JPS63238022A - HBe抗原の単離方法 - Google Patents
HBe抗原の単離方法Info
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- JPS63238022A JPS63238022A JP7365087A JP7365087A JPS63238022A JP S63238022 A JPS63238022 A JP S63238022A JP 7365087 A JP7365087 A JP 7365087A JP 7365087 A JP7365087 A JP 7365087A JP S63238022 A JPS63238022 A JP S63238022A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、1iBe抗原の単離方法に胸する。ざらに詳
しくは、血漿中のB型肝炎ウィルス関連抗原を吸着剤に
吸着させた後、溶離液で処理することによってMile
抗原を単離する方法に関する。
しくは、血漿中のB型肝炎ウィルス関連抗原を吸着剤に
吸着させた後、溶離液で処理することによってMile
抗原を単離する方法に関する。
今日、B型肝炎の保菌者は全世界で2億人と推定され、
我が国においても約200〜300万人の保菌者がいる
といわ几ている。B型肝炎は主として輸血(輸血漿)に
より、又時として医療現場における誤操作、例えば注射
針、器具等を介しての忠君の血液や体液への接触により
感染することが知られている。
我が国においても約200〜300万人の保菌者がいる
といわ几ている。B型肝炎は主として輸血(輸血漿)に
より、又時として医療現場における誤操作、例えば注射
針、器具等を介しての忠君の血液や体液への接触により
感染することが知られている。
B型肝炎はB型肝炎ウィルス(以下、11 B Vと略
記する)によって惹起されるとされているか、正確には
li’BVには肝細胞の障害性はない。肝炎の発症すな
わち肝細胞の壊死はひとえにHBvを排除しようとする
宿主の免疫反応によって起るとするのが現時点の定説で
ある。しかし、免疫反応力トノように肝細胞障害を惹起
するかについてはまだ解明されていない。いずれにして
も)IBVはかなり感染力か強く、免疫学的にも、臨床
的にも数多くの問題点が指摘されており、未だ確立され
た予防法、治療法はなく、アフリカ、東南アジア地域か
ら我国に至る環太平洋地区の西南部はIIBV汚染地帯
と指摘される如く、多数の忠君が存在しているのが現状
である。
記する)によって惹起されるとされているか、正確には
li’BVには肝細胞の障害性はない。肝炎の発症すな
わち肝細胞の壊死はひとえにHBvを排除しようとする
宿主の免疫反応によって起るとするのが現時点の定説で
ある。しかし、免疫反応力トノように肝細胞障害を惹起
するかについてはまだ解明されていない。いずれにして
も)IBVはかなり感染力か強く、免疫学的にも、臨床
的にも数多くの問題点が指摘されており、未だ確立され
た予防法、治療法はなく、アフリカ、東南アジア地域か
ら我国に至る環太平洋地区の西南部はIIBV汚染地帯
と指摘される如く、多数の忠君が存在しているのが現状
である。
かかるIIBVへの感染防止法として現在ではワクチン
の投与が実用化の段階にあり、現在、nBV予防ワクチ
ンを生産する方法として、遺伝子操作によって大腸菌、
枯草菌、hるいは酵母菌にHBsAg蛋白質をコードす
るkl B VのDNAを導入、発現させることにより
ワクチンの原材料となるklBsAgのみを大量に生合
成する方法が普及しつつある。
の投与が実用化の段階にあり、現在、nBV予防ワクチ
ンを生産する方法として、遺伝子操作によって大腸菌、
枯草菌、hるいは酵母菌にHBsAg蛋白質をコードす
るkl B VのDNAを導入、発現させることにより
ワクチンの原材料となるklBsAgのみを大量に生合
成する方法が普及しつつある。
〔発明が解決しようとする問題点〕
nBV関連抗原としては、ウィルス表面抗原であるHB
sAg、核酸を含有するウィルスの芯の部分の抗原で
ある1113 cAgおよび1(BVの感染性と関係し
ている抗原であるHB e Agが存在し、従来、免疫
反応の主たる標的はtLj3 s Agと考えらrして
いたか、現在は否定ざrしる方向にある。そして、現在
ではilB 8 AQにかわって’に3BcAg %u
BeAg LIhるいは1iBV−LINAのリージョ
ンブレ8 (llegion pre S )の産生ず
るペプチドが主たる標的の候補として挙げられている。
sAg、核酸を含有するウィルスの芯の部分の抗原で
ある1113 cAgおよび1(BVの感染性と関係し
ている抗原であるHB e Agが存在し、従来、免疫
反応の主たる標的はtLj3 s Agと考えらrして
いたか、現在は否定ざrしる方向にある。そして、現在
ではilB 8 AQにかわって’に3BcAg %u
BeAg LIhるいは1iBV−LINAのリージョ
ンブレ8 (llegion pre S )の産生ず
るペプチドが主たる標的の候補として挙げられている。
。
このように、)l B Vの感染はklB s Agの
みでなく、HJ3 cAg及びliBeAgか関与して
おり、とくにflBrAg(+)の血液はl1Be抗体
(以下、HBeAbと略記する〕(+)の血液よりもI
IBVの感染性は10’倍以上も高いことかチンパンジ
ーの感染実験から明らかにされている。そして、現実に
も、母親がMB eAg j+lであれば児への感染は
100%成立し、92%かnB s Ag持続陽性化し
ていることか証明ざrしている。
みでなく、HJ3 cAg及びliBeAgか関与して
おり、とくにflBrAg(+)の血液はl1Be抗体
(以下、HBeAbと略記する〕(+)の血液よりもI
IBVの感染性は10’倍以上も高いことかチンパンジ
ーの感染実験から明らかにされている。そして、現実に
も、母親がMB eAg j+lであれば児への感染は
100%成立し、92%かnB s Ag持続陽性化し
ていることか証明ざrしている。
これに対して、母親かZL13 eAg f+lである
と、28%の児に感染が起っているが、ljBsAg持
続陽性化した症例は1例もないとの報告もなざrしてい
る(白木和夫他=B型肝炎ウィルスの母子感染、小児科
臨床、32:199.1979 )。また、HBeAg
は肝病変の進行をよく反映し、油s Ag (+lの慢
性肝疾患の活動期に上昇する。といわれる。ざらにIi
BeAg(利の慢性肝疾患は組織学的発展のテンポがl
′1BeAb :+lのものより早いことが報告ざ几て
いる(大場均他:B型肝炎ウィルス、日本臨床(秋期増
刊) : 869.1982J。
と、28%の児に感染が起っているが、ljBsAg持
続陽性化した症例は1例もないとの報告もなざrしてい
る(白木和夫他=B型肝炎ウィルスの母子感染、小児科
臨床、32:199.1979 )。また、HBeAg
は肝病変の進行をよく反映し、油s Ag (+lの慢
性肝疾患の活動期に上昇する。といわれる。ざらにIi
BeAg(利の慢性肝疾患は組織学的発展のテンポがl
′1BeAb :+lのものより早いことが報告ざ几て
いる(大場均他:B型肝炎ウィルス、日本臨床(秋期増
刊) : 869.1982J。
このように)lBeA5y(利の血液は感染性も高く、
臨床的にも病態の増悪傾向と栢接な開運性を有している
ことが明らかにざ几つつあるが、かかるhLB e A
gに対するワクチンは得られていないのか現状である。
臨床的にも病態の増悪傾向と栢接な開運性を有している
ことが明らかにざ几つつあるが、かかるhLB e A
gに対するワクチンは得られていないのか現状である。
従って、本発明の目的は、上記ワクチンを得るための前
準備等に有効なklBe Agを単離する方法を提供す
ることにある。
準備等に有効なklBe Agを単離する方法を提供す
ることにある。
本発明者らは、先にリン酸カルシウム系焼結多孔体、固
体酸又は陽イオン交換樹脂等が血漿中のtiB s A
g及びfiB eA gのタイター値(Titer
)を陰性領域(1以丁)にまで低下させることのでさる
ISを肝炎抗原tlJ3sAg及び■jeAg(以下、
insagと略す〕の吸着剤であることを見出し、先に
特願昭60−67270号、61−96021号及び6
1−109282号として特許用b;hl Lだが、ざ
らに14BAQの股布、遊離挙動について詳h↓■に研
究を一中ね、吸着剤に股布されたjiLIAgを溶+=
a+t:液で処理CることによりuBehgが道択的に
遊離して(ることを見出し、本発明に至った。すなわち
本発明は、血漿中のRBAgを吸着剤に股布させた役、
溶阿敢で処理することによってLl、B eAgを単離
することを特徴とするHBeAgの単離方法である。
体酸又は陽イオン交換樹脂等が血漿中のtiB s A
g及びfiB eA gのタイター値(Titer
)を陰性領域(1以丁)にまで低下させることのでさる
ISを肝炎抗原tlJ3sAg及び■jeAg(以下、
insagと略す〕の吸着剤であることを見出し、先に
特願昭60−67270号、61−96021号及び6
1−109282号として特許用b;hl Lだが、ざ
らに14BAQの股布、遊離挙動について詳h↓■に研
究を一中ね、吸着剤に股布されたjiLIAgを溶+=
a+t:液で処理CることによりuBehgが道択的に
遊離して(ることを見出し、本発明に至った。すなわち
本発明は、血漿中のRBAgを吸着剤に股布させた役、
溶阿敢で処理することによってLl、B eAgを単離
することを特徴とするHBeAgの単離方法である。
本発明において、kL B A yは吸着剤で吸右ざr
l、るか、かかる吸着剤としては種々の多孔体等、吸着
剤として使用できるものであれはとくに制限はないか、
リン酸カルシウム系焼結多孔体、固体酸及び陽イオン交
換樹脂はと(にttBAgを股布するので好ましい。
l、るか、かかる吸着剤としては種々の多孔体等、吸着
剤として使用できるものであれはとくに制限はないか、
リン酸カルシウム系焼結多孔体、固体酸及び陽イオン交
換樹脂はと(にttBAgを股布するので好ましい。
リン酸カルシウム系焼結多孔体としては、ヒドロキシア
パタイト (Ua(OLL)z e aUa3(P(J
4 )2)、第三リン酵カルシウム(Ca3 (P(J
4 )2 )またはこれらのルル合物等が、固体酸とし
てはシリカ−アルミナ、アルミナ等が、又陽イオン交換
樹脂としてはIHU84、II;−718,1ne−5
0等V)高品名で市販さ!している揚イオ7交決樹脂が
あげられる。
パタイト (Ua(OLL)z e aUa3(P(J
4 )2)、第三リン酵カルシウム(Ca3 (P(J
4 )2 )またはこれらのルル合物等が、固体酸とし
てはシリカ−アルミナ、アルミナ等が、又陽イオン交換
樹脂としてはIHU84、II;−718,1ne−5
0等V)高品名で市販さ!している揚イオ7交決樹脂が
あげられる。
こ几らの吸着剤の形状はと(に規定されるものでは/、
【いが、20〜60メソシユの大きざのものが実用面で
あり、り]ましい。又、こ!しらの吸着剤は必要に応じ
て屁合使用してもよい。
【いが、20〜60メソシユの大きざのものが実用面で
あり、り]ましい。又、こ!しらの吸着剤は必要に応じ
て屁合使用してもよい。
11 B A Qを吸着剤に霞石させるには血漿を吸着
剤とj&触させる必要かあるが、該接触には何ら特別な
条件は必要としない。すなわち、該吸着剤を血漿中に浸
漬するか、該吸着剤を充填したカラムに1ift泉を循
環させrしはよい。
剤とj&触させる必要かあるが、該接触には何ら特別な
条件は必要としない。すなわち、該吸着剤を血漿中に浸
漬するか、該吸着剤を充填したカラムに1ift泉を循
環させrしはよい。
使用する吸着剤の鼠は、少なくとも1113 A Qを
吸右するに十分な量が必要であるか、これは予め血漿中
の11BAgのタイター値を測定することによって決め
られる。従って、使用する吸着剤の量は血漿中のHBA
Qの量により一概に決めら几るものではないが、通常は
吸着剤に対する血漿の割合は、、、’5m施ざrしる。
吸右するに十分な量が必要であるか、これは予め血漿中
の11BAgのタイター値を測定することによって決め
られる。従って、使用する吸着剤の量は血漿中のHBA
Qの量により一概に決めら几るものではないが、通常は
吸着剤に対する血漿の割合は、、、’5m施ざrしる。
吸着剤には通常11B s Ag、llBeAg、 I
JJJeAgで代表ざrしるllBAgか霞石されるか
、LiB eAgのみあるいはklBoAgを選択的に
霞石してもよい。
JJJeAgで代表ざrしるllBAgか霞石されるか
、LiB eAgのみあるいはklBoAgを選択的に
霞石してもよい。
本発明において、吸着剤に吸着ざ几た11BAQは次い
で溶離液で処理される。該溶離液はとくに限定さrしる
ものではないか、塩化ナトリウム水溶液、界面活性剤水
溶液およびデオキシ胆汁酸ナトリウム水溶液は本発明の
効果かよく発現する溶bI液であり、好ましく用いられ
る。とくに、本発明におラム水溶液で処理するか、又は
固体酸でuBAgを霞石し、界面活性剤水溶液で処理す
ると1iBcAyの単離効率が昌くなり、好ましい。
で溶離液で処理される。該溶離液はとくに限定さrしる
ものではないか、塩化ナトリウム水溶液、界面活性剤水
溶液およびデオキシ胆汁酸ナトリウム水溶液は本発明の
効果かよく発現する溶bI液であり、好ましく用いられ
る。とくに、本発明におラム水溶液で処理するか、又は
固体酸でuBAgを霞石し、界面活性剤水溶液で処理す
ると1iBcAyの単離効率が昌くなり、好ましい。
HBAQを設層した吸着剤を溶離液で処理するには、k
LBhgが吸右された後の血漿残液を除き、咳吸着剤を
溶離液に浸漬するか、吸着剤カラムを使用する場合には
、血漿残液を除いた吸着剤をカラムに充填し、溶離液を
循環させればよい。撹1゛ト、振とう等の手段は透宜必
要に応じて実施してもよい。溶離液中に遊離したnB
e Agは溶離液と分離ざrし、必要ならばざらに前処
理を施ざfした後、ワクチン製造用の原料として供され
る。
LBhgが吸右された後の血漿残液を除き、咳吸着剤を
溶離液に浸漬するか、吸着剤カラムを使用する場合には
、血漿残液を除いた吸着剤をカラムに充填し、溶離液を
循環させればよい。撹1゛ト、振とう等の手段は透宜必
要に応じて実施してもよい。溶離液中に遊離したnB
e Agは溶離液と分離ざrし、必要ならばざらに前処
理を施ざfした後、ワクチン製造用の原料として供され
る。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本
発明はこ才tらによって何ら限定されるものではない。
発明はこ才tらによって何ら限定されるものではない。
実施例1〜12
e M fillとしてa)IJン酸カルシウム系焼結
多孔体ン(目3製)及びC)陽イオン交換樹脂(日本オ
ルガノ(l(1)装jl(084)各々0.39を1m
lの生理食塩水溶液中に浸漬して減圧した。該吸着剤に
MB sAg、llBeAgのタイター値が各々51.
9及び4.0の血漿2rrLiを添加し、室温にて約3
時間撹拌し、IIBAgを霞石させた。
多孔体ン(目3製)及びC)陽イオン交換樹脂(日本オ
ルガノ(l(1)装jl(084)各々0.39を1m
lの生理食塩水溶液中に浸漬して減圧した。該吸着剤に
MB sAg、llBeAgのタイター値が各々51.
9及び4.0の血漿2rrLiを添加し、室温にて約3
時間撹拌し、IIBAgを霞石させた。
各上澄液1.57nJlを採取し、ダイナポット■社の
放射免疫測定(f2 (Radio Imtnuno
As5ay 、 IIIA )によってタイター値を測
定した。タイター値は下記吸着剤a)の場合のun s
Ag及びliBeAgのタイター値は各々5.7及び0
.8、吸着剤b)の場合のそれらは各々0.6及び0.
8、吸着剤C)の場合のそれらは各々7.4及び1.4
であり、HBAgは充分吸着ざjしていた。
放射免疫測定(f2 (Radio Imtnuno
As5ay 、 IIIA )によってタイター値を測
定した。タイター値は下記吸着剤a)の場合のun s
Ag及びliBeAgのタイター値は各々5.7及び0
.8、吸着剤b)の場合のそれらは各々0.6及び0.
8、吸着剤C)の場合のそれらは各々7.4及び1.4
であり、HBAgは充分吸着ざjしていた。
一万、もとの血漿1.5mlを塩化ナトリウム0.14
ntolA〜3 rnol/J水溶液1.5mlで希釈
するとhLB sAgは30.4、liBeAgは1.
5となり、塩化ナトリウム水溶液自体は単なる希釈効果
しかないことを確認した。
ntolA〜3 rnol/J水溶液1.5mlで希釈
するとhLB sAgは30.4、liBeAgは1.
5となり、塩化ナトリウム水溶液自体は単なる希釈効果
しかないことを確認した。
次に、上澄液を除去した上記各吸着剤に0.14.1.
2及び3 n1o1/lの塩化ナトリウム水溶液(溶離
液1,2.3.4とする) 1.577LA’を添加し
て10分間室温にて振とう後、タイター値を測定した。
2及び3 n1o1/lの塩化ナトリウム水溶液(溶離
液1,2.3.4とする) 1.577LA’を添加し
て10分間室温にて振とう後、タイター値を測定した。
結果を第1表に示す。
この結果によれば、液相中のlLBeAgの大部分は遊
離してくるがun s Agのそ几はわずかしか遊離ざ
71、ておらず、本イl IIJIの効婁は明らかであ
る−実施例13〜16 吸着剤として実施例1〜8で用いたものと同様の吸着剤
a)及びb)を用い、実施例1〜8と同様に13il処
理を行い、血漿を添加し、1o分間室温にて振とうした
。実施例1〜12と同様に溶離液の希釈効果を調べたと
ころ、吸着剤a)及びb)の1LISs Ag及びlL
13eAgは各々1.1.1.5及び0.6.0.8で
あった。LLI3 s Agに対しては希釈効果以外の
効果か認められるが、lIB eAgについては単なる
希釈効果か認めらルた。各上澄液の川3sAg及び)L
B c Agのタイター値を実施例1〜8と同様にして
測定したところ、各々5.6.0.8及び0.6.0.
8で、カリllllAgは充分汲置されていた。上澄液
を除去した役、溶離液として牛丼化学製の15!5トリ
トンx−too水溶液(溶離液5)、ギシダ化学製の2
96ドデシル硫酸ナトリウム水溶液(溶離液6)を各々
1 、5 rnll添加して室温にて10分間振とうし
、実施例1〜[2と同様にして液相のタイター値を測定
した。
離してくるがun s Agのそ几はわずかしか遊離ざ
71、ておらず、本イl IIJIの効婁は明らかであ
る−実施例13〜16 吸着剤として実施例1〜8で用いたものと同様の吸着剤
a)及びb)を用い、実施例1〜8と同様に13il処
理を行い、血漿を添加し、1o分間室温にて振とうした
。実施例1〜12と同様に溶離液の希釈効果を調べたと
ころ、吸着剤a)及びb)の1LISs Ag及びlL
13eAgは各々1.1.1.5及び0.6.0.8で
あった。LLI3 s Agに対しては希釈効果以外の
効果か認められるが、lIB eAgについては単なる
希釈効果か認めらルた。各上澄液の川3sAg及び)L
B c Agのタイター値を実施例1〜8と同様にして
測定したところ、各々5.6.0.8及び0.6.0.
8で、カリllllAgは充分汲置されていた。上澄液
を除去した役、溶離液として牛丼化学製の15!5トリ
トンx−too水溶液(溶離液5)、ギシダ化学製の2
96ドデシル硫酸ナトリウム水溶液(溶離液6)を各々
1 、5 rnll添加して室温にて10分間振とうし
、実施例1〜[2と同様にして液相のタイター値を測定
した。
結果を第2表に示す。
実施例17
吸着剤として実施例5〜8で用いたものと同様の吸着剤
b)を用い、実施例5〜Bと同様に前処理し、溶離液と
して0.596−デオキシ胆汁g−0,5%水酸化ナト
リウム−o、ott口o I/lホウ酸ナトナトリウム
水溶液いる以外は実施例5〜8と同様にして実験を行っ
た。LiBsAg及びIIB eAgのタイター値は各
々1.8及び1.2であり、MBeAgか選択的に遊離
していることか明らかである。
b)を用い、実施例5〜Bと同様に前処理し、溶離液と
して0.596−デオキシ胆汁g−0,5%水酸化ナト
リウム−o、ott口o I/lホウ酸ナトナトリウム
水溶液いる以外は実施例5〜8と同様にして実験を行っ
た。LiBsAg及びIIB eAgのタイター値は各
々1.8及び1.2であり、MBeAgか選択的に遊離
していることか明らかである。
本発明によrしは、MBe Agを効率的に単離するこ
とができるので、血漿出来のワクチンを得るための手段
を容易に提供することかでき、本発明の実用trJ意義
は大きい。
とができるので、血漿出来のワクチンを得るための手段
を容易に提供することかでき、本発明の実用trJ意義
は大きい。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、血漿中のB型肝炎ウィルス関連抗原を吸着剤に吸着
させた後、溶離液で処理することによつてHBe抗原を
単離することを特徴とするHBe抗原の単離方法。 2、該吸着剤がリン酸カルシウム系焼結多孔体、固体酸
又は陽イオン交換樹脂である特許請求の範囲第1項記載
の単離方法。 3、該固体酸がシリカ−アルミナである特許請求の範囲
第2項記載の単離方法。 4、該溶離液が塩化ナトリウム水溶液である特許請求の
範囲第1項、第2項又は第3項記載の単離方法。 5、該溶離液が界面活性剤水溶液である特許請求の範囲
第1項、第2項又は第3項記載の単離方法。 6、該溶離液がデオキシ胆汁酸ナトリウム水溶液である
特許請求の範囲第1項、第2項又は第3項記載の単離方
法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7365087A JPS63238022A (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | HBe抗原の単離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7365087A JPS63238022A (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | HBe抗原の単離方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63238022A true JPS63238022A (ja) | 1988-10-04 |
Family
ID=13524371
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP7365087A Pending JPS63238022A (ja) | 1987-03-26 | 1987-03-26 | HBe抗原の単離方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS63238022A (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61226058A (ja) * | 1985-03-29 | 1986-10-07 | 株式会社クラレ | B型肝炎ウイルス除去用吸着剤 |
-
1987
- 1987-03-26 JP JP7365087A patent/JPS63238022A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61226058A (ja) * | 1985-03-29 | 1986-10-07 | 株式会社クラレ | B型肝炎ウイルス除去用吸着剤 |
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