JPS63216475A - 乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法 - Google Patents
乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法Info
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- JPS63216475A JPS63216475A JP5013087A JP5013087A JPS63216475A JP S63216475 A JPS63216475 A JP S63216475A JP 5013087 A JP5013087 A JP 5013087A JP 5013087 A JP5013087 A JP 5013087A JP S63216475 A JPS63216475 A JP S63216475A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、乳酸桿菌属（ｌａ（ｔｏｂａｃｉ ｆｌｕｓ
）の細菌に対してジカルボン酸塩又はトリカルボン酸又
は二糖以上の糖類の存在下で誘導反応させることを特徴
とする乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法に関する。
）の細菌に対してジカルボン酸塩又はトリカルボン酸又
は二糖以上の糖類の存在下で誘導反応させることを特徴
とする乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法に関する。
［従来の技術］
乳酸菌は古くから食品に広く利用され、その有用性と安
全性は周知の事実である。近年バイオテクノロジーの発
展に伴ない、遺伝的改良などによる乳酸菌の新たな利用
が期待されている。しかしながら、遺伝子工学分野にお
ける乳酸菌の利用は □他の細菌、微生物に比べ著
しく遅れている。乳酸桿菌に関しては、漸く溶菌酵素を
利用したプロトプラスト化についてその報告が徐々にな
されてきたところである（例えば特開昭５９−８８０８
６、特開昭５９−１３５８８３ 、特開昭６０−３０６
８６、特開昭６１−２８０２６７を参照）。一方本発明
者らも、特定の浸透圧安定刑を用いることによる溶菌酵
素を利用した乳酸桿菌のプロトプラスト化の方法を見出
している（特願昭６１−４９５５８、特願昭６ｌ−４９
５５９）。
全性は周知の事実である。近年バイオテクノロジーの発
展に伴ない、遺伝的改良などによる乳酸菌の新たな利用
が期待されている。しかしながら、遺伝子工学分野にお
ける乳酸菌の利用は □他の細菌、微生物に比べ著
しく遅れている。乳酸桿菌に関しては、漸く溶菌酵素を
利用したプロトプラスト化についてその報告が徐々にな
されてきたところである（例えば特開昭５９−８８０８
６、特開昭５９−１３５８８３ 、特開昭６０−３０６
８６、特開昭６１−２８０２６７を参照）。一方本発明
者らも、特定の浸透圧安定刑を用いることによる溶菌酵
素を利用した乳酸桿菌のプロトプラスト化の方法を見出
している（特願昭６１−４９５５８、特願昭６ｌ−４９
５５９）。
こうした溶菌酵素は、この分野ではプロトプラストの作
成に用いられているほか、乳酸桿菌や乳酸球菌の菌体内
物質の抽出への利用も可能である。
成に用いられているほか、乳酸桿菌や乳酸球菌の菌体内
物質の抽出への利用も可能である。
乳酸菌の物質生産への利用を考える場合、菌体内物質の
効率的で安全な抽出方法を確立することは重要な課題で
ある。現在、抽出にはりゾチーム等の溶菌酵素を利用し
たり、物理的な菌体の破壊などが行われているが、実際
に産業上利用される場合には、添加酵素成分や物理的破
壊に起因する安全性・効率の面で改善されなければなら
ない問題点がある。
効率的で安全な抽出方法を確立することは重要な課題で
ある。現在、抽出にはりゾチーム等の溶菌酵素を利用し
たり、物理的な菌体の破壊などが行われているが、実際
に産業上利用される場合には、添加酵素成分や物理的破
壊に起因する安全性・効率の面で改善されなければなら
ない問題点がある。
全ての微生物は、その菌体内に自己溶解酵素を持ってい
るが、その作用を利用したより効率的で安全なプロトプ
ラスト（オートプラスト）の作成や菌体内物質の抽出方
法が乳酸桿菌以外のいくつかの微生物で研究されてきて
いる（Ｏｇａｔａ ｅｊａｔ、、 Ｊ、 Ｆａｃ、 Ａ
ｇｒ−、２５（４）、 ２０１（１９８１））。
るが、その作用を利用したより効率的で安全なプロトプ
ラスト（オートプラスト）の作成や菌体内物質の抽出方
法が乳酸桿菌以外のいくつかの微生物で研究されてきて
いる（Ｏｇａｔａ ｅｊａｔ、、 Ｊ、 Ｆａｃ、 Ａ
ｇｒ−、２５（４）、 ２０１（１９８１））。
しかし乳酸桿菌属細菌では、掻く一部の菌を除いては、
効率よい自己溶解活性の誘導が困難であった（Ｏｇａｔ
ａ ｅｔ ａｌ、、 Ａｇｒ、 Ｂｆｏｌ、 （：ｈｅ
ｎ＋、 ＫｙｕｓｈｕＵｎｉｖ、、 ２５（４）、 ２
０１−２２２（１９８１））。
効率よい自己溶解活性の誘導が困難であった（Ｏｇａｔ
ａ ｅｔ ａｌ、、 Ａｇｒ、 Ｂｆｏｌ、 （：ｈｅ
ｎ＋、 ＫｙｕｓｈｕＵｎｉｖ、、 ２５（４）、 ２
０１−２２２（１９８１））。
乳酸桿菌属細菌において、自己溶解活性を最大りつるで
あろうと考えられる。
あろうと考えられる。
［発明が解決しようとする問題点］
こうした見地から本発明者らは、乳酸桿菌属細菌の自己
溶解活性の制御・有効利用に関して研究を重ねた結果、
乳酸桿菌属をジカルボン酸塩又はトリカルボン酸塩また
は二糖以上の糖類の存在Ｆで誘導反応させることにより
、菌体の自己溶解酵素活性を最大に引き出すことに成功
した。この方法を用い、誘導反応時間等とを適宜選択組
み合せることで、乳酸桿菌属細菌のオートプラストの形
成や自己溶解による菌体内物質の抽出に非常に効率的で
有効であることを見出し、本発明を完成するに至ったの
である。
溶解活性の制御・有効利用に関して研究を重ねた結果、
乳酸桿菌属をジカルボン酸塩又はトリカルボン酸塩また
は二糖以上の糖類の存在Ｆで誘導反応させることにより
、菌体の自己溶解酵素活性を最大に引き出すことに成功
した。この方法を用い、誘導反応時間等とを適宜選択組
み合せることで、乳酸桿菌属細菌のオートプラストの形
成や自己溶解による菌体内物質の抽出に非常に効率的で
有効であることを見出し、本発明を完成するに至ったの
である。
［問題点を解決するための手段］
本発明は■自己溶解活性誘導剤、■乳酸桿菌以外菌、及
び■誘導反応条件の３つの必須構成要件からなる。
び■誘導反応条件の３つの必須構成要件からなる。
これらの構成要件のうち、いずれの構成要件が欠けても
利用しつるような効率的な自己溶解活性を誘導すること
が出来ないのであるが、その中でも最も大きな要件とな
るのが自己溶解活性誘導剤である。
利用しつるような効率的な自己溶解活性を誘導すること
が出来ないのであるが、その中でも最も大きな要件とな
るのが自己溶解活性誘導剤である。
本発明で用いられる自己溶解活性誘導剤は、ジカルボン
酸塩、トリカルボン酸塩又は二糖以上の糖類のいずれか
である。
酸塩、トリカルボン酸塩又は二糖以上の糖類のいずれか
である。
ジカルボン酸塩およびトリカルボン酸塩は、それぞれナ
トリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム基
金てが有効である。特にその中でもナトリウム塩、カリ
ウム塩が好ましい。
トリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム基
金てが有効である。特にその中でもナトリウム塩、カリ
ウム塩が好ましい。
ジカルボン酸塩およびトリカルボン酸塩の使用濃度は、
いずれも０．４−１．０閘程度が好ましい。
いずれも０．４−１．０閘程度が好ましい。
二糖以上の糖類としては、シュクロース、ラクトース、
ラフィノース、スタキオース、マルトテトラオース、マ
ルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタ
オース等が含まれるが、入手の容易さ、経済性等を考慮
するとシュークロースが好ましい。これらの糖類は、０
．２−１．２閘の濃度での使用が好ましい。
ラフィノース、スタキオース、マルトテトラオース、マ
ルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタ
オース等が含まれるが、入手の容易さ、経済性等を考慮
するとシュークロースが好ましい。これらの糖類は、０
．２−１．２閘の濃度での使用が好ましい。
このような自己溶解活性誘導剤を用いることにより、他
の構成要件は、最も有効的かつ効率的に使用されつるの
である。これらの自己溶解活性誘導剤はその適応範囲に
おいて、対象である乳酸桿菌属細菌で最も効率的に誘導
される自己溶解活性誘導剤を適宜選択すればよい。
の構成要件は、最も有効的かつ効率的に使用されつるの
である。これらの自己溶解活性誘導剤はその適応範囲に
おいて、対象である乳酸桿菌属細菌で最も効率的に誘導
される自己溶解活性誘導剤を適宜選択すればよい。
乳酸桿菌属細菌には、全てのものが含まれるが、例を挙
げるとＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ 赳」」弘■邦（以
下、ＬａｃｔｏｂａｃｉｔｌｕｓをＬと略記する）、Ｌ
眼堕肛旦匹、Ｌ、 ｃａｓｅｉ、Ｌ、 ｄｅｌｂｒｕｅ
ｃｋｉｉ、 Ｌ。
げるとＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ 赳」」弘■邦（以
下、ＬａｃｔｏｂａｃｉｔｌｕｓをＬと略記する）、Ｌ
眼堕肛旦匹、Ｌ、 ｃａｓｅｉ、Ｌ、 ｄｅｌｂｒｕｅ
ｃｋｉｉ、 Ｌ。
ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ、 Ｌ、 ｈｅｌｖｅｔｔｃｕｓ％
Ｌ、 １ａｃｔｉｓ、 Ｌ。
Ｌ、 １ａｃｔｉｓ、 Ｌ。
凶■山匹四、虱■枯等である。
これら乳酸桿菌属細菌濃度は、細胞懸濁液の状態で誘導
剤が適応範囲内であれば、１０’−１０”細胞／ｍｌが
適当である。
剤が適応範囲内であれば、１０’−１０”細胞／ｍｌが
適当である。
それぞれの菌株は、通常の培地及び培養条件で培養した
ものを使用してもよいが、特に目的によって培地、条件
を選択することで、より効率的に自己溶解活性を利用し
つる。例えば大量に菌体内物質を抽出する場合には、大
量培養に適した栄養条件の良い培地、培養条件を採用す
ればよいし、オートプラスト作製に用いる場合は、培地
のグルコース濃度を低め（ｏ、ｉ〜０．５ ｋ）に押さ
えればより効率的である。
ものを使用してもよいが、特に目的によって培地、条件
を選択することで、より効率的に自己溶解活性を利用し
つる。例えば大量に菌体内物質を抽出する場合には、大
量培養に適した栄養条件の良い培地、培養条件を採用す
ればよいし、オートプラスト作製に用いる場合は、培地
のグルコース濃度を低め（ｏ、ｉ〜０．５ ｋ）に押さ
えればより効率的である。
ただ、培養での菌体の増殖相（ｇｒｏｗｔｈ ｐｈａｓ
ｅ）は、対数増殖期（ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｐｈａ
ｓｅ）から定常期（ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｐｈａｓｅ
）の初めのものを使用することが効率的である。
ｅ）は、対数増殖期（ｌｏｇａｒｉｔｈｍｉｃ ｐｈａ
ｓｅ）から定常期（ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ ｐｈａｓｅ
）の初めのものを使用することが効率的である。
誘導反応条件は、先の２つの構成要件が適切に選択でき
れば、ｐＨ５〜７、温度は３０〜５０℃が適当で、特に
ｐＨ５，５，４５℃付近が最適である。
れば、ｐＨ５〜７、温度は３０〜５０℃が適当で、特に
ｐＨ５，５，４５℃付近が最適である。
以上の３つの構成要件をその適応範囲において適宜組合
せることにより、目的に適合する自己溶解活性を誘導す
ることが可能である。
せることにより、目的に適合する自己溶解活性を誘導す
ることが可能である。
［発明の効果と作用］
本発明の方法を用いることにより乳酸桿菌属細菌の自己
溶解活性を誘導し菌体内物質の抽出、オートプラストの
作製、プラスミドの抽出等が効率的に達成できる。
溶解活性を誘導し菌体内物質の抽出、オートプラストの
作製、プラスミドの抽出等が効率的に達成できる。
以下に実験例を示し本発明の効果を更に詳しく説明する
。
。
（実験例１）
己′ ゛ いた ′の
り、 ｂｕｎａｒｉｃ匹８７８株（明治乳業株式会社保
有株） ０．３！にグルコースを含むＬＣＭ培地（Ｅｆ
ｔｈｍｉｏｕ。
有株） ０．３！にグルコースを含むＬＣＭ培地（Ｅｆ
ｔｈｍｉｏｕ。
Ｃ，、ｅｌ、 ａｌ、、 Ｄｉｓ、、 １１０２５８−
２６７（１９６２））に０．５！ｋ（Ｖ／Ｖ）接種して
３７℃で２０時間静置培養した後、培養液１０ｈ＋１を
遠心分離（４，０００ｘｇ、 ５分）して集菌した。得
られた湿菌体を０．４Ｍシュークロースを含む２０ｍＭ
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，５） １０ｍ１に懸濁
後、４５℃で自己溶解活性誘導反応を６０分行った。
２６７（１９６２））に０．５！ｋ（Ｖ／Ｖ）接種して
３７℃で２０時間静置培養した後、培養液１０ｈ＋１を
遠心分離（４，０００ｘｇ、 ５分）して集菌した。得
られた湿菌体を０．４Ｍシュークロースを含む２０ｍＭ
酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５，５） １０ｍ１に懸濁
後、４５℃で自己溶解活性誘導反応を６０分行った。
反応終了後、一定量を採取し水で希釈して浸透圧的に弱
化した細胞を破壊させた。遠心分＠（４，０００×ｇ、
５分）で未破壊細胞を除き、上清を０．４５μｍφのメ
ンブランフィルタ−（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に通し
た後、２６０ｎｍにおける吸光度（以下、０Ｄ２６゜と
記す）を分光光度計（島津製作所ダブルビームＵＶ−１
９０）で、蛋白濃度を１ｏｗｒｙ法（Ｌｏｗｒｙ、 ０
．Ｈ，。
化した細胞を破壊させた。遠心分＠（４，０００×ｇ、
５分）で未破壊細胞を除き、上清を０．４５μｍφのメ
ンブランフィルタ−（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製）に通し
た後、２６０ｎｍにおける吸光度（以下、０Ｄ２６゜と
記す）を分光光度計（島津製作所ダブルビームＵＶ−１
９０）で、蛋白濃度を１ｏｗｒｙ法（Ｌｏｗｒｙ、 ０
．Ｈ，。
ｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｗ、、 １９
３．２６５（１９５１））にて測定した（標準蛋白質は
牛血清アルブミンを使用）。
３．２６５（１９５１））にて測定した（標準蛋白質は
牛血清アルブミンを使用）。
比較例として従来の菌体内物質の抽出方法である、外来
の溶菌酵素（ムタノリシンとリゾチーム）で菌体を徹底
的に破壊したものについて、００２６０と蛋白濃度を上
と同様な方法で測定した。
の溶菌酵素（ムタノリシンとリゾチーム）で菌体を徹底
的に破壊したものについて、００２６０と蛋白濃度を上
と同様な方法で測定した。
Ｌ、 ｃａμ：ｉ ＪＣＭ １１３４株についても、誘
導剤として０．６Ｍクエン酸ナトリウム液（ｐＨ５，５
）を用いた本発明方法による抽出と、従来の方法による
抽出を行ない、００２６゜及び蛋白量を測定した。
導剤として０．６Ｍクエン酸ナトリウム液（ｐＨ５，５
）を用いた本発明方法による抽出と、従来の方法による
抽出を行ない、００２６゜及び蛋白量を測定した。
以上の結果を表１に示す。
なお、この表における００２８０及び蛋白濃度の値は、
自己溶解活性誘導時の懸濁液あたりの値に換算したを示
している。
自己溶解活性誘導時の懸濁液あたりの値に換算したを示
している。
表１
塑８７８株 ００２６゜ ４．１ ４．６表１は本
発明の方法により得られる菌体内可溶化蛋白質、紫外線
部吸収（００２６゜）とも、従来の外来酵素により菌体
破壊する方法に匹敵することを示しており、これからみ
て本発明は操作性の面において従来の技術よりも効率的
であることは明らかである。
発明の方法により得られる菌体内可溶化蛋白質、紫外線
部吸収（００２６゜）とも、従来の外来酵素により菌体
破壊する方法に匹敵することを示しており、これからみ
て本発明は操作性の面において従来の技術よりも効率的
であることは明らかである。
（実験例２）
己“ ′ いたオートプラストの−Ｌ、匝雑肛江
匹８７８株を用い、グルコース０．３９６（Ｖ／Ｖ）を
含むＬＣＭ培地に接種し、３７℃で１６時間静置培養し
た。その後集菌し、０．４Ｍシュークロースを含む２０
ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に添加し、反応温度４５℃、
ｐＨ５，５で約６０分反応させた。
匹８７８株を用い、グルコース０．３９６（Ｖ／Ｖ）を
含むＬＣＭ培地に接種し、３７℃で１６時間静置培養し
た。その後集菌し、０．４Ｍシュークロースを含む２０
ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に添加し、反応温度４５℃、
ｐＨ５，５で約６０分反応させた。
反応後、晃学顕微鏡による形態変化の観察及び高張液と
低張液に懸濁したときの濁度（６６０止における吸光度
で測定）変化からオートブラスト化を測定した。その結
果、約９５％以上の細胞が球状のオートブラストになる
ことが確認された。
低張液に懸濁したときの濁度（６６０止における吸光度
で測定）変化からオートブラスト化を測定した。その結
果、約９５％以上の細胞が球状のオートブラストになる
ことが確認された。
以上と同様な方法で菌体を培養し、自己溶解誘導反応を
行なわせてオートブラスト化する場合の培養時のグルコ
ース濃度の最適値を０．１〜１％の範囲で、また、シュ
ークロース以外の誘導剤の効果を調べた。その結果、培
養条件の違いに関しては濃度０．３ｔのグルコースの培
地で培養した菌体の時が最も効率的であり、またシュー
クロース以外の誘導剤を用いた場合は、オートブラスト
は形成されなかった。
行なわせてオートブラスト化する場合の培養時のグルコ
ース濃度の最適値を０．１〜１％の範囲で、また、シュ
ークロース以外の誘導剤の効果を調べた。その結果、培
養条件の違いに関しては濃度０．３ｔのグルコースの培
地で培養した菌体の時が最も効率的であり、またシュー
クロース以外の誘導剤を用いた場合は、オートブラスト
は形成されなかった。
なお、０．４Ｍシュークロース存在下ではＬｌａｃｔｉ
ｓ ＪＣＭ １１０６株が、また０、６Ｍクエン酸塩下
ではり、 ｃａｓｅｉ ＪＣＭ １１３４株及びり、
己工白ｍ四ＪＣＭ１１４９株のオートプラスト形成も効
率よく起こることが観察された。
ｓ ＪＣＭ １１０６株が、また０、６Ｍクエン酸塩下
ではり、 ｃａｓｅｉ ＪＣＭ １１３４株及びり、
己工白ｍ四ＪＣＭ１１４９株のオートプラスト形成も効
率よく起こることが観察された。
（実験例３）
一己溶 ゛ いたブースミドのｈ区匝銘肛江匹８
７８株を用い、グルコース１％を含むＬＣＭ培地に接種
し、３７℃で１０時間静置培養した。その後遠心分離（
４、０００ｘｇ、５ｍ１ｎ）で集菌し、１ ｍＭ ＥＤ
ＴＡを含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、
０．４Ｍシュークロース、ｌＯ［１１Ｍ ＭｇＣｌ２．
１０ｍＭＣａＣｌ２を含む酢酸緩衝液（ｐＨ５，５）に
懸濁し、反応温度４５℃で２０分反応させた。
７８株を用い、グルコース１％を含むＬＣＭ培地に接種
し、３７℃で１０時間静置培養した。その後遠心分離（
４、０００ｘｇ、５ｍ１ｎ）で集菌し、１ ｍＭ ＥＤ
ＴＡを含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、
０．４Ｍシュークロース、ｌＯ［１１Ｍ ＭｇＣｌ２．
１０ｍＭＣａＣｌ２を含む酢酸緩衝液（ｐＨ５，５）に
懸濁し、反応温度４５℃で２０分反応させた。
し吐肌肛凹ＪＣＭ１１４９株、屓計匡ＪＧＭ １１３４
株についても以下の表に示す条件で反応させた。
株についても以下の表に示す条件で反応させた。
ＪＣＭ １１４９株 （ｐＨ５，５）２０ｍＭ
ＥＤＴＡ 反応後の菌体からＢｉｒｎｂｏｉｍとＤｏＬｙの方法の
改良法によりプラスミドの抽出を行った。比較例として
同一条件で培養した各菌体をムタノリシンとリゾシーム
処理してプラスミドを抽出したものを用いた。溶菌酵素
は、プラスミド抽出に最適な条件で反応させた。
ＥＤＴＡ 反応後の菌体からＢｉｒｎｂｏｉｍとＤｏＬｙの方法の
改良法によりプラスミドの抽出を行った。比較例として
同一条件で培養した各菌体をムタノリシンとリゾシーム
処理してプラスミドを抽出したものを用いた。溶菌酵素
は、プラスミド抽出に最適な条件で反応させた。
抽出したプラスミドは、アガロースゲル電気泳動により
純度を検定し、そのＤＮＡ量は００６６゜の値から算出
した。結果を表２に示す。
純度を検定し、そのＤＮＡ量は００６６゜の値から算出
した。結果を表２に示す。
表２
９旦旦 ８７８ １３５
１５５ （ムタノリシン処理）Ｌユ ２１旦ユ１
旦り且μ ＪＣＭ １１４９ ３７５
２２５（ムタノリシン処理）Ｌ、 ｃａｓｅ
ｉ ＪＣＭ １１３４ ２４０
１４４（リゾチーム 処理）表２から分かるよ
うに、本発明の方法は従来の酵素処理による抽出方法と
比べて同等かそれ以上の収量を示した。
１５５ （ムタノリシン処理）Ｌユ ２１旦ユ１
旦り且μ ＪＣＭ １１４９ ３７５
２２５（ムタノリシン処理）Ｌ、 ｃａｓｅ
ｉ ＪＣＭ １１３４ ２４０
１４４（リゾチーム 処理）表２から分かるよ
うに、本発明の方法は従来の酵素処理による抽出方法と
比べて同等かそれ以上の収量を示した。
以上の様に本発明の方法を用いれば、自己溶解活性を用
いた乳酸桿菌属細菌の菌体成分の抽出、オートブラスト
の作製、プラスミドの抽出等を従来の方法に匹敵する収
率でかつ、より効率的に行なうことが可能となるのであ
る。
いた乳酸桿菌属細菌の菌体成分の抽出、オートブラスト
の作製、プラスミドの抽出等を従来の方法に匹敵する収
率でかつ、より効率的に行なうことが可能となるのであ
る。
以下に乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法の実施例を
示す。
示す。
［実施例］
実施例Ｉ
Ｌ、 肪釦肛旦匹８７８株を、脱脂粉乳ｌＯ％（Ｖ／Ｖ
）、酵母エキス０．１％（Ｖ／Ｖ）からなる組成の培地
で前培養（１６時間、３７℃）した。この前培養液を０
．３％グルコースを含むＬＣＭ培地に０．５％（Ｖ／Ｖ
）接種し、３７℃で２０時間静置培養した。培養後、培
養液１０００１１を遠心分離（４，０００ｘｇ、５分）
して集菌し、２０＋ａＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７）
１０ｍ１にて２回洗浄した。洗浄後、集めた湿菌体を０
．４Ｍシュークロースを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐｉ−１５，５）１０ｍｌに懸濁した。この懸濁
液を恒温水槽中で４５℃で自己溶解活性誘導反応を６０
分行なった。
）、酵母エキス０．１％（Ｖ／Ｖ）からなる組成の培地
で前培養（１６時間、３７℃）した。この前培養液を０
．３％グルコースを含むＬＣＭ培地に０．５％（Ｖ／Ｖ
）接種し、３７℃で２０時間静置培養した。培養後、培
養液１０００１１を遠心分離（４，０００ｘｇ、５分）
して集菌し、２０＋ａＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７）
１０ｍ１にて２回洗浄した。洗浄後、集めた湿菌体を０
．４Ｍシュークロースを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐｉ−１５，５）１０ｍｌに懸濁した。この懸濁
液を恒温水槽中で４５℃で自己溶解活性誘導反応を６０
分行なった。
自己溶解活性の誘導に伴なう細胞の浸透圧的弱化の程度
は、濁度の低下で測定した。すなわち６０分後の反応液
を０．２ｏ＋１採取し、２．８ｍｌの蒸溜水に加え、ｏ
ｏａａｏをスペクトロニック２０Ａ（島津ポシュロム社
）で測定し、０分時の濁度と比較して減少率を％で示し
た。
は、濁度の低下で測定した。すなわち６０分後の反応液
を０．２ｏ＋１採取し、２．８ｍｌの蒸溜水に加え、ｏ
ｏａａｏをスペクトロニック２０Ａ（島津ポシュロム社
）で測定し、０分時の濁度と比較して減少率を％で示し
た。
Ｌ、 １ａｃｔｉｓ ＪＧＭ １１０６株についても０
．１％グルコースを含む１０Ｍ培地で培養し、上と全く
同様な方法で濁度の変化を測定した。結果を下の表３に
示す。
．１％グルコースを含む１０Ｍ培地で培養し、上と全く
同様な方法で濁度の変化を測定した。結果を下の表３に
示す。
表３
９旦互 ８７８ シェークロース
９２Ｌ、 Ｉａｃｔｉｓ ＪＣＭ １１０６ シュークロー
ス ９１この表に示されるように、どち
らの菌株においても自己溶解の誘導の結果を示す、顕著
な濁度減少が見られた。
９２Ｌ、 Ｉａｃｔｉｓ ＪＣＭ １１０６ シュークロー
ス ９１この表に示されるように、どち
らの菌株においても自己溶解の誘導の結果を示す、顕著
な濁度減少が見られた。
なお本実施例の方法に基き、シュークロースの代りにラ
クトース、ラフィノース、スタキオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオースを用いて行なったところ、
データは示さないが各菌体において濁度減少が見られた
。
クトース、ラフィノース、スタキオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオースを用いて行なったところ、
データは示さないが各菌体において濁度減少が見られた
。
実施例２
凰≧凪Ｊ（：Ｍ １１３４株を１０Ｍ培地で前培養（１
６時間、３７℃）した。この前培養液をｏ、ｉ％グルコ
ースヲ含ムＬＣＭ培地ニ０．５％（Ｖ／Ｖ）接種し、３
７℃で１６時間静置培養した。培養後、培養液１００ｏ
＋１を遠心分離（４，ＯＯＯｘｇ、５分）して集菌し、
２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７） １０ｍ１にて２
回洗浄した。
６時間、３７℃）した。この前培養液をｏ、ｉ％グルコ
ースヲ含ムＬＣＭ培地ニ０．５％（Ｖ／Ｖ）接種し、３
７℃で１６時間静置培養した。培養後、培養液１００ｏ
＋１を遠心分離（４，ＯＯＯｘｇ、５分）して集菌し、
２０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７） １０ｍ１にて２
回洗浄した。
洗浄後、集めた湿菌体を０．６Ｍクエン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ５，５） １００１１に試験管内で懸濁した
。この懸濁液を恒温水槽中で４５℃で自己溶解活性誘導
反応を６０分行なった。
衝液（ｐＨ５，５） １００１１に試験管内で懸濁した
。この懸濁液を恒温水槽中で４５℃で自己溶解活性誘導
反応を６０分行なった。
自己溶解活性誘導反応の測定は実施例１の方法によった
。結果を表４に示す。
。結果を表４に示す。
同様にＬ吋ａｎｔａｒｕｍ Ｊ（：Ｍ １１４９株につ
いても上と同様の自己溶解活性誘導反応を行ない、濁度
を実施例１と同じ方法で測定した。この結果も表４に合
せて示す。この表に示されるように、自己溶解の誘導の
結果に基く顕著な濁度の減少が観察された。
いても上と同様の自己溶解活性誘導反応を行ない、濁度
を実施例１と同じ方法で測定した。この結果も表４に合
せて示す。この表に示されるように、自己溶解の誘導の
結果に基く顕著な濁度の減少が観察された。
表４
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ［１］乳酸桿菌属（￥Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ￥）
の細菌に対してジカルボン酸塩又はトリカルボン酸又は
二糖以上の糖類の存在下で誘導反応させることを特徴と
する乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法。 ［２］ジカルボン酸塩がコハク酸塩又はリンゴ酸塩であ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の乳酸桿
菌属細菌の自己溶解活性誘導法。 ［３］トリカルボン酸塩がクエン酸塩であることを特徴
とする特許請求の範囲第１項記載の乳酸桿菌属細菌の自
己溶解活性誘導法。 ［４］二糖以上の糖類がシュークロースであることを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の乳酸桿菌属細菌の
自己溶解活性誘導法。 ［５］誘導反応をｐＨ５〜７、反応温度が３０〜５０℃
で行うことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の乳
酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5013087A JPS63216475A (ja) | 1987-03-06 | 1987-03-06 | 乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5013087A JPS63216475A (ja) | 1987-03-06 | 1987-03-06 | 乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63216475A true JPS63216475A (ja) | 1988-09-08 |
Family
ID=12850554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5013087A Pending JPS63216475A (ja) | 1987-03-06 | 1987-03-06 | 乳酸桿菌属細菌の自己溶解活性誘導法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63216475A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995035389A1 (en) * | 1994-06-17 | 1995-12-28 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | Method for introduction of genetic material into microorganisms and transformants obtained therewith |
| WO2022230476A1 (ja) * | 2021-04-28 | 2022-11-03 | キリンホールディングス株式会社 | 乳酸球菌の増殖促進剤 |
-
1987
- 1987-03-06 JP JP5013087A patent/JPS63216475A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995035389A1 (en) * | 1994-06-17 | 1995-12-28 | Nederlandse Organisatie Voor Toegepast-Natuurwetenschappelijk Onderzoek Tno | Method for introduction of genetic material into microorganisms and transformants obtained therewith |
| WO2022230476A1 (ja) * | 2021-04-28 | 2022-11-03 | キリンホールディングス株式会社 | 乳酸球菌の増殖促進剤 |
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