JPS63159363A - α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラニンメチルエステルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ンメチルエステル（以下、α−ＡＰＭと略記する）の改
良された製造法に関する。

さらに詳しくは、α−Ｌ−アスパルチル−し−フェニル
アラニンを塩酸とメタノールから成る媒体系でエステル
化し、生成した固体状のα−ＡＰＭ塩酸塩を固液分離し
、その後、この塩酸塩を中和してα−ＡＰＭを製造する
方法の著しく改良された方法に関する。

本発明の方法で得られるα−ＡＰＭは良質の甘味を有し
、人工甘味剤として有用な物質であり、近年その需要は
大きいものがある。

（従来の技術） α−ＡＰＭの製造法に関しては、既に数多くの方法が開
示されているが製造プロセス面からＮ−保護−Ｌ−アス
パラギン酸無水物を利用する方法が一般的である。とく
に、Ｌ−アスパラギン酸をギ酸および無水酢酸と反応さ
せることにより１工程で製造可能なＮ−ホルミル−し−
アスパラギン酸無水物を利用する方法は、原料が容易に
且つ安価に製造でき、その上工程も比較的簡略化される
ことから現状の技術レベルでは工業的製法として適した
方法であると考えられる。

このＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物を用いる
α−ＡＰＭ製造法は、そのほとんどが特開昭４６−１３
５０号などに代表されるように、もう一方の反応原料と
してＬ−フェニルアラニンメチルエステルを用いる方法
で、Ｎ−ホルミル−α−アスパルチル−し−フェニルア
ラニンメチルエステルを中間体として製造した後、保護
基のホルミル基を脱離させてα−ＡＰＭとする技術であ
る。

そしてＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物とＬ−
フェニルアラニンメチルエステルとの縮合方法、異性体
の抑制方法に関する技術およびホルミル基の脱離方法に
関する技術を中心に色々の方法が提案されている。しか
しながら、このＬ−フェニルアラニンメチルエステルを
一方の反応原料として用いる方法は、Ｌ−フェニルアラ
ニンをエステル化してＬ−フェニルアラニンメチルエス
テルとし、さらにＮ−ホルミル−Ｌ−アスパラギン酸無
水物との縮合反応につなげるまでの工程が繁雑になる。

その上、本発明者らの知見によればＬ−フェニルアラニ
ンメチルエステルが遊離の形態では、溶液中２分子縮合
し、且つ環化して下式のジケトピペラジン化合物に変化
し易い性質を有していることがわかった。このことは、
工業的には収率の低下やα−ＡＰＭの品質劣化等種々の
トラブルを誘起する原因になるものである。

したがって、Ｎ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物
を利用するα−ＡＰＭの製造法としては、Ｌ−フェニル
アラニンメチルエステルを使用せずに効率良く製造でき
る方法がより好ましい方法と考えられる。

Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルを使用しないα−
ＡＰＭの製造法として、Ｎ−ホルミル−し−アスパラギ
ン酸無水物を酢酸中、Ｌ−フェニルアラニンと直接縮合
させてＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニンを製造し、ついでホルミル基を除去してα
−Ｌ−アスパ゛ルチルーＬ−フェニルアラニンとしたの
ち、このα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
をメタノール中、塩化水素の存在下にエステル化してα
−ＡＰＭを製造する方法（特公昭５５−２６１３３号）
、及びこのエステル化の改良方法としてα−Ｌ−アスパ
ルチル−Ｌ−フェニルアラニンまたはＮ−ホルミル−α
−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンからその場
で生成するα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ンを塩化水素、メタノールおよび水から成る媒体と接触
させてエステル化反応を行い、生成したα−ＡＰＭを固
体状の塩酸塩として析出させて製造する方法（特公昭６
０−５０２００号）が開示されている。しかしながら、
前者の方法で１よ２つのカルボン酸基のエステル化反応
に選択性が低く、目的のα−ＡＰＭの他にβ−カルボン
酸基がエステル化されたα−Ｌ−７スバルチルーＬ−フ
ェニルアラニンーβ−メチルエステルや、ジエステル化
されたα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンジ
メチルエステルが多量に副生じ、その為にα−ＡＰＭの
選択率ならびに収率が低いという欠点がある。これに対
して後者の方法は生成したα−ＡＰＭが反応の進行に伴
い難溶性の塩酸塩として反応系外に徐々に析出してくる
ので、比較的好収率でα−ＡＰＭを製造しうる方法であ
る。原料の安定性、プロセスの簡便さ、ならびにα−Ａ
ＰＭの分離・精製が比較的容易である点などから考える
と、現状のα−ＡＰＭ製造技術のレベルにおいては工業
的プロセスになりうる技術の一つであると考えられる。

しかしながら、この方法は反応時間が著しく長いのが難
点である。

この特公昭に記載の実施例の中、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ
−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンからその場で生
成するα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを
用いての例において、反応時間は数日間と長時間を要し
ており、また収率でも反応後単離されたα−ＡＰＭ塩酸
塩を中和して得られる遊離α−ＡＰＭ段階での収率が、
およそ５０〜６０％であり、必ずしも満足しうるちので
はない。

（発明が解決しようとする問題点） 本発明の課題は、工業的な製造条件で、好収率でα−Ａ
ＰＭを製造しうる方法を提供することである。

（問題点を解決する為の手段） 本発明者らは前記したようなα−ＡＰＭ製造技術の現状
を踏まえ、また溶液中での安定性に問題のあるＬ−フェ
ニルアラニンメチルエステルを用いずに製造できるα−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンをメチルエス
テル化する方法で、さらに効率良くα−ＡＰＭを製造す
る方法を鋭意検討した。とくにα−Ｌ−アスパルチル−
し一フヱニルアラニンを塩酸とメタノールの媒体中にて
エステル化してざらに高収率に、そして反応時間も短縮
しうる方法を鋭意検討した結果、反応系に塩化マグネシ
ウムをある濃度で共存させた場合には、無添加の場合に
比較してＡＰＬ生成速度を顕著に速めることが可能で、
同一の反応時間では一段と高いα−ＡＰＭ収率が得られ
ることを見出した。

塩化マグネシウム以外の無機塩類についても種々検討し
たが、このような効果は塩化マグネシウム以外の無機塩
ではほとんど認められず、塩化マグネシウムに特有の効
果であることがわかった。

ＩＥＩ−１ハ、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニンを２５％塩酸（３，７モル比）とメタノール（３
，７５モル比）とから成る媒体中、２０〜２５°Ｃでエ
ステル化反応を行った際に種々の無機塩添加の有無条件
下に経時的α−ＡＰＭの生成率を追跡した結果である０
図−１に示されるように塩酸とメタノールの媒体系のみ
の場合には反応を３日間行ってもα−ＡＰＭ生成率は原
料のα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンに対
しておよそ７３モル％であるが、塩化マグネシウムをα
−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンに対して０
．４１モル％比添加して反応させた場合には反応２日後
で、７８モル％となり、３日後には８２モル％まで達す
る。また塩化マグネシウムの代わりに塩化ナトリウムま
たは硫酸マグネシウムを添加して反応を行った場合はＡ
ＰＬ生成速度は無添加の場合とほとんど同じである。

本発明はこのような知見に基づいて成されたものであり
、塩化マグネシウムの上記したような効果は従来知られ
ていない。

本発明は、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ンを塩酸およびメタノールから成る媒体中でエステル化
し、生成した固体状のα−ＡＰＭ塩酸塩を固液分離し、
この塩酸塩を中和してα−ＡＰＭを製造する方法におい
て、エステル化反応を塩化マグネシウムの存在下に行う
ことを特徴とするα−ＡＰＭの製造法である。

そして、更には原料のα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニンとしては、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパ
ルチル−Ｌ−フェニルアラニンからその場で生成するα
−し一アスパルチルーＬ−フェニルアラニンに本発明の
方法が適用でき、これらの方法も併せて提供するもので
ある。

本発明の方法においては、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−
フェニルアラニンが原料として使用される。このα−Ｌ
−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンは必ずしも単離
されたものである必要はなく、Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−
アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを塩酸中、または
塩酸とメタノールとの媒体中、高められた温度で処理し
てホルミル基を除去することによってその場で生成され
るものでも良い。

原料の一つであるＮ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル
−Ｌ−フェニルアラニンはＮ−ホルミル−し−アスパラ
ギン酸無水物とＬ−フェニルアラニンを縮合させること
によって製造できる。とくに水溶媒中で縮合させる特開
昭６１−１４３３９７号の方法で効率良く製造できる。

またα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンはＮ
−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラ
ニンヲ水性媒体中、酸と接触させる等の公知のホルミル
基除去方法を利用しても製造できる。これらの原料化合
物はＮ−ホルミル−し−アスパラギン酸無水物とＬ−フ
ェニルアラニンを縮合させる隙に副生ずるβ−異性体、
即ち、Ｎ−ホルミル−β−り一アスバルチルーＬ−フェ
ニルアラニンや原料由来のＮ−ホルミル−し−アスパラ
ギン酸またはＬ−フェニルアラニンが越ち込されるなら
、本発明の方法に影響しない範囲で混入していても何ら
問題なく、特にβ−異性体は、およそ３０重世％程度ま
では本発明の方法においてα−ＡＰＭ塩酸塩の析出を極
端に妨害しないばかりか、このβ−異性体由来の化合物
の析出も起こらず、反応を通して得られるα−ＡＰＭ塩
酸塩の品質を低下させるものではない。

本発明の方法において、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンのエステル化反応ハ［［とメタノールと
から成る媒体中、塩化マグネシウムの存在下に実施され
る。

媒体の塩酸ならびにメタノールはそれぞれ原料のα−Ｌ
−７スバルチルーＬ−フェニルアラニンに対して１当量
以上使用され、とくに、塩酸については１．１当量以上
用いるのがα−ＡＰＭ塩酸塩収率の点で好ましい。使用
する塩酸の濃度は５〜３３重量％、好適には１０〜３０
重量％の範囲であり、またメタノールは媒体中のメタノ
ール／Ｈ２Ｏ（重量比）で０．０３〜０．４０、このま
しくは、０．０４〜０．３５の範囲である。塩酸および
メタノールがこれらの範囲外であると、α−ＡＰＭ生成
速度が著しく緩慢になったり、また生成したα−ＡＰＭ
の溶解度が高くなり、その為、α−ＡＰＭ塩酸塩が析出
し難くなったりして好ましくない。

本発明の方法において、塩酸とメタノールから成る媒体
中に共存させる塩化マグネシウムは、前記媒体中におい
て溶解状態で効果を表すものであり、媒体中の塩化マグ
ネシウム濃度が低すぎるとその効果はほとんどなく、ま
た高すぎると無添加の場合に比較して逆にα−ＡＰＭ生
成速度が遅くなり、場合によってはα−ＡＰＭ塩酸塩が
析出しないこともあり得る。塩化マグネシウムの使用量
は、媒体の塩酸濃度やメタノール濃度によって好適な条
件は変わるが、塩酸とメタノールから成る媒体中での濃
度で０，５〜２５重量％、好適には０．７〜２０重量％
である。共存させる塩化マグネシウムの量が上記の範囲
であると、塩化マグネシウムの共存しない系でのエステ
ル化よりもα−ＡＰＭ生５　成速度が速まりその効果が
得られる。

本発明の方法でのα−′Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニンのエステル化反応は、原料反応媒体および塩
化マグネシウムの装入順序等は特に限定されるものでは
なく、例えば、塩酸とメタノールから成る媒体に塩化マ
グネシウムを装入溶解した溶液中にα−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フェニルアラニンを装入溶解させ、所定の温度
で反応させることによって達成される。

エステル化反応温度は、通常は０〜５０°Ｃ１好ましく
は１０〜４０°Ｃである。低すぎるとエステル化反応速
度が遅く、また高すぎると生成したα−ＡＰＭ塩酸塩の
溶解度が高くなるので、該塩酸塩が析出し難くなってα
−ＡＰＭ収率が低下する。

本発明の方法において、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンは、その前段の化合物であるＮ−ホルミ
ル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンから
その場で生成するα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニンモ使用できる。

Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニンからその場でα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニンを生成させるには、引きつづいて行うエステ
ル化反応で使用される量またはそれ以下の量の塩酸中で
Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニンを加熱することによって達成される。この際、エ
ステル化工程で用いる量またはそれより少ない量のメタ
ノールを共存させて行うことも可能である。加熱される
温度はペプチドの開裂等の副反応を抑制する上で６５°
Ｃ以下が良く、好ましくは４０〜６０’Ｃである、Ｎ−
ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニ
ンからα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンの
生成をメタノールの共存下に行った場合には、塩酸濃度
ならびにメタノール濃度によってその程度は変化するが
生成したα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
はそのエステル化合物との混合物として生成するのは勿
論のことである。このようにして生成したα−Ｌ−アス
パルチル−Ｌ−フェニルアラニンは媒体の塩酸量や濃度
ならびにメタノール量などを調整したのち、所定量の塩
化マグネシウムを装入溶解して、エステル化することに
よりα−ＡＰＭ塩酸塩が製造される。

本発明においては生成したα−ＡＰＭの塩酸塩は逐次反
応系より結晶として析出する。従ってエステル化反応後
は必要に応じて冷却後、円心分離等の濾過操作によって
α−ＡＰＭ塩酸塩を取得できる。この塩酸塩は常法によ
り、例えば、水中で水酸化アルカリ、炭酸アルカリまた
は重炭酸アルカリなどの塩基で中和することによって遊
離のα−ＡＰＭに変換できる。

（効果） 本発明の方法によれば、α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
ェニルアラニンを塩酸とメタノールとから成る媒体中で
エステル化反応を行いα−ＡＰＭ塩酸塩を製造するに際
して、工業的にも安価な塩化マグネシウムの添加のみで
α−ＡＰＭ塩酸塩の生成速度が顕著に速まり、より高収
率でα−ＡＰＭが製造できる。またα−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フェニルアラニンは必ずしも単離されたもので
ある必要はなく、その前段の化合物であるＮ−ホルミル
−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンからそ
の場で生成されるものであってもよく、エステル化法に
よるα−ＡＰＭの優れた改良法と言える。

（実施例） 以下、実施例により本発明の詳細な説明する。

尚、実施例中の高速液体クロマトグラフィーの分析条件
は以下の通りである。

高速液体クロマトグラフィーの分析条件カラム　ＹＭＣ
ｐａｃｋ　Ａ−３１２６ｎ＋ｍφ×１５０ｆｆＩ１１（
充填剤００５） 移動相　０．００５Ｍ／　１　　ヘプタンスルホン酸ナ
トリウム水？容ン＆、：　　メタノール＝６５：３５（
体積比） （リン酸でｐＨ・２．５に調整） 流ｉｔ　１ｍｌ／ｍｉｎ 検出器　　紫外分光光度計 実施例１ ３５χ塩酸３８．６ｇ−水１１ｇおよびメタノール１２
゜０ｇから調整された媒体中に塩化マグネシウム６水和
物８．３ｇを溶解した（塩化マグネシウムの媒体中での
７農度は５．６重量％）、この？ノー中にα−り一アス
パルチルーＬ−フェニルアラニン２８．０ｇヲ室温で溶
解した。その後２０〜２５℃で３日間（７２Ｈｒ）反応
させた。α−ＡＰＭの生成率を高速液体クロマトグラフ
ィーで追跡した結果は、図−１に示す、この結果から３
日後のα−ＡＰＭ生成率は８１．９χ（対α−Ｌ−アス
パルチル−Ｌ−フェニルアラニン）であった。

その後５℃に冷却し、析出している結晶を吸引濾過し、
５℃以下に冷却された１規定塩酸で洗浄することにより
α−ＡＰＭ塩酸塩の湿ケーキを得た。高速液体クロマト
グラフィーで分析の結果、２３．３ｇのα−ＡＰＭ　（
遊離換算）を含有していた。収率７９．２Ｘ　（対α−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン） ここに得たα−ＡＰＭ塩酸塩の湿ケーキを水４００ｎ＋
１中、常法により２０χ炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ５
，２に中和し、５℃に冷却後濾過、水洗ののち減圧下に
乾燥することにより２０．６ｇのα−ＡＰＭを得た。

収率７０．０χ（対α−し一アスパルチルーＬ−フェニ
ルアラニン） 〔α）　”＝　＋１５．７°（Ｃ＝４１５規定ギ酸）実
施例２ 実施例１において水を１４．５ｇにまた塩化マグネシウ
ム６水和物を１．６ｇに代える以外は実施例１と同様に
反応を行った。α−ＡＰＭの生成率を高速液体クロマト
グラフィーで追跡した結果は、図−１に示す。３日後の
α−ＡＰＭ生成率は７９．４χ（対α−Ｌ−アスパルチ
ル−Ｌ−フェニルアラニン）であり、また実施例１と同
じようにして単離されたα−ＡＰＭ塩酸塩の単離収率は
、７６．９Ｘ　（対α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニ
ルアラニン）であった。

比較例１ 実施例１において塩化マグネシウムを添加しない他は実
施例１と同様にエステル化反応を行った（但し水の量を
１５．４ｇとし塩酸濃度を実施例１と同じ＜２５ｚ濃度
にした）。α−ＡＰＭの生成率を高速液体クロマトグラ
フィーで追跡した結果は、図−１に示す、　２０〜２５
℃、３日間反応後のα−ＡＰＭ生成率は７３．０χ（対
α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン）であっ
た、また実施例１と同じように単離されたα−ＡＰＭ塩
酸塩の単離収率は６９．８χ（対α−し一アスパルチル
ーＬ−フェニルアラニン）であった。

比較例２〜３ 実施例１において塩化マグネシウムの代わりに塩化ナシ
リウム（比較例２　）　４．８ｇ、或いは無水硫酸マグ
ネシウム（比較例３　’ｊ　４．９ｇを用いる以外は水
の量を実施例１に合わせて同様に反応を行った。反応３
日後のα−ＡＰＭ生成率はそれぞれ７３゜６χ、？２．
１χ（対α−し一７スバルチルーＬ−フェニルアラニン
）で比較例１とほとんど差はなかった。

比較例４ 実施例２において塩化マグネシウム６水和物の使用量を
０．６ｇに代える他は実施例２と同様にエステル化反応
を行った結果、同じく反応３日後のα−ＡＰＭ生成率は
７３．９χ（対α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
ラニン）であった。

実施例３ ３５χＨＣｊ！　４１．７ｇ、水３９．４ｇおよびメタ
ノール９．６ｇ、から成る媒体中に無水塩化マグネシウ
ム１０゜０ｇをｔ容解し、さらにα−Ｌ−アスパルチル
−フェニルアラニン２８．０ｇを溶解した。その後３０
〜３５℃で３日間反応させた．高速液体クロマトグラフ
ィーにてα−ＡＰＭ生成率を分析の結果８１．２χ（対
α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン）であっ
た。

比較例５ 実施例３において塩化マグネシウムを添加せずに反応を
行った。３日後のα−ＡＰＭ生成率は７４、６ｚであっ
た。

実施例４ ４規定塩酸６０．８ｇとメタノール１２ｇとから成る媒
体を５０℃に昇温し５０〜５５℃でＮ−ホルミル−α−
Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン３０。

８ｇをおよそ３０分要して加えた。その後５０〜６０℃
で２時間反応させてホルミル基を除去した．室温まで冷
却後３５χＨＣ　１　１７．７ｇと無水塩化マグネシウ
ム７、８ｇを装入した．２０〜２５℃で４日間反応させ
たところα−ＡＰＭ生成率は８２．５χ（対α−Ｌ−ア
スパルチル−Ｌ−フェニルアラニン）であった。５℃に
冷却後吸引濾過し、５℃以下に冷却された１規定塩酸で
洗浄することにより２３．４ｇのα−ＡＰＭ（遊離換算
）を含有するα−ＡＰＭ塩酸塩のケーキを得た。収率：
　７９．５χ（対α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニル
アラニン） 比較例６ 実施例４において塩化マグネシウムを添加せずに同様に
反応を行った．２０〜２５℃４日間反応後α−ＡＰＭ生
成率は７４．３χ（対α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェ
ニルアラニン）であった。

【図面の簡単な説明】

図−１は、実施例１、実施例２および比較例１のα−Ａ
ＰＭ生成率と時間の関係を示すものである。 図中の符号はそれぞれつぎの通りである。 ■実施例１　　（　ＭｇＣｈ　　Ｏ．４１モル比添加）
■実施例２　（　ＭｇＣ１ｇ　　０．０８モル比添加）
■比較例１　（無機塩無添加）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンを塩
   酸およびメタノールから成る媒体中でエステル化し、生
   成した固体状のα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
   ラニンメチルエステルの塩酸塩を固液分離し、該塩酸塩
   を中和することから成るα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フ
   ェニルアラニンメチルエステルの製造法において、エス
   テル化反応を塩化マグネシウムの存在下に行うことを特
   徴とするα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニン
   メチルエステルの製造法。 ２）α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンが、
   Ｎ−ホルミル−α−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルア
   ラニンからその場で生成するα−Ｌ−アスパルチル−Ｌ
   −フェニルアラニンである特許請求の範囲第１項記載の
   方法。 ３）塩化マグネシウムが、塩酸およびメタノールから成
   る媒体中におよそ０．５〜２５重量％の範囲で存在する
   特許請求の範囲第１項ならびに第２項記載の方法。