JPH07173080A - メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法 - Google Patents
メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法Info
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- JPH07173080A JPH07173080A JP5132873A JP13287393A JPH07173080A JP H07173080 A JPH07173080 A JP H07173080A JP 5132873 A JP5132873 A JP 5132873A JP 13287393 A JP13287393 A JP 13287393A JP H07173080 A JPH07173080 A JP H07173080A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 低毒性でかつ抗癌効果に優れた新規メトトレ
キセート誘導体高分子結合体の提供 【構成】 繰り返し単位が一般式（Ｉ） 及び一般式（ＩＩ） （式中のＲは一般式（ＩＩＩ） あるいは一般式（ＩＶ）で表されるメトトレキセート誘
導体 （ただし一般式（ＩＩＩ）及び一般式（ＩＶ）中のｎは
１から１２までの整数である））で表される繰り返し単
位１０以上５００以下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び
一般式（ＩＩ）の割合が０：１００から９０：１０であ
るメトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結
合体及びその塩。
キセート誘導体高分子結合体の提供 【構成】 繰り返し単位が一般式（Ｉ） 及び一般式（ＩＩ） （式中のＲは一般式（ＩＩＩ） あるいは一般式（ＩＶ）で表されるメトトレキセート誘
導体 （ただし一般式（ＩＩＩ）及び一般式（ＩＶ）中のｎは
１から１２までの整数である））で表される繰り返し単
位１０以上５００以下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び
一般式（ＩＩ）の割合が０：１００から９０：１０であ
るメトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結
合体及びその塩。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は抗癌効果に優れた新規な
メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合
体及びその製造方法に関するものである。
メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合
体及びその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】メトトレキセートは臨床的に広く用いら
れている抗癌剤であり、急性リンパ性白血病・乳癌・頭
頸部癌などに有効とされている。メトトレキセート葉酸
の拮抗体であり、ジヒドロ葉酸還元酵素と強く結合し
て、ＤＮＡ合成を阻害して細胞を死に至らしめる。
れている抗癌剤であり、急性リンパ性白血病・乳癌・頭
頸部癌などに有効とされている。メトトレキセート葉酸
の拮抗体であり、ジヒドロ葉酸還元酵素と強く結合し
て、ＤＮＡ合成を阻害して細胞を死に至らしめる。
【０００３】しかしメトトレキセートは優れた抗癌作用
を有すると同時に、増殖速度のはやい正常細胞に対して
毒性を示し、消化管障害・白血球や血小板の減少・腎臓
障害などの副作用が認められる。したがってメトトレキ
セートの使用に対しては副作用を十分配慮した投与を行
う必要があった。
を有すると同時に、増殖速度のはやい正常細胞に対して
毒性を示し、消化管障害・白血球や血小板の減少・腎臓
障害などの副作用が認められる。したがってメトトレキ
セートの使用に対しては副作用を十分配慮した投与を行
う必要があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】メトトレキセートのよ
うな低分子の抗癌剤が患者に投与された時、血中の抗癌
剤の半減期は一般に短い。癌細胞の細胞周期のＳ期に対
して作用するメトトレキセートは、３６時間から４８時
間といわれる細胞周期のＳ期のみに対して働くために、
限られた抗癌作用しか示すことができない。血中濃度を
持続させより多くの癌細胞を攻撃するために抗癌剤の投
与量を上げると、短時間当たりの血中薬剤濃度が高すぎ
て、癌細胞と同様に細胞増殖速度の速い粘膜などの正常
細胞に障害をもたらす。
うな低分子の抗癌剤が患者に投与された時、血中の抗癌
剤の半減期は一般に短い。癌細胞の細胞周期のＳ期に対
して作用するメトトレキセートは、３６時間から４８時
間といわれる細胞周期のＳ期のみに対して働くために、
限られた抗癌作用しか示すことができない。血中濃度を
持続させより多くの癌細胞を攻撃するために抗癌剤の投
与量を上げると、短時間当たりの血中薬剤濃度が高すぎ
て、癌細胞と同様に細胞増殖速度の速い粘膜などの正常
細胞に障害をもたらす。
【０００５】そこでメトトレキセートのような抗癌剤を
何らかの方法で血中に徐々に放出させ、副作用を生じな
い薬剤濃度を持続させれば、毒性を軽減し抗癌効果を高
めることが期待される。薬剤濃度持続の方法としては従
来から臨床的に行われてきた持続点滴などの直接的方法
と、患者の負担を軽減するために抗癌剤をリポソームや
高分子ミクロスフィア微粒子へ包埋して投与する間接的
方法がある。後者は血中濃度を一回の投与で制御するこ
とができ、副作用の強い薬剤を投与するための優れた方
法として注目されている。このような必要な薬剤を、必
要な濃度、必要とされる時間、必要とされる場所に供給
する手法あるいは考え方はドラッグ・デリバリー・シス
テム（ＤＤＳ）と呼ばれ、近年著しく発展しつつある分
野である。薬剤と高分子化合物の結合体も、高分子の体
内滞留性の高いこと、高分子から薬剤が徐々に放出され
ることからＤＤＳの有力な手法として考えられている。
特にメトトレキセートのように血中内薬剤濃度の持続に
より副作用軽減と坑癌効果増強が期待される薬剤は、高
分子に化学的に結合し、薬剤を徐放化するこが有効と考
えられる。
何らかの方法で血中に徐々に放出させ、副作用を生じな
い薬剤濃度を持続させれば、毒性を軽減し抗癌効果を高
めることが期待される。薬剤濃度持続の方法としては従
来から臨床的に行われてきた持続点滴などの直接的方法
と、患者の負担を軽減するために抗癌剤をリポソームや
高分子ミクロスフィア微粒子へ包埋して投与する間接的
方法がある。後者は血中濃度を一回の投与で制御するこ
とができ、副作用の強い薬剤を投与するための優れた方
法として注目されている。このような必要な薬剤を、必
要な濃度、必要とされる時間、必要とされる場所に供給
する手法あるいは考え方はドラッグ・デリバリー・シス
テム（ＤＤＳ）と呼ばれ、近年著しく発展しつつある分
野である。薬剤と高分子化合物の結合体も、高分子の体
内滞留性の高いこと、高分子から薬剤が徐々に放出され
ることからＤＤＳの有力な手法として考えられている。
特にメトトレキセートのように血中内薬剤濃度の持続に
より副作用軽減と坑癌効果増強が期待される薬剤は、高
分子に化学的に結合し、薬剤を徐放化するこが有効と考
えられる。
【０００６】メトトレキセートに関してはこのような観
点からこれまで数多くの高分子結合体が知られ最近では
血清アルブミンとの結合体が知られている（Neoplasma,
37(3)343-349(1990)）。しかしアルブミンは生体由来の
タンパク質で多数のアミノ酸からなり、メトトレキセー
トとの結合様式及び結合部位は不明である。さらに結合
体のＢ１６黒色腫に対する抗癌活性はメトトレキセート
とほとんど差異が見られず、アルブミン結合体の優位性
は示されていない。
点からこれまで数多くの高分子結合体が知られ最近では
血清アルブミンとの結合体が知られている（Neoplasma,
37(3)343-349(1990)）。しかしアルブミンは生体由来の
タンパク質で多数のアミノ酸からなり、メトトレキセー
トとの結合様式及び結合部位は不明である。さらに結合
体のＢ１６黒色腫に対する抗癌活性はメトトレキセート
とほとんど差異が見られず、アルブミン結合体の優位性
は示されていない。
【０００７】メトトレキセートの薬理機構から高分子に
結合して徐放化することにより抗癌活性増強の可能性が
高いにもかかわらず、これまでの高分子結合体がメトト
レキセート単独の活性を上回ることができなかった原因
は、メトトレキセートと高分子の結合様式を明確に設計
していなかったことにある。メトトレキセートの体内で
の変換を考慮して末端のグルタミン酸残基で高分子と結
合し、メトトレキセートの高分子からの徐放性を確立
し、メトトレキセートより優れた抗癌活性を有する高分
子結合体を合成することが課題である。
結合して徐放化することにより抗癌活性増強の可能性が
高いにもかかわらず、これまでの高分子結合体がメトト
レキセート単独の活性を上回ることができなかった原因
は、メトトレキセートと高分子の結合様式を明確に設計
していなかったことにある。メトトレキセートの体内で
の変換を考慮して末端のグルタミン酸残基で高分子と結
合し、メトトレキセートの高分子からの徐放性を確立
し、メトトレキセートより優れた抗癌活性を有する高分
子結合体を合成することが課題である。
【０００８】
【 課題を解決するための手段]本発明者らは以上のよう
な事情に鑑み、メトトレキセートのグルタミン酸残基を
修飾した誘導体を合成し、この誘導体を結合する高分子
として鋭意研究を重ねた結果、ピラン共重合体が有効で
あることを見いだした。 【０００９】すなわちピラン共重合体はまずそれ自身で
生物の防御機能である免疫系を活性化して抗癌作用を有
することが知られている（Pure&Appl.Chem.,46,103-113
(1976)）。高分子量のピラン共重合体と低分子量の抗癌
剤を結合した場合、低分子抗癌剤は徐々に高分子から放
出され、高分子の体内での高い滞留性と相まって、血中
濃度が長時間持続することが期待される。またピラン共
重合体の免疫活性化と抗癌剤の殺細胞作用が抗癌剤とし
ての機構が異なるために、相乗的効果の可能性が高い。
ピラン共重合体は化学的反応性が高い酸無水物結合を多
数有しているので、薬剤のアミノ基や水酸基などの官能
性基と容易に反応して、高い薬剤含有率の高分子結合体
を得ることができる。さらにこの結果生成した高分子結
合体は、酸無水物結合開裂の結果多数のカルボン酸が生
じこと、高分子骨格中に親水性の高いピラン環を有する
ことから、極めて水溶性が高い。ピラン共重合体と薬剤
の結合体の場合、高分子と薬剤のアミドあるいはエステ
ル結合に隣接してカルボキシル基が存在するため、カル
ボキシル基の背後攻撃による加水分解が起こり、通常容
易に加水分解できないアミド結合も加水分解酵素の関与
なく開裂して薬剤が放出される。このように相乗的抗癌
効果の増強、高含有率結合体の合成、高い水溶性、分子
内官能基による加水分解などピラン共重合体はメトトレ
キセートの高分子担体として極めて優れていることを見
いだし、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。
な事情に鑑み、メトトレキセートのグルタミン酸残基を
修飾した誘導体を合成し、この誘導体を結合する高分子
として鋭意研究を重ねた結果、ピラン共重合体が有効で
あることを見いだした。 【０００９】すなわちピラン共重合体はまずそれ自身で
生物の防御機能である免疫系を活性化して抗癌作用を有
することが知られている（Pure&Appl.Chem.,46,103-113
(1976)）。高分子量のピラン共重合体と低分子量の抗癌
剤を結合した場合、低分子抗癌剤は徐々に高分子から放
出され、高分子の体内での高い滞留性と相まって、血中
濃度が長時間持続することが期待される。またピラン共
重合体の免疫活性化と抗癌剤の殺細胞作用が抗癌剤とし
ての機構が異なるために、相乗的効果の可能性が高い。
ピラン共重合体は化学的反応性が高い酸無水物結合を多
数有しているので、薬剤のアミノ基や水酸基などの官能
性基と容易に反応して、高い薬剤含有率の高分子結合体
を得ることができる。さらにこの結果生成した高分子結
合体は、酸無水物結合開裂の結果多数のカルボン酸が生
じこと、高分子骨格中に親水性の高いピラン環を有する
ことから、極めて水溶性が高い。ピラン共重合体と薬剤
の結合体の場合、高分子と薬剤のアミドあるいはエステ
ル結合に隣接してカルボキシル基が存在するため、カル
ボキシル基の背後攻撃による加水分解が起こり、通常容
易に加水分解できないアミド結合も加水分解酵素の関与
なく開裂して薬剤が放出される。このように相乗的抗癌
効果の増強、高含有率結合体の合成、高い水溶性、分子
内官能基による加水分解などピラン共重合体はメトトレ
キセートの高分子担体として極めて優れていることを見
いだし、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。
【００１０】すなわち本発明は繰り返し単位が一般式
（Ｉ）
（Ｉ）
【化１２】 及び一般式（ＩＩ）
【化１３】 （式中のＲは一般式（ＩＩＩ）
【化１４】 又は一般式（ＩＶ）
【化１５】 で表されるメトトレキセート誘導体残基（ただし一般式
（ＩＩＩ）及び一般式（ＩＶ）中のｎは１から１２まで
の整数である））で表される繰り返し単位１０以上５０
０以下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩ）
のモル比が０：１００から９０：１０であるメトトレキ
セート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその
塩、及び当該メトトレキセート誘導体とピラン共重合体
の高分子結合体及びその塩を、水溶性有機溶媒の存在下
一般式（Ｖ）
（ＩＩＩ）及び一般式（ＩＶ）中のｎは１から１２まで
の整数である））で表される繰り返し単位１０以上５０
０以下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩ）
のモル比が０：１００から９０：１０であるメトトレキ
セート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその
塩、及び当該メトトレキセート誘導体とピラン共重合体
の高分子結合体及びその塩を、水溶性有機溶媒の存在下
一般式（Ｖ）
【化１６】 （式中のｍは１０以上５００以下からなる整数である）
で表されるピラン共重合体に一般式（ＶＩ）
で表されるピラン共重合体に一般式（ＶＩ）
【化１７】 又は一般式（ＶＩＩ）
【化１８】 （ただし一般式（ＶＩ）及び一般式（ＶＩＩ）中のｎは
１から１２までの整数である）であるメトトレキセート
誘導体を反応させ、ついで所望に応じ塩に変えることに
より製造する方法を提供するものである。
１から１２までの整数である）であるメトトレキセート
誘導体を反応させ、ついで所望に応じ塩に変えることに
より製造する方法を提供するものである。
【００１１】本発明に用いる一般式（ＩＶ）のピラン共
重合体はジビニルエーテルと無水マレイン酸から公知の
方法により合成した（Macromol.Synthesis,8,89-94(198
2)）。このピラン共重合体はそれ自身で抗癌活性を有し
ており、結合した抗癌剤との相乗的抗癌活性増強が期待
される。本発明に用いるピラン共重合体の分子量は生体
内からの排泄性を考慮して分子量約１０万以下、かつ滞
留性から分子量約３０００以上とした。これは一般式
（Ｖ）の繰り返し単位ｍが１０から５００の範囲に相当
する。
重合体はジビニルエーテルと無水マレイン酸から公知の
方法により合成した（Macromol.Synthesis,8,89-94(198
2)）。このピラン共重合体はそれ自身で抗癌活性を有し
ており、結合した抗癌剤との相乗的抗癌活性増強が期待
される。本発明に用いるピラン共重合体の分子量は生体
内からの排泄性を考慮して分子量約１０万以下、かつ滞
留性から分子量約３０００以上とした。これは一般式
（Ｖ）の繰り返し単位ｍが１０から５００の範囲に相当
する。
【００１２】本発明に用いた抗癌剤のメトトレキセート
は急性リンパ性白血病・乳癌・肺癌・頭頸部癌等に対し
て優れた抗癌作用を有し、高分子と結合して徐放化する
ことにより抗癌作用の増強が期待される。
は急性リンパ性白血病・乳癌・肺癌・頭頸部癌等に対し
て優れた抗癌作用を有し、高分子と結合して徐放化する
ことにより抗癌作用の増強が期待される。
【００１３】ピラン共重合体とメトトレキセートの結合
体に関しては、メトトレキセートの芳香環であるプテリ
ジン環のアミノ基とピラン共重合体の酸無水物結合との
直接的反応が知られている（Makrolmol.Chem.,179,1719
-1843(1978)）。しかしプテリジン環のアミノ基とピラ
ン共重合体の結合は不安定であり、結合したメトトレキ
セートは数分以内にほとんど放出されてしまう。このた
めこの高分子結合体はL1210白血病マウスに対してメト
トレキセートと同等の活性しか示さなかった（Cancer T
reat.Rep.,62,1837-1843(1978)）。ピラン共重合体とメ
トトレキセートの安定な高分子結合体を合成するために
は、メトトレキセートのグルタミン酸残基のカルボキシ
ル基に予めアミノ基を末端に有するスペーサーを導入し
た誘導体を合成し、このアミノ基とピラン共重合体の酸
無水物結合を反応させて、安定なアミド結合による高分
子結合体を合成することが最も有効と考えられた。
体に関しては、メトトレキセートの芳香環であるプテリ
ジン環のアミノ基とピラン共重合体の酸無水物結合との
直接的反応が知られている（Makrolmol.Chem.,179,1719
-1843(1978)）。しかしプテリジン環のアミノ基とピラ
ン共重合体の結合は不安定であり、結合したメトトレキ
セートは数分以内にほとんど放出されてしまう。このた
めこの高分子結合体はL1210白血病マウスに対してメト
トレキセートと同等の活性しか示さなかった（Cancer T
reat.Rep.,62,1837-1843(1978)）。ピラン共重合体とメ
トトレキセートの安定な高分子結合体を合成するために
は、メトトレキセートのグルタミン酸残基のカルボキシ
ル基に予めアミノ基を末端に有するスペーサーを導入し
た誘導体を合成し、このアミノ基とピラン共重合体の酸
無水物結合を反応させて、安定なアミド結合による高分
子結合体を合成することが最も有効と考えられた。
【００１４】すなわち本発明のメトトレキセートとピラ
ン共重合体の高分子結合体の特徴は、予めメトトレキセ
ートにアルキルジアミンを反応させて誘導体を合成・単
離し、このメトトレキセート誘導体とピラン共重合体を
反応させることにある。メトトレキセートのアルカリ性
緩衝液とピラン共重合体を水と相溶性の有機溶媒中で反
応させ、限外ロ過により精製し、アセトン又はメタノー
ル中に沈澱あるいは凍結乾燥により高分子結合体を得
る。また所望に応じ結合体をナトリウム・カリウム・カ
ルシウム・マグネシウムなどの薬理的に共用しうる塩に
変えた後、限外ロ過及び再沈澱あるいは凍結乾燥により
高分子結合体の塩として取り出す。このようにして得ら
れるメトトレキセートとピラン共重合体の高分子結合体
中のメトトレキセートの含有率は望ましくは５から６７
重量％である。５重量％は一般式（Ｉ）と一般式（Ｉ
Ｉ）の割合が９０：１０に相当し、６７重量％は一般式
（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が０：１００に相当する
高分子結合体である。
ン共重合体の高分子結合体の特徴は、予めメトトレキセ
ートにアルキルジアミンを反応させて誘導体を合成・単
離し、このメトトレキセート誘導体とピラン共重合体を
反応させることにある。メトトレキセートのアルカリ性
緩衝液とピラン共重合体を水と相溶性の有機溶媒中で反
応させ、限外ロ過により精製し、アセトン又はメタノー
ル中に沈澱あるいは凍結乾燥により高分子結合体を得
る。また所望に応じ結合体をナトリウム・カリウム・カ
ルシウム・マグネシウムなどの薬理的に共用しうる塩に
変えた後、限外ロ過及び再沈澱あるいは凍結乾燥により
高分子結合体の塩として取り出す。このようにして得ら
れるメトトレキセートとピラン共重合体の高分子結合体
中のメトトレキセートの含有率は望ましくは５から６７
重量％である。５重量％は一般式（Ｉ）と一般式（Ｉ
Ｉ）の割合が９０：１０に相当し、６７重量％は一般式
（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が０：１００に相当する
高分子結合体である。
【００１５】抗癌剤の高分子結合体からの徐放性に関し
ては、一般式（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が７１：２
９であり、かつ一般式（ＩＶ）のｎ＝６さらに一般式
（Ｖ）でｍ＝１１０のメトトレキセートと分子量３万の
ピラン共重合体の結合体は、ヒト血清中３７℃で３日目
までに３０％のメトトレキセート誘導体を放出し、この
結合体が血清中で抗癌剤を徐々に放出する事が示され
た。
ては、一般式（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が７１：２
９であり、かつ一般式（ＩＶ）のｎ＝６さらに一般式
（Ｖ）でｍ＝１１０のメトトレキセートと分子量３万の
ピラン共重合体の結合体は、ヒト血清中３７℃で３日目
までに３０％のメトトレキセート誘導体を放出し、この
結合体が血清中で抗癌剤を徐々に放出する事が示され
た。
【００１６】また高分子結合体の抗癌活性に関しては前
述の一般式（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が７１：２９
であり、かつ一般式（ＩＶ）のｎ＝６さらに一般式
（Ｖ）でｍ＝１１０のメトトレキセートと分子量３万の
ピラン共重合体の結合体についてP388白血病マウスに対
して抗癌活性を評価した。１×１０6個のP388白血病細
胞を腹腔内に移植した６週令メスＣＤＦ1マウスに対し
て、腫瘍移植２４時間後に一回腹腔内に薬剤を投与して
治療し、一群６匹の治療群と無治療群の生存を比較検討
した。各群の生存日数の中央値から無治療群に対する延
命率を算出し、評価の基準とした。メトトレキセート単
独投与群の延命率が５４％であったのに対して、メトト
レキセートとピラン共重合体の高分子結合体は延命率１
６３％であり、生物学的統計方法のMann-Whitnneyの有
為差検定でも明らかに高分子結合体が優れた抗癌効果を
示した。
述の一般式（Ｉ）と一般式（ＩＩ）の割合が７１：２９
であり、かつ一般式（ＩＶ）のｎ＝６さらに一般式
（Ｖ）でｍ＝１１０のメトトレキセートと分子量３万の
ピラン共重合体の結合体についてP388白血病マウスに対
して抗癌活性を評価した。１×１０6個のP388白血病細
胞を腹腔内に移植した６週令メスＣＤＦ1マウスに対し
て、腫瘍移植２４時間後に一回腹腔内に薬剤を投与して
治療し、一群６匹の治療群と無治療群の生存を比較検討
した。各群の生存日数の中央値から無治療群に対する延
命率を算出し、評価の基準とした。メトトレキセート単
独投与群の延命率が５４％であったのに対して、メトト
レキセートとピラン共重合体の高分子結合体は延命率１
６３％であり、生物学的統計方法のMann-Whitnneyの有
為差検定でも明らかに高分子結合体が優れた抗癌効果を
示した。
【００１７】以上このように本発明のメトトレキセート
誘導体とピラン共重合体の高分子結合体は、抗癌活性物
質のメトトレキセート誘導体を血清中で徐々に放出し、
それ自身で抗癌効果を有するピラン共重合体とメトトレ
キセートの抗癌効果の相乗作用により、該メトトレキセ
ート単独を用いる場合に比較して著しく優れた抗癌効果
を有した。
誘導体とピラン共重合体の高分子結合体は、抗癌活性物
質のメトトレキセート誘導体を血清中で徐々に放出し、
それ自身で抗癌効果を有するピラン共重合体とメトトレ
キセートの抗癌効果の相乗作用により、該メトトレキセ
ート単独を用いる場合に比較して著しく優れた抗癌効果
を有した。
【００１８】
【 実施例】次に実施例により本発明をより詳細に説明
する。なお一般式（Ｖ）のジビニルエーテルと無水マレ
イン酸共重合体はピラン共重合体と記述する。
する。なお一般式（Ｖ）のジビニルエーテルと無水マレ
イン酸共重合体はピラン共重合体と記述する。
【００１９】実施例１ ４０ｍｌのジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキ
シドあるいはＮ−メチルピロリドン中に溶解したメトト
レキセート１.６ｇと１,６−ジアミノヘキサン４.０ｇ
を水溶性カルボジイミド０.８ｇを用いて室温で２時間
攪拌して反応させ、１ｌのアセトン中に滴下してメトト
レキセートとジアミノヘキサン反応物２.２ｇを沈澱さ
せた。この反応物をpH4.6の0.2モル酢酸アンモニウム緩
衝液に10%アセトニトリル及び10%メタノールを添加した
溶出液で分取用高速液体クロマトグラフィーカラム(20m
m直径x25cm長さ)により分取し、メトトレキセートの１,
６−ジアミノヘキサン誘導体として一般式（ＩＩＩ）の
化合物（ただしｎ＝６）０.４ｇ及び一般式（ＩＶ）の
化合物（ただしｎ＝６）０.５ｇを得た。酢酸塩として
単離した一般式（３）の分子式Ｃ28Ｈ42Ｎ10０7に対す
る元素分析値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、
Ｃ：５３.２４％（５３.３１％）、Ｈ：６.３６％（６.
７２％）、Ｎ：２２.４８％（２２.２０％）であり、実
測値と理論計算値は一致した。
シドあるいはＮ−メチルピロリドン中に溶解したメトト
レキセート１.６ｇと１,６−ジアミノヘキサン４.０ｇ
を水溶性カルボジイミド０.８ｇを用いて室温で２時間
攪拌して反応させ、１ｌのアセトン中に滴下してメトト
レキセートとジアミノヘキサン反応物２.２ｇを沈澱さ
せた。この反応物をpH4.6の0.2モル酢酸アンモニウム緩
衝液に10%アセトニトリル及び10%メタノールを添加した
溶出液で分取用高速液体クロマトグラフィーカラム(20m
m直径x25cm長さ)により分取し、メトトレキセートの１,
６−ジアミノヘキサン誘導体として一般式（ＩＩＩ）の
化合物（ただしｎ＝６）０.４ｇ及び一般式（ＩＶ）の
化合物（ただしｎ＝６）０.５ｇを得た。酢酸塩として
単離した一般式（３）の分子式Ｃ28Ｈ42Ｎ10０7に対す
る元素分析値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、
Ｃ：５３.２４％（５３.３１％）、Ｈ：６.３６％（６.
７２％）、Ｎ：２２.４８％（２２.２０％）であり、実
測値と理論計算値は一致した。
【００２０】メトトレキセートの１,６−ジアミノヘキ
サン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）（あるい
は一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））２５ｍｇを１５ｍ
ｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均分子量
３万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合体２０
ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシドあるい
はＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2モル水
酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反応させ
た。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸塩をア
ミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）を用い
て蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸収で反
応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在しない
ことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ過膜で
滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体５４ｍｇを
得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性である
が、ここで得られたメトトレキセート高分子結合体は蒸
留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であった。生
成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中の紫外
部吸収スペクトルは図１に示すようにメトトレキセート
とほぼ同一のスペクトルを有していた。高分子結合体中
のメトトレキセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部
吸収強度から４１重量％と定量された。これは一般式
（Ｉ）が６７％、一般式（ＩＩ）が３３％からなり、か
つ一般式（ＩＩ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは
一般式（ＩＶ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体の
ピラン共重合体の高分子結合体である。
サン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）（あるい
は一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））２５ｍｇを１５ｍ
ｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均分子量
３万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合体２０
ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシドあるい
はＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2モル水
酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反応させ
た。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸塩をア
ミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）を用い
て蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸収で反
応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在しない
ことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ過膜で
滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体５４ｍｇを
得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性である
が、ここで得られたメトトレキセート高分子結合体は蒸
留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であった。生
成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中の紫外
部吸収スペクトルは図１に示すようにメトトレキセート
とほぼ同一のスペクトルを有していた。高分子結合体中
のメトトレキセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部
吸収強度から４１重量％と定量された。これは一般式
（Ｉ）が６７％、一般式（ＩＩ）が３３％からなり、か
つ一般式（ＩＩ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは
一般式（ＩＶ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体の
ピラン共重合体の高分子結合体である。
【００２１】実施例２ 実施例１で得られたメトトレキセート誘導体のピラン共
重合体の高分子結合体２０ｍｇを蒸留水に溶解し、0.1
モルの炭酸水素ナトリウム溶液でpH7.8に調整した。ナ
トリウム塩となった高分子結合体を再びアミコン社限外
ロ過膜ＰＭ３０を用いて蒸留水に対して洗浄し、0.1μm
孔径のミリポアフィルターで滅菌ロ過後、凍結乾燥して
２１ｍｇの黄色綿状固体を得た。この高分子結合体塩は
実施例１で得られた高分子結合体よりさらに水又は生理
食塩水に対する溶解性が高い。水溶液中の紫外部吸収ス
ペクトルは実施例１と同様であり、メトトレキセート含
有率は３５重量％であった。
重合体の高分子結合体２０ｍｇを蒸留水に溶解し、0.1
モルの炭酸水素ナトリウム溶液でpH7.8に調整した。ナ
トリウム塩となった高分子結合体を再びアミコン社限外
ロ過膜ＰＭ３０を用いて蒸留水に対して洗浄し、0.1μm
孔径のミリポアフィルターで滅菌ロ過後、凍結乾燥して
２１ｍｇの黄色綿状固体を得た。この高分子結合体塩は
実施例１で得られた高分子結合体よりさらに水又は生理
食塩水に対する溶解性が高い。水溶液中の紫外部吸収ス
ペクトルは実施例１と同様であり、メトトレキセート含
有率は３５重量％であった。
【００２２】実施例３ 実施例１で得られたメトトレキセートの１,６−ジアミ
ノヘキサン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）
（あるいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））６８ｍｇ
を１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平
均分子量５千の一般式（Ｖ）でｍ＝１８のピラン共重合
体６８ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシド
あるいはＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2
モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反
応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸
塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ１０（分画分子量１万）
を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸
収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在
しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ
過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１５
２ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性
であるが、ここで得られたメトトレキセート高分子結合
体は蒸留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２９重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８０
％、一般式（ＩＩ）が２０％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体のピラン共重
合体の高分子結合体である。
ノヘキサン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）
（あるいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））６８ｍｇ
を１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平
均分子量５千の一般式（Ｖ）でｍ＝１８のピラン共重合
体６８ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシド
あるいはＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2
モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反
応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸
塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ１０（分画分子量１万）
を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸
収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在
しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ
過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１５
２ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性
であるが、ここで得られたメトトレキセート高分子結合
体は蒸留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２９重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８０
％、一般式（ＩＩ）が２０％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体のピラン共重
合体の高分子結合体である。
【００２３】実施例４ 実施例１で得られたメトトレキセートの１,６−ジアミ
ノヘキサン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）
（あるいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））６８ｍｇ
を１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平
均分子量１２万の一般式（Ｖ）でｍ＝４４１のピラン共
重合体６８ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキ
シドあるいはＮーメチルピロリドン溶液を加え、pH8.6
に0.2モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２
時間反応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及び
ホウ酸塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量
３万）を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫
外部吸収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体
が存在しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社
滅菌ロ過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固
体１５０ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に
難溶性であるが、ここで得られたメトトレキセート高分
子結合体は蒸留水及び生理食塩水に対し易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２９重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８０
％、一般式（ＩＩ）が２０％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体のピラン共重
合体の高分子結合体である。
ノヘキサン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝６）
（あるいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝６））６８ｍｇ
を１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平
均分子量１２万の一般式（Ｖ）でｍ＝４４１のピラン共
重合体６８ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキ
シドあるいはＮーメチルピロリドン溶液を加え、pH8.6
に0.2モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２
時間反応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及び
ホウ酸塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量
３万）を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫
外部吸収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体
が存在しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社
滅菌ロ過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固
体１５０ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に
難溶性であるが、ここで得られたメトトレキセート高分
子結合体は蒸留水及び生理食塩水に対し易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２９重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８０
％、一般式（ＩＩ）が２０％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝６のメトトレキセート誘導体のピラン共重
合体の高分子結合体である。
【００２４】実施例５ 実施例１と同様に４０ｍｌのジメチルホルムアミド又は
ジメチルスルホキシドあるいはＮ−メチルピロリドン中
に溶解したメトトレキセート４５４ｍｇと１,３−ジア
ミノプロパン８４０μlを水溶性カルボジイミド２３０
ｍｇを用いて室温で２時間攪拌して反応させ、１ｌのア
セトン中に滴下してメトトレキセートとジアミノプロパ
ン反応物５００ｍｇを沈澱させた。この反応物をpH4.6
の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝液に10%アセトニトリル
及び5%メタノールを添加した溶出液で分取用高速液体ク
ロマトグラフィーカラム(20mm直径x25cm長さ)により分
取し、メトトレキセートの１,３−ジアミノプロパン誘
導体として一般式（ＩＩＩ）の化合物（ただしｎ＝３）
１０５ｍｇ及び一般式（ＩＶ）の化合物（ただしｎ＝
３）１２０ｍｇを得た。酢酸塩として単離した一般式
（ＩＩＩ）の分子式Ｃ25Ｈ36Ｎ10０7に対する元素分析
値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、Ｃ：５１.
００％（４９.９７％）、Ｈ：６.１８％（５.９６
％）、Ｎ：２３.８０％（２３.８３％）であり、実測値
と理論計算値は一致した。
ジメチルスルホキシドあるいはＮ−メチルピロリドン中
に溶解したメトトレキセート４５４ｍｇと１,３−ジア
ミノプロパン８４０μlを水溶性カルボジイミド２３０
ｍｇを用いて室温で２時間攪拌して反応させ、１ｌのア
セトン中に滴下してメトトレキセートとジアミノプロパ
ン反応物５００ｍｇを沈澱させた。この反応物をpH4.6
の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝液に10%アセトニトリル
及び5%メタノールを添加した溶出液で分取用高速液体ク
ロマトグラフィーカラム(20mm直径x25cm長さ)により分
取し、メトトレキセートの１,３−ジアミノプロパン誘
導体として一般式（ＩＩＩ）の化合物（ただしｎ＝３）
１０５ｍｇ及び一般式（ＩＶ）の化合物（ただしｎ＝
３）１２０ｍｇを得た。酢酸塩として単離した一般式
（ＩＩＩ）の分子式Ｃ25Ｈ36Ｎ10０7に対する元素分析
値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、Ｃ：５１.
００％（４９.９７％）、Ｈ：６.１８％（５.９６
％）、Ｎ：２３.８０％（２３.８３％）であり、実測値
と理論計算値は一致した。
【００２５】メトトレキセートの１,３−ジアミノヘキ
サン誘導体一般式（ＩＩ）（ただしｎ＝３）（あるいは
一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝３））６８ｍｇを１５ｍｌ
のpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均分子量３
万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合体６８ｍ
ｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシドあるいは
Ｎ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2モル水酸
化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反応させ
た。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸塩をア
ミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）を用い
て蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸収で反
応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在しない
ことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ過膜で
滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１２９ｍｇ
を得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性である
が、ここで得られたメトトレキセート高分子結合体は蒸
留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であった。生
成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中の紫外
部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一のスペ
クトルを有していた。高分子結合体中のメトトレキセー
ト含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度から３３
重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が７５％、一
般式（ＩＩ）が２５％からなり、かつ一般式（ＩＩ）中
のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（ＩＶ））で
ｍ＝３のメトトレキセート誘導体のピラン共重合体の高
分子結合体である。
サン誘導体一般式（ＩＩ）（ただしｎ＝３）（あるいは
一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝３））６８ｍｇを１５ｍｌ
のpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均分子量３
万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合体６８ｍ
ｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシドあるいは
Ｎ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2モル水酸
化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反応させ
た。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸塩をア
ミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）を用い
て蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸収で反
応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在しない
ことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ過膜で
滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１２９ｍｇ
を得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性である
が、ここで得られたメトトレキセート高分子結合体は蒸
留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であった。生
成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中の紫外
部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一のスペ
クトルを有していた。高分子結合体中のメトトレキセー
ト含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度から３３
重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が７５％、一
般式（ＩＩ）が２５％からなり、かつ一般式（ＩＩ）中
のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（ＩＶ））で
ｍ＝３のメトトレキセート誘導体のピラン共重合体の高
分子結合体である。
【００２６】実施例６ 実施例１と同様に４０ｍｌのジメチルホルムアミド又は
ジメチルスルホキシドあるいはＮ−メチルピロリドン中
に溶解したメトトレキセート４５４ｍｇと１,１２−ジ
アミノドデカン２.０ｇを水溶性カルボジイミド４２２
ｍｇを用いて室温で２時間攪拌して反応させ、１ｌのア
セトン中に滴下してメトトレキセートとジアミノドデカ
ン反応物６２４ｍｇを沈澱させた。この反応物をpH4.6
の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝液に10%アセトニトリル
及び30%メタノールを添加した溶出液で分取用高速液体
クロマトグラフィーカラム(20mm直径x25cm長さ)により
分取し、メトトレキセートの１,１２−ジアミノドデカ
ン誘導体として一般式（ＩＩＩ）の化合物（ただしｎ＝
１２）１２８ｍｇ及び一般式（ＩＶ）の化合物（ただし
ｎ＝３）２２５ｍｇを得た。酢酸塩として単離した一般
式（ＩＩＩ）の分子式Ｃ33Ｈ52Ｎ10０7に対する元素分
析値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、Ｃ：５
６.８７％（５５.２２％）、Ｈ：６.９６％（７.１４
％）、Ｎ：２０.１０％（１９.３４％）であり、実測値
と理論計算値は一致した。
ジメチルスルホキシドあるいはＮ−メチルピロリドン中
に溶解したメトトレキセート４５４ｍｇと１,１２−ジ
アミノドデカン２.０ｇを水溶性カルボジイミド４２２
ｍｇを用いて室温で２時間攪拌して反応させ、１ｌのア
セトン中に滴下してメトトレキセートとジアミノドデカ
ン反応物６２４ｍｇを沈澱させた。この反応物をpH4.6
の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝液に10%アセトニトリル
及び30%メタノールを添加した溶出液で分取用高速液体
クロマトグラフィーカラム(20mm直径x25cm長さ)により
分取し、メトトレキセートの１,１２−ジアミノドデカ
ン誘導体として一般式（ＩＩＩ）の化合物（ただしｎ＝
１２）１２８ｍｇ及び一般式（ＩＶ）の化合物（ただし
ｎ＝３）２２５ｍｇを得た。酢酸塩として単離した一般
式（ＩＩＩ）の分子式Ｃ33Ｈ52Ｎ10０7に対する元素分
析値はそれぞれ実測値（理論計算値）として、Ｃ：５
６.８７％（５５.２２％）、Ｈ：６.９６％（７.１４
％）、Ｎ：２０.１０％（１９.３４％）であり、実測値
と理論計算値は一致した。
【００２７】メトトレキセートの１,１２−ジアミノド
デカン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝１２）（あ
るいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝１２））５４ｍｇを
１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均
分子量３万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合
体５４ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシド
あるいはＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2
モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反
応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸
塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）
を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸
収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在
しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ
過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１１
２ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性
であるが、ここで得られたメトトレキセート高分子結合
体は蒸留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２５重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８６
％、一般式（ＩＩ）が１４％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝１２のメトトレキセート誘導体のピラン共
重合体の高分子結合体である。
デカン誘導体一般式（ＩＩＩ）（ただしｎ＝１２）（あ
るいは一般式（ＩＶ）（ただしｎ＝１２））５４ｍｇを
１５ｍｌのpH8.6の0.2モルホウ酸緩衝液に溶解し、平均
分子量３万の一般式（Ｖ）でｍ＝１１０のピラン共重合
体５４ｍｇの２ｍｌアセトン又はジメチルスルホキシド
あるいはＮ−メチルピロリドン溶液を加え、pH8.6に0.2
モル水酸化ナトリウム溶液で調整しつつ室温で２時間反
応させた。未反応のメトトレキセート誘導体及びホウ酸
塩をアミコン社限外ロ過膜ＰＭ３０（分画分子量３万）
を用いて蒸留水により洗浄し、ロ液の313nmの紫外部吸
収で反応溶液中に未反応メトトレキセート誘導体が存在
しないことを確認して、0.1μm孔径のミリポア社滅菌ロ
過膜で滅菌ロ過した後、凍結乾燥して黄色綿状固体１１
２ｍｇを得た。メトトレキセート自身は蒸留水に難溶性
であるが、ここで得られたメトトレキセート高分子結合
体は蒸留水及び生理食塩水に対して極めて易溶性であっ
た。生成物のメトトレキセート高分子結合体の水溶液中
の紫外部吸収スペクトルはメトトレキセートとほぼ同一
のスペクトルを有していた。高分子結合体中のメトトレ
キセート含有率は水溶液中の309nmの紫外部吸収強度か
ら２５重量％と定量された。これは一般式（Ｉ）が８６
％、一般式（ＩＩ）が１４％からなり、かつ一般式（Ｉ
Ｉ）中のＲが一般式（ＩＩＩ）（あるいは一般式（Ｉ
Ｖ））でｍ＝１２のメトトレキセート誘導体のピラン共
重合体の高分子結合体である。
【００２８】参考例１ メトトレキセート誘導体のピラン共重合体の高分子結合
体からの血清中でのメトトレキセート誘導体の放出速度
体からの血清中でのメトトレキセート誘導体の放出速度
【００２９】実施例１で得たメトトレキセート高分子結
合体６.７ｍｇをヒト血清１.０ｍｌに溶解して３７℃に
保ち、一定時間経過後100μlのサンプルを取り、メタノ
ール500μlを添加して攪拌後遠心分離して血清中タンパ
ク質を分離し、アメトプテリンを内部標準として分析用
ODS逆相系高速液体クロマトグラフィーカラム(4.6mm内
径x15cm長さ)でメトトレキセート誘導体を分離・定量し
た。溶出液としてpH4.6の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝
液、溶出速度1.0ml/min、検出波長313nmを用いた。図２
に示すように実施例１で得られたメトトレキセート誘導
体のピラン共重合体の高分子結合体からヒト血清中で６
日間で３０％のメトトレキセート誘導体が放出された。
合体６.７ｍｇをヒト血清１.０ｍｌに溶解して３７℃に
保ち、一定時間経過後100μlのサンプルを取り、メタノ
ール500μlを添加して攪拌後遠心分離して血清中タンパ
ク質を分離し、アメトプテリンを内部標準として分析用
ODS逆相系高速液体クロマトグラフィーカラム(4.6mm内
径x15cm長さ)でメトトレキセート誘導体を分離・定量し
た。溶出液としてpH4.6の0.2モル酢酸アンモニウム緩衝
液、溶出速度1.0ml/min、検出波長313nmを用いた。図２
に示すように実施例１で得られたメトトレキセート誘導
体のピラン共重合体の高分子結合体からヒト血清中で６
日間で３０％のメトトレキセート誘導体が放出された。
【００３０】
【図２】
【００３１】参考例２ メトトレキセート誘導体のピラン共重合体の高分子結合
体の抗癌効果
体の抗癌効果
【００３２】実施例１で得たメトトレキセート高分子誘
導体の抗癌効果をP388白血病マウスに対して検討した。
導体の抗癌効果をP388白血病マウスに対して検討した。
【００３３】すなわち６週令のメスCD2F1マウスの腹腔
内に1x106個のP388白血病細胞を移植し、24時間経過後
腹腔内に一回薬剤を投与して治療した。一群６匹の無処
置の対照群と治療群の体重減少と生存日数を観察した。
各群マウス死亡の中央値を生存日数として、無処置の対
照群の生存日数に対して、治療群の延命率を百分率で算
出し、抗癌活性比較の指標とした。表１に示すように無
処置対照群の生存中央値は９.０日であったのに対し、
メトトレキセート単独投与では１３.９日、メトトレキ
セート高分子結合体では２３.８日であり、メトトレキ
セート高分子結合体の方が著しく優れた抗癌効果を示し
た。
内に1x106個のP388白血病細胞を移植し、24時間経過後
腹腔内に一回薬剤を投与して治療した。一群６匹の無処
置の対照群と治療群の体重減少と生存日数を観察した。
各群マウス死亡の中央値を生存日数として、無処置の対
照群の生存日数に対して、治療群の延命率を百分率で算
出し、抗癌活性比較の指標とした。表１に示すように無
処置対照群の生存中央値は９.０日であったのに対し、
メトトレキセート単独投与では１３.９日、メトトレキ
セート高分子結合体では２３.８日であり、メトトレキ
セート高分子結合体の方が著しく優れた抗癌効果を示し
た。
【００３４】この各群の結果の差異を明確に評価するた
め、Mann-Whitneyの有為差検定を行った結果、それぞれ
の差異は９５％以上の確率で有為であることが確かめら
れた。またメトトレキセートとピラン共重合体の同時治
療もメトトレキセート単独治療に比較して優れた効果を
示しており、メトトレキセートとピラン共重合体が相乗
的に働くことが示された。
め、Mann-Whitneyの有為差検定を行った結果、それぞれ
の差異は９５％以上の確率で有為であることが確かめら
れた。またメトトレキセートとピラン共重合体の同時治
療もメトトレキセート単独治療に比較して優れた効果を
示しており、メトトレキセートとピラン共重合体が相乗
的に働くことが示された。
【００３５】
【表１】
【００３６】
【発明の効果】本発明のメトトレキセート誘導体のピラ
ン共重合体の高分子結合体は抗癌活性物質であるメトト
レキセート誘導体の徐放性に優れ、それ自身抗癌活性を
有するピラン共重合体との相乗効果により、該メトトレ
キセート単独で用いる場合に比較して著しく優れた抗癌
効果を有する。
ン共重合体の高分子結合体は抗癌活性物質であるメトト
レキセート誘導体の徐放性に優れ、それ自身抗癌活性を
有するピラン共重合体との相乗効果により、該メトトレ
キセート単独で用いる場合に比較して著しく優れた抗癌
効果を有する。
【００３７】
【図１】 実施例１におけるメトトレキセート誘導体の
ピラン共重合体の高分子結合体の蒸留水中の紫外部吸収
スペクトル。
ピラン共重合体の高分子結合体の蒸留水中の紫外部吸収
スペクトル。
【図２】 実施例１におけるメトトレキセート誘導体の
ピラン共重合体の高分子結合体のヒト血清中でのメトト
レキセート誘導体の放出速度。
ピラン共重合体の高分子結合体のヒト血清中でのメトト
レキセート誘導体の放出速度。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 国分友邦 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内 (72)発明者 田中秀明 茨城県つくば市東１丁目１番３ 工業技術 院生命工学工業技術研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 繰り返し単位が一般式（Ｉ） 【化１】 及び一般式（ＩＩ） 【化２】 （式中のＲは式（ＩＩＩ） 【化３】 又は式（ＩＶ） 【化４】 で表されるメトトレキセート誘導体残基（ただし式（Ｉ
ＩＩ）あるいは式（ＩＶ）中のｎは１から１２までの整
数である））で表される繰り返し単位１０以上５００以
下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び一般式（ＩＩ）のモ
ル比が０：１００から９０：１０であるメトトレキセー
ト誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその塩。 - 【請求項２】 水溶性有機溶媒の存在下、一般式（Ｖ） 【化５】 （式中のｍは１０以上５００以下の整数である）で表さ
れるピラン共重合体に、一般式（ＶＩ） 【化６】 又は一般式（ＶＩＩ） 【化７】 （ただし一般式（ＶＩ）及び一般式（ＶＩＩ）中のｎは
１から１２までの整数である）で表されるメトトレキセ
ート誘導体を反応させ、ついで所望に応じて塩に変える
ことを特徴とする、繰り返し単位一般式（Ｉ） 【化８】 及び一般式（ＩＩ） 【化９】 （式中のＲは一般式（ＩＩＩ） 【化１０】 又は一般式（ＩＶ） 【化１１】 で表されるメトトレキセート誘導体残基（ただし一般式
（ＩＩＩ）あるいは一般式（ＩＶ）中のｎは１から１２
までの整数である））で表される繰り返し単位１０以上
５００以下からなり、かつ一般式（Ｉ）及び一般式（Ｉ
Ｉ）のモル比が０：１００から９０：１０であるメトト
レキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及び
その塩の製造方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5132873A JP2545729B2 (ja) | 1993-05-11 | 1993-05-11 | メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法 |
| US08/214,467 US5401742A (en) | 1993-05-11 | 1994-03-18 | Polymeric conjugate of methotrexate compound and pyran copolymer and method for the preparation thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5132873A JP2545729B2 (ja) | 1993-05-11 | 1993-05-11 | メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07173080A true JPH07173080A (ja) | 1995-07-11 |
| JP2545729B2 JP2545729B2 (ja) | 1996-10-23 |
Family
ID=15091555
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5132873A Expired - Lifetime JP2545729B2 (ja) | 1993-05-11 | 1993-05-11 | メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5401742A (ja) |
| JP (1) | JP2545729B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7740875B2 (en) * | 2004-10-08 | 2010-06-22 | Mediquest Therapeutics, Inc. | Organo-gel formulations for therapeutic applications |
| US20060078580A1 (en) | 2004-10-08 | 2006-04-13 | Mediquest Therapeutics, Inc. | Organo-gel formulations for therapeutic applications |
| CN112094322B (zh) * | 2019-06-18 | 2022-04-22 | 首都医科大学 | His-Gly-Lys修饰的甲氨蝶呤,其合成,抗肿瘤活性和应用 |
| CN112094320B (zh) * | 2019-06-18 | 2022-08-02 | 首都医科大学 | His-Gly-Glu修饰的甲氨蝶呤,其合成,抗肿瘤活性和应用 |
| CN115991869B (zh) * | 2022-04-14 | 2024-04-19 | 四川大学 | 一种聚氨基酸共聚物、抗骨肿瘤骨材料及其制备 |
| CN115920076B (zh) * | 2022-11-07 | 2024-05-31 | 盐城师范学院 | 一种马齿苋多糖-去甲基斑蝥素-甲氨蝶呤偶联物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4182800A (en) * | 1977-07-16 | 1980-01-08 | Hercules Incorporated | Methotrexate-divinyl ether--maleic anhydride copolymer reaction product |
| US4520162A (en) * | 1983-09-24 | 1985-05-28 | Director-General Of The Agency Of Industrial Science & Technology | Polymeric compounds with sustained anti-tumor activity and a method for the preparation thereof |
-
1993
- 1993-05-11 JP JP5132873A patent/JP2545729B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-03-18 US US08/214,467 patent/US5401742A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2545729B2 (ja) | 1996-10-23 |
| US5401742A (en) | 1995-03-28 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |