である乳癌細胞であっても、そのホルモン依存性は同−
神場内でも不均一であり、また治療期間中に当該依存性
の変化消失が生じ易いという問題があり、これらが内分
泌療法による治療を複雑にしていた。

〔課題を解決するための手段〕

斯かる実状において、本発明者らは、非ステロイド性抗
エストロジエン剤の有する利点をいかし、その有効性を
高め、更にその適応範囲を拡大すべく鋭意研究を行った
結果、これに硫酸化多糖体を併用すると血管新生抑制活
性が発現し、抗エストロジエン剤の抗腫瘍作用が著しく
増強されると共に、ホルモン非依存性固形腫瘍にも優れ
た効果を示すことを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、硫酸化多糖体及び非ステ四イド性
抗エストロジエン剤を有効成分とする抗腫瘍剤を提供す
るものである。

本発明において、非ステロイド性抗エストロジエン剤と
しては、例えばクロミツエン（ｃｌｏｍｉｐｈｅｎ　）
　、ナフオキシゾ：ｙ　（ｎａｆｏｘｉｄｉｎｅ）、タ
ーＥ　−？　シフ　ｘ　ｙ　（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ　）
　、さらに４−ヒドロキシタモキシフェン、Ｎ−デスメ
チルタモキシフェン等のタモキシフェン代謝物及びこれ
らの生理学的に許容される塩、例えばクエン酸等の有＋
１Ａ酸塩、塩酸等の無機酸塩等が挙げられる。

また、硫酸化多糖体としては、例えばへ、ｅリン、低分
子へ、Ｑリン及び本発明者によって製造されたＤ８４１
５２等が挙げられる。

硫酸化多糖体Ｌ）Ｓ４１５２は、アルスロバクタ−（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　）　ｓｐ、　ＡＴ　−２５（
工業技術院微生物工業技術研究所に、微工研条寄第１３
５７号として、また、同所にＭｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓｓ
ｐ、　ＡＴ　−２５なる名称で、微工研菌寄第５２５５
号として寄託されている）の培養物から分離されるＤＦ
４６３９（特開昭５６−６７３０１号参照）から、その
中に含まれる分子量約１５　Ｘ　１０’以上の発熱性物
質を適当な分子量分画法、例えばグル濾過法、限外濾過
法やアルコール沈澱法で除くことによって得られる。

すなわち、グル濾過法によればＤＦ４６３９を適当なグ
ル濾過担体、例えば、セファクリ／ｌ／　［５ｅｐｈａ
ｃｒｙｌ　Ｓ　−３００（ファルマシアＭ）］を用いて
ゲルＦ−１Ｍを行い、得られるフラクションについて高
速グル濾過クロマトグラフィー（東洋ンーダ製Ｇ３００
０　　ＳＷ　カラム使用）を行い、排除限界（ボイド・
ぎリューム、ｖｏｉｄ　ｖｏｌｕｍｅ　）にピークを示
すフラクション（Ｈ画分）とボイド・ボリュームにピー
クを与えず分子量約２　Ｘ　１０’〜８　Ｘ　１０’の
範囲に溶出されるフラクション（Ｌ画分）を各々集め、
透析する。

また、限外濾過は適当な膜（例えば１ｖｌｉｌｌｉｐｏ
ｒｅ社製のＰ’ｒＨＫ、　　Ａｍｌｃｏｎ社製のＹＭｔ
Ｏ１ＹＭ３０、ＸＭ５０、ＰＭ３０やＦｉｌｔｒｏｎ社
製のＮ０ＶＡＩ００、ＯＭＥＧＡＩ　ｏ　ｏ、Ｎ０ＶＡ
５０、ＯＭＥＧＡ５０　等％にＹＭＩＯ）を用い、窒素
ガスによる加圧またはべりスタルチツク（ｐｅｒｉｓｔ
ａｌｔｉｃ　）　＄ンゾによって加圧（０，５〜５にグ
／　ｃｒｌ程度）し、透過ｇをＩ）Ｓ４１５２として果
めればよい。使用溶媒は、水−エタノール（１０：２〜
３）または水が適当であり、４℃乃至室温で行うのが一
般的である。

得られた各透析内液を濃縮後濾過し、ろ液を数倍量のエ
タノール中に攪拌下注ぐことにより生成する白色沈澱を
集め、９０％エタノール、エタノール、アセトンの順に
洗った後、減圧乾燥すれば、目的とする硫酸化多糖体Ｄ
Ｓ４１５２　　（Ｌ画分）と発熱性物質（Ｈ画分）が各
々得られる。

こうして得られる４ＡＨ化多糖体ＤＳ４１５２は以下に
述べる物理化学的諸性質を示す。下記の物性はそのす）
　ＩＪウム塩についてのものである。

１）分子量（グル涙過法による主ピーク）２９．０００
±３，０００ ２）元素分析値（５０ツトの巾を示す）Ｃ２４，４２〜
２５．７６％　ｌ（３，３４〜３．９８％ＮＯ，５１〜
０．８９％　　８１０．６〜１１．７％Ｐ０．７７〜１
．０６％ ３）糖および蛋白質の含量 糖ｔ　ｉｃ％）：５６±２（フェノール−硫酸法、ガラ
クトース標準） 蛋白含量（％）＝１±０．５（ローリ−・フォリン法、
牛血清アルブミン標準） ４）比旋光度 〔α１２５３７°±１°　（０，５％水溶液）５）赤外
線吸収スペクトルにおける主要吸収帯 １２４０．８４０（肩）　ｐ　８１０　（ｍ−１；　Ｋ
Ｂｒ）６）　溶解性 水に易溶。エーテル、ベンゼン、クロロホルム、メタノ
ール、エタノール等の有機溶媒には殆ど不溶。

７）呈色反応 フェノール−硫酸、アンスロン−硫酸、ビユレット反応
およびローリ−・フォリン反応は陽性。氷解液のエルソ
ン・モルガン反応およびニンヒドリン反応も陽性。カル
ノ２ゾール反応および坂口反応は陰性。

８）塩基性、中性、酸性の区別 −６〜８（３％濃度水溶液） ９）構成糖および硫酸基、燐の含量 Ｄ−グルコース、Ｄ−ガラクトース、＄０３Ｎａおよび
Ｐ　（燐）の含Ｍモル比はＤ−グルコースを１０として
それぞれ約１０　：　６３　ニア３：６である。

１０）構成アミノ酸およびアミノ糖 酸加水分′１４４物のアミノ酸分析計による分析で、ア
ラニン、グリシン、グルタミン酸、シアミノピメリン酸
、グルコサミ／およびムラミン酸の存在を認める。

本発明の抗腫瘍剤は、硫酸化多糖体と非ステロイド性抗
エストロジエン剤をそれぞれの単剤に調製して組合せ剤
とするか、あるいは両成分を含む合剤とすることができ
る。剤形は、医学的に計容される担体、賦形剤を含有す
る種々の形態、例えば水または各棟の輸液用製剤に溶解
させた液剤、散剤、顆粒剤、錠剤等とすることができる
。

本発明の抗腫瘍剤は、静脈内、動脈内、経口、皮下、直
腸内、粘膜内または腫瘍局所内に投与することができる
。その投与量は、非ステロイド性抗エストロジエン剤は
一般に癌の治療に使用されている量、すなわち成人に対
し２０〜４０ｍ＋？／日が、また硫酸化多糖体は１〜１
０ｍｇ／日が好ましい。硫酸化多糖体及び非ステロイド
性抗エストロジエン剤はそれぞれ別個に投与しても、ま
た−緒に投与してもよい。

〔作用および効果〕

硫酸化多糖体と非ステロイド性抗エストロジエン剤を併
用した本発明抗腫瘍剤は、腫瘍血管の新生抑制作用、癌
の増殖抑制作用を有するので、広範囲の腫瘍に対して優
れた効果を奏する。

〔実施例〕

次に参考例及び実施例を挙げて更に詳細に説明する。

参考例Ｉ ＤＦ４６３９　　（５，Ｏｆ　）を１５−の０．ＩＭＮ
ａＣＡ！に溶解し、これを０．１　Ｍ　　Ｎａ（４で平
衡化したカラム（５，ＯＸ　８０　ｃｍ　；セファクリ
ルＳ−３００）にかけて同溶媒にて溶出し、１８ｄずつ
溶出液を集めた。得られたフラクションについて高速グ
ル濾過クロマトグラフィー（東洋ンーダｌｉ！　　Ｇ３
０００　　ＳＷ　　カラム、溶媒０．１Ｍ酢酸カリウム
緩衝液−６，５）を行い、ボイド・ボリュームに−一り
を与えず、分子量（デキストラン標準）が約２　Ｘ　１
０’〜８　Ｘ　１０’の範囲に溶出されるフラクション
を集め（約７００　ｍｌ　）　、脱イオン水に対して透
析した。透析内液を約５０−まで濃縮後濾過した。Ｆｇ
を約４００ｍ／のエタノール中へ攪拌下滴下して、生成
した沈澱を集め、これを９０％エタノール、エタノール
、アセトンの順に洗った後、減圧乾＄９４（５０℃、６
時間）してＤＳ４１５２の白色粉末３．８２を得た。斯
くして得られたＤＳ４１５２は前記した通りの物理化学
的性質を有し、その急性毒性（マウス、静注）は、ＬＤ
５ｏが２０００１９／Ｋｔ以上であった。

参考例２ ＤＦ４６３９　　（６，Ｏｒ）を３００ｄの水−エタノ
ール（１０：３）溶媒に溶解し、ＹＭＩＱ膜（４１，８
ｃｔ１ｉ、アミコン社製）を用いて、窒素で加圧（Ｌ　
５　Ｋｐ　／　ｃｒ／１　）下、室温で限外濾過した。

上記溶媒を追加しながら透過液量が約３１となるまで実
施した。透過液の濃縮液（約５０−）に１００■の酢酸
ナトリウムを加えて溶解した後、遠心分離により得られ
る上清を約５００−のエタノール中へ攪拌下滴下した。

生成した沈澱を集め、９０％エタノール、エタノール、
アセトンの順に洗った後、減圧乾燥（５５℃、５時間）
してＬ）Ｓ４１５２の白色粉末３．３ｔを得た。

このものの物理化学的性質は、参考例１で得たＤＳ４１
５２と同一であり、その糖、蛋白、Ｓ及びＰの含量は次
の通りであった。

糖含量　　５８％ Ｓ含量　　１１．３％ 蛋白含ｉ１０．９％ Ｐ含量　　０．９２％ 実施例１ 鶏胚漿尿膜血管新生阻止試験： ａ）直接法 鶏胚を用いる血管新生阻止試験はティラーとフォーク−
ｒ　ｙ　（Ｎａｔｕｒｅ　２９７　：　３０７　＋（１
９８２））の方法を一部改良した以下の方法で行った。

鶏（ノーリンクロス）の４〜５日齢受精卵の漿尿膜に、
生理食塩水に懸濁もしくは溶解させた抗エストロジエン
剤を単独で、または硫酸化多糖体と同時に添加し、３７
℃で培養した。薬物添加２日後に、漿尿膜血管の発達度
を、生理食塩水のみを添加した対照と比較した。

■　抗エストロジエン剤単独では血管新生に影響のない
１又は１０μｔをＤＳ４１５２の０．０１μｔと併用し
たときの結果は第１表のとおりであり、血管新生は２７
．４〜６７．６％抑制された。

以下余白 一部　コー ■　血管新生に影響のないクエン酸タモキシフェン１μ
ｔと硫酸化多糖体を併用したときの５０％血管新生阻止
量は第２表のとおりである。

第　　２　　表 生理食塩水に懸濁した抗エストロジエン剤（１００１１
１？／ゆ）に硫酸化多糖体を３０■／　ｋｐとなる様調
整して加え、ＩＣＲ系雄マウスに皮下もしくは経口で投
与し、６時間後に血液を採取した。０．３１３％クエン
酸ナトリウムで凝固を阻止し、前記直接法と同様に５日
齢受稍卵漿尿膜に採血した血液を添加し、２日後に血管
新生に及ぼす効果を判定した。生理食塩水を同量投与し
た対照マウスより採取した血液を添加した漿尿膜血管の
発達度を１００％とした時の値を第３表に示す。

第　　３　　表 ａ）　　ＩＣＲ系雄マウスに投与６時間目の血液を来血
液添加例の血管の発達度を１００％とした時の比率を示
す。

第３表から明らかなように、クエン酸タモキシフェン単
独投与では血管新生に何ら影響を与えなかったが、ＤＳ
−４１５２を３０１１ｕ／Ｋｐ皮下もしくは経口で併用
したマウスの血液はＣＡＭ血管の新生を著明に抑制し、
その効果は皮下投与の方が犬であった。

実施例２ 抗腫瘍試験： Ｃ３Ｈ／Ｈｅ雄マウス（５週齢）にマクス乳癌ＭＭ４６
を４　Ｘ　１０’個皮下接種し７日目に腫瘍径を計測後
ランダマイズした。一方ＩＣＲ系雄マウス（５週齢）Ｋ
Ｊｔサルコーマ１８〇２Ｏ− （８１８０）をＩ　Ｘ　１０’個皮下接種し、３日目に
マウスをランダマイズした。ＭＭ４５担癌１担癌１マ目
スおよび８１８０担癌３日目のマウスにクエン酸タモキ
シフェンの生理食塩水懸濁液を１日１回４日間投与した
。硫酸化多糖体は生理食塩水に溶解し、　３０　ｗｅ／
Ｋｙ／日もしくは３００轟ｙ　／　Ｋｙ　７日となる様
１日１回、４日間経口もしくは皮下投与し、投与開始５
日目に動物を層殺し、腫瘍重量を生理食塩水投与対照群
と比較した。その結果を第４表に示す。

以下余白 第４表に示す如く、クエン酸タモキシフェンを単独で投
与した場合、ＭＭ４６乳癌の増殖は軽度ながら抑制され
たが、８１８０肉腫の増殖には影響がなかった。ついで
クエン酸タモキシフェンを硫酸化多糖体と併用したとこ
ろ、クエン酸タモキシフェン感受性のＭＭ４６乳癌の増
殖抑制作用が著明に促進されたのみならず、クエン酸タ
モキシフェン非感受性の８１８０に対しても有意な腫瘍
増殖抑制効果が得られた。併用した硫酸化多糖体のなか
では、ＤＳ−４１５２の投与量が他の薬物の１／１０で
あったにもかかわらず最も著効を示した。

実施例３ ＤＳ−４１５２６１１９％クエン酸タモキシフェン２０
１１９、乳糖５０１１ｇ、トウモロコシデンノン１５．
５１１１？、カルボキシメチルセルロースカルシウム５
扉９、ヒドロキシゾロピルセルロース３１ｇ及びステア
リン酸マグネシウム０．５１１９を常法に従って１錠と
する。

以上

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、硫酸化多糖体及び非ステロイド性抗エストロジエン
   剤を有効成分とする抗腫瘍剤。