JPS63255265A - 新規な抗マラリア性アミノキノリン誘導体、該誘導体製造方法および該誘導体を含む薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は１人間のマラリア病、特にその組織形態の治療
に関する。より詳細には、抗マラリア性アミノキノリン
誘導体、この誘導体の製造方法およびこの誘導体を含む
薬組成物に関する。

［従来の技術および解決すべき課題］ マラリアが蔓延した地域に住む２５位の人間にとって、
この病気を征服しようとしてきた努力とその失敗が現在
までの成果に発展してきたことが想い起される。現在も
なお予防手段が施されていない望域に４億の人間が住ん
でいる。世界保険機関（ＷＨＯ）の見積りでは、５歳未
満の１００位人の幼児が毎年マラリアで死亡しており、
この状況はアフリカ大陸に限られている。

人類にマラリアをもたらすマラリア原虫には４つの種類
がある。これらは同様なライフサイクルを有し、アノフ
ェレス属（ハマダラ力）の雌の蚊を媒介として、人間に
寄生する。このうち熱帯性マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏ
ｄｉｕｍ　ｆａｌｅｉｐａｒｕｍ）　（悪性三日熱）が
最も重篤である。これは、致命的な脳性マラリアの併発
のもととなり、蔓延地域において幼児死亡の主要な原因
の１つである。三日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓ層ｏｄｉ
ｕ腸マ１ｖａｘ）および卵形マラリア原虫（Ｐ、　ｏｖ
ａｌｅ）　　（良性三日熱）は発病力が弱いが、ヒプノ
ゾイテス（ｈｙｐｎｏｚｏｉｔｅｓ）、肝臓内に潜伏形
態を生じる。これらの形態は、単一感染後長期間（２〜
５年間）遺存して再発する原因となる。四日熱原虫（Ｐ
、　ｍａｌａｒｉａｅ）はそれほど広範に広がっていな
いが、腎炎および致死腎症症候群などの慢性腎疾患の原
因となり、数年間も血液中に存続する。

マラリアの従来の治療においては、実質的に８−アミノ
キノリン類（プリマキン、キノサイド）で表わされる組
織裂虫撲減剤は、原因的予防能力がある。すなわち、熱
帯性マラリア原虫の場合において、−次（赤血球外）組
織形態の破壊による血液の感染の予防である。またこの
裂虫撲減剤は、三日熱マラリア原虫および卵形マラリア
原虫の二次組織形態の排除による根治治療能力がある。

３０年以上前に導入されたプリマキン、構造式１の６−
メドキシー８−（４−アミノ−１−メチルブチルアミノ
）キノリンは、人体内の三日熱マラリア原虫および卵形
マラリア原虫の潜伏組織形態に臨床的に有効であり、現
在も選択される薬剤である。

しかしながら、プリマキンは毒性があるために、その使
用が管理された臨床応用に限られる。

最も深刻な毒性は溶血現象であり、例えばグルコース−
６−リン酸脱水素酵素による赤血球発生欠乏である。メ
トヘモグロビン尿症、胃腸障害および中枢神経系への影
響もまた。プリマキンその他の８−アミノキノリン類の
著しい毒性効果である。

こうして、原因予防効果または根治治療効果のある多く
の抗マラリア薬剤の使用がきわめて制限されてきた。プ
リマキンは根治治療のための唯一の薬剤であるが、その
毒性副作用によって治療上の使用が著しく制限されてい
る。

８−アミノキノリン類に属する化合物だけが根治治療能
力があることに注目されたい、従って、毒性が治療効果
の高い抗マラリア薬剤の開発が望まれていた。

本発明の目的は、より有効な治療指数を有する新規な抗
マラリア性キノリン誘導体、特に新規な８−アミノキノ
リン誘導体を提供することである。

本発明の他の目的は、プリマキンなどの上記抗マラリア
性キノリン類の固有毒性を減少させ、肝臓組織形態に関
して特にプリマキンの活性を増大させることである。

本発明の他の目的は、上記のような誘導体を製造するた
めの新規な方法を提供することである。

本発明の他の目的は、上記のような誘導体を含む新規な
抗マラリア薬剤を提供することである。

［課題を解決するための手段］ 上記目的を達成するために、本発明に従った新規な抗マ
ラリア性アミノキノリン誘導体、特に新規なプリマキン
誘導体は、以下の式で表現される。

ＰＱ−Ｘ ただし、 ＰＱは、遊離アミノ基を含み抗マラリア特性を有するキ
ノリン類、特にプリマキンを示し；Ｘはアミノ酸または
２〜４のアミノ酸から成るペプチドであり、その１また
複数のアミノ酸は天然アミノ酸およびこれらの誘導体か
ら選ばれ、前記ｌのアミノ酸またはＰＱに隣接するペプ
チドの第１アミノ酸はＬ−ロイシン以外であり；かつＰ
Ｑ−Ｘ結合は、ＰＱの遊離アミノ基とＸの末端カルボキ
シル基との間の共有ペプチド結合である。

本発明に従った新規なアミノキノリン誘導体、特にプリ
マキンの新規誘導体の構造は次のとおりである。

本発明の適用において、アミノキノリンは、少なくとも
１つの遊離アミノ基を有するキノリン誘導体を意味する
ものであり、特に次のものを含む。

プリマキン［６−メドキシー８−（４−アミノ−１−メ
チルブチル−アミノ）−キノリン］を含む８−７ミノキ
ノリン類；および 側鎖の端部に第一アミノ基を有する他の８−アミノキノ
リン類、例えばキノサイド（ｑｕ　１ｎｏｃ　１ｄｅ）
［６−メドキシー８−（４−アミノペンチルアミノ）キ
ノリン］または５Ｎ３８８３　［６−メドキシー８−（
４−アミノブチルアミノ）キノリン］。

本発明はさらに変形例として、キノリン環状系（２−，
４−，２，４−，５−および４，５−位置における）お
よび側鎖（４−アミノ−１−アルキルブチルアミノ）を
含む他のプリマキン誘導体も含む。

プリマキンは酸化剤として機能し、赤血球の膜を不安定
化し、毒性の源である溶血現象を生じさせる。

本発明に従いアミノ酸またはペプチドを加えることによ
り、立体障害の結果として、赤血球へのプリマキンの貫
通が抑制される。

さらに驚くべきことは、後述するようにこれらの新規な
誘導体の活性が非常に増大したのである。

特に効果のある誘導体ＰＱ−Ｘは、Ｘがアミノ酸または
ジペプチドであり、ＰＱがプリマキンまたは他の抗マラ
リア性８−アミノ−キノリンである。

本発明に従った新規な誘導体ＰＱ−Ｘのうちで好適なも
のは、Ｘがアミノ酸のものである。

アミノ酸のなかでも、特にＬ−ロイシン、Ｌ−アラニン
、Ｄ−アラニン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−フェニルアラ
ニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−チロジンお
よびＬ−グルタミンを挙げることができる。

ここで注意すべきことは、プリマキンに結合したＬ−ロ
イシンは、その結合部またはアームの理由によりかつキ
ャリアーアーム−薬剤結合に関して、欧州特許出願３７
，３８８号で提案されていることである。事実、Ｌ−ロ
イシルプリマキンは血清中で安定であり、細胞内詣肪の
消化に晒されたときに遊離有効成分を再生する。しかし
ながら、非結合隣接り一ロイシンを有するＰＱ誘導体の
治療指数は、後述するように、本発明に係る誘導体のそ
れよりも低いことが分かった。

プリマキンの場合に特に価値のある治療活性が得られる
。すなわち、Ｌ−リシル−ＰＱ、Ｌ−フェニルアラニル
−ＰＱ、Ｌ−アラニル−ＰＱ、およびＬ−グルタミル−
ＰＱである。

毒性の実質的減少がＬ−グルタミル−ＰＱおよびＬ−ア
ラニル−ＰＱとともに得られる。

これら２つの効果の組み合わせ（治療能力と毒性減少）
が、誘導体Ｌ−グルタミル−ＰＱ（１６，１）　、　Ｌ
−アラニル−ＰＱ（７，５）およびＬ−フェニルアラニ
ル−ＰＱ（５，３）の場合において、治療指数の実質的
増大を可能にする。

プリマキンに第２のアミノ酸を付加することによって、
特に誘導体り一ロイシルーＬ−アラニル−ＰＱ（３，７
）とともに、治療指数が増大する。

本明細書においては、アミノキノリンのアミノ酸誘導体
またはアミノアシル誘導体は、本発明に従って前記アミ
ノキノリン上に１または複数のアミノ酸を合体させるこ
とにより得られる生成物を意味する。

ここで理解すべきことは、本発明の保護範囲から外れる
ことなしに、アミノキノリン（ＰＱ）原生酸物を置換す
ることができることである。ただし、アミノキノリンは
本発明に従って、ｌまたは複数のアミノ酸（Ｘ）が合体
すべきアミノ側鎖を含まなければならない。

原生酸物ＰＱおよび得られたＰＱ−Ｘ生成物は、酸を有
する加酸塩の形態をとることもできる。

本発明は、上記の抗マラリア性アミノキノリン誘導体、
特に新規なプリマキン誘導体を製造する方法をも対象と
している。

本発明に従った製造方法の木質的特徴において、アミノ
基が保護されている、酸形態のペプチドまたはアミノ酸
が、アミノキノリンまたは遊離アミノ基を含むその塩の
１つと、縮合剤の存在下で縮合反応する。

アミノ基を保護する基は在来の基であり、好ましくは第
三ブチルオキシカルボニル基である。

アミノ酸またはペプチドの酸性団は、例えばＮ−ヒドロ
キシコハク酸イミドを有するエステルの形態で活性化さ
れる。

一般的には、縮合剤はジチクロヘキシルカルポジイミド
などのカルボジイミドである。

本発明の製造方法の特定実施例に従えば、出発材料は、
例えばプリマキンニリン酸などの７ミノキノリン塩と、
アミノ基が例えば第三ブチルオキシカルボニル基により
保護されているアミノ酸またはペプチドとから成る。ま
た、この製造方法は以下の諸段階ａ）〜ｄ）から成る。

ａ）Ｘの酸性団を活性化するＮ−ヒドロキシコハク酸イ
ミドを、例えばＸのＮ−第三ブチルオキシカルボニル誘
導体などのＸの保護された誘導体と反応させる段階： ｂ）ＰＱを例えばアンモニア溶液でその塩から遊離させ
１例えばＸの保護された誘導体のＮ−ヒドロキシコハク
酸イミドエステルと反応させる段階； Ｃ）上記段階で得た粗製生成物をシリカゲル上のクロマ
トグラフで精製する段階；ならびにｄ）上記段階で得た
化合物上の例えば第三ブチルオキシカルボニル基などの
保護基を、酸、特にトリフルオロ酢酸の存在下で分裂さ
せて、塩、特にトリフルオロ酢酸塩の形態でＰＱ−Ｘ誘
導体を得る段階。

この保護基は事実上、形成されたペプチド結合を破壊し
ない条件下で除去される。

本発明の他の特徴に従えば、上記段階ｄ）で得た生成物
が逆相支持体上のクロマトグラフィで精製される。

この精製過程は、産業上は、カラムを直列に設定して行
なっても良い。

例えばトリフルオロ酢酸などの、酸含有水内のアセトニ
トリルの混合物が溶離剤として用いられる。

本発明の製造方法の他の特徴に従えば、トリフルオロ酢
酸塩カウンターアニオンが塩化水素酸と交換される。

酸化反応を阻止する目的のために、本発明の製造方法の
他の特徴に従い、誘導体の塩化水素酸塩を含む水溶液が
重亜硫酸ナトリウムで処理される。

本発明はさらに、上記の新規な誘導体またはこれらの薬
学的に回部な塩を有効成分として含有する薬組成物とも
対象としている。

本発明の他の特徴および利点は、以下の実施例の説明に
よって明らかになろう。

［実施例］ 裏Ｎ工二舅：プリマキンの７ミノアシルテニ体の立虞 プリマキンのアミノアシル誘導体は、２段階の工程で得
られる。プリマキンニリン酸塩と、アミノ基がＮ−ター
ト（ｔｅｒｔ、第三）−ブチルオキシカルボニル（Ｎ−
ｔＢｏｃ）　Ｔｉｓで保護されているアミノ酸とで、出
発する。

第１の段階は、プリマキン塩基と、アミノ酸のＮ−ｔＢ
ｏｃ誘導体のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルと
の反応から成る。

こうして得られた粗製生成物をシリカゲル上のクロマト
グラフィで精製する。得られた生成物を、十分に吸湿性
の形態（大体、結晶固体）で良好な収率（７０％）を以
って分離する。

次にｔＢｏｃ基を、トリフルオロ酢酸の存在下で、分裂
させる。プリマキンのアミノアシル誘導体をトリフルオ
ロ酢酸塩形態（おそらく、ジトリフルオロ酢酸塩）で得
る。

続いて精製工程を要する場合には、逆相クロマトグラフ
ィカラムを用意して、生成物をアセトニトリル／上２０
混合物で溶出する。

ＮＨ４０Ｈを用いてアミノアシル−Ｐ（ｌのトリフルオ
ロ酢酸塩を含有する水溶液をｐＨ８に中和し、その後ジ
クロロメタンを用いて活発に抽出することによって、プ
リマキンの７ミノアシル誘導体を遊離塩基形態で得るこ
とができるｒＣＨ２Ｃ見２の蒸発後に緑色の油分を得る
。この油分は扱いが難しく、シリカゲルカラム上でＣＨ
２Ｃ１２／Ｅ　ｔ　ＯＨ／ＮＨ４０Ｈ（１２０：２０：
１）混合物で溶出するクロマトグラフィによって精製す
ること４＜できる。

逆相方ラムクロマトグラフィ技法を用いたプリマキンの
アミノアシル誘導体（トリフルオロ酢酸塩形態）の精製
過程において用いたカラムは、Ｍｅｒｃｋ　Ｌｏｂａｒ
　８カラムである。支持体は、Ｃ８残基で結合したシリ
カである。誘導体がカラム上で酸化することを防ぐため
に、溶出溶媒を注意深く脱ガスする。同じ目的のために
、他のタイプの結合シリカ、特に完全に鉱物除去したシ
リカを固相をみなすことができる。水性酸媒体内で溶解
した粗製生成物をカラムのヘッドで吸収する０次に、脱
塩工程を実行（Ｈ２０／Ｈ゛）［、、その後Ｈ２０／Ｈ
・内のＣＨ３ＣＮ勾配（ＣＨ３ＣＮｇｒａｄｉｅｎｔ　
ｉｎ　Ｈ２０／Ｈ・）を用いて生成物を溶出する。溶離
物を分画する。生成物を含む両分（オレンジ争イエロー
画分）をＨＰＬＣで分析する。９８％以上の純度で生成
物を含有するものを集めて凍結乾燥する。明るいオレン
ジイエローの粉末を得る９次に、トリフルオロ酢酸塩の
重量に基づく計算の結果２当量の酸に大体対応する量の
水性ＨＣｕをトリフルオロ酢酸塩の水溶液に添加するこ
とによって、トリフルオロ酢酸塩カウンターアニオンを
塩化水素酸と交換する。得られた溶液（ｐ　Ｈ２，８〜
３）を光を遮断して凍結乾燥する（２凍結乾燥）、得ら
れた生成物は、非常に吸湿性の明るいオレンジ色の粉末
の形態をとる。不活性雰囲気（アルゴン）の下に貯えた
ときでも、生成物は時間の経過とともにかなり急速に分
解する。光から遮断した０℃の生理学的媒体または水溶
液の溶液中でも安定性に限界があることを示す。

キノリン環状系は、酸化反応の特に感度の高い対象であ
る。酸化反応は、上記不安定性の一因である。これらの
酸化反応を阻止する目的のために、トリフルオロ酢酸塩
を含有する水溶液を重亜硫酸ナトリウム（０，１％）で
処理する。

ＣＨ３ＣＮ対Ｈ２０／Ｈ・の相対的比率は、ブリマキン
に結合（ｇｒａｆｔ）するアミノ酸の性質および数に従
って変化する。

０、ｅｌｇ（５，３ミリモル（ＩＩａｏｌ）のＮ−ヒド
ロオキシコハク酸イミドと１．０９ｇ（５，３厘履０１
）のジチクロへキシルカルボジイミドとを、０℃に維持
した１０ミリリットル（ｍｕ）のジグライム（ｄｉｇｌ
ｙｍｅ）内に溶解した１　ｇ　（５，９＋＊ｍｏｌ）の
Ｎ−ｔＢｏｃ−アラニンに加える。４時間の反応後、１
．３７ｇ（５，３１鳳０１）のプリマキン塩基を加える
。２５％濃度のアンモニア溶液の作用によって、プリマ
キンニリン酸からプリマキン塩基を分離する。１７時間
後に、ジチクロへキシルウレア（ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘ
ｙｌｕｒｅａ）を濾過し・溶媒を真空下で除去する。得
られた褐色油分をＣＨｚＣＪＬｚ内に溶解し、水で洗浄
する。有機相を硫酸ナトリウム上で除去し、濾過し蒸発
する。

ジクロロメタン／メタノール混合物を溶離剤として用い
たシリカゲル上で、生成物を精製する。精製画分を集め
て溶離剤を蒸発させ、１．５ｇ（８８％）の十分吸湿性
の大体結晶状の生成を得る。

ＮＭＲ：　　（ＣＤＣｕ３−ＴＭＳ）：１．２−１．７
（ｍ、１９Ｈ）　；３．３（ｍ、２ｈ）；３．１３４（
ｍ、ＩＨ）　；３．９（ｓ、３Ｈ）；４．０？（ｍ、Ｉ
Ｈ）；５（ｍ、ＩＨ）；８（ｍ、ＩＨ）；８．２（ｍ、
ＩＨ）；５．２Ｂ（ｄ、ＩＨ）；８．３３（Ｄ、ＩＨ）
；７．３（ｄｄ、ＩＨ）；７．９（ｄｄ、ＩＨ）　；８
．５（ｄｄ、ＩＨ）。

上で得た化合物を、ジクロロメタンとトリフルオロ酢酸
の１対１混金物の１５ｍｆＬ中に溶解する。この混合物
を室温で３０分間攪拌する。溶媒を真空下で蒸発し、残
渣を水に入れ、ジイソプロピルエーテルで数回洗浄する
。

必要ならば、溶離剤として１％のトリフルオロ酢酸を含
む水の中の２５％のアセトニトリルの混合物を用いた逆
相クロマトグラフィ（ＭｅｒｃｋＬｏｂａｒ　８）によ
って生成物を精製する。精製画分（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）を集
めて、アセトニトリルを真空上で除去した。２回の凍結
乾燥サイクルの後に、ｔ、ｅｇ（８０２）の吸湿性用　
色粉末を得る。

ＮＭＲ：　　（Ｄ２０−外部参照（ｅｘｔｅｒｎａｌ　
ｒｅｆ、）：ＩＪ５−１．５０（ｍ、８Ｈ）：１．８８
（ｉ＋、４Ｈ）；３．４５（ｍ、２Ｈ）；５（ｍ、ＩＨ
）　；４．１？（層、４ｈ）；７．０８（ｓ、ＩＨ）；
７．１３（ｄ、ＩＨ）　；７．９３（ｄｄ、ＩＨ）　；
８．８５（ｄ、ＩＭ）　；８．８８（ｄ、ＩＨ）。

実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する。最
初プリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−Ｄ−アラニンによっ
て、その後トリフルオロ酢酸（５２％）を用いたアミノ
基の保護解除によって、対象とする化合物を分離する。

ＮＭＲ：　（ＣＤ３０Ｈ−ｅｘＬ　ｒｅｆ、）：１．４
０（ｄ、３Ｈ）　；１．５４（ｄｄ、３Ｈ）　；１，８
０（ｍ、４Ｈ）　；３．８０（脂、ＩＨ）；３．９４（
ｑ、ＩＨ）；４（ｓ、３８）；８．８（ｓ、２Ｈ）；７
．３５（ｄｄ、ＩＨ）；８．３７（層、ＩＨ）；８．８
８（ｄｄ、ＩＨ）。

実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する。最
初プリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−Ｌ−ロイシンによっ
て、その後トリフルオロ酢酸（７０％）を用いたアミノ
基の保護解除によって、対象とする化合物を分離する。

ＮＭＲ：　　（Ｈ２０−ｅｘｔ、　ｒｅｆ、）：０．７
１−０．８１（層、ｆｉＨ）；１．２８（ｄ、３Ｈ）；
１．４−１．７（層、７Ｈ）；３−３．２（ｍ、ＩＨ）
；３．２Ｂ−３，５（ｍ、ＩＨ）；３．８−４（層。

５Ｈ）　；８．８−８．９（ｍ、２Ｈ）　；７．６５−
７．７２（層、ＩＨ）　；８．５２（ｄ、ＩＨ）、８．
６３（ｄ、ＩＨ）。

実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する、最
初プリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−Ｄ−ロイシンによっ
て、その後トリフルオロ酢酸（７８％）を用いたアミノ
基の保護解除によって、対象とする化合物を分離する。

凡ＭＲ：　　（ＣＤ３００−ｅｘｔ、　ｒｅｆ、）：１
．０５（腸、８Ｈ）；１．４（ｄ、３Ｈ）；１．７７（
ｍ、８Ｈ）；３．３Ｅｌ（ｍ、２Ｈ）　；３．７（ｍ、
２１）　；４（ｓ、３Ｈ）　；Ｅｌ、８８（ｓ、２Ｈ）
　；７．８？（ｄｄ　、ＩＨ）　；８．４ｅ（ｄｄｄ、
ＩＨ）　；８．７２（ｄｄ、　ＩＨ）　。

実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する。最
初プリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−Ｌ−フェニルアラニ
ンによって、その後トリフルオロ酢酸（７９％）を用い
たアミノ基の保護解除によって、対象とする化合物を分
離する。

ＮＭＲ：　（ＣＤ３０Ｄ　−ｅｘＬ　ｒｅｆ、）、　１
．３５（ｄｄ、３Ｈ）；ＩＪ２（閣、４Ｈ）；３．ｌＧ
（■、２Ｈ）　：３．４０（ｍ、２Ｈ）；３．７１（＋
、ＩＨ）　；３．９２（ｄ、３Ｈ）；４．０３（ｄｔ、
ＩＨ）；８．３８（ｍ、　ＩＨ）　；８．５３（ｍ、　
ＩＨ）　；７．３２（ｍ、５Ｈ）　；７．４Ｂ（ｄｄ、
ＩＨ）；８．１３（ｍ、ＩＨ）；８．５９（ｄｄ、ＩＨ
）。

ジアミノの合成 実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する。最
初にプリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−Ｌ−リジンによっ
て、その後トリフルオロ酢酸を用いたアミノ基の保護解
除によって、対象とする化合物を分離する。

実例工で述べた手順に続いて、次の手順を実行する。最
初にプリマキンおよびＮ−ｔＢｏｃ−グルタミン酸によ
って、その後トリフルオロ酢酸を用いたアミノ基の保護
解除によって、対象とする化合物を分離する。

３６６ｍｇ　（３ｍ　ｍｏｌ　）のＮ−ヒドロキシコハ
ク酸イミドとＥｌ、３ｍｇ（３鳳薦ｏ１）のジチクロヘ
キシル力ルポジイミドとを、０℃に維持した７ｒｎｌの
ジメチルホルムアミド中に溶解した６８６■ｇ（３層ｍ
ｏｌ）のＮ−ｔＢｏｃ−ロイシンに加える。

反応を２４時間４℃に維持する。

それとは別個に、７ｍ９．のジクロロメタン中のＬ−７
ラニルプリマキンのトリフルオロ酢酸塩の１．５ｇ（２
，７ｍ　ｍｏｌ）の溶液を用意し、そこに５９３４１　
（５，４層層０１）のＮ−メチルモルフォリンを加える
。

２０℃における２４時間の反応の後に、溶媒を蒸発させ
る。そうして得た褐色油分を酢酸エチル中に溶解する０
次に有機相を水で５回洗浄する。

水性相を集めて、酢酸エチルで１回抽出する。有機相を
集めて、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、蒸発させ
る。得られた褐色油分を最小量の酢酸エチル中に溶解し
、４００ｍＪｌの５０対５０酢酸工チル／ヘキサン混合
物で、次に４００ｍＪ１の純粋酢酸エチルで溶出するシ
リカゲルカラム上で精製する。精製画分を集めて、蒸発
乾燥させる。

それにより、１ｇのＮ−ｔＢｏｃ−Ｌ−ロイシル−Ｌ−
アラニループリマギンが得られる。

この生成物を保護解除反応に直接に晒す、すなわち、室
温で３０分間、５ｍ４のジクロロメタンと５ｍＭのトリ
フルオロ酢酸の混合物に晒す。

溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を水中に入れ、ジエチル
エーテル、ジイソプロピルエーテルおよびヘキサンのｌ
対１対１混合物で抽出する８次に水性相を凍結乾燥する
。２回の凍結乾燥後に、１．２ｇ（８６＄）のジペプチ
ドが得られる。

げっ歯頚マラリアモデル、げっ索類住血胞子虫−アノフ
ェレス串ステフェンサイ（Ｐｌａｓ厘ｏｄｉｕ＋ｓｂｅ
ｒｇｈｅｉ−Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ　５ｔｅｐｈｅｎｓｉ
）　−マウス（ＭＯＳＴ、Ｈ，、ＨＥＲＭＡＮ、Ｒおよ
び５ＣＨＯＥＮＦＥＬＤ、Ｃ，（１９Ｂ？）Ａｍ、Ｊ、
Ｔｒｏｐ、Ｍｅｄ、Ｈｙｇ、１８，５７２〜５７５によ
って発育されたもの）を用いる。このモデルにより、新
規な治療化合物の原因的予防（組織裂虫撲減）能力を決
定することができる。用いた手順は、ＭＯＳＴ、Ｈ，＆
ＭＯＮＴＵＯＲＩ、Ｗ、Ａ、　（１９７５）Ａｍ、Ｊ、
Ｔｒｏｐ、Ｍｅｄ。

Ｈｙｇ、２４，１７９〜１８２の記載から得られる。用
いた系は、げっ書類住血胞子虫（Ｐ、ｂｅｒｇｈｅｉ　
ｂｓｒｇｈｅｉ）（ＡＮＫＡ）−７ノフエレス争ステフ
ェンサイ−０ＦＩスイスマウスである。げっ書類住血胞
子虫のＡＮＫＡ種を７ノフエレス参ステフエンサイ上に
周期的に維持する。ＯＦ１種スイスイスマウス不変的に
致命的感染をもたらずげっ書類住血胞子虫に特に敏感で
ある。

文例ｙ：蚊からの掃去（ｓｐａｒｏｚｏｉｔｅｓ）の分
離　よｆ尖象ｍ望迭 雌の蚊（１実験あたり８０〜１００個体）から脚、羽、
腹部を剥奪し、１０％の牛胎児血清を含むＭ１９９培養
基（ＧＩＢＣＯ）内でガラスボッターを用いて４℃で均
質化する０次に連続する２回の遠心分１＠（５０ｇで２
分間、２００ｇで５分間）によって、先出懸濁物から蚊
の破片を取り除いて純化し、集めた上澄を４℃で保存す
る。

ペトロフーハウサー室内での計数の後に、上記と同様な
冷却培養基で希釈することにより、寄生虫の数を２Ｘ１
０５種虫／ｍ文の密度に調節する。

全工程は常に最３５分間内に終了し、掃去の生活力およ
び感染力の保存が可能である。

１０５種虫先金む０．５ｍ文の懸濁物を体重１８〜２２
ｇの雌のＯＦＩスイスマウスに生体内注射し、これを治
療テストに用いる。

夾狼ス：化笠療抹狼１１ 上記のように感染させた２０〜２５匹のマウスの各グル
ープについて、捕虫接種の３時間後に、プリマキンニリ
ン酸塩（Ｐ　ｑ）またはジヒドロクロライド形態におけ
るプリマキンのモノアシルおよびアミノ酸誘導体（Ｘ−
Ｐｑ）を−回静脈注射する。注射の体積は、体重２５ｇ
に対し０．５　ｍＭを基準として、マウスの体積に従っ
て調節する。

化合物をリン酸緩衝塩溶液（ＰＢＳ）、ｐＨ７，０内で
希釈し、ｐＨを７．０に調節する。感染させた未処置マ
ウス（グループあたり５匹）には緩衝液□のみを与え、
掃去の感染状況を観察する。

Ｘ勇Ａ：プリマキンの　能評価に　いたパラメ辷 実験したマウスを５０日間飼育する。寄生虫血症の発現
の後に、５日目から１５５日目での毎日、ｐＨ７，２の
ゼーレンセン緩衝液内の５％ギームサで６０分間染色し
た血液塗抹標本を検査する。こうして感染した動物の数
を決定できる。この結果より長期間生存率（ＬＴＳ、寄
生虫がなく生存するマウスの数／感染され処置されたマ
ウスの数〕を計算することができる。

ドーズ量（ｍｇ　　Ｐｑ、／ｋｇ）の関数としての応答
（ＬＴＳの％表示）のロジット（Ｌｏｇｉｔｓ、対数表
現）を解析することにより、原因的予防能力（ＣＰＤ５
０）が得られる。

ワルフルスト（Ｗａｒｈｕｒｓｔ’ｓ）の２％テストに
基づき、ＧＲＥＧＯＲＹ、に、Ｇ、＆　ＰＥＴＥＲ８，
Ｗ、（１９７０）Ａｎｎ、Ｔｒｏｐ。

Ｍｅｄ、Ｐａｒａｓｉｔｏｌ、Ｅｔ４，１５〜２４の方
法によって、初期赤血球形態に対する薬剤の潜在的残余
効果（赤血球裂虫撲滅効果）を決定する。

丈盈厘：化立糎立皇性久呈犬 単−投与量の関数としての急性毒性を１８〜２２ｇの体
重のマウスについて決定する。各化合物の一連の希釈液
をマウス１０匹の各グループに静脈注射する。注射ドー
ズ量（Ｐｑニリン酸塩当量ｍｇ／ｋｇ）の対数関数とし
ての、生存動物の百分率のロジットの線形回帰によって
、未感染マウスの５０％の致死量（Ｌ０５０）が決定さ
れる。

次の文献を参照されたい。

Ｌｏｇｉｔ　Ｗｅｉｇｈｔｅｄ　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａ
ｔｉｏｎ；ＢＥＲＫＳＯＮ、Ｊ。

（１９５３）Ｊ、Ａｍ、５ｔａｔ、Ａ＋ｓｏｃ、４８．
５Ｅ１５〜５９９げっ歯齦住血胞子虫の掃去で感染させ
たマウスについて、３時間後に、本発明の化合物を一回
静脈注射する。このテストの結果、本発明の化合物の原
因的予防能力、または感染動物の５０％を治療させるド
ーズ量（ＣＰ０５０）が決定される。

ドーズ量は常に、ｋｇあたりのＰｑニリン酸塩のｍｇと
して表現する。

プリマキンならびにそのアミノ酸誘導体およびジペプチ
ド誘導体の毒性の結果をテーブル１に示す、プリマキン
およびその異なる誘導体の原因的予防能力（＋３時間）
の結果をテーブル３〜テーブル８に示し、テーブル２に
要約を示す。

プリマキン（テーブル３）の場合、最小有効ドーズ量（
ＥＪ＋　）は１０．４ｍｇ　　Ｐ　ｑ　／　ｋ　ｇであ
る。プリマキン（Ｐ　ｑ）の原因的予防効能（ＣＰＤｓ
ｏ）は１８．７ｍｇ　　Ｐ　ｑ／　ｋ　ｇである。

２５　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇおよびそれ以上におけるＰｑ
の毒性の結果として、治療装置能力を得ることは不可能
である。２５ｍｇ／ｋＨにおける治療能力は７５％であ
る。　Ｐｑ　（プリマキン）の毒性に関する結果もまた
テーブル１に示す、最大許容ドーズ量（ＭＴＤ）は２５
．７ｍｇ　　Ｐ　ｑ／　ｋ　ｇであり。

５０％致死ドーズ１（ＬＤｓｏ）は３１ｍｇ／ｋｇであ
る。Ｐｑの治療指数（ＬＤｓｏ対ＣＰＤｓｏの比率）は
１．７である。

第１の誘導体、Ｌ−ロイシル−Ｐｑ（テーブル２）は、
Ｐｑよりもわずかに能力が高い、最小有効ドーズ量およ
びＣＰＤ５０はそれぞれ、？、８ｍｇＰｑ／ｋｇおよび
ＩＥｌ、２Ｆ（１／ｌｃｇである。３０ｍｇ　　Ｐｑ／
ｋｇのドーズ量において、完全治療処置（１００％）が
得られる。Ｐｑ指数は、わずかに１．２である。

（別表テーブル１）　　　　　・ （別表テーブル２） （別表テーブル３） Ｌ−アラニル−Ｐｑ（テーブル４）は、Ｐｑやそのロイ
シル−Ｐｑ誘導体よりも著しく高い治療能力を有する。

最小有効ドーズ量は４　ｍ　ｇＰｑ／ｋｇであり、ＣＰ
Ｄｓｏは８．３ｍｇＰｑ／ｋｇである。９．９　ｍｇ　
　Ｐｑ／ｋｇのドーズ量は完全治療能力がある。Ｐｑの
指数は３．０であり、Ｌ−アラニル−Ｐｑの治療指数は
７．５である。

この誘導体は、プリマキン（テーブル１）よりも毒性が
低い。

こうしてＬ−アラニンの場合に特に利益ある結果が得ら
れた。特に抗マラリア能力は、プリマキンベースのそれ
よりも大体４倍大きかった。

Ｄ−アラニンもまた。毒性が非常に低いという利点があ
る。事実、Ｄ生成物との結合の可逆性は低い、こうして
、赤血球中への代謝物貫入は少量となる。

（別表テーブル４） Ｌ−フェニル−アラニル−Ｐｑの原因的予防能力をテー
ブル５に示す、この誘導体のＣＰＤｓｏは８．１ｍｇ　
　Ｐｑ／ｋｇであり、３．１（７）Ｐｑ指数を与える。

最小有効ドーズ量は１．８ｍｇＰｑ／ｋｇである。この
誘導体は２１．３ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇのドーズ量で完全
治療性である。この化合物の毒性は、Ｐｑのそれに類似
する。治療指数は５．３である。

Ｌ−リシル−ＰｑもまたＰｑよりも著しく治療能力があ
り、３．９ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇのＣＰＤｓ。

８ＪＣヒ４．８　（７）Ｐ　ｑｗ１＠を示す（テーブル
６）、最小有効ドーズ量は、１．７ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇ
である。にもかかわらず、この化合物の毒性は高いドー
ズ量において初めて見出される。８．２ｍｇＰｑ／ｋｇ
の最小毒性ドーズ量において、この化合物は完全治療性
である。治療指数は、Ｐｑのそれ（２，８）よりも大き
い。

Ｌ−グルタミン酸またはＬ−グルタミンの付加によって
、プリマキンの効能が増大する（テーブル７）、これら
のＣＰＤｓｏの値はそれぞれ。

８．５ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇおよび１０ｍｇＰｑ／ｋｇで
ある。Ｐｑ積指数それぞれ、２．２および１．９である
。誘導体Ｌ−グルタミル−Ｐｑの毒性は低い、ＭＴＤは
１２４ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇ　（ＰｑのＭＴＤよりも５倍
大きい）であり、ＬＤｓｏは１３６ｍｇ　　Ｐｑ／ｋｇ
　（ＰｑのＬＤｓｏよりも４倍大きい）である。

プリマキンの最後の３種のアミノ酸誘導体、スフシリル
（ｓｕｃｃｉｎｉｙｌ）　−Ｌ−７ラニルーｐｑ、スク
シニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｐｑおよびグルタリル
（ｇｌｕｔａｒｙｌ）　−Ｐ　ｑは、Ｐｑよりも能力が
著しく低い。

（別表テーブル５） 、（別表テーブル６） （別表テーブル７） （別表テーブル８） ［発明の効果］ 上記の全ての化合物についてその他の効果を実験した。

上記のどの化合物も、ＣＰＤｓｏおよびＥ　Ｄ　＋ｏｏ
　に対応する濃度において、初期血液形態（肝臓の分裂
小体）を阻止する能力を示さなかった。従って、得られ
た治療効果は、肝臓（赤血球外）形態の破壊から生じる
ものであり、真正の原因的予防能力を表わすものである
。

マラリアモデルで得た結果から明白なことは、ペプチド
結合を介してプリマキンの側鎖にアミノ酸を付加するこ
とによって、プリマキンの治療能力が増大し、しかも急
性毒性が実質的に減少したことである。

Ｐｑ積指数基づけば、Ｌ−リシル−Ｐｑ（４，８）　、
　Ｌ−フェニルアラニル−Ｐｑ（３，１）、Ｌ−アラニ
ル−Ｐｑ（３，０）およびＬ−グルタミル−Ｐｑ（２，
２）の場合に最良の治療能力が得られる。他のプリマキ
ン誘導体の治療能力はプリマキンのそれと同様である。

プリマキンおよびその誘導体の急性毒性に関しては、Ｌ
−グルタミル−Ｐｑ、Ｌ−アラニル−ＰｑおＪ：びＬ−
アラニル−ロイシル−Ｐｑの場合に最良の毒性減少が得
られる。Ｌ−リシル−Ｐｑの場合は、プリマキンよりも
著しく毒性が高い（３倍）。

これら２つの効果（治療能力および低毒性）を合わせる
と、治療薬としてきわめてすぐれた効果を奏する。特に
治療指数の高い誘導体Ｌ−グルタミル−Ｐｑ　（１８，
１）　、　Ｌ−アラニル−Ｐ　ｑ　（７，５）およびＬ
−フェニルアラニル−Ｐｑ（５，３）の場合に高い治療
効果が得られる。

プリマキンにｆ５２のアミノ酸を付加することによって
、治療指数が増大し、特に誘導体り一ロイシルーＬ−７
ラニルーＰｑ（３−７）の場合に治療指数が増大する。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. （１）遊離アミノ基を含み抗マラリア特性を有し、以下
   の式で略示される新規なキノリン誘導体、特にプリマキ
   ン誘導体またはそれらの酸含有加成塩： ＰＱ−Ｘ ただし、 ＰＱは、遊離アミノ基を含み抗マラリア特性を有するキ
   ノリン類、特にプリマキンを示し；Ｘはアミノ酸または
   ２〜４のアミノ酸から成るペプチドであり、その１また
   複数のアミノ酸は天然アミノ酸およびこれらの誘導体か
   ら選ばれ、前記１のアミノ酸またはＰＱに隣接するペプ
   チドの第１アミノ酸はＬ−ロイシン以外であり；かつＰ
   Ｑ−Ｘ結合は、ＰＱの遊離アミノ基とＸの末端カルボキ
   シル基との間の共有ペプチド結合である。
2. （２）ＰＱがプリマキンおよび他の抗マラリア性８−ア
   ミノキノリンから選ばれ；かつ Ｘがアミノ酸またはジペプチドである； ことを特徴とする請求の範囲１記載の新規な誘導体。
3. （３）Ｘが、Ｄ−ロイシン、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニ
   ン、Ｌ−インロイシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−グ
   ルタミン酸、Ｌ−リジン、Ｌ−チロジンおよびＬ−グル
   タミンから選んだアミノ酸である； ことを特徴とする請求の範囲１記載の新規な誘導体。
4. （４）ＰＱがプリマキンであり；かつ Ｘが、Ｌ−アラニン、Ｌ−リジン、Ｌ−フェニルアラニ
   ンおよびＬ−グルタミン酸から選ばれる； ことを特徴とする請求の範囲１記載の新規な誘導体。
5. （５）ＰＱ−ＸがＬ−ロイシル−Ｌ−アラニル−ＰＱを
   示し；かつ ＰＱがプリマキンである； ことを特徴とする請求の範囲１記載の新規な誘導体。
6. （６）請求の範囲１記載の新規な誘導体を製造するため
   の方法であって： アミノ基が選択的に保護されているＸを、縮合剤の存在
   下で、ＰＱまたはその遊離アミノ基を含む塩の１つと縮
   合反応させて、ＰＱ−Ｘペプチド結合を形成する方法。
7. （７）前記のアミノ基を保護する基が、在来の基であり
   、好ましくは第三ブチルオキシカルボニル基である； ことを特徴とする請求の範囲６記載の方法。
8. （８）前記アミノ酸またはペプチドの酸性団が、Ｎ−ヒ
   ドロキシコハク酸イミドを有するエステルの形態で活性
   化される； ことを特徴とする請求の範囲６記載の方法。
9. （９）出発材料が、アミノキノリン（ＰＱ）塩、好まし
   くはプリマキン二リン酸塩と、アミノ基が例えば第三ブ
   チルオキシカルボニル基により保護されているアミノ酸
   またはペプチド（Ｘ）とであり、以下の諸段階ａ）〜ｄ
   ）から成る請求の範囲６記載の方法： ａ）Ｘの酸性団を活性化するＮ−ヒドロキシコハク酸イ
   ミドを、例えばＸのＮ−第三ブチルオキシカルボニル誘
   導体などのＸの保護された誘導体と反応させる段階； ｂ）ＰＱを例えばアンモニア溶液でその塩から遊離させ
   、例えばＸの保護された誘導体のＮ−ヒドロキシコハク
   酸イミドエステルと反応させる段階； ｃ）上記段階で得た粗製生成物をシリカゲル上のクロマ
   トグラフで精製する段階；ならびにｄ）上記段階で得た
   化合物上の例えば第三ブチルオキシカルボニル基などの
   保護基を、酸、特にトリフルオロ酢酸の存在下で分裂さ
   せて、塩、特にトリフルオロ酢酸塩の形態でＰＱ−Ｘ誘
   導体を得る段階。
10. （１０）前記段階ｄ）で得た生成物を逆相クロマトグラ
    フで精製する； ことを特徴とする請求の範囲９記載の方法。
11. （１１）例えばトリフルオロ酢酸などの酸含有水内のア
    セトニトリルの混合物を溶離剤として用いる；ことを特
    徴とする請求の範囲１０記載の方法。
12. （１２）トリフルオロ酢酸塩カウンターアニオンを塩化
    水素酸塩と交換する； ことを特徴とする請求の範囲９記載の方法。
13. （１３）前記塩化水素酸塩を重亜硫酸ナトリウムで処理
    する； ことを特徴とする請求の範囲１２記載の方法。
14. （１４）請求の範囲１記載の新規な誘導体またはこれら
    の薬学的に可能な塩を有効成分として含有する薬組成物
    。