JPS63146826A - 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は顆粒球コロニー刺激因子含有製剤に関し、特に
容器壁土への吸着または会合、重合、酸化等による活性
成分の損失、不活性化を有利に防止し、安定化させた顆
粒球コロニー刺激因子含有製剤に関するものである。

従来の技術 最近では各種感染症の化学療法においては、耐性菌発生
、原因菌の交代現象、あるいは高い副作用などが臨床的
に重大な問題となっており、そのため、抗生物質、抗菌
剤等による上記の如き化学的療法とは別に、感染菌宿主
の防禦機能を活性化するような物質を用いることにより
、上記化学療法の根本的な問題の解決を図ろうとする動
きがある。即ち、例えば細菌感染の初期には宿主のもつ
防禦機能のうちで白血球の貧食殺菌作用が最も強く影響
すると考えられており、そこで好中球の増殖、分化成熟
を促進することにより宿主の感染防禦機能の亢進を図る
ことが重要と考えられる。このような作用を示す極めて
有用な物質のひとつとして顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ
−Ｃ３Ｆ）があり、既にこれを用いた感染防禦剤が本出
願人によって別途特許出願されている（特願昭６０−２
３７７７号）。

発明が解決しようをする問題点 上記の如く、各種化学療法においては、各種の回避し得
ない問題があり、そのために被感染体即ち宿主の防禦機
能を賦活化し得るような物質を薬剤として用いる試みが
なされている。

Ｇ−ＣＳ　Ｆは勿論、それ自身に宿主の防禦機能を賦活
化する活性を有し、臨床上の治療効果をさらに十分に発
揮すべく、上述した薬剤との併用の場合においても、そ
の目的を遂行する上で極めて有用であることが判明した
。

このＧ−Ｃ３Ｆは極めて微量で使用され、通常成人−人
当たり、０．１〜５００μｇ（好ましくは５〜５０μｇ
）のＧ−ＣＳ　Ｆを含有する製剤を１〜７回／週の割合
で投与する。しかしながら、このＧ−Ｃ３Ｆは、例えば
注射用アンプル、注射器等の器壁に対し吸着性を示すこ
とから、特にこの薬剤を水溶液等の注射薬として利用す
る場合には、アンプル等の容器、注射器等の器壁に吸着
されてしまい、Ｇ−ＣＳ　Ｆの医薬としての活性を十分
有効に発揮させることができず、あるいはこのような吸
着に基く損失分を予め見積って余分に医薬中に添加して
おかねばならない。

その上、Ｇ−ＣＳ　Ｆは不安定で、外的因子の影響を受
は易く、温度、湿度、酸素、紫外線等に起因して会合、
重合あるいは酸化などの物理的、化学的変化を生じ、結
果として、大きな活性の低下を招く。

このことは、極めて微量の投与量のＧ−Ｃ３Ｆを極めて
正確に投与しようとする治療行為の完全な遂行を困難に
する。

そこで、このような問題点を解決し、有効成分の活性の
低下を十分に防止できる製品を開発する必要が生じる。

本発明の目的はこのような点にあり、即ち安定なＧ−Ｃ
Ｓ　Ｆ含有製剤を提供することにある。

問題点を解決するための手段 本発明者等は上記目的とするＧ−Ｃ３Ｆ含有製剤の安定
性を改善すべく種々検討・研究した結果、製薬上許容さ
れる界面活性剤を添加することが有効であることを見出
し、本発明を完成した。

即ち、本発明の安定なＧ−ＣＳ　Ｆ含有製剤は、Ｇ−Ｃ
８Ｆと少なくとも１種の製薬上許容される界面活性剤と
を含有することを特徴とする。

本発明におけるＧ−Ｃ３Ｆは、例えば既に出願されてい
る特願昭５９−１５３２７３号、同６０−２６９４５５
号、同６０−２６９４５６号、同６０−２７０８３８号
、同６０−２７０８３９号の明細書に記載の各種方法に
従って得ることができ、例えばヒ）　Ｇ−ＣＳ　Ｆは口
腔底癌患者の腫瘍細胞から採取した細胞株（ＣＮＣＭ受
託番号ｒ　Ｉ　−３１５Ｊ　、同ｒ　Ｉ　−４８３Ｊ　
）の培養により、あるいは更にヒ）　Ｇ−ＣＳ　Ｆをコ
ードする遺伝子を用いて組換体ＤＮＡを作製し、これを
適当な宿主細胞（例えば大腸菌、Ｃ１２７細胞、チャイ
ニーズハムスターの卵巣細胞等）で発現させるなどによ
って得ることができる。

本発明におけるＧ−ＣＳ　Ｆとしては高純度に精製され
たヒ）　Ｇ−ＣＳ　Ｆであれば全て使用できるが、ヒ）
Ｇ−Ｃ３Ｆ産生細胞を培養して得られる培養上清から単
離して得られるもの及びヒ）Ｇ−Ｃ５Ｆ活性を有するポ
リペプチドをコードする遺伝子を組み込んだ組換えベク
ターで宿主を形質転換して得られる形質転換体が産生す
るヒトＧ−Ｃ５Ｆ活性を有するポリペプチドまたは糖蛋
白質が好ましい。

具体的には、次の（ｉ）及び（ｉｉ）で示すヒトＧ−Ｃ
ＳＦが特に好ましく用いられる。

（ｉ）次の理化学的性質を有するヒ）　Ｇ−ＣＳ　Ｆ０
■分子量ニドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法による測定で 約１９．０００±１．０００゜ ■等電点：ｐｌ＝５．５±０．１　、ｐ　Ｉ＝　５．８
±０．１、ｐＩ＝６．１±０．１の三つの等電点のうち
少なくとも１つを有する。

■紫外部吸収：　２８０ｎｍに極大吸収を有し、２５０
ｎｍに極小値を持つ。

■Ｎ末端から２１残基目迄のアミノ酸配列が次の如くで
ある。

Ｈ２Ｎ−Ｔｈ　ｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｒ
ｏ−Ａ　Ｉａ−Ｓｅｒ−Ｓｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｇｌ
ｎ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−νａｌ−（ｉｉ）下記のア
ミノ酸配列またはその一部で表わされるヒト顆粒球コロ
ニー刺激因子活性を有するポリペプチド又はこれと糖鎖
部を有する糖蛋白質を含有するヒトＧ−ＣＳ　Ｆ。

（Ｍｅｔ）ｌｌ　Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌ
ｙ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ｓｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｌｅ
ｕＰｒｏ　　Ｇｉｎ　　Ｓｅｒ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ　
　Ｌｅｕ　　Ｌｙｓ　　Ｃｙｓ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｕ　
　ＧｉｎＶａｌ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ　　！ｌｅ　　Ｇ
ｌｎ　　Ｇｌｙ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｙ　　八ｌａ　　Ａ
ｌａ　　ＬｅｕＧｉｎ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　　（
Ｖａｔ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ）、ａ　Ｃｙｓ　Ａｌａ　Ｔｈ
ｒＴｙｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　
Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　ＬｅｕＬｅｕ　Ｇｌ
ｙ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　ｌｉｅ　Ｐｒｏ
　Ｔｒｐ　Ａｌａ　Ｐｒ。

Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｇ
ｉｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　ＬｅｕＡｌａ　Ｇｌｙ
　［’ｙｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ
　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　ＬｅｕＰｈｅ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｇ
ｉｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ、Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ｌｅ
ｕ　ＧｌｕＧｌｙ　　Ｉｌｅ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　
Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　Ｐｒｏ　　Ｔｈｒ　　
Ｌｅｕ　　ＡｓｐＴｈｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ｌｅｕ　Ａ
ｓｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔｈ
ｒＴｈｒ　　Ｉｌｅ　　Ｔｒｐ　　Ｇｉｎ　　Ｇｉｎ　
　！Ｊｅｔ　　Ｇｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ
　　！ＪｅｔＡｌａ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ｌｅｕ　
　Ｇｌｎ　　Ｐｒｏ　　Ｔｈｒ　　Ｇｉｎ　　Ｇｌｙ　
　Ａｌａ　　！ＪｅｔＰｒｏ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ａｌａ
　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　
ＡｌａＧｌｙ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａｌ
ａ　Ｓｅｒ　）Ｉｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　５ｅｒＰｈｅ
　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　
Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ａｒｇｔｌｉｓしｅｕ　Ａｌａ　Ｇｌ
ｎ　Ｐｒｏ　　（但しｍは０又は１を表わし、ｎは０又
は１を表わす）。

なおこれらのＧ−Ｃ３Ｆの詳細な製造方法については、
本出願人が先に出願した特願昭５９−１５３２７３号、
特願昭６０−：２６９４５５号、特願昭６０−２６９４
５６号、特願昭６０−２７０８３８号、特願昭６０−２
７０８３９号明細書を参照されたい。

又、その他の方法としてＧ−Ｃ３Ｆ産生細胞と自己増殖
能を有する悪性腫瘍細胞とを細胞融合して得られるハイ
ブリドーマをマイトジェンの存在下または不在下で培養
することによって得ることもできる。

これ等の方法で得られたヒ）　Ｇ−ＣＳ　Ｆ含有液は必
要により公知の手段でさらに精製、濃縮した後凍結保存
とするかまたは凍結乾燥などの手段により水分を除去し
て保存することができる。

このようにして得たヒトＧ−ＣＳ　Ｆは全て本発明によ
って安定なＧ−Ｃ３Ｆ含有製剤とすることができる。

本発明の安定なＧ−Ｃ３Ｆ含有製剤を得るのに使用する
界面活性剤としては、非イオン性界面活性剤、例えばソ
ルビタンモノカプリレート、ソルビタンモノラウレート
、ソルビタンモノパルミテートなどのソルビタン脂肪酸
エステル；グリセリンモノカブリレート、グリセリンモ
ノミリステート、グリセリンモノステアレートなどのグ
リセリン脂肪酸エステル；デカグリセリルモノステアレ
ート、デカグリセリルジステアレート、デカグリセリル
モノリル−ト等のポリグリセリン脂肪酸エステル；ポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシ
エチレンソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレ
ンソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレンソ
ルビタンモノオレエ−ト、ポリオキシエチレンソルビタ
ントリオレエート、ポリオキシエチレンソルビクントリ
ステアレート等のポリオキシエチレンソルビット脂肪酸
エステル；ポリオキシエチレンソルビットテトラステア
レート、ポリオキシエチレンソルビットテトラオレエー
トなどのポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル
：ポリオキシエチレングリセリルモノステアレートなど
のポリエチレングリセリン脂肪酸エステル；ポリエチレ
ングリコールジステアレートなどのポリエチレングリコ
ール脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンラウリルエー
テルなどのポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリ
オキシエチレンポリオキシプロピレングリコールエーテ
ル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキル
エーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセ
チルエーテルなどのポリオキシエチレンポリオキシプロ
ピレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレンノニルフ
ェニルエーテルなどのポリオキシエチレンアルキルフェ
ニルエーテル；ポリオキシエチレンヒマシ油、ポリオキ
シエチレン硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン水素ヒマ
シ油）などのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；ポリオ
キシエチレンソルビットミツロウなどのポリオキシエチ
レンミツロウ誘導体；ポリオキシエチレンラノリンなど
のポリオキシエチレンラノリン誘導体；ポリオキシエチ
レンステアリン酸アミドなどのポリオキシエチレン脂肪
酸アミド等のＨＬＢ６〜１８を有するもの、陰イオン性
界面活性剤、例えばセチル硫酸ナトリウム、ラウリル硫
酸ナトリウム、オレイル硫酸ナトリウムなどの炭素原子
数１０〜１８のアルキル基を有するアルキル硫酸塩；ポ
リオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム等の、エチレ
ンオキシドの平均付加モル数が２〜４でアルキル基の炭
素原子数が１０〜１８であるポリオキシエチレンアルキ
ルエーテル硫酸塩；ラウリルスルホコハク酸エステルナ
トリウムなどといったアルキル基の炭素原子数が８〜１
８のアルキルスルホコハク酸エステル塩、天然系界面活
性剤、例えばレシチン、グリ七ロリン脂質；スフィンゴ
ミエリンなどのスフィンゴリン脂質；炭素原子数１２〜
１８の脂肪酸のショ糖脂肪酸エステルなどを典型的な例
として挙げることができる。

これらは、勿論単独であるいは２種以上の混合物として
使用できる。

この界面活性剤は一般にＧ−Ｃ３ＦＩ重量部に対し１重
量部〜１０．０００重量部の範囲内で使用することが好
ましい。

本発明のＧ−ＣＳ　Ｆ含有製剤はその製剤化の目的に応
じて希釈剤、溶解補助剤、等張化剤、賦形剤、ｐＨ調整
剤、無痛化剤、緩衝剤、金儲還元剤、酸化防止剤等を含
有してもよい。例えば金儲還元剤としてはＮ−アセチル
システィン、Ｎ−アセチルホモシスティン、チオクト酸
、チオジグリコール、チオエタノールアミン、チオグリ
セロール、チオソルビトール、チオグリコール酸および
その塩、チオ硫酸ナトリウム、グルタチオン、並びに炭
素原子数１〜７のチオアルカン酸などのスルフヒドリル
基を有するものなどを例示できる。

また、酸化防止剤としてはエリソルビン酸、ジブチルヒ
ドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、α−
トコフェロール、酢酸トコフェロール、Ｌ−アスコルビ
ン酸およびその塩、Ｌ−アスコルビン酸パルミテート、
Ｌ−アスコルビン酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウ
ム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリアミル、没食子酸
プロピルあるいはエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム
（ＥＤＴＡ）　、ピロリン酸ナトリウム、メクリン酸ナ
トリウムの如きキレート剤などを例示できる。

あるいはまた、賦形剤としてグリシン、システィン、ス
レオニン、シスチン、トリプトファン、メチオニン、リ
ジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン、アルギニンなど
のアミノ酸を添加してもよい。

本発明の安定化されたＧ−ＣＳ　Ｆ含有製剤は経口、各
種注射などの非経口等各種の投与形式で使用でき、該投
与形式に応じた様々な網形で実現できる。例えば、投与
剤形としては錠剤、丸剤、カプセル剤、頚粒剤、懸濁剤
等の経口投与剤、あるいは静注、筋注、皮下性、皮内注
用等の溶液、懸濁注射剤、凍結乾燥剤あるいは串刺、経
鼻剤、膣剤等の経粘膜投与剤形を典型的なものとして例
示できる。

九」 上記の如く、感染症等の化学的療法においては、抗生物
質、抗菌剤等の薬剤の他、患者の抵抗力、活性などとい
った免疫応答力にもとすいた防禦機能自体をも同時に改
善するために、この目的で有効な成分を添加併用するこ
とが臨床上極めて有用な手段であることが判明してきた
。

この種の成分の一つであるＧ−Ｃ３Ｆは極めて微量で使
用される。従って、Ｇ−Ｃ３Ｆを極低濃度の水溶液等と
して取扱う場合には、例えば注射器等に入れたり、アン
プル等の容器に収容して使用されることが多いが、この
ような場合に、上記の如く成分の容器、注射器等の器壁
に対する吸着性が高いことから、これらの器壁等に吸着
してしまい、薬液中での有効濃度を、あるいは所定単位
用量中の成分の目的とする活性を維持することが困難で
あるといった問題がみられた。従って、有効量以上の量
を、吸着により失われる量を考慮して、予め添加してお
く必要があった。

更に、特にＧ−ＣＳ　Ｆについてみると、これは一般に
不安定なものであり、温度、湿度、酸素、紫外線等の外
的因子によって大きな影響を受け、会合、重合あるいは
酸化分解などの物理的、化学的変化を生じ活性の低下を
招く。

そこで、本発明ではＧ−ＣＳ　Ｆ含有製剤に界面活性剤
を添加することにより上記諸問題点を解決した。このも
のの安定化および／または吸着防止効果の詳細な機構は
不明であるが、たとえば、界面活性剤の存在下に於ては
、疎水性活性蛋白であるＧ−Ｃ３Ｆの表面がこれによっ
て被覆され可溶化されることにより、極微量成分として
のＧ−Ｃ５Ｆの器壁上での吸着が効果的に防止されてい
るものと思われる。このような問題は注射用溶液、懸濁
剤などにおいて顕著なものであるが、その他の錠剤等の
製剤過程においても同様にみられる問題であり、界面活
性剤の使用はこのような場合にも有効である。

更に、界面活性剤の添加によってＧ−ＣＳ　Ｆは大巾に
安定化され、以下の実施例で実証するように長期に亘り
Ｇ−Ｃ３Ｆの活性を有効に維持することができる。これ
は、界面活性剤の使用により、各活性成分分子相互が保
護され、吸着による損失を防止し同時にこれらの間の会
合、重合の確率が大巾に減じられるためであると思われ
る。

このような理由から、界面活性剤の添加量は、特にその
下限は臨界的であり、Ｇ−Ｃ３ＦＩ重量部に対し１重量
部〜１０．０００重量部の範囲内の量で含有することが
望ましい。

上記の如く、効果的に器壁等への吸着が防止でき、更に
安定性を向上させたことは、微量成分としてのＧ−ＣＳ
　Ｆの有効利用を可能とし、更に高価な成分の浪費が防
止されることから、製品コストの低下を図ることにもつ
ながる。

実施例 以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明する。

しかしながら、本発明は以下の例によって同等制限され
るものではない。

尚、以下の実施例においてＧ−Ｃ３Ｆの残存活性の測定
は以下の如〈実施した。

（ａ）　　マウス骨髄細胞を用いる軟寒天法ウマ血清Ｑ
、４ｍｌ、被検体０．１ｍｌ、　Ｃ３Ｈ／Ｈｅ　Ｎ（メ
ス）マウスの骨髄細胞浮遊液０，１ｍ１（０，５〜ｌ×
１０５有核細胞）、寒天を０．７５％含む改変マツコイ
５Ａ培養液Ｑ、４ｍｌを混合し、直径３５ｍｍの組織培
養用プラスチックディツシュに入れて固まらせた後、３
７℃、５％炭酸ガス／９５％空気、１００％湿度の条件
にて５日間培養し、形成されたコロニー数（５０個以上
の細胞からなる集落を１コロニーとする）を数え、１個
のコロニーを形成する活性を１単位（Ｕｎｉｔ）とした
。

尚、上記（ａ）の方法において用いた「改変マツコイ５
Ａ培養液」は次の如くして作製した。

「改変マツコイ５Ａ培養液（２倍濃度）」マツコイ５Ａ
培養液〔ギブコ（ＧＩＢＣＯ）社製〕１２ｇ、ＭＥＭア
ミノ酸ビタミン培地（田水製薬社製）２、５５　ｇ　、
重炭酸ナトリウム２．１８　ｇ　、ペニシリンＧカリウ
ム５００００単位を２回蒸溜水５００ｍ１に溶解後、０
．２２μｍのミリポアフィルタ−にて濾過滅菌を行った
後使用した。

（ｂ）　　逆相系高速液体クロマトグラフィー法Ｃ８逆
相カラム（４，６ｍｍ　Ｘ　３００ｍｍ、　５　ｔｔ　
ｍ　）を用い、ｎ−プロパツール、トリフルオロ酢酸を
移動相に使用し、Ｇ−Ｃ３Ｆとして１μｇ相当量以上を
注入し、以下のグラジェント条件で残存活性の測定をす
る。

時間　溶媒（Ａ）　　溶媒（６）　　グラジェント条件
溶媒（Ａ）　：　３０％ｎ−プロパツール。

０１．１％トリフルオロ酢酸 溶媒（Ｂ）　：　６０％ｎ−プロバノーノぺ０．１％ト
リフルオロ酢酸 測定波長：　２１０ｎｍ 本性で測定されたＧ−ＣＳ　Ｆの残存量は、上記（ａ）
のマウス骨髄細胞を用いる軟寒天法の測定結果と極めて
高い相関性を示した。

実施例Ｉ Ｇ−Ｃ３Ｆ５μｇに第１表に示す界面活性剤を添加し、
更に凍結乾燥用の賦形剤としてアラニンをＧ−ＣＳ　Ｆ
に対して２００重量部加えたＧ−ＣＳ　Ｆ５μｇ／ｒｎ
！！含有製剤（２０ｍＭリン酸緩衝液、１００　ｍ　Ｍ
塩化す）　ＩＪウム含有、ｐＨ７，４）を無菌的に調製
し、次いで凍結乾製剤を製造した。Ｇ−Ｃ３Ｆ活性の経
時変化は上記（ａ）マウス骨髄細胞を用いる軟寒天法で
測定した。結果は第１表に示す。尚、表中活性（％）と
は、初期単位に対する相対的割合であり、以下の式で定
義される。

凍結乾燥条件は以下の通りである： 安定化剤を添加したＧ−ＣＳ　Ｆ溶液を無菌サルフチ処
理ガラスバイアルに入れ、−４０℃以下で４時間凍結し
、−４０℃から０℃、真空度０．０３から０．ＩＴｏｒ
ｒで、４８時間−次乾燥した。次いで０℃から２０℃、
真空度０．０３から０．０８Ｔｏｒｒで１２時時間法乾
燥し、バイアル内部を無菌乾燥窒素ガスで大気圧になる
まで置換する。次いで凍結乾燥用ゴム栓で打栓し、アル
ミニウムキャップで密封する。

第１表 実施例２ Ｇ−Ｃ３ＦＩＯμｇに第２表に示す界面活性剤を添加し
たＧ−ＣＳ　Ｆ１０μｇ／ｒｒＬｌ含有製剤（２０ｍＭ
リン酸緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム含有、ｐＨ７
，４）を無菌的に調製し、サルファ処理ガラスバイアル
内に無菌的に充填、密封してＧ−Ｃ３Ｆ溶液製剤を製造
した。これらの溶゛液製剤について、Ｇ−Ｃ３Ｆ活性の
経時変化を実施例１と同様の方法で測定し、その結果を
第２表に示した。

実施例３ Ｇ−Ｃ５ＦＩＯμｇに第３表に示す界面活性剤を添加し
たＧ−Ｃ５ＦＩＯ，ｕｇ／ｍｊｌ！含有製剤（２０ｍＭ
リン酸緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム含有、ｐＨ７
，Ｃを無菌的に調製し、サルファ処理シリコーンコーテ
ィングがラスバイアル中に１ｍｆ充填し、４℃で放置し
、０．５．２および２４時間後の溶液中のＧ−Ｃ３Ｆの
残存活性を上記ら）の逆相系高速液体クロマトグラフィ
ー法により測定し残存率（％）を求め、界面活性剤のＧ
−Ｃ３Ｆ吸着防止効果を評価した。その結果を第３表に
示す。

発明の効果 以上詳しく述べたように、本発明によれば、製薬上許容
される界面活性剤を所定濃度で使用したことにより、製
剤中に極微量で存在するＧ−Ｃ３Ｆの、温度、湿度、酸
素、紫外線等の外的因子にもとずく会合、重合、あるい
は酸化もしくは容器壁等への吸着の結果として生ずる、
有効成分の損失、活性の低下等に関する問題点を効果的
に解決することが可能となった。

従って、患者に対するＧ−Ｃ３Ｆの投与量を極めて正確
に投与、管理することが可能となり、しかも高価なＧ−
ＣＳ　Ｆの有効利用ができ、Ｇ−Ｃ３Ｆ含有製剤のコス
ト節減を図ることも可能となる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）顆粒球コロニー刺激因子と少なくとも一種の製薬
   上許容される界面活性剤とを含むことを特徴とする、安
   定な顆粒球コロニー刺激因子含有製剤。
2. （２）上記界面活性剤を顆粒球コロニー刺激因子１重量
   部に対して１重量部〜１０，０００重量部の範囲内の量
   で含有することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
   の安定な顆粒球コロニー刺激因子含有製剤。
3. （３）上記界面活性剤が非イオン界面活性剤であるソル
   ビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポ
   リグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソル
   ビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット
   脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸
   エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポ
   リオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレ
   ンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシ
   エチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレ
   ン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンミツロウ誘導体、
   ポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレ
   ン脂肪酸アミド；陰イオン界面活性剤であるアルキル硫
   酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ア
   ルキルスルホコハク酸エステル塩；天然系の界面活性剤
   であるレシチン、グリセロリン脂質、スフィンゴリン脂
   質、ショ糖脂肪酸エステルから成る群から選ばれた少な
   くとも１種であることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項または第２項に記載の安定な顆粒球コロニー刺激因子
   含有製剤。