JPS6322803A - 薬理活性を持つジビニルエ−テル‐無水マレイン酸共重合体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な共重合体の製造方法に関し、さらに詳し
くは特定の分子量を有するジビニルエーテル−無水マレ
イン酸共重合体に、制ガン活性物質を結合させたものを
活性成分として成る。低毒性かつ制ガン効果に優れた共
重合体の製造方法に関するものである。近年、優れた制
ガン効果をイＴする物質として５−フルオロウリジンや
１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンのような核酸
誘導体、あるいはアドリアマイシンやダウノマイシンの
ようなアントラサイクリン系抗生物質などが見出されて
いる。

しかしながら、これ、らの制ガン活性物質は、優れた制
ガン効果を有すると同時に、正常細胞に対しても強い毒
性を示す欠点を有し、したがってその使用に際しては、
副作用に対して十二分な注意が必要であり、そのため少
量づつ多数回投与するなど煩、雑な方法がとられている
。

ところで、前記のような低分子化合物である制ガン活性
物質を高分子化合物に結合させた場合。

該制ガン活性物質は体内で除々に放出されてその濃度が
一定に保たれ、またそのものの体内分布が変り、毒性が
軽減されて制ガン効果が高まることが期待される。

本発明者らは、このような事情に鑑み、活性水素を冑す
る制ガン活性物質を結合させる高分子化合物にフいて鋭
意研究を重ねた結果、ある特定の分子量を有するジビニ
ルエーテル−無水マレイン酸共重合体は、それ自体優れ
た制ガン効果を有し。

かつ毒性が極めて低く、また分子中に多数の酸無水物構
造を有しているため、活性水素をもつ制ガン活性物質と
容易に反応し、しかもこの反応物は温和な条件下で前記
制ガン活性物質を除々に放出するなど、該制ガン活性物
質の担体として極めて優れていることを見出し、この知
見に基づいて本発明を完成するに至った。

すなわち１本発明は、一般式 すなわち１本発明は、一般式 蹴 （式中のＲは水酸基又はアミノ基を有する制ガン活性物
質の水酸基又はアミノ基から水素原子１１固を除いた残
基、ｎはＲと結合するジビニルエーテル−無水マレイン
酸共重合体の分子！２．ｏｏｏ〜１５．０００に相当す
る値である） で示される高分子化合物及びその薬理的に許容しうる塩
類を活性成分として成る制ガン剤、及び有機溶媒の存在
下１分子！　２．０００〜１５．０００を有するジビニ
ルエーテル−無水マレイン酸共重合体に。

活性水素を有する制ガン活性物質を反応させたのち加水
分解し１次いで所望に応じ塩に変えることを特徴とする
。前記一般式（１）で示さ・れる制ガン剤及びその塩類
を提供するものである。

本発明に用いるジビニルエーテル−無水マレイ、ン酸共
重合体は１次の式 （式中のｎは該共重合体の分子量２．０００〜１５．０
００に相当する値である） で示される分子量が２．０００〜ｉｓ、ｏｏｏの範囲の
ものであって、ジビニルエーテルと無水マレイン酸とを
公知の方法に従って共重合させることにより得られる。

このジビニルエーテル−無水マレインｍ共重合体は制ガ
ン活性、抗菌性、インターフェロン誘発能など、の種々
の活性を有しているが、その分子量メルカプト基などの
活性水素を有する制ガン活性物質と容易に反応して、そ
れぞれエステル結合。

アミド結合、チオエステル結合を形成しうる。

本発明に用いられる制ガン活性物質としては。

例えば水酸基を含有するものとして、５−フルオロウリ
ジン、アミノ基を含有するものとして、１−β−Ｄ−ア
ラビノフラノシルシトシン、アドリアマイシンやダウノ
マイシンのようなアントラサイクリン系構成物質などが
挙げられる。前記一般式（１）におけるこれらの制ガン
活性物質の残基Ｒを次に示す。

薯 Ｍ）！ Ｒ’−ＯＲアドリアマイシン残基 Ｒ’−０Ｈ５ダウノマイシン残基 ・°本発明の方法により得られた共重合体は９例えばＮ
−メチルピロリドンなどの有識ン容媒、トリエチルアミ
ンなどの触媒の存在下、ジビニルエーテル−無水マレイ
ン酸共重合体と前記の制ガン活性物質とを反応させたの
ち加水分解し２次いでイオン交換樹脂や限外ろ過膜など
を用いて目的物以外のものを取り除いたのち、凍結乾燥
などを行うことによって得られる。また、所望に応じ、
前記の加水分解後、薬理的に許容しうる塩１例えばナト
リウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩
などに変えた後のち、限外ろ過、凍結乾燥などを行い、
塩として取り出してもよい。

このようにして得られた制ガン剤中の制ガン活性物質の
含有量は、好ましくは５〜４０重量％の範囲である。

本発明によって得られた共重合体における制ガン活性物
質の徐放性については９例えばアドリアマイシンとジビ
ニルエーテル−無水マレイン酸共重合体との結合物の場
合、試験管内の０．１規定。

ｐＨ７，，２リン酸緩衝液中におけるアドリアマイシン
の放出速度は、２週間で約２０％であった。

また１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンと該共重
合体との結合物の場合、試験管内の生理食塩水液中にお
ける制ガン活性物質の放出速度は。

１週間で５０％程度であった。

さらに、ｐ３８８白血病の１（１のＣＤＦエ　マウスを
用いた制ガン効果については１例えばアドリアマイシン
と該共重合体との結合物では最高延命率５７０％（６０
日生存３／６）、アドリアマイシン単独では同８５％（
６０日生存Ｏ／６）であり。

１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンと８亥共重合
体との結合物では最高延命率１２５％、１−β−Ｄ−ア
ラビノフラノシルジトシン単独では同１０％であった。

このように１本発明によって得られた共重合体は、制ガ
ン活性物質の徐放性に優れ低毒性である上に、それ自体
制ガン活性をもつ該共重合体との相乗効果により、該制
ガン活性物質を単独で用いる場合に比べて、優れた制ガ
ン効果を有する。

次に、実施例及び参考例によって本発明をさらに詳細に
説明する。

なお、ジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体をＤ
ＩＶＥＦ１八と略記する。

実施例１５−フルオロウリジン−旧ＶＩＥＭＡ結合物 ＤＩＶＥＭＡ　（分子量７０００）５００ｍｇをＮ−メ
チルピロリドン２０ｍ１に溶かし、５−フルオロウリジ
ン１．００ｇ及びトリエチルアミン０．１０ｍ１を加え
て。

室温下４０時間かきまぜ反応させた。この反応混合物を
５００　ｍｌの水中に投入し、炭酸水素ナトリウムを加
えてｐＨ８に１１整したのち、２時間放置した。

次いでＩＮ塩酸を加えてｐＨ３に調整後、ダイアフロー
メンブレン（ＹＭ−５）を用い限外ろ過して未反応物、
有機溶媒、塩を除いたのち、凍結乾燥して目的物５９３
　ｍｇを白色粉末として得た。

このもののＵ■吸収量から求めた５−フルオロウリジン
含有量は３６．１重量％であった。

実施例２５−フルオロウリジン−ＤＩＶＩＥＩＩＡ結合
物 ＤＩＶＥＭＡ　（分子量７０００）５００ｍｇをＮ−メ
チルビロリドン２０ｍ１に溶かし、５−フルオロウリジ
ン７５ｍｇ及びトリエチルアミン０．１０ｍ１を加えて
。

室温下４０時間かきまぜ反応した。

反応混合物を実施例１と同様の方法で処理して目的Ｏｆ
ｆ’４９０　ｍｇを得た。このものの５−フルオロウリ
ジン含有量は１６．１ｍｆｔ％であった。

実ｊｆｌ＋（ｆｌＪ３　１−β−Ｄ−アラビノフラノシ
ルシトシン−ＤＩＶＥＭＡ結合物 ＤＩＶＨＭＡ（分子量７０００）　　５００ｍｇ）Ｆｒ
−Ｎ−メチルピロリドン４０ｍ１に溶かし、１−β−Ｄ
−アラビノフラノシルシトシン１．ＯＯｇ及びトリエチ
ルアミン０．２５ｏ＋１を加えて、室温下４０時間かき
まぜ反応させた。この反応混合物を５０Ｏｎ＋１の水中
に投入し、炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ８に調整後
、２時間放置した。次にＩＮ塩酸を加えてｐｉｔをいっ
たん３付近に下げたのち、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液
でｐ１１５に戻し、ダイアフローメンブレン（ＹＭ−５
）を用い限外ろ過して未反応物。

有機溶媒、塩を除き、凍結乾燥して目的物９３０ｍｇを
白色粉末として得た。

このもののＵＶ吸収量から求めた１−β−Ｄ−アラビノ
フラノシルシトシン含有量は３８．３ｍ）！量％であっ
た。

実施例４１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン−Ｄ
ＩＶ開八開会結 合物ＶＨＭＡ　（分子ｉｔ７０００）５００ｍｇ、Ｎ−
メチルピロリドン４０ｍ１．１−β−Ｄ−アラビノフラ
ノシルシトシン１５０ｍｇ、）リエチルアミン０゜２５
ｍ１を用い、実施例３と同様の方法で反応及び後処理を
行って、６５３ｎ＋Ｈの目的物を得た。

このもののＵＶ吸収量から求めた１−β−Ｄ−アラビノ
フラノシルシトシン含有量はｉｓ、２重量％であった。

実施例５　アドリアマイシン−ＤＩＶＩＥＭＡ結合物Ｄ
ＩＶＨＭ＾（分子量７０００）１００ｍｇを１　ｍｌの
無水Ｎ−メチルピロリドンに溶解し、かきまぜながら８
ｍｌのＮ−メチルピロリドンに溶解させたアドリアマイ
シン塩酸塩１．００ｍｇを滴下した。次いで触媒として
５０μ夏の無水トリエチルアミンを５ｍｌのＮ−メチル
ピロリドンに溶解したものを１０分間で滴下した。反応
は室温で１２時間、光を遮断した状態で行った。反応後
、無水のｎ−ヘキサン１１中に激しくかきまぜながら反
応液を滴下し。

沈殿した赤い固体物を新しい１１のｎ−ヘキサンで洗浄
した。沈殿物を集めて再蒸留水５０ｍ１に浮遊させ、か
きまぜながら１重量％炭酸水素すｌ−’Ｊウム水溶液で
ｐＨ７，０に調整した。１時間後に固形物はすべて溶解
し赤い溶液となった。次いで未反応のアドリアマイシン
及び触媒のトリエチルアミンを除去するため、２回強陽
イオン交換樹脂（ダウエックス）２００ｍｇを加えて１
０分間かきまぜたのちろ過し、１０ｍ１の水で洗浄した
。ろ液を分子量１万の分別に相当する限外ろ過膜（アミ
コン社製、ｐｍｌｏ）を用いて再蒸留水によりろ過。

洗浄した。ろ液の色が完全にな（なった時点でろ過を止
め、０．２２μ孔系ミリポアフィルタ−に通したのち、
凍結乾燥した。アドリアマイシンの分解によって生じる
水に不溶性のアドリアマイシンは存在しなかった。凍結
乾燥によって２０４ｍｇの赤橙色の綿状固体物が得られ
た。

このもの、は４９０　ｎｍの可視部の吸収から求めたと
ころ、２９．４ｍｆｔ量％のアドリアマイシンを含んで
いた。また、このアドリアマイシン−ＤＩＶＥＭＡ結合
物は水には易溶（５００ｍｇ／　ｍｌ）であるが。

生理食塩水には難溶であった。しかし、水に溶解させた
のちでは、生理食塩水に均一に混合することができた。

また、このものはＤＭＳＯ，ＤＭＦ、　Ｎ−メチルピロ
リドンのような極性触媒に可溶であったが、ジエチルエ
ーテル、ｎ−ヘキサン、ベンゼンなどには不溶であった
。さらに赤外吸収スペクトルは３３５０．２９４０．１
７２０．１６６０．１６０５．１５８０．１５２０゜１
４０５、１３９０．１２９０．１２４０．１２１０．１
１２０．１０９０゜１０？０．１０２０．９５０．８０
０．７７０　ｃｍ　　に吸収をもち。

アドリアマイシン塩酸塩に相当する吸収の他にアミド結
合（１６６０ｃｍ）の存在が示された。また可視・紫外
部の吸収スペクトルには４８５．２９１゜２５３、２３
３ｎｍに吸収があった。

得られたアドリアマイシン−ＤＩＶＣＭＡ結合物の赤外
吸収スペクトルを第１図Ａに、可視・紫外吸収スペクト
ルを第１図Ｂに示す。

実施例６　アドリアマイシン−ＤＩＶＥＭＡ結合物（塩
型） 実施例５によって得られたアドリアマイシン−ＤＩＶＢ
？ＩＡ結合物の水溶液を凍結乾燥直前に、１重量％炭酸
水素ナトリウム水溶液でｐｌ！７．０に調整したのち、
ミリポアフィルタ−を通して凍結乾燥した。その結果、
　ｎＩ赤色の綿状固体物が実施例５に対して定量的に得
られ、そのものは実施例５の生成物より容易に水に溶け
ることを示した。その赤外吸収スペクトルでは１５８０
ｃｍ　　に大きな吸収が現われ、１７２０ｃ１１１　　
における吸収が減少した。

また、可視・紫外吸収スペクトルは変化しなかった。

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第２図に示す。

実施例７　アドリアマイシン−ＤＩＶＣＭＡ結合物実施
例５と同様にして、４０ｍｇのＤＩＶＩ！ＭＡ　（分子
量７０００）と２０　ｍｇのアドリアマイシン塩酸塩と
をトリエチルアミン１０ＩＩｌを触媒としてＮ−メチル
ピロリドン１０ｍ１中で反応させたのち、実”ｊｆｌｒ
　（Ｆｌ　５と全（同じ処理方法により５８ｍｇの赤橙
色の凍結乾燥綿状固体物を得た。このものは、可視吸収
スペクトルにより２２．４ｆｆｉｆｆ１％のアドリアマ
イシンを含むことが分かった。その赤外吸収スペクトル
及び可視・紫外吸収スペクトルの吸収位置は実施例５の
生成物と同様であった。

実施例８　ダウノマイシン−ＤＩＶＥＭＡｍ合物実施例
５と同様にして４０ｍｇのＤＩＶＥＭＡ　（分子量７０
００）と４０ｍｇのダウノマイシン塩酸塩をトリエチル
アミン２０μｍを触媒としてＮ−メチルピロリドン１２
ｍｇ中で反応させたのち、実施Ｉｊｌ　５と全く同じ処
理方法により８７ｍｇの赤橙色の綿状固体物を得た。こ
のものは、可視吸収スペクトルにより、３２．８１１３
１％のダウノマイシンを含むことが分かった。また、赤
外吸収スペクトルは３４５０、２９３０．１７０５．１
６６０．１６０５．１５７０．１４０５．１３５０、　
１２９０．１２３０．１２１０．１１２０．１０９０．
１０？０．１０４０、　１０２０．９９０　ｃｍ　　に
吸収をもち、可視・紫外吸収スペクトルは４８８．２８
８．２５１．２３３ｎｍに吸収をもっていた。

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第３図Ａに、可
視・紫外吸収スペクトルを第３図Ｂに示す。

実施例９　ダウノマイシン−ＤＩＶＣＭＡ結合物（塩型
） 実施例８で得られたダウノマイシン−ＤＩＶＥＭ＾結合
物の水溶液を１重量％炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ
？、ｏに１１整し凍結乾燥したところ、暗赤色の綿状固
体物が実施例８に対して定量的に得られ、そのものは実
施例８の生成物より水に対する溶解性が高いことを示し
た。その赤外吸収スペクトルでは１５８０ｃｍに大きな
吸収が現われ、１７−１　′ ２０ｃｍにおける吸収は減少した。また可視・紫外吸収
スペクトルは変化しなかった。

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第４図に示す。

実施例１０　ダウノマイシン−ＤＩＶＩＥＭＡ結合物実
旅例５と同様にして、４０ｍｇのＤＩＶＣＭＡ　（分子
量７０００）と２０ｍｇのダウノマイシン塩酸塩とをト
リエチルアミン１０μｍを触媒としてＮ−メチルピロリ
ドン１０ｍ１中で反応させたのち、実施例５と全く同じ
処理方法により、６３ｍｇの赤橙色の凍結乾燥綿状固体
物を得た。このものは、可視吸収スペクトルから求めた
ところ、　　２３．　５ｆｆＩｆｆｉ％のダウノマイシ
ンを含んでいた。また、可視・紫外吸収スペクトルの吸
収位置は実施例８の生成物と全く同じであった。

参考例Ｉ ＤＩＶＨＭＡの酸無水物構造を加水分解したポリマーを
生理食塩水に溶解し、８〜１０週令の雄のＣＤＦ１マウ
スの腹腔内に１回投与して、３０日間マウスの生死を観
察した。その結果を第１表に示す。

なお、マウスは１部５〜６匹で繰り返し実験を行い、Ｌ
Ｄ、ｏを算出した。

第　　１　　表 この表から明らかなように１分子量１．２万のＤＩＶＥ
ＭＡでは著しく毒性が下がること、及び牌臓肥Ｆ°考例
２ ０．１規定、　ｐＨ７、２のリン酸緩（１１生理食塩水
（ＰＢＳ）中におけるアドリアマイシン（Ａｄ）−ＤＩ
ＶＥＭＡ結合物からのＡｄ放出を検討・した。

実施例５で得られりＡ　ｄ　−ＤＩＶＥ？ＩＡ結合物３
．２ｍｇを含むＰＢ３１０ｍｌを３７℃に保ち、一定時
間後０．１ｍｌをサンプリングし、Ｏ，ＩＮ塩酸０゜４
ｍｌ加えて該化合物を沈殿させ、遠心分離した上橙液の
可視部（４９０ｎｍ）の吸光度を測定し。

Ａｄ放出量を求めた。その結果を第５図に示す。

なお放出量は３つのサンプルの平均値である。

この図から、２週間経過後、約２０％のアドリアマイシ
ンが放出されたことが分る。

参考例３ １−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（Ａｒ　ａ　
Ｃ）　　ＤＩＶＩＥＭＥ結合物からのＡ　ｒ　ａ　Ｃ放
出速度を調べるために、実施例３で得たＡ　ｒ　ａ　Ｃ
−ＤＩＶＩＥＨ＾結合物１　ｍ結合主１食塩水１ｍｌに
溶解させて３７℃に保った。一定時間毎にサンプリング
し、高速液体クロマトグラフィーで遊離のＡｒａＣ量を
測

【図面の簡単な説明】

第１図Ａ及びＢはそれぞれ実施υす５におけるアドリア
マイシン−〇ＩＶＥＭＡ結合物の赤外吸収スペクトル及
び可視・紫外吸収スペクトル、第２図は実施例６におけ
るアドリアマイシン−ＤＩＶＥＭ＾結合物（塩型）の赤
外吸収スペクトル、第３図Ａ及びＢはそれぞれ実ｊＪｍ
例８におけるダウノマイシン−ＤＩＶｌ！ＭＡ結合物の
赤外吸収スペクトル及び可視・紫外吸収スペクトル、第
４図は実施例９におけるダウノマイシン−ＤＩＶＩＥＭ
Ａ結合物（塩型）の赤外吸収スペクトルである。 また、第５図は０．１規定、　ｐＨ７、２のリン酸緩衝
生理食塩水中におけるアドリアマイシン−ＤＩＶ［！Ｍ
Ａ結合物からのアドリアマイシンの放出量と経過日数と
の関係を示すグラフ、第６図は生理食塩水中における１
−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン−ＤＩＶＥＭＡ
結合物からの１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン
の放出量と経過日数との関係を示すグラフである。 図面の浄書（内容に変ｚなし） 第　　３　　図　　Ｂ ２００　　３００　　４００　　５００　　６００　　
（ｎｍ）第　　　　　　６　　　　　　図 Ｔｉｍｅ　　（ｄａｙ） 官庁手続 手　続　補　正　書（方式） ％式％ Ｌ　事件の表示 昭和６１年特許願第３１１８３５号 ２　発明の名称 薬理活性を持つジビニルエーテル− 無水マレイン酸共重合体の製造方法 器　補正をする者 事件との関係　　特許出１人 東京都千代田区塵が＠１丁目３番１号 （１１番）工業技ｖｋ院長　ト　塚　幸　三４　指定代
理人 ■ 昭和６２年３月番日 （発送日：昭和６２年３月３１日） ａ　補正の内容 （１）　　願書を別添訂正願書のとおり訂正し、住民票
でこれを証します。 （２）　　図面を別添のとおり訂正します。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、有機溶媒の存在下、ジビニルエーテル−無水マレイ
   ン酸共重合体に、水酸基又はアミノ基を有する制ガン活
   性物質を反応させたのら加水分解し、次いで所望に応じ
   塩に変えることを特徴とする、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中のＲは水酸基又はアミノ基を有する制ガン活性物
   質の水酸基又はアミノ基から水素原子１個を除いた残基
   、ｎはＲと結合するジビニルで示される低毒性制ガン剤
   及びその塩類の製造方法。