JPS63117265A - 抗ストレプトリジンｏ価の測定法 - Google Patents
抗ストレプトリジンｏ価の測定法Info
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- JPS63117265A JPS63117265A JP26360086A JP26360086A JPS63117265A JP S63117265 A JPS63117265 A JP S63117265A JP 26360086 A JP26360086 A JP 26360086A JP 26360086 A JP26360086 A JP 26360086A JP S63117265 A JPS63117265 A JP S63117265A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は抗ストレプトリシンＯ価の測定法に関し、更に
詳細にはリポソームを用いる抗ストレプトリシンＯ価の
測定法に関する。
詳細にはリポソームを用いる抗ストレプトリシンＯ価の
測定法に関する。
ストレプトリシンＯは、Ａ群β−溶連菌が産生する菌体
外毒素であり、この菌に感染すると体内に抗ストレプト
リジンＯ抗体が産生される。この抗体は、感染の初期か
ら産生されるため、その存在の判定は、β−溶連菌によ
る感染症、例えぼりウマチ熱、扁桃腺炎、狸紅熱、急性
糸球体腎炎等の診断に重要な意義をもつものである。
外毒素であり、この菌に感染すると体内に抗ストレプト
リジンＯ抗体が産生される。この抗体は、感染の初期か
ら産生されるため、その存在の判定は、β−溶連菌によ
る感染症、例えぼりウマチ熱、扁桃腺炎、狸紅熱、急性
糸球体腎炎等の診断に重要な意義をもつものである。
従来、抗ストレゾ） ＩＪシン０抗体の力価である抗ス
トレプトリジンＯ価を測定する方法としては、溶血阻止
反応を利用したランツーランダル（Ｒａｎｔｚ −Ｒａ
ｎｄａｌｌ ）法とマイクミルイタ−法および受身凝集
反応を利用した方法とがあり、この中でジンツーランダ
ル法が日常検査に広く用いられている。
トレプトリジンＯ価を測定する方法としては、溶血阻止
反応を利用したランツーランダル（Ｒａｎｔｚ −Ｒａ
ｎｄａｌｌ ）法とマイクミルイタ−法および受身凝集
反応を利用した方法とがあり、この中でジンツーランダ
ル法が日常検査に広く用いられている。
ランツーランダル法等の溶血阻止反応を利用した方法は
、ストレットリシンＯが有する溶血活性を抗ストレプト
リジンＯ抗体が中和することを原理とする測定法であり
、新鮮なウサギ赤血球又はヒトＯ型光血球を用いるため
、赤血球の安定性、ロフト差等により測定値の変動が生
じるという欠点があった。
、ストレットリシンＯが有する溶血活性を抗ストレプト
リジンＯ抗体が中和することを原理とする測定法であり
、新鮮なウサギ赤血球又はヒトＯ型光血球を用いるため
、赤血球の安定性、ロフト差等により測定値の変動が生
じるという欠点があった。
斯かる実情において、本発明者らは上記の問題点を解決
せんと鋭意研究をおこなった結果、卵黄レシチンとコレ
ステロールから形成されるリポソームは赤血球と同様ス
トレプトリジンＯによって破壊されること及びこの性質
を利用すれば検体中の抗ストレプトリジンＯを測定する
ことができることを見出し、本発明を完成した。
せんと鋭意研究をおこなった結果、卵黄レシチンとコレ
ステロールから形成されるリポソームは赤血球と同様ス
トレプトリジンＯによって破壊されること及びこの性質
を利用すれば検体中の抗ストレプトリジンＯを測定する
ことができることを見出し、本発明を完成した。
したがって、本発明は卵黄レシチン及びコレステロール
から形成され、内部にマーカー物質を封入したリポソー
ム及びストレプトリシンＯを検体中に加えて反応させ、
す？ソーム中から放出されたマーカー物質量を測定する
ことを特徴とする抗ストレプトリシンＯの測定法を提供
するものである。
から形成され、内部にマーカー物質を封入したリポソー
ム及びストレプトリシンＯを検体中に加えて反応させ、
す？ソーム中から放出されたマーカー物質量を測定する
ことを特徴とする抗ストレプトリシンＯの測定法を提供
するものである。
本発明において用いられるリポソームは、卵黄レシチン
及びコレステロールから常法によって製造されるもので
あり、卵黄レシチンとコレステロールの割合は、モル比
で１：０．５〜２とするのが好ましい。
及びコレステロールから常法によって製造されるもので
あり、卵黄レシチンとコレステロールの割合は、モル比
で１：０．５〜２とするのが好ましい。
このリポソームに封入するマーカー物質としては、す？
ソームの破壊の程度を測定できる指標となり得るもので
あれば何れでもよいが、好適には、カルボキシフルオレ
セイン、スルホローダミンＢ等の螢光色素、あるいはβ
−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の酵素
が挙げられる。マーカー物質のリポソーム中への封入は
、例えば卵黄レシチン及ヒコレステロールカラフィルム
状ノＩＪ、ｔＥ’ソーム形成物質を調製し、これにマー
カー物質を含有する水溶液を加えることによりおこなわ
れる。
ソームの破壊の程度を測定できる指標となり得るもので
あれば何れでもよいが、好適には、カルボキシフルオレ
セイン、スルホローダミンＢ等の螢光色素、あるいはβ
−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ等の酵素
が挙げられる。マーカー物質のリポソーム中への封入は
、例えば卵黄レシチン及ヒコレステロールカラフィルム
状ノＩＪ、ｔＥ’ソーム形成物質を調製し、これにマー
カー物質を含有する水溶液を加えることによりおこなわ
れる。
本発明方法は、次の如くして実施される。
まず、ストレプトリジンＯを検体中に加え、反応させる
。反応は通常、３７℃で３０分間程度おこなうのが好ま
しい。次いで、この反応液中にマーカー物質封入り一ソ
ームを加え、更に反応させる。この反応において、前段
階の反応で残った過剰量のストレプトリジンＯがマーカ
ー物質封入す？ソームを破壊し、対応する量のマーカー
物質が放出される。この反応は３７℃で３０分間程度お
こなうのが好ましい。
。反応は通常、３７℃で３０分間程度おこなうのが好ま
しい。次いで、この反応液中にマーカー物質封入り一ソ
ームを加え、更に反応させる。この反応において、前段
階の反応で残った過剰量のストレプトリジンＯがマーカ
ー物質封入す？ソームを破壊し、対応する量のマーカー
物質が放出される。この反応は３７℃で３０分間程度お
こなうのが好ましい。
従って、更に、この放出されたマーカー物質量を測定す
れば、検体中の抗ストレプトリシンＯ価を求めることが
できる。マーカーの測定にはマーカーの種類によって、
一般の螢光法、酵素法等が採用される。
れば、検体中の抗ストレプトリシンＯ価を求めることが
できる。マーカーの測定にはマーカーの種類によって、
一般の螢光法、酵素法等が採用される。
本発明方法は、赤血球の代りに脂質組成が一定で、しか
も安定なリポソームを使用するので測定値の変動が少な
く、更に測定対象がマーカー物質であるので正確な測定
を行うことができる。
も安定なリポソームを使用するので測定値の変動が少な
く、更に測定対象がマーカー物質であるので正確な測定
を行うことができる。
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
実施例１
マイクロタイター法による測定：
（１） リーソームの作製
５ｍＭの卵黄レシチン−クロロホルム溶液を１００μ’
５１０ｍＭのコレステロール−クロロホルム溶液５０μ
ｊを１０−のナス型フラスコに取す、溶媒のクロロホル
ムをエバーレータ−で揮散させ、フラスコ内面にフィル
ム状物を付着形成させた。次いで１〜２時間、減圧乾燥
を行った後、２００ｒｒＩＭカルボキシフルオレセイン
−ＮａＯＨ溶液２００μｌを加えて、ボルテツクスミキ
丈−で激しく攪拌した後、未封入のカルボキシフルオレ
セインを遠・心により除去しり献ソームを得た。
５１０ｍＭのコレステロール−クロロホルム溶液５０μ
ｊを１０−のナス型フラスコに取す、溶媒のクロロホル
ムをエバーレータ−で揮散させ、フラスコ内面にフィル
ム状物を付着形成させた。次いで１〜２時間、減圧乾燥
を行った後、２００ｒｒＩＭカルボキシフルオレセイン
−ＮａＯＨ溶液２００μｌを加えて、ボルテツクスミキ
丈−で激しく攪拌した後、未封入のカルボキシフルオレ
セインを遠・心により除去しり献ソームを得た。
（２）測定方法
抗ストレゾトリゾ１０抗体を含有する検体５０μｌにス
トレプトリジンＯを２０ ＨＵ／−含む水溶液２５μノ
を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。これに
（１）で得たリポソームの懸濁液（卵黄レシチン濃度０
．５μＭ、コレステロール濃度０．５μＭ）２５μＥを
加え、３７℃で更に３０分間インキュベートした。最後
にゼラチン−ペロナール緩衝液１００μｌを加えた後、
マイクロタイタープレート用螢光リーダーによりその螢
光強度を求めた。（励起波長４９０ ｎｍ、測定波長５
３ Ｑ ｎｍ ）なお対照として検体の代シにゼラチン
−ペロナール緩衝液５０μｇを用いた。
トレプトリジンＯを２０ ＨＵ／−含む水溶液２５μノ
を加え、３７℃で３０分間インキュベートした。これに
（１）で得たリポソームの懸濁液（卵黄レシチン濃度０
．５μＭ、コレステロール濃度０．５μＭ）２５μＥを
加え、３７℃で更に３０分間インキュベートした。最後
にゼラチン−ペロナール緩衝液１００μｌを加えた後、
マイクロタイタープレート用螢光リーダーによりその螢
光強度を求めた。（励起波長４９０ ｎｍ、測定波長５
３ Ｑ ｎｍ ）なお対照として検体の代シにゼラチン
−ペロナール緩衝液５０μｇを用いた。
（３）結 果（検量線）
抗ストレプトリシンＯ価９６ Ｔｏｄｄ単位の血清をゼ
ラチン−ペロナール緩衝液で、３２倍、６４倍、１２８
倍、２５６倍に希釈し、（１）およびＣ）の方法に従っ
て測定した結果を図１に示した。この図から２５６倍希
釈（０，３７５Ｔｏｄｄ単位）から３２倍希釈（３Ｔｏ
ｄｄ単位）の範囲の測定が可能であることがわかる。
ラチン−ペロナール緩衝液で、３２倍、６４倍、１２８
倍、２５６倍に希釈し、（１）およびＣ）の方法に従っ
て測定した結果を図１に示した。この図から２５６倍希
釈（０，３７５Ｔｏｄｄ単位）から３２倍希釈（３Ｔｏ
ｄｄ単位）の範囲の測定が可能であることがわかる。
実施例２
相 関
実施例１−（１）で得たリポソームおよび実施例１に準
じた方法で検量線から求めた抗ストレプトリシンＯ価と
、ヒツジ赤血球を用いたＲａｎｔｚ −Ｒａｎｄａｌ
ｌ法で求めた抗ストレプトリジンＯ価を、１０１の血清
検体について比較した結果を表１に示した。この結果か
ら明らかなように本発明法は従来方法と良い相関関係を
示した。
じた方法で検量線から求めた抗ストレプトリシンＯ価と
、ヒツジ赤血球を用いたＲａｎｔｚ −Ｒａｎｄａｌ
ｌ法で求めた抗ストレプトリジンＯ価を、１０１の血清
検体について比較した結果を表１に示した。この結果か
ら明らかなように本発明法は従来方法と良い相関関係を
示した。
以下余白
第１図は、抗ストレプトリジンＯ抗体を含む血清（抗ス
トレプトリシンＯ価９６ Ｔｏｄｄ単位）の希釈培率と
放出されるマーカー量の関係を示す図面である。 以上 弁理士 小 野 信 ｉｉ；’ ”’ −ゝ）・・：１
、・ ：：、、−、− １。 第 １ 図 希釈倍数
トレプトリシンＯ価９６ Ｔｏｄｄ単位）の希釈培率と
放出されるマーカー量の関係を示す図面である。 以上 弁理士 小 野 信 ｉｉ；’ ”’ −ゝ）・・：１
、・ ：：、、−、− １。 第 １ 図 希釈倍数
Claims (1)
- １、卵黄レシチン及びコレステロールから形成され、内
部にマーカー物質を封入したリポソーム及びストレプト
リジンＯを検体中に加えて反応させ、リポソーム中から
放出されたマーカー物質量を測定することを特徴とする
抗ストレプトリジンＯ価の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61263600A JPH0758293B2 (ja) | 1986-11-05 | 1986-11-05 | 抗ストレプトリジンｏ価の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61263600A JPH0758293B2 (ja) | 1986-11-05 | 1986-11-05 | 抗ストレプトリジンｏ価の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63117265A true JPS63117265A (ja) | 1988-05-21 |
| JPH0758293B2 JPH0758293B2 (ja) | 1995-06-21 |
Family
ID=17391792
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61263600A Expired - Lifetime JPH0758293B2 (ja) | 1986-11-05 | 1986-11-05 | 抗ストレプトリジンｏ価の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0758293B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5856202A (en) * | 1994-11-15 | 1999-01-05 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for determining antistreptolysin O antibody |
| CN106153887A (zh) * | 2016-05-27 | 2016-11-23 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定抗链球菌溶血素“o”的试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63184063A (ja) * | 1986-09-24 | 1988-07-29 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 抗ストレプトリジンｏの新規測定法 |
-
1986
- 1986-11-05 JP JP61263600A patent/JPH0758293B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63184063A (ja) * | 1986-09-24 | 1988-07-29 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 抗ストレプトリジンｏの新規測定法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5856202A (en) * | 1994-11-15 | 1999-01-05 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for determining antistreptolysin O antibody |
| CN106153887A (zh) * | 2016-05-27 | 2016-11-23 | 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 | 一种测定抗链球菌溶血素“o”的试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0758293B2 (ja) | 1995-06-21 |
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