JPS63206652A

JPS63206652A - 多層分析素子およびそれを用いた生体由来の試料分析法

Info

Publication number: JPS63206652A
Application number: JP4097087A
Authority: JP
Inventors: Takashi Kawasaki; 隆志川崎
Original assignee: Nitto Electric Industrial Co Ltd
Current assignee: Nitto Denko Corp
Priority date: 1987-02-24
Filing date: 1987-02-24
Publication date: 1988-08-25

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、多層分析素子、特に吸収層と試薬層との間に
液体不透過性フィルムを設けた多層分析素子およびそれ
を用いた生体由来の試料分析法に関する。

（従来の技術）血液や尿などの生体由来の液体試料の定量分析には、フ
ロ一方式およびディスクリート方式などの自動定量分析
装置が用いられている。この装置は分析処理能力が高い
ものの使用前のウオーミングアツプおよび使用後の洗浄
が必要である。洗浄廃液の処理には環境汚染上の問題も
ある。装置が高価であるうえにその操作に熟練を要する
という問題もある。

これら欠点を解決するために、多層分析素子を用いた光
学的方法による生体由来の液体試料の定量分析法が提案
されている。多層分析素子とは。

生体由来の液体試料中の特定化学成分を、乾式で。

迅速かつ簡便に定量する材料であり８例えば、特開昭４
９−５３８８８号公報、特開昭５０−１３７１９２号公
報。

特開昭５１−４０１９１号公報、特開昭５２−１３１７
８６号公報、特開昭５３−８９７９６号公報および特開
昭５５−２６４２８号公報に開示されている。

この多層分析素子に生体由来の液体試料を点着し、その
色変化または濃度変化を肉眼判定または反射測光するこ
とにより、試料中の被検成分が定量分析される。

しかし、生体由来の試料と素子中の試薬との反応が、抗
原抗体反応のような反応速度の遅い反応である場合１反
応が完結しない状態の反応液が次の吸収層に移動すると
きがあり、そのために３分析端度が低下し、試料の定量
が不正確となる。

（発明が解決しようとする問題点）本発明は上記従来の問題点を解決するものであ　　゛す
、その目的とするところは、被検成分と試薬との反応が
抗原抗体反応のような反応速度の遅い反応の場合におい
ても９反応を完結させてのち所定の分析に供する多層分
析素子を提供するところにある。本発明の他の目的は、
上記多層分析素子を用いた生体由来の試料分析法を提供
するところにある。

（問題点を解決するための手段）本発明の多層分析素子は、吸収層と光不透過性の試薬層
とを順次積層しかつ該吸収層と該試薬層との間に、少な
くとも一枚の液体不透過性フィルムが取りはずし可能に
挿入された構成でなり、そのことにより上記目的が達成
される。本発明の多層分析素子を用いた生体由来の試料
分析法は、吸収層と光不透過性の試薬層とが順次積層さ
れかつ該吸収層と該試薬層との間に少なくとも一枚の液
体不透過性フィルムが取りはずし可能に挿入された構成
でなる多層分析素子の該試薬層上に生体由来の試料を点
着し、試薬層に浸透した該点着試料を試薬層中の試薬お
よび／または該点着後に試薬層に供給された試薬と反応
させ３反応が完結したのち該液体不透過性フィルムを取
りはずすことにより、未反応物を次の吸収層に供給する
こと、および該試薬層に、必要に応じて洗浄液を供給し
て反応物を洗浄した後、この試薬層に試薬を供給して該
反応物と反応させること、を包含し、そのことにより上
記目的が達成される。

本発明の試薬層は１例えば、被検試料と反応する試薬を
含有する層であり、光不透過性の素材。

例えば、メンブランフィルタ−２布、濾紙、不織布、ガ
ラス繊維などが用いられる。この試薬層は。

試薬および酵素の少なくとも一方を、その内部および表
面に吸収あるいは吸着、固定させることにより１作製さ
れる。試薬層を光不透過性の素材とすれば、光が遮断さ
れるため試薬が光分解を受けにくいだけでなく、試料中
の成分の色（例えば。

ヘモグロビンの赤色）を遮断でき、光遮断層としての効
果も付加し得る。これら素材は多孔質であるため、試薬
の含浸も容易となる。しかし、試薬層には、必ずしも最
初からすべての試薬を含浸させる必要はない。試料点着
前に試薬層上に試薬が供給されてもよい。

吸収層は、試薬層における反応の未反応物を吸収するた
めの層である。この未反応物は、一旦吸収層に吸収され
た後、試薬層に供給された洗浄液とともに除去される。

吸収層には１例えば、メンブランフィルタ−２布、濾紙
、不織布、ガラス繊維などが用いられる。これら素材は
、試薬層と同一であってもよい。

上記吸収層と試薬層との間に配置される液体不透過性フ
ィルムは１例えば、抗原抗体反応のような反応速度の遅
い反応において１反応を完結させて後２反応物と未反応
物とを分離するべく、試薬層を吸収層と遮断するための
層であり、取りはずし可能である。このフィルムには、
液体不透過性のあらゆる材料が使用でき、その例には、
ポリエチレンテレフタレフト三酢酸セルロース、ポリカ
ーボネート、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン。

ポリメチルメタクリレートおよびガラスがある。

フィルムの厚さは、可能なかぎり薄い方が好ましい。一
般に、１０〜２００μｍである。このフィルムは薄膜で
あるため、これを取りはずした後も２通常、フィルム設
置箇所に空隙が生しることはなく。

分析に支障をきたさない。上記フィルム設置箇所の取り
はずし口に接着層を設けることにより、空隙の発生を効
果的に防ぐことができる。

上記多層分析素子には、必要に応じて、界面活性剤が添
加されうる。界面活性剤は、素子中での試料成分の移動
を促進する。その例には、ポリオキシエチレン、ポリグ
リセリンのアルキルアリルエーテル、ソルビタンエステ
ル、　１Ｍ肪酸エステルなどのノニオン性界面活性剤が
ある。

本発明の多層分析素子は、保型のためプラスチックマウ
ントに組み込まれてもよい。

（実施例）以下に本発明を実施例について述べる。

実施炎上本発明の多層分析素子は、第１図に示すように。

吸収層１．液体不透過性フィルム３および試薬層２を、
公知の方法により順次積層して作製される。

フィルム３には取りはずし用把手３０が適宜設けられる
。各層には以下の材料が用いられた。

吸収層１：階５＾濾紙（東洋濾紙社製）を５枚重ねた。

試薬層２：抗インシュリン抗体を固定化したミクロフィ
ルター。

この多層分析素子を用いて、ヒト血清中のインシュリン
の定量が１次のようにして行われた。

（１）パーオキシダーゼで標識した過剰量の抗インシュ
リン抗体とヒト血清（被検試料）との混合溶液を、上記
多層分析素子の試薬層上に点着した。

（２）このようにして供給された標識抗インシュリン抗
体と血清中のインシュリンは、固定化体インシュリンと
反応して複合体を形成する。３７℃で６０分間反応させ
た。この反応は液体不透過性フィルム上で行われる。

（３）反応後、ｖｊ、体不透過性フィルムを取りはずし
た。反応物は試薬層２中に残留し、未反応物だけが吸収
層１に移動した。

（４）次に、　ｐＨ−８，０、０，０１モルのリン酸バ
ッファーを試薬層２上に点着し、洗浄した。洗浄後、こ
の試薬層に、過酸化水素、４−アミノアンヂビリンおよ
び１．７−シヒドロキシナフタレンを含有する発色液を
加えて、パーオキシダーゼ（上記抗インシュリン抗体の
標識物質）による発色を行った。

（５）分光光度計を用いて、素子の吸光度を測定した。

他方、既知量のインシュリンを含む溶液を用いて、上記
と同様の反応を行わせ、吸光度とインシュリン量との関
係を求めて検量線を作成した。

被検試料の上記吸光度測定値を用いて、検量線から、被
検試料中のインシュリンを定量した。

実隻炭Ｉ吸収層１ニガラスフアイバ一濾紙（日本理化学器械社製
）。

試薬層２：ポリスチレンでコートした表面に抗１（ＣＧ
抗原体固定化したグラスフィルター。

この多層分析素子を用いて、妊婦尿中のＨＣＧが次のよ
うにして半定量的に測定された。

（１）試薬層に妊婦の尿を点着した。

（２）次に、パーオキシダーゼにて標識したＦＩＣＧ溶
液をさらに試薬層に加え、３７℃で３０分間抗抗原体反
応をさせた。

（３）反応後、液体不透過性フィルムを取りはずした。

反応物は試薬層２中に残留し、未反応物は吸収層１に移
動した。

（４）実施例工と同様にして、洗浄および発色を行い９
着色の濃さを肉眼にて観察することにより。

ＨＣＧが尿中に存在するか否かを判定した。それにより
、妊婦の妊娠の有無を判定した。

実施斑主各層に以下の材料を用いたこと以外は、実施例１と同様
の多層分析素子を作成した。

吸収層１：Ｎａ５Ａ濾紙（東洋濾紙社製）を５枚重ねた
。

試薬層２：抗ＨＣＧ抗体を固定化したミクロフィルター
。

この多層分析素子を用いて、ヒト血清中のＨＣＧの定量
が１次のようにして行われた。

ｆｌ）パーオキシダーゼで標識した過剰量の抗１１ｃＧ
モノクロナール抗体とヒト血清（被検試料）との混合溶
液を、上記多層分析素子の試薬層上に点着した。

（２）このようにして供給された標識抗ＨＣＧモノクロ
ナール抗体と血清中のＨＣＧは、固定化体ＨＣＧと反応
して複合体を形成する。３７℃で６０分間反応させた。

この反応は液体不透過性フィルム上で行われる。

（３）反応後、液体不透過性フィルムを取りはずした。

反応物は試薬層２中に残留し、未反応物だけが吸収層１
に移動した。

（４）次に、ｐＨ＝８．０　、０．０１モルのリン酸バ
ッファーを試薬層２上に点着し、洗浄した。洗浄後、こ
の試薬層に、過酸化水素、４−アミノアンチピリンおよ
び１，７−シヒドロキシナフタレンを含有する発色液を
加えて、パーオキシダーゼ（上記抗ＨＣＧモノクロナー
ル抗体の標識物質）による発色を行った。

（５）分光光度計を用いて、素子の吸光度を測定した。

他方、既知量のＨＣＧを含む溶液を用いて、上記と同様
の反応を行わせ、吸光度と）ＩｃＧ量との関係を求めて
検量線を作成した。

被検試料の上記吸光度測定値を用いて、検量線から、被
検試料中のＨＣＧを定量した。

実施炭↓ 各層に以下の材料を用いたこと以外は、実施例１と同様
の多層分析素子を作製した。

吸収層１：ｍ５Ａ濾紙（東洋濾紙社製）を５枚重ねた。

試薬層２：抗ＨＣＧ抗体を固定化して含有させ。

かつパーオキシダーゼで標識した過剰量の抗１（ＣＧモ
ノクロナール抗体を固定せず含有させたミクロフィルタ
ー。

この多層分析素子を用いて、ヒト血清中のＨＣＧの定量
が５次のようにして行われた。

（１）ヒト血清（被検試料）を、上記多層分析素子の試
薬層上に点着した。

（２）このようにして供給された血清中のＨＣＧは。

固定化体ＨＣＧおよび標識抗ＨＣＧモノクロナール抗体
と反応して複合体を形成する。３７℃で６０分間反応さ
せた。この反応は液体不透過性フィルム上で行われる。

（３）反応後、液体不透過性フィルムを取りはずした。

（４）次に、　ｐＨ−８，０、０，０１モルのリン酸バ
ッファーを試薬層２上に点着し、洗浄した。洗浄後、こ
の試薬層に、過酸化水素、４−アミノアンチピリンおよ
び１，７−シヒドロキシナフタレンを含有する発色液を
加えて、パーオキシダーゼ（上記抗ＨＣＧモノクロナー
ル抗体の標識物質）による発色を行った。

（５）分光光度計を用いて、素子の吸光度を測定した。

他方、既知量の１（ＣＧを含む溶液を用いて、上記と同
様の反応を行わせ、吸光度とＨＣＧ量との関係を求めて
検量線を作成した。

（発明の効果）本発明の多層分析素子は、このように、吸収層と光不透
過性の試薬層との間に、少なくとも一枚の液体不透過性
フィルムが取りはずし可能に挿入されている。そのため
、生体由来の試料中の被検成分と試薬との反応が抗原抗
体反応のような反応速度の遅い反応の場合でも９反応を
完結させてのち被検試料中の被検成分が分析されうる。

その結果２分析端度が向上し、被検成分の定量が正確に
なされる。

４、　欠　　の　　　な− 第１図は２本発明の多層分析素子の一実施例を示す斜視
図である。

１・・・吸収層、２・・・試薬層、３・・・液体不透過
性フィルム、　３０・・・フィルム取りはずし用把手。

以上

Claims

【特許請求の範囲】１、吸収層と光不透過性の試薬層とを順次積層しかつ該
吸収層と該試薬層との間に、少なくとも一枚の液体不透
過性フィルムが取りはずし可能に挿入された構成でなる
多層分析素子。２、吸収層と光不透過性の試薬層とが順次積層されかつ
該吸収層と該試薬層との間に少なくとも一枚の液体不透
過性フィルムが取りはずし可能に挿入された構成でなる
多層分析素子の該試薬層上に生体由来の試料を点着し、
試薬層に浸透した該点着試料を試薬層中の試薬および／
または該点着後に試薬層に供給された試薬と反応させ、
反応が完結したのち該液体不透過性フィルムを取りはず
すことにより、未反応物を次の吸収層に供給すること、
および該試薬層に、必要に応じて洗浄液を供給して反応物を洗
浄した後、この試薬層に試薬を供給して該反応物と反応
させること、を包含する生体由来の試料分析法。