JPS6316709B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗原、抗体及び標識付したメサ
ドン誘導体を用いるメサドンに対する改善された
イムノアツセイ（immunoassay）に関する。

メサドンに対するイムノアツセイは本分野にお
いては公知である。例えば酵素重複度
（enzymemultipliication）に基ずくメサドンに対
するイムノアツセイは米国特許第3843696号に記
載されている。このイムノアツセイは下記ハプテ
ン基を有する抗原から誘導された抗体を用いる： かくしてハプテン対免疫原性（immunogenic）
担体との結合は分子のケトン末端で生じることが
わかる。生じる担体はメサドン代謝産物２−エチ
リデン−１，５−ジメチル−３，３−ジフエニル
−ピロリジンとやや交叉反応する。

この欠点は、免疫原性担体物質にカルボキシル
基を介して共有結合した式 式中、ｎは２または３から選らばれる整数であ
る、 の化合物から本質的になる新規な抗原を用いるメ
サドンに対する改善されたイムノアツセイに関す
る本発明によつて克服される。

本発明の一つの観点においては、式 式中、ｎは２または３から選らばれる整数であ
る、 の新規なハプテンを製造するために式 のメサドン誘導体を用いる。

式のハプテンを生成させるための式の化合
物の転化は、ヘミエステルを生成させるためのそ
れ自体公知の方法において、低級アルカンカルボ
ン酸無水物と式の化合物との反応によつて行な
われる。適当な低級アルカンカルボン酸無水物は
コハク酸無水物（ｎが２である場合の式の化合
物を生成する）及びグルタル酸無水物（ｎが３で
ある場合の式の化合物を生成する）である。こ
の反応は極性有機溶媒例えばジメチルホルムアミ
ド、ジメチルスルホキシドまたはピリジン中で行
なわれる。50〜120℃、好ましくは100〜110℃範
囲の反応温度を用いる。通常反応混合物中に塩基
が存在する。適当な塩基にはトリエチルアミンの
如きトリ低級アルキルアミンまたはカリウムｔ−
ブトキシドの如きアルカリ金属によるアルコキシ
ド塩が含まれる。

本発明の抗原を製造するために、式のハプテ
ンが普通の免疫原性担体物質にカルボキシル基を
介して共有結合していることが必要である。

本明細書において用いる「免疫原性担体物質」
なる語は、宿主動物に免疫原性反応を独立に誘発
する特性を有し且つ上記のハプテンに共有的にカ
ツプリングし得る物質を含むことを意味する。適
当な担体物質には、例えば蛋白質；天然または合
成重合体状化合物例えばポリペプチド、例えばポ
リリジンまたはアミノ酸の共重合体；多糖類等が
含まれる。殊に好適な担体物質は蛋白質及びポリ
ペプチド、特に蛋白質である。

本発明の抗原の製造に用いる蛋白質物質の本体
は臨界的ではない。本発明の実施に用いる適当な
蛋白質の例には哺乳動物血清蛋白質例えば人間の
γ−グロブリン、人間の血清アルブミン、牛の血
清アルブミン、メチル化された牛の血清アルブミ
ン、うさぎの血清アルブミン及び牛のγ−グロブ
リンが含まれる。他の適当な蛋白質製品は当業者
にとつては連想されよう。生じた抗原を用いる動
物宿主とは異なる蛋白質を用いることが一般に好
ましいが、しかし必要条件ではない。

該免疫原性担体物質に対するハプテンの共有結
合（covalent coupling）は本分野においてよく
知られた方法で行なうことができる。例えばハプ
テンをカツプリングする前に単離可能な活性型に
転化することができる。適当な活性化された型に
は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル、ｐ
−ニトロフエニルフエステル；アシルイミダゾー
ル等が含まれる。カツプリングに対する他の方法
を用いることができ、その際には活性化された中
間体を単離する必要はない。かかる方法には混合
無水物法、カツプリング剤としてEEDQ（Ｎ−エ
トキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒ
ドロキノリン）の使用等が含まれる。

該免疫原性担体物質に対する遊離酸または活性
化された誘導体としてのハプテンのカツプリング
は、アミド結合を確立させる際に本分野において
よく知られた方法を用いて容易に行なうことがで
きる。かくして例えばかかる方法の一つには適当
な不活性溶媒に担体物質及びカツプリング剤を溶
解し、次いでハプテンを加えることが含まれる。
この反応は約０℃〜約50℃の温度範囲で行なうこ
とができるが、反応体の性質に応じて上記よりも
高温または低温に用いることもできる。最も好適
な温度はほぼ室温である。

上記の反応に用い得るカツプリング剤は、アミ
ド結合生成開始に対して有機化学において通常用
いられるものから選らばれよう。カツプリング剤
の殊に好適な群はカルボジイミド、最も好ましく
は遊離塩基としてまたは鉱酸付加塩、例えば塩酸
塩としてのジシクロヘキシルカルボジイミドまた
は１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミドからなる。勿論、ハプテン対
担体物質のモル比は用いるハプテンの本体
（identity）及び反応に選らんだ蛋白質に依存す
るであろう。

カツプリング反応に対する普通の条件を用いる
ことができる。かくして、カツプリング剤として
カルボジイミドを用いる場合、この段階にやや酸
性の反応媒質、例えばPH値範囲約３〜6.5、最も
好ましくは約４〜6.5を有する媒質を用いること
が望ましい。反応の終了に際し、過剰のハプテン
分子を透析によつて除去することができる。

すでに指摘した如く、本発明の抗原を製造する
一つの方法は、活性化された誘導体をまず製造
し、そして単離し、次にこの化合物を担体物質と
反応させて抗原を生成させることである。かかる
活性化された誘導体は、ハプテンと所望の活性化
する化合物例えばＮ−ヒドロキシコハク酸イミド
及びカツプリング剤例えばジシクロヘキシルカル
ボジイミドとを不活性溶媒中で反応させることに
より容易に製造される。この反応は通常低温（０
〜５℃）にて16〜60時間で進行させる。次に活性
化された誘導体を副生成物、ジシクロヘキシル尿
素の〓別によつて単離し、そして溶媒を留去す
る。

次に該ハプテンは、該活性化された誘導体と選
らんだ担体物質とを接触させることにより、担体
物質にカツプリングさせることができる。活性化
された誘導体がＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエ
ステルであり、そして担体物質が牛の血清アルブ
ミンである場合、このカツプリングは水混和性溶
媒中の活性化された誘導体を塩基例えば重炭酸ナ
トリウムを含む担体物質の水溶液に加えることに
より完了させることができる。

担体蛋白質にハプテンをカツプリングさせる他
の方法は、中間体を単離せずにハプテンのカルボ
キシル基を活性化し、そして活性化されたハプテ
ンを担体蛋白質に加えることである。かかる反応
の例はイソブチルクロルホルメートとの反応によ
つて得られた混合無水物である。ハプテンを無水
の水混和性有機溶媒例えばジオキサンまたは１−
メチル−２−ピロリジノンに溶解し、この溶液を
等モル量のトリエチルアミンで中和する。室温で
撹拌した後、混合物の温度を0゜乃至８℃間に降下
させる。次に等モル量＋10％過剰のイソブチルク
ロルホルメートを加え、そして撹拌を続行する。

一方、担体蛋白質、例えば牛の血清アルブミン
を水に溶解し、PH値をNaOHで9.0に調節する。
使用する担体の量はハプテンのモル量を担体上の
反応性基の理論数で割つた値にほぼ同等である。
有機溶媒を担体溶液に加え、この溶液を0゜乃至８
℃間に冷却する。次にこの溶液を活性化されたハ
プテンに加えて、30分ないし一夜でカツプリング
を進行させる。

次いで混合物を透析し、抗原を透析バツグから
回収する。

本発明の抗原は、宿主動物に好ましくは補助剤
を用いて該抗原を注射することにより、宿主動物
中でメサドン及び関連化合物に特異的な抗体の生
成を誘起させるのに利用することができる。周期
的に注射をくり返して行ない改善された力価
（titer）を得ることができる。この目的に対して
適する宿主動物には、哺乳動物、例えばうさぎ、
馬、やぎ、モルモツト、ラツト、牛、羊等が含ま
れる。生じる抗血清は抗体を含んでおり、この抗
体は上記の如くメサドン、またはその誘導体から
製造された抗原と選択的に錯体形成するであろ
う。

本発明の特異抗体はメサドンの検出用試薬とし
て有用である。かかるアツセイにおいては、既知
量の標識付したメサドン誘導体例えば ¹²⁵I−Ｎ
−２−（４−ヒドロキシフエニル）−エチルスクシ
ンアミド酸、Ｎ−メチル−Ｎ−〔１−メチル−３，
３−ジフエニル−４−オキソヘキシル〕アミノエ
タノールエステルまたは ¹²⁵I−６−ジメチルア
ミノ−４−フエニル−４−（４−ヒドロキシフエ
ニル）ヘプタン−３−オンを上記の抗体と混合
し、そしてある量のメサドンを含む試料を加え
る。試料中のメサドンの量は、未知試料による標
識付したメサドン誘導体の特異抗体に対する結合
の抑制を測定し、抗体−標識付抗原混合物による
既知量のメサドンを用いて得られる標準曲線と上
記の測定値を比較し、かかる量のそれぞれに対す
る結合抑制を測定することにより決定することが
できる。試薬は任意の順序で加えることができ
る。この目的に対して適するアツセイ法は米国特
許第3709868号に極めて詳細に記載されている。
殊に好適な標識付したメサドン誘導体は ¹²⁵I−
６−ジメチルアミノ−４−フエニル−４−（４−
ヒドロキシフエニル）ヘプタン−３−オンであ
り、その理由は長期間室温で貯蔵した際にも安定
であるためである。

本発明の新規な抗原及び抗体は、通常の添加
物、緩衝剤、安定剤、希釈剤と共に、或いは他の
生理学的に活性物質として配合して用いることが
できる。その製法、及び生理学的に許容し得る補
助剤と共に抗原または抗体を含む組成物の用途は
本分野においてよく知られている。

本発明の化合物及び中間体は遊離塩基または酸
付加塩として用いることができる。適当な付加塩
には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、
リン酸塩、トリフルオル酢酸塩、シユウ酸塩等が
含まれる。

実施例 １ 撹拌機を備えた容量100mlのフラスコに、窒素
雰囲気下にて、６−ジメチルアミノ−４−（４−
メトキシフエニル）−４−フエニル−ヘプタン−
３−オン0.55ｇ、塩化メチレン40ml及び三臭化ホ
ウ素／塩化メチレン（市販の10％溶液）12.1mlを
入れた。この混合物を室温で一夜撹拌した。次に
冷却しながらメタノール30mlを加えた。減圧下で
溶媒を除去した際に得られる残油を水７mlで処理
し、その際に粗製の生成物が晶出した。過しそ
して水で洗浄後、固体を水から再結晶し、融点
246〜247.5℃の６−ジメチルアミノ−４−（４−
ヒドロキシフエニル）−４−フエニルヘプタン−
３−オン臭化水素酸塩0.137ｇを得た。上記の水
性液を濃縮して少量の第二の生成物20mgを得
た。

実施例 ２ 撹拌機、窒素ガス導入口、温度計、滴下ロート
を備えた容量500mlの三つ口フラスコに、3Nエチ
ル塩化マグネシウム45.5ml（0.136モル）及び無
水エーテル54mlを入れた。これに乾いたトルエン
81ml中の４−（Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−ヒドロキシ
エチル〕）アミノ−２，２−ジフエニルペンタン
ニトリル10.1ｇ（0.0328モル）の溶液を徐々に加
えた。反応は温和な発熱反応であつた。次に反応
混合物を加熱し、エーテルを留去した。反応温度
が100℃に到達した際、反応混合物を撹拌しなが
ら８時間還流させた。

次に2NHCl合計95.5mlを滴下し、非常な発熱
反応を伴なつた。この反応混合物を４時間還流及
び撹拌した。冷却後、この溶液を分液ロートに移
し、水層を除去した。有機層を2NHCl70mlで洗
浄した。合液した水層をトルエン70mlで逆洗浄し
た。次に水層を濃NH₄OHでPH値８に調節し、ク
ロロホルム２×100mlで抽出した。有機抽出液を
CaSO₄上で乾燥し、過し、そして濃縮した。更
に高真空下で濃縮した後、残渣を無水エタノール
に採り入れ、希釈水性HBrで処理した。この溶
液を濃縮して黄褐色油（tan oil）にし、このも
のを無水エタノールに採り入れ、半分の容量に濃
縮し、この溶液を濁るまで無水エーテルで処理し
た。この混合物を冷凍庫中に貯蔵し、次に過
し、固体分を無水エタノール／無水エーテルの混
合物で洗浄した。P₂O₅上にて高真空下で乾燥し
た後、融点148℃を有するＮ−メチル−Ｎ−（１−
メチル−３，３−ジフエニル−４−オキソヘキシ
ル）アミノエタノール臭化水素酸塩が得られた。

上記のエタノール／エーテル母液から、更に無
水エーテルを加えることにより更に生成物を得る
ことができた。

実施例 ３ 乾いたピリジン５ml中のＮ−メチル−Ｎ−（１
−メチル−３，３−ジフエニル−４−オキソヘキ
シル）アミノエタノール臭化水素酸塩210mgの溶
液に、カリウムｔ−ブトキシド56mgを加えた。室
温で15分間撹拌した後、コハク酸無水物200mgを
加えた。この混合物を100℃に加熱し、この温度
で１時間45分撹拌した。次にこれを減圧下で蒸発
させ、残渣をシリカゲル上でクロマトグラフにか
けた。カラムをエーテル、酢酸エチル及びアセト
ンで展開した後、所望の生成物を含むフラクシヨ
ンをアセトン／メタノール（４：１）で溶離し
た。蒸発させた際、無色の吸湿性固体としてＮ−
メチル−Ｎ−（１−メチル−３，３−ジフエニル
−４−オキソヘキシル）アミノエタノールヘミコ
ハク酸塩207mgが得られた。

実施例 ４ 乾いたテトラヒドロフラン５ml中のＮ−メチル
−Ｎ−（１−メチル−３，３−ジフエニル−４−
オキソヘキシル）アミノエタノールヘミコハク酸
塩440mgの溶液にカルボニルジイミダゾール162mg
を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌し
た。次にチラミン（tyramine）137mgを加えた。
更に室温で16時間撹拌した後、この混合物を減圧
下で蒸発させ、残渣をシリカゲル上でクロマトグ
ラフにかけた。このカラムをエーテル及びエーテ
ル／酢酸エチル（１：１）で展開させた。所望の
生成物を含むフラクシヨンを真空下で蒸発させ
た。無色の無定形固体としてＮ−３−（４−ヒド
ロキシフエニル）エチルスクシンアミド酸のＮ−
メチル−Ｎ−（１−メチル−３，３−ジフエニル
−４−オキソヘキシル）アミノエタノールエステ
ル379mgが得られた。

実施例 ５ I¹²⁵−Ｎ−３−（４−ヒドロキシフエニル）エ
チルスクシンアミド酸のＮ−メチル−Ｎ−〔１
−メチル−３，３−ジフエニル−４−オキソヘ
キシ〕アミノエタノールエステルの製造 ジメチルスルホキシド１ml中のＮ−３−（４−
ヒドロキシフエニル）エチルスクシンアミド酸の
Ｎ−メチル−Ｎ−〔１−メチル−３，３−ジフエ
ニル−４−オキソヘキシル〕アミノエタノールエ
ステル１mgの溶液合計50μを、比放射能
（specific activity）11〜17μCi／mgを有する
5μCiNaI¹²⁵を含む小びんに加えた。この混合物
にクロラミンＴ溶液（５mg／ml）の含計40を加
えた。この反応混合物をボルテツクス（Vortex）
ミキサーで５分間混合した。混合した後、この反
応小びん中にピロ亜硫酸ナトリウムの10mg／ml溶
液の合計40μを加え、この小びんをボルテツク
ス・ミキサーで２分間混合し、反応を止めた。

この混合物を小びんから取り出し、トリス
（Tris）緩衝剤PH値6.5の２mlを含小さなびんに１
％人間のアルブミンと共に入れた。次にこの混合
物を、100〜200メツシユのビオ・ゲル（Bio
Gel）Ｐ−Ｚカラム（2.6×40cm）の表面に、完全
にこのカラム物質に吸着するまで置いた。１％人
間アルブミンによりトリス緩衝剤合計２mlをこの
カラムに加え、次にカラムを１％人アルブミンに
よるトリス緩衝剤で溶離し、60×５mlフラクシヨ
ンを25ml／時間の流速で捕集した。フラクシヨン
＃12〜18をため、得られた合液した溶離液は放射
性濃度6.7μCi／mlを有する上記表題の標識付抗体
を含んでいた。

実施例 ６ I¹²⁵−６−ジメチルアミノ−４−フエニル−４
−（４−ヒドロキシフエニル）ヘプタン−３−
オンの製造 次に変更を除き、メサドン誘導体６−メチルア
ミノ−４−フエニル−４−（４−ヒドロキシフエ
ニル）ヘプタン−３−オンを用いて実施例５の方
法をくり返し行なつた。ボルテツクス・ミキサー
によりNaI¹²⁵反応混合物を混混合する代りに、こ
の混合物を90秒間おだやかに振盪し、重亜硫酸塩
の添加後、この混合物を30秒間おだやかに振盪し
た。最後にカラムクロマトグラフ段階の前に
0.1Mトリス緩衝剤PH値7.0の2.0mlを用いた。その
結果上記表題の標識付抗体が10.5μCi／mlの放射
性濃度でフラクシヨン＃22〜27中で得られた。

実施例 ７ 免疫原の製造 牛の血清アルブミン（結晶性）200mgを含む酢
酸塩緩衝剤40ml（0.05M、PH値5.5）に、実施例
３で製造したヘミコハク酸塩ハプテン150mgを加
えた。次にこの溶液に合計150mgの水溶性１−エ
チル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミドHClを加え、室温で24時間連続的に撹
拌した。PH値を周期的に監視し、5.5に保持した。
この最終溶液を３日間蒸留水に対して冷時透析し
た。所望の抗原を透析バツグから単離し、蛋白質
５〜10mg／mlの最終濃度に希釈した。次のこの抗
原をフロインド（Freund）完全補助液で１：１
に乳化し、３週間連続してやぎに皮下注射した。
その後、フロインド不完全補助液で１：１に乳化
した抗原を月々注射した。１カ所当り0.5mlを用
いた２カ所に注射した。各免疫後１週間して動物
から採血し、得られた抗血清をメサドンに対する
ラジオイムノアツセイ（radioimmunoassay）に
用いた。

実施例 ８ メサドン用 ¹²⁵Iラジオイムノアツセイに対す
る試験方法 尿検体は特別な取扱を必要としない。ピペツト
計量した試料は粗大な汚物を含んではならない。

全ての試薬を使用前に室温にすべきである。

全てのピペツト計量は正確に行なうべきであ
る。

定性分析 １ メサドン−陽性対照（positive control）及
び未知の尿検体の分析に対して必要な多くの管
（10×75mmの特製ガラス試験管）を用意し、ラ
ベルを付ける。測定に際して対照値が重要であ
るために陽性対照を三重に行なうことを推漿す
る。

２ 各々３本の試験管にメサドン陽性尿素対照
（100nｇ／ml）0.1mlを加える。

３ 残りの番号付試験管にそれぞれ未知の尿検体
0.1mlを加える。

４ リン酸塩PH値7.2緩衝剤中の54000DPMから
なる抗原試験試薬0.2mlを加え、ボルテツク
ス・ミキサーで十分に混合する。

５ 各々の管に50％正常やぎ血清を含むリン酸塩
PH値7.2緩衝剤中の1/40力価からなる抗体試験
試薬0.2mlを加える；ボルテツクス・ミキサー
で十分に混合する。

６ 周囲温度で１時間培養する。

７ 各々の管に飽和硫酸アンモニウムの溶液の上
澄液0.5mlを加えてグロブリンを沈殿させる；
ボルテツクス・ミキサーで十分に混合する。

８ 管を周囲温度で10分間放置して沈殿を終了さ
せる。

９ 振動バケツローター（swinging
bucketrotor）により約1200〜2500×ｇで、或
いは固定角度ヘツドローターにより3500〜4000
×ｇで10分間遠心分離する。（振動バケツロー
ターが好ましい。

10 各々の管から沈殿物を撹拌せずに側面に沿つ
てまたは底から上澄液0.5mlを取り出す（上澄
液は透明でなければならない）。カウントする
ためにガンマー・シンチレーシヨン小びんに移
す（或いは液を除去し、ペレツトを数える）。

11 １分当りの数（CPM）を得るために１分間
ガンマー・シンチレーシヨンカウンター中で
各々の管をカウントする。

定量試験 ここに示すメサドン検定（protocol）に対する
ラジオイムノアツセイ（RIA）は定性試験を示
す。定量化が必要な場合には、陽性対照のみの代
りに標準曲線を確立するために上記方法の次の変
更を用いることができる。

標準曲線の確立：標準曲線上の０点として及び
他の標準溶液を調製する際の希釈剤として正常の
尿対照（0nｇ／ml）を用いた。メサドン陽性対
照尿はメサドン100nｇ／mlを含有し、これを標
準として用いる。100nｇ／ml標準と正常の尿対
照との１：２希釈は50nｇ／ml標準溶液を与え
る。100nｇ／ml標準と正常の尿との１：４希釈
は25nｇ／ml標準溶液を与える。

15本のガラス製試験管（10×75mm）を用意し、
ラベルを付けた。管＃１、２及び３にそれぞれ正
常の尿対照0.1mlを加え；管＃４、５及び６にそ
れぞれ25nｇ／mlメサドン標準溶液0.1mlを加え；
管＃７、８及び９にそれぞれ50nｇ／mlメサドン
標準溶液0.1mlを加え；そして管＃10、11及び12
にそれぞれ100nｇ／mlメサドン標準溶液0.1mlを
加えた。

上記の検定における４〜11段階を続行した。

標準曲線の決定を次の如く行つた：Ｙ（縦）軸
はCPMを示し、Ｘ（横）軸はメサドン１ml当りの
ｎｇを示すようにする。プロツトした点は正常の
人尿を含む３本の管の平均CPM、25nｇ／ml標準
液を含む３本の管の平均値、50nｇ／ml標準液を
含む３本の管の平均値及び100nｇ／ml標準を含
む３本の管の平均値を示す。曲線を定めるために
最もよい線を適合させる。

メサドン量の分析：試験した各尿検体に対する
CPMを測定した。Ｙ軸からCPM値が標準曲線を
横切る測定点との交差点を読み取り、次にＸ軸に
降ろし、試験尿中に存在するメサドンのｎｇ／ml
を決定する。

試験した尿の値が100nｇ／mlよりも高い場合、
正常塩水で検体を１：10乃至１：100（ある場合に
は、CPM値が標準曲線の範囲に含まれる前に尿
検体を１：1000に希釈しなければならないことが
ある）に希釈し、試験をくり返す。値が標準曲線
内に含まれる場合、未希釈尿のメサドン値を決定
するために、適当な希釈フアクターでｎｇ／mlを
剰ずる。

評価： 各未知検体または標準液から得られた１分間当
りのカウントをメサドン陽性対照から得られた平
均CPMと比較する。

陰性の結果：未知検体CPMがメサドン陽性対
照の平均CPMよりも低い場合には、メサドンの
存在に対して試験は陰性である。

陽性の結果：未知検体CPMがメサドン陽性対
照の平均CPMと同等またはこれよりも高い場合
には、試験は陽性である。

実施例 ９ 本発明のイムノアツセイを、「正常」な個人の
任意の人数及びメサドンを与えた個人の尿を用い
て評価した。

100件の「正常」尿を用いてメサドンに対する
分析結果の集約を第１表に示した。

第１表 「正常」な個人100人の尿中の明白なメサ
ドン濃度 個人数 メサドン当量ｎｇ／ml 90 ０〜10 ９ 10〜40 １ 40〜60 この結果に基ずき、１ml当りの100nｇメサド
ン当量のレベルを陰性尿と陽性尿との間の識別に
選らんだ。

メサドン診断を受けており且つ化学分析により
尿中にメサドンを含むことが見出された個人から
の尿中のメサドンに対する分析結果を第２表に示
す。

第２表 メサドン診断を受けている118人 の尿中の明白なメサドン濃度 個人の数 メサドン当量ｎｇ／ml 46 500 58 200−500 11 100−200 １ 50−100 ２ ＜50 切捨て点として１ml当り100nｇメサドン当量
を用いて、試験した尿の97％は陽性であつた。

上記のデータはRIAによるメサドン使用者の検
出割合が極めて高いことを明らかに示している。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 試料を、既知量の放射性標識したメサドン誘
   導体及び免疫原性担体物質にカルボキシル基を介
   して共有結合した式 式中、ｎは２または３から選ばれる整数であ
   る、 の化合物から本質的になる抗原を宿主動物に接触
   することにより誘発させた、メサドン及び上記放
   射性標識したメサドン誘導体と選択的に錯体を形
   成する抗体と混合し、該標識したメサドン誘導体
   の結合の度合を測定し、そしてその結合の度合
   を、既知量のメサドンを固定量の上記標識したメ
   サドン誘導体及び上記抗体と混合しそして各既知
   量のメサドンについて結合の度合を決定すること
   によつて得られる標準曲線と比較することによ
   り、上記試料中に存在するメサドンの量を決定す
   ることを特徴とする試料中のメサドンのラジオイ
   ムノアツセイ方法。 ２ 該放射性標識したメサドン誘導体がI¹²⁵−標
   識したメサドン誘導体である特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ３ 該放射性標識した誘導体がI¹²⁵−Ｎ−２−
   （４−ヒドロキシフエニル）−エチル−スクシンア
   ミド酸Ｎ−メチル−Ｎ−（１−メチル−３，３−
   ジフエニル−４−オキソヘキシル）アミノエタノ
   ールエステルである特許請求の範囲第１または２
   項記載の方法。 ４ 該放射性標識した誘導体がI¹²⁵−６−ジメチ
   ルアミノ−４−フエニル−４−（４−ヒドロキシ
   フエニル）ヘプタン−３−オンである特許請求の
   範囲第１または２項記載の方法。