JPS63168543A - 顕微鏡による螢光偏光測定装置 - Google Patents
顕微鏡による螢光偏光測定装置Info
- Publication number
- JPS63168543A JPS63168543A JP31250386A JP31250386A JPS63168543A JP S63168543 A JPS63168543 A JP S63168543A JP 31250386 A JP31250386 A JP 31250386A JP 31250386 A JP31250386 A JP 31250386A JP S63168543 A JPS63168543 A JP S63168543A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- light
- excitation light
- fluorescent
- polarization
- fluorescence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000010287 polarization Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims abstract description 41
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 230000015654 memory Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 10
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 2
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 2
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 241000084978 Rena Species 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6445—Measuring fluorescence polarisation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は螢光偏光を利用して螢光物質の回転運動速度を
測定し、特に生物学、医学等の分野における＆１１繊細
胞及び細胞構成物質の状態測定等に好適な顕微鏡による
螢光偏光測定装置に関する。
測定し、特に生物学、医学等の分野における＆１１繊細
胞及び細胞構成物質の状態測定等に好適な顕微鏡による
螢光偏光測定装置に関する。
一般に、螢光物質が励起光で照射されると、特定の方向
に振動する光（偏光）が効率良く吸収され、その方向と
直角に振動する光は吸収されない。
に振動する光（偏光）が効率良く吸収され、その方向と
直角に振動する光は吸収されない。
この方向（軸）は分子の構造によって決まっている。例
えば第３図に示すように、励起光Ｅの偏光方向がＡのよ
うに横方向であったとき、第３図（イ）のように軸が偏
光方向Ａと直角の螢光分子は励起されず、第３図（ロ）
のように軸が偏光方向Ａと平行な螢光分子は励起される
。そして、分子が螢光Ｆを出すときも軸に平行に振動す
る光（偏光）を発する。この現象を螢光偏光という。
えば第３図に示すように、励起光Ｅの偏光方向がＡのよ
うに横方向であったとき、第３図（イ）のように軸が偏
光方向Ａと直角の螢光分子は励起されず、第３図（ロ）
のように軸が偏光方向Ａと平行な螢光分子は励起される
。そして、分子が螢光Ｆを出すときも軸に平行に振動す
る光（偏光）を発する。この現象を螢光偏光という。
この場合分子が励起されてから螢光Ｆを発するまでに時
間がかかるので、その間に分子はブラウン運動などによ
り回転する。そうなると分子の軸方向も当然回転するの
で、励起光Ｅの偏光方向Ａと螢光Ｆの偏光方向とが一致
しなくなる。したがって、第３図（ハ）に示すような２
つの偏光方向のなす角度ａが小さいほど分子の運動が少
なく、大きいほど分子の運動が大きいこととなる。そこ
でこの角度ａを測定することによって螢光物質の振動速
度を推測することができる。また、その値から物質の運
動に及ぼすいろいろな環境要因や内部要因を推測するこ
とができる。
間がかかるので、その間に分子はブラウン運動などによ
り回転する。そうなると分子の軸方向も当然回転するの
で、励起光Ｅの偏光方向Ａと螢光Ｆの偏光方向とが一致
しなくなる。したがって、第３図（ハ）に示すような２
つの偏光方向のなす角度ａが小さいほど分子の運動が少
なく、大きいほど分子の運動が大きいこととなる。そこ
でこの角度ａを測定することによって螢光物質の振動速
度を推測することができる。また、その値から物質の運
動に及ぼすいろいろな環境要因や内部要因を推測するこ
とができる。
このような螢光物質が溶液の中に溶けている場合は、上
で述べた物質の軸はランダムに分布している。そこでこ
の溶液を偏光した光で照射すると、分子のうち、軸が照
射光の偏光方向に近い分子はど良く励起され、軸と偏光
方向の角が大きくなるほど励起されにくくなる。
で述べた物質の軸はランダムに分布している。そこでこ
の溶液を偏光した光で照射すると、分子のうち、軸が照
射光の偏光方向に近い分子はど良く励起され、軸と偏光
方向の角が大きくなるほど励起されにくくなる。
第４図は励起光Ｅの偏光方向Ｂが縦方向の場合を示す図
で、第４図（イ）は代表的な軸方向を持つ分子を模式的
に並べたもので、第４図（ロ）に示すように８個の分子
のうち縦方向の分子はすべて励起されるが、斜めに傾い
ている４個の分子は半分だけ励起されている。軸が水平
の２個の分子はまったく励起されない。
で、第４図（イ）は代表的な軸方向を持つ分子を模式的
に並べたもので、第４図（ロ）に示すように８個の分子
のうち縦方向の分子はすべて励起されるが、斜めに傾い
ている４個の分子は半分だけ励起されている。軸が水平
の２個の分子はまったく励起されない。
励起されてから螢光を発するまでに、分子がほとんど回
転しないと、その螢光の偏光は励起された時の分子の軸
方向にほとんど一致する。しかし、速い回転をしζいる
と、偏光の方向がランダムになっていき、これを螢光偏
光解消という。そこで、各々の分子の螢光について、励
起光の偏光方向に平行な成分Ｉ７、垂直な成分Ｉよをそ
れぞれ合計すると、速い分子はど並行な成分が少なくな
り、垂直な成分が多くなる。第４図（ロ）は殆ど運動を
しない場合で、第４図（ハ）は運動をする場合を示して
おり、第４図（ニ）は、それらの螢光成分の合計を示し
ている。
転しないと、その螢光の偏光は励起された時の分子の軸
方向にほとんど一致する。しかし、速い回転をしζいる
と、偏光の方向がランダムになっていき、これを螢光偏
光解消という。そこで、各々の分子の螢光について、励
起光の偏光方向に平行な成分Ｉ７、垂直な成分Ｉよをそ
れぞれ合計すると、速い分子はど並行な成分が少なくな
り、垂直な成分が多くなる。第４図（ロ）は殆ど運動を
しない場合で、第４図（ハ）は運動をする場合を示して
おり、第４図（ニ）は、それらの螢光成分の合計を示し
ている。
ところで、溶液中の分子１４ＵＭ１個が出す螢光の成分
を測定することは不可能であるが、／８液全体の螢光成
分は測定できる。そこで、この値を基にして次の計算を
したものを異方性と呼び、螢光偏光解消の度合を示す。
を測定することは不可能であるが、／８液全体の螢光成
分は測定できる。そこで、この値を基にして次の計算を
したものを異方性と呼び、螢光偏光解消の度合を示す。
１／＋２ＸＩよ
この定義によれば、異方性ｒは理論的に０．４を越える
ことはない。ｒの値が大きいほど分子の運動速度が小さ
く、Ｏに近いほど激しく回転運動をしていることになる
。
ことはない。ｒの値が大きいほど分子の運動速度が小さ
く、Ｏに近いほど激しく回転運動をしていることになる
。
生物物理学の分野では異方性は既に古くから測定されて
いるが、その測定はほとんどすべて試料室に角柱形の透
明容器（キュベツト）を挿入して行っている。すなわち
、キュベツトに偏光した励起光を照射し、キュベツト内
部全体からの螢光成分子７、Ｉ工の情報を得、これから
異方性を測定している。しかしこの従来の方法では、精
製された均一な試料しか異方性測定をすることができず
、例えば細胞や組織などの複雑な生物試料の場合、試料
自体の自家螢光やｍ織内の細胞の間の違い、細胞内の構
成要素の間の違いなどのため今までの装置では測定でき
なかった。
いるが、その測定はほとんどすべて試料室に角柱形の透
明容器（キュベツト）を挿入して行っている。すなわち
、キュベツトに偏光した励起光を照射し、キュベツト内
部全体からの螢光成分子７、Ｉ工の情報を得、これから
異方性を測定している。しかしこの従来の方法では、精
製された均一な試料しか異方性測定をすることができず
、例えば細胞や組織などの複雑な生物試料の場合、試料
自体の自家螢光やｍ織内の細胞の間の違い、細胞内の構
成要素の間の違いなどのため今までの装置では測定でき
なかった。
本発明は上記問題点を解決するためのもので、細胞やＭ
ｉ織などの複雑な生物試料等の異方性も測定することが
でき、これを基に画像化をすることも可能な顕微鏡によ
る螢光偏光測定装置を提供することを目的とする。
ｉ織などの複雑な生物試料等の異方性も測定することが
でき、これを基に画像化をすることも可能な顕微鏡によ
る螢光偏光測定装置を提供することを目的とする。
ｃ問題点を解決するための手段〕
そのために本発明の顕微鏡による螢光偏光測定装置は、
特定波長の偏光光が励起光として照射された後、試料を
透過した励起光と試料による螢光が対物レンズを介して
入射される励起光をカントする干渉フィルタ、干渉フィ
ルタを透過した螢光のうち励起光に平行な偏光成分、及
び励起光に垂直な偏光成分をそれぞれ選択できるように
回転可能に設けられたアナライザー、アナライザーから
の前記平行偏光成分による拡大像、及び垂直偏光成分に
よる拡大像をそれぞれＩ最影するカメラ、カメラで捉え
た観察像を画像処理する画像処理装置とを備えたことを
特徴とする。
特定波長の偏光光が励起光として照射された後、試料を
透過した励起光と試料による螢光が対物レンズを介して
入射される励起光をカントする干渉フィルタ、干渉フィ
ルタを透過した螢光のうち励起光に平行な偏光成分、及
び励起光に垂直な偏光成分をそれぞれ選択できるように
回転可能に設けられたアナライザー、アナライザーから
の前記平行偏光成分による拡大像、及び垂直偏光成分に
よる拡大像をそれぞれＩ最影するカメラ、カメラで捉え
た観察像を画像処理する画像処理装置とを備えたことを
特徴とする。
本発明の顕微鏡による螢光偏光測定装置は、特定波長の
偏光光を選択し、励起光として試料に照射し、試料を透
過した励起光と試料による螢光を対物レンズを通し、そ
のうち励起光をカットして螢光のうち励起光の偏光方向
と平行な偏光、垂直な偏光をそれぞれ選択して拡大像を
カメラで撮影し、カメラで捉えた観察像を画像処理する
ことにより観察像の各部分の異方性を測定すると共に画
像化することができる。
偏光光を選択し、励起光として試料に照射し、試料を透
過した励起光と試料による螢光を対物レンズを通し、そ
のうち励起光をカットして螢光のうち励起光の偏光方向
と平行な偏光、垂直な偏光をそれぞれ選択して拡大像を
カメラで撮影し、カメラで捉えた観察像を画像処理する
ことにより観察像の各部分の異方性を測定すると共に画
像化することができる。
以下、実施例を図面に基づき説明する。
第１図は本発明による顕微鏡を使用した異方性測定の一
実施例を示す図で、１は光源、２は集光レンズ、３はミ
ラー、４は干渉フィルタ、５は偏光板（ポラライザー）
、６はコンデンサーレンズ、７は試料、８は対物レンズ
、９は干渉フィルタ、１０は偏光板（アナライザー）、
１１はリレーレンズ、１２はカメラ、１３は画像処理装
置、１４は表示装置である。
実施例を示す図で、１は光源、２は集光レンズ、３はミ
ラー、４は干渉フィルタ、５は偏光板（ポラライザー）
、６はコンデンサーレンズ、７は試料、８は対物レンズ
、９は干渉フィルタ、１０は偏光板（アナライザー）、
１１はリレーレンズ、１２はカメラ、１３は画像処理装
置、１４は表示装置である。
図において、励起光源１の側に配置された反射ミラー３
とコンデンサーレンズ６の間に干渉フィルター４とポラ
ライザー５を挿入し、また、対物レンズ８とリレーレン
ズ１１の間の螢光側にも干渉フィルター９とアナライザ
ー１０を入れる。励起側のポラライザー５は動かないよ
うに固定し、螢光側のアナライザー１０は１８０＠回転
できるようにする。干渉フィルター４は螢光物質を充分
励起できかつ励起光が螢光側に入り込まないように、螢
光物質の励起スペクトルと螢光スペクトルから適当な種
類を選ぶ。また、フィルターの間で反射する螢光がカメ
ラに入らないように、励起側の干渉フィルター４を若干
傾けて配置する。
とコンデンサーレンズ６の間に干渉フィルター４とポラ
ライザー５を挿入し、また、対物レンズ８とリレーレン
ズ１１の間の螢光側にも干渉フィルター９とアナライザ
ー１０を入れる。励起側のポラライザー５は動かないよ
うに固定し、螢光側のアナライザー１０は１８０＠回転
できるようにする。干渉フィルター４は螢光物質を充分
励起できかつ励起光が螢光側に入り込まないように、螢
光物質の励起スペクトルと螢光スペクトルから適当な種
類を選ぶ。また、フィルターの間で反射する螢光がカメ
ラに入らないように、励起側の干渉フィルター４を若干
傾けて配置する。
次に作用を説明すると、光源１から出て集光レンズ２を
通り、ミラー３で反射された偏光性のない光は、干渉フ
ィルタ４で波長が選択され、ポラライザー５を通り、偏
光となってコンデンサーレンズ６を介してステージ上の
試料７に照射される。
通り、ミラー３で反射された偏光性のない光は、干渉フ
ィルタ４で波長が選択され、ポラライザー５を通り、偏
光となってコンデンサーレンズ６を介してステージ上の
試料７に照射される。
この偏光した励起光によって試料中の螢光物質が励起さ
れる。試料の環境条件や存在状態によって異なるが励起
された螢光物質から螢光が出て励起光とともに対物レン
ズ８を通り、螢光側の干渉フィルター９に入る。ここで
励起光はカットされ、螢光のうち許される波長の光だけ
が次のアナライザー１０に入る。アナライザーｌＯは回
転させることができるので、その偏光方向を励起光の偏
光方向と平行にセットした場合と垂直の方向にセットし
た場合のそれぞれについての螢光偏光成分だけを透過さ
せ、リレーレンズ１１を経てカメラ１２で撮影する。こ
うして得られた励起光の偏光方向に平行な成分と垂直な
成分とから、２つの画像即ち励起光の偏光方向に平行な
螢光成分による画像と、垂直な螢光成分による画像を画
像処理装置内蔵の２つのフレームメモリＭ、 、Ｍｔに
それぞれ別々に記憶させる。異方性の計算はＭｌの画像
中で目的とする構造の上に適当な大きさのウィンドを設
け、その合計強度を求めてその値を１７とする０次にＭ
ｔの画像で同じ位置に同じ大きさのウィンドを設けその
光強度を求め１．とする、これらの値から式（１）を用
いて、ウィンド内の異方性ｒを求める。
れる。試料の環境条件や存在状態によって異なるが励起
された螢光物質から螢光が出て励起光とともに対物レン
ズ８を通り、螢光側の干渉フィルター９に入る。ここで
励起光はカットされ、螢光のうち許される波長の光だけ
が次のアナライザー１０に入る。アナライザーｌＯは回
転させることができるので、その偏光方向を励起光の偏
光方向と平行にセットした場合と垂直の方向にセットし
た場合のそれぞれについての螢光偏光成分だけを透過さ
せ、リレーレンズ１１を経てカメラ１２で撮影する。こ
うして得られた励起光の偏光方向に平行な成分と垂直な
成分とから、２つの画像即ち励起光の偏光方向に平行な
螢光成分による画像と、垂直な螢光成分による画像を画
像処理装置内蔵の２つのフレームメモリＭ、 、Ｍｔに
それぞれ別々に記憶させる。異方性の計算はＭｌの画像
中で目的とする構造の上に適当な大きさのウィンドを設
け、その合計強度を求めてその値を１７とする０次にＭ
ｔの画像で同じ位置に同じ大きさのウィンドを設けその
光強度を求め１．とする、これらの値から式（１）を用
いて、ウィンド内の異方性ｒを求める。
もし、背景の光が強く、異方性を求めるに当たってその
光強度が無視できないときは、励起光の一部が螢光と混
ざってカメラに入っているので、干渉フィルターの種類
を変えるかフィルターの枚数を増やすようにすればよい
。ただし、背景光の光強度を画面上の他の場所で求めら
れるならば、次の処理を行う。
光強度が無視できないときは、励起光の一部が螢光と混
ざってカメラに入っているので、干渉フィルターの種類
を変えるかフィルターの枚数を増やすようにすればよい
。ただし、背景光の光強度を画面上の他の場所で求めら
れるならば、次の処理を行う。
即ち、第２図に示すように、撮影画像信号から背景光の
成分Ｎ（図の背景信号に相当）を求め、上で使ったウィ
ンドの大きさで補正した後、前に求めた見かけ上の螢光
成分である光強度から差し引いて本当の螢光成分の光強
度を求め、その値から同様にして異方性を求めれば良い
。
成分Ｎ（図の背景信号に相当）を求め、上で使ったウィ
ンドの大きさで補正した後、前に求めた見かけ上の螢光
成分である光強度から差し引いて本当の螢光成分の光強
度を求め、その値から同様にして異方性を求めれば良い
。
ところで、細胞やＭｉ織などの生物試料は強い励起光を
当てると死んでしまうために、大きな出力の光源が使用
できず、そのため異方性を計算するために必要な螢光偏
光の２つの成分の光量は非常に少なくその測定はなかな
か困難であるが、最近開発されている超高感度顕微鏡シ
ステムによれば極めて暗い像も撮影でき、生物試料に悪
影響をあまり与えない弱い光量で励起しても螢光の偏光
成分の像が得られる。さらに、画像処理技術により様々
な画像間演算ができ、充分な光量があれば、ディスプレ
イ上の各画素毎の異方性を表示することができる。
当てると死んでしまうために、大きな出力の光源が使用
できず、そのため異方性を計算するために必要な螢光偏
光の２つの成分の光量は非常に少なくその測定はなかな
か困難であるが、最近開発されている超高感度顕微鏡シ
ステムによれば極めて暗い像も撮影でき、生物試料に悪
影響をあまり与えない弱い光量で励起しても螢光の偏光
成分の像が得られる。さらに、画像処理技術により様々
な画像間演算ができ、充分な光量があれば、ディスプレ
イ上の各画素毎の異方性を表示することができる。
なお、上記実施例においては、干渉フィルタ４、ポララ
イザ５を用いて特定波長、特定偏光を選択するようにし
たが、光源として特定波長、特定偏光で発振するような
レーザー光源を使用する場合には、これら干ン歩フィル
り、ポラライザを用いる必要がないことは勿論である。
イザ５を用いて特定波長、特定偏光を選択するようにし
たが、光源として特定波長、特定偏光で発振するような
レーザー光源を使用する場合には、これら干ン歩フィル
り、ポラライザを用いる必要がないことは勿論である。
以上のように本発明によれば、顕微鏡撮影画像から、画
像解析によってｗ４微鏡視野内のいろいろな部位で別々
に異方性を測定でき、また画像間で演算を行ってＨｊ微
鏡像を構成する一つ一つの画素で異方性の各々の値を画
面上に表示することができ、異方性の画像化が可能であ
る。したがって本発明は、ゲル状態かゾル状態か等の細
胞内の粘性、螢光物質が結合している対象の構造、モノ
マーかダイマーか等分子の会合の状態、ＤＮＡ、染色体
等の凝集・膨潤状態、薬品等の化学物質の細胞膜への結
合様式等の測定に適用可能であり、生物分野、薬剤の分
野、医学の分野等幅広い利用が可能となる。
像解析によってｗ４微鏡視野内のいろいろな部位で別々
に異方性を測定でき、また画像間で演算を行ってＨｊ微
鏡像を構成する一つ一つの画素で異方性の各々の値を画
面上に表示することができ、異方性の画像化が可能であ
る。したがって本発明は、ゲル状態かゾル状態か等の細
胞内の粘性、螢光物質が結合している対象の構造、モノ
マーかダイマーか等分子の会合の状態、ＤＮＡ、染色体
等の凝集・膨潤状態、薬品等の化学物質の細胞膜への結
合様式等の測定に適用可能であり、生物分野、薬剤の分
野、医学の分野等幅広い利用が可能となる。
第１図は本発明による顕微鏡を使用した螢光偏光測定装
置の一実施例を示す図、第２図は画像信号及び背景信号
を示す図、第３図（イ）は励起されない螢光分子を示す
図、第３図（ロ）は励起された螢光分子を示す図、第３
図（ハ）は螢光の偏光方向と励起光の偏光方向とのなす
角を示す図、第４図（イ）は代表的な軸方向を持つ分子
を模式的に示す図、第４図（ロ）は分子が殆ど運動をし
ない場合の励起状態と螢光発光の状態を示す図、第４図
（ハ）は分子が運動をする場合の励起状態と螢光発光の
状態を示す図、第４図（ニ）は螢光成分の合計を示す図
である。 １・・・光源、２・・・集光レンズ、３・・・ミラー、
４・・・干渉フィルタ、５・・・偏光板（ポラライザー
）、６・・・コンデンサーレンズ、７・・・試料、８・
・・対物レンズ、９・・・干渉フィルタ、１０・・・偏
光板（アナライザー）、１１・・・リレーレンズ、１２
・・・カメラ、１３・・・画像処理装置、１４・・・表
示装置。 出 願 人 浜松ホトニクス株式会社代 理
人 弁理士 蛭 川 昌 信第１図 第２図 ０１４１１４名−４ 励起光の偏光方向 （貸元分子） ワｈ彦２１れな５つ螢光の偏た方
向
置の一実施例を示す図、第２図は画像信号及び背景信号
を示す図、第３図（イ）は励起されない螢光分子を示す
図、第３図（ロ）は励起された螢光分子を示す図、第３
図（ハ）は螢光の偏光方向と励起光の偏光方向とのなす
角を示す図、第４図（イ）は代表的な軸方向を持つ分子
を模式的に示す図、第４図（ロ）は分子が殆ど運動をし
ない場合の励起状態と螢光発光の状態を示す図、第４図
（ハ）は分子が運動をする場合の励起状態と螢光発光の
状態を示す図、第４図（ニ）は螢光成分の合計を示す図
である。 １・・・光源、２・・・集光レンズ、３・・・ミラー、
４・・・干渉フィルタ、５・・・偏光板（ポラライザー
）、６・・・コンデンサーレンズ、７・・・試料、８・
・・対物レンズ、９・・・干渉フィルタ、１０・・・偏
光板（アナライザー）、１１・・・リレーレンズ、１２
・・・カメラ、１３・・・画像処理装置、１４・・・表
示装置。 出 願 人 浜松ホトニクス株式会社代 理
人 弁理士 蛭 川 昌 信第１図 第２図 ０１４１１４名−４ 励起光の偏光方向 （貸元分子） ワｈ彦２１れな５つ螢光の偏た方
向
Claims (1)
- 特定波長の偏光光が励起光として照射された後、試料を
透過した励起光と試料による螢光が対物レンズを介して
入射される励起光をカットする干渉フィルタ、干渉フィ
ルタを透過した螢光のうち励起光に平行な偏光成分、及
び励起光に垂直な偏光成分をそれぞれ選択できるように
回転可能に設けられたアナライザー、アナライザーから
の前記平行偏光成分による拡大像、及び垂直偏光成分に
よる拡大像をそれぞれ撮影するカメラ、カメラで捉えた
観察像を画像処理する画像処理装置とを備えた顕微鏡に
よる螢光偏光測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31250386A JPH0697204B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | 顕微鏡による螢光偏光測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31250386A JPH0697204B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | 顕微鏡による螢光偏光測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63168543A true JPS63168543A (ja) | 1988-07-12 |
| JPH0697204B2 JPH0697204B2 (ja) | 1994-11-30 |
Family
ID=18029999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31250386A Expired - Fee Related JPH0697204B2 (ja) | 1986-12-29 | 1986-12-29 | 顕微鏡による螢光偏光測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0697204B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015004736A (ja) * | 2013-06-19 | 2015-01-08 | オリンパス株式会社 | 透過蛍光顕微鏡 |
| WO2022269877A1 (ja) * | 2021-06-24 | 2022-12-29 | 株式会社Shinsei | 発光体または口腔内組織体の識別装置、及び口腔内組織体の検査装置 |
-
1986
- 1986-12-29 JP JP31250386A patent/JPH0697204B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015004736A (ja) * | 2013-06-19 | 2015-01-08 | オリンパス株式会社 | 透過蛍光顕微鏡 |
| WO2022269877A1 (ja) * | 2021-06-24 | 2022-12-29 | 株式会社Shinsei | 発光体または口腔内組織体の識別装置、及び口腔内組織体の検査装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0697204B2 (ja) | 1994-11-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Periasamy et al. | FLIM microscopy in biology and medicine | |
| WO2020013325A1 (ja) | 画像生成装置及び画像生成方法 | |
| Siegel et al. | Wide-field time-resolved fluorescence anisotropy imaging (TR-FAIM): Imaging the rotational mobility of a fluorophore | |
| US20060188869A1 (en) | Method and apparatus for UV imaging | |
| JP2975991B2 (ja) | 偏光性測定方法及び装置 | |
| JP2009145242A (ja) | 光測定装置 | |
| JP2009288161A (ja) | 光測定装置及び光測定方法 | |
| JP4632634B2 (ja) | 共焦点顕微鏡装置及び共焦点顕微鏡装置を用いた観察方法 | |
| JP3365474B2 (ja) | 偏光性イメージング装置 | |
| Verkman et al. | Construction and evaluation of a frequency-domain epifluorescence microscope for lifetime and anisotropy decay measurements in subcellular domains | |
| CN109154548B (zh) | 用于材料的物理化学表征的方法和设备 | |
| JPS63168543A (ja) | 顕微鏡による螢光偏光測定装置 | |
| Sullivan et al. | Single-and two-photon fluorescence recovery after photobleaching | |
| JPH1096697A (ja) | 蛍光顕微鏡装置 | |
| Rieger et al. | Fluctuation correlation spectroscopy for the advanced physics laboratory | |
| JP2004069428A (ja) | 原子及び分子間力顕微鏡 | |
| JP3994568B2 (ja) | 偏光性測定装置 | |
| JPH01270644A (ja) | 粒子解析装置 | |
| JP2966874B2 (ja) | 被試験用膜の物質透過性能を評価する方法および装置 | |
| JPH0928698A (ja) | 光計測装置 | |
| JPH10104079A (ja) | 偏光解消イメージング装置 | |
| JP2836859B2 (ja) | ３次元空間分解・時間分解吸収スペクトル測定装置 | |
| US7335874B2 (en) | Method and apparatus for generating a circularly polarized illumination beam | |
| JP3139085B2 (ja) | イオン濃度の定量装置および定量方法 | |
| JP6249406B2 (ja) | 顕微鏡観察方法及び装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |