JPS6331199B2

JPS6331199B2 -

Info

Publication number: JPS6331199B2
Application number: JP870779A
Authority: JP
Inventors: Kazuhiro Kamya; Akio Iwasaki; Takeo Ideushi; Isamu Watanabe; Toshito Mori
Original assignee: Kowa Co Ltd
Current assignee: Kowa Co Ltd
Priority date: 1979-01-30
Filing date: 1979-01-30
Publication date: 1988-06-22
Also published as: JPS55102397A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、アプラマイシンの新規な製造法に関
する。アプラマイシンは下記の構造を有する抗生物質
であつて、ストレプトミセス・テネブラリウスの
代謝産物から（アンチミクロビアル・エイジエン
ツ・アンド・ケモセラピー第1967巻314頁参照）、
あるいはストレプトアロテイクス・ヒンズスタヌ
スの代謝産物から（特開昭53−20491号明細書参
照）採取できることが知られている。本発明者らは、このアプラマイシンがサツカロ
ポリスポラ・ヒルスタ（ATCC No.27875株）を
培養し、その培養液から分離採取することによ
り、工業的に有利に製造されることを見出した。本発明に使用されるサツカロポリスポラ・ヒル
スタATCC No.27875株（KCCカルチヤー・コレ
クシヨン・オブ・アクチノマイセテスのKCC Ａ
−0170と同じ）は公知の菌株で、その菌学的性質
はジヤーナル・オブ・ゼネラル・ミクロバイオロ
ジー第88巻75頁（1975年）に記載されている。し
かしこの菌株がこの種の抗生物質を生産すること
は、これまで報告されていない。本発明によれば、サツカロポリスポラ・ヒルス
タATCC No.27875株を炭素源及び窒素源を含む
水性栄養培地中で好気性条件下に培養すると、ア
プラマイシンが培養液中に生産される。炭素源と
しては種々のものが用いられるが、例えば殿粉、
グルコース、グリセリン、デキストリン、しよ
糖、果糖、糖蜜などを単独で又は組み合せて用い
ることが好ましい。さらに炭化水素、有機酸、植
物油なども用いられる。窒素源としては、例えば
大豆粉、酵母エキス、乾燥酵母、ペプトン、肉エ
キス、コーンステイープリカー、カザミノ酸、デ
イステイラーズソリユブル、塩化アンモニウム、
硫酸アンモニウム、尿素、硝酸ナトリウムなどが
単独で又は組み合わせて用いられる。そのほか必
要に応じ、例えば食塩、硫酸カリウム、硫酸マグ
ネシウム、水酸化カルシウム、塩化コバルト、硫
酸亜鉛、塩化鉄、硫酸鉄などの無機塩、ならびに
微量の重金属を添加することができる。さらに菌
の発育を助け、アプラマイシンの生産を促進する
有機及び無機物質を適宜に添加することができ
る。通気培養法を用いる場合には、さらに脂肪
油、シリコーン油、パラフインなどの消泡剤を用
いることが好ましい。培養方法としては、固体培地上での培養も可能
であるが、一般の抗生物質生産の方法と同様に液
体培養法、特に深部培養法を用いることが好まし
い。培養は好気的条件下で行われ、培養温度は15
〜40℃、好ましくは25〜30℃である。アプラマイシンの生産は、振盪培養又はタンク
培養のいずれの場合にも２〜６日間培養を行う
と、活性物質が培養液中に生産蓄積される。培養
液中の生産量が最大に達した時点で培養を停止
し、培養液から目的の抗生物質を単離精製する。培養液から本物質を単離精製するには、通常
の水溶性塩基性抗生物質の単離精製法を利用する
ことができる。例えばイオン交換樹脂、活性炭、
セルロース、シリカゲル、アルミナなどによる吸
脱着法、補助剤として高級脂肪酸を加えブタノー
ル、アミルアルコールなどで抽出する方法その他
を適当に組み合わせて用いることができる。培養液を弱酸性陽イオン交換樹脂の層に通す
と、目的物質が吸着される。これを0.1〜３規定
のアルカリ又は酸で溶出し、活性部分を凍結乾燥
すると、アプラマイシヘンの粗粉末が得られる。
この際用いられる弱酸性陽イオン交換樹脂として
は、例えばアンバーライトIRC−50、IRC−84又
はCG−50（ローム・アンド・ハース社製）、ダイ
ヤイオンWK−10又はWK−20（三菱化成社製）
などがあげられる。またアルカリとしては、例え
ばアンモニア水、水酸化ナトリウム水溶液など
が、酸としては例えば蟻酸、塩酸、硫酸などが用
いられる。培養液をPH７〜９に調整し、目的物質を活性
炭に吸着させ、酸性の水又は塩酸−メタノールで
溶出する方法も利用できる。こうして得られる粗粉末を、例えば弱酸性陽イ
オン交換樹脂、CM−セフアデツクス、CM−セ
ルロースなどに吸着させ、例えばアンモニア水、
蟻酸アンモニウム水溶液などを用いて濃度勾配法
又は濃度段階法で溶出することにより、アプラマ
イシンが遊離塩基として得られる。この遊離塩基を、さらに強塩基性イオン交換樹
脂、例えばダウエツクス１×２（ダウ・ケミカル
社製）のカラムに吸着させ、例えば水で溶出して
活性区分を集め、凍結乾燥することにより、純品
の遊離塩基を得ることができる。アプラマイシンの遊離塩基は常法に従つて酸付
加塩に導くことができる。酸としては、例えば硫
酸、塩酸、臭化水素酸、沃化水素酸、燐酸、炭
酸、硝酸等の無機酸、酢酸、フマル酸、リンゴ
酸、クエン酸、マンデル酸、コハク酸等の有機酸
が用いられる。実施例グリセリン2.0％、乾燥酵母1.5％、硫酸マグネ
シウム・七水塩0.05％、炭酸カルシウム0.3％、
綿実油0.5％及び食塩0.3％の組成を有する栄養培
地をPH7.0に調整したのち、500mlのエルレンマイ
ヤーフラスコ250本に50mlずつ分注して滅菌する。
この培地にサツカロポリスポラ・ヒルスタATCC
No.27875株のよく生育した寒天斜面培養物を接
種し、220rpmの回転振盪機上で27℃において５
日間培養すると、抗生物質の生産は最高に達す
る。この培養液をPH2.0に調整したのち過助剤を
用いて過し、得られた液約10をPH7.0に調
整する。生じた沈殿を去したのち、液をアン
バーライトIRC−50（NH₄ ⁺型）のカラム（500ml）
に付し、水洗したのち1N−アンモニア水で目的
物質を溶離する。活性画分を併せ、真空濃縮した
のち凍結乾燥すると、粗製の抗性物質１ｇが得ら
れる。この粗粉末を水100mlに溶解し、CM−セフア
デツクスＣ−25（NH₄ ⁺型）のカラム（2.2×35cm）
に吸着させ、水洗したのち0.01N−アンモニア水
と0.4N−アンモニア水との間で濃度勾配法によ
り目的物を溶離する。活性画分を集めて濃縮した
のち凍結乾燥すると、白色の粉末120mgが得られ
る。この粉末を少量の水に溶解し、ダウエツクス１
×２（OH^-型）のカラム（1.0×130cm）に付し、
水を展開液として溶出する。活性部分を集めて凍
結乾燥すると、純粋なアプラマイシン45mgが得ら
れる。元素分析値：アプラマイシンの分子式C₂₁H₄₁N₅O₁₁としてＣＨＮ計算値（％） 46.74 7.66 12.93 実測値（％） 46.33 7.38 12.56 NMR値：δ^TMS _D2Oppm 2.88（3H、ｓ、Ｎ−ＣH₃ ） 5.44（1H、ｄ、Ｊ＝80Hz、アノメリツクＨ） 5.70（1H、ｄ、Ｊ＝3.0Hz、アノメリツクＨ） 5.90（1H、ｄ、Ｊ＝3.0Hz、アノメリツクＨ）比旋光度：〔α〕²⁵ _D＋157゜（C0.5、H₂O）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム中にペレツトした赤外線吸収スペ
クトルは第１図に示すとおりである。薄層クロマトグラフイー：プレート：TLCアルミニウムシート・シリカ
ゲル60・F₂₅₄0.2mm（メルク社製）

【表】これらの諸性質から、本化合物はアプラマイシ
ンと同定された。

【図面の簡単な説明】

図面は、本発明方法により得られたアプラマイ
シンの赤外線吸収スペクトルである。

Claims

【特許請求の範囲】

１サツカロポリスポラ・ヒルスタ（ATCC
No.27875）株を培養し、培養液よりアプラマイ
シンを採取することを特徴とする、アプラマイシ
ンの製造法。